DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TOTALES

MEDIANTE LA TÉCNICA DE FERMENTACIÓN

DE TUBOS MÚLTIPLES

CARRERA: Ingeniería Química

MATERIA: Microbiología Industrial
GRUPO: 1
APELLIDOS Y NOMBRES: Univ.: Flores Yevara Noemí Jhelen
Univ.: Siñani Soruco Francis Valeria
Univ.: Valverde Ordoñez Vanessa Isabel
Univ.: Calsina Angulo América Ruth

Sucre-Bolivia
2023
BACTERIAS COLIFORMES TOTALES
O ¿QUE ES UNA O COLIFORME significa con
forma de Coli.
COLIFORME?
O Designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas
caracteristicas bioquímicas en común
(Bacilos Gram negativos, Oxidasa
negativos, No ser Esporogenas).
Refiriéndose a la bacteria principal
O Importancia relevante como
del grupo, la Escherichia coli,
indicadores de la contaminación del
bautizándola como bacteria del
agua y los alimentos.
intestino.

• Las Bacterias de este genero
se encuentran:
- Intestino de Homeotermos
- Ampliamente distribuido
por la naturaleza (suelos,
vegetales).
- Las Coliformes que se encuentran en
el medio ambiente en su mayoría son de
origen Fecal.
- Se los considero indicadores de
Contaminación Fecal en el control de
calidad del Agua destinada al consumo
humano
- Su numero en el agua es proporcional
al grado de contaminación.
O ¿ QUE ES UNA COLIFORME
TOTAL?
O No todos los coliformes son de origen
fecal, por lo que se hizo necesario
desarrollar pruebas para diferenciarlos
a efectos de emplearlos como
indicadores de contaminación.
O Los coliformes totales se usan para
evaluar la calidad de la leche
pasteurizada, leche en polvo, helados,
pastas frescas, fórmulas para
lactantes, fideos y cereales para el
desayuno. Los coliformes totales los
encontramos en varios medios
principales como son el aire el agua y
el suelo.
Determinación de coliformes totales
La determinación de coliformes totales
es un procedimiento de laboratorio
utilizado para evaluar la calidad del
agua o la higiene de los alimentos. Los
coliformes son un grupo de bacterias
que se encuentran en el intestino de los
animales de sangre caliente y en el
suelo. Su presencia en el agua o los
alimentos puede indicar contaminación
fecal y, por lo tanto, un riesgo potencial
para la salud humana. Los coliformes
totales incluyen varias especies de
coliformes, como Escherichia coli.
Características
• Grupo de bacterias el cual comprenden a
todos los bacilos Gram negativos
• Pueden ser aerobios o anaerobios
facultativos
• no forman esporas
• Fermentan la lactosa con producción de
gas en un lapso máximo de 48 horas a
35°C
• A este grupo pertenecen cuatro 4 géneros
que son: Enterobacter, Escherichia,
Citrobaster y Klebsiella.
Técnica de fermentación de tubos
múltiples
La técnica de fermentación de tubos
múltiples (FTM) es un método
microbiológico utilizando para la detección
y enumeración de microorganismos
indicadores de la calidad del agua.
La técnica de fermentación de tubos
múltiples implica la inoculación de múltiples
tubos de cultivo con una muestra de agua y
la observación de la producción de gas, que
resulta de la fermentación de la lactosa o de
otro sustrato por parte de los coliformes
presentes en la muestra.
 ¿Cuáles son los diferentes
métodos para coliformes totales?
El primero se basa en la técnica del número más probable (NMP), utilizando caldo Lauril Sulfato
Triptosa (es un medio de cultivo selectivo usado para el análisis de la calidad del agua y para
detectar la presencia de bacterias coliformes en muestras.) seguido de la confirmación de los tubos
positivos de formación de gas en caldo Lactosa Bilis Verde Brillante. La incubación es a 35ºC.
El segundo método emplea únicamente el caldo McConkey (es un medio de cultivo selectivo y
diferencial usado para el aislamiento, el cultivo y la diferenciación de bacterias Gram negativas,
en particular aquellas que fermentan la lactosa.). La incubación es a 37 ºC
El tercer método usa el caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (es un medio de cultivo selectivo
utilizado para el aislamiento y la detección de bacterias coliformes, particularmente Escherichia
coli (E. coli) ) a 35 – 37 ºC, seguido de confirmación en agar Bilis Rojo-Violeta o en agar Endo.
 ¿Qué características tienen las colonias de coliformes
en agar Endo y en agar Eosina Azul de Metileno?
O El medio Eosina Azul de Metileno (EMB) es un
O El medio Endo es un medio selectivo para
medio de plaqueo diferencial que puede usarse en
lugar del agar MacConkey en el aislamiento y
detección de Enterobacteriaceae o de bacilos
coliformes de muestras con bacterias mixtas. Los
colorantes anilínicos (eosina y azul de metileno)
inhiben a las bacterias Gram positivas y a las Gram
negativas exigentes. Se combinan para formar un
precipitado a pH ácido y, de este modo, sirven
también como indicadores de la producción de
ácido. Las colonias lactosa (+) dan colonias de
color violeta, las de E. coli presentan un
característico brillo verde metálico, las de
Enterobacter presentan un color violeta sin brillo
metálico (ojo de buey). Las colonias de Klebsiella
son siempre mucosas, grande y ligeramente
rosadas.
demostración de E. coli fecal y coliformes en
los más diversos materiales. El sodio sulfito y la
fucsina inhiben a las bacterias Gram (+). E. coli
y coliformes utilizan lactosa con formación de
aldehído y ácido. Por otra parte, el aldehído
libera fucsina a partir de la combinación:
fucsina sulfito, lo que da lugar a la coloración
roja de las colonias. En este medio las colonias
lactosa (+) presentan una coloración roja, p.ej.
E. coli es de color rojo con brillo metálico
estable. Enterobacter aerogenes y otros
presentan colonias rojas hasta rojizas,
semiesféricas y mucosas.
 Colimetría presuntiva
• Medios de cultivo:
– Recomendado: Caldo lactosado
– Alternativos: Caldo McConkey y Caldo lactosado
laurilsulfato sódico
• Incubación: 37 ± 0,5 ºC durante 24 ± 2 horas.
• Resultado positivo: Fermentación de lactosa con
formación de gas (detectado en campana Durham) y
producción simultánea de ácido (con cambio de
color del medio, indicador de pH).
• En el caso de medios que no contengan en su composición
un indicador de pH, se puede usar 0,9 g de
púrpura de bromocresol por litro de caldo
• Los tubos considerados negativos a las 24 horas se
seguirán incubando hasta las 48 ± 3 horas