8/03/2022

Estrategias de control de las 2

aflatoxinas
Aplicación de la biotecnología
en el control de aflatoxinas

REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA Prevenir Remover Detoxificar Prevenir

MARÍA MARCELA MARTÍNEZ MIRANDA efectos
CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR
DOCTORADO EN CIENCIAS BIOMÉDICAS
UNIVERSIDAD DE CALDAS Pre-cosecha

Enfoques de la biotecnología 3 Estudio de Aspergillus 4

Clúster de 75 kb

Vía biosíntesis
AFs
Resistencia
de la planta
Hongo huésped

Genes Enzimas
involucrados Mecanismos
Monooxigenasas, Intermediarios de regulatorios
24-26 genes deshidrogenasas, la vía AFLR: proteína de
afl-R, AflJ, LaeA, metiltransferasas
Factores unión al DNA
VeA, VelB, VosA y sintetasas.
ambientales

Clonación de genes para identificar agentes inhibidores naturales de

la vía biosintética de las AFs

Factores ambientales 5 Resistencia de la planta huésped 6

Inducen la expresión de AflR y

Estímulos ambientales factores de transcripción global
que, a su vez, transmiten señales
de activación del clúster Identificación Estrategias Producción
Identificación
genético: de proteínas moleculares de plantas
de resistencia
asociadas a para el resistentes por
•F. nutricionales: Carbono o •CreA (utilización de azúcar) natural y sus
resistencia mejoramiento ingeniería
nitrógeno mecanismos
•AreA (utilización de nitrato) (RAPs) de plantas genética
•Alta temperatura y humedad
•PacC (regulación del pH)

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7 Identificación de resistencia natural 8

 Estrategia para aumentar la
resistencia de la planta huésped
a la contaminación por AFs

 Identificación fenotípica de
resistencia en semillas.

 Identificación de proteínas
asociadas a resistencia (RAPs).

 Identificación y clonación de
genes de resistencia.

 Ingeniería genética-selección
asistida por marcadores.
Kernel screening assay (KSA)

Métodos moleculares 9 Identificación de genes asociados 10

Resistencia planta huésped a resistencia

 Identificar y seleccionar nuevos compuestos de
Identificación de genes candidatos
inhibición como:

Mutagénesis (TILLING)  Proteínas que inhiben ribosomas (RIP) cDNA library

 Lectinas
Proteomic
Mejoramiento molecular Microarray
 Polipéptidos de bajo peso molecular
qRT-PCR
Proteómica
 Hidrolasas QLT mapping
Ingeniería genética de cultivos  Glicoproteínas de superficie celular

 Caracterizar sus respectivos genes antes de

Silenciamiento genético inducido por le huésped (HIGS) usarlos en transformación genética de la planta.

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Mutagénesis dirigida 12

 Targeting Induced Local

Lesions in Genomes
(TILLING): usado para la
detección de mutaciones
en 6 genes de 3,400 líneas
mutantes.

 Mutación inducida de
genes LOX (lipooxigenasa)
involucrada en la síntesis
de hidroperoxidasa de
ácidos grasos reportada
como o inhibidor de la
biosíntesis de AFs.

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Mejoramiento molecular 13 Proteómica 14

 Usada para identificar RAPs y genes de
 Identificación de marcadores moleculares de resistencia.
resistencia por Polimorfismos de Longitud de
Fragmentos Amplificados (AFLP).  Plantas resistentes de maní muestran un
incremento de 3-4 veces β-1,3-
 En maní, el marcador SCAR (Sequence glucanasa.
Characterized Amplified Region) "AFS 412" está
estrechamente vinculado con la resistencia a la  Perfiles proteicos de cultivos resistentes y
infección por A. flavus susceptibles, revelan diferencias en 12
proteínas.
 Otros marcadores de ADN, están asociados con la
reducción en la producción de AFs en maní.  Proteínas constitutivas e inducibles que
contrarrestan la proteínas hidrolíticas de
virulencia producidas por A. flavus como
 Combinación de métodos tradicionales de cultivo la -amilasa.
y moleculares para el desarrollo de variedades de
maíz resistentes a la infección por A. flavus y  Proteínas expresadas diferencialmente:
contaminación por AFs: detección fenotípica y relacionadas con el estrés, anti fúngicas
marcadores moleculares asociados con genes anti (glioxalasa, peroxidasa, inhibidoras de
fúngicos. tripsina) y proteínas relacionadas con
patogénesis.

Ingeniería genética 15 Ingeniería genética (2) 16

 Desarrollo de variedades transgénicas con rasgos anti fúngicos

que confieren resistencia a hongos aflatoxigénicos.
 Plantas transgénicas que contienen segmentos del genoma de
hongos patógenos de plantas para aumentar la expresión de
varios genes responsables de actividad anti fúngica y anti toxina.
 Diferentes proteínas anti fúngicas y péptidos utilizados en la
ingeniería genética : defensinas, tioninas, proteínas de
transferencia de lípidos no específica (ns-LTP), péptidos
antimicrobianos, proteínas que inactivan los ribosomas (PIR),
lectinas y péptidos tipo lectina.
 Control de expresión de genes anti estrés, por ingeniería de la
maquinaria regulatoria, usando factores de transcripción y
combinación genética en lugar de inserciones de genes de
“acción simple”.
 Constructos de gen anti fúngico combinado con genes resistentes
a los insectos que potencialmente ofrecen resistencia a los hongos
aflatoxigénicos.
 Ciertos péptidos líticos (D4E1 y D5C ) han demostrado actividad
inhibitoria contra A. flavus y son prometedores para reducir la
infección de las semillas mediante transformación. Así como genes
anti fúngicos de origen bacteriano, vegetal y mamífero.

Ingeniería genética (3) 17 Silenciamiento genético inducido 18

por el huésped (HIGS)

 Plantas de maní transgénicas que expresan genes de quitinasa, glucanasa y lipo  Tecnología promisoria en la que la planta huésped regula la baja expresión de
oxigenasas que aumentan su resistencia a A. flavus y la acumulación de AFs. genes del patógeno, sin necesidad de que ésta exprese una proteína foránea.

 En granos de maíz, han sido identificadas durante la germinación varias
proteínas especificas con actividad anti fúngica:
 Hidrolasas, que degradan polisacáridos estructurales de la pared celular del hongo.
 Proteínas que inactivan ribosomas (RIPs), las cuales actúan sobre ribosomas foráneos.
 Algunos genes de micovirus son capaces de interferir el RNA de Aspergillus, lo
cual podría ofrecer una solución viable para incorporar resistencia a las
aflatoxinas.
 Virus dsRNA de Penicillium chrysogenum puede degradar los transcriptos de
genes de aflatoxinas por mecanismo de interferencia de ARN.

 Zeamatina, que incrementa la permeabilidad de membranas celulares fúngicas.
 β-1,3-glucanasa, que bloquea la actividad -amylasa de A. flavus e inhibe la
germinación de esporas y crecimiento fúngico.
 Tres secuencias de siRNA sintéticas (Nor-Ia, Nor-Ib, Nor-Ic) dirigidas a los dos
genes clave de la ruta biosintética de aflatoxina, aflR (un gen regulador) y aflD
(un gen estructural), se utilizaron para controlar la producción de aflatoxinas y
estudiar sus efectos sobre la AFG1 y la AFB1.

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19 Glosario 20

 AFLP: Amplified Fragment Length Polymorphism

 RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism.
 QTL: Quantitative Trait Locus.
 KSA: Kernel screening assay
 TILLING: Targeting Induced Local Lesions in Genomes
 qRT-PCR: Quantitative reverse transcription-PCR
 HIGS: Host-induced gene silencing

Bibliografía 21

 Bhatnagar-Mathur, P., et al. (2015). Biotechnological

advances for combating Aspergillus flavus and aflatoxin
contamination in crops, Plant Science, 234, 119-132.

 Brown, R., et al. (2003). Using biotechnology to enhance

host resistance to aflatoxin contamination of corn.
African Journal of Biotechnology, 2 (12), 557-562.

 Cary, J. W., et al. (2011). Developing Resistance to

Aflatoxin in Maize and Cottonseed. Toxins, 3(6), 678–696.