Pruebas renales: creatinina, ácido úrico, urea y BUN

GUIA ÚNICA DE LABORATORIO
SECCIONAL: BARRANQUILLA
FACULTAD: Ciencia de la Salud
PROGRAMA: Medicina
ASIGNATURA: Bioquímica
SEMESTRE: Segundo
NOMBRE DE LA PRACTICA DE LABORATORIO:
PRUEBAS DE FUNCIÓN RENAL: CREATININA, ÁCIDO ÚRICO, UREA Y BUN
LABORATORIO No 7.
MATEO MORON
CARLOS MARQUEZ
JOSE MONTERROSA
ANDRES VILLANUEVA
1. INTRODUCCIÓN
Las pruebas de función renal son exámenes comunes de laboratorio empleados

para evaluar el funcionamiento de los riñones. Las enfermedades renales crónicas
suelen cursar de forma asintomática durante mucho tiempo, por lo tanto, la
determinación eficaz de la función renal tiene gran importancia en la práctica clínica
tanto para el diagnóstico temprano de la insuficiencia renal como para el
seguimiento del tratamiento. En las pruebas de función renal se evalúan metabolitos
tanto en sangre como en orina y corresponden a productos finales del metabolismo
de las proteínas y bases nitrogenadas. Estos son: creatinina, ácido úrico y urea
MARCO TEORICO
¿Qué es?
El ácido úrico es un compuesto orgánico formado por carbono, nitrógeno, oxígeno e
hidrógeno que se forma cuando el metabolismo desintegra las purinas, unas
sustancias que se encuentran en algunos alimentos y bebidas como el hígado, las
anchoas, las judías, la caballa o la cerveza, entre otros.
Casi todo el ácido úrico está disuelto en la sangre que viaja directamente a los
riñones. Desde allí se excreta por la orina en forma de sales de sodio o en forma
libre.
Si el cuerpo produce demasiado ácido úrico o no elimina lo suficiente puede

provocar que se desarrolle hiperuricemia, gota y también pueden provocar que se
produzcan cálculos renales que podrían bloquear las vías urinarias y causar
infecciones renales y/o insuficiencia renal. También puede elevarse si no se elimina
lo suficiente por la orina.
¿Cómo se detectan los niveles altos de ácido úrico?

Para saber si la cantidad de ácido úrico en sangre es la adecuada se pueden
verificar mediante un análisis a través de una muestra de sangre.
Para que los resultados sean fiables los especialistas recomiendan no ingerir
ninguna comida ni ninguna bebida durante las cuatro horas anteriores a la
realización de la prueba. Además, aunque algunos tratamientos farmacológicos
podrían alterar los resultados. Los especialistas aconsejan preguntar antes al
médico y no retirar, ni modificar las dosis antes de hablar con él.
Las razones principales por las que se puede solicitar la realización del examen son
para comprobar los niveles de ácido úrico en sangre y confirmar o descartar si esto
podría derivar en el desarrollo de enfermedades como las patologías renales o la
gota.
Además, si el paciente va a someterse a un tratamiento de quimioterapia, el médico

también puede solicitar la prueba antes de que empiece el tratamiento. Esto se
justifica en que durante el tratamiento oncológico se destruyen células ricas en
purinas y además los pacientes pueden perder peso de forma muy rápida y como
consecuencia, se puede incrementar la cantidad de ácido úrico que hay en la
sangre.
También puede solicitarse dicho análisis si el paciente tiene enfermedad renal

crónica, artritis gotosa crónica o alguna lesión del riñón.
CREATININA
La creatinina es un producto metabólico no enzimático de la creatina y la

fosfocreatina. Condiciones normales, se produce una tasa constante desde el tejido
muscular esquelético. La creatina se sintetiza mayoritariamente en el hígado a partir
de arginina, glicina y metionina. Luego es transportada al músculo, donde se
convierte en fosfocreatina, una reserva de “alta energía” (Figura 1 y 2).
PALABRAS CLAVE
ACIDO: Sustancia capaz de ceder protones que se caracteriza por provocar

cambios de color en sustancias orgánicas, naturales o sintéticas (indicadores) y por
reaccionar muy rápidamente con sustancias de otro grupo (bases); se designa con el
nombre genérico ácido, seguido de un nombre específico que se forma por
adjetivación del elemento que hace de átomo central.
URICO: Que se produce como desecho en el metabolismo humano y de muchos

animales, es tóxico y se elimina a través de la orina
SUERO: Sustancia acuosa que se separa de un líquido orgánico cuando este se

encuentra fuera del organismo y se ha coagulado
ABSORBANCIA: Medida de la cantidad de luz absorbida por una solución. Se mide

con un colorímetro o con un espectrómetro.
Figura 1 y 2. Síntesis desde creatina hasta creatinina.
La cantidad de creatina en el organismo depende de la masa muscular y se renueva

diariamente (aproximadamente el 2% por día de la reserva total de creatina se cicla
de forma no enzimática produciendo creatinina). La creatinina forma parte de los
constituyentes no proteicos de la sangre. Se elimina de la circulación por filtración
72
glomerular y se excreta por la orina. La concentración de cratinina plasmática

depende de la masa muscular del individuo, la tasa de recambio de la creatina y la
función renal. Los niveles plasmáticos de creatinina son contantes; sin embargo,
pueden alterarse por la dieta. La creatinina en sangre está entre 1 y 2 mg/100 ml. La
creatinina es una molécula pequeña (113 Dalton) y no circula unida a proteínas
plasmáticas, por lo que tiene un umbral bajo de eliminación y su excreción es
relativamente fácil. Un exceso de creatinina en sangre por encima de 5 mg/100 ml es
indicador de insuficiencia renal con un mal pronóstico. En condiciones normales, la
excreción extrarrenal de creatinina es mínima; sin embargo, a medida que decae la
Volumen de Filtración Glomerular (VFG) se produce un aumento de su excreción a
nivel intestinal, favorecida por la proliferación de flora intestinal capaz de degradarla.
Depuración de la creatinina
La prueba de la depuración de la creatinina constituye una cuantificación específica

de la función renal, principalmente de la filtración glomerular (FG). Se estima la
concentración de creatinina en sangre y orina, el volumen de orina colectada en 24
horas y ajustando los datos con el peso y talla del paciente. La fórmula para
determinar la depuración de la creatinina es:
Cro: creatinina en orina; V: volumen de orina; Crs: creatinina en suero y SC:

superficie corporal, que se calcula así:
Actualmente existen más de 40 ecuaciones para determinar la FG; sin embargo, la

más representativa es la de Cockcroft-Gault:
73
La depuración de la creatinina del plasma se relaciona directamente con el caudal

glomerular siempre que no hay presencia de proteinuria (interfiere en la
determinación) y se recoja cuidadosamente el volumen de orina.
ÁCIDO ÚRICO
Figura 3. Ácido úrico
El ácido úrico es un producto de desecho de la descomposición final de las purinas y

es excretado por la orina (Figura 3). En el hígado, las purinas como la adenina y la
guanina, productos del catabolismo de los ácidos nucleicos, son convertidas en
ácido úrico. Este es transportado hacia los riñones donde se filtra a través del
glomérulo, vía responsable de la excreción del 70% del ácido úrico. Pequeñas
cantidades de ácido úrico son metabolizadas por la flora intestinal y excretadas por
las heces. La mayoría del ácido úrico en el plasma se encuentra en forma de urato
monosódico, que al pH plasmático es relativamente insoluble. Concentraciones de
ácido úrico por encima de 6,8 mg/dl causa saturación plasmática con la consecuente
precipitación de los cristales de urato. Los sitios de predilección para la formación de
cristales son las regiones periféricas del cuerpo (por ejemplo, las articulaciones de
las extremidades). El intervalo de referencia normal del ácido úrico en sangre es 1.5
a 6.0 mg/dl en mujeres y 2.5 a 7.0 en hombres. Un valor superior a 6.8 mg/dl a 37°C
y pH neutro se define como hiperuricemia
UREA
74
La urea es el principal producto de excreción del catabolismo de las proteínas. Se

sintetiza en el hígado mediante el ciclo de la urea a partir de amoníaco derivado de
la desaminación de los aminoácidos. La urea es transportada por la sangre hacia el
riñón donde se filtra fácilmente a través del glomérulo. Aunque la mayor parte de la
urea que se filtra a nivel glomerular se elimina por la orina, cerca del 40% se
reabsorbe por difusión pasiva durante el paso por los túbulos renales. La cantidad
de urea que se reabsorbe depende del flujo urinario y el grado de deshidratación del
individuo. Aproximadamente el 10% de la urea se excreta por el tubo digestivo y la
piel.
El nitrógeno ureico en la sangre (BUN) corresponde a la cantidad de nitrógeno

circulando en forma de urea en el torrente sanguíneo. El análisis de BUN se realiza
con el fin de determinar el funcionamiento renal. Se observan aumentos en el BUN
en caso de perfusión renal inadecuada, shock, hipovolemia (por causas prerrenales),
nefritis crónica, nefroesclerosis, necrosis tubular, glomerulonefritis (por causas
renales) y la obstrucción de las vías urinarias (por causas pos renales). También se
aprecian incrementos en la insuficiencia cardíaca, la deshidratación y durante
períodos de alta ingestión proteica.
2. OBJETIVOS
 Identificar la importancia de la cuantificación de ácido úrico en sangre y orina

como un indicador de enfermedades asociadas con el metabolismo de las bases
púricas.
 Asociar los niveles alterados de creatinina en sangre y orina con

enfermedades asociadas con el metabolismo de las proteína y excreción de sus
productos.
 Evaluar la utilidad clínica de la cuantificación de urea en sangre y orina en

ciertas enfermedades que afectan su producción y eliminación.
3. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipos y Reactivos
Materiales
Espectrofo micro Reactivos: (A) Hidróxido sódico 0,4 mol/L
75
tómetro pipetas IRRITANTE; (B): Ácido pícrico 25 mmol/L.

Baño de Solución patrón glucosa/urea/creatinina: Glucosa
María 1000µ 100 mg/dL, urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL
Centrifuga mL , (177 μmol/L).
dora 10µL,2
Tubo de 0µL y Muestra: Suero, plasma y orina, recogidos
ensayo 50µL mediante procedimientos estándar. Diluir la orina
15x160 Beaker fresca 1/50 con agua destilada antes de medir.
-1
mm . Los anticoagulantes como la heparina, EDTA,
Gradilla. oxalato o fluoruro, no interfieren. La creatinina en
las muestras es estable 24 horas a 2-8ºC.
Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, detergente 1,5

g/L, diclorofenolsulfonato 4 mmol/L, uricasa >
0,12 U/mL, ascorbato oxidasa > 5 U/mL,
peroxidasa > 1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,5
mmol/L, pH 7,8. Solución patrón de Ácido Úrico:
Ácido úrico 6 mg/dL (357 μmol/L).
Muestra: Suero, plasma u orina recogidos

mediante procedimientos estándar. Diluir la orina
1/10 con agua destilada antes del ensayo. El
ácido úrico en suero o plasma es estable 7 días a
2-8ºC. Los anticoagulantes como la heparina,
EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren. El ácido
úrico en orina es estable 4 días a temperatura
ambiente si se ajusta el pH a > 8 con NaOH.
Reactivos:(A) Tris 100 mmol/L, 2-oxoglutarato 5,6

mmol/L, ureasa > 140 U/mL, glutamato
deshidrogenasa > 140 U/mL, etilenglicol 220 g/L,
sodio azida 0,95 g/L, pH 8,0. (B) NADH 1,5
mmol/L, sodio azida 9,5 g/L.
Solución patrón glucosa/urea/creatinina: Glucosa

100 mg/dL, urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL
(177 μmol/L).
Muestra: Suero, plasma u orina recogidos

mediante procedimientos estándar. Diluir la orina
1/50 con agua destilada antes del ensayo. La
urea en suero o plasma es estable 7 días a 2-
8ºC. Se recomienda la heparina como
anticoagulante. La urea en orina es estable 3
días a temperatura ambiente si no se produce
crecimiento bacteriano.
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4. METODOLOGÍA
DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO, PLASMA Y ORINA
Fundamento: La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en

medio alcalino originando un complejo coloreado. Se mide la velocidad de formación
de dicho complejo en periodos iniciales cortos, evitándose así la interferencia de
otros compuestos. Método: Cinética-espectrofotométrica. Reactivos: (A) Hidróxido
sódico 0,4 mol/L IRRITANTE; (B): Ácido pícrico 25 mmol/L. Solución patrón
glucosa/urea/creatinina: Glucosa 100 mg/dL, urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL (177
μmol/L).
Procedimiento:
a. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a 37ºC.
b. Pipetear en dos tubos de ensayo
1. Patrón: 1 mL de reactivo + 0,1 mL μL de patrón.
2. Muestra: 1 mL de reactivo + 0,1 mL de muestra.
c. Mezclar y pasar la muestra por el espectrofotómetro.
d. Leer la absobancia a 500 nm después de 30 segundos (A1) y a los 90 segundos

(A2).
a. Medición en el equipo:
• Siga las instrucciones de manejo del equipo.
• Al seleccionar concentración, en la pantalla aparecerán los parámetros a evaluar.
Seleccionar creatinina.
• Realice la lectura del blanco: para esto debe presionar la flecha que aparece
debajo de la palabra nuevo blanco y esperar que se encienda la luz verde que indica
que el equipo está listo para succionar la solución blanco (agua destilada).
• Realice la lectura del patrón (nuevo calibrador) y luego de la muestra: Esperar que
se encienda la luz verde y colocar el tubo en posición para que la muestra sea
succionada. El equipo arrojará el valor de la concentración.
Cálculos
La concentración de proteína en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula
general:
77
Si se utiliza el patrón de calibración suministrado:
Valores de referencia
DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SUERO, PLASMA Y ORINA
Fundamento: El ácido úrico presente en la muestra origina, según las reacciones

acopladas descritas a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometría.
Procedimiento:
a. Atemperar el reactivo hasta que alcance la temperatura ambiente.
b. Pipetear en dos tubos de ensayos lo que se indica:
1. Patrón: 1 mL de reactivo + 25 μL de solución patrón
2. Muestra: 1 mL de reactivo + 25 μL de muestra
c. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-
25ºC) o durante 5 minutos a 37ºC.
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d. Leer la absorbancia a 520 nm frente al blanco (agua destilada). El color es estable

durante 30 minutos.
Cálculos:
La concentración de ácido úrico en la muestra se calcula a partir de la siguiente
fórmula general:
Si se utiliza para calibrar el patrón de ácido úrico:
DETERMINACIÓN DE UREA EN SUERO, PLASMA Y

ORINA Fundamento:
La urea presente en la muestra consume, según las reacciones acopladas descritas
a continuación, NADH que se cuantifica espectrofotométricamente.
Reactivos:(A) Tris 100 mmol/L, 2-oxoglutarato 5,6 mmol/L, ureasa > 140 U/mL,
glutamato deshidrogenasa > 140 U/mL, etilenglicol 220 g/L, sodio azida 0,95 g/L, pH
8,0. (B) NADH 1,5 mmol/L, sodio azida 9,5 g/L.
79
Solución patrón glucosa/urea/creatinina: Glucosa 100 mg/dL, urea 50 mg/dL,

creatinina 2 mg/dL (177 μmol/L).
Muestra: Suero, plasma u orina recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir
la orina 1/50 con agua destilada antes del ensayo. La urea en suero o plasma es
estable 7 días a 2-8ºC. Se recomienda la heparina como anticoagulante. La urea en
orina es estable 3 días a temperatura ambiente si no se produce crecimiento
bacteriano.
Procedimiento:
a. Precalentar el Reactivo de Trabajo a 37ºC.
b. Pipetear en dos tubos de ensayos lo que se indica:
1. Patrón: 1,5 mL de reactivo + 10 μL de solución patrón
2. Muestra: 1,5 mL de reactivo + 10 μL de muestra
c. Mezclar y pasa la muestra por el espectrofotómetro.
d. Anotar la absorbancia a 340 nm a los 30 segundos (A1) y a los 90 segundos (A2).
Cálculos:
La concentración de urea en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula
general:
Si se utiliza para calibrar el patrón de urea
Valores de referencia
80
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Como resultado el pacienta muestra:
Abs muestra: 0.050
Abs patron: 0.035
Cpatron: 2.44mg/dl
podemos concluir en base a estos resultados que; si el paciente es hombre, sus

valores estan por debajos del rango normal de concentracion de la urea en suero.
Pero si elñ paciente resulta ser mujer; sus valores se encuentran en el rango normal;
por lo que no necesitaria nunguna clase de dietas o tratamientos, pero en el caso del
hombre, se necesitaria aumentar un poco lkos valores de urea; y esto lo podria lograr
con una dieta base rica en proteinas. Las carnes, el pescado, la leche y los huevos
son alimentos con alto contenido en proteínas, los frutos secos (nueces, avellanas,
almendras, cacahuetes, etc.) y la soja pueden ser una fuente alternativa de proteínas.
, ademas deberia bajar los niveles de consumo de agua debido que esto puiede ser
contraproducente
PREGUNTAS Y ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS
a. Describa el fundamento e importancia clínica de la prueba de depuración de la
creatinina así como las condiciones previas que debe cumplir el paciente. b. ¿En
qué consiste la reacción de Jaffé?
c. ¿Por qué se utiliza la creatinina para medir la velocidad de filtración glomerular?
d. Describa los mecanismos por los cuales se puede elevar el ácido úrico en la
sangre.
R/ Se considera que un individuo tiene una excreción renal disminuida cuando
excreta menos de 250-300 mg en 24 h con una dieta libre de purinas. La
disminución en la excreción renal de ácido úrico puede deberse a un defecto de
carácter idiopático, que hace selectiva la secreción tubular de ácido úrico. Pero,
normalmente, la hiperuricemia mantenida suele deberse a la disminución del
aclaramiento renal de urato, que ocurre en transplantados de riñón y en pacientes
con insuficiencia renal o enfermedades renales. Los diuréticos y la ciclosporina A
también favorecen la hiperuricemia. Los ancianos suelen presentar varias causas de
hiperuricemia (insuficiencia renal, consumo de diuréticos, hipertensión, etc.). Por
tanto, la hiperuricemia puede ser consecuencia de la suma de varios de estos
mecanismos.
e. ¿Cuáles son las alteraciones más comunes derivadas del aumento del ácido úrico
en sangre?
R/ entre las alteraciones mas comunes causadas por la hiperuricemia tenemos:
Gota
La hiperuricemia es una condición común usualmente causada por dietas ricas en

nucleótidos púricos o en proteínas o por la ingesta alta de alcohol o de fructosa7. Además
las tiazidas y los diuréticos de asa frecuentemente causan hiperuricemia. También se
puede producir hiperuricemia en diversas patologías como el síndrome de Lesch-Nyhan, la
enfermedad de von Gierke, o por el tratamiento de leucemias y linfoma
Hipertensión
La hiperuricemia se asocia comúnmente con la hipertensión arterial (HTA). El nivel

aumentado de AU siempre precede al desarrollo de la hipertensión 3. Se postula, además,
que la hiperuricemia actúa tanto como factor de riesgo para la HTA y como una condición
patológica incrementada por la propia HTA
Preeclampsia
La preeclampsia se define como una combinación de hipertensión de novo y proteinuria

ocurriendo después de la semana 20 de gestación
Enfermedad cardiovascular, enfermedad renal crónica y disfunción endotelial
La hiperuricemia se asocia con la enfermedad renal y cardiovascular. De hecho algunos

investigadores ubican al ácido úrico como un ingrediente clave en el síndrome metabólico
cardio-renal2. Los niveles altos de AU se asocian con un empeoramiento de la función
renal. Cada unidad de aumento del ácido úrico disminuye la tasa de filtración glomerular y
los pacientes hipertensos con AU elevado (> 6.0 mg/dl) tienen un riesgo mayor de tres
veces de desarrollar enfermedad renal crónica que los hipertensos con AU normal
Acido úrico y síndrome metabólico
Hay una estrecha relación entre los niveles de ácido úrico y la presencia del síndrome
metabólico (SM) y de varios de sus componentes. La evidencia apunta a que el AU puede
predecir el desarrollo de SM, de la obesidad y de la diabetes
Ación antioxidante versus ación prooxidante
El AU y el ácido ascórbico son considerados los dos antioxidantes más importantes del
plasma, teniendo el AU un nivel plasmático seis veces mayor que el ácido ascórbico. El AU
puede reaccionar con una variedad de oxidantes incluyendo anión superóxido, peróxido de
hidrógeno y radical hidroxil
f. Describa la diferencia entre azoemia y uremia.

g. Menciones y describa dos alteraciones comunes producidas por el aumento de
urea en el organismo
6. BIBLIOGRAFIA NACIONAL E INTERNACIONAL
BioSystems S.A. Creatinina. Barcelona, España.
BioSystems S.A. Ácido úrico. Barcelona, España.
BioSystems S.A. Urea/BUN-UV. Barcelona, España.
Pacheco Vergara E. Prácticas de Bioquímica: para estudiantes de Ciencias de la
Salud. 2014. Meisenberg & Simmons. Principios de Bioquímica Médica. Elsevier.
2018. Gaw A, Murphy MJ, Cowan RA, O’Reilly DSJ. Bioquímica Clínica. Elsevier.
2014
3.1 EQUIPOS
NOMBRE DEL EQUIPO
1 Espectrofotómetro ultravioleta Biosytems 350, centrifugadora y Baño
María
Observaciones:
3.2 Materiales
Materiales Cantidad
1 Gradilla 5
2 Tubos de ensayos 20
3 micro pipetas de 1000µmL , 5
10µmL,20µmL y 50µmL
4 Beaker 1
3.3 Reactivos
5 CANTIDAD N° DE TOTAL
REACTIVO POR GRUPO GRUPO
DE TRABAJO S DE
TRABAJ
O
1 Reactivos: (A) Hidróxido sódico 0,4
mol/L IRRITANTE; (B): Ácido pícrico 25 1ml 5 5ml
mmol/L. Solución patrón
glucosa/urea/creatinina: Glucosa 100
mg/dL, urea 50 mg/dL, creatinina 2
mg/dL (177 μmol/L).
2 Muestra: Suero, plasma y orina,

recogidos mediante procedimientos
estándar. Diluir la orina fresca 1/50 con
agua destilada antes de medir. Los 0,2ml 5 1ml
anticoagulantes como la heparina,
EDTA, oxalato o fluoruro, no interfieren.
La creatinina en las muestras es estable
24 horas a 2-8ºC.
3 Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L,

detergente 1,5 g/L, diclorofenolsulfonato
4 mmol/L, uricasa > 0,12 U/mL, 1ml 5 5ml
ascorbato oxidasa > 5 U/mL, peroxidasa
> 1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,5 mmol/L,
pH 7,8. Solución patrón de Ácido Úrico:
Ácido úrico 6 mg/dL (357 μmol/L).
4 Muestra: Suero, plasma u orina

estándar. Diluir la orina 1/10 con agua
destilada antes del ensayo. El ácido 25µL 5 125 µL
úrico en suero o plasma es estable 7
días a 2-8ºC. Los anticoagulantes como
la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no
interfieren. El ácido úrico en orina es
estable 4 días a temperatura ambiente si
se ajusta el pH a > 8 con NaOH.
5 Reactivos:(A) Tris 100 mmol/L, 2-

oxoglutarato 5,6 mmol/L, ureasa > 140 1,5ml 5 7,5ml
U/mL, glutamato deshidrogenasa > 140
U/mL, etilenglicol 220 g/L, sodio azida
0,95 g/L, pH 8,0. (B) NADH 1,5 mmol/L,
sodio azida 9,5 g/L.
82
6 Solución patrón glucosa/urea/creatinina: 10 μL 5 50 μL

Glucosa 100 mg/dL, urea 50 mg/dL,
creatinina 2 mg/dL (177 μmol/L).
7 Muestra: Suero, plasma u orina
estándar. Diluir la orina 1/50 con agua 10 μL 5 50 μL
destilada antes del ensayo. La urea en
suero o plasma es estable 7 días a 2-
8ºC. Se recomienda la heparina como
anticoagulante. La urea en orina es
estable 3 días a temperatura ambiente si
no se produce crecimiento bacteriano.
Observaciones: Para el trabajo experimental de la asignatura de bioquímica en el

programa de Medicina se organiza las secciones por grupo 5 de 4 integrantes
máximo.
83
SECCIONAL: BARRANQUILLA
FACULTAD: Ciencia de la Salud
PROGRAMA: Medicina
ASIGNATURA: Bioquímica
SEMESTRE: Segundo
NOMBRE DE LA PRACTICA DE LABORATORIO:

BILIRRUBINA
LABORATORIO No 8.
1.INTRODUCCIÓN
La bilirrubina es un producto de desecho generado del catabolismo de la

hemoglobina. Los glóbulos rojos viejos o defectuosos son retirados por los
macrófagos donde la hemoglobina se metaboliza y el hemo se transforma en
biliverdina la cual se reduce hasta bilirrubina, que es liberada a la sangre. La
bilirrubina tiene una baja solubilidad en agua y, por esta razón, es transportada por la
albúmina a nivel sanguíneo. Luego, la bilirrubina es captada por las células
hepáticas donde se separa de la proteína y se conjuga con el ácido glucorónico y se
excreta en la bilis (bilirrubina directa o bilirrubina conjugada). Las bacterias
intestinales metabolizan esta bilirrubina y la transforman en urobilinógenos,
responsables del color amarillo marrón de las heces. La bilirrubina indirecta o no
conjugada se liga a la albúmina para que el riñón no la filtre fuera de la sangre. Un
adulto sano produce entre 200 y 300 mg de bilirrubina al día. Se necesita un hígado
en óptimo funcionamiento para eliminar esta cantidad de bilirrubina. La función
excretora hepática también requiere que la bilirrubina esté en la forma conjugada, es
decir, unida al ácido glucorónico que es hidrosoluble. En condiciones normales, los
niveles séricos de bilirrubina son de 0,2 a 1 mg/dl que casi en su totalidad están en
forma no conjugada. Un pequeño porcentaje de esa bilirrubina total se encuentra en
el suero normal en forma conjugada.
84
Cuando aumentan los niveles séricos de bilirrubina en sangre, este pigmento

empieza a depositarse en la esclerótica y en la piel dando origen a la ictericia.
Existen diferentes tipos de ictericia: prehepática, hepáticay post-hepática.
2. OBJETIVO
•Aplicar el método espectrofotométrico para la determinación de las distintas

bilirrubinas plasmáticas.
•Diferenciar las bilirrubinas de acuerdo con la manera que reaccionan con los
reactivos diazoados.
3. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
Equipos y Reactivos
Materiales
Espectr micro Reactivos: Para bilirrubina total se utiliza el
ofotóme pipetas reactivo AT (ácido sulfanílico, ácido clorhídrico y
tro de cetrimida) y el reactivo BT (Nitrito sódico).Para
Baño 1000µmL bilirrubina directa se utiliza el reactivo AD (ácido
María , sulfanílico y ácido clorhídrico)y el reactivo BD
Centrifu 10µL,20µ (Nítrito sódico).
gadora L y 50µL Preparación del reactivo: Vaciar el contenido de
Tubo de Beaker. un vial de reactivo BT en un frasco de reactivo AT
ensayo para la determinación de bilirrubina total, o el
15x160 contenido de un vial de reactivo BD en un frasco
-1
mm de reactivo AD para la determinación
Gradilla debilirrubina directa. Si se desea preparar en otro
. volumen: mezclar 1 mL de reactivo BT + 4 mL de
reactivo AT o 1 mL de reactivo BD + 4 mL de
reactivo AD.
Solución patrón de bilirrubina: Albúmina bovina.
La concentración viene indicada en la etiqueta
del vial. Muestra: Suero recogido mediante
procedimientos estándar. La bilirrubina en suero
85
es estable 2 días a 2-8ºC si se protege de la luz.
4. METODOLOGÍA
DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA EN SUERO
Fundamento:
La bilirrubina directa presente en la muestra reacciona con el ácido sulfanílico
diazoado, originando un complejo coloreado que se determina por
espectrofotometría. La cetrimida solubiliza la bilirrubina indirecta permitiendo su
reacción junto con la fracción directa. Los términos “directa” y “total” se refieren a las
características de reacción en presencia o ausencia de solubilizantes (aceleradores).
La bilirrubina “directa” e “indirecta” equivale sólo de forma aproximada a las
fracciones conjugada y no conjugada.
Procedimiento para determinar bilirrubina total
a. Tome 4tubos de ensayo limpios y rotule así: 1. Blanco, 2. Patrón, 3. Muestra.
En cada tubo adicionará:
1. Blanco reactivo: 1 mL de reactivo de trabajo+ 100μL de agua destilada
2. Blanco muestra: 1 mL de reactivo AT + 100 μL de muestra
3. Muestra: 1 mL de reactivo de trabajo+ 100μL de muestra.
4. Patrón: 1 mL de reactivo + 100μL de solución patrón.
b. Agitar bien y dejar durante 2 minutos a temperatura ambiente.
c. Medición en el equipo:
•Siga las instrucciones de manejo del equipo.
•Al seleccionar concentración, en la pantalla aparecerán los parámetros a evaluar.
Seleccionar bilirrubina total.
•Leer la absorbancia de los blancos de muestra frente a agua destilada.
•Leer la absorbancia de las muestras y del patrón frente al blanco de reactivo.
Procedimiento para determinar bilirrubina directa
a. Tome 4 tubos de ensayo limpios y rotule así: 1. Blanco, 2. Patrón, 3. Muestra.
En cada tubo adicionará:
1. Blanco reactivo: 1 mL de reactivo de trabajo + 100 μL de agua destilada
2. Blanco muestra: 1 mL de reactivo AD + 100 μL de muestra.
86
3. Muestra: 1 mL de reactivo de trabajo+ 100 μL de muestra.

4. Patrón: 1 mL de reactivo + 100 μL de solución patrón.
b. Agitar bien y dejar durante 2 minutos a temperatura ambiente.
c. Medición en el equipo:
•Siga las instrucciones de manejo del equipo.
•Al seleccionar concentración, en la pantalla aparecerán los parámetros a evaluar.
Seleccionar bilirrubina directa.
•Leer la absorbancia de los blancos de muestra frente a agua destilada.
•Leer la absorbancia de las muestras frente al blanco de reactivo.
Cálculos:
La concentración de bilirrubina en la muestra se calcula a partir de la siguiente
fórmula general:
En los cálculos de bilirrubina directa, se debe utilizar el valor de absorbancia

obtenido para el patrón en el procedimiento de bilirrubina total. Concentración masa
(mg/dL) x 17,1= concentración sustancia (μmol/L).
87
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Incluir todos los resultados de la práctica en el informe de laboratorio y realice
una breve discusión (250 palabras) con base en lo obtenido.
PREGUNTAS Y ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS
a. Mencione y describa brevemente dos enfermedades que estén asociadas
con hiperbilirrubinemia no conjugada.
mencione y describa brevemente dos enfermedades que estén asociadas con
hiperbilirrubinemia conjugada.
c. De acuerdo con su etiopatogenia, las ictericias se clasifican en pre-hepáticas,
hepáticas y post-hepáticas. Defina brevemente cada una de ellas.
d. ¿Cuál es la bilirrubina que aparece en la orina? Fundamente su respuesta.
e. ¿Qué tipo de medicamentos pueden alterar los resultados de la prueba de
bilirrubina en sangre?
6. BIBLIOGRAFIA NACIONAL E INTERNACIONAL
BioSystems S.A. Bilirrubina total y directa. Barcelona, España Pacheco Vergara E.
Prácticas de Bioquímica: para estudiantes de Ciencias de la Salud. 2014.
Meisenberg & Simmons.
Principios de Bioquímica Médica. Elsevier. 2018.
3.1 EQUIPOS
NOMBRE DEL EQUIPO
1 Espectrofotómetro ultravioleta Biosytems 350, centrifugadora y Baño
María
Observaciones:
3.2 Materiales
Materiales Cantidad
1 Gradilla 5
2 Tubos de ensayos 20
3 micro pipetas de 1000µmL , 5
10µmL,20µmL y 50µmL
4 Beaker 1
88
3.3 Reactivos
5 CANTIDAD N° DE TOTAL
REACTIVO POR GRUPO GRUPO
DE TRABAJO S DE
TRABAJ
O
1 Reactivos: Para bilirrubina total se utiliza
1ml A y 5 5ml
el reactivo AT (ácido sulfanílico, ácido
4 ml B
clorhídrico y cetrimida) y el reactivo BT
(Nitrito sódico).Para bilirrubina directa se
utiliza el reactivo AD (ácido sulfanílico y
ácido clorhídrico)y el reactivo BD (Nítrito
sódico).
Preparación del reactivo: Vaciar el
contenido de un vial de reactivo BT en
un frasco de reactivo AT para la
determinación de bilirrubina total, o el
contenido de un vial de reactivo BD en
un frasco de reactivo AD para la
determinación debilirrubina directa. Si se
desea preparar en otro volumen:
mezclar 1 mL de reactivo BT + 4 mL de
reactivo AT o 1 mL de reactivo BD + 4
mL de reactivo AD.
2 Solución patrón de bilirrubina: Albúmina 100µL 5 100 µL
bovina. La concentración viene indicada
en la etiqueta del vial.
3 Muestra: Suero recogido mediante 100µL 5 500 µL
procedimientos estándar. La bilirrubina
en suero es estable 2 días a 2-8ºC si se
protege de la luz.
Observaciones: Para el trabajo experimental de la asignatura de bioquímica en el

programa de Medicina se organiza las secciones por grupo 5 de 4 integrantes
máximo.
89
CRONOGRAMA COMPETENCIA O LOGRO ACCIONES

Semana Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas
1 Seguridad para el de bioseguridad, protocolos de emergencia y Entrega del informe de laboratorio
trabajo en el buenas prácticas de laboratorio que garanticen la
laboratorio.
protección del analista y de la comunidad en
general.
Semana Fotometría Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas Entrega del informe de laboratorio
2 de bioseguridad, protocolos de emergencia y
buenas prácticas de laboratorio que garanticen la
Elaboración de preguntas tipo saber
Pro, por parte del docente del
general. laboratorio para evaluar en el parcial
Comprender que los problemas y soluciones del corte respectivo.
involucran distintas dimensiones y reconocer
relaciones entre estas.
Semana Fotometría Seleccionar estrategias apropiadas para
3 resolver un problema de investigación. Entrega del informe de laboratorio.
Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas
de bioseguridad, protocolos de emergencia y
buenas prácticas de laboratorio que garanticen la laboratorio para evaluar en el parcial
protección del analista y de la comunidad en del corte respectivo.
general.
Semana ENZIMAS: Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas

4 Transaminasas de bioseguridad, protocolos de emergencia y Entrega del informe de laboratorio.
ALT/GPT y AST/GOT buenas prácticas de laboratorio que garanticen la
90

protección del analista y de la comunidad en Elaboración de preguntas tipo saber
general. Pro, por parte del docente del
Frente a un problema que involucre información
cuantitativa, plantear e implementar estrategias laboratorio para evaluar en el parcial
que lleven a soluciones adecuadas. del corte respectivo.
Comprender casos clínicos y soluciones

involucran distintas dimensiones y reconocer
Aplicar diferentes métodos para estimar la

concentración de una muestra.
Semana Carbohidratos Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas

5 de bioseguridad, protocolos de emergencia y Entrega del informe de laboratorio.
general.
laboratorio para evaluar en el parcial
Representar información en gráficas, diagramas
del corte respectivo.
o tablas.
Semana Carbohidratos Representar información en gráficas, diagramas Entrega del informe de laboratorio.
6 o tablas.
Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas Elaboración de preguntas tipo saber
91

de bioseguridad, protocolos de emergencia y Pro, por parte del docente del
buenas prácticas de laboratorio que garanticen la laboratorio para evaluar en el parcial
protección del analista y de la comunidad en del corte respectivo.
general.
Semana Lípidos Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas Entrega del informe de laboratorio.
buenas prácticas de laboratorio que garanticen la Elaboración de preguntas tipo saber
protección del analista y de la comunidad en Pro, por parte del docente del
Aplicar diferentes métodos para estimar la del corte respectivo.

o tablas.
Semana Lípidos Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas
8 de bioseguridad, protocolos de emergencia y Entrega del informe de laboratorio.
general.

o tablas.
92

Semana Proteínas Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas Entrega del informe de laboratorio.
buenas prácticas de laboratorio que garanticen la Elaboración de preguntas tipo saber
protección del analista y de la comunidad en Pro, por parte del docente del
o tablas.
Semana Proteínas Aplicar diferentes métodos para estimar la
10 concentración de una muestra. Entrega del informe de laboratorio.
o tablas.
Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas laboratorio para evaluar en el parcial
de bioseguridad, protocolos de emergencia y del corte respectivo.
general.
Semana Pruebas de función Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas Entrega del informe de laboratorio
11 renal: creatinina, ácido de bioseguridad, protocolos de emergencia y
úrico, urea y Bun buenas prácticas de laboratorio que garanticen la Elaboración de preguntas tipo saber
general. del corte respectivo.
93

o tablas.
Semana Pruebas de función Representar información en gráficas, diagramas Entrega del informe de laboratorio.
12 renal: creatinina, ácido o tablas.
úrico, urea y Bun Elaboración de preguntas tipo saber
Comprender que los problemas y soluciones
involucran distintas dimensiones y reconocer del corte respectivo

general.

Semana Pruebas de función Comprender que los problemas y soluciones Entrega del informe de laboratorio.
13 renal: creatinina, ácido involucran distintas dimensiones y reconocer
úrico, urea y Bun relaciones entre estas. Elaboración de preguntas tipo saber
94

Trabajar en laboratorios cumpliendo las normas Pro, por parte del docente del
de bioseguridad, protocolos de emergencia y laboratorio para evaluar en el parcial
buenas prácticas de laboratorio que garanticen la del corte respectivo.
general

Semana Pruebas de función Comprender que los problemas y soluciones

14 renal: creatinina, ácido involucran distintas dimensiones y reconocer Entrega del informe de laboratorio.
úrico, urea y Bun Elaboración de preguntas tipo saber
de bioseguridad, protocolos de emergencia y del corte respectivo
general

Semana Bilirrubina Comprender que los problemas y soluciones

15 involucran distintas dimensiones y reconocer Entrega del informe de laboratorio
95

general.
Semana Bilirrubina Comprender que los problemas y soluciones Entrega del informe de laboratorio
16 involucran distintas dimensiones y reconocer
relaciones entre estas. Elaboración de preguntas tipo saber
de bioseguridad, protocolos de emergencia y del corte respectivo.
general.

Semana Evaluación final Elaboración de preguntas tipo saber Pro, por Elaboración de preguntas tipo saber
17 parte del docente del laboratorio para evaluar en Pro, por parte del docente del
el parcial del corte respectivo. laboratorio para evaluar en el parcial
96
Semana Entrega de notas Digitación notas definidas del

18 definidas laboratorio.
97

Pruebas renales: creatinina, ácido úrico, urea y BUN

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GUIA ÚNICA DE LABORATORIO

FACULTAD: Ciencia de la Salud

NOMBRE DE LA PRACTICA DE LABORATORIO:

PRUEBAS DE FUNCIÓN RENAL: CREATININA, ÁCIDO ÚRICO, UREA Y BUN

Las pruebas de función renal son exámenes comunes de laboratorio empleados

Si el cuerpo produce demasiado ácido úrico o no elimina lo suficiente puede

¿Cómo se detectan los niveles altos de ácido úrico?

Además, si el paciente va a someterse a un tratamiento de quimioterapia, el médico

También puede solicitarse dicho análisis si el paciente tiene enfermedad renal

La creatinina es un producto metabólico no enzimático de la creatina y la

ACIDO: Sustancia capaz de ceder protones que se caracteriza por provocar

URICO: Que se produce como desecho en el metabolismo humano y de muchos

SUERO: Sustancia acuosa que se separa de un líquido orgánico cuando este se

ABSORBANCIA: Medida de la cantidad de luz absorbida por una solución. Se mide

Figura 1 y 2. Síntesis desde creatina hasta creatinina.

La cantidad de creatina en el organismo depende de la masa muscular y se renueva

glomerular y se excreta por la orina. La concentración de cratinina plasmática

La prueba de la depuración de la creatinina constituye una cuantificación específica

Cro: creatinina en orina; V: volumen de orina; Crs: creatinina en suero y SC:

Actualmente existen más de 40 ecuaciones para determinar la FG; sin embargo, la

La depuración de la creatinina del plasma se relaciona directamente con el caudal

Figura 3. Ácido úrico

El ácido úrico es un producto de desecho de la descomposición final de las purinas y

La urea es el principal producto de excreción del catabolismo de las proteínas. Se

El nitrógeno ureico en la sangre (BUN) corresponde a la cantidad de nitrógeno

 Identificar la importancia de la cuantificación de ácido úrico en sangre y orina

 Asociar los niveles alterados de creatinina en sangre y orina con

 Evaluar la utilidad clínica de la cuantificación de urea en sangre y orina en

3. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

tómetro pipetas IRRITANTE; (B): Ácido pícrico 25 mmol/L.

Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, detergente 1,5

Muestra: Suero, plasma u orina recogidos

Reactivos:(A) Tris 100 mmol/L, 2-oxoglutarato 5,6

Solución patrón glucosa/urea/creatinina: Glucosa

Muestra: Suero, plasma u orina recogidos

DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO, PLASMA Y ORINA

Fundamento: La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en

d. Leer la absobancia a 500 nm después de 30 segundos (A1) y a los 90 segundos

Si se utiliza el patrón de calibración suministrado:

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SUERO, PLASMA Y ORINA

Fundamento: El ácido úrico presente en la muestra origina, según las reacciones

d. Leer la absorbancia a 520 nm frente al blanco (agua destilada). El color es estable

Si se utiliza para calibrar el patrón de ácido úrico:

DETERMINACIÓN DE UREA EN SUERO, PLASMA Y

Solución patrón glucosa/urea/creatinina: Glucosa 100 mg/dL, urea 50 mg/dL,

Si se utiliza para calibrar el patrón de urea

podemos concluir en base a estos resultados que; si el paciente es hombre, sus

La hiperuricemia es una condición común usualmente causada por dietas ricas en

La hiperuricemia se asocia comúnmente con la hipertensión arterial (HTA). El nivel

La preeclampsia se define como una combinación de hipertensión de novo y proteinuria

Enfermedad cardiovascular, enfermedad renal crónica y disfunción endotelial

La hiperuricemia se asocia con la enfermedad renal y cardiovascular. De hecho algunos

Acido úrico y síndrome metabólico

Ación antioxidante versus ación prooxidante

f. Describa la diferencia entre azoemia y uremia.

2 Muestra: Suero, plasma y orina,

3 Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L,

4 Muestra: Suero, plasma u orina

5 Reactivos:(A) Tris 100 mmol/L, 2-

6 Solución patrón glucosa/urea/creatinina: 10 μL 5 50 μL

Observaciones: Para el trabajo experimental de la asignatura de bioquímica en el

FACULTAD: Ciencia de la Salud

NOMBRE DE LA PRACTICA DE LABORATORIO: