OBTENCIÓN DE ENZIMAS

RECOMBINANTES PARA

BIORREMEDIACIÓN
ELABO
RADO PO Á VEZ
R: D A Y A N A A L D Á S Y C H RIS TIA N C H

DIOXIGENASA (CATECOL
BIORREMEDIACION ENZIMATICA 2,3 DIOXIGENASA)
La biorremediación enzimática es una tecnología derivada Esta enzima está presente en varios
de la biorremediación con la finalidad de disminuirlos tipos de bacterias, principalmente en las
efectos indeseables de los contaminantes en el ambiente. del género Pseudomonas. Esta enzima
Entre los contaminantes más peligrosos se encuentran los rompe anillos aromáticos de varios
denominados persistentes, que en su mayoría son contaminantes ambientales, tales como
compuestos organoclorados. derivados de tolueno, xileno, naftaleno y
bifenilo.
Su persistencia en el
ambiente se debe Mediante el uso de técnicas de
principalmente a su ingeniería genética como la
estabilidad física y química, transformación bacteriana, es posible
así como a la baja producir una gran cantidad de
biodregabilidad enzimas.

GLUTATIÓN S TRASNFERASA (GTS)

PLÁSMIDO PGEX-6P-2
Es un vector de expresión que se utiliza para
introducir un gen específico en una célula
diana, y que esta produzca la proteína
objetivo. Está diseñado para contener
secuencias reguladoras que actúan como
potenciador y regiones promotoras que dan
lugar a la transcripción eficiente del gen.
Estas enzimas están presentes en casi todos los
organismos y pueden degradar compuestos
aromáticos y halogenados.
GTS pertenece a una superfamilia de enzimas
que se han encontrado en bacterias, hongos,
algas, plantas y animales.
Catalizan la conjugación de glutatión endógeno a una
variadad de compuestos electrofilicos como parte del
mecanismo de defensa de organismo contra tóxicos.

La enzima fue aislada del parásito Depende la configuración de la enzima esta

Schistosoma japonicum helmintosm. participa en los mecanismos de desintoxicación
de herbicidas o puede ser inducida por ataque de
patógenos, metales pesados, daño oxidativo y
estrés térmico.

PRODUCCIÓN DE LA ENZIMA TRANSFORMACIÓN

PREPARACIÓN DE CÉLULAS BACTERIANA
La transformación genética ocurre
Se obtuvieron células competentes a partir de cuando una célula incorpora dentro de
cepas E. coli BSJ y BL21, mediante las ella material genético exógeno, esto
siguientes fases: puede ser de manera natural o in vitro,
1. Crecimiento (37C en 3mL de medio LB) para que estas celulas expresen un nuevo
2. Inoculación (2 a 3 horas a 37C, agitación segmento de DNA.
250 rpm) La verificación de los
3. Centrifugación ( 2500 rpm por 12 min) plasmidos por medio de la digestión
4. Separación y secado con las enzimas de restricción
5. Centrifugación ( 2500 rpm por 10 min) produjo dos bandas.
6. Separación y secado
7. Almacenamiento (80 C)

EXPRESIÓN DE GST
Después de ser confirmado el plásmido objetivo, se
transformó con el mismo la cepa E.coli BL21 para
EXTRACCIÓN expresar las proteínas GST. Las bacterias que fueron
PLASMÍDICA clonadas se recrecieron, inducidas con IPTG para después
lisarse, se extrajo la proteína yse corrió en un gel de Gel de
De las colonias bacterianas anteriormente SDS-PAGE.
cultivadas que fueron capaces de crecer
en agar con ampicilina se tomaron 6 colonias Se observaron bandas de
al azar, y se realizón la extracción 25 kDa que corresponde al
plasmídica por lisis alcalina. tamaño esperado para la
enzima GST.

CONCLUSIONES
- La proteina GST recombinante mostró actividad enzimatica.
- Las secuencias nucleotídicas del gen nahH que codifica para la
enzima calecoI 2,3-dioxigenasa, presentan variabilidad en las
regiones 5´y 3
La variabilidad determinada por los analisis
bioinformaticos sugieren
amplificar el gen a partir de una cepa tipo cuya
secuencia se encuentre reportada en algunas de
las bases de datos disponibles

Melchor G., Velazquez J. (2014). Obtención de enzimas recombinantes para biorremediación. Universidad
Autónoma de Nayarit