MESA: N° 3

Grupo (día/hora): Lunes 2-4 pm

Fecha (día/mes): 06/05/19

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

``AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCIÓN E IMPUNIDAD´´

INFORME N°6 DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PROFESORA: Mg.Sc. Paola Jorge Montalvo

CURSO: Laboratorio de Bioquímica

INTEGRANTES:

 Espinoza Torres, Damaso Junior

 Huauya Reymundo, María Soledad
 Pauca Enriquez, Luis Alberto
 Samaniego Puente, Julio Cesar
 Sandoval Acosta, Deivit

2019
I) INTRODUCCIÓN

Se nos ha enseñado que los átomos emiten radiación electromagnética cuando son
sometidos a la radiación; se llevan a cabo transiciones electrónicas de estados
energéticos de baja energía a estados energéticos de alta energía y viceversa. La
demostración más simple se lleva a cabo cuando se somete a los elementos y
compuestos a la flama, observándose un color que es característico del átomo metálico
presente en el compuesto. A este fenómeno se le conoce como espectroscopia de
emisión.
Si observamos una disolución acuosa de 𝐶𝑢+2 a trasluz percibimos un color azulado.
Esta coloración se debe a la interacción de los iones cobre con la radiación lumínica que
atraviesa la disolución. Más concretamente, se debe a la absorción de algunas
radiaciones lumínicas que corresponden al “color complementario” (en este caso el
amarillo). Las radiaciones no absorbidas son las que atraviesan la disolución sin
obstáculo alguno y llegan a nuestro ojo. En nuestro ejemplo, estas radiaciones
“transmitidas” corresponden al color azul. Una solución roja absorbe la luz verde y
transmite o refleja la luz roja. En ausencia de luz, las sustancias no tienen color.
Siguiendo con el ejemplo de la solución de cobre, si comparamos el color de dos
disoluciones de 𝐶𝑢+2 con diferente concentración, observamos que a mayor
concentración corresponde una mayor intensidad de color azul de la disolución. Por lo
tanto, podemos saber la concentración de la sustancia según la intensidad del color.
Esta propiedad de la interacción de la luz con una gran cantidad de especies químicas
nos permitirá identificar y cuantificar analitos, dando lugar a una técnica denominada
espectrofotometría.
La espectroscopía de absorción está relacionada con el hecho de que una sustancia
absorbe la luz, provocando que los electrones “salten” de un nivel de energía a otro
mayor; este fenómeno permite explicar por qué algunas sustancias son coloreadas como
el 𝐼2 y el 𝐶𝑟𝑂42− , mientras que otras como el agua y el NaCl no.
La espectroscopía ha jugado una parte importante en el desarrollo de la bioquímica. Se
ha utilizado para medir velocidades de reacción catalizadas por enzimas, para medir
concentraciones de compuestos, determinar conformaciones estructurales e
interacciones moleculares.

II) OBJETIVOS
● evidenciar la relación lineal entre la absorbancia y concentración propuesta por
la ley de Beer con concentraciones ascendentes de cada colorante, leída en la
misma longitud de onda.
● confeccionar curvas de calibración con soluciones colorantes y observar su
aplicación para determinar la concentración de soluciones de concentración
desconocida.

Iu
III) RESULTADOS
Determinación de la concentración de la sustancia
a) Se preparó una batería de 10 tubos de ensayo con diferentes concentraciones
de agua destilada y la sustancia colorante, que llevados al espectrofotómetro
arrojaron los siguientes resultados:

Tubos de ensayo

B 1 2 3 4 5

mL H20 10 8 6 4 2 0

mL Sustancia saturada 0 2 4 6 8 10

Azul de Mesa 1 0 0.082 0.164 0.251 0.339 0.406

bromofenol
(0.445) Mesa 2 0 0.06 0.175 0.242 0.326 0.387

Mesa 3 0 0.111 0.199 0.257 0.354 0.404

Naranja de Metilo Mesa 4 0 0.032 0.093 0.151 0.208 0.268

(0.125) Mesa 5 0 0.038 0.096 0.155 0.215 0.273

Mesa 6 0 0.054 0.102 0.164 0.218 0.279

b) Se promediaron los valores de las mesas de laboratorio y los resultados fueron:

Tubos de ensayo
B 1 2 3 4 5
mL H20 10 8 6 4 2 0
mL Sustancia saturada 0 2 4 6 8 10
Naranja de Metilo
0 0.041 0.097 0.156 0.214 0.273
(0.125)
Azul de bromofenol
0 0.084 0.179 0.25 0.339 0.399
(0.445)
Concentración - 8x10-4 16x10-4 24x10-4 32x10-4 40x10-4
mg% - 0.08% 0.16% 0.24% 0.32% 0.40%
mg/ml - 8x10-7 16x10-7 24x10-7 32x10-7 40x10-7
mg/L o ppm - 0.8 1.6 2.4 3.2 4.0
 Azul de Bromofenol
0.45
0.4
0.35
0.3
Absorvancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003 0.0035 0.004 0.0045
Concentración

0.25 − 0.179 0.071

𝑚 = −4 −4
= = 88.75
24𝑥10 − 16𝑥10 8𝑥10−4

Naranja de Metilo
0.3

0.25

0.2
Absorvancia

0.15

0.1

0.05

0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.003 0.0035 0.004 0.0045
Concentración

0.156 − 0.097 0.059

𝑚 = −4 −4
= = 73.75
24𝑥10 − 16𝑥10 8𝑥10−4

c) Con los resultados obtenidos en los apartados anteriores se determinó la

concentración de la sustancia colorante haciendo uso de la Ley de Fotometría
𝐴 = 𝑎. 1. 𝑐; donde c es la constante de relación.
 Para la naranja de metilo: 𝐴 = 𝑎𝑥1𝑥𝑐
0.125 = 73.75 𝑥1𝑥𝑐
c = 1.69 𝑥 10−3

 Para el azul de bromofenol: 𝐴 = 𝑎𝑥1𝑥𝑐

0.445 = 88.75 𝑥1𝑥𝑐
c = 5.014𝑥 10−3
IV) DISCUSIONES

La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos para absorber

radiación electromagnética, pudimos observar como dependiendo de la
concentración y longitud a la cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un punto
máximo de absorción.
Según esto la longitud y la absorbancia son proporcionales hasta alcanzar el punto
máximo y de allí empieza a descender.
Según la concentración varia la absorbancia del compuesto, Variando la cantidad de
solvente (Siendo agua destilada) se puede disminuir la absorbancia.

V) CONCLUSIONES
- El conocer el adecuado uso del espectrofotómetro permitió obtener en
el laboratorio resultado con alta calidad analítica en las mediciones que
son emitidas por este.

- Se determinó la longitud de onda óptima de las 2 soluciones del azul de

Bromofenol (ABF) y naranja de metilo (NM).

- La relación entre %T y A, es inversa, ya que la primera es una medida

del porcentaje de radiación que atraviesa la muestra, ya la segunda
indica la cantidad absorbida por la misma.

- La absorbancia es proporcional a la concentración de cada sustancia.

- Se identificó que el equipo presenta una adecuada precisión y exactitud

determinando que las mediciones realizadas en este pueden ser
confiables.
 CUESTIONARIO
1. Hallar la concentración de un metabolito en una sustancia en una muestra de suero
si su absorbancia es de 0.280 y las absorbancias del estándar son:
TUBO ABSORBANCI CONCENTRACIÓN(mg/dL)
A

1 0.100 10

2 0.200 20

3 0.300 30

Si la absorbancia es de 0.280 entonces la concentración es:

y = 0.01x
0.28 =0.01x
X=28 mg/dL

2. El coeficiente de extinción molar del NADH es 6220 cm-1 M-1. ¿Cuál será la concentración
de la muestra que tiene una absorbancia de 0.720 diluida la mitad y puesta en una cubeta de
1 cm de espesor?
A = a. b. c
0.72 = 6220 (1 cm). c
c= 1.1576x10-4 M

3.- Una solución que contiene 2g/L de una sustancia que absorbe en una cubeta de 1 cm
transmite el 75% de luz incidetne. Calcular la transmitancia de una solución que contiene: a)
4 g/L, b) 1 g/L, c) no hay nada, d) 5.4 g/L, e) si el peso molecular de compuesto es 25, calcular
el coeficiente de extinción molar.
Primero hallaremos la constante de proporcionalidad o absortividad. Para ello utilizaremos la
transmitancia.
A=2-logT%
A=0.125
Entonces procedemos a determinar la constante.
A=EIC
0.125=E(1)(2/M)
E=0.0625M
a) A=0.0625M(1)(4/M)
b) A=0.0625M(1)(1/M)
A=0.25
0.25=2-logT% A=0.0625
Entonces 0.0625=2-logT%
T=56.234% T=86.596%

c) No hay d) A=0.0625M(1)(5.4/M)

A=0.3375
0.3375=2-logT%
T=45.973%

e) M=m/MV=2/250=8(10^-3)

A=2-log75%
A=0.125
A=EIC
0.125=E(1)(8)(10^-3)
E=15.625

4.- Una solución 10^-5M de ATP tiene una transmitancia de 0.702 a 260mm en una cubeta
de 1 cm. Calcular:
a)La transmitancia de la solución en una cubeta de 3 cm
b)La absorbancia de una solución en una cubeta de 1 cm o 3 cm
c)la absorbancia de una solución 5(10^-5)M
Primero hallaremos la constante de proporcionalidad o absortividad.
A=2.logT%
A=0.154
0.154=E(1)(10^-5)
E=15400
a) A=15400(3)( 10^-5) b) Absorvancia de una solución en
una cubeta de 1 cm:
A=0.462
A=2-logT% A=15400(1)( 10^-5)
T=34.514% A=0.154
Absorvancia de una solución en una
cubeta de 3 cm:
A=15400(3)( 10^-5)
A=0.462
 c) A=15400(1)( 10^-5)

A=0.77

5. Con los datos graficar las tres curvas de absorción de la Hb en su estado de

desoxihemoglobina, oxihemoglobina y cianometahemoglobina indicando cada curva con
diferente color. Grafique en el sistema (xy) longitud de onda. D.O respectivamente, identificar
para cada curva el o los puntos de máxima absorción.
Longitud Hb HbO2 HbCN
de onda D.O D.O D.O

470 0.07 0.34 0.46

475 0.05 0.31 0.4

480 0.06 0.27 0.35

485 0.11 0.24 0.32

a) ¿Qué importancia tiene la longitud de onda?

La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual

la absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima, y recibe la denominación de
Lambda máximo (λmax).
b) ¿Por qué en las gráficas no coinciden los puntos de máxima absorción a pesar de
pertenecer las tres graficas a laO2 Hb?

Debido que la Hb está en diferentes estados: desoxihemoglobina, oxihemoglobina y

Ciano metahemoglobina por lo tanto actúan a diferentes longitudes de onda.

6. A partir de una solución stock de sulfato de Cobre de 10g% se preparó la siguiente

batería:

Tubo Nº1 Nº2 Nº3 Nº4

Solución 0.2 0.5 2.0 4.0

stock 5
CuSO4 mL

H2O 9.7 9.5 8.0 6.0

destilada 5
mL

Exprese las concentraciones de cada uno de los tubos en ppm y en mg% (en forma
tabular)

10g à 100 mL
X g à lo extraído
X=M

M g à 10 mL
X g à 100 mL
Y g à 1000 mL
Tubo Nº1 Nº2 Nº3 Nº4

ppm (Y) 2.5 5 20 40

mg% (X) 0.25 0.5 2.0 4.0