I.

Introducción:

El nitrato es una de las formas de nitrógeno de mayor interés en las aguas

naturales, residuales y residuales tratadas, se presenta generalmente a nivel
de trazas en el agua de superficie, pero puede alcanzar niveles elevados en las
subterráneas. El nitrato se encuentra sólo en pequeñas cantidades en las
aguas residuales domésticas, pero en el diluyente de las plantas de tratamiento
biológico desnitrificante, el nitrato puede encontrarse en concentraciones de
hasta 30 mg de nitrato como N/L. El nitrato es un nutriente esencial para
muchos autótrofos fotosintéticos, y en algunos casos ha sido identificado como
el determinante del crecimiento de estos. Una concentración alta de nitratos es
indicio de una etapa mayor de mineralización de los compuestos nitrogenados.
En las aguas de algunos pozos suele encontrarse cantidades apreciables de
nitratos, lo que es objetable desde el punto de vista sanitario.

Las principales rutas de ingreso de nitrógeno a las masas de agua son a través
de aguas residuales industriales o municipales, por tanques sépticos o
descargas de corrales ganaderos, residuos animales (incluyendo aves y peces)
y también por las descargas de la emisión de gases de vehículos (Calderon,
2004).

En relación con la ingesta de nitratos y sus posibles consecuencias para el ser

humano como tal, un exceso de estos iones en el agua potable causa
metahemoglubinemia, una enfermedad que principalmente se manifiesta en
bebés de hasta 6 meses de edad y causa la disminución de la capacidad de
transporte de oxígeno de los glóbulos rojos (Figuerelo y Dávila, 2004); como
consecuencia inmediata de ello, ocasiona una disminución del oxígeno en los
órganos y tejidos de todo el cuerpo, con daños en ellos e, incluso, la muerte.

La técnica de monitoreo espectrofotométrico ultravioleta (UV) mide la

absorbancia del nitrato (NO–) a 220 nm y es adecuada para la determinación
rápida de NO3– y el monitoreo de aguas con bajo contenido de materia
orgánica, como aguas naturales sin contaminar y fuentes de agua potable.

Debido a que la materia orgánica disuelta también puede absorber a 220 nm y

a que el NO – no absorbe a 275 nm, se usa una segunda medición a 275 nm
para corregir el valor de NO3 –. La aplicación de esta corrección empírica está
relacionada con la naturaleza y concentración de materia orgánica y puede
variar de una muestra a otra. Consecuentemente, este método no es
recomendado si se requiere una corrección significativa para absorbancia de
materia orgánica, aunque puede usarse en el monitoreo de niveles de NO – en
un cuerpo de agua con un tipo constante de materia orgánica. Los factores de
corrección para la absorbancia de la materia orgánica se pueden establecer por
el método de adiciones en combinación con el análisis del contenido original de
NO– por otro método.

La lectura del blanco se hace para ajustar el cero de absorbancia con agua UP.
La lectura de absorbancia a una longitud de onda de 220 nm, es para obtener
la concentración de NO3– y la lectura a una longitud de onda de 275 nm es
para determinar la interferencia debida a la materia orgánica disuelta. Las
muestras que a 275 nm obtengan resultado mayor a 0,25 unidades de
absorbancia deben diluirse, aunque la concentración de nitratos esté dentro del
rango de medición.

La filtración de muestra tiene la intención de remover la posible interferencia de

partículas suspendidas. La acidificación con HCl 1 N está designada para
prevenir la interferencia de concentraciones de hidróxido o carbonato hasta de
1000 mg CaCO3/L. El cloruro no tiene efecto en la determinación.

La técnica de monitoreo espectrofotométrico ultravioleta de NO – obedece la

ley de Beer entre 0.03 y 5 mg NO3 –-N/L.

Finalmente, según el reglamento de la calidad del agua para consumo humano

(DS N°031-2010-SA) del Ministerio de Salud 2010 (Lima – Perú)
http://bvs.minsa.gob.pe/local/MINSA/1590.pdf; el límite máximo permitido de
parámetros químicos inorgánicos y orgánicos, en el caso de nitrato presenta
niveles máximos de 50 mg NO3 L-1 y de nitritos 3 y 0.20 mg NO2L-1 para
exposición corta y larga, respectivamente.

II. Objetivo:

 DETERMINAR NITRATOS EN AGUAS POR ESPECTROFOTOMETRIA

UV

II.1. Equipo de Seguridad

 Guantes
 Bata
 Mascarilla
 Calzado adecuado

III. Equipos y materiales

III.1. Equipo

 Espectrofotómetro, para usar a 220 nm y 275 nm con celda de

cuarzo de 1 cm de longitud de paso óptico, lámpara de deuterio.
 Equipo de filtración al vacío Reactivos.
 Agua libre de nitrato. Usar agua destilada para preparar todas las
soluciones y diluciones.

Solución patrón de nitrato. Secar nitrato de potasio (KNO3) al 99% o

mayor, en un horno a 105ºC por 24 h. Disolver 0,1805 g en agua
destilada y diluir a 250 mL (100 ppm; 1 mL = 100 ug NO3-).

Solución intermedia de nitrato. Diluir 100 mL de la solución patrón de

nitrato a 1000 mL con agua destilada; (10 ppm; 1 mL = 10 ug NO3-).
 Solución de ácido clorhídrico, HCl, 1 N. Diluir 83 mL de HCl concentrado
en 800
mL de agua UP, completar 1000 mL.

III.2. Materiales

 Balones aforados de 200, 100 y 50 mL.

 Pipetas aforadas de 25, 10, 3 y 2 mL
 Erlenmeyer de 125 mL
 Pipeta graduada de 10 mL
 Celda de cuarzo de 1 cm
 Pipeta Pasteur
 Vasos de precipitados de 100 mL
 Probeta de 25 mL
 Filtros de acetato de celulosa 0.45 μm

IV. Procedimiento:

Lave toda la vidriería con jabón alcalino, posteriormente déjelo en H2SO4 al 10

% por 30 minutos y enjuague muy bien con agua destilada. Reserve esta
vidriería para la determinación de Nitratos y utilice únicamente a la que se le
haya efectuado el control de calidad. Consultar el procedimiento TP0125 PSO
Lavado Material de Vidrio.

Procedimiento de preparación de estándares.

A partir de la solución intermedia de nitratos, prepare las 5 soluciones de

trabajo
(estándar) de 0.03 – 0.10 - 2.0 - 3.0 y 5.0 mg N – NO –/L y elabore la curva de
calibración.
a. Prepare un estándar de 5.0 mg N – NO –/L
A partir de la solución intermedia de 10mg N - NO –/L, tome 25 mL de
esta solución y lleve a volumen en un balón aforado de 50 mL con agua
destilada.

b. Prepare un estándar de 3.0 mg N – NO –/L

A partir de la solución intermedia de 10mg N - NO –/L, tome 15 mL de
esta solución y lleve a volumen en un balón aforado de 50 mL con agua
destilada.

c. Prepare un estándar de 2.0 mg N – NO –/L

A partir de la solución intermedia de 10mg N - NO –/L, tome 10 mL de
esta solución y lleve a volumen en un balón aforado de 50 mL con agua
destilada.

d. Prepare un estándar de 0.10 mg N – NO –/L

A partir de la solución intermedia de 10 mg N – NO –/L, tome 2 mL de
esta solución y lleve a volumen en un balón aforado de 200 mL con agua
destilada.
 e. Prepare un estándar de 0.03 mg N – NO –/L
A partir de la solución patrón de 2,0 mg N – NO –/L, tome 0.6 mL de esta
solución y lleve a volumen en un balón aforado de 200 mL, con agua
UP.

Preparación de la curva estándar.

 Mida 25 mL de cada uno de los estándares de trabajo y transfiéralos a
un Erlenmeyer de 125 mL.
 Adicione 0.5 mL de solución de HCl 1 N y mezclar muy bien

MUESTRA PATRON NITRATOS MATERIA ORGANICA

(mg/L) 220 nm
275 nm 275 nm
MEDICION 1 MEDICION 2 PROMEDIO
5,00 1,2340 1,2360 1,2350 0,0050 0,0000
3,00 0,4720 0,4790 0,4755 0,0070 0,0000
2,00 0,4160 0,4240 0,4200 0,0000 0,0000
0,10 0,0230   0,0230 0,0070 0,0000
0,003 0,0000   0,0000 0,0000 0,0000

Descripción preparación de la muestra.

 Solicite las muestras, deje aclimatar y filtre solo en el momento del

análisis, a través de membrana de acetato de celulosa de 0.45
micrómetros. Las muestras con sólidos suspendidos abundantes,
fíltrelas primero con un prefiltro de fibra de vidrio.
 Filtre aproximadamente unos 100 mL de muestra.
 Purgue una probeta de 25 mL con la muestra filtrada y transfiéralos a un
Erlenmeyer de 125 mL, reserve el resto del filtrado para posibles
diluciones.

MUESTRAS DE AGUA 220 nm 275 nm

Grupo 1 (Agua Tratada-

0,1060 0,0310
Planta Piloto)
Grupo2 (Agua Rio
0,6230 0,3130
Nanay)
Grupo 3 (Agua Potable
0,1300 0,0400
de San Juan)
Grupo 4 (Agua Potable
0,1150 0,0340
de San Juan-Belén)
 V. Determinación de nitratos n aguas por espectrofotometría UV –
VIS

El espectrofotómetro arroja resultados en mg N–NO3/L de acuerdo con el

factor de dilución digitado en el momento de la lectura, aplicando la siguiente
fórmula:

mg N-NO3-/L = m * (Absorbancia 220 nm – (2 * absorbancia 275nm))

Donde:
m = inverso de la pendiente de la curva de calibración.
Absorbancia = Lectura realizada por el espectrofotómetro.
N-NO3–/L = Concentración de nitratos calculada y registrada por el
espectrofotómetro UV-VIS.

Para las muestras y los estándares, reste dos veces la lectura de absorbancia
a 275 nm de la lectura a 220 nm para obtener la absorbancia debida al NO3.

Absorbancia corregida = Absorbancia 220 nm – (2 * absorbancia 275nm)

MUESTRA PATRON NITRATOS MATERIA ORGANICA ABSORBANCIA

(mg/L) 220 nm CORREGIDA
275 nm 275 nm
MEDICION 1 MEDICION 2 PROMEDIO
5,00 1,2340 1,2360 1,2350 0,0050 0,0000 1,2350
3,00 0,4720 0,4790 0,4755 0,0070 0,0000 0,4755
2,00 0,4160 0,4240 0,4200 0,0000 0,0000 0,4200
0,10 0,0230   0,0230 0,0070 0,0000 0,0230
0,003 0,0000   0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

MUESTRA PATRON ABSORBANCIA

(mg/L) CORREGIDA
5,00 1,2350
3,00 0,4755
2,00 0,4200
0,10 0,0230
0,003 0,0000
 ESTÁNDAR NITRATO
1.4000
1.2350
1.2000

1.0000 f(x) = 0.232579230219207 x − 0.0392495925809299

R² = 0.951110522716158
0.8000

0.6000 0.4755
0.4200
0.4000

0.2000
0.0230
0.0000
0.0000
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00

 Ecuación de la Recta y=0,2326 x +0,0392, despejando tenemos

( y +0,0392 )
x=
0,2326

 Donde “x” es igual a la concentración en mg/L de las muestras de agua

( y +0,0392 )
x=
0,2326

 “Y” es igual a la absorbancia corregida, reemplazamos en “x”:

y=0,0440

( 0,0440+0,0392 )
x= =0,3577
0,2326

y=−0,0030

(−0,0030+0,0392 )
x= =0,1556
0,2326

y=0,0500

( 0,0500+0,0392 )
x= =0,3835
0,2326

y=0,0470

( 0,0470+0,0392 )
x= =0,3706
0,2326
Discusión

Se ha efectuado un control con el fin de determinar cuál de los distritos

conllevan una confiabilidad para así proceder a la elección y aplicar la
determinación de N03- en aguas potables de san juan, belén y rio nanay.
El procesamiento estadístico de los datos de linealidad, presentó resultados no
satisfactorios, ya que la ecuación nos muestra un resultado erróneo debido a
que el r2 es menor a 0.9777, comprendiendo que posiblemente haya habido
ocurrido una contaminación cruzada o mala manipulación de los instrumentos.

Resultados

Una vez cumplido el procedimiento, se leyeron las absorbancias de los

patrones ya coloreados. Los resultados arrojados por el mismo se muestran a
continuación.
Los valores mostrados en la tabla Nº 3 corresponden al promedio de 4
mediciones realizadas.

Tabla Nº 3: lectura de absorbancias de los patrones en función de la

concentración de nitratos.

ABSORBANCI CONCETRACIÓ
MUESTRAS DE AGUA 220 nm 275 nm
A CORREGIDA N (mg/L)
Grupo 1 (Agua
0,1060 0,0310 0,0440 0,3577
Tratada-Planta Piloto)
Grupo2 (Agua Rio
0,6230 0,3130 -0,0030 0,1556
Nanay)
Grupo 3 (Agua Potable
0,1300 0,0400 0,0500 0,3835
de San Juan)
Grupo 4 (Agua Potable
0,1150 0,0340 0,0470 0,3706
de San Juan-Belén)

A partir de las lecturas de absorbancia-concentración de patrones (tabla Nº3),

pudo construirse la recta de regresión (curva patron), que muestra la relación
que existe entre las concentraciones conocidas de nitratos y las lecturas de
absorbancias dadas por el espectrofotómetro.

Conclusiones

La curva de calibración obtenida presenta linealidad para concentraciones

comprendidas entre 5,00 a 0.003 mg/l de nitrato, los resultados obtenidos a
través del análisis estadístico de los datos confirman que las aguas potables de
san juan, belén están dentro del Reglamento y las normas técnicas que emita
la Autoridad de Salud al nivel nacional,

8. Referencias bibliográficas
Calderón, R. “Evaluación de la comunidad de macro invertebrados bentónicos y
la calidad fisicoquímica del agua en la parte alta de la quebrada El Carracá, del
municipio de Los Santos”, tesis de licenciatura, Universidad Industrial de
Santander, Colombia, 2004.

Figueruelo, J; Dávila, M. Química física del ambiente y de los procesos

medioambientales. España: Reverté, S.A., 2004, pp. 570.

Methods for Chemical Analysis of Water and Wastes. United States

Environmental Protection Agency. Cincinnati, 1983.

Reglamento de la calidad de agua para consumo humano: D.S. N° 031-2010-

SA/ Ministerio de Salud. Dirección General de Salud Ambiental – Linma:
Ministerio de Salud; 2011. 44 p.;ilus.

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American

Public Health Association, American Water Works Association, Water Pollution
Control Federation. 21 ed., United Estates of America. pp 4-83 a 4-84.