Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Laboratorio de Microbiología General I
Microbiología del agua
Trujillo Iturbide Nallely
Equipo 6

Práctica 16: Microbiología del Agua

1. Características físicoquímicas del agua.
La composición química natural de las aguas puede verse alterada por actividades
humanas: agrícolas, ganaderas e industriales, principalmente. La consecuencia es
la incorporación de sustancias de diferente naturaleza a través de vertidos de
aguas residuales o debido al paso de las aguas por terrenos tratados con
productos agroquímicos o contaminados.
Los parámetros de control se pueden agrupar de la siguiente manera:
Físicos
Características organolépticas
Color, olor, sabor
Elementos flotantes
Temperatura
Sólidos
Conductividad
Radioactividad
Parámetros físicos
Color Es el resultado de la presencia de materiales de origen vegetal tales como
ácidos húmicos, turba, plancton, y de ciertos metales como hierro, manganeso,
cobre y cromo, disueltos o en suspensión. Constituye un aspecto importante en
términos de consideraciones estéticas.
Olor Es debido a cloro, fenoles, ácido sulfhídrico, etc. La percepción del olor no
constituye una medida, sino una apreciación, y ésta tiene, por lo tanto, un carácter
subjetivo.
Turbidez Es una medida de la dispersión de la luz por el agua como consecuencia
de la presencia en la misma de materiales suspendidos coloidales.
Sólidos en suspensión Comprenden a todas aquellas sustancias que están
suspendidas en el seno del agua y no decantan de forma natural.

2. Patologías asociadas al consumo de agua.

 Tifus: enfermedad provocada por bacterias que causa fiebres,
diarreas, vómitos e inflamación del bazo y del intestino.
 Tracoma: es una infección de los ojos provocada por las deficientes
prácticas higiénicas debido a la falta de agua o la existencia de
condiciones insalubres. Los niños y las niñas son especialmente
vulnerables a ella.
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Equipo 6
 Fiebre tifoidea: es una infección bacteriana causada por la ingesta de
agua contaminada. Los pacientes a quienes se les diagnostica sufren
dolor de cabeza, náuseas y pérdida de apetito, entre otros síntomas
3. Colimetría
Coliformes totales
Es un procedimiento mediante el cual, una reacción negativa excluye la presencia
del grupo coliforme, mientras que una reacción positiva indica su presencia
inequívoca. Deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado
positivos en la prueba presuntiva. A partir de ellos y tras homogenizar su
contenido, se procederá a sembrarlos mediante asa en estría, sobre la superficie
de placas Petri conteniendo medio de agar-lactosa-eosina-azul de metileno (medio
de Teague Levine o EMB). A continuación, se incubaran las placas a 37oC durante
24h. Las bacterias fermentadoras de lactosa crecen sobre este medio dando
colonias opacas y pigmentadas en rosa, azul violeta oscuro con o sin brillo
metálico, mientras que las colonias que aparezcan distintas a las descritas
pertenecerán a bacterias no fermentadoras de lactosa. Posteriormente, de cada
placa, seleccionaremos una colonia de cada uno de los diferentes aspectos
descritos como característicos y se resiembra mediante hilo o asa sobre agar
nutritivo inclinado y a continuación y sin recargar se resiembra un tubo de caldo
MacConkey, con campana Durham, incubándose a 37oC durante 24 h.
Coliformes fecales
Es un procedimiento por el cual una reacción negativa excluye la presencia de
coliformes fecales, mientras que una reacción positiva indica su presencia
inequívocamente. Deben someterse a esta prueba, todos los tubos que hayan
resultado positivo en la prueba presuntiva. A partir de los tubos positivos
obtenidos se resiembra mediante asa o bien con dos gotas de cultivo tomadas con
pipeta Pasteur tantos tubos de caldo MacConkey como tubos positivos presuntivos
haya, incubándose inmediatamente a 44oC durante 24 horas.
Indicadores de contaminación fecal
El control de la calidad sanitaria de los recursos del ambiente puede llevarse a
cabo mediante la enumeración de bacterias indicadoras de contaminación fecal.
Estas bacterias pueden ser utilizadas para valorar la calidad de los alimentos,
sedimentos y aguas destinadas al consumo humano, la agricultura, la industria y la
recreación. No existe un indicador universal, por lo que se debe seleccionar el más
apropiado para la situación específica en estudio. Los indicadores de
contaminación fecal más utilizados son los coliformes totales y termo tolerantes,
Escherichia coli y enterococos.

4. Normas mexicanas relacionadas al análisis de agua.

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NOM-012-SSA1-1993
Requisitos sanitarios que deben cumplir los sistemas de abastecimiento de agua para uso y
consumo humano públicos y privados

NOM-013-SSA1-1993
Requisitos sanitarios que debe cumplir la cisterna de un vehículo para el transporte y distribución
de agua para uso y consumo humano

NOM-014-SSA1-1993
Procedimientos sanitarios para el muestreo de agua para uso y consumo humano en sistemas de
abastecimiento de agua públicos y privados

NOM-041-SSA1-1993
Bienes y servicios. Agua purificada envasada. Especificaciones sanitarias

NOM-120-SSA1-1994
Prácticas de higiene y seguridad para el proceso de alimentos, bebidas no alcohólicas y
alcohólicas

NOM-127-SSA1-1994
Salud ambiental, agua para uso y consumo humano-limites permisibles de calidad y tratamientos
a que debe someterse el agua para su potabilización

NOM-160-SSA1-1995
Buenas prácticas para la producción y venta de agua purificada

NOM-179-SSA1-1998
Vigilancia y evaluación del control de calidad del agua para uso y consumo humano, distribuida
por sistemas de abastecimiento publico

NOM-201-SSA1-2002
Agua y hielo para consumo humano, envasados y a granel. Especificaciones sanitarias

CUESTIONARIO 16: ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

1. Indica si el agua es un hábitat natural de las enterobacterias.

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae se desarrollan en medios
artificiales muchas de estas bacterias son parásitos de animales y otros
patógenos. Las bacterias coliformes suelen encontrarse en el aparto intestinal del
hombre y animal.
Escherichia Coli, rara vez se encuentra fuera del intestino, por lo que muchos de
estos agentes son eliminados por las excretas contaminando las aguas. Si bien el
agua no es su hábitat natural es el elemento de contagio directo al vehicular
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directa o indirectamente los agentes productores de enfermedades como lo
pueden ser las enterobacterias.

2. Menciona que es un indicador de contaminación.

Los microorganismos indicadores son aquellos que tienen un comportamiento
similar a los patógenos (concentración y reacción frente a factores ambientales y
barreras artificiales), pero son más rápidos, económicos y fáciles de identificar.
Una vez se ha evidenciado la presencia de grupos indicadores, se puede inferir
que los patógenos se encuentran presentes en la misma concentración y que su
comportamiento frente a diferentes factores como pH, temperatura, presencia de
nutrientes, tiempo de retención hidráulica o sistemas de desinfección es similar a
la del indicador.
Un microorganismo indicador de contaminación fecal debe reunir las siguientes
características:
- Ser un constituyente normal de la flora intestinal de individuos sanos.
- Estar presente, de forma exclusiva, en las heces de animales homeotérmicos.
- Estar presente cuando los microorganismos patógenos intestinales lo están.
- Presentarse en número elevado, facilitando su aislamiento e identificación.
- Debe ser incapaz de reproducirse fuera del intestino de los animales
homeotérmicos.
- Su tiempo de supervivencia debe ser igual o un poco superior al de las bacterias
patógenas (su resistencia a los factores ambientales debe ser igual o superior al
de los patógenos de origen fecal).
- Debe ser fácil de aislar y cuantificar.
- No debe ser patógeno.
No existe ningún microorganismo que reúna todos los criterios de un indicador
ideal y apenas algunos grupos satisfacen algunos de estos requisitos. A
continuación, se describen los grupos patógenos y los microorganismos que se
han propuesto como sus indicadores.

3. Menciona 4 microorganismos que se utilizan como índice de contaminación

fecal del agua.

Escherichia coli
Klebsiella sp
Citrobacter sp
Streptococcus fecales
Clostridium perfringens
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4. Menciona 10 enfermedades de origen hídrico

- Diarrea - Esquistosomiasis
- Fiebre Tifoidea - Dracunculiasis
- Hepatitis A - Amibiasis
- Cólera - Fiebre amarilla
- Disentería bacteriana - Malaria
- Leptospirosis
- Dengue
5. Mencione los tratamientos que pueden realizarse al agua para hacerla
potable.
- Cloración: Proceso sencillo de esterilización y barato, la acción del cloro es de
poca profundidad y las partículas en suspensión la dificultan.
- Irradiación Ultravioleta: Por medio de una lámpara de cuarzo llena de vapor de
mercurio, se pueden producir rayo ultravioleta. Estos rayos matan a las bacterias
desintegrándolas.
- Ozonización: El ozono en contacto con sustancias oxidables se descompone
rápidamente en oxígeno naciente y oxígeno diatómico inactivo. El primero
destruye la materia orgánica.
- Filtración: Si el agua no se encuentra muy cargada de materias en suspensión,
puede bastar un filtrado como única depuración. Para cantidades pequeñas se
fabrican filtros portátiles que pueden transportarse con todos sus accesorios.
Los filtros de arenas y multimedias minerales son lentos y poseen cierta acción
eliminadora de bacterias, pero necesitan mucho espacio para la purificación de
aguas fluviales. Estos filtros retienen tierra, arena y algunas impurezas, pero dejan
pasar algunos microorganismos y las sustancias químicas disueltas. Las plantas
de filtración para agua potable, utilizan un tratamiento de agua que se compones
de Filtro Multimedia, Filtro de carbón activado, Suavizadores, Filtración por
Osmosis Inversa y Desinfección.
Filtros de carbón activado: Empleado como material filtrante elimina olor, sabor y
color del agua.
- Depósitos de decantación: se emplean en la purificación previa de aguas muy
sucias, por ejemplo, corrientes superficiales haciéndolas pasar antes, en caso
necesario, a través de rejillas y desarenadores.
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6. Mencione las características del grupo coniforme.
Coliforme significa con forma de coli. El grupo coliforme agrupa a todas las
bacterias entéricas que se caracterizan por tener las siguientes propiedades
bioquímicas:
- Ser aerobias o anaerobias facultativas;
- Ser bacilos Gram negativos;
- Ser oxidasa negativos
- No ser esporógenas;
- Fermentar la lactosa a 35 °C en 48 horas, produciendo ácido láctico y gas.
Se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de
sangre caliente, pero también distribuidas en la naturaleza (suelos, semillas y
vegetales). Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por
las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que los
coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo,
existen muchos coliformes de vida libre.

7. Indica cómo se interpretan las tablas de McCrady.

Se siembran como mínimo tres tubos para cada dilución, aunque se pueden
utilizar también cinco réplicas de cada uno de ellos, lo que disminuye el desvío. Se
leen los resultados, tomándose como positivos a aquellos tubos con caldo nutritivo
en los que ha habido desarrollo (se ven turbios debido a la proliferación de
microorganismos).
Se toma nota, para cada dilución, del número de tubos positivos (+) y se obtiene
un número característico representado por tres cifras. La primera cifra del número
característico corresponderá al nivel de dilución menos concentrado en el que
todos los tubos sean positivos. En la siguiente tabla se indican, a modo de
ejemplo, los resultados obtenidos para dos siembras distintas con tres repeticiones
para cada nivel de dilución.

Ejemplo 1: número característico 310 (para la dilución 10 -4 )

Ejemplo 2: número característico 322 (para la dilución 10 -1 )
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Una vez que se ha obtenido el número característico, se busca en una tabla en la
que figuran todas las combinaciones posibles y para las que se ha calculado,
mediante un método estadístico, el número más probable de microorganismos
presentes en la muestra.
Se ingresa en la tabla con el número característico y se lee el número más
probable de microorganismos en el volumen de siembra. A este número obtenido
de la tabla debe multiplicárselo por la inversa de la menor dilución en la que se
han hallado 3 (+), es decir que corresponde a la dilución de la primer cifra del
número característico.
Ejemplo 1: 4,5x10 4 bacterias/100mL de agua
Ejemplo 2: 20x10 1 bacterias /100mL de agua

8. Indica si se utiliza la misma tabla de McCrady para una serie de tres o

cinco tubos.
No se emplean diferentes tablas para el cálculo de m.o presentes en el agua; la
utilización de las tablas está dado por el método que se utiliza para el análisis:
Técnica de 3 tubos y técnica de 5 tubos.

9. Menciona las ventajas y desventajas del NMP y el método de filtración

por membrana.
Número más probable.
Ventajas:
- Es relativamente sencillo y barato
- Es más probable que los resultados coincidan con los de otro laboratorio, cosa
que no sucede con los resultados del método de recuento en placa.
- Mediante el use apropiado de medios selectivos y diferenciales se puede
determinar el número de microorganismo perteneciente a grupos específicos
(coniformes totales, coniformes fecales, etc)
Desventajas:
- Se utiliza gran cantidad de material de vidrio (en especial en la técnica de cinco
tubos)
- Falta de oportunidad para observar la morfología colonial de microorganismos y
su falta de exactitud.
Filtración por membrana.
Ventajas:
- Permite la observación de la morfología colonial.
- Se puede realizar muy rápidamente.
Desventajas:
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Inadecuado en los siguientes casos:
- Aguas de alta turbidez y pocos organismos coniformes.
- Agua cuya proporción de organismos no coniformes es elevada, ya que su
crecimiento interfiere al de organismos coniformes.
- En agua con claro predominio de organismos no fermentadores de lactosa se
produce una elevada proporción de resultados falsos positivos.

10. Menciona cual es la carga microbiana y de coniformes permitida para

el agua potable.
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994, “SALUD AMBIENTAL,
AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO-LIMITES PERMISIBLES DE
CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL AGUA PARA SU
POTABILIZACION”
Límites permisibles de características bacteriológicas
El contenido de organismos resultante del examen de una muestra simple de
agua, debe ajustarse a lo establecido.
Bajo situaciones de emergencia, las autoridades competentes deben establecer
los agentes biológicos nocivos a la salud a investigar.

Los resultados de los exámenes bacteriológicos se deben reportar en unidades de

NMP/100 ml (número más probable por 100 ml), si se utiliza la técnica del número
más probable o UFC/100 ml (unidades formadoras de colonias por 100 ml), si se
utiliza la técnica de filtración por membrana.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 MacFaddin J. F. Pruebas Bioquímicas para la Identificación de Bacterias de
Importancia Clínica. 3ª ed. México: Ed. Panamericana, 2003.