Optimización de la Extracción Asistida por

Ultrasonidos de Componentes Bioactivos de

Diferentes Partes de Residuos de Piña
Kaavya Rathnakumar*, Anil Kumar Anal and Kalpana Lakshmi

RESUMEN
La acumulación de residuos es un grave problema en los últimos tiempos ya que provocan graves
efectos en el medio ambiente. Los desechos de piña son uno de ellos e incluyen la cáscara, el
corazón, el tallo y la corona, que se obtienen después del procesamiento y varios compuestos
bioactivos como polifenoles, antioxidantes y la enzima digestiva de proteínas bromelina, también
están presentes en los desechos de las piñas. En el presente estudio, la extracción de compuestos
bioactivos de la cáscara y el corazón de la piña se realizó mediante extracción asistida por
ultrasonido (UAE). Las condiciones de extracción se optimizaron utilizando la metodología de
superficie de respuesta utilizando las variables tiempo (min), amplitud (%) y concentración de
etanol. Las muestras de proteína obtenidas se purificaron mediante precipitación con acetona y
diálisis para determinar la actividad de bromelina y el patrón de proteína junto con la tinción de
actividad para confirmar la presencia de la enzima bromelina.

La piña (Ananas comosus) es la fruta más procesamiento incluyen el corazón, el tallo,

valiosa que se encuentra en todas partes y es
el miembro principal de la familia
Bromeliaceae que se origina en América del
Sur. La producción es de 18,7 millones de
toneladas en 2014 según la FAO. Su jugo es
el más preferido todo el mundo después de
manzana y naranjas. El crecimiento de la
planta es de una altura de 75-150 cm y un
ancho de 90-120 cm, que es un tocón corto y
robusto con hojas estrechas, fibrosas y
espinosas [23]. El desarrollo de la planta fue
de forma cónica a partir de frutos jugosos y
carnosos con corona en la parte superior.
Tailandia es uno de los gigantes
exportadores de piña enlatada en todo el
mundo. El año 2008 produjo alrededor de
2,5 millones de toneladas reportadas en la
FAO y la mayoría de las cuales se exportan
en forma de piña enlatada y jugos.
En el sector de procesamiento de piña, antes
de pelar la fruta se corta el pedúnculo, se
retira la corona y el corazón. Las partes de
desecho de la piña antes y después del
la cáscara y la corona, que comúnmente
registran un desperdicio del 50% del peso
total de la piña. Si bien la producción de piña
aumenta día a día, aparentemente también
aumenta el desperdicio de la piña. Los
desechos poseen mucho valor y es un hecho
conocido que están enriquecidos con
celulosa, hemicelulosa, carbohidratos,
antioxidantes, polifenoles y también la
bromelina, una enzima digestiva de
proteínas, está presente en los desechos de
la piña[7]. La enzima bromelina es muy
utilizada en tratamientos médicos por su
mayor valor terapéutico. Se puede usar
como un agente antiinflamatorio que se usa
para la reducción de lesiones deportivas,
traumatismos, artritis y dolores de
hinchazón, especialmente en lesiones
deportivas y también en problemas
digestivos y también con fines curativos
después de la cirugía [2]. El uso de bromelina
ayudó a reducir la artritis, las hemorroides
de gota, la menstruación.
dolor, trastornos autoinmunitarios y colitis
ulcerosa,[1] de aglutinación de plaquetas y
coágulos de sangre en la sangre corriente,
especialmente en las arterias[26].
La extracción asistida por ultrasonido es un
sustituto simple, innovador, económico y
eficiente del proceso de extracción
convencional. El aumento del rendimiento
de extracción mediante ultrasonidos se debe
principalmente al efecto de las capitaciones
acústicas creadas en el disolvente a través
del cual pasa la onda de ultrasonido. El
efecto mecánico producido en el ultrasonido
ayuda a la penetración del solvente en la
muestra al aumentar el área superficial y el
contacto entre la fase sólida y la líquida, lo
que resultará en un rápido movimiento del
soluto de la fase sólida al solvente[18]. La
extracción asistida por ultrasonido es más
notable porque hay menos posibilidades de
degradación química en el bioactivo
objetivo[19].
La eliminación de desechos es un problema
que se extiende, ya que es el deterioro
microbiano que actúa sobre y que causa
serios problemas ambientales. Residuos de la
comida la industria posee una gran cantidad
de valores y el patrón de gestión y
eliminación de residuos en los alimentos
industria es un enfoque integrado en el
escenario de reciclaje y reutilización en la
valorización de residuos. Piña los residuos
serían una excelente fuente de proteínas
proteolíticas. enzimas, antioxidantes
fenólicos. Convención técnica de extracción
como la maceración es más de requiere
mucho tiempo y el rendimiento es menor en
comparación con otros técnicas
novedosas[8].
Los objetivos de la presente investigación
fueron investigar, el rendimiento de
proteína, fenólico total contenido, poder
antioxidante usando las variables tiempo
(min), amplitud (%) y concentración de
etanol (%) a través del tratamiento de los
EAU. Además, el estudio
cuyo objetivo es identificar las condiciones
óptimas de funcionamiento para el
procesamiento de la piel y el corazón
utilizando el metodología de la superficie de
respuesta y determinar la rendimiento a
través de las características del bioactivo
compuestos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materia prima
Las materias primas utilizadas en este
experimento son la cáscara y el corazón de la
piña obtenidos de la provincia de Chonburi,
Tailandia, de “Prime Products Industry Co.
Ltd”, que son las principales áreas para las
plantaciones de piña. La fábrica produce
varios productos, como piñas enlatadas, que
incluye golosinas, trozos, rodajas, trozos y
también cócteles de frutas y jugos. A través
de estos productos, la empresa genera un
13% por ciento de residuos que pueden ser
aprovechados de manera eficiente.
Sustancias químicas
Todos los productos químicos utilizados
fueron de grado analítico. Reactivo de
colorante Bradford
(PRD.0.ZQ5.10000050486), acetato de sodio,
ácido acético glacial (ARK2183), EDTA, HCl,
reactivo Folin-ciocalteau (Código No: -
03870), cloruro férrico, ácido gálico, TPTZ (2,
4 , 6-tripyridyl-s-triazine), tampón de fosfato
de potasio, glicerol, cloruro férrico, metanol
(n.° CAS: 67- 56-1), carbonato de sodio (n.°
CAT: 463), acetona, L tirosina (n.° CAS: 60-
18-4), caseína (n.º CAS: 9000-71-9), solución
de carbonato de sodio, tampón de acetato
de sodio, tampón de acetato de calcio, L-
cisteína (PUB chem 24901592), ácido
tricloroacético (PubChem CID 6421),
dodecilsulfato de sodio (PubChem CID
3423265), Ácido clorhídrico (PubChem CID
313) Hidróxido de sodio (PubChem CID
14798).
Métodos
Preparación de la muestra
La recolección de los desechos de piña
(cáscara y corazón) se realizó de “Prime
Products Industry Co. Ltd”. Las muestras se
limpiaron con agua destilada y se separaron
en pequeños pedazos que se secaron en el
horno de aire caliente. Las muestras secas se
trituraron en un molinillo mecánico a escala
de laboratorio hasta convertirlas en un trozo
de polvo fino y se mantuvieron a 4 °C para el
proceso posterior.
Extracción asistida por
ultrasonidos
Los componentes bioactivos de la piña
(cáscara y corazón) se obtuvieron utilizando
la sonda de ultrasonido (UP 200S, 200W,
HIELSCHER, TELTOW, Alemania) utilizando
diferentes concentraciones de etanol (0, 20 y
40 %) como solvente. Se utilizó una
proporción fija de muestra a disolvente
(1:10). La operación de ultrasonido fue en
modo de 0,5 pulsos. El proceso de extracción
se realizó en 3 intervalos de tiempo
diferentes (10, 20 y 30 min). También hubo
un condensador que ayudó a mantener la
temperatura del solvente por debajo de 15
°C. En un vaso de precipitados de 200 ml o
250 ml se añadió la muestra y se mantuvo en
el extractor ultrasónico. una pequeña
cantidad
Los componentes bioactivos de la piña
(cáscara y corazón) se obtuvieron utilizando
la sonda de ultrasonido (UP 200S, 200W,
HIELSCHER, TELTOW, Alemania) utilizando
diferentes concentraciones de etanol (0, 20 y
40 %) como solvente. Se utilizó una
proporción fija de muestra a disolvente
(1:10). La operación de ultrasonido fue en
modo de 0,5 pulsos. El proceso de extracción
se realizó en 3 intervalos de tiempo
diferentes (10, 20 y 30 min). También hubo
un condensador que ayudó a mantener la
temperatura del solvente por debajo de 15
°C. En un vaso de precipitados de 200 ml o
250 ml se añadió la muestra y se mantuvo en
el extractor ultrasónico. Había un pequeño
espacio para asegurarse de que la sonda no
toque el vaso de precipitados, aunque la
sonda está sumergida en el vaso de
precipitados.
En este proceso de EAU, se utilizó RSM para
optimizar y reducir la prueba a 15
condiciones para extraer proteínas,
polifenoles y antioxidantes de la cáscara y el
corazón de la piña. Los factores
independientes fueron tiempo (A: 10 min, 20
min y 30 min) Amplitud (B: 60%, 80% y
100%) y concentración de etanol (0, 20 y
40%) y las respuestas fueron contenido de
proteína total, contenido fenólico y actividad
antioxidante. Los factores mencionados
anteriormente para ser optimizados se
codificaron en tres niveles: 1, 0 y 1. El diseño
de datos de Box-Behnken de tres factores
redujo el número de ensayos experimentales
a 15. Las interacciones entre los factores y
las respuestas se identificaron utilizando
métodos cuantitativos. datos. Después del
análisis estadístico, se obtuvieron las
condiciones de extracción optimizadas.
Purificación de proteínas por Acetona
Se realizó una precipitación con acetona para
purificar la muestra de proteína. Se tomó
acetona y se enfrió a (-20 °C). La muestra de
proteína obtenida se añadió a la acetona fría
cuatro veces el volumen de la muestra de
proteína y se agitó a fondo. Luego la muestra
se incubó a -20 °C por 60 minutos y luego se
centrifugó a 13.000 g por un intervalo de
tiempo de 10 min. Los sobrenadantes
después de la centrifugación se arrojaron y
los tubos que tenían el sedimento se
invirtieron durante 15 minutos para eliminar
la acetona del sedimento que puede estar en
exceso. La disolución del sedimento de
proteína se realizó en tampón de fosfato
0,01 mol/L (pH 7,0). Luego, la solución se
dializó contra 0,01 mol/L de tampón fosfato
(pH 7,0) utilizando una membrana de diálisis
de 1 kDa durante 14 horas a 4 °C[11].
ANÁLISIS APROXIMADO
El polvo de piña seca (corazón y cáscara) se
sometió a la determinación del contenido de
humedad, contenido de cenizas, contenido
de volátiles y contenido de carbono fijo
utilizando un analizador termogravimétrico
(TGA 701, LECO) utilizando el método AOAC.
Análisis cuantitativo
Contenido total de proteínas
Para determinar la proteína presente en la
muestra se tomó como referencia el
estándar de Bradford y se utilizó en la
determinación de la muestra. El reactivo BSA
se elaboró diluyendo el reactivo con agua
destilada en una proporción de 1:4.100 μl. y
se añadieron 5 ml de colorante Bradford a la
solución de muestra. Luego se agitó
completamente y la mezcla se mantuvo en
incubación a temperatura ambiente durante
15 min y luego se midió la absorbancia a 595
nm[3] utilizando un espectrofotómetro UV
(UV-UNICAM, ALVA, Reino Unido).
CONTENIDO FENÓLICO
TOTAL
El método de Folin-Ciocalteau [14] es un
método destacado que se utilizó para
determinar la cantidad de fenoles totales
presentes en la muestra. Se tomó la muestra
de 1 ml y se diluyó con 9 ml de agua
destilada, de ahí se tomó 0.5ml de la
muestra diluida y se adicionó con reactivo de
folins de 2 ml recién preparado en
proporción 1:10. Y a la mezcla se le añadió
carbonato de sodio al 7.5% de 4 ml y luego
se mantuvo en incubación por un tiempo de
30 minutos y utilizando el espectrofotómetro
UV (UV-UNICAM, ALVA, U.K) se midió la
absorbancia a 765 nm.
PODER ANTIOXIDANTE
REDUCTOR FÉRRICO
La actividad antioxidante de la muestra de
extracto crudo se determinó mediante el
ensayo FRAP, utilizando sulfato ferroso como
estándar. Se usó tampón acetato 300 mM
para preparar el reactivo frap, luego se tomó
10 mM de TPTZ y 20 mM de cloruro férrico
en la proporción (10:1:1). En Hcl 40 mM, se
disolvieron 10 ml de 0,031 g de TPTZ en un
baño de agua a 50°C. Por lo tanto, se disolvió
cloruro férrico en 10 ml de agua destilada.
Ambos estaban recién preparados antes de
su uso. A 100 µl de la muestra, se mezcló el
reactivo FRAP de 3 ml, se agitó en vortex y se
mantuvo en incubación durante un tiempo
de 3 min y se midió la absorbancia a 593 nm
en el espectrofotómetro UV (UV-UNICAM,
ALVA, U.K)
ACTIVIDAD DE
ELIMINACIÓN DE
RADICALES DPPH
Para determinar el IC50 del DPPH para la
condición optimizada de la cáscara y el
corazón de la piña se realizó mediante el
ensayo DPPH [25]. Se usó un software
conocido como prisma Graph Pad (GPM6-
1123456-ABCD-1234) para determinar el
valor de IC50 usando la ecuación 1/regresión
no lineal ponderada Y2; log (concentración
de inhibidor) frente al modelo de respuesta
normalizado con una pendiente variable
DPPH se sabe que es un radical estable
debido a su propiedad paramagnética que le
confiere el electrón impar. A través de esta
propiedad tiene la capacidad de cambiar de
color en la solución de violeta intenso a
amarillo mientras se prepara con etanol. Este
cambio se puede determinar mediante la
absorbancia a 515 nm utilizando un
espectrómetro UV. La muestra para analizar
la actividad antioxidante se añadió a la
solución de DPPH y dio como resultado un
violeta pálido, que muestra el efecto del
antioxidante. Para la prueba, la muestra se
diluyó en al menos cinco concentraciones
(diluciones dobles), es decir, 1000, 500, 250,
125 y 62,5 µl. Y se prepararon 6x10-5 M de
DPPH en etanol absoluto y luego se añadió 1
ml de la muestra con solución de DPPH de 1
ml. La mezcla se mantuvo en la oscuridad
durante 30 minutos de incubación y la
medición de la absorbancia fue a 515 nm en
el espectrofotómetro UV (UVUNICAM, ALVA,
Reino Unido)
ANÁLISIS DE
ELECTROFORESIS: (BIO-
RAD LABORATORIES, INC.,
RICHMOND, CA, EE. UU.)
La determinación del peso molecular y el
patrón de proteínas se determinó utilizando
la página SDS.
Las muestras de proteína obtenidas de las
condiciones optimizadas de EAU se
mezclaron con tampón de muestra y se
cargaron 15 µl en el gel y luego se sometió a
electroforesis (Bio-Rad Laboratories, Inc.,
Richmond, CA, EE. UU.) utilizando el tampón
de electrodo ( glicina - 14,4 g, Tris - 3 g y SDS
- 1 g que se preparó para 1 litro) a la
corriente de 15 mA/gel[13]. Luego de
realizada la separación se puso el gel en un
teñidor (Coomassie Brilliant Blue) y se dejó
con ligera agitación por 12 h y luego se tomó
y se puso en un desteñidor. Después de la
actividad, se realizó una tinción para
corroborar la bromelina usando gel de
sustrato de caseína. El gel se fusionó
completamente en 50 ml de tampón de
fosfato 50 mM de caseína al 2%, durante 45
minutos con agitación constante [9]. Luego, a
37 °C, se realizó una incubación en gel
durante 30 minutos para discernir una zona
clara sobre un fondo azul, lo que ayudó a
confirmar la actividad de la bromelina.
ENSAYO DE PROTEASA
PARA ACTIVIDAD DE
BROMELINA
La determinación de la actividad de la
bromelina se realizó por el método de
digestión de caseína por la presencia de
cisteína y EDTA (Murachi 1976) utilizando
caseína como sustrato. El ensayo fue de
hidrólisis proteolítica en la que la bromelina
rompe los enlaces peptídicos más pequeños
presentes y ayuda a liberar los aminoácidos analizador termogravimétrico (TGA 701,
que quedan libres después de hidrolizarla LECO) y se representaron los resultados.
con proteína. En este caso, la L-tirosina se
liberó de la caseína después de la hidrólisis
con la enzima bromelina. El sustrato no
hidrolizado se precipitó usando TCA. El
ensayo se basó principalmente en el método
colorimétrico [27].

En este ensayo, se tomaron viales adecuados

(en mililitros) y se pipeteó el reactivo caseína
de 5 ml en la prueba y el blanco, por lo tanto,
se equilibró a 37 °C y se le agregó una Se encontró que el contenido de humedad
solución enzimática de 1 ml y se mezcló por de la cáscara y el núcleo era menor y, por lo
agitación y agitación. Se incubó durante 10 tanto, los productos con bajo contenido de
minutos a 37 °C. Luego, después de agregar 5 humedad no están sujetos al efecto de la
ml de TCA a la prueba y al blanco, seguido de degradación por microbios y otros cambios
la solución agregada de 1 ml al blanco, que químicos que ocurren dentro de los
se centrifugó e incubó a 37 °C durante 30 productos.
minutos, se filtró a través de un filtro de
jeringa y el filtrado se usó en el desarrollo del
color. . Para la determinación del color se
tomaron 2 ml del filtrado de prueba y del
blanco y luego se añadieron 5 ml de
carbonato de sodio tanto al filtrado de
prueba como al blanco seguido de 1 ml de
reactivo de folin. Luego se centrifugó y se
enfrió a temperatura ambiente y se midió la
absorbancia a 275 nm.

La actividad enzimática se calculó mediante

el ecuación:
Los compuestos volátiles son los que aportan
el aroma y el sabor ya que están compuestos
por muchos compuestos como ésteres,
alcoholes, aldehídos, cetonas, lactonas,
terpenoides y apocarotenoides. También
desempeñan funciones especiales y también
ayudan a la planta a prevenir el estrés
oxidativo. Tanto la cáscara como el núcleo
tienen un mayor contenido de volátiles. El
contenido de cenizas de la muestra
RESULTADOS Y DISCUSIÓN determina la cantidad de minerales
presentes, por lo tanto, el corazón de la piña
Análisis aproximado tiene menos minerales que la cáscara.
El análisis proximal de la cáscara y el corazón
de la piña se determinó utilizando el
AJUSTE DEL MODELO
El análisis de la superficie de respuesta se
utilizó como herramienta para optimizar las
condiciones de extracción para el
tratamiento con EAU y, utilizando las
respuestas, también se analizaron los
componentes bioactivos. El diseño
experimental general dio 15 ejecuciones y,
por lo tanto, también se realizó el análisis de
regresión para el ajuste de la curva para el
modelo cuadrático y también se obtuvo la
diferencia significativa de ANOVA. Las
estadísticas de resumen de los modelos
mostraron que los modelos cúbicos tenían
valores de R2 entre 0,80 y 0,99, lo que indica
que los modelos de regresión eran
adecuados para explicar el comportamiento
del modelo. Además, los valores adj-R2
(modelo cúbico) para el contenido fenólico
total y FRAP de la cáscara fueron superiores
a 0,910, lo que indica que no se han incluido
términos insignificantes en el modelo. Sin
embargo, se descubrió que el modelo cúbico
tenía alias, lo que significa que los efectos de
cada variable hacían que las diferentes
señales se volvieran indistinguibles[24].
EXTRACCIÓN DE
COMPONENTES ACTIVOS
BIOACTIVOS A PARTIR DE
CÁSCARA DE PIÑA
El rango de proteína, TPC y FRAP se muestra
en la Tabla 4. El contenido de proteína
difiere según las técnicas de purificación y
extracción utilizadas. Por medio del
procesamiento de membrana se encontró
que el contenido de proteína era de (1,37
mg/ml)[21]. Por lo tanto, el contenido de
proteína de la cáscara difiere en cada
cultivar. Los principales polifenoles presentes
en la cáscara de la piña son la catequina, la
epicatequina, el ácido ferúlico y el ácido
gálico. Por lo tanto, se encontró que el
contenido fenólico de las cáscaras es de
31,98 mg equivalentes de ácido gálico
(GAE)/g de extractos[15]. Con respecto a
TPC[6] 9,1 mg GAE/g seco TPC de piñas y
residuos de piña resultó ser 2,75 mg GAE/g
de peso seco (DW). El otro estudio[28]
mostró que la cáscara de piña no se
concentró con harina de soya (1249 µg/g –
170,93 µg/g) y se concentró aún más
(14691,5 µg/g – 2788,6 µg/g), que
comparativamente se encontró que contenía
menos fenoles contenido de este presente
estudio del tratamiento de los EAU. El
ensayo de poder reductor férrico muestra la
capacidad del extracto para donar electrones
al ion férrico, reduciéndolo a ion ferroso. El
ácido ferúlico presente en la cáscara de piña
contribuyó principalmente al
antioxidante[31]. Se encontró que el valor de
FRAP era (6,9 µM TE/g) y (2,5 µM TE/g)
usando un solvente como metanol: acetona
y etanol respectivamente [17]. El efecto de la
actividad antioxidante puede diferir según el
tipo y la complejidad de la muestra utilizada
para el estudio.
También se realizó el ANOVA para obtener la
diferencia significativa entre cada variable en
el contenido de proteína, fenoles y
antioxidantes del proceso de extracción.
Mostró que en el caso del tiempo de
proteína, la amplitud, la concentración de
etanol utilizada no fue significativa, y como el
valor para el término del modelo fue mayor a
0.100, lo que mostró que no fue significativa.
En la extracción de TPC, hubo una diferencia
significativa en la amplitud (p<0.05) donde el
tiempo y la concentración de etanol no
tienen diferencia significativa. En la
determinación de la actividad antioxidante
no se mostró diferencia significativa entre las
variables utilizadas y el modelo tampoco.
Pero la falta de ajuste del modelo es
significativa. La condición optimizada
obtenida fue tiempo 10 min, amplitud 100%
y concentración de etanol 28% dio 4166,11
µg/g 8054,77 µg GAE/g 124,7388 µmol
Fe(II)/g con deseabilidad 0,837.

En el proceso de extracción, la interacción

entre la variable independiente y las
respuestas Tiempo (A), Amplitud (B) y
Concentración de etanol (C) se dan como
una ecuación de regresión múltiple que
Aquí Y1, Y2, Y3 representan el contenido de
representa una relación empírica que se
proteína, contenido fenólico y contenido de
muestra a continuación:
FRAP de la cáscara y A, B, C son los valores
reales de las variables independientes. Se
generó la condición optimizada y el gráfico
de respuesta tridimensional en el que se fija
una variable y se variaron otras dos para
mostrar los efectos interactivos. Los gráficos
se muestran en las Fig. 1, 2 y 3.
EXTRACCIÓN DE
COMPONENTES ACTIVOS
BIOACTIVOS DEL CORAZÓN
DE LA PIÑA
En este estudio bajo los EAU de la Tabla 4, el
contenido de proteína osciló entre 3581,69 y
6612,83 µg/g; el núcleo de la piña Nang Lae
tiene un contenido de proteína de 45,4
mg/100 g y Phu Lae tiene un contenido de
proteína de 27,1 mg/100 g[12] . El contenido
de proteína depende del ph del tampón de
extracción, la temperatura y la fuerza del
tampón de extracción. Por lo tanto, se
encontró que el contenido de proteína era
de 12,6 mg/ml[4]. De la Tabla 4, el contenido
de tpc fue 9340,26 – 24678,7 µg GAE/g. La
extracción del contenido fenólico en el
núcleo mediante el uso de etanol como
disolvente fue de casi 10 mg/g de GAE[30].
Por lo tanto, según nuestro estudio, el
tratamiento con EAU proporcionó un
contenido fenólico comparativamente más
alto. Esto se debe a que los EAU utilizan
ondas de sonido a frecuencias por encima
del rango audible para los humanos (=20
kHz) para romper la pared celular de la
planta, mejorando así la penetración del
solvente en el material vegetal y facilitando
la liberación del extracto y brindando una
mayor eficiencia de extracción[16]. Se
encontró que el valor FRAP del corazón de la
piña era de 2,01 mmol/100[10]. En nuestro
estudio, el valor de FRAP osciló entre (349,93
y 502,3 µmol Fe(II)/g. El ácido ferúlico, que
es el ácido hidroxicinámico más abundante
presente en las paredes celulares de las
plantas, ha contribuido mucho a la actividad
antioxidante.
El ANOVA mostró que no hubo diferencias
significativas en cada variable, como el
tiempo, la amplitud y la concentración de
etanol en la proteína, el contenido fenólico y
el contenido de antioxidantes del proceso de
extracción, al igual que el modelo y la falta
de ajuste como (p>0.05) . La condición
optimizada del núcleo para el rendimiento
máximo de proteína 4860,58 µg/g, TPC
20192,19 µg GAE/g y 438,60 µmol Fe(II)/g
para el tiempo 16 (min), amplitud 100 %,
concentración de etanol 36 %.
Por lo tanto, la ecuación pronosticada
muestra una relación empírica entre las
variables y las respuestas se obtienen usando
la ecuación de regresión múltiple
Aquí Y4, Y5, Y6 representan el contenido de
proteína, el contenido fenólico y el
contenido de FRAP del núcleo y A, B, C son
los valores reales de las variables
independientes.
DETERMINACIÓN DE LA
ACTIVIDAD ELIMINADORA
DE RADICALES DPPH DE LA
CÁSCARA Y EL CORAZÓN
DE LA PIÑA
La capacidad antioxidante es un indicador
significativo como promotor de la salud en la
cáscara de muchas frutas y verduras. Es
ampliamente utilizado para detectar la
actividad antirradicalaria de diferentes
muestras, debido a su sensibilidad a
concentraciones más bajas de principios
activos de origen natural. Se prepararon
diferentes concentraciones de cada muestra
(1000 µg/ml, 500 µg/ml, 250 µg/ml y 125
µg/ml) y se determinó el % de inhibición. El
valor de IC50 se determinó utilizando la
regresión no lineal ponderada 1/Y2; log
(concentración de inhibidor) frente al
modelo de respuesta normalizado con una
pendiente variable. El análisis de los datos se
obtuvo utilizando Graph Pad Prism® versión
6.01 (San Diego, EE. UU.) y se proporciona en
la siguiente tabla. El valor IC50 más bajo
exhibe un mayor potencial antioxidante; en
nuestro estudio, el núcleo de la piña tiene un
valor IC50 más bajo de 38,65 µg/ml, lo que
representa un mayor potencial antioxidante
presente en el núcleo en comparación con la
cáscara.
El tratamiento con EAU es más significativo
para determinar la capacidad antioxidante
debido a la fuerte disrupción de las células
que ayuda a exprimir los compuestos
bioactivos de las células de manera eficiente.
La inhibición estimada de DPPH de la cáscara
y el corazón de la piña a diferentes
concentraciones, utilizando regresión no
lineal, se representó en forma de gráfico.
DETERMINACIÓN DE LA
ACTIVIDAD DE BROMELINA
La actividad de bromelina se determinó
utilizando el método de digestión de caseína.
A partir de nuestro estudio se encontró que,
después de la purificación con acetona y
diálisis, la actividad de la bromelina y el
número de purificaciones se dan en la Tabla
6. La actividad de la enzima dependía mucho
del solvente de extracción utilizado y las
diferentes variedades de piña dieron
resultados diferentes [12], por lo tanto, para
el agua destilada como solvente la variedad
de cáscara NL arrojó una actividad de
327.71(unidades/ml) la misma variedad PL
arrojó 443.66 unidades/ml. A partir de
nuestro estudio utilizando etanol como
disolvente de extracción, se encontró que la
actividad de la piel y el núcleo era de 131 ±
0,025 unidades/ml y 116,25 ± 0,405
unidades/ml con una purificación de 1,25 y
1,17 veces, respectivamente. La actividad de
la bromelina depende del tampón de
extracción, la temperatura y las técnicas de
purificación utilizadas, según el estudio de
[4], la actividad de la bromelina central osciló
entre 155 y 130 cdu/ml dependiendo de la
temperatura de 5 a 40 °C. Y por lo tanto, el
pliegue de purificación estuvo en el rango (2-
5 pliegues) dependiendo de la concentración
de acetona utilizada.
PATRONES DE PROTEÍNAS
El peso molecular de la proteina del crudo.
mezcla de residuos que contiene (57 %
cáscara, 28 % corona y 15 % núcleo) tiene
entre 11,7 y 26,9 kDa[21]. El patrón de
proteína de la cáscara de diferentes
cultivares osciló entre 23 y 28 kDa[12]. A
partir de la Fig. 8, se encontró que el patrón
de proteína estaba en el rango de 23 kDA
tanto para la piel como para el núcleo. Por
tanto, la tinción de actividad para la actividad
proteolítica fue positiva y confirmó la
presencia de bromelina.

CONCLUSIÓN
Se demostró que el diseño de Box-Behnken (BBD) es una técnica eficaz y fiable para investigar la
extracción de compuestos bioactivos. Se encontró que la actividad de bromelina para la condición
optimizada para la cáscara y el corazón era 94,20 ± 0,05 (unidad/ml) y 93,13 ± 0,005 (unidad/ml)
para la cáscara y el corazón de la piña, respectivamente. Por lo tanto, después de la purificación,
131 ± 0,025 unidades/ml y 116,25 ± 0,405 con actividad específica de 27,78 y 29,85 con
purificación de 1,25 y 1,17 veces. Se encontró que el peso molecular de la proteína tanto en la piel
como en el centro era de 23 KDa. Se realizó una tinción para confirmar la presencia de bromelina,
lo que representó un resultado positivo. El valor I C50 demostró que el núcleo tenía un mayor
potencial antioxidante que la cáscara. Por lo tanto, a partir de nuestro estudio, podemos concluir
que los EAU son uno de los métodos más rápidos para obtener los bioactivos y la bromelina
obtenida se puede aplicar en el proceso de ablandamiento de carne, horneado y también se
puede usar en varias industrias farmacéuticas.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Nos gustaría agradecer a AIT y Bio lab por financiar la investigación y también la ‘‘industria
principal’’ por dar materias primas.