G.P. L. Microbiologia Médica 2022

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
GUÍA DE PRÁCTICA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
MICROBIOLOGÍA MÉDICA
PLAN DE ESTUDIOS: 2020

SEMESTRE ACADEMICO: 2022
Código MEH-OT-01
Versión V.2
MICROBIOLOGÍA MEDICA Documento de
Aprobación
Fecha de Aprobación 09-07-2018
GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60
I. INFORMACION GENERAL (*)
1.1. Ciclo IV
1.2. Código 041201
1.3. Asignatura
MCROBIOLOGÍA MEDICA
1.4 Créditos totales 04
1.5. Horas semanales 06
1.5.1 Horas Teóricas 02
1.5.2 Horas Prácticas 04
II. SUMILLA (*)
La asignatura de Microbiología Médica pertenece al área de Formación

Básica es de naturaleza teórico- práctico; siendo su propósito brindar al
estudiante los conocimientos sobre los microorganismos (Bacterias,
Rickettsias, Clamidias, Micoplasma, Virus y Hongos), que se relacionan con
el cuerpo humano y la Salud pública; asimismo, imparte bases modernas,
sobre la profilaxis y biología avanzada, con énfasis en la proyección a la
comunidad.
Contiene tres Unidades Académicas en dieciséis semanas del Semestre
Académico.
Según la emergencia sanitaria declarada por el Gobierno Peruano mediante Decreto Supremo N.° 008-2020-SA, Resolución
Viceministerial N.° 081-2020-MINEDU, y Resolución N° 039-2020-SUNEDU-CD. Aprueban los “Criterios para la supervisión de la
adaptación de la educación no presencial, con carácter excepcional, de las asignaturas por parte de universidades y publicaciones
difundidas por SUNEDU sobre enseñanza no presencial en las Universidades, hacemos de conocimiento que se programará un plan de
recuperación de asignaturas con desarrollo de habilidades clínicas, una vez sea dado el restablecimiento de las prácticas clínicas en
establecimientos no COVID. PLAN DE CONTINUIDAD DEL SERVICIO EDUCATIVO UPSJB - Resolución N° 145-2020-CU-UPSJB 17 de
abril 2020. (Incluye el “Plan Excepcional y Temporal de Recuperación de Asignaturas”).
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
INTRODUCCIÓN
En el ámbito de la salud y la medicina, la microbiología resulta de gran

importancia puesto que es la que se encarga de estudiar los microorganismos
patógenos como los hongos, virus, parásitos y bacterias que pueden generar
alguna enfermedad en el ser humano
A partir de la microbiología se estudian las enfermedades infecciosas que
padece cualquier paciente y gracias a ella se logra determinar cuál es el
tratamiento más adecuado para cada enfermedad y paciente.
Sin duda que las repercusiones que se desprenden de la Microbiología, en
cuanto a la vida cotidiana y la cantidad de aspectos que se enmarcan en ella
misma, es el factor más importante de esta ciencia. Debido a que no hay límite
alguno que se excluya en lo referente a la ciencia de la salud.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
DESARROLLO DE LAS ACTIVIDADES APRENDIZAJE
RESULTADO DE APRENDIZAJE (LRPD-Resultados que pueden denominarse:

logros, productos, desempeños)
Producto formativo de la asignatura:

Evaluación de estación de microscopia, desde la siembra hasta la lectura de los
resultados; agentes infecciosos: bacterias con características especiales, virus,
hongos y su aplicabilidad en la medicina.
Producto formativo de las unidades:
Unidad Producto Formativo

Estación de Microscopia, bioseguridad, siembra y aislamiento e
I.
identificación microscópica de bacteria Gram Positivas y Negativas.
identificación microscópica de bacteria formadoras de esporas, no
II.
formadoras de esporas, fermentadoras y no fermentadoras y bacilos
ácido alcohol resistentes.
III. identificación microscópica de virus y hongos.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PROTOCOLO DE BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS Y TALLERES EN

EL MARCO DEL SERVICIO REMOTO DE EMERGENCIA SANITARIA
Resolución Rectoral N° 004-2021-R-UPSJB Fecha de Aprobación: 5 de mayo

de 2021
MARCO REFERENCIAL
 Ley N° 26842. Ley General de Salud y sus modificatorias.
 Ley N° 29783, Ley de Seguridad y Salud en el Trabajo, y su modificatoria.
 Resolución Viceministerial N° 081 -2020 – MINEDU, “Disposiciones para
la prevención, atención y monitoreo ante el Coronavirus (COVID-19) en
universidades a nivel nacional”.
 DS N° 031-2020-SA, declara en emergencia sanitaria a nivel nacional por
el plazo de 90 días calendario y dicta medidas de prevención y control del
COVID- 19.
 DS N° 046-2020-PCM, Decreto Supremo que precisa el Decreto Supremo
N° 044-2020-PCM, que declara el Estado de Emergencia Nacional, por
las graves circunstancias que afectan la vida de la Nación a consecuencia
del brote del COVID 19.
 Decreto de Urgencia N° 026-2020, Decreto de Urgencia que Establece
Diversas Medidas Excepcionales y Temporales para Prevenir la
Propagación del Coronavirus (COVID-19) en el Territorio Nacional.
 Resolución Ministerial Nº 055-2020-TR, de fecha 06 de marzo de 2020,
que aprueba el Documento denominado “Guía para la prevención del
Coronavirus en el ámbito laboral”.
 Resolución del Consejo Directivo N° 039-2020-SUNEDU/CD, de fecha 27
de marzo de 2020, que aprueba los “Criterios para la supervisión de la
adaptación de la educación no presencial, con carácter excepcional, de
las asignaturas por parte de universidades y escuelas de posgrado como
consecuencia de las medidas para prevenir y controlar el COVID-19” y su
modificación RESOLUCIÓN DEL CONSEJO DIRECTIVO Nº 115-2020-
SUNEDU-CD.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL USO DEL LABORATORIO

DURANTE EL CURSO DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA
1. El estudiante deberá asistir a las clases prácticas llevando consigo la Guía de
Prácticas, mandil, plumón indeleble para escribir sobre vidrio y lápices de
colores.
2. No se podrá ingresar sin mandil, guantes y mascarilla a la sala de prácticas,
para evitar contaminaciones
3. Durante las prácticas no se debe comer, beber ni fumar, para evitar o prevenir
posibles contaminaciones.
4. Sobre la mesa de trabajo sólo deberán colocar su guía de práctica y su libreta
de apuntes.
5. Eliminar el material de desecho, como papeles, trozos de algodón, etc. Al
tacho de basura
6. Las coloraciones deben efectuarse en el lavadero de cada mesa de práctica
para evitar que se tiñan la mesa de trabajo, ropa o manos.
7. Colocar las láminas preparadas sobre hojas de papel blanco.
8. Dejar los cultivos ya usados, en la canastilla de tubos. Tener cuidado que
permanezcan debidamente cerrados y en posición vertical para evitar que se
derramen.
9. Las láminas coloreadas a desecharse deberán ser colocadas en frascos de
boca ancha con desinfectante.
10. Todos los cultivos que se preparen deberán incubarse, teniendo en cuenta
las siguientes anotaciones:
 Nombre o iniciales de los estudiantes
 Nombre del germen, número de mesa, turno y fecha de la siembra
 Las placas deberán ser invertidas, a menos que el profesor de
instrucciones contrarias
 Los tubos deberán estar bien tapados y colocados en gradillas
 Los alumnos se responsabilizan de colocar estos cultivos en estufa a 37ºC
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
11. Al finalizar el trabajo:

 Limpiar con papel lente los objetivos del microscopio
 Tener cuidado de dejar el objetivo de menor aumento frente al
condensador y que no queden láminas sobre la platina
 Limpiar la mesa de trabajo
 Comprobar que la llave de gas se encuentre cerrada
 Lavarse prolijamente las manos con jabón.
12. El Protocolo de cada práctica será controlado por el profesor al final de la
práctica.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRÁCTICA N° 1- SEMANA 1
BIOSEGURIDAD
INTRODUCCION:
La seguridad en el laboratorio se puede definir como: “La situación carente de
riesgo o con un riesgo limitado, que resulta del cumplimiento de un conjunto de
normas y prácticas para lograr este fin”
1. Medidas generales de seguridad Barrera La seguridad como prevención
viene definida por una serie de barreras. Si estas fallan y ocurre un
accidente, es preciso efectuar un tratamiento precoz y adecuado para
evitar un daño mayor y posteriormente hacer un diagnóstico del fallo.
Las barreras se rompen por fallos humanos y/o errores mecánicos.
Barreras primarias: Las localizadas en tomo al origen del riesgo, como
son: - Contenedores, equipo e instrumental correcto y “buena práctica” (la
técnica de trabajo ordenada v rigurosa es probablemente la mejor
protección que existe) – Uso de desinfectantes y cabinas de seguridad.
Barreras secundarias: Localizadas en el círculo del operador, incluirán:

 La higiene personal rigurosa.
 La vacunación
• Programas de salud laboral.
 Vestimenta: uso de ropa adecuada, guantes, gafas, pelo recogido.
 No frotarse los ojos o la nariz con las manos contaminadas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 No inhalar los aerosoles producidos durante la centrifugación, la

sedimentación o el derrame de cultivos líquidos.
 Evitar ingerir microorganismos por accidente, al llevarse los dedos o el
lápiz a la boca.  No sufrir inoculación percutánea, por ejemplo, al
pincharse con una aguja.
 No comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos.
 No colocarse o quitarse lentes de contacto.
 No pipetear con la boca.
 Presuponer que todos los pacientes están potencialmente infectados

por HIV u otros patógenos transportados por la sangre.
 Las heridas en las manos deben vigilarse, ya que pueden ser una puerta
de entrada a la infección. En caso de tenerlas, deben cubrirse
adecuadamente con material resistente al agua.
 Lavarse a conciencia las manos y otras superficies de la piel tras
quitarse los guantes e inmediatamente después de cualquier
contaminación.
Barreras terciarias: Localizadas alrededor del laboratorio: Evitan que los
riesgos de laboratorio puedan repercutir en la comunidad.
 Ningún material tóxico o infeccioso abandone el laboratorio.
 Acceso restringido a determinadas áreas de laboratorio.
 Contenedores especiares para material bio-peligroso, autoclaves e
incineradores para desechos contaminados.
 Acceso al laboratorio únicamente al personal capacitado.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
DESINFECCIÓN, DESCONTAMINACIÓN Y ESTERILIZACIÓN Existen muchos

agentes químicos o físicos para eliminar los microorganismos podemos distinguir
tres grupos:
 Agentes antisépticos: son germicidas químicos para la utilización en la piel
como, por ejemplo; alcohol, iodóforos, etc.
 Agentes desinfectantes: destruyen microorganismos en superficies e

instrumentos, como, por ejemplo: soluciones fenólicas al 3 o 5%, hipocloritos.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Agentes esterelizantes: destruyen toda forma de vida incluidas las esporas.

Por ejemplo: los sistemas de autoclave, calor seco, óxido de etileno.
 Eliminación de residuos peligrosos Todos los materiales contaminados son

agentes potencialmente infecciosos que deben ser descontaminados antes
de su eliminación. Esto implica porciones no utilizadas de las muestras de
los pacientes, cultivos de las muestras cultivos almacenados de
microorganismos e instrumentos descartables, por ejemplo, escalpelos y
jeringas con agujas. Los residuos infecciosos se deben descontaminar
mediante autoclave, incinerador o cualquiera de los diversos métodos
alternativos de tratamiento de residuos.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
LOGRO A MEDIR:
1. Conocer las medidas de bioseguridad necesarias que se debe cumplir en el
laboratorio para disminuir el riesgo biológico.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, de las medidas de barrera
necesarias para trabajar en bioseguridad.
MATERIALES:
 Contenedores de descarte de punzocortante.
 Guantes, gorros, mandilones, lentes
 Autoclave (visita al laboratorio donde está el equipo)
DESARROLLO DE LA PRACTICA:
1. Definición de Bioseguridad.
2. Mencione cinco ejemplos (c/u) de barreras primarias, secundarias y
terciarias.
3. ¿Cuál es la diferencia entre desinfección, descontaminación y
esterilización? (ejemplo de c/u).
4.- Mencione los cuatro niveles de laboratorio de bioseguridad, justifique
porque está clasificado en estos niveles
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN: (Rubrica de Evaluación).
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRÁCTICA N° 2 – SEMANA 1
MICROSCOPIA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
LOGRO A MEDIR:
1. Conocer e identificar correctamente las partes ópticas y mecánicas del
microscopio compuesto.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservación del
microscopio.
MATERIALES:
Microscopios
PARTES DEL MICROSCOPIO:
Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio
PARTE MECANICA:
 Tubo portalentes y cremallera
 Condensador
 Tornillos macro y micrométrico
 Brazo y Pie
 Revolver
 Charnela
PARTE OPTICA:
 Ocular
 Lentes de condensador
 Objetivos
 Diafragma
 Espejo
SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO:

1. Sistema de soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revólver y
la platina.
2. Sistema de Iluminación: comprende el foco, condensador y diafragma.
3. Sistema de Ajuste: comprende el macrométrico, micrométrico y cremallera
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
4. Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10 x , 15 x, y los

objetivos de 4x, 10, 20x, 40, y 100x.
CUESTIONARIO:
1. Cuantos tipos de microscopios hay? ¿Y cuáles son?
2. ¿Esquematiza los tipos de microscopios?
3. Mencione las unidades de medidas de microscopios que existen.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
METODOS DE COLORACIONES: COLORACIONES SIMPLES.
DIFERENCIALES Y ESPECIALES.
INTRODUCCIÓN:
La mayor parte de los colorantes usados en Microbiología son de tres tipos:
A) Aquellos en los cuales el ion portador del color (cromóforo) es el anión
llamados colorantes ácidos Ej. Eosinato de sodio ó Eosina.
B) Aquellos cuyo cromóforo es el catión llamados colorantes básicos Ej. Cloruro
azul de metileno.
C) Los colorantes neutros, compuestos por básicos y ácidos Ej. Hematoxilina
(básico) Eosina (ácido).
En los trabajos bacteriológicos generalmente se usan colorantes básicos como
el azul de metileno, cristal de violeta, fucsina básica, safranina, todos ellos
pertenecen al grupo de los colorantes derivados de la anilina. Las coloraciones
pueden ser según el número de colorantes que utilizan:
A) Simples: cuando se utiliza un solo colorante como el Azul de metileno, Tinta
China, Azul de lactofenol
B) Diferenciales: cuando utilizan más de un colorante como la coloración de
Gram, y Ziehl - Neelsen.
C) Especiales: cuando se usan colorant–s que permiten reconocer ciertas
estructuras celulares como la coloración de Leishman, Vago, Hiss (para
capsula), Wirtz conklin (para espora) ,Albert, etc.
1. REALIZACIÓN DE LA EXTENSLÓN:
 Producto líquido: Depositar en el centro de un portaobjetos una pequeña
cantidad del producto a examinar y extenderlo con la ayuda de un asa de
platino o una pipeta de modo que la extensión sea lo más fina y
homogénea posible. Un producto denso puede ser diluido antes
ligeramente.
 Cultivo en medio sólido: depositar en un portaobjetos una gotita de agua
ó solución salina estéril y disociar en ella una pequeña cantidad de cultivo.
Extender para obtener un frotis fino y homogéneo.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Sangre: hacer un frotis como para un examen hematológico, depositar

sobre el primer tercio de un portaobjetos limpio y desengrasado una
pequeña gotita de sangre. Hacer contactar con la misma un portaobjetos
de bordes esmerilados, que se inclinará 45 °C. La sangre alcanza por
capilaridad todo el borde del portaobjetos que se empujará hacia la parte
libre del primer portaobjetos que contenga la gota de sangre, haciéndolo
de un solo movimiento, sin detener ni volver atrás.
 Órganos: seccionar un pequeño fragmento. Sujetarlo con una pinza, secar
el trozo seccionado sobre un papel secante, haciendo seguidamente con
ésta porción una extensión o una serie de aposiciones, sin apoyar
demasiado, de manera que se obtengan preparaciones finas.
2. SECADO:
Dejar secar por sí solo el frotis. Se puede acelerar la desecación calentando
ligeramente con un mechero Bunsen, pero sin calentar jamás brutalmente.
3. FIJACIÓN: Cuando la extensión esté bien seca, proceder a la fijación. Sólo

algunas coloraciones especiales no deben ir precedidas de una fijación. Él
motivo de la misma es hacer adherir el frotis al portaobjetos y fijar la
morfología de las bacterias, células, por coagulación rápida de las proteínas.
Puede ser por:
 Alcohol flameado: Es la técnica más general. Verter sobre la
preparación algunas gotas de alcohol absoluto. Después de algunos
segundos de contacto, escurrir lo mejor posible e inflamar después el
alcohol restante.
 Por el calor: Aplastar la llama de un mechero Bunsen 2 a 3 veces
contra la parte inferior de la preparación, que sujetaremos con unas
pinzas. Este método debe rechazarse para los productos patológicos
puesto que altera la morfología de los elementos celulares.
 Por el alcohol en frío: Recubrir la preparación con alcohol etílico
absoluto o metílico. Dejar actuar 1 o 2 minutos. Escurrir y dejar secar.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
EXAMEN DE LAS PREPARACIONES TEÑIDAS

Las preparaciones coloreadas se examinan con el objetivo de inmersión (100x)
sin usar cubreobjetos. Depositar sobre el frotis una gota de aceite de inmersión.
Descender primero el objetivo de 10 x, una vez enfocado pasar al lente de 100 x
sumergiéndolo en la gota, comprobar el enfoque microscópico con el tornillo
micrométnco.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
LOGRO A MEDIR:
 Realizar coloraciones: simples, diferenciales y especiales
 Diferenciar que tipos de muestras se utilizan para cada coloración.
 interpretar y evaluar correctamente los resultados obtenidos en las
distintas coloraciones y discernir si la coloración fue bien realizada.
A. COLORACIONES SIMPLES:
Son aquellas coloraciones que utilizan un solo colorante para visualizar la
morfología de los microorganismos.
MATERIAL:
 Muestra con mezcla bacteriana
 Láminas portaobjetos
 Laminillas cubreobjeto
 Asa bacteriológica de Kolle en aro
 Colorante Azul de metileno
 Colorante Tinta China
 Colorante Azul de lactofenol
 Mechero de Bunsen
 Varillas para coloración
 Aceite de cedro
 alcohol isopropilico
 Papel lente
 Microscopio de luz con 18sporangiófoinmersión.
COLORACIÓN AZUL DE METILENO:

1. Preparar un frotis con la mezcla bacteriana y fijar al calor
2. Cubrir el frotis con una gota del colorante y dejar actuar por 3 – 5 minutos
3. Lavar con agua y dejar secar
4. Observar al microscopio con objetivo de inmersión y aceite de cedro
RESULTADO: Los microorganismos se observan de color azul intenso.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
COLORACIÓN DE TINTA CHINA O NEGATIVA:

1. Colocar una gota de tinta china sobre la lámina portaobjetos
2. Agregar una gota de la mezcla bacteriana
3. Cubrir la preparación con una laminilla cubreobjetos
4. Observar con lente de menor y mayor aumento.
RESULTADO: Observar la capsula en los microorganismos sin teñir resaltan
sobre un fondo oscuro. Como la capsula de la levadura Cryptococcus
neoformans
COLORACIÓN AZUL DE LACTOFENOL:

1 Colocar una gota del colorante sobre la lámina portaobjetos
2 Colocar una muestra de un cultivo de hongo sobre el colorante
3 Cubrir con una laminilla cubreobjeto
4 Observar con lente de menor y mayor aumento
RESULTADO: Los microorganismos se observaran en un fondo azul – celeste
PROTOCOLO: Esquematice o dibuje la morfología de los microorganismos
observados
B. COLORACIONES DIFERENCIALES:
Son aquellas coloraciones que utilizan más de un colorante y, generalmente el
segundo colorante es llamado colorante de contraste. Entre los más usados
tenemos la coloración de Gram y la de Ziehl Neelsen o también llamado ácido-
alcohol resistente
COLORACIÓN DE GRAM
Es una coloración diferencial que permite diferenciar a las bacterias en Gram
positivas y Gram negativas, según la estructura y composición de la pared
celular. En las Gram negativas, el peptidoglucano tiene una sola capa y las
cadenas no están entrelazadas; en las Gram positivas la mayoría presenta
muchas capas de peptidoglucano. Existen varias modificaciones del Gram, una
de ellas es la de Kopeloff
MATERIAL:
 Muestra con mezcla de bacterias
 Solución fisiológica al 0.85%
 Asa bacteriológica de Kolle en aro
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Pipetas pauster de plástico

 Set de colorante de Gram, modificado por Kopeloff: Violeta de genciana o
Cristal violeta (colorante primario) Bicarbonato de sodio Lugol (mordiente)
Alcohol- acetona (decolorante) Fucsina básica (colorante de contraste)
 Mechero de Bunsen
 Varillas para coloración
 Microscopio de luz con objetivo de inmersión
 Aceite de cedro
 Alcohol isopropilico
 Papel lente
DESARROLLO DE LA PRACTICA
1. Dividir la lámina en 3 partes: 1/3 para rotular el N° de muestra y 2/3 para la

preparación del frotis
2. Con el asa bacteriológi.ca previamente esterilizada, tomar la muestra y
realizar un frotis en el centro de la lámina portaobjeto, extendiéndola en espiral
del centro a la periferia, para obtener una preparación en capa fina.
3. Fijar la muestra, mediante el secado del frotis a temperatura ambiente, o con
la ayuda de la llama débil del mechero de Bunsen.
4. Colocar la lámina portaobjetos con la preparación sobre la varilla de
coloración.
5. Cubrir el frotis con el colorante Violeta de Genciana, luego agregar 1- 2 gotas
de la solución de bicarbonato de sodio, dejar actuar por 2 minutos.
6. Lavar con agua corriente (evitar la caída del chorro de agua directamente
sobre el frotis)
7. Cubrir con Lugol durante 1- 2 minutos, lavar luego con agua.
8. Decolorar el frotis con una solución de alcohol- acetona (inclinar la lámina y
decolorar hasta que no arrastre colorante) máximo por 10 segundos. Luego
lavar con agua.
9. Cubrir con el colorante de contraste fucsina básica durante 30 segundos.
Luego lavar con agua.
10. Secar a temperatura ambiente o con ayuda de la llama débil del mechero de
Bunsen
11. Observar al microscopio con el objetivo de inmersión.
RESULTADOS:
Las bacterias Gram positivas se colorean de violeta y las bacterias Gram
negativas de color rosado.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
CUESTIONARIO:
1. ¿Por qué Escherichia coli adquiere el color de la Fucsina?¿De qué está
compuesta su pared celular?. Explique brevemente.
2. ¿Por qué Staphylococcus aureus adquiere el color del cristal violeta y
no el de Fucsina? ¿De qué está compuesta su pared celular? Explique
brevemente.
PROTOCOLO:
Esquematice o dibuje lo realizado en prácticas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
COLORACIÓN DIFERENCIAL DE ZIEHL-NEELSEN
INTRODUCCIÓN:
Coloración diferencial que permite la tinción de microorganismos que poseen
elevado contenido de lípidos, como el género Mycobacterium (bacilo
tuberculoso), llamados también ácido-alcohol resistente. Al teñirse los
microorganismos con el colorante primario (fucsina básica fenicada) que es
soluble en sustancias lipoides y aplicando el calor, el colorante es forzado a
penetrar en la célula y en esta forma resistir a la decoloración.
MATERIAL:
 Láminas con frotices de bacilo tuberculoso
 Set de coloración Ziehl-Neelsen: Fucsina fenicada al 5% (colorante
primario) Alcohol ácido (alcohol etílico con 3% de HCl) Azul de metileno
(colorante de contraste)
 Mechero de alcohol
1. Cubrir con fucsina fenicada el frotis realizado en la lámina y calentar la
preparación con el mechero de alcohol hasta apreciar el desprendimiento de
vapores, repetir este procedimiento por tres veces, evitando que hierva el
colorante.
2. Lavar con agua corriente.
3. Decolorar con alcohol ácido hasta que se aprecie una coloración rosada.
4. Lavar con agua corriente
5. Cubrir con colorante de contraste: Azul de metileno por un minuto.
7. Secar y observar con lente de inmersión.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
INSTRUMENTOS DE EVALUACION:
1. ¿Por qué el bacilo de Koch se tiñe con la fucsina fenicada y no con el
azul de metileno? ¿De qué está compuesta su pared celular? Explique
brevemente.
2. ¿Qué otros microorganismos son considerados dentro de la clasificación
de ser BAAR?
RESULTADO Las bacterias ácido alcohol resistentes se tiñen de color rojo y el
no ácido alcohol resistentes se tiñen de color azul.
PROTOCOLO: Esquematice o dibuje lo observado en la práctica.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
COLORACIÓN ESPECIAL
INTRODUCCIÓN:
Son coloraciones especiales que permiten colorear algunas bacterias que no
tienen afinidad con los colorantes de anilina como: las espiroquetas. Así como
también la coloración de microorganismos presentes en la sangre.
COLORACIÓN DE LEISHMAN
Es una coloración especial policromática utilizada para demostrar la presencia y
morfología de microorganismos en sangre y tejidos como: Bartonella, Hongos,
Rickettsias.
MATERIALES:
 Frotis de sangre con Bartonella o bacterias variadas
 Solución de colorante Leishman
 Agua destilada tamponada
 Microscopio con lentes de 100X
 Aceite de inmersión
1. Cubrir el frotis con el colorante y dejar actuar por 5 minutos.
2. Agregar agua destilada tamponada mezclando bien y esperar 15 minutos
3. Lavar con agua de caño y dejar secar
4. Observar con objetivo de inmersión
5. Anotar los resultados en el protocolo.
COLORACIÓN DE VAGO:
Es utilizado para la coloración de gérmenes espirilares y espiroquetas, que no
se colorean por el método de Gram, ni por el Ziehl-Neelsen y que se colorean
muy débilmente con el Leishman.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
MATERIALES:
 Lámina portaobjetos
 Palito mondadientes
 Set de coloración de Vago: Mercurio cromo al 2% y Violeta de genciana
 Asa de siembra en aro
 Microscopio con lentes de 100X
DESARRROLLO DE LA PRÁCTICA:
1. En una lámina colocar una gota de suero fisiológico al o.85%
2. Con el palito mondadientes obtener una muestra de sarro dentario y realizar
un frotis en capa fina extendiendo en sentido espiral de adentro hacia fuera.
3. Fijar el frotis al calor suave
4. Cubrir con Mercurio cromo durante 3 minutos
6. Cubrir el frotis con Violeta de genciana por 3 minutos
8. Secar y observar al microscopio con objetivo de inmersión.
RESULTADOS:
Coloración Leishman: Los microorganismos se tiñen de color rosado oscuro
Coloración de Vago: Observar Treponema phagadeni, espiroqueta que se
encuentra formando parte de la flora normal de la boca, en forma de espiral y
de color violeta- rosado.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
COLORACION HISS (PARA CAPSULA)

1) Preparar un frotis
2) Cubrir con Fucsina básica y calentar hasta el desprendimiento de vapores
por 30 segundos 3) Lavar con solución acuosa de Sulfato de cobre al 20%.
4) Lavar con agua corriente y secar
5) Observar al microscopio con lente de inmersión
RESULTADOS:
Hiss : El cuerpo bacteriano de Bacillus anthracis se observa de color púrpura y
la cápsula de color claro o incoloro.
COLORACION DE WIRTZ CONKLIN ( PARA ESPORAS)
2) Cubrir con verde de malaquita y calentar hasta el desprendimiento de
vapores por 5 minutos (adicionar colorante cada vez que falte) 3) Lavar con
agua corriente
4) Colorear con safranina al 0.5% por 1 minuto 5) Lavar y secar
RESULTADO:
Wirtz Conklin: El cuerpo bacteriano de Bacillus sp. se observa de color rosado
y la espora de color verde.
COLORACION DE ALBERT
Los gránulos metacromáticos conocidos también como de volutina, son
material de reserva de polifosfato, se distribuyen en el citoplasma,
preferentemente en los extremos del bacilo, se tiñen de color azul intenso y el
soma bacteriano se observa muy débilmente.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
1. Realizar el frotis a partir del cultivo y fijar al calor suave.
2. Cubrir con la Solución A de Albert (Azul de toluidina, verde de metilo, ácido
acético, alcohol etílico, agua destilada) por 3 a 5 minutos.
3. Lavar con agua corriente, evitar el lavado directo del frotis.
4. Cubrir con la Solución B de Albert (yodo metálico, yoduro de potasio, agua
destilada) por 1 minuto.
5. Lavar con agua corriente, secar y observar al microscopio, objetivo de 100X
RESULTADO:
En la coloración Albert observar la bacteria Corynebacterium sp. color verde y
los gránulos de color azul oscuro.
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN:
1.- Realice un cuadro sinóptico de las coloraciones especiales estudiadas en
clase
PROTOCOLO:
Esquematice o dibuje lo observado en la práctica.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRACTICA N° 6 – SEMANA 2
MEDIOS DE CULTIVO: SIMPLES, ENRIQUECIDOS, SELECTIVOS Y
DIFERENCIALES,
INTRODUCCION:
Para el aislamiento de bacterias de un material patológico, es necesario su
cultivo en medios especiales con una determinada concentración de iones de
hidrógeno, sales, compuestos nitrogenados, hidratos de carbono, humedad y
temperatura. Según su utilización pueden ser: simples, enriquecidos, selectivos
y diferenciales.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:
De acuerdo a su consistencia
Líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta
razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión
bacteriana de una determinada concentración.
Semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un
agente solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos.
Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias
Sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente
gelificante , el agar. Agar-agar: Es un polímero de azúcares obtenido de algas
marinas. Se trata de una molécula insoluble en agua pero soluble en agua
caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39ºC y no se
funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor
de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos
indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de
un microorganismo. Especialmente útiles para el aislamiento de bacterias y
observación de colonias, contienen de 2 a 3 % de agar
SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
1) Medios Simples: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar

nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al caldo nutritivo. Otros
representantes de este grupo se encuentra el agar el agar triplicase de soja, el
agar Columbia, etc.
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de factores de crecimiento,
indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este
enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos
(sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores.
3) Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen o

permiten que se multipliquen microorganismos que se desea aislar e inhibe
parcialmente a los contaminantes. Ejemplo: es el caldo selenito, que se utiliza
para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de
enterobacterias, caldo Peptonado alcalino en el caso de Vibrio .
4) Medios selectivos: Son medios donde sólo crece un grupo de bacterias
inhibe al mismo tiempo a otros grupos , contiene inhibidores, indicadores de pH
y azucares que ayuda a identificarlo por el metabolismo que de este.Ejemplo:
agar Mac Conkey, agar Salmonella- Shigella(SS), agar Manitol salado.
5) Medios diferenciales o metabólicos: contiene sustancias nutritivas e

indicadores de pH que permite detectar las reacciones bioquímicas específicas,
ayuda a realizar la identificación de género y especie. Ejemplo: agar Triple
azúcar (TSI),agar Úrea, agar Citrato de Simmons.
MATERIALES:
 Tubos con Caldo nutritivo
 Placas con Agar simple o Agar nutritivo
 Caldo peptonado
 Agar Mac conkey
 Agar Sangre
 Agar chocolate
 Agar Manitol salado
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Agar SS
 Agar TCBS
 Agar TSI
 Agar SIM
 Agar Citrato de simons
 Agar Urea
 Agar LIA
 Agar MR VP
Realizar un cuadro indicando:
A. Los medios de cultivo que se vieron en la práctica
B. El color que presentan cada medio de cultivo preparado.
C. Materiales que se usan para la preparación.
D. Indicar cuál es su indicador e inhibidor según sea el caso.
INSTRUMENTO DE EVALUACION:
1.- Realice un cuadro de clasificación de medio de cultivo de acuerdo a su
consistencia y su utilidad, incluyendo dos ejemplos de estos medios.
PROTOCOLO:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
SIEMBRA BACTERIANA. MEDIOS DE AISLAMIENTO.
INTRODUCCION:
Cuando las bacterias se siembran en un medio de cultivo y en condiciones

adecuadas, ocurre un incremento marcado del número de células. Algunas
especies alcanzan una población máxima a las 24 horas y otras necesitan un
período más prolongado para alcanzar su máximo desarrollo.
Los microorganismos que desarrollan en medios de cultivo en el laboratorio, se
denominan cultivos y el resultado de la multiplicación bacteriana colonia, así
como el procedimiento por el cual se pone en contacto un microorganismo con
un medio de cultivo, se llama siembra. Existen varias técnicas de siembra, siendo
las más usadas:
La siembra por estría, por dispersión agotamiento, por inoculación y por puntura.
Las principales características morfológicas que presentan las colonias son:
FORMA : Circular, elíptica, puntiforme y filamentosa.

ELEVACIÓN : Plana, convexa, acuminada, umbilicada.
BORDE : Entera, ondulada, dentada y filamentoso.
SUPERFICIE : Lisa, rugosa, granulada.
TAMAÑO : Diámetro en milímetros.
CONSISTENCIA : Cremosa, membranosa y mucoide.
CROMOGENESIS : Pigmentación verde, amarilla, roja, etc.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
MATERIALES:
 Tubos con suero fisiológico estéril
 Tubos de 16x150 con Caldo nutritivo
 Tubos de 16x150 con Agar nutritivo
 Placas con Agar nutritivo
 Placas con Agar Mac Conkey
 Placas con Agar hipertónico de Chapman
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
A) TIPOS DE SIEMBRA:
 Tubos con Agar Sabouraud
 Tubos de 16x150 con medio Caldo nutritivo
 Agar hipertónico de Chapman
 Agar TSI,LIA,CITRATO,UREA
 Agar Mac conkey
 Asas de siembra en aro y punta
Siembra por estría: Diseminar en forma de zigzag, una pequeña cantidad de
muestra bacteriana sobre la superficie del medio de cultivo sólido con la ayuda
de un Asa de siembra en aro. Ejemplo agar urea, citrato, TSI, LIA
Siembra por dispersión-agotamiento: Sembrar la muestra bacteriana en
zigzag, hasta la mitad de la superficie del medio de cultivo sólido que se
encuentra en una placa Petri, girar ésta unos 45º y continuar sembrando en
zigzag, hasta que se agote toda la muestra del Asa de siembra en aro. Ejemplo
Agar manitol , Agar SS
Siembra por puntura: Sembrar la muestra bacteriana en un tubo con Agar
semi-sólido, con ayuda del Asa de siembra en punta, introduciéndola en forma
vertical hasta la mitad de Agar.
Ejemplo SIM, MIO ,TSI, LIA
Siembra por inoculación: Con ayuda de un Asa en aro, tomar una muestra
bacteriana e introducirlo hasta el fondo del tubo con medio líquido, procurando
no tocar las paredes del tubo. Ejemplo los medios en caldo MR VP,PEPTONA,
NUTRITIVO
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
B) LECTURA:
Con la ayuda del profesor:
1. El alumno procederá a hacer el estudio de lo que ha desarrollado en los
medios de cultivos sembrados.
2. Realizar un protocolo con los resultados obtenidos.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
METABOLISMO BACTERIANO
INTRODUCCION:
La identificación bacteriana inicial puede realizarse mediante la determinación
de las características de las colonias y morfología con tinción de Gram u otras
coloraciones. Sin embargo, la caracterización final de un aislamiento bacteriano
desconocido, para identificarlo a nivel de género y especie se lleva a cabo
estudiando ciertos sistemas enzimáticos que son únicos para cada especie y
sirvan como marcadores de identificación.
En el laboratorio, estos sistemas enzimáticos se detectan inoculando una
pequeña porción de la colonia bacteriana aislada en una serie de medios de
cultivo que contienen substratos específicos e indicadores químicos que
permiten detectar cambios del pH o la presencia de subproductos específicos.
I. ACCION SOBRE LOS CARBOHIDRATOS:

Por definición, la fermentación es un proceso metabólico de oxido- reducción
que ocurre en un medio ambiente anaerobio, y en lugar de oxígeno, un substrato
orgánico sirve como el aceptor final de hidrógeno (electrones). Este término de
fermentación se refiere a la utilización de hidratos de carbono como la glucosa
los cuales les servirán como fuente de energía y carbono.
Las bacterias se diferencian por los hidratos de carbono que utilizan, los tipos y
cantidades de ácidos mixtos producidos, dando como resultado la acidificación
del medio, el cual es visible por el cambio de color en el medio de cultivo de
fermentación (pH- indicador); la presencia de gas (CO2 e H+) se manifiesta por
la presencia de burbujas o rotura del medio sólido.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
A) REACCIONES DE OXIDACIÓN- FERMENTACIÓN DE AZUCARES:

EN MEDIO TSI (Triple Sugar Iron)
EL medio TSI fue diseñado para la diferenciación de Bacilos Gram negativos,
basándose en la capacidad potencial de estas bacterias para fermentar
carbohidratos y producir sulfuro de hidrógeno (H2S).
El medio contiene tres azúcares: glucosa, lactosa y sacarosa en proporciones
de 1:10:10 respectivamente. Para detectar los productos ácidos generados se
emplea un indicador de pH que es el rojo de fenol cuyo rango de viraje está entre
pH 8.4 (rojo) y pH 6.8 (amarillo).
Los patrones de comportamiento de los bacilos Gram negativos ante los
carbohidratos presentes en este medio pueden ser fundamentalmente tres: 1.
Fermentación de glucosa únicamente.
2. Fermentación de glucosa + lactosa, glucosa + sacarosa o glucosa + ambos
carbohidratos.
3. No fermentación de carbohidratos.
Como producto de la fermentación de los diferentes carbohidratos se puede
formar gas, que se detecta como pequeñas burbujas o grietas en el medio o por
desplazamiento del mismo hacia arriba del tubo.
El medio tiene incorporado tiosulfato de sodio como fuente de azufre para
generar H2S, y sales de hierro que al reaccionar con el gas forman un precipitado
negro insoluble de sulfuro ferroso (FeS).
MATERIAL:
Tubo con medio TSI en plano inclinado con Cepas control: E. coli, S. aureus,
Ps. Aeruginosa
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
1. Con el asa de siembra inocule una porción pequeña de la colonia en el centro
del tubo y estríe la superficie del pico de flauta.
2. Rotular e incubar a 37°C por 18- 24 horas.
INTERPRETACION:
Es indispensable que la lectura se haga en el tiempo de incubación indicada.
1. Producto de H2S: ennegrecimiento en el fondo del tubo.
2. Fermentación de la glucosa únicamente: (rojo/amarillo), esto se debe a que la
glucosa (que se encuentra en baja concentración con respecto a los otros
azúcares), ha sido utilizada y la cantidad de ácido producido no es suficiente
para neutralizar los productos alcalinos generados por la utilización de la
peptona; además los ácidos pueden ser utilizados. Estos procesos, que son
oxidativos, ocurren en la superficie del medio, mientras que en el fondo, por no
estar en contacto con el oxígeno, sólo hay fermentación y el medio permanece
ácido.
3. Fermentación doble o triple de carbohidratos:(Amarillo/amarillo).La
fermentación de la glucosa y alguno (o ambos) de los otros dos azúcares
produce gran cantidad de ácidos, por lo que el tubo permanece amarillo.
4. No fermentación de carbohidratos:(rojo/anaranjado). Se presenta únicamente
utilización oxidativa de peptonas, por lo que sólo la superficie del tubo se
alcaliniza.
5. Producción de gas: Formación de burbujas (CO2 e H+), grietas o
desplazamiento del medio.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
B) PRODUCCION DE ACIDOS Y ACETIL- METIL- CARBINOL (Acetoina)

1. PRUEBA DEL ROJO DE METILO ( RM )
La prueba de Rojo de metilo es una prueba cuantitativa que proporciona una
característica valiosa para identificar especies bacterianas que producen ácidos
fuertes (láctico, acético, fórmico) a partir de glucosa. Estas bacterias que
primariamente siguen la vía de fermentación de ácidos mixtos frecuentemente
producen suficiente ácido después de una incubación prolongada, como para
mantener un pH por debajo de 4.4 (el punto ácido límite del indicador rojo de
metilo), superando el sistema amortiguador del pH del medio.
2 PRUEBA DE VOGES PROSKAUER ( VP )

El ácido pirúvico, un compuesto fundamental formado en la degradación
fermentativa de la glucosa, es metabolizado por algunos microorganísmos
produciendo el acetil- metilcarbinol(Acetoina)un subproducto neutro de la vía 2,3-
butilenglicol. La prueba se basa en la conversión del acetil- metil- carbinol en
diacetil a través de la acción del KOH y Oxígeno atmosférico. El diacetilo es
convertido en un complejo rojo bajo la acción catalítica del Alfa naftol y
Creatinina.
MATERIALES:
 Cepa bacteriana MR positivo y negativo
 Cepa bacteriana VP positivo y negativo
 Reactivo Rojo de metilo
 Reactivo de Voges- Proskauer(Alfa naftol al 5% y KOH al 40%)
 Cepas bacterianas E. coli y Klebsiella
PROCEDIMIENTO:
1. Por la técnica de inoculación, sembrar independientemente la cepa
control MR positivo y negativo, en el medio MR- VP. Rotular los tubos e
incubar durante 48- 72 horas a 37°C. 2. Proceder del mismo modo con
las cepas VP controles, incubar por 18- 24 horas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
INTERPRETACION:
1. Para la prueba Rojo de Metilo, añadir al cultivo unas gotas del reactivo del
mismo nombre, cuyo rango de viraje está entre pH 4.4(rojo) y 6.0
(amarillo).
La prueba positiva se manifiesta de color rojo estable y la negativa de
color amarillo- naranja.
2. Para la prueba de Voges- Proskauer, agregar al cultivo 0.6 ml(12 gotas)
de Alfa naftol y 0.2 ml (4 gotas) de KOH. Agitar el tubo por 1 minuto y
dejarlo en reposo durante 15 minutos. Es importante añadir los reactivos
en el orden específico.
Una prueba positiva, color rojo localizado en la mitad superior o en todo
el tubo es observada dentro de los primeros 15 minutos. Si la lectura se
realiza después de una hora los cultivos pueden presentar un color
cobrizo, siendo esta una interpretación falsa positiva. En la prueba
negativa no cambia el color inicial del medio de cultivo.
I. ACCION SOBRE LAS PROTEINAS:

PRODUCCION DEL INDOL:
Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de actuar sobre
el aminoácido triptofano, produciendo indol, un benzil pirrol, á39sporangióico y
amoniaco(NH3). El indol puede detectarse en un medio rico en triptofano,
observando la aparición de un color ro39sporangióa de anillo o impregnado en
la tira de papel), luego de agregar una solución que contiene p-
dimetilaminobenzaldehido
MATERIALES:
 Cepa indol positivo y negativo.
 Medio líquido peptonado y/o Medio SIM
 Reactivo de Kovac(alcohol amilico + HCL concentrado + p- dimetilamino
benzal39sporan.
 Cepas bacterianas E. coli, Salmonella.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PROCEDIMIENTO:
La aparición de un color rojo fucsia brillante en la interfase del reactivo y el caldo,
pocos segundos después de haber agregado el reactivo es indicativo de la
presencia de indol y constituye una prueba positiva. Las bacterias que ha pesar
de desarrollar en el medio, pero que no producen indol, al agregar el reactivo,
este aparecerá sin cambio alguno, siendo esta una prueba negativa.
III. UTILIZACION DEL CITRATO COMO UNICA FUENTE DE CARBONO
Esta prueba se utiliza principalmente para identificar varias especies de la
familia Enterobacteriaceae, las cuales pueden obtener energía por vía distinta
de la fermentación de los carbohidratos, utilizando el citrato de sodio como única
fuente de carbono para su metabolismo y desarrollo, por lo tanto, cualquier medio
que se emplee para determinar esta característica no debe contener proteínas
ni carbohidratos. El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, compuesto
orgánico simple que constituye uno de los metabolitos del ciclo de Krebs.
PRINCIPIO:
La utilización del citrato por una bacteria se detecta por su crecimiento en un
medio con citrato con formación de subproductos alcalinos. El medio (Citrato de
Simmons) incluye citrato de sodio, un anión como única fuente de carbono y
fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno. Las bacterias que pueden
utilizar citrato también pueden extraer nitrógeno de la sal de amonio, con
producción de amonio(NH3), alcalinizando el medio por conversión del NH3 en
hidróxido de amonio(NH4OH), detectándolo con el indicador de pH incorporado
el azul de bromotimol cuyo rango de viraje esta entre pH 6.9(verde) y pH
7.8(azul).
MATERIALES:
 Cepa control citrato positivo y negativo.
 Medio de Citrato de Simmons en plano inclinado
PROCEDIMIENTO:
1. Con el asa de siembra bien esterilizada, sembrar por la técnica de estría en
cada tubo la cepa citarto positiva y negativa.
2. Rotular los tubos e incubar a 37°C por 18- 24 horas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
INTERPRETACION:
Prueba positiva: Color azul en 24 a 48 horas y crecimiento en la superficie del
medio inclinado. Prueba negativa: No hay cambio de color ni crecimiento.
IV. HIDRÓLISIS DE LA UREA (PRUEBA DE LA UREASA)
Prueba importante para la identificación de especies bacterianas que poseen la
enzima ureasa que hidroliza la urea, según el siguiente esquema:
El amoniaco reacciona en la solución para dar carbonato de amonio,

produciéndose una alcalinización y un aumento del pH del medio que lleva como
indicador el rojo neutro.
MATERIALES:
 Cepa patrón ureasa positiva y negativa ( E. coli, Proteus )
 Medio Agar urea según Christensen
PROCEDIMIENTO:
1. Por medio de la siembra por estría, sembrar la cepa positiva y negativa. No
inocular en el fondo. 2. Incubar durante 18- 24 horas a 37°C
INTERPRETACION:
Prueba positiva: se observa de color rosado en la superficie o en todo el medio.
Prueba negativa: El medio permanece del color original.
V. PRUEBA DE LA CATALASA:
La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias y
facultativas anaerobias. El peróxido de hidrógeno (H2O2) es uno de los
productos finales del metabolismo oxidativo de los carbohidratos y sí se acumula
es letal para el microorganismo. La catalasa convierte el peróxido de hidrógeno
en agua y oxígeno de acuerdo a la siguiente reacción:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
La prueba es de vital importancia en la diferenciación de los estreptococos

(catalasa negativa) de los estafilococos (catalasa positiva).
MATERIALES:
 Cepas Control: S. aureus, Streptococcus ó Enterococcus
 Solución de Peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%
 Medio de cultivo: cualquier medio sólido, no inhibitorio, y sin sangre ya
que los eritrocitos poseen actividad de catalasa, por lo que su presencia
puede dar resultados falsos positivos.
PRUEBA EN LÁMINA:
a) Con el asa bacteriológica en punta o un aplicador estéril, picar el centro de
una colonia bien aislada y transferir él inoculo a un portaobjetos limpio.
b) Añadir 1 a 2 gotas de H2O2 al 3%
c) Observar si se forman burbujas o no inmediatamente después que se añade
el reactivo.
d) Descartar la lámina en un recipiente con desinfectante.
PRECAUCIONES:
1. El orden de la prueba en lámina no debe invertirse cuando se use asa de
platino, ya que puede resultar falso positivo. El alambre de nicrome no interfiere
en el resultado de la prueba.
2. La prueba debe realizarse en cultivos de 18- 24 horas; cultivos más viejos
pueden perder su actividad de catalasa dando una reacción falsa negativa.
3. El H2O2 es extremadamente acústico, por lo que se debe evitar que toque la
piel, en caso que ocurra inundar el área afectada con alcohol de 70% para
neutralizar la acción. NO DEBE USARSE AGUA.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
INTERPRETACION:
Prueba cualitativa: La aparición rápida y prolongada de burbujas, de gas o
efervescencia son indicativas de catalasa positiva. Algunas bacterias poseen
enzimas diferentes a la catalasa que descomponen el H2O2, dando pocas
burbujas diminutas durante 20- 30’, éstas no son catalasa positivas.
VI. PRUEBA DE LA CITOCROMO – OXIDASA
Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro y actúan como el último
eslabón de la cadena respiratoria aerobia, transfiriendo electrones (H) al oxígeno
con formación de agua. El sistema citocromo se encuentra en los organismos
aerobios o anaerobios facultativos, permitiendo identificar a organismos que
carecen de la enzima o son anaerobios estrictos. En el laboratorio se hace
reaccionar la bacteria con un sustrato oxidable como el dimetil o tetrametil- p-
fenilendiamina ( el cual se presenta en solución, discos o tiras llamados
comúnmente oxidasa).
MATERIAL:
 Cepa control: sembrada en Agar nutritivo
 Reactivo de oxidasa
PROCEDIMIENTO:
1. Directo: Se añaden a las placas sobre la bacteria dos o tres gotas del reactivo.
2. Indirecto: Se toma con el asa un poco de la colonia bacteriana y se extiende
sobre los discos o tiras de papel que tienen ya el reactivo de oxidasa
INTERPRETACIÓN Las colonias bacterianas con actividad Citocromo oxidasa
desarrollan inmediatamente un intenso color azul oscuro.
AGAR LIA (Agar Lisina Hierro)

Principio: Determina la capacidad de un microorganismo para utilizar el
aminoácido Lisina descarboxilándolo o desaminándolo, la fermentación de la
glucosa, la producción o no de gases (CO2), junto con la producción o no de
ácido sulfhídrico (H2S).
Lectura: Se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación. Se lee la reacción
producida en la superficie (parte aerobia) y en la profundidad (parte anaerobia)
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
del medio. El indicador de pH del medio es purpura de bromocresol, el cual en

acidez vira al color amarillo y en alcalinidad al color purpura. Por contener una
pequeña cantidad de glucosa (1g/L) al ser fermentada el fondo del tubo es
amarillo y la superficie alcalina
Interpretación: en este medio se leen las siguientes reacciones bioquímicas:
a) Fermentación de la glucosa: la bacteria no utiliza el aminoácido sólo fermenta
la glucosa: superficie purpura/fondo amarillo.
b) Descarboxilación de la lisina: Positivo (purpura todo el medio), Negativo
(superficie violeta/fondo amarillo).
c) Desaminación de la lisina: superficie roja/fondo amarillo.
d) Producción de gas: ruptura del medio.
e) Producción de H2S: ennegrecimiento del medio.
VII. PRUEBA DE LA HEMOLISINA:
Algunos microorganismos son capaces de producir una serie de enzimas y
sustancias tóxicas que pueden ser detectadas al sembrar el microorganismo en
una placa de Agar sangre, produciendo la lisis de los eritrocitos, según el tipo de
lisis que producen pueden clasificarse en tipo Alfa, Beta y Gamma.
MATERIALES:
 Cepa bacteriana
 Placas con Agar sangre de carnero
PROCEDIMIENTO:
1. Con el asa en aro sembrar la cepa bacteriana en la placa de Agar sangre
2. Incubar por 18 – 24 horas a 37° C
INTERPRETACIÓN:
Hemólisis tipo Alfa: Es un tipo de hemólisis incompleta, hay un enverdecimiento
del medio debido a la salida de un derivado del tipo de la metahemoglobina, que
es oxidado a compuestos del tipo de la biliverdina
Hemólisis tipo Beta: Hay una lisis completa de los eritrocitos observándose una
zona clara alrededor de la colonia
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
VIII. PROTOCOLO:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIBIOTICOS (ANTIBIOGRAMA)
INTRODUCCION:
Es una prueba de laboratorio clínico que se utiliza para medir la actividad
antibacteriana de los antibióticos y quimioterapéuticos empleados en el
tratamiento de las enfermedades infecciosas. La medida de la actividad
antibacteriana puede realizarse por los siguientes métodos:
 Método de dilución
 Método de Difusión en Agar
LOGRO A MEDIR:
1. Realizar la técnica de difusión en Agar simple para determinar la
susceptibilidad a los antibióticos.
2. Interpretar los resultados del método utilizado.
3. Precisar las indicaciones y limitaciones de la técnica empleada.
DILUCION EN TUBO:
Permite estimar cuantitativamente la susceptibilidad de un antibiótico, midiendo
la concentración inhibitoria mínima (CIM), es decir, la concentración más baja
que inhibe el crecimiento “in vitro” bacteriano.
Consiste en la preparación de una serie de diluciones del antibiótico estudiado
en caldo o en medio agar al cual se inocula luego una suspensión del germen.
Luego de una incubación por 24 horas, se puede observar la CIM como la
dilución más alta en la que no existe crecimiento macroscópico bacteriano. Esta
técnica es costosa por la cantidad de material que se utiliza.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
DIFUSION EN AGAR (Según Kirby- Bauer y col.):

Es un método simple de rutina en Microbiología médica, para seleccionar el
antibiótico o quimioterápicos más adecuado en la terapia de las enfermedades
infecciosas. Consiste en sembrar la muestra en estudio sobre toda la superficie
de una placa de Agar y colocar luego discos de papel filtro que contienen los
antibióticos y que después de una incubación de 24 horas, se observan las zonas
de inhibición alrededor de cada disco de antibiótico. La cantidad de antibiótico
presente en el disco difiere para los distintos fármacos.
MATERIALES:
 Placas de Agar Müller Hilton o Tripticase soya
 Tubos con caldo nutritivo
 Tubos con Agar semisólido
 Tubos con cultivo bacteriano
 Asas de siembra
 Discos impregnados con diferentes antibióticos o quimioterápicos
(sensi- disck).
 Pinzas
 Mecheros
 Tubo de McFarland (0.5)
 Espectrofotómetro
* Para la preparación del inóculo o caldo bacteriano se toma de 3 -5 colonias y
se siembra en 4 o 5 ml de caldo triplicase de soya, se incuba a 35°C por a 2
horas luego se mide turbidez para que sea igual al estándar de McFarland(0.5)
o hacer la medición con un espectrofotómetro
1. Sumergir la torunda en el caldo bacteriano, escurrir en las paredes del tubo y
sembrar uniformemente sobre la superficie de la placa de Agar.
2. Dejar reposar por 5 minutos a temperatura ambiente.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
3. Con la pinza en condiciones estériles, colocar los discos impregnados con los
diferentes antimicrobianos sobre la superficie del Agar. La distancia entre los
discos debe ser de 20mm. 4. Incubar a 37°C durante 24 horas.
LECTURA:
a) Medir en milímetros el diámetro de las zonas de inhibición del desarrollo
bacteriano alrededor de los discos, incluyendo el diámetro del disco.
b) Comparar con la tabla el diámetro de las zonas de inhibición obtenidas y
determinar si el microorganismo es Resistente (R), intermedio (I), o
sensible (S) a los diferentes antimicrobianos utilizados. Un resultado
intermedio (I) indica que el aislado es menos susceptible de lo normal,
pero puede responder a dosis altas del antibiótico.
c) La cantidad de antibiótico presente en el disco depende de la
concentración y de su capacidad de difusión en el Agar.
d) Anotar e interpretar los resultados.
PROTOCOLO:
 Desarrollar y esquematizar un cuadro indicando los resultados que se
han obtenido en la práctica desarrollada
 Desarrollar y esquematizar un cuadro indicando los resultados que se
han obtenido en la práctica desarrollada
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRACTICA Nº 10 – SEMANA 4
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS:

GENERO STAPHYLOCOCCUS
INTRODUCCION:
Los Estafilococos pertenecen a la Familia Micrococcaceae y son

organismos redondos u ovales, agrupados generalmente en forma de
racimos, inmóviles, no esporulados, y Grampositivos en los cultivos
jóvenes. Son habitantes naturales de la flora nasal, boca, piel e intestinos,
pero como patógeno es causante de diversos procesos infecciosos que
van desde forúnculos, abscesos, intoxicaciones alimentarias hasta
septicemias mortales. De las tres especies conocidas S. aureus, S.
epidermidis y S. saprophyticus, sólo dos tienen importancia médica. Sólo
la especie patógena S. aureus produce una enzima llamada coagulasa.
MATERIALES:
 Placas Petri con Agar hipertónico de Chapman (MH) o Manitol
salado
 Placas Petri con Agar sangre (AS)
 Tubos con Caldo plasma
 Set de colorantes para Gram
 Asa de platino en aro
 Reactivo Catalasa
1. Estudiar la bacteria sembrada en las placas con Agar hipertónico de

Chapman y Agar sangre, por el método de dispersión-agotamiento y con
24- 48 horas de incubación a 37°C
2. Realizar un frotis de las placas sembradas y colorearlas con Gram.
3. Observar placas sembradas con las diferentes especies de
Staphylococcus, estudiando las características de las colonias en medios
de Agar sangre y Agar Hipertónico de Chapman (tamaño, forma,
pigmento, hemolisis, etc.)
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
4. De la placa con Agar sangre y Agar Hipertónico de Chapman, tomar

una asada de una colonia de color amarillo e inocularlo el tubo con caldo
plasma e incubar a 37ºC (Prueba de la coagulasa)
5. Realizar la prueba de la Catalasa.
6. Agar hipertonico de Chapman o manitol salado contiene:
51sporangiófruro de sodio al 6.5% y como indicador de pH el rojo de fenol
7. Sembrar las especies en una placa Petri con disco de novoviacina
RESULTADOS:
1. Características macroscópicas de la muestra:

2. Resultado de la coloración realizada
3. Resultado de la reacción de la Coagulasa, en caldo plasma observar
que sólo S. aureus coagula el plasma.
4. Resultado de la reacción de Catalasa, agregando agua oxigenada y
observando la aparición de burbujas en las tres especies.
5. Resultado en Agar hipertónico de Chapman observar las colonias
amarilla (manita positivas) de S. aureus y S. saprofiticus; y color rosado
(manita negativa) en S .epidermidis.
6. Observar la presencia de hemólisis en las placas con Agar sangre
7. La novoviacina permite diferenciar S. epidermidis de S. saprofiticus.; S.
epidermidis es sensible y S. saprofiticus resistente.
PROTOCOLO:
 Realizar un protocolo de trabajo indicando: la especie bacteriana

que se trabajo, tamaño de la colonia, forma que presenta,
pigmento, hemólisis, y otras características que crea conveniente.
 Complete el cuadro con lo realizado durante la práctica.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS:
GENERO STREPTOCOCCUS
INTRODUCCION:
El género Streptococcus comprende muchas especies agrupadas según

la clasificación de Lancefield en los grupos A (S. pyogenes); B (S.
agalactiae); C (Ej. S. equi); D (Ej. Enterococos); G (S. canis); H (S.
sanguis); K (S. salivarius) y Streptococcus pneumoniae (no pertenece a
ningún grupo). Con la coloración de Gram se comportan como positivos
adoptando formas de cadenas. Algunos son patógenos para el hombre y
los animales, otros forman parte de la flora normal o transitoria del cuerpo
humano y otros son saprofitos.
Los Streptococcus desarrollan en medios enriquecidos como el Agar

sangre, que permite diferenciar algunas especies en base a la hemólisis
producida. La hemolisis tipo es incompleta, los glóbulos rojos que rodean
a la colonia son parcialmente dañados pero no lisados como sucede en la
hemolisis tipo . Existe un reverdecimiento del medio debido a la salida del
eritrocito de un derivado del tipo de la metahemoglobina, que es oxidado
a compuestos como la biliverdina. El grupo de estreptococos alfa
hemolíticos se denominan S. viridans. La mayoría de Streptococcus
pueden desarrollar en presencia o ausencia de oxígeno. Diversas pruebas
bioquímicas permiten la diferenciación de las especies de Streptococcus.
MATERIAL:
 Cultivo de Streptococcus en medio de caldo BHI
 Placas con Agar sangre de carnero
 Torunda estéril y bajalengua
 Tubos con Thioglicolato
 Tubos con caldo Inulina
 Discos de Bacitracina
 Discos de Optochin
 Solución de Desoxicolato al 2%
 Tubo con ClNa al 6.5%
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Set de colorantes de Gram- Kopeloff

 Asas de Kolle, pinzas
 Microscopio, aceite de inmersión.
PROCEDIMIENTO:
1. Observar el desarrollo de Streptococcus en el medio de caldo BHI, si el

crecimiento produce turbidez o sedimento.
2. Observar el desarrollo de la bacteria en Agar sangre, sembrado por el
método de dispersión y agotamiento e incubado a 37°C por 18- 24 horas.
Realizar un frotis en la lámina portaobjetos y colorear por Gram.
3. Estudiar el comportamiento de las especies de Streptococcus, frente a
la Bacitracina y el disco de Optochin,
4. Sembrar las cepas bacterianas en el medio de Thioglicolato.
5. Sembrar la cepa en el caldo de Inulina.
6. Sembrar la cepa en el tubo con ClNa al 6.5%
7. Realizar la prueba de la catalasa
8. Realizar la prueba de Desoxicolato de sodio, permite observar la
capacidad de ciertas bacterias de lisarse en presencia de sales biliares
LECTURA:
1. En Agar sangre, S. pyogenes y S. agalactiae son beta- hemolíticos; S.
viridans y S. pneumoniae son alfa- hemolíticos. Realizar el frotis de las
colonias y colorear por Gram.
2. Respecto a la sensibilidad a la Bacitracina y Optochina: S. pyogenes
es sensible a la Bacitracina y S pneumoniae es sensible a la Optochina
3. Agregar una gota del Desoxicolato de sodio al 2% sobre una o varias
colonias en la placa de Agar sangre e incubar a 35°C durante 30 minutos.
En una reacción positiva se observa que las colonias son lisadas
(desaparecen)
4. Observar que solo S. pneumoniae metaboliza la Inulina.
5. Observar El desarrollo en el medio de Thioglicolato. Este medio es
usado para determinar el efecto del O2 sobre las bacterias (Aerobio,
Anaerobio, Facultativo), contiene Agar 0.075% y ácido tioglicolato que
actúa como agente reductor disminuyendo aun más el potencial de oxido-
reducción del medio.
6. En la solución de ClNa al 6.5% , observar que sólo desarrolla
Enterococo (Grupo D)
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
7. Todas las especies del género Estreptococo son catalasa negativa

PROTOCOLO
 Realizar un protocolo de trabajo de la práctica realizada
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE COCOS GRAM NEGATIVOS:

GENERO NEISSERIA
INTRODUCCION:
Las Neisserias son cocos Gram negativos, que se presentan

característicamente en pares, con los lados adyacentes aplanados,
simulando “granos de café”. Comprende varias especies, entre éstas N.
gonorrhoeae, y N. meningitidis, causan frecuentemente enfermedad
significativa en el hombre. En muestras clínicas del tracto urogenital u
otras, se tiñen adicionalmente con el colorante azul de metileno,
observándose las Neisseria intra y extracelularmente.
Estos microorganismos son exigentes y requieren medios enriquecidos

como el Agar chocolate, que le proporciona una rica fuente de hierro y el
Agar Thayer Martin.
La mayoría de las especies requieren para el crecimiento una humedad
relativamente alta y una tensión de CO2 entre 5 a 10%. Desarrollan a
temperaturas exactas entre 35 a 37°C y un pH de 7.2 a 7.6.
Todas las especies producen catalasa y Citocromo- oxidasa, que

permiten diferenciarlos de otros microorganismos morfológicamente
similares.
La diferenciación bioquímica se realiza por pruebas de utilización de
hidratos de carbono: Glucosa, maltosa, sacarosa y lactosa.
El diagnóstico de gonorrea requiere una estrecha cooperación entre el

médico y el laboratorio. Se debe considerar los siguientes aspectos:
a) Recolección correcta de la muestra.
b) Selección del recipiente apropiado para el transporte y rápido envío al
laboratorio.
c) Selección del medio de cultivo apropiado
d) Aislamiento e identificación de la bacteria en el laboratorio.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
MATERIALES:
 Placa con Agar Thayer Martin sembrada con Neisseria
 Placa con Agar chocolate sembrada con Neisseria
 Lámina control con frotis de Neisseria coloreada con Gram
 Reactivo de Citocromo- oxidasa
 Reactivo de catalasa
 Set de coloración de Gram
 Colorante de Azul de metileno
 Microscopio
 Asas de siembra en aro y punta
 Solución de alcohol yodado
 Algodón y alcohol isopropilico
1. Ob57sporangiófo medio de Thayer Martin y Agar chocolate, las

colonias pequeñas, circulares de bordes continuos, blanco- grisáceos,
convexas, brillantes o ligeramente opacas si corresponden a N.
gonorrhoeae y si es N. meningitidis colonias pequeñas de borde entero,
circulares, translúcidas o ligeramente opacas.
2. Dejar caer una gota del reactivo de oxidasa sobre una colonia y
observar entre los 2- 3 minutos el cambio de color del rosado al marrón o
negro, que corresponde a una prueba de oxidasa positiva.
3. Realizar un frotis de la colonia oxidasa positiva y colorearla por el Gram.
Comparar con la lámina control.
4. Realizar un frotis de la muestra clínica de secreción endocervical y
colorearla con el azul de metileno.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PROTOCOLO:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM POSITIVOS:

GENERO BACILLUS
INTRODUCCION:
El género Bacillus agrupa microorganismos aerobios Grampositivos,

formadores de esporas y que pueden sobrevivir en el ambiente por
muchos años. Algunas especies causan enfermedades en el hombre y los
animales como el B. anthracis causante de la enfermedad conocida como
"carbunco", otros como el B. cereus, B. subtilis, “. megate”ium y B.
mycoides son saprofitas y se encuentran en el suelo, agua y aire.
La especie patógena B. anthracis, causante del carbunco en los procesos
patológicos se presenta como un bacilo rectilíneo, Gram positivo, grueso,
inmóvil y capsulado. En los cultivos, las colonias son grandes, mates,
rugosas con bordes festoneados (aspecto de cabeza de medusa), se
agrupan en largas cadenas, sin cápsula y conforme el cultivo envejece
forman esporas.
MATERIALES:
 Placas Petri con Agar nutritivo
 Placas Petri con Agar sangre
 Tubos con Agar semisólido
 Tubos con gelatina
 Láminas para frotices
 Set de coloración de Hiss para cápsula
 Set de coloración de Wirtz Conklin para esporas
 Asa de Kolle
1. Sembrar la muestra en placas de Agar sangre, Agar nutritivo, caldo

nutritivo y gelatina.
2. Preparar frotices para colorear con Gram, Hiss, y Wirtz Conklin.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
COLORACION HISS (PARA CAPSULA):
2) Cubrir con Fucsina básica y calentar hasta el desprendimiento de
vapores por 30 segundos
3) Lavar con solución acuosa de Sulfato de cobre al 20%.
4) Lavar con agua corriente y secar
COLORACION DE WIRTZ CONKLIN ( PARA ESPORAS):
2) Cubrir con verde de malaquita y calentar hasta el desprendimiento de
vapores por 5 minutos (adicionar colorante cada vez que falte)
3) Lavar con agua corriente
4) Colorear con safranina al 0.5% por 1 minuto 5) Lavar y secar
LECTURA:
EN LOS CULTIVOS:
En Agar sangre: Las colonias se observan blanco grisáceo, no hemolítica
en las especies patógenas y ß- hemolíticas en las especies saprofitas. En
Agar nutritivo: Se observan bacilos endoesporulados
En caldo nutritivo: Se observa un sedimento en el fondo del tubo.
En Agar semisólido: Se observa un crecimiento en forma de pino invertido
En Gelatina: sólo las especies saprofitas producen hidrólisis.
EN LAS LÁMINAS COLOREADAS:

Gram : Bacilos Grampositivos dispuestos en cadenas, las esporas
generalmente se ubican en el centro del bacilo.
Hiss : El cuerpo bacteriano se observa de color púrpura y la cápsula de
color claro o incoloro.
Wirtz Conklin: El cuerpo bacteriano se observa de color rosado y la espora
de color verde.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
RESULTADOS:
A) DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM

POSITIVOS: GENERO LISTERIA
INTRODUCCION:
El género Listeria comprende bacilos Grampositivos, microaerófilos,

no esporulados, móviles y presentan flagelos peritricos. Se presentan
aislados o en grupos de dos en cadena o en forma de V ó de Y. Esta
ampliamente distribuido en la naturaleza, en los vegetales en
descomposición, en el suelo, en las heces de los portadores sanos
animales y hombres. La especie patógena es Listeria monocytogenes
y la enfermedad que causa se le conoce como Listeriosis, la cual
compromete los ganglios linfáticos, produce síntomas neurológicos,
encefalitis aguda y monocitosis en sangre.
El microorganismo se puede aislar de la sangre, líquido
cefalorraquídeo y de las heces, desarrolla bien en medios de cultivo
comunes.
MATERIAL:
 Tubos con medios semisólidos (Motilidad)
 Placas Petri con Agar sangre
 Placas Petri con Agar nutritivo
 Tubos de 13x100 con:
 Agar urea de Christensen
 Citrato de Simmons
 Caldo rojo de fenol con glucosa
 Caldo rojo de fenol con sacarosa
 Caldo rojo de fenol con lactosa
 Caldo rojo de fenol con manita
 Caldo rojo de fenol con salicina
 Caldo esculina
 Caldo: MR- VP
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
1. Hacer frotices a partir de una colonia sembrada en Agar nutritivo y

colorearla con Gram.
2. Preparar una lámina en fresco a partir del tubo con caldo nutritivo
sembrado, entre lámina y laminilla.
3. Sembrar en el Tubo con medio semisólido, placas de Agar sangre,
Agar nutritivo, y en los diferentes medios diferenciales
4. Dejar en incubación por 24 a 48 horas a 37ºC.
LECTURA:
 FROTICES CON GRAM : Se observaran como bacilos
Grampositivos.
 LAMINAS EN FRESCO : Se observará la movilidad peritrica,
utilizando los objetivos de 40 aumentos.
 EN CALDO NUTRITIVO: Se observará una turbidez tenue y
homogénea.
 EN AGAR SANGRE : Se observará colonias pequeñas con
hemólisis tipo Beta.
 EN MEDIOS DIFERENCIALES : Observar
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
"ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE LA FLORA NORMAL DE LA

S”CRECION BUCOFARINGEA”
INTRODUCCION:
La flora normal se adquiere con rapidez durante y poco después del nacimiento,
y cambia de forma continua a lo largo de la vida. Los organismos presentes en
un determinado momento dependen de la edad, nutrición y medio ambiente del
individuo, por lo que es difícil determinar la flora normal de cada individuo ya que
depende en gran parte de los factores antes enunciados; ejemplo, los lactantes
alimentados con leche materna tienen Estreptococos y Lactobacilos en su tracto
gastrointestinal, en los pacientes que están recibiendo grandes dosis de
antibióticos presentan un gran desarrollo de levaduras.
La nariz y la boca pueden ser intensamente colonizados por bacterias como
Estreptococos, Estafilococos, difteroides, y cocos Gram negativos.
La superficie de los dientes y los surcos gingivales contienen un gran número
de bacterias anaerobias.
La rinofaringe está habitada generalmente por estreptococos no hemolíticos y
diplococos Gram negativos, en ella puede poblarse un gran número de especies
patógenas como Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, S.
pyogenes, Klebsiella pneumoniae y Haemophilus influenzae.
MATERIALES:
 Caldo nutritivo en tubos (13 x 100)
 Agar nutritivo en placas
 Agar sangre en placas
 Agar chocolate en placas
 Medio hipertónico de Chapman en placas
 Agar Mac Conkey en placas
 Agar Sabouraud en tubos
 Torundas estériles (2 x tubo)
 Baja lengua
 Asa de Kolle en aro
 Laminas portaobjetos
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Set de colorante
 Gram Varillas para coloración.
A. PRIMER DIA:
1. Con ayuda de torundas estériles y la baja lengua, tomar una muestra de la
orofaringe.
2. Sembrar las muestras, en los diferentes medios de cultivo.
3. Incubar las placas y tubos sembrados por 24 a 48 horas a 37ºC
B. SEGUNDO DIA:
LECTURA:
Con la ayuda del Profesor, el alumno procederá a hacer el estudio de lo que
ha desarrollado en los medios de cultivos.
IDENTIFICACION:
Sembrar en los diferentes medios de cultivo para el estudio bioquímico
correspondiente y pruebas de patogenicidad si se requiere.
 Caldo plasma en tubo
 Disco de Bacitracina
 Disco de Optochin
 Reactivo de Citocromo
 oxidasa
 Reactivo de catalasa
PROTOCOLO:
El alumno realizará un cuadro estadístico con los resultados obtenidos.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACCION DE BACILOS ACIDO- ALCOHOL-
RESISTENTES
GENERO MYCOBACTERIUM.
INTRODUCCION:
Este género está conformado por microorganismos que se caracterizan por tener
morfología bacilar, poseen un alto contenido de lípidos complejos en su
estructura química y se desarrollan lentamente en los medios de cultivo frente a
los cuales son exigentes con los componentes nutritivos.
Existen especies patógenas para el hombre y los animales, así como especies
saprofitas en el aire, en el agua y en la tierra.
Las especies patógenas para el ser humano son: Mycobacterium tuberculosis
variedad hominis, que puede infectar cualquier lugar del organismo, siendo la
localización pulmonar, renal y digestiva los más frecuentes y el esputo es el
espécimen clínico más común para establecer el diagnóstico específico a través
de la baciloscopia.
Mycobacterium leprae produce la lepra ó enfermedad de Hansen;
Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium, Mycobacterium kansasi y
Mycobacterium simiae, con menor frecuencia, también, son patógenos.
PRUEBAS DIAGNÓSTICAS:
 Examen directo: BACILOSCOPIA
 Cultivo convencional: OGAWA o LJ
 Pruebas de sensibilidad convencionales:
Método de proporciones se 1era línea
Método de Proporciones en placa de 2da Línea (APP)
 Pruebas de sensibilidad rápidas:
GENOTÍPICAS:
Sondas de ADN (Genexpert MDRplus): Se evalúa las drogas Isoniacida
y Rifampicina
GeneXpert: Se evalúa la droga Rifampicina
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
FENOTIPICAS
MODS: Se evalúa las drogas Isoniacida y Rifampicina
MATERIALES:
 Un frasco de boca ancha con muestra de esputo positivo
 Láminas portaobjetos nuevas y desengrasadas
 Láminas con extensiones de M. tuberculosis var. Hominis
 Láminas con extensión de otros tipos de Micobacterias
 Set de colorante de Ziehl- Neelsen ( B.A. A. R.)
 Cepas patrones sembradas en medio Lowenstein Jensen o Ogawa
1. Observar los caracteres macroscópicos del esputo: sangre, mucoide,
mucopurulento.
2. Tomar una partícula mucopurulenta del esputo y hacer una extensión
homogénea sobre la lámina portaobjetos nueva.
3. Fijar la preparación.
4. Realizar una coloración con Gram y otra con Ziehl- Neelsen
El mismo procedimiento se sigue con muestras de orina, heces, líquido
cefalorraquídeo, líquido pleural, etc.
LECTURA:
Observar como los gérmenes visibles por el Gram, no aparecen en la coloración
de Ziehl- Neelsen porque no son ácidos alcohol resistente.
El bacilo de Koch y los otros Mycobacterium en cambio aparecen como
elementos bacilares rojos en un fondo azul.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
EXAMEN MICROSCOPICO CUANTITATIVO

BACILOSCOPIA:
Enfocar con el objetivo de 100x la lámina referencial, cuantificar la cantidad de
bacilos en toda la longitud de los 2/3 del extendido que corresponde
aproximadamente a 100 campos y anotar los resultados, según el siguiente
cuadro:
Negativo : No se observan bacilos en 100 campos.
De 1 a 9 BAAR promedio en 100 campos
Positivo (+) : Menor de 1 bacilo promedio por campo, en 100 campos.
Positivo (++) : De 1 a 10 bacilos promedio por campo, en 50 campos.
Positivo (+++) : Más de 10 bacilos promedio por campo, en 25 campos.
La lectura cuantitativa permite controlar la evolución del paciente que está en
tratamiento y permite detectar aquellos que sean resistentes al tratamiento.
TIPIFICACIÓN DE MICOBACTERIAS:
Se investiga la velocidad de desarrollo y la producción de pigmento, permitiendo
clasificarlos en grupos.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PROTOCOLO DE TRABAJO:
Realizar esquemas de lo realizado y observado en la práctica correspondiente
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM POSITIVOS:
GENERO CORYNEBACTERIUM
INTRODUCCION:
El género Corynebacterium comprende un grupo heterogéneo de bacterias en
el cual se incluyen especies comensales y patógenos a animales, plantas y
bacterias de suelo.
Las características comunes del género son:
1) Bacilos pleomórficos Grampositivos, No forman esporas
2) Las células se dividen abruptamente (efecto de resorte), de donde resulta su
disposición en “letras chinas”,
3) Aerobios o anaerobios facultativos,
4) Catalasa positivos,
5) Citocromo oxidasa negativo.
La especie tipo es Corynebacterium diphtheriae que causa la difteria, infección
aguda, contagiosa y febril, caracterizada por inflamación local y formación de
una seudomembrana en la orofaringe, además del daño al corazón y nervios
periféricos por acción de una exotoxina (toxina difterica). Es propagada por
portadores sanos y co70sporangites, su puerta de entrada es las vías
respiratorias superiores.
El género se divide en tres grupos:
Grupo I : Corinebacterias parásitas y patógenas para el hombre y animales;
Grupo II : Corinebacterias fitopatógenas, y;
Grupo III : Corinebacterias no patógenas.
Algunas de las especies más frecuentemente halladas en el laboratorio clínico
son: C.diphtheriae, C.pyogenes, C.ulcerus, C.haemolyticus, C.xerosis, C.renale,
C.equi, C.ovis, C.bovis, C.ovis y C.hoffmannii (pseudodiphthericum).
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
La muestra debe ser tomada con un hisopo, se debe frotar enérgicamente sobre
cualquier lesión inflamatoria, además del hisopado de garganta, se requieren
muestras de nasofaringe, y enviar inmediatamente al laboratorio o inocular
directamente en el medio suero de Loeffer o Agar telurito.
MATERIAL:
 Cepa de Corynebacterium diphtheriae en caldo enriquecido
 Placa con Agar sangre
 Placa con Agar chocolate telurito de potasio
 Tubo de 13x100 con medio Pai en plano inclinado
 Set de colorante de Gram
 Set de colorante de Albert
 Tubos con Agar Urea Christensen en plano inclinado
 Caldo Rojo de fenol + Glucosa
 Caldo Rojo de fenol + Maltosa
 Asas de siembra
 Microscopio
1. Tomar el inóculo de la cepa de C.diphtheriae y realizar la siembra por el
método de dispersión agotamiento en las placas de Agar sangre y Agar
chocolate, y en el medio Pai por estrías. Incubar por 48 horas a 37°C.
2. Realizar el frotis del cultivo en caldo enriquecido y colorear por Gram.
3. Realizar el frotis del cultivo y colorear por el método de Albert.
4. Bioquímica: Sembrar en los medios diferenciales de Agar Urea de
Christensen, en el caldo Rojo de fenol + Glucosa, caldo Rojo de fenol + Maltosa.
COLORACION DE ALBERT:
Los gránulos metacromáticos conocidos también como de volutina, son material
de reserva de polifosfato, se distribuyen en el citoplasma, preferentemente en
los extremos del bacilo, se tiñen de color azul intenso y el soma bacteriano se
observa muy débilmente.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
1. Realizar el frotis a partir del cultivo y fijar al calor suave.
2. Cubrir con la Solución A de Albert (Azul de toluidina, verde de metilo, ácido
acético, alcohol etílico, agua destilada) por 3 a 5 minutos.
3. Lavar con agua corriente, evitar el lavado directo del frotis.
4. Cubrir con la Solución B de Albert (yodo metálico, yoduro de potasio, agua
destilada) por 1 minuto.
5. Lavar con agua corriente, secar y observar al microscopio, objetivo de 100X
LECTURA:
En la coloración Gram- Kopeloff observar los bacilos rectos o ligeramente
curvados ensanchados en sus extremos como mazos, pleomórficos (en forma
de pera, huso) o dispuestos paralelamente, o en forma de “letras chinas”.
En la coloración Albert observar la bacteria color verde y los gránulos de color
azul oscuro
En el cultivo en Agar chocolate telurito de potasio (medio selectivo inhibidor de
Gram negativos) observar los tres tipos de bacilos diftéricos:
a) Tipo gravis: colonias grandes grisáceas.
b) Tipo mitis: colonias medianas, circulares, lisas totalmente negras.
c) Tipo intermedius: colonias pequeñas, lisas o rugosas con centro negro.
En el cultivo en Agar sangre observar el crecimiento de colonias pequeñas,
convexas, con bordes enteros, color crema o blanco grisáceas, sólo las colonias
Tipo mitis producen beta hemolisis.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
BIOQUIMICA DE Corynebacterium diphtheriae
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM NEGATIVOS:
GENERO PSEUDOMONAS
INTRODUCCION:
La especie Pseudomona aeruginosa es un bacilo Gram negativo, casi todas son
móviles con flagelos polares monotricos y multitricos, poseen cápsula, no forman
esporas, no son exigentes para su desarrollo “In Vitro”.
Pseudomona aeruginosa es la especie más frecuentemente asociada con
enfermedad humana, principalmente quemaduras severas, pero también se
aíslan de orina, sangre, lavados bronquiales, esputo y tracto genital femenino.
En pacientes comprometidos pueden causar infecciones con riesgo de vida
fatales.
La detección del pigmento piocianina en el medio de cultivo es virtualmente
diagnóstica de P. aeruginosa, la mayoría de los aislamientos producen también
el pigmento fluoresceina y desarrollan bien a 42°C.
 MATERIAL:74sporangiófoudomona aeruginosa en caldo nutritivo.
 Caldo Tripticase en tubo de 16 x 150
 Agar nutritivo en Placa Petri
 Agar Mac Conkey en tubo 16 x 150
 Agar semi-sólido en tubo de 13 x 100
 Medio TSI
 Reactivo de Oxidasa
 Frasco con cloroformo
 Set de colorantes Gram
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
1. Hacer un frotis a partir de la cepa Pseudomona aeruginosa y colorear por el
método de Gram.
2. Sembrar la cepa de P. aeruginosa en los diferentes medios de cultivo, por
las técnicas conocidas. 3. Incubar a 37°C por 24- 48 horas.
RESULTADOS:
COLORACION DE GRAM: Bacilos pequeños, Gram negativos.
CALDO NUTRITIVO: Observar el crecimiento abundante en el medio, el
pigmento de color verdoso y un olor característico.
AGAR MAC CONKEY: Observar colonias grises claro, no fermentadoras de
lactosa. MEDIO TSI: No hay cambios, ya que P. aeruginosa y otras especies de
este género no fermentan los carbohidratos [utilizan los carbohidratos sólo por
vía oxidativa en el medio de oxidación- fermentación (OF)].
AGAR NUTRITIVO: Describir la colonia, observar la difusión del pigmento en el
Agar, y realizar la prueba de la oxidasa, que es positiva para P. aeruginosa.
CALDO TRIPTICASE: Agregar 1 ml de cloroformo para extraer el pigmento de
la piocianina.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PROTOCOLO:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM NEGATIVOS:
GENERO BRUCELLA HEMOCULTIVO Y SEROLOGIA
INTRODUCCION:
Son microorganismos pequeños, usualmente cocobacilares, inmóviles no
formadores de esporas. Son Gram negativos y necesitan una tinción prolongada
con la fucsina básica de por lo menos 2 minutos en lugar de los 30- 60 segundos
de tinción convencional de Gram.
La enfermedad conocida como Brucelosis o “Fiebre Malta” es causada por las
siguientes especies Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella abortus.
Su multiplicación y desarrollo “in vitro” es muy lento, necesitan de medios
especiales como el Agar Brucella o Caldo tripticasa soya.
Para la identificación de especies se utiliza una serie bioquímica para observar
la producción de H2S, hidrólisis de la urea, desarrollo en medios especiales con
fucsina 0.002 %, Thionina 0.002 % y requerimiento de CO2.
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO:
Este microorganismo puede ser aislado de la sangre, líquido cefalorraquídeo,
médula ósea o biopsias de ganglios linfáticos e hígado.
I: HEMOCULTIVO:
Para el Hemocultivo se utiliza el medio de doble fase (sólido + líquido) de Ruiz-
Castañeda. La incubación debe hacerse en una atmósfera de 5- 10% de CO2 a
35- 37°C. Las colonias aparecen entre el 4 al 5 día, pero los cultivos deben ser
incubados hasta los 30 días antes de ser descartado como negativo.
II: SEROLOGIA Para el diagnóstico serológico se utilizan las técnicas de:
1. Aglutinación rápida en placa
2. Aglutinación lenta en tubo (Wright)
3. Prueba de aglutinación del 2- mercaptoethanol (2- ME)
4. Prueba modificada de Coombs (antiglobulina)
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
5. ELISA
MATERIAL:
 Tubo con cepa de Brucella
 Frascos con medio de Ruiz- Castañeda
 Muestra de sangre total de paciente
 Agar fucsina en placa
 Agar Thionina en placa
 Suero positivo y suero control negativo
 Antígeno estandarizado de Brucella
 Láminas excavadas
 Pipetas de 0.2 ml
 Palito mondadientes
I: HEMOCULTIVO:
Agregar 5 ml. de sangre de paciente sospechoso a Brucelosis en el medio de
Ruiz- Castañeda, e incubar por 4 a 5 días a 37°C. Se debe esperar hasta 30 días
para descartar el cultivo.
COLORACION:
Realizar un frotis de la cepa desarrollada en Caldo trypticase y colorearla por el
método de Gram, siguiendo las recomendaciones señaladas anteriormente.
II: SEROLOGIA:
1. Con la pipeta de 0.01 colocar una gota de suero negativo en el primer círculo
de la 2da. Línea de la lámina excavada.
2. Con la pipeta de 0.01 ml colocar en la lámina excavada, las siguientes
cantidades de suero positivo: 0.08, 0.04, 0.02, 0.01 y 0.005 ml respectivamente.
3. A cada alícuota de suero añadir una gota de antígeno, equivalente a 0.03 ml.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
4. Mezclar cuidadosamente por rotación, con ayuda de un palito mondadientes

empezando por el suero negativo y la dilución más alta 1:400
5. Dejar en reposo por espacio de 3 minutos, luego rotar la lámina durante un
minuto y dejar en reposo por 4 minutos más.
6. A los 8 minutos no más, observar la presencia de grumos (aglutinación) que
indica una reacción positiva antígeno- anticuerpo y el título de anticuerpo
alcanzado.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS:
COPROCULTIVO
INTRODUCCION:
En el intestino del hombre existe una flora bacteriana constituida por
Enterobacterias (Escherichia coli, Salmonella, Shigella, Klebsiella) y otros
microorganismos anaerobios y aerobios, algunos de los cuales son patógenos
para el Hombre y causantes de enfermedades.
El diagnóstico y aislamiento del microorganismo causante de la enfermedad se
realiza mediante el COPROCULTIVO, es decir el cultivo de las heces en la fase
evolutiva de la enfermedad, para el aislamiento del agente patógeno bacteriano.
La mayoría de las Enterobacterias tienen una acción invasiva penetrando en la
mucosa intestinal produciendo ulceraciones o abscesos, y el modo de
transmisión es generalmente por ingesta de alimentos contaminados con heces
humanas.
Escherichia coli, bacilo Gram negativo no esporulados, es miembro de la flora
intestinal y en determinadas condiciones patógena para el hombre, poseen
factores de virulencia que les permite causar infecciones en el tracto
gastrointestinal así como en el sistema urinario. La E. coli enterotoxigénico
(ECET) es la causa común de la "Diarrea del viajero" y produce en el organismo
en“erotoxinas potentes”y poseen factores de colonización; la E.coli
enteroinvasiva (ECEI) y la E.coli enterohemorragica (ECEH) son causantes de
diarrea 81sporangióforos81alebsiella pneumoniae, bacilos Gram negativos a
veces con cápsula producen infecciones oportunistas en el huésped
comprometido (generalmente hospitalizado), el tracto respiratorio y urinario son
los lugares de infección más comunes, es difícil distinguir entre colonización e
infección y son productoras de endotoxinas.
Salmonella typhi, bacilo Gram negativo móvil con flagelos peritricos son
exclusivas del hombre y causan la fiebre tifoidea; otras, causan infecciones
intestinales y a veces septicemias como la Salmonella paratyhi A, B ó C.
El género Shigella, comprende especies que son bacilos Gramnegativos
inmóviles, causan la Disentería bacteriana, enfermedad que produce diarrea,
moco, sangre, calambres abdominales y fiebre. La especie S. dysenteriae es la
más virulenta.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
El género Proteus, presenta especies que son bacilos Gram negativos rectos,
móviles con flagelos peritricos, anaerobio facultativo. Son habitantes de la flora
intestinal y otras causantes de infecciones urinarias, heridas crónicas adquiridas
generalmente en el hospital
MATERIALES:
 Muestra de heces.
 Placas Petri con Agar Mac Conkey
 Placas Petri con Agar SS
 Placas con Agar Manitol
 Tubos con Agar Sabouraud
 Tubos con medio TSI, LIA
 Tubos con caldo peptonado
 Tubos con Citrato de Simmons
 Tubos con caldo MR-VP
 Frasco con Lugol
 Reactivo para Citocromo-oxidasa
 Reactivo de Kovacks (prueba de indol)
 Reactivo para Rojo de metilo
 Láminas portaobjeto y cubreobjeto
 Reactivo para VP (Alfa- naftol al 5% e Hidróxido de Potasio al 40%)
 Juego de colorantes para Gram
 Material básico para laboratorio
1. Realizar un estudio macroscópico de la muestra de heces (consistencia, color,
presencia de sangre, moco, etc.)
2. Realizar un estudio microscópico de la muestra con Lugol y suero fisiológico
y Gram.
3. Realizar la siembra de la muestra de heces en medios de cultivos:
a) Suspender aproximadamente un gramo de heces (dos asadas) en un tubo
con 3 ml. de solución salina.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
b) Tomar una asada de la suspensión de heces y sembrar en las placas de Agar

Mac Conkey, Agar SS, Agar Manitol, y tubos con Agar Sabouraud e incubar a
37°C por 24 horas.
c) Sembrar las cepas bacterianas aisladas en medios de diferenciación
bioquímica: TSI, LIA, Caldo peptonado, Citrato de Simonns y Caldo MR-VP.
Incubar a 37°C por 24 horas.
LECTURA:
EN AGAR MAC CONKEY, observarlas colonias rojas (Lactosa +) que han
metabolizado la Lactosa y las colonias Lactosa negativas que no han
metabolizado la Lactosa.
EN AGAR SS, observar el desarrollo de colonias Lactosa negativas y presencia
de color negro en las colonias que son SH2.
EN AGAR MANITOL Y AGAR SABOURAUD, observar el desarrollo de
colonias y anotar las características.
EN TSI (Glucosa, Sacarosa, Lactosa), cuando las bacterias metabolizan los
carbohidratos toma el medio un color amarillo y cuando producen SH2 se torna
de color negro.
EN LIA (Agar, Lisina, Hierro ), observar si hay descarboxilación y desaminación
de la Lisina y producción de SH2 por las bacterias. Si hay Descarboxilación de
la lisina se eleva el pH del medio debido a la producción de aminas, pH= 5.2
(color amarillo), pH 6.8 (color púrpura) [indicador púrpura de bromocresol]
EN CALDO PEPTONADO, observar la producción de Indol por las bacterias, al
agregar el reactivo de Kovac tornándose rojo grosella.
EN CITRATO DE SIMMONS, se tornará de color azul cuando la bacteria utiliza
el citrato como fuente de energía y alcaliniza el medio. (Formación de Hidróxido
de amonio). Positivo (color azul), negativo (color verde).
EN CALDO MR, observar el color rojo que toma cuando se le añade el Rojo de
metilo. Cuando hay producción de ácidos mixtos con un pH < 4.4 (positivo color
rojo); pH > 4.4 (negativo color amarillo).
EN CALDO VP, observar el color rojo en anillo que se forma después de 15
minutos cuando se le añade alfa-naftol y KOH por la producción de acetil-metil-
carbinol. Positivo (color rojo), negativo (color amarillo).
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRUEBA DE CITOCROMO- OXIDASA agregando una gota del reactivo oxidasa

sobre la colonia y observar a los 5 minutos un intenso color azul si son
productoras de la enzima en caso contrario no habrá ningún cambio de color
COLORACION DE GRAM observar los bacilos Gram negativos.
CON SUERO FISIOLOGICO Y LUGOL observar la muestra de heces y verificar
si hay movilidad utilizando objetivos de 40 aumentos.
DIFERENCIACION BIOQUÍMICA:
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO E IDENTIFICACION DE VIBRIO CHOLERAE
INTRODUCCION:
Los miembros de la familia Vibrionaceae, se encuentran en el agua dulce y
salada. Incluye los géneros: Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas. El género Vibrio
comprende muchas especies siendo las de importancia médica Vibrio cholerae,
causante del cólera epidémico; V. parahaemolyticus, causante de gastroenteritis;
V. vulnificus, causante de bacteriemia, infecciones en heridas cutáneas, celulitis;
y V. alginoliticus, responsable de otitis externa, infección de heridas cutáneas,
tejidos blandos.
Son bacilos Gramnegativos, curvados, con aspecto de coma de 1-5 m, se
presentan solos, en parejas o en cadenas que semejan espirilos, muy móviles,
poseen un flagelo polar, no forman esporas, sin cápsula, aerobios y oxidasa
positivo.
La última pandemia fue producida por el biotipo El Tor, serotipo Ogawa.
Desarrollan en medios enriquecidos como el agar sangre, el medio selectivo
TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares, sacarosa, indicador Azul de timol y Azul
de bromotimol) y medios alcalinos.
MATERIAL:
 Placa Petri con medio TCBS sembrada con V. cholerae y V.
parahaemolyticus
 Tubos con TSI
 Tubos con LIA
 Tubo con Caldo peptonado
 Tubo con MR-VP
 Tubo con Citrato de Simmons
 Desoxicolato de sodio al 0.5 %
 Microscopios
 Aceite de cedro
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PROCEDIMIENTO Y LECTURA:
1. En Agar TCBS (thiosulfato, citrato, sales biliares, sacarosa):
S86sporangiólas colonias de V. cholerae, de 2-4 mm de diámetro, lisas,
con un centro opaco y periferia transparente, circulares, de color amarillo
(resultado de la utilización del citrato y formación de ácidos a partir de la
utilización de la sacarosa)
En Agar TCBS las colonias de V. parahaemolyticus se observan colonias
circulares, de aspecto verde- gris translucido; V. alginolyticus se observa
de color amarillo (sacarosa positiva)
2. En medio TSI, observar si hay acidez en la superficie y en el fondo por
metabolismo de la sacarosa, no produce H2 S.
3. En el caldo peptonado, detectar la presencia de indol
4. En el medio LIA observar si hay decarboxilación de la Lisina.
5. En el medio MR- VP detectar la producción del acetil-metil-carbinol
6. En el medio Citrato de Simmons, observar la formación o no de hidróxido
de amonio
7. Realizar un frotis de ambas especies y colorear con Gram
8. Realizar la prueba de la “cuerda positiva”, colocando una gota de la
solución de Desoxicolato sobre una lámina portaobjetos, luego con el asa de
siembra en aro transferir una colonia de V. cholerae, mezclar y observar que
se produce una suspensión viscosa al retirar el asa “como una cuerda larga”
que se torna más pegajosa después de 60 segundos más.
9. Realizar las lecturas en los medios diferenciales bioquímicos sembrados.
PROTOCOLO
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
RESULTADOS:
1. Realizar esquemas de lo observado en la práctica
2. Realizar las pruebas bioquímicas correspondientes.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO E IDENTIFICACION DEL GENERO LEPTOSPIRA
INTRODUCCION:
Las Leptospiras son microorganismos helicoidales, flexibles, con las espiras
estrechamente unidas, muy móviles, con una longitud de 6 a 20 µm y 0.1 µm de
diámetro, sus extremos semejan a ganchos semicirculares (ocasionalmente se
presentan rectos).
El género Leptospira (Noguchi, 1917) pertenece a la Familia Leptospiraceae,
Orden Spirochetales; comprende 6 especies patógenas Leptospira interrogans
con 18 variantes serológicas, L. noguchi,
L. santarosai, L. borgpetersenii, L. weilii, L. kirhneri y L. inadai, y mas de 200
serovares saprofitos comprendidos dentro de Leptospira biflexa. Se diferencian
por su virulencia, sus propiedades antigénicas, reactividad frente a anticuerpos
monoclonales, la prueba de la endonucleasa de restricción o la composición de
su DNA.
La Leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial. Los reservorios
naturales son los roedores y una gran variedad de animales silvestres y
domésticos, los cuales eliminan con la orina el agente etiológico, contaminando
el agua, suelo, alimento, etc. El mecanismo de transmisión puede ser directo
(orina, órganos de animales infectados) o indirecto (a través del agua o material
contaminado. La puerta de ingreso al organismo humano es a través de lesiones
de la piel y mucosas incluyendo la conjuntiva ocular.
Se colorean por métodos especiales como Fontana Tribondeau (contiene nitrato
de plata) y coloración de Kiktenko, ya que toman débilmente los colorantes de
anilina. Son visibles al microscopio de campo oscuro en preparaciones frescas.
Desarrolla en medios especiales líquidos, semisólidos y sólidos enriquecidos
con suero de conejo o carnero al 8-10%, a una temperatura óptima de 28 – 30ºC,
en un periodo de incubación de 5- 10 días, en condiciones de aerobiosis.
Para el diagnóstico definitivo de Leptospirosis se requiere de:
1. Aislamiento de la Leptospira a partir de muestras clínicas (sangre, líquido
cefalorraquídeo, orina) en medios de cultivo o inoculación en hámster o cobayo.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
2. Evidencia serológica en sueros pareados con incremento cuádruple del título

de diagnóstico inicial de 1:100
MATERIAL:
 Cultivo de Leptospira en medio semisólido de Fletcher- modificado
 Lamina control coloreada por el método de Kiktenko, Vago, Fontana
Tribondeau, o Rojo de Congo.
 Microscopio.
LECTURA:
En el medio semisólido de Fletcher- modificado observar el desarrollo de las
Leptospiras en todo el tubo y la formación de un anillo a unos milímetros de la
superficie del medio En la coloración de Kiktenko las Leptospiras se tiñen de un
color rosado- violeta en fondo incoloro, presentándose sueltas o entrelazadas,
semejando la letra C ó S, generalmente con los extremos en forma de
semigancho y con las espiras bien unidas. En la observación al microscopio de
campo oscuro, las leptospiras se observan como un “collar de perlas” son muy
móviles, realizan movimientos de translación, rotación y alrededor de su eje.
RESULTADOS:
1. Características del cultivo observado.

2. Realiza esquema de la observación en las láminas coloreadas
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO E IDENTIFICACCON DE BARTONELLA
INTRODUCCIÓN:
La familia Bartonelaceae comprende cinco (5) especies, siendo B. bacilliformes
la causante de la Bartonelosis human90sporangiófod de Carrión y se transmite
a través de la picadura de un insecto alado hematófago conocido como
Lutzomya.
Bartonella bacilliformes presenta un marcado polimorfismo
(ba90sporangiófocilar, cocoide), su tamaño varía entre 1- 3 m de longitud por
0.25- 0.30 m de diámetro, presenta flagelos unipolares en número de 1 a 10. En
los cultivos jóvenes predominan las formas bacilares (forma virulenta), y en
cultivo viejo la forma cocoide (no virulenta)
Se colorea escasamente con los colorantes de anilina (Gram negativas), pero si
tiene afinidad por los colorantes derivados de Romanowski (Giemsa, Leishman,
Wright).
Desarrolla en aerobios y microaerobiosis, a una temperatura óptima de 29°C en
medios enriquecidos con peptona, triptosa, y plasma (gel de fases) y medio
bifásico con sangre y plasma, durante un periodo de incubación de 5- 10 días.
Su crecimiento es lento por lo general semanas, enturbia el medio con sedimento
y a veces se observa películas o témpanos en la superficie de la parte líquida del
medio.
Puede ser aislada de la sangre (Hemocultivo) en la fase hemática de la
enfermedad, de las lesiones eruptivas (fase verrucosa o histioide) y del LCR en
los casos de neurobartonelosis.
En el laboratorio se puede aislar la bacteria por Hemocultivo (fase hemática)
usando el agar de fases, medio de aislamiento primario, por cultivo del
verrucoma (fase eruptiva); se pueden realizar pruebas serológicas
(aglutinaciones, fijación de complemento, Elisa, etc.), ó por Infección de los
hematíes humanos por Bartonella (Danza de los hematíes) e Inhibición del
movimiento de los hematíes por acción de anticuerpos específicos antibartonella
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
MATERIAL:
 Frotices coloreados por Leishman, Wrigth ó Giemsa procedentes de
cultivo.
 Cultivo de la bacteria en Medio Agar Gel de Fases
 Cortes histológicos de verrucoma coloreados con Hematoxilina eosina
PROCEDIMIENTO E INTERPRETACIÓN:
Observar al microscopio las láminas coloreadas y apreciar la morfología y tinción
de Bartonella. En las láminas coloreadas observar las bacterias en forma de
empalizada y en forma aislada.
En los cultivos observar la turbidez del medio, la formación de sedimento y la
formación de películas o témpanos
Realizar esquemas de las observaciones realizadas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO E IDENTIFICACIÓN DE TREPONEMA – PRUEBA DE VDRL ó RPR
INTRODUCCIÓN:
Las espiroquetas constituyen un grupo grande y heterogéneo de
microorganismos espirilares móviles, dentro de las cuales se encuentra la familia
Treponemataceae que comprende tres géneros de microorganismos patógenos
para el hombre: Treponema ( T. pallidum, causa la sífilis, T. pertenue, produce
el pián, T. carateneum, produce el pinto), Borrelia ( B. recurrentis produce la
fiebre recurrente, B. burgdorferi causa la enfermedad de Lyme), y Leptospira que
origina infecciones generales con fiebre, ictericia y meningitis.
La especie T. pallidum se caracteriza por ser de forma espiral delgados y miden
0.2 m de ancho y 5 a 15 m de largo, son móviles y giran constantemente, no se
tiñen bien con los colorantes de anilina y es difícil su cultivo en medios artificiales.
PRUEBAS DE DIAGNOSTICO:
1. Las muestras obtenidas de las lesiones superficiales tempranas (líquidos
tisulares) pueden observarse en un microscopio de campo oscuro buscando las
espiroquetas móviles características.
2. Por inmunofluorescencia usando suero antitreponema marcado con
fluoresceina
3. Pruebas serológicas para sífilis, estas pueden usar antígenos treponémicos o
antígenos no treponémicos (cardiolipina purificada del corazón de buey)
4. Prueba de Floculación (VDRL), el antígeno VDRL es una solución alcohólica
que contiene 0.03% de cardiolipina, 0.9% de colesterol y lecitina purificada; esta
prueba esta basada en que las partículas del antígeno lípido (cardiolipina)
permanecen dispersas en suero normal y en enfermos se combina con la reagina
de la sífilis (la reagina es una mezcla de IgM e IgA dirigidos contra algunos
antígenos).
5. Prueba de aglutinación (RPR) En la prueba rápida para reaginas plasmáticas
(RPR), las "reaginas" presentes en el suero de individuos inf“ctados c”n
Treponema pallidum, se detectan por acción de las mismas con antígeno de
cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre partículas de carbón. La
reacción produce una aglutinación visible macroscópicamente, favorecida por las
partículas de carbón. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina, por lo que no

es necesario inactivar la muestra
MATERIALES:
 Suero problema
 Laminas excavadas
 Antígeno VDRL o RPR
 Pipetas graduadas
PROCEDIMIENTO (VDRL):
Tomar con una pipeta 0.05 ml de suero calentado (baño María a 56°C x 30’)
sobre la lámina excavada
Añadir una gota del antígeno VDRL sobre el suero y rotar durante cuatro (4)
minutos
Observar al microscopio con objetivo de menor aumento la formación de floculos
cuando la reacción es positiva.
PROCEDIMIENTO (RPR):
I.PRUEBA CUALITATIVA:
Llevar a temperatura ambiente los reactivos y la muestra antes de realizar el
ensayo. En cada uno de los círculos de la tarjeta de reacción colocar con un
gotero plástico provisto: Muestra o Controles 1 gota (50 ul) Con el extremo
cerrado del gotero distribuir la muestra uniformemente en todo el círculo.
Con el gotero metálico provisto, en posición vertical, agregar en el centro del
círculo:
Reactivo A 1 gota (17 ul)
SIN MEZCLAR, hacer rotar horizontalmente la tarjeta de reacción en forma
manual o con agitador rotativo a 100 rpm durante 8 minutos. Observar la
presencia o ausencia de aglutinación al cabo de este tiempo. Tiempos de lectura
mayores pueden dar lugar a falsos resultados
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA:

Efectuar diluciones seriadas 1:2, 1:4, 1:8, hasta 1:64 empleando solución
fisiológica y proceder de la misma manera que en la técnica cualitativa. El título
estará dado por la inversa de la última dilución que se observe reactiva.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Reactivo: presencia de aglutinación visible en forma de grumos negros sobre el
fondo claro que indica presencia de "reaginas" en la muestra.
No reactivo: aspecto gr“s homogé”eo que indica ausencia de "reaginas" en la
muestra.
RESULTADOS:
N (No rea“tivo) ..”..................... Ausencia de floculos
RD (Reactivo débil) .................. Floculos pequeños
R (Reactivo) .............................. Floculos medianos y grandes
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
CULTIVO DE MUESTRAS DE INFECCIONES URINARIAS: UROCULTIVO
INTRODUCCION:
El Urocultivo es el examen de muestras de orina que permiten el aislamiento de
agentes patógenos causantes de una infección urinaria.
Para la obtención de muestras debe considerarse:
La recolección debe ser con un mínimo de contaminación Establecer el
momento óptimo para la recolección, con el objeto de tener la mejor probabilidad
de recuperar microorganismos causales. Obtener una cantidad suficiente de la
muestra para efectuar las técnicas de cultivo necesarias. Toda vez que sea
posible, obtener las muestras antes de la administración de antibióticos.
Normalmente la orina es estéril, pero al tomarse la muestra existe la posibilidad
de contaminación por lo que se realiza de rutina el Urocultivo cuantitativo:
1. Si existe menos de 10,000 gérmenes por ml. se considera como
contaminantes, siendo la muestra negativa.
2. Cuando la orina tiene más de 100,000 bacterias por ml, se considera que hay
infección urinaria.
3. Si el número de gérmenes oscila entre 10,000 a 100,000 se interpreta como
dudoso y será necesario repetir el cultivo.
La orina debe ser procesada en el laboratorio dentro de las 2 horas siguientes
a la recolección para lograr recuentos de colonias exactos, luego se deberá
identificarlas y realizar el Antibiograma correspondiente.
MATERIAL:
 Muestra de orina patológica
 Sedimento de orina
 Agar Mac Conkey, Medio hipertónico de Chapman (Agar Manitol), Agar
Sabouraud, en placas
 Agar nutritivo en tubos con 20 ml licuado +/- 50°C
 Agar Mac Conkey en tubos con 20 ml licuado +/- 50°C
 Tubos con medio TSI, LIA, Caldo peptonado, MR-VP, Agar Citrato de
Simmons, Agar Urea de Christensen.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Tubos con 9.9 ml de Suero fisiológico 0.85%

 Pipetas de 1 ml. estériles Placas Petri, vacías estériles
 Bocal Con desinfectante
 Microscopio
 Serie de colorantes de Ziehl- Neelsen
 Serie de colorantes de Gram
 Láminas portaobjetos y laminillas
PRIMER DIA:
A. Estudio de las características macroscópicas Describir el aspecto de la
orina: Color (amarillo, oscuro, castaño o incoloro) Señalar si la orina es clara o
turbia.
B. Estudio de las características microscópicas
1. Obtener una gota del sedimento urinario y observarlo entre lámina y laminilla
al microscopio con objetivos de 10X y 40X
2. Realizar un frotis y colorear por el método de Gram y Ziehl- Neelsen
C. Siembra de la muestra de orina:
1. Tomar 0.01 ml. de la orina sin centrifugar y sembrar por dispersión
agotamiento en las placas con Agar Mac Conkey, Agar Manitol y Agar Sabouraud
2. Método de dilución: Preparar una dilución de la orina de la siguiente manera.
a) Con la pipeta de 1 ml, obtener 0.1 ml de orina sin centrifugar y transferirlo al
tubo con suero fisiológico 0.85% estéril. Mezclar bien.
b) Con la misma pipeta transferir 0.1 ml de la mezcla a cada una de las placas
Petri vacías estériles.
c) A cada una de las placas agregar el Agar Mac Conkey licuado y a la otra el
Agar nutritivo licuado, rotar sobre la mesa del laboratorio para obtener una
mezcla homogénea.
d) Una vez solidificado el Agar, incubar a 37°C por 18- 24 horas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
3.- Método de asa calibrada: Seguir el siguiente procedimiento

a) Esterilizar el asa calibrada de 10ul o 100ul, en el mechero y luego enfriarlo
introducirlo en la orina total (no centrifugado)
b) Agitar con la misma asa la muestra de orina y tomar una cantidad (0.01ul,
0.001ul) para el sembrado
c) Se siembra esta muestra de orina en las placas de Agar Mac Conkey y otra
con el Agar nutritivo
d) Una vez solidificado el Agar, incubar a 37°C por 18- 24 horas
LECTURA:
1. En el sedimento de la orina los elementos que pueden observarse son: pus,
eritrocitos, cristales anormales, leucocitos, levaduras, parásitos,
espermatozoides, células epiteliales, cilindros.
2. En los frotices coloreados por Gram, observar la presencia de bacterias Gram
positivas y Gram negativas, y por el método de Ziehl- Neelsen las bacterias ácido
alcohol resistentes(en caso de infección por Mycobacterium).
SEGUNDO DIA:
1. En la siembra de la orina sin centrifugar, observar en la placa de Agar Mac
Conkey el crecimiento de colonias lactosa positivas; en las placas de Agar
Manitol, el desarrollo decolonias resistente a altas concentraciones de sales, y
en el Agar Sabouraud, si hay presencia de levaduras.
2. En la siembra por dilución, observar el desarrollo bacteriano en las placas,
contar el número de colonias en un 1/8 de la placa y multiplicarlo por 8 y luego
por 1000.
* En la siembra por Asa calibrada observar el desarrollo bacteriano en las placas,
contar el número de colonias, se establece el número de unidades formadoras
de colonias (UFC) que en este caso por utilizar una asa calibrada de 10ul o es
100 ul se multiplica por 100 o 1000 respectivamente.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
3. Se deberá seleccionar una colonia lactosa positiva y negativa del Agar Mac
Conkey, preparar suspensiones en caldo nutritivo y realizar las pruebas
diferenciales en la serie bioquímica respectivamente: TSI, Caldo peptonado, MR-
VP, Citrato de Simmons, LIA y Urea de Christensen. Incubar a 37°C por 18-24
horas.
Nota: El agente causal aislado e identificado deberá ser sometido a Pruebas de
Susceptibilidad Antimicrobiana. El Antibiograma se realiza tomando 5 colonias
del Agar Mac Conkey, se prepara una suspensión en un tubo con SF al 0.85%,
y se determina la Concentración Mínima Inhibitoria (MIC) del antibiótico cuya
finalidad es orientar en la terapéutica y la concentración del antibiótico alcanzado
en el suero o en foco de infección.
El método de disco-difusión estandarizado [Kirby - Bauer] es el que se usa de
rutina en el laborato–io, para dicha determinación (MIC).
REPORTE FINAL:
Diseñar el protocolo correspondiente, señalando:
1. La observación macroscópica y microscópica de la muestra clínica.
2. Las características del desarrollo bacteriano, y los principios bioquímicos en
cada uno de los medios selectivos empleados.
3. Los resultados del comportamiento bioquímico.
4. La determinación del agente patógeno causante de la infección urinaria.
5. Determinación cuantitativo número de UFC por ml.
Nota: UFC (Unidad Formadora de Colonia)
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRACTICA N.º 25 – SEMNANA 12

AISLAMIENTO DE VIRUS EN HUEVOS EMBRIONADOS Y EN RATONES
LACTANTES.
OBSERVACION DE LÁMINAS COLOREADAS

INTRODUCCION:
Los virus son agentes infecciosos responsables de numerosas enfermedades
del hombre, de los animales, de las plantas y también de las bacterias
(bacteriófagos).
En este capítulo analizaremos solamente los virus que producen patología en el
ser humano; debido a sus características especiales como son su pequeño
tamaño y su parasitismo intracelular obligado, los virus no pudieron ser
estudiados hasta principios del siglo XX, si bien algunas de las enfermedades
producidas por ellos ya se conocían desde la antigüedad (viruela, rabia, hepatitis,
etc.). Dado que los virus carecen de los constituyentes fundamentales para el
crecimiento y multiplicación deben necesariamente utilizar los sistemas de las
células que parasitan y por ello se denominan parásitos intracelulares obligados.
En los últimos años, se han desarrollado métodos de diagnóstico rápido para la
mayoría de las infecciones virales, así como drogas antivirales específicas para
muchos virus.
Se emplean métodos directos para el diagnóstico de los virus, y dado que estos
solo se replican en el interior de las células vivas, para su cultivo in Vitro es
necesario el empleo de métodos especiales en el laboratorio de virología, tales
como:
a) Cultivos tisulares de humanos o animales. La mayoría de los virus pueden
multiplicarse en cultivo de células apropiadas.
b) Embriones de pollo (membrana corioalantoidea, cavidad amniótica, cavidad
alantoidea y saco vitelino).
c) Animales de laboratorio (ratones lactantes, Hámsters, monos)
d) Serología o demostración de anticuerpos frente al virus.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
e) Demostración directa del virus o de antígenos víricos a partir de frotis de las

lesiones.
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
El aislamiento de los virus es de gran importancia en la investigación médica y
epidemiología y constituye un método muy extendido para el diagnóstico de la
infección.
Por lo tanto, estas prácticas nos orientan a conocer los diversos métodos de
aislamiento directo o indirecto para demostrar los efectos citopáticos de los
diferentes virus y sus formas como se deben evaluar en los diferentes procesos
infecciosos que generan en el ser humano.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
METODOS DE DIAGNOSTICO VIROLÓGICO:

A. USO DE LOS HUEVOS EMBRIONADOS PARA LA PROPAGACION DE
LOS VIRUS.
Muchos de los virus y Rickettsias patógenas para el hombre y los animales
pueden propagarse en las células vivas de las membranas extraembrionarias o
en el propio embrión de huevos embrionados de gallina. Estas técnicas fueron
introducidas por Footdpasture y col., en 1931, y desde entonces están siendo
ampliamente usadas.
Las vías de inoculación y la edad del embrión a usar dependen del agente viral
que va a ser inoculado.
MATERIALES:
 Huevos embrionados de 7-9 días.
 Huevos embrionados de 10-12 días.
 Jeringas de tuberculina con aguja N° 25 x ¼” y 22 x 2”.
 Colorante Fucsina al 1% con agua destilada
 Colorante Azul de metileno al 1% con agua destilada
 Frascos con Alcohol yodado
 Algodón
 Ovoscopio
 Cinta adhesiva o parafina para sellar los huevos embrionados
 Equipo de disección (Pinzas, tijeras curvas, guantes)
 Ratones lactantes
INOCULACION DEL COLORANTE POR VIA ALANTOIDEA:

a) Marcar y limpiar con alcohol yodado, huevos de 10-12 días.
b) Hacer un pequeño orificio con el punzón en la zona marcada de huevos
embrionados.
c) Introducir la aguja de la jeringa cargada con colorante aproximadamente ¼”
en ángulo de 45° e inocular 0.2 ml. de colorante.
d) Se tapa la abertura con cinta Adhesiva o cera calentada y se deja en
incubación a 33-35°C por 2-4 días, luego cosechar y observar.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
INOCULACION POR VIA AMNIOTICA:

a) Marcar la cámara de aire y la posición del embrión de 10-12 días.
b) Limpiar con alcohol yodado un área de la cámara de aire que está situada por
encima del embrión y hacer una perforación rectangular de 0.5 cm, con el
punzón.
c) Deja caer una gota de suero fisiológico o aceite mineral estéril, para visualizar
una zona no vascularizada de la membrana corioalantoidea subyacente.
d) Con una pinza curva introducir a través de esta área, coger hacia arriba la
membrana amniótica, formando una pequeña “tienda” en la base del cual se
inyecta 0.2 ml, de la solución de Azul de metileno o del inoculo problema.
e) Se suelta la membrana que se localiza en su sitio de origen.
f) Se sella la abertura del huevo con cinta adhesiva o cera caliente y se deja
incubando a 3335°C por 2-4 días (sujeto a la muestra: Influenza)
INOCULACION DEL SACO VITELINO:
a) Limpiar con alcohol yodado, la porción de la cáscara que cubre la cámara de
aire del huevo embrionado de 6-7 días.
b) Perforar la cáscara en el centro de la cámara de aire.
c) Con una jeringa de 1 ml y aguja de 22x½” inocular 0.5 ml de Azul de metileno,
introduciendo la aguja verticalmente a través de la cámara de aire, hasta 35 mm
de profundidad.
d) Sellar la abertura
D. INOCULACIÓN EN RATONES LACTANTES:
Se utilizaran ratones lactantes y las vías de inoculación serán: Intraperitoneal,
Intracraneal, Subcutánea y Nasal.
E. OBSERVACIÓN DE LÁMINAS COLOREADAS:
Observar la presencia de cuerpos anormales intracelulares denominados
cuerpos de inclusión (Efecto citopatico). Estas estructuras pueden encontrarse
102sporangióeo o en el citoplasma y su localización es específica de la
enfermedad viral. Se considera estos cuerpos de inclusión (efecto citopatico)
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
como conglomerados de virus asociados 103sporangiós de reacción de la célula

infectada.
OBSERVACIÓN DE LÁMINAS:
1. Cultivo de células normales, coloreadas con Hematoxilina eosina (HE), no se
tiñe de rosado el citoplasma.
2. Rabia: corte histológico de cerebro. Coloración HE. Observar inclusiones
eosinofilas intracitoplasmáticas denominadas corpúsculos de negri.
3. Enterovirus- Virus Polio: En cultivos de células humanas (HEP-2), observar la
degeneración celular, el redondeamiento celular, la picnosis nuclear y
desplazamiento del núcleo hacia el borde de la célula.
4. Herpes simple en cultivos de células: Observar las células gigantes
polinucleadas, las inclusiones eosinofilas intracelulares denominadas cuerpos de
Lipschutz.
5. Citomegalovirus en sedimento de orina: Observar la inclusión intranuclear
basófila en “ojos de lechuza” rodeada de un halo claro y el citoplasma ce color
azulado (Basófilo).
6. Adenovirus en cultivo de células HEP-2: Observar la agrupación de células en
racimo y las inclusiones basófilas intranucleares.
PROTOCOLO Esquematizar los resultados de las inoculaciones realizadas.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO E IDENTIFICACIÓN DE HONGOS AMBIENTALES
INTRODUCCION:
Los hongos ambientales se encuentran ampliamente distribuidos en la
naturaleza viviendo a expensas de la materia inerte existente, la mayoría se
encuentra como saprofito, otros pueden ser causantes de inducir
hipersensibilidad así como también ser responsables de infecciones. Entre los
hongos ambientales comunes tenemos: Aspergillus, Penicilluim, Fusarium,
Rhizopus,
Cephalosporium, Helmintosporium, Rhodotorula
MATERIALES:
 Tubos con cultivo de Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Rhizopus,
Cephalosporium, Rhodotorula y Helmintosporium.
 Láminas con azul de lactofenol de cada uno de los hongos mencionados.
 Microscopios
1. Estudie las características macroscópicas de los diferentes cultivos,
observando el tipo de micelio aéreo, aspecto de la colonia, producción de
pigmento y consistencia de la colonia.
2. Observar al microscópico utilizando lentes de menor y mediano aumento, las
características microscópicas de cada uno de los hongos preparados en las
láminas con azul de lactofenol.
CARACTERISTICAS DE LOS HONGOS AMBIENTALES:

Aspergillus
Colonias al inicio de color blanco, luego varía de acuerdo a la especie en:
amarillo, verde azufrado, marrón o negro.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Microscópicamente presenta hifas tabicadas que forman conidióforos no

tabicados que se ensanchan en su extremo distal dando lugar a la cabeza
aspergilar que da origen a los esterigmas y de donde salen las conidias en
cadena.
Penicillium
Colonias de color azul verdosas, pulverulento y desarrollo abundante.
Microscópicamente presenta hifas tabicadas con conidióforos ramificados en
cuyo extremo se hallan los esterigmas en forma de pincel del cual se originan las
conidias en cadena.
Fusarium
Colonias de micelio aéreo algodonoso de color rosado ó violeta en la superficie.
Microscópicamente presenta filamentos tabicados con cortos conidióforos,
macroconidias septadas y alargadas, fusiformes.
Rhizopus
Colonias de micelio aéreo, de aspecto algodonoso, de un color blanco grisáceo.
Microscópicamente presenta hifas sin septos, rizoides a partir de los cuales se
forman largos 106sporangióforos que terminan en una estructura globosa
llamada esporangio en cuyo interior se encuentran las esporas.
Cephalosporium
Colonias de micelio aéreo de color blanco- rosado o blanco- amarillento.
Microscópicamente presentan hifas septadas, conidióforos cortos que dan
origen a conidias hialinas agrupadas.
Helmintosporium
Colonias de color gris al inicio, después se torna de color negro en el centro, con
la periferia elevada de color gris.
Microscópicamente se observan hifas septadas y macroconidios con septos
longitudinales sobre conidióforos cortos y nudosos
Rhodotorula
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Desarrolla colonias de aspecto cremoso, de color rojo o rosado debido a que

forma pigmentos carotenoides. Microscópicamente se observa células ovoides
o redondeadas con o sin yema.
PROTOCOLO
Realizar esquemas o dibujos de lo observado en la práctica.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO E IDENTIFICACIÓN DE HONGOS DERMATOFITOS
INTRODUCCION:
Los dermatofitos son organismos queratinófilos que invaden las estructuras
queratinizadas del cuerpo como la piel, pelo y uñas. Las artrosporas se adhieren
a los queratinocitos, germinan y los invaden, son causantes de las micosis
superficiales y constituyen una de las infecciones más comunes en los humanos.
Los agentes causales mas importantes son los hongos del género Trichophyton,
Microsporum y Epidermophyton, así como también Malassezia furfur que es
causante de la Tiña versicolor o Pitiriasis versicolor y la Piedraia hortai que afecta
los pelos y produce nódulos en el tallo piloso de los cabellos, barba y bigote.
Por su hábitat pueden clasificarse en: Zoofílicos (Microsporum canis), Geofílicos

(Microsporum gypseum), y Antropofílicos (Epidermophyton).
MATERIALES:
 Tubos con cultivo de: T. rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, M.
canis, M. gypseum y E. floccosum.
 Lámina con azul de lactofenol de cada uno de los hongos
mencionados.
 Láminas preparadas de M. furfur en hidróxido de potasio al 20%.
 Láminas preparadas de pelo infectado con Piedraia hortai.
 Material básico de laboratorio(xilol, algodón, alcohol)
 Microscopios con lentes de menor y mediano aumento.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
1. Estudiar las características macroscópicas de los diferentes cultivos,
observando el tipo de micelio, aspecto de la colonia, producción de pigmento y
consistencia de la colonia.
2. Observar al microscopio las características microscópicas de cada uno de los
hongos preparados en láminas.
CARACTERISTICAS DE LOS HONGOS DERMATOFITOS, MALASESSIA Y

PIEDRAIA.
Trichophyton rubrum
Colonias de micelio aéreo blanco, de aspecto algodonoso, al reverso puede
observarse un pigmento de color púrpura.
Al microscopio se observan hifas septadas con microconidias sésiles piriformes,
a veces puede observarse macroconidias, clamidosporas y cuerpos nodulares.
Trichophyton mentagrophytes
Colonias blanquecinas pulverulentas, granuladas, yesosas, al reverso puede
observarse un pigmento amarillo- pardusco.
Al microscopio se observan hifas septadas con abundante microconidias
esféricas agrupadas, pueden presentar hifas en espiral y macroconidias.
Trichophyton tonsurans
Colonias membranosas, crateriformes o cerebriformes de consistencia
acartonada con pigmentación amarillo- castaño al reverso.
Al microscopio se observan microconidias piriformes hialinas, clamidosporas, e
hifas en raquetas septadas, pueden observarse macroconidios.
Microsporum gypseum
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Colonias poco elevadas pulverulentas con pigmento de color canela.

Al microscopio se observan hifas septadas, macroconidios con tabiques
transversales en número de 4-6, rara vez se observan microconidias.
Microsporum canis
Colonias de color blanquecino poco elevado, con pigmento amarillo- naranja en
el reverso de la colonia.
Al microscopio se observan macroconidios fusiformes hasta con 8 tabiques
transversales y con pequeñas excrecencias en la superficie, pueden también
observarse microconidias y clamidosporas.
Epidermophyton floccosum
Colonias de aspecto aterciopelado, pulverulentas de color amarillo- azufre con
pliegues en la colonia.
Al microscopio se observan macroconidios con su extremo distal romo y con 3-
4 tabiques transversales, pueden encontrarse aisladas o en racimo.
Malassezia furfur (Pityrosporum)

Al microscopio se observan hifas cortas de extremos romos al lado de formas
redondeadas agrupadas; este hongo no desarrolla en medios comunes por lo
que el diagnóstico se da por el examen directo de la muestra.
Piedraia hortai
Los nódulos se observan en el tallo piloso como costras arenosas, duras de
color pardo a negro que envuelven completamente el tallo piloso.
PROTOCOLO Realizar esquemas o dibujos de lo observado en la práctica

Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
ESTUDIO DE HONGOS LEVADURIFORMES. OBSERVACION DE CORTES
HISTOPATOLOGICOS.
INTRODUCCION:
Los hongos levaduriformes son frecuentes al estado saprofito en el suelo,
aguas, plantas y en las cavidades naturales del hombre como el tubo digestivo y
en las regiones de los pliegues cutáneos. Muchas especies han sido vinculadas
a infecciones humanas como la Candida albicans y otras especies de Candida
que puede producir infecciones agudas o crónicas en la piel o mucosas, aparato
genito- urinario, y respiratorio; otras levaduras como Cryptococcus neoformans
pueden causar infecciones cerebrales y rara vez infecciones cutáneas; en el
hombre la infección primaria es casi siempre pulmonar.
MATERIALES:
 Cultivo con Candida albicans y Cryptococcus neoformans.
 Láminas de Candida albicans en Agar harina de maíz.
 Láminas de Cryptococcus neoformans en tinta china.
 Cortes histológicos con C. albicans y Cr. Neoformans.
 Material básico de laboratorio (xilol, algodón, alcohol)
 Microscopios con lentes de menor y mayor aumento.
observando el aspecto y consistencia de la colonia.
2. Observar al microscopio las características que presentan cada especie de
los hongos en el Agar harina de maíz, tinta china y en los cortes histológicos.
CARACTERISTICA DE LOS HONGOS LEVADURIFORMES
Candida albicans
Las colonias son de aspecto cremoso y consistente, de color blanco perlado.
En el Agar- almidón- arroz, se observan clamidospora, pseudomicelio y
blastospora que tipifican a Candida albicans. En los cortes histopatológicos
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
observar la presencia de filamentos cortos y levaduras en las lesiones rodeadas

de una zona de histiocitos.
Cryptococcus neoformans:
Las colonias son de color blanquecino perlado al inicio, luego se tornan de color
ocre, de aspecto mucoide viscosas y brillantes con tendencia a deslizarse hacia
el fondo del tubo de cultivo.
En las láminas con tinta china se aprecia la cápsula como un halo brillante entre
el borde de la levadura y el fondo oscuro dado por la tinta china.
En los cortes histopatológicos, se observan como levaduras a lo largo de los
vasos en las lesiones, las cuales comprimen los tejidos vecinos y los necrosan,
escasa infiltración celular.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
PRACTICA Nº 29 - SEMANA 15
ESTUDIO DE HONGOS DIMORFICOS. OBSERVACION DE CORTES
HISTOPATOLOGICOS.
INTRODUCCION:
Los hongos dimórficos, son hongos causantes de infecciones mucocutáneas y/o
sistémicas en el hombre y algunos animales.
Paracoccidioides brasiliensis:
En su fase inicial esporógena, se encuentra en el suelo, fragmentos vegetales,
espinas, etc. Y en su fase de levadura en tejidos infectados.
Es el agente causante de la Paracoccidioidomicosis, infección crónica,
granulomatosa de la piel, mucosa, ganglios y vísceras. Es más frecuente entre
los trabajadores rurales.
Histoplasma capsulatum:
En el ambiente natural se encuentra en la fase miceliar esporógena, que se
desarrolla principalmente sobre compuestos nitrogenados, tales como excretas
de aves (gallina, lechuza), excremento de murciélagos, etc., y en su fase de
levadura se encuentra en tejido infectado.
Es el agente causal de la Histoplasmosis que puede afectar el sistema
respiratorio en su forma benigna pudiendo producir calcificaciones dispersas en
los campos pulmonares.
Sporothrix schenckii:
Hongo que vive en el suelo, sobre plantas, produce la Esporotricosis en el
hombre y algunos animales, el hongo ingresa generalmente por traumatismo con
restos punzantes de vegetales contaminados con el hongo. La infección esta
localizada preferentemente en los ganglios linfáticos
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
MATERIALES:
 Cultivo en Agar Sabouraud y Agar BHI de P. brasiliensis, H. capsulatum,
S. schenckii.
 Microcultivos coloreados con Azul de lactofenol
 Cortes histológicos infectados por estos hongos.
observando el tipo de micelio, aspecto de la colonia y consistencia de la colonia.
2. Observar las características microscópicas de cada uno de los hongos.
CARACTERISTICAS DE LOS HONGOS DIMORFICOS

Paracoccidioides brasiliensis
En los frotices coloreados con Leishman o en cortes histológicos, se presentan
como células esféricas u ovaladas de 10 a 80 micras de diámetro, con doble
membrana y multigemantes.
En cultivo en Agar Sabouraud glucosado desarrolla colonias de micelio aéreo
de color blanco compacto, de crecimiento lento. Microscópicamente se observan
filamentos hialinos, tabicados con microconidias esféricas o piriformes.
En Agar Infusión cerebro corazón (BHI), se observan colonias cerebriformes, de
color beige claro. Microscópicamente se observan células esféricas.
Histoplasma capsulatum
En frotices o cortes histológicos se observan intracelularmente como nidos de
levadura incluidas en los histiocitos o polimorfonucleares. Las levaduras son
pequeñas, redondas u ovaladas de 1-3 micras de diámetro.
En Agar Sabouraud glucosado, desarrolla colonias algodonosas de color
blanco. Microscópicamente se observan hifas tabicadas con escasa producción
de microconidias y gran cantidad de macroconidias tuberculadas redondas y
grandes de pared gruesa “Clamidospora tuberculada”.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
En el medio BHI desarrolla colonias pequeñas de aspecto membranoso rugoso,

color marrón claro. Microscópicamente, se observan como células ovaladas a
veces gemantes.
Sporothrix schenckii
En Agar Sabouraud glucosado desarrolla colonias al inicio pequeñas,
blanquecinas presentando posteriormente un aspecto húmedo, rugoso y
membranoso, de un color que puede variar de crema a negro.
Microscópicamente se observan hifas finas tabicadas con cortos conidióforos en
cuyo extremo se encuentran las conidias agrupadas dando el aspecto de una
margarita.
En medio BHI, desarrolla colonias levaduriformes. Al microscopio se observan
células en gemación ovales o en forma de cigarrillos Gram positivos.
PROTOCOLO
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
BIBLIOGRAFÍA
Bibliografía Básica
 Struthres, Keith; Microbiología Clínica; Edit. Manuel Moderno; Ed. 1; 2018;

ELIBRO.
Bibliografía Complementaria
 Ramírez Ponce, Rafael, Microbiología Clínica Básica, Ed.1, Edit. Jesús G.

Bellido M, 2017, Lima/Perú.
 Biblioteca Virtual – Www.Upsjb.Edu.Pe
Base de Datos
 Intranet UPSJB.
 Plataforma Blackboard Learn Ultra
 Grabación Asincrónica de Clase
 Plataforma Upto Date https://biblioteca.upsjb.edu.pe/#/biblioteca
 Plataforma Turnitin
 EBSCO-Host https://biblioteca.upsjb.edu.pe/#/biblioteca
 Scopus https://biblioteca.upsjb.edu.pe/#/biblioteca
Publicaciones UPSJB.
 Caro-Castro J, Mestanza O, Quino W, et al. Molecular diversity in pathogenic

variants of Vibrio parahaemolyticus in Peru. Rev Peru Med Exp Salud Publica
2020; 37: 270–275.
 De León LF, Cornejo A, Gavilán RG, et al. Hidden biodiversity in Neotropical
streams: DNA barcoding uncovers high endemicity of freshwater
macroinvertebrates at small spatial scales. PLoS One 2020; 15: 1–13.
 Pillaca-Pullo O, Rodrigues D, Sánchez-Moguel I, et al. Recombinant l-
asparaginase production using Pichia pastoris (MUTs strain): Establishment of
conditions for growth and induction phases. J Chem Technol Biotechnol 2021;
96: 283–292.
 Quino W, Caro-Castro J, Mestanza O, et al. Phylogenetic structure of Salmonella
Enteritidis provides context for a foodborne outbreak in Peru. Sci Rep 2020; 10:
1–6.
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
 Quino W, Mestanza O, Caro-Castro J, et al. Resistoma y genómica comparativa

de aislados clínicos de Escherichia coli diarreogénica en Lima, Perú. Rev Peru
Med Exp Salud Publica 2020; 37: 705–10
Código MEH-OT-01
Versión V.2
Aprobación
FORMATO DE EVALUACIÓN RÚBRICA

COGNITIVO, PROCEDIMENTAL Y ACTITUDINAL POR COMPETENCIAS DE LA EPMH
INSTRUMENTO-RÚBRICA PARA MEDICIÓN DEL LRPD

Asignatura / Tipo de MICROBIOLOGÍA MÉDICA
Evaluación:
Profesor:
REGISTRA LA CALIFICACIÓN PARA EL NIVEL DE LOGRO CORRESPONDIENTE MEDIANTE LA ESCALA DE LIKERT, CADA UNA
CONTIENE LA DESCRIPCIÓN SEGÚN LOS CRITERIOS ESTABLECIDOS.
RÚBRICA INTEGRAL QUE CONTEMPLA TRES DIMENSIONES: COGNITIVO, PROCEDIMENTAL Y ACTITUDINAL.
M.A.C. PPMH
MUY NO
CRITERIOS EXCELENTE SATISFACTORIO INSUFICIENTE
SATISFACTORIO SATISFATORIO
CRITERIO 1 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%
CONCEPTOS, CARACTERÍSTICAS, PATOGENIA:
CUMPLE
identifica y diferencia las bacterias, virus y hongos NO CUMPLE LO
PARCIALMENTE CUMPLE
causantes de infecciones en la salud humana. SOLICITADO
CUMPLE LO DE MANERA PARCIALMENTE LO NO CUMPLE LO
Reconoce las características microsocópicas y PERO EVIDENCIA
SOLICITADO 100% POSITIVO LO SOLICITADO EN UN SOLICITADO. 0%
macroscópicas de los microorganismos. Conoce y TRABAJO MINÍMO
SOLICITADO A UN 50%
analiza los mecanismos de patogenicidad y virulencia EN UN 30%
75%
de los patógenos. (CC)
CRITERIO 2 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%
DIAGNÓSTICO: Identifica a los microorganismos a
través de las técnicas de aislamiento, pruebas
presuntivas y confirmativas. (CC)
CRITERIO 3 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%
SEMINARIOS: se enfoca en el tema. Utiliza información
actual y propone soluciones. Sigue una secuencia
lógica y ordenada. Evidencia impacto visual. Domina el
tema. Expone con voz clara y fuerte. (CP)
CRITERIO 4 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%

CASOS PROPUESTOS : analiza y asocia los signos y
síntomas con el agente causal.
Realiza comentario y/o análisis de manera puntual
(CP)
CRITERIO 5 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%
BIOSEGURIDAD, AISLA E IDENTIFICA A LOS
MICROORGANISMOS: ingresa al laboratorio con la
vestimenta adecuada y desarrolla sus actividades con
la metodología y procedimientos establecidos; conoce
los métodos de siembra, los medios de cultivo;
identifica mediante pruebas bioquímicas y
confirmativas a los microoganismos en estudio (CP)
CRITERIO 6 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%
RESPETO, TOLERANCIA Y EMPATÍA. Asume un
comportamiento basado en valores éticos y respeto en
el desarrollo de sus actividades en el aula. Muestra
tolerancia y empatía con sus compañeros (CA)
CRITERIO 7 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%

PUNTUALIDAD Y RESPONSABILIDAD: cumple con las
fechas de presentación y logra los objetivos de los
temas desarrollados. (CA)
CRITERIO 8 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%

ELABORA INFOGRAFÍAS, relaciona ideas y conceptos,
capacidad de análisis y resumen, impacto visual,
registra datos y referencias actualizadas. (CP)
CRITERIO 9 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%

TRABAJO EN EQUIPO: con responsabilidad y asume
decisiones. (CA)
CRITERIO 10 80% - 100% 60% - 80% 40% - 60 20% - 40% 0 - 20%

COMENTARIOS Y APORTES: interviene y participa en
clases teóricass y prácticas. (CA)
FECHA Y FIRMA DEL ESTUDIANTE (OPCIONAL EN PORTAFOLIO VIRTUAL)

FECHA Y FIRMA DEL PROFESOR RESPONSABLE (OPCIONAL EN PORTAFOLIO VIRTUAL)
*La evaluación actitudinal abarca todas las actividades que desarrollo el Estudiante (Teoría - Práctica)
*M.A.C. PPMH (Matriz de Articulaciones de Competencias - Programa de Pregrado de Medicina Humana

G.P. L. Microbiologia Médica 2022

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

G.P. L. Microbiologia Médica 2022

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PLAN DE ESTUDIOS: 2020

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

I. INFORMACION GENERAL (*)

II. SUMILLA (*)

La asignatura de Microbiología Médica pertenece al área de Formación

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

En el ámbito de la salud y la medicina, la microbiología resulta de gran

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

DESARROLLO DE LAS ACTIVIDADES APRENDIZAJE

RESULTADO DE APRENDIZAJE (LRPD-Resultados que pueden denominarse:

Producto formativo de la asignatura:

Producto formativo de las unidades:

Unidad Producto Formativo

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

PROTOCOLO DE BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS Y TALLERES EN

Resolución Rectoral N° 004-2021-R-UPSJB Fecha de Aprobación: 5 de mayo

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL USO DEL LABORATORIO

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

11. Al finalizar el trabajo:

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

Barreras secundarias: Localizadas en el círculo del operador, incluirán:

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

 No inhalar los aerosoles producidos durante la centrifugación, la

 Presuponer que todos los pacientes están potencialmente infectados

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

DESINFECCIÓN, DESCONTAMINACIÓN Y ESTERILIZACIÓN Existen muchos

 Agentes desinfectantes: destruyen microorganismos en superficies e

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

 Agentes esterelizantes: destruyen toda forma de vida incluidas las esporas.

 Eliminación de residuos peligrosos Todos los materiales contaminados son

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO:

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

4. Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10 x , 15 x, y los

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

 Sangre: hacer un frotis como para un examen hematológico, depositar

3. FIJACIÓN: Cuando la extensión esté bien seca, proceder a la fijación. Sólo

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

EXAMEN DE LAS PREPARACIONES TEÑIDAS

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

COLORACIÓN AZUL DE METILENO:

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

COLORACIÓN DE TINTA CHINA O NEGATIVA:

COLORACIÓN AZUL DE LACTOFENOL:

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

 Pipetas pauster de plástico

1. Dividir la lámina en 3 partes: 1/3 para rotular el N° de muestra y 2/3 para la

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

PROTOCOLO: Esquematice o dibuje lo observado en la práctica.

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

COLORACION HISS (PARA CAPSULA)

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

GUÍA DE PRÁCTICA Nº Página 2 de 60

requerimientos especiales. El medio más conocido de este grupo es el agar