Taller 6: Investigando la regulación del ADN

Orientaciones

Objetivos

Identificar las partes del Operón Lac y entender los procesos ocurridos cuando se encuentran
mutantes en cada una de las regiones que componen un operón.

Responsable

La actividad se entregará en grupos.

Descripción de la actividad

La actividad consiste en llenar esta guía en donde encontrarán una serie de tablas que contienen
información sobre unos mutantes. Estos consisten en regiones de operones que presentan
mutaciones en algunas de las partes que los componen. Inicialmente en la casilla “genotipo” se
mostrará el operón “normal” o Wild Type y al lado encontrarán el operón con su mutación.

Por otro lado, es común utilizar moléculas que funcionan como sustratos o como inductores, es
decir, que reemplacen el papel de la alolactosa y la lactosa, en nuestro caso tenemos como molécula
inductora a IPTG el cual no actúa como sustrato. Tendrán dos posibles escenarios, el primero será
en presencia de IPTG (+) y el segundo será en ausencia de IPTG (-). Adicionalmente tendrán dos
proteínas de interés, la β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y) las cuales podrán ser o no expresadas
según el escenario en el que se encuentren. Debajo de cada cuadro encontrarán una imagen de
cómo se vería el operón

Deberán responder las preguntas que se encuentran en cada uno de los espacios y escribir una breve
conclusión en el espacio en verde ubicado en cada tabla, además de completar las tablas, indicando
si está presente (+) o no (-) la forma funcional de los genes Z y Y, en presencia o ausencia de IPTG
(+IPTG ó -IPTG).
 1. Preguntas:
a. ¿El represor está activo en la célula?
El represor que en este no se evidencia mutación (Lacl+), debido a esto el IPTG hará función
como inductor y posibilitará que el represor transforme su forma y se unifique cona región
operadora, de esta manera activando la expresión de los genes.

b. ¿La célula puede expresar β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y)?

La célula se le hace posible expresar β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y) por el hecho de
que en estos dos casos el inductor está presente, ya que el represor se unificará con la región
operadora y por esto se expresarán los genes. A diferencias de los otros dos casos, el IPTG
está negativo, debido a esto va a ser posible expresar los genes.

β-galactosidasa Permeasa (Y)

Mutant Genotipo (Z) Conclusión
e +IPTG - IPTG +IPTG -IPTG

1 O+ Z+ Y+ / O+ Z- Y+ + - + - Z+ es dominante sobre Z-

LacL+ = represor

Plac = promotor

O+ = región operadora

IPTG = inductor

2. Preguntas:
a. ¿El represor puede bloquear los dos sitios operadores (O), el normal y el mutante?
En este caso, el represor no puede bloquear el mutante, por lo que se produce una
expresión constitutiva ya que está presente en todas.
b. ¿La célula puede expresar β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y)?
Sí, porque el operador está mutado, por lo que se expresarán la β-galactosidasa (Z)
y la Permeasa (Y)

β-galactosidasa (Z) Permeasa (Y)

Mutante Genotipo Conclusión
+IPTG - IPTG +IPTG -IPTG
 2 O+ Z- Y+ / OC Z+ Y- + + + + En este caso, se puede
concluir que se da una
expresión inducida
constitutiva

3. Preguntas:
a. ¿El represor está presente en la célula? ¿Se produce en ambas copias del operón?
- Aquí el represor está presente en una de las copias, pero esto no le impide bloquear
a las dos, esto ya que actúa en trans.
b. ¿El represor está activo en la célula?
- El represor si está activo en la célula.
c. ¿La célula puede expresar β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y)?
- Se presenta una producción global, ya que se produce en una de las copias a pesar
de no estar presente en ambos casos.

β-galactosidasa (Z) Permeasa (Y)

Mutante Genotipo Conclusión
+IPTG - IPTG +IPTG -IPTG
3 I+Z+Y+/ I- Z+ Y+ SI (+) NO (-) SI (+) NO (-) Esta es una expresión
constitutiva

4. Preguntas:
 a. ¿El represor está presente en la célula? ¿Se produce en ambas copias del operón?
El represor está presente en la célula, pero sólo se produce en la segunda copia del operón.
b. ¿El represor está activo en la célula?

c. ¿La célula puede expresar β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y)?

La célula puede codificar para la β-galactosidasa (Z) y la Permeasa (Y) ya que los genes Z y Y
pueden expresar esas proteínas.

β-galactosidasa (Z) Permeasa (Y)

Mutante Genotipo Conclusión
+IPTG - IPTG +IPTG -IPTG
4 I- Z- Y+ / I+ Z+ Y- + + + -