Informe de resultados de la Práctica 2

Asignatura de Biocatálisis y microencapsulación de enzimas

Laura Isabella Rendón Muñoz*

*Estudiante del Máster en Ingeniería Ambiental y de Procesos Sostenibles

Para identificar si existe actividad amilasa en un detergente comercial empleado en los ensayos y si son
adecuadas para lavar durante 50 min a temperaturas de 25°C (Tamb) y 50°C, se empieza con la realización de
la recta de calibrado (ver Figura 1) teniendo en cuenta los datos de la Tabla 1.

Tabla 1. Datos patrón de maltosa

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6
Maltosa (mmol) 0 0,0004 0,0008 0,0012 0,0016 0,002
Agua (mL) 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
DNS (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Concentración maltosa (mM) 0 0,444 1 1,714 2,667 4
Absorbancia a 540 nm 0 0,255 0,445 0,736 0,903 1,104

Figura 1. Recta de calibrado maltosa

Ahora bien, dados los datos de absorbancia luego de los ensayos (ver Tabla 2), se gráfica este parámetro
frente al tiempo de reacción en condiciones posteriores al lavado a Tamb y a 50°C (ver Figura 2).

Tabla 2. Absorbancia del detergente lavando a diferentes temperaturas

t=0 min t=10 min t=20 min t=30 min t=40 min t=50 min
Absorbancia a 540 nm
0 0,08 0,205 0,278 0,38 0,442
luego de lavado a Tamb
Absorbancia a 540 nm
0 0,143 0,274 0,482 0,558 0,712
luego de lavado a 50°C
 Figura 2. Gráfica de absorbancia detergente comercial frente al tiempo de reacción

Luego, con la ecuación encontrada se procede a calcular actividad enzimática (ver Tabla 3) mediante la
siguiente formula:

Tabla 3. Absorbancia del detergente comercial a diferentes temperaturas

Rangos de tiempo
0-10 min 10-20 min 20-30 min 30-40 min 40-50 min MEDIA
Tamb 0,008 0,0125 0,0073 0,0102 0,0062 0,00884
ΔAbs/min
50°C 0,0143 0,0131 0,0208 0,0076 0,0154 0,01424
Actividad Tamb 0,126 0,197 0,115 0,161 0,098 0,139
enzimática
(µmol/min) 50°C 0,225 0,206 0,328 0,120 0,243 0,224

Como se puede observar en la Tabla 3, se presenta actividad enzimática en cualquiera de las temperaturas
de lavado con detergente comercial, es decir que en este se ha agregado amilasa, comportándose aún mejor
a temperatura de 50°C.

Frente a esto, se comparan valores de actividad enzimática con aquellos calculados utilizando medidas de
absorbancia de amilasa soluble a temperatura ambiente (ver Tabla 4 y Figura 3).

Tabla 4. Absorbancia de amilasa soluble

t=0 t=2 min t=4 min t=6 min t=8 min t=10 min MEDIA
Absorbancia a 540 nm de
0 0,267 0,446 0,694 0,878 1,050 ---
amilasa soluble a Tamb
ΔAbs/min --- 0,1335 0,0895 0,124 0,092 0,086 0,105
Actividad enzimática
--- 2,10 1,41 1,95 1,45 1,36 1,66
(µmol/min)
 Figura 3. Gráfica de absorbancia amilasa soluble frente al tiempo de reacción

La amilasa comercial soluble a Tamb presenta una actividad enzimática mucho mayor a aquella identificada en
el detergente comercial a la misma temperatura o a 50°C. Esto es de esperarse, pues tenemos mayor
disponibilidad de la enzima, así como condiciones menos agresivas dado que los detergentes contienen otros
componentes que pueden disminuir la actividad de las amilasas. Con dicha comparación, es posible afirmar
que el uso de la amilasa en estos productos no es realmente eficiente.

Para finalizar, se compara y verifica como con una concentración reducida de amilasa comercial soluble se
puede conservar el valor de actividad reportado para un detergente comercial al transcurrir 10 min. Se calcula
entonces las unidades contenidas en el preparado en laboratorio:

30 U / 1 mg * 5 mg / 50 mL * 1 mL = 3 U

Con este valor, transcurridos 10 min, la actividad enzimática mostrada (ver Tabla 4) es de 1,36 µmol/min. De
acuerdo con las estimaciones plasmadas en la Tabla 3, la actividad enzimática del detergente a T amb y a 50°C
corresponde a 0,126 µmol/min y 0,225 µmol/min, respectivamente, estando, como ya se menciona, muy por
debajo de la calculada para la amilasa soluble comercial. Ahora bien, como el preparado de enzima comercial
se prueba a Tamb, se toma el ensayo del detergente de las mismas condiciones, siendo así que la cantidad
correspondiente de preparado de enzima comercial para obtener la misma actividad que con la enzima del
detergente es:

3U → 1,36 µmol/min
X  0,126 µmol/min

X = 0,28 U

0,28 U * 1 mg / 30 U = 0,0093 mg

Dado que a 50°C en el ensayo del detergente al transcurrir 10 min la actividad era mayor, no es válida una
comparación con el preparado enzimático a Tamb, pues es posible que, si esa misma amilasa soluble se
preparase a 50°C, su actividad enzimática sea mayor a los 1,36 µmol/min reportados.