BIOQUÍMICA PRÁCTICA UAMH, UAE y UAO ENERO – JUNIO 2022

PRÁCTICA No. 10
QUÍMICA SANGUÍNEA
UREA, CREATININA, ACIDO ÚRICO Y PROTEÍNAS TOTALES

OBJETIVO
Cuantificar la concentración de Urea, Creatinina, Ácido Úrico y Proteínas
Totales en sangre para comprender su impacto en la función del organismo.

PRE – REPORTE:
1.- ¿Qué es la Urea y como es que se genera?

2.- Describa la función de la Creatina y como es proceso de eliminación.

3.- ¿Qué son las proteínas totales? ¿Cuáles son sus funciones principales?

4.- ¿Qué es el Ácido Úrico y como se genera?

5.- Investigue lo siguiente:

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Longitud de onda que

Concentración del
Práctica requiere para usar el
Estándar
espectrofotómetro
Urea
Creatinina
Ácido Úrico
Proteínas Totales

INTRODUCCION
UREA
La urea es el principal producto nitrogenado de desecho que se produce por
un proceso catabólico de degradación proteica, a partir de los aminoácidos
mediante desaminación oxidativa se trasforman en amoniaco y este a su vez
en el producto final (urea) en el ciclo de la ornitina dentro del hígado. La urea
es transportada por la sangre para ser excreta por vía renal.
Sus concentraciones varían fisiológicamente, dependiendo de manera directa
del consumo de proteínas en la dieta y del estado de hidratación etc.
Pudiendo disminuir su concentración sérica en situaciones como:
Ø Embarazo normal (por aumento de la circulación renal plasmática y del
índice de filtración glomerular y el estado anabólico del cuerpo)
Ø Insuficiencia hepática grave, debido a la incompetencia del hígado para
convertir el amoniaco en urea.
Ø Cambios rápidos en la hidratación
Mientras que el aumento de concentración sérica se da en condiciones como:
Ø Disfunción renal debido a la incapacidad de los riñones para excretar la
orina.
Ø Deshidratación debido a la disminución del volumen de plasma
circulante.
CREATININA

La Creatininaes una sustancia nitrogenada de desecho que se genera a partir

de la creatina aminoácido que forma parte del tejido muscular, es catalizadopor
acción de la creatinfosfocinasa (CPK) cuando se requiere energía en procesos
metabólicos generando el metabolito creatinina que pasa a la circulación a un
índice constante. En varones la cantidad de producción es mayor que en

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mujeres debido a la diferencia de masa muscular. Este producto final es

generado y excretado a un índice constante, al ser eliminado mediante vía renal
se utiliza con fines diagnósticos como indicador del índice de filtración
glomerular (IFG) en procesos de disfunción renal.

La concentración sérica de la creatinina puede disminuir en:

Ø Procesos de desgaste muscular profundo como en la distrofia muscular y la
miastenia gravis.
Mientras que un aumento puede deberse a situaciones como:
Ø Insuficiencia renal crónica
Ø Disminución crónica del IFG debido a causas pre-renales, como en la
insuficiencia cardiaca
Ø Personas con masa muscular muy grande, que producen cantidades mayores
de creatinina (aumento ligero)
Ø Cetoacidosis diabética, debido al aumento de cetonas en el suero
Ø Rechazo de un trasplante de riñón, debido a una filtración escasa de
productos de desecho por el riñón ineficaz
La determinación de urea y creatinina son dos de los estudios más solicitados
para evaluar la capacidad del riñón para eliminar desechos metabólicos.

ÁCIDO ÚRICO
El ácido úrico son sustancias que se forman principalmente en el hígado a
partir de los núcleos celulares animales como la carne o el pescado a partir de
la xantina por acción de la xantinooxidasa. Se produce de manera natural en el
organismo como resultado del metabolismo de las purinas (constituyentes de
las nucleoproteínas). El ácido úrico y sus sales, los uratos, tiene un papel
antioxidante, es decir son capaces de eliminar los radicales libres.
El ácido úrico tiene dos orígenes:
· Origen Endógeno: es el que se forma en nuestro organismo a través de
reacciones de degradación de las células.
· Origen Exógeno: a partir de la dieta, de todos aquellos alimentos ricos
en purinas.
La principal vía de eliminación del ácido úrico es a través de la orina, por lo
cual es muy importante la ingesta de agua. Una cuarta parte de este metabolito
es eliminado y degradado por la flora intestinal. El adulto medio tiene un

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contenido total aproximadamente de 1 a 2 gramos de ácido úrico, lo cual

puede considerarse una reserva miscible con un recambio alto.

PROTEÍNAS TOTALES
Las proteínas constituyen la mayor porción de solutos en el plasma. Las
proteínas del suero se dividen en dos fracciones Albúmina y Globulina. La
albúmina representa el más abundante constituyente de las proteínas,
mientras que las globulinas son un grupo heterogéneo de componentes como
las inmunoglobulinas, complemento, enzimas, factores de coagulación,
hormonas y proteínas de transporte específicas.
La determinación de las proteínas totales es útil en la detección de
hiperproteinemia debido a la hemoconcentración como en las deshidrataciones
y varias condiciones de hiperglobulemia con mieloma múltiple,
macroglobulinemia de Wadenstrom, infecciones y ciertas enfermedades
hepáticas entre otros. Los ensayos de proteínas totales son útiles también en la
detección de hipoproteinemia observada en la mal nutrición, enfermedades
renales asociadas con pérdida de proteínas, edema, hemorragias, procesos
malignos y otras condiciones.

MATERIAL Y REACTIVOS
Pipetores Puntas desechables para pipetores
Baño María Espectrofotómetro
Cubetas para espectrofotómetro Kleenex o papel muy fino
Tubos de ensayo Muestra: Suero o Plasma
Reactivos para la determinación de:
Ø Urea
Ø Creatinina
Ø Ácido úrico
Ø Proteínas totales

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UREA
Principio de la técnica
En presencia de ureasa, la urea se hidroliza en amonio y dióxido de carbono.
El amonio producido en esta reacción se combina con α-cetoglutarato y
NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa dando como resultado
glutamato y NAD. El consumo de NADH, que se mide por la disminución de
su absorción en la región ultravioleta, es proporcional a la cantidad de urea de
la muestra.
METODOLOGIA PARA DETERMINACION DE UREA
1.- Una vez descongelado el suero, y haciendo uso de los pipetores y sus
respectivas puntillas colocar los reactivos de acuerdo con la siguiente tabla:
Leer contra blanco de reactivo
Tubos 0.5 ml 12.5 µl
BLANCO Reactivo I Agua destilada
ESTÁNDAR Reactivo I Solución Estándar o patrón

MUESTRA Reactivo I Suero

2.- Mezclar cada uno de los tubos y añadir:

0.5 ml
BLANCO Reactivo 2
ESTANDAR Reactivo 2
MUESTRA Reactivo 2

3.- Mezclar muy bien los tres tubos e incubarlos a 370 C durante 10 minutos.
4.- Calibrar el espectrofotómetro a una longitud de onda de 510 nm y después
de esto leer la muestra problema.
5.- Anotar los resultados.
6.- Cálculos
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‫ܽݎݐݏ݁ݑ݈ܾ݉ܽ݁݀ܽ݅ܿ݊ܽݎ݋ݏܾܣ‬ ݉݃
ൈ ‫ݎܽ݀݊žݐݏ݈݁݁݀݊×݅ܿܽݎݐ݊݁ܿ݊݋ܥ‬ሺ ሻ
‫ݎܽ݀݊žݐݏ݈ܾ݁݁݀ܽ݅ܿ݊ܽݎ݋ݏܾܣ‬ ݀‫ܮ‬

Estándar: Urea 50 mg/dl.

Valores de referencia: 15 – 45 mg/dL

CREATININA
Principio de la técnica:
La creatinina es un medio alcalino sin proteínas, reacciona con picrato para
formar un compuesto rojo anaranjado (reacción de Jaffé)

METODOLOGIA PARA DETERMINACION DE CREATININA

1.- Una vez descongelado el suero, y haciendo uso de los pipetores y sus
respectivas puntillas colocar solamente el reactivo en un tubo de ensaye:
2.- Calibrar el espectrofotómetro con el blanco a una longitud de onda de 492
nm y después de esto:
3.- Mezclar muy bien el tubo que contiene reactivo o estándar y vaciarlo
inmediatamente en la cubeta para espectrofotómetro e introducirlo en el
espectrofotómetro y tomarle la primera lectura (A1) a los 30 seg, dejarlo en el
espectro y tomarle la segunda lectura (A2) a los 90 seg.
Hacer lo mismo con el tubo de la muestra problema.
· Las cantidades a utilizar son las siguientes:
Tubos 1 ml 100 µl
BLANCO Reactivo Agua destilada
ESTÁNDAR Reactivo Solución Estándar o patrón

MUESTRA Reactivo Suero

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4.- Anotar los cálculos

5.- Calcular ΔA = A2 - A1
ȟ‫ܽݎݐݏ݁ݑ݉ܣ‬ሺ‫ܣ‬ଶ െ  ‫ܣ‬ଵ ሻ ݉݃
ൈ ‫ݎܽ݀݊žݐݏ݈݁݁݀݊×݅ܿܽݎݐ݊݁ܿ݊݋ܥ‬ሺ ሻ
ȟ‡•–ž†ƒ”ሺ‫ܣ‬ଶ െ  ‫ܣ‬ଵ ሻ ݀‫ܮ‬

Estándar: Creatinina 2 mg/dL

Valores de referencia:
Ø Hombres: 0.7 – 1.4 mg/dl
Ø Mujeres: 0.6 – 1.1 mg/dl

ÁCIDO ÚRICO
Principio de la técnica
El ácido úrico oxidado por la uricasa a alantoina y peróxido de hidrógeno que
en presencia de la peroxidasa, 4-aminofenazona y 2,4- DicloroferolSulfonato
forma un compuesto rosáceo:
Acido Úrico + 2H2O + O2 → Alantoina + CO2 + 2H2O2
2H2O2 + 4-AF + DCPS → Quinonailina + 4H2O
La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la
concentración de ácido úrico presente en la muestra ensayada.

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METODOLOGIA PARA DETERMINACION DE ACIDO URICO

1.-Una vez descongelado el suero, y haciendo uso de los pipetores y sus
respectivas puntillas colocar los reactivos de acuerdo con la siguiente tabla:

Tubos 1 ml 25 µl
BLANCO Reactivo Agua destilada
ESTÁNDAR Reactivo Solución Estándar o patrón

MUESTRA Reactivo Suero

2.- Mezclar muy bien los tres tubos e incubarlos a 37º C durante 10 minutos.
3.- Calibrar el espectrofotómetro con el blanco a una longitud de onda de 520
nm y después de esto leer la muestra problema.
4.- Anotar los resultados
5.- Cálculos:
‫ܽݎݐݏ݁ݑ݈ܾ݉ܽ݁݀ܽ݅ܿ݊ܽݎ݋ݏܾܣ‬ ݃‫ݎ‬
ൈ ‫ݎܽ݀݊žݐݏ݈݁݁݀݊×݅ܿܽݎݐ݊݁ܿ݊݋ܥ‬ሺ ሻ
‫ݎܽ݀݊žݐݏ݈ܾ݁݁݀ܽ݅ܿ݊ܽݎ݋ݏܾܣ‬ ݀‫ܮ‬

Estándar: ácido úrico 6 mg/dL

Valores de referencia:
Ø Mujeres: 2.5 – 6.8 mg/dL
Ø Hombres: 3.6 – 7.7 mg/dL

PROTEÍNAS TOTALES
Principio de la técnica
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en
presencia de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante. La intensidad

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del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la

muestra ensayada.

El procedimiento de proteínas totales es una modificación de la reacción de

Biuretdescrito originalmente por Kingsley. Un color violeta resulta cuando los
iones cúpricos en medio alcalino se complejan con los electrones no saturados
de los átomos de nitrógeno y oxígeno de los enlaces de todas las proteínas. La
cantidad de color producido es proporcional a la concentración de proteínas y
es medida espectrofotométricamente a 550 nm.

METODOLOGIA PARA DETERMINACION DE PROTEINAS

TOTALES

1.- Una vez descongelado el suero, y haciendo uso de los pipetores y sus
respectivas puntillas colocar los reactivos de acuerdo con la siguiente tabla:
Tubos 1 ml 25 µl
BLANCO Reactivo Agua destilada
ESTÁNDAR Reactivo Solución Estándar o patrón

MUESTRA Reactivo Suero

2.- Mezclar muy bien los tres tubos e incubarlos a 370 C durante 10 minutos.
3.- Calibrar el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm y después
de esto leer la muestra problema.
4.- Anotar los resultados.
5.- Cálculos
‫ܽݎݐݏ݁ݑ݈ܾ݉ܽ݁݀ܽ݅ܿ݊ܽݎ݋ݏܾܣ‬ ݃‫ݎ‬
ൈ ‫݅ܿܽݎݐ݊݁ܿ݊݋ܥ‬ó݈݊݀݁݁‫ݐݏ‬á݊݀ܽ‫ݎ‬ሺ ሻ
‫ݐݏ݈ܾ݁݁݀ܽ݅ܿ݊ܽݎ݋ݏܾܣ‬á݊݀ܽ‫ݎ‬ ݀‫ܮ‬

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Estándar: Proteínas Totales: 7 g/dL

Valores de referencia:
Ø Adultos: 6.6 – 8.3 g/dL
Ø Recién nacidos: 5.2 – 9.1 g/dL

Resultados
(Anotar resultados de las lecturas en el espectrofotómetro y realizar los
cálculos correspondientes)
NOMBRE DE LA PRACTICA
FECHA DE REALIZACION
NOMBRE DEL DOCENTE
GRADO Y GRUPO
INTEGRANTES DEL EQUIPO

REPORTE
1.- ¿Cuáles aminoácidos promueven la formación de la urea y que indica un
valor por encima del rango normal?

2.- Si no se eliminan del organismo de manera correcta la urea, creatinina y

ácido úrico ¿Qué le pasa al organismo?

3.- ¿Qué órgano se evalúa al realizar estas determinaciones?

4.- ¿Qué es el aclaramiento de la creatinina? y ¿Cómo se realiza?

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5.- ¿Qué estudios complementarios se requieren para el diagnóstico de la

gota?

6.- Importancia de la fosfocreatina en el musculo esqueletico

7.- Importancia de la ciclo Glucosa – Alanina para el metabolismo de la Urea

8.- Completar la siguiente tabla:

Determinación Concentración Interpretación
Urea

Creatinina

Ácido úrico

Proteínas totales

CONCLUSIONES
(Que aporta esta práctica al desarrollo de su profesión)

Bibliografía:
Cardellá, L., & Hernández, R. (2005). Bioquimica médica tomo III
metabolismo intermediario y su regulación. Ciencias médicas .

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