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TRANSDUCCIN DE SEALES EN EUCARIOTAS

TRANSDUCCIN DE LA SEAL INTRACELULAR

PROTENAS G

Esta diapositiva la pusimos para introducir el tipo de modificaciones que se realizan en


las molculas que van a transducir la seal de forma intracelular. Adems, tenamos
dos formas de transducir la seal: por fosforilacin y por unin de las protenas G a
nucletidos de guanina.

MOLCULAS DE LAS VAS DE TRANSDUCCIN


INTRACELULARES DE SEALES:

- protena G
- adaptadores
- enzimas:
protenas kinasas y fosfatasas
lipasas
ciclasas (adenilato ciclasa, guanilato ciclasa)
- sistemas efectores
- 2os mensajeros
PROTENAS G

- 20 kD Protenas G pequeas Ej.: protena Ras


- 90 kD Protenas G grandes Son heterotrimricas
GTP-hidrolasas con funcin reguladora
Ncleo central comn origen comn
Poseen un sitio de reconocimiento de nucletidos de guanina
Forman complejos estables con GTP y con GDP
Unin e hidrlisis de GTP cambios conformacionales recprocos en la(s)
regin(es) switch del dominio cataltico
Poseen protenas reguladoras

Las protenas G forman un grupo extenso de protenas y se conoce bastante bien su


estructura. Podemos dividirlas en dos grupos, fundamentalmente por su tamao, tal y
como se indica en la diapositiva, y tienen caractersticas diferentes.

El hecho de que las protenas G grandes sean heterotrimtricas, significa que estn
formadas por tres subunidades diferentes entre s y que cada una tiene sus funciones
caractersticas.

En conjunto, todas las protenas G, tienen las siguientes funciones/caractersticas:

- Tienen capacidad hidrolasa del GTP. Son GTP-hidrolasas con funcin reguladora, es
decir, que cuando tienen unido GTP van a ser capaces de hidrolizarlo y se desprende
un grupo fosfato del GTP quedando en forma de GDP.

- Todas ellas tienen un ncleo central comn, lo cual indica que todas ellas proceden
de una sola protena que a lo largo de la evolucin ha ido cambiando en su estructura.
Parece ser que la protena G pequea Ras podra ser el origen del resto de las
protenas G por medio de la evolucin.

- Todas poseen un sitio de reconocimiento de los nucletidos de guanina, tanto las


protenas G pequeas como las grandes.

- Van a formar complejos estables con GTP y con GDP. Estables pero no
permanentes.

- Pueden unir e hidrolizar GTP, lo cual da lugar a una serie de cambios


conformacionales en estas protenas y esos cambios conformacionales son recprocos
y se producen en unas determinadas regiones de la molcula que se denominan
switch o cambio, que es lo que les va a permitir estar activas o inactivas, y que se
encuentran en el dominio cataltico.

- Poseen unas protenas reguladoras, sobre todo las protenas G pequeas.

Las protenas G se denominan as porque son capaces de unir nucletidos de


guanina.
Ahora, vamos a ir viendo caractersticas de las protenas G pequeas y de las
protenas G grandes. Ambos grupos de protenas estn implicados en la transduccin
de la seal, y veremos que las protenas G grandes estn al principio de las vas de
transduccin intracelulares, relacionadas con los receptores, mientras que las
protenas G pequeas pueden aparecer ms tarde en estas vas.

En esta tabla aparecen los diferentes grupos de protenas con los nombres de algunas
de ellas y sus funciones. Estas protenas, adems de funcionar en la transduccin de
la seal como pone en la tabla, dependiendo del tipo de organismo, no siempre estn
funcionando en la transduccin de la seal. Por ejemplo, pueden funcionar en las
levaduras por ejemplo en algo que tiene que ver con la reproduccin y con el trasiego
de los nutrientes, no siempre estn funcionando en la transduccin de la seal. Pero
estas protenas han ido evolucionando a lo largo de los aos pues tambin han
tomado una serie de funciones diferentes. Incluso algunas actan como factores de
elongacin.

Protenas G pequeas (Pm 20 kD)

- Relacionadas con Ras estructuralmente


- En secuencia de aminocidos
- En modificaciones con lpidos
- Ras: c-Ras y v-Ras (sarcoma de rata) de 21 kD
- Forma dmeros y trmeros idnticos
- Extremo carboxlico poliprenilado y palmitoilado
- Extremo amino miristoilado
- Funcin: - En levaduras activa adenilato ciclasa
- En mamferos activacin de Raf-quinasa
Importante regulador de la proliferacin celular y
componente esencial cascadas iniciadas por RTKs
- Las protenas G pequeas, cuyo peso molecular est alrededor de los 20 kD, todas
ellas estn relacionadas con Ras desde el punto de vista estructural, tanto en su
secuencia de aminocidos como en las modificaciones con lpidos.

- La protena Ras se encuentra en dos modalidades: la c-Ras, que se encuentra en las


clulas normales de mamferos, y la v-Ras, que se encuentra en los virus. Estas dos
molculas son equivalentes pero que se encuentran bien en virus (v-Ras) o bien en las
clulas eucariotas (c-Ras). La v-Ras es capaz de producir el sarcoma de rata, tiene 21
kD, y como sta fue la primera que se descubri, es por lo que se le puso ese nombre.

- Se puede encontrar en forma de dmero y de trmero idnticos (misma protena), no


slo como monmero.

- En el extremo carboxilo tiene una modificacin por restos alifticos, pues tiene un
grupo poliprenilado y palmitoilado.

- En el extremo amino se encuentra un resto de cido mirstico.

- Funcin: en levaduras activa la adenilato ciclasa y en mamferos activa la Raf-


quinasa que acta como importante regulador de la proliferacin celular porque esta
protena quinasa va a empezar una va de transduccin de seal que permita la
divisin celular, y por tanto es un componente esencial en las cascadas iniciadas por
los receptores tirosinquinasa. Por ejemplo, la insulina acta sobre receptores
tirosinquinasa, y los factores de crecimiento epidrmico tambin estn relacionados
con la divisin celular.

Protenas Ras

- Conexin con receptores de membrana RTKs activados por GFs


- Anclada a la membrana interacciona con adaptadores (conectores)
- Actividad de RAS regulada por:
GEFs (guanine nucleotide Exchange factors)
GAPs (GTPase activating proteins)
GNRPs (guanine nucleotide release proteins)
- Principal controlador de la cascada de la MAP-kinasa (mitogen-activated
protein kinase): activa a Raf-kinasa
- Es muy verstil: puede interaccionar con muchos adaptadores

- Estas protenas Ras tienen conexin con los receptores tirosinquinasa que estn
activados por factores de crecimiento.

- Estn ancladas a la membrana, lo cual es interesante porque esta protena queda


anclada a la membrana por medio de su extremo carboxlico palmitoilado, y esto le
permite estar anclada a la membrana situada en el lugar en el que despus tendr que
actuar.

- Su actividad est regulada por unas protenas reguladoras (GEFs, GAPs, GNRPs).
Estas protenas reguladoras van a ser ms importantes en las protenas G pequeas
que en las protenas G grandes.
GEFs (factores de intercambio de nucletidos de guanina). Estimulan a la
protena Ras para separar GDP y unir GTP.
GAPs (protenas activadoras de la actividad GTPasa). Van a estimular esa
actividad GTPasa y por tanto pasarn de tener un GTP unido a un GDP.
GNRPs (protenas que liberan nucletidos de guanina). Estimulan la
separacin de GDP para que pueda unir al GTP.

- Una de sus funciones ms importantes es activar la va de las MAP-kinasas


(mitogen-activated protein kinase): activa a Raf-kinasa.

- Es muy verstil: puede interaccionar con muchos adaptadores. Esta es una


propiedad muy importante en la protena Ras porque va a ser como el punto de unin
de diferentes cadenas de transduccin intracelular en la misma clula, o la vamos a
encontrar relacionada con diferentes vas de transduccin intracelular en diferentes
clulas, ya que puede unirse a muchos adaptadores pudiendo participar en vas de
transduccin distintas.

En esta tabla
aparecen
subfamilias de la
protena Ras
con otras que se
parecen mucho
a la protena
Ras.
Estas protenas reguladoras actan en un ciclo de la siguiente manera. Por un lado
tenemos una protena inactiva que tiene unido GDP y va a pasar a una situacin activa
en la que tiene unido GTP. En el estado inactivo est dibujada como un cuadrado y en
el estado activo con los bordes redondeados para indicar un cambio de conformacin.
Esta protena, de estar en situacin inactiva a estar en situacin activa, se reestructura
su molcula. El GDI es un regulador que acta como un inhibidor de la protena en
cuestin y la mantiene en forma inactiva. Pero cuando se le une el GEF, que sera un
factor de intercambio de nucletidos de guanina, se le va a separar el GDP y en su
lugar se le va a unir el GTP, de manera que as pasa a estar activa con GTP unido. A
continuacin, la protena pasa a estar de nuevo en estado inactivo por medio de una
protena con actividad GTPasa, que hidroliza al GTP con separacin de un grupo
fosfato.

La diferencia est en que no se intercambian cada vez GDP y GTP, sino que el GTP
est unido a la misma protena y el que sale es el GDP (lo ha dicho tal cual).

Este ciclo lo tiene que estar realizando continuamente: cuando est en la posicin
activa, con GTP, transducir la seal, y cuando est inactiva no va a transducir
ninguna seal.

Este esquema empieza con la forma activa que tiene GTP unido. Se produce la
hidrlisis de GTP con separacin de un grupo fosfato, da lugar a GDP y pasa a la
situacin inactiva. Despus se mantiene en situacin inactiva mientras que se puede
separar o quedar unido el GDP (realmente suceden las dos cosas). Finalmente, se
separa el GDP, entra GTP rpidamente y vuelve a estar activa.

Modificaciones con lpidos de las protenas G pequeas

- cido mirstico
- cido palmtico
- Grupo farnesilo
- Geranilgeranilo
En esta imagen estaramos viendo
la estructura bsica de la protena
Ras. Vemos que tiene un extremo
N-terminal y un extremo C-terminal
y entre medias hay una serie de
lminas plegadas y alguna hlice
tambin. Es interesante la hlice
que denominan switch porque
es donde radica el cambio de
conformacin de la protena pues
es la que va a cambiar de posicin
cuando tiene unido GDP o cuando
se le une GTP. Estamos viendo la
estructura de la protena cuando
est activa pues tiene unido GTP.
En conjunto tiene una estructura
globulosa.

Vamos a ver unos esquemas donde se puede observar cmo cambia la estructura.

Situacin: Ras unido a GDP. Vemos


la molcula de GDP y en azul y en
verde las partes de la molcula Ras
que van a modificarse.

Situacin: Ras unido a GTP. Las


zonas de Switch de la molcula
estn modificadas en su posicin
porque tienen unido GTP. Esta sera
la posicin activa.
A su vez se va a unir a una protena
que se denomina SOS (aqu est
representada parte de esta
protena).

Aqu podemos ver en conjunto cmo sucede el proceso.


En este esquema vemos un receptor de factor de crecimiento epidrmico (EGF) ya
dimerizado que es un receptor de tipo tirosinquinasa (se indica que parte de la
molcula tiene actividad quinasa y que tiene una serie de restos de tirosina
fosforilados). En esta situacin, el receptor EGF puede transducir la seal y lo hace a
travs de una serie de molculas, de las cuales aqu se representan el Grb-2 y el Sos.
Estos conectores o adaptadores tienen unas partes de la molcula que van a ser
capaces de unirse a otras. El Grb-2 es capaz de unirse a un resto de fosfotirosina por
una parte de su molcula, y por otra parte se puede unir a la protena Sos. Sos es un
factor de intercambio de nucletidos de guanina para Ras, es decir, que tiene la
capacidad de inducir a Ras a perder el GDP y a unir GTP. En ese punto (crculo rojo)
vemos que Ras con GDP que est inactiva, pasa a Ras con GTP activa.

La unin entre estas molculas es importante, se conoce en qu punto se produce y


cmo se activa.

Aqu vemos parte de la molcula de


Sos y parte de la molcula de Ras y lo
que se quiere indicar es:

- Los Switch de Ras que se van a


modificar (activacin/desactivacin).

- Existe una unin fsica entre ambas


molculas, de manera que se conocen
qu partes de la molcula de Ras
interaccionan con qu partes de la
molcula de Sos.

Protenas G grandes (Pm 90 kD)

- Tamao molecular 90 kD
- Se conocen desde 1971 (Rodbell y cols.)
- Interaccionan directamente con los receptores de membrana
- La unin del ligando activa las protenas G grandes
- Ciclo de activacin desactivacin: unen GTP (activa) y GDP (inactiva)
- Poseen estructura heterotrimrica: subunidades , ,
- Las subunidades tienen diferente estructura y funciones
- Interaccionan con diferentes efectores intracelulares
- Diferentes cascadas de sealizacin intracelular
- Diferentes respuestas celulares

Las protenas G grandes son protenas heterotrimricas que se conocen desde los
aos 70s y tienen una serie de caractersticas que estn en la diapositiva.
El hecho de que interaccionen directamente con los receptores de membrana es lo
que da lugar a los receptores de 7 hlices transmembrana que se acoplan a protenas
G.

Existe un ciclo de activacin y desactivacin exactamente igual que en las protenas G


pequeas: cuando se le une GTP estn activas y cuando se le une GDP estn
inactivas.

Las protenas G grandes estn formadas por tres subunidades distintas, las cuales
poseen distinta estructura y distintas funciones, por lo que en este sentido estn
especializadas. Van a interaccionar con diferentes efectores intracelulares, por lo tanto
vamos a ver que a partir de la intervencin de estas protenas G grandes tenemos
diferentes cascadas de sealizacin y por tanto diferentes respuestas celulares. Hay
muchos receptores, como los de siete hlices transmembrana, que van a interaccionar
con las protenas G grandes.

Tenemos otra vez un ciclo donde podemos ver la protena G grande (estn
representadas las tres subunidades) en estado inactivo con GDP unido. Tambin en
este caso, se representa con un cuadro la subunidad inactiva y cuando se activa,
cuando tiene unido GTP, se representa con los bordes del cuadro redondeados para
indicar el cambio conformacional que se ha producido. Tiene la caracterstica de que
cuando se une el ligando a su receptor, se separa GDP y se le une GTP a la
subunidad , y la subunidad con GTP unido se separa de y de de manera que
cada una va a hacer su funcin por separado. La subunidad con GTP unido, va a
actuar sobre una serie de efectores (adenilatociclasa, fosfolipasa C, fosfolipasa A2,
canales inicos, fosfodiesterasa cGMP). Estos efectores son protenas con actividad
enzimtica o bien canales inicos que van a ser activados por las protenas G
grandes, y como al ser activados van a producir unos segundos mensajeros, por eso
se denominan efectores (son un conjunto de protenas que reciben la accin desde las
protenas G y que son capaces de producir los segundos mensajeros). De igual
manera que en las protenas G pequeas, la subunidad va a tener la capacidad