Estructura y Función Molecular 2

Fundamentos Teóricos de la práctica de laboratorio:

“Electroforesis en gel de agarosa”

 Estructura de las doble hélice de ADN.

Según el modelo de doble hélice, la estructura consiste en dos cadenas de
polínucleótido con las bases nitrogenadas hacia dentro, enfrentadas entre sí
formando parejas, de modo que siempre frente a una Adenina se sitúe una Timina
y frente a una Guanina, una Citosina. Así se cumpliría el principio de proporcio-
nalidad de Chargaff  y la molécula tendría un diámetro constante de unos 20 Å, de
acuerdo con el tamaño molecular de las bases, pues frente a una base
púrica grande habría una pirimidínica pequeña. De lo contrario, presentaría
entrantes y salientes donde coincidieran dos bases del mismo tipo enfrentadas.
Se dice por ello que las dos cadenas son complementarias, pues conociendo la
secuencia de bases de una, se deduce la de la otra por complementariedad.

Esto requiere que ambas cadenas sean antiparalelas, es decir, se orienten con

distinta polaridad en el espacio, de manera que si una tiene la dirección 5′ -> 3′, la
otra se oriente en dirección 3′ -> 5′.
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 Función de las soluciones amortiguadoras

Es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base
conjugada, es decir, sales hidrolíticamenteactivas.
Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la
adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases fuertes. Este
hecho es de vital importancia para la vida ya que solamente un leve cambio en la
concentración de hidrogeniones en la célula puede producir un paro en la actividad
de las enzimas.
Se puede entender esta propiedad como consecuencia del efecto ion común y las
diferentes constantes de acidez o basicidad: una pequeña cantidad de ácido o base
desplaza levemente el equilibrio ácido-base débil, lo cual tiene una consecuencia
menor sobre el pH.

El objeto de su empleo, tanto en técnicas de laboratorio como en la finalidad

funcional del plasma, es precisamente impedir o amortiguar las variaciones de pH
y, por eso, suele decirse que sirven para mantener constante el pH. Los mas
sencillos están formados por mezclas binarias de un ácido débil y una sal del
mismo ácido con base fuerte, por ejemplo, una mezcla de ácido acético y acetato
de sodio; o bien una base débil y la sal de esta base con un ácido fuerte, por
ejemplo, amoníaco y cloruro de amonio.

La aplicación más importante de esta teoría de los amortiguadores es, para los
fisiólogos, el estudio de la regulación del equilibrio ácido-base.
Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual dependerá de
la constante de equilibrio del ácido o base empleado. Son importantes en el
laboratorio y en la industria, y también en la química de la vida. Tampones típicos
son el par amoníaco-catión amonio, ácido acético-anión acetato, anión carbonato-
anión bicarbonato, ácido cítrico-anión citrato o alguno de los pares en la
disociación del ácido fosfórico.

 Composición química y propiedades de la agarosa

Es un polisacárido formado por galactosas alfa y beta que se extrae de las algas de
los géneros Gellidium y Gracillaria.
Es soluble en agua a temperaturas superiores a los 65 °C, dependiendo del grado
de sustituciones hidroxietílicas de sus cadenas laterales. Sustituciones las cuales, se
pueden modificar para provocar que la temperatura de gelificación varíe entre los
17 y los 40 °C.
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La agarosa es un producto natural que forma una matriz inerte y no tóxica que

supone una herramienta indispensable en gran cantidad de técnicas de biología
molecular, bioquímica y biología celular. Su uso más extendido es para construir
geles que permitan separar moléculas deADN mediante electroforesis, además de
ser utilizada para fijar moléculas a su estructura
como anticuerpos, antígenos y enzimas. Igualmente se utiliza para el cultivo
celular y microbiología. Otros usos menos extendidos son la utilización de estos
geles como matrices en la reparación de tejidos dañados.