Medios de cultivo y conservación

Juan Ricardo Urrego Alvarez Q.F.

Docente
Los medios de cultivo son complejos y consisten en
una mezcla de diversos componentes: azúcares,
aminoácidos, electrolitos, vitaminas, suero fetal
bovino y una mezcla de peptonas, factores de
crecimiento, hormonas y otras proteínas.
 Condiciones para crecimiento bacteriano y
propagación
Temperatura
-Las bacterias pueden crecer y prosperar en una variedad de
ambientes.

-Las temperaturas óptimas de crecimiento pueden variar

significativamente entre las especies (Ej. Especies patógenas 37oC).
- Psicrófilos (0o a 20oC)
- Mesofilos (25oC a 40oC)
- Termófilos (45oC a 122oC)

-La mayoría de las cepas pueden soportar caídas considerables de

temperatura y sobrevivir varios días a 4 ° C
 Condiciones para crecimiento bacteriano y
propagación
Atmosfera
Las bacterias también difieren en su
uso de oxígeno para la respiración. Anaerobios obligados
(Ej. Clostridium ssp)
*Aeróbicos  Oxígeno como -O2
aceptor terminal de electrones
durante la respiración.
Anaerobios aereotolerantes
(Ej. Lactobacillus ssp)
* Microaerófilos  Requieren el
uso de oxígeno, pero a niveles más -O2
bajos

* Anaeróbicos  Utilizan aceptores Anaerobios facultativos

de electrones como el nitrato o (Ej. Escherichia coli)
sulfato (menor potencial de
 Condiciones para crecimiento bacteriano y
propagación

Cultivo anaeróbico
• Mixtura gaseosa de 80% N2, 10% CO2, and
10% H2.
Principales componentes para el crecimiento de
células de mamíferos empleadas en cultivos
 Medios de cultivo bacterianos

Los medios de cultivo pueden clasificarse en varios

grupos:

Medio definido: Composición conocida.

Medio complejo: Composición desconocida. (Ej. Extracto

de levadura, peptona)

Medios selectivos: Formulado para inhibir/promover el

crecimiento de ciertas especies bacterianas
 Medios de cultivo bacterianos
Luria-Bertani Broth Medium (LB)
• Es un medio de uso general utilizado para la
propagación y el mantenimiento de
Escherichia coli para aplicaciones de
biología molecular.

• Consta de triptona, extracto de levadura y

cloruro sódico .

• LB también se puede preparar como un

medio sólido mediante la adición de agar.
Triptona: Es un digerido
• Este medio a menudo se suplementa con pancreático de caseína, se
utiliza como fuente de
varios antibióticos para el mantenimiento nitrógeno
del ADN plasmídico.
 Medios de cultivo bacterianos

Tryptic Soy Agar

• Aislamiento y propagación de una
variedad de cepas bacterianas.
• Base de soja tríptica,
suplementada con 5% de sangre
de oveja.
• La adición de sangre de oveja
ayuda a facilitar el crecimiento de
las bacterias más exigentes. La base triptica de la soja
consiste en una
combinación de triptona,
soytone, y cloruro de sodio.
 Medios de cultivo bacterianos
Nutrient Agar/Broth
• Cultivo de cepas bacterianas no
fastidiosas.

• Extracto de carne y peptona.

• Puede ser enriquecido con

caldo de infusión de corazón.
• Puede usarse para el
crecimiento selectivo de cepas
especıficas mediante (adición
de cloruro de sodio).
La peptona son polipéptidos
hidrosolubles que se forman
mediante la degradación
enzimática de proteína de origen
animal
Se usa en medios bacterianos
como una fuente orgánica de
nitrógeno
 Titulación del cultivo bacteriano

Los cultivos se pueden

titular:
-Determinación del número
de unidades formadoras de
colonias por mililitro (CFU /
mL)
-Midiendo la densidad
óptica a una longitud de
onda de 600 nm (OD600).
 Métodos de conservación
Criopreservación

La criopreservación es un método de
preservación mediante congelamiento a
muy bajas temperaturas (-70oC a -
130oC).

El glicerol y el DMSO son los agentes

crioprotectores más comunes.

“Congelar una suspensión de células vivas

puede resultar en una disminución en la
viabilidad".
Criopreservación
 Métodos de conservación
Criopreservación
• Reducción del riesgo de contaminación microbiana

• Reducción del riesgo de contaminación cruzada

con otras líneas celulares

• Reducción del riesgo de deriva genética y cambios

morfológicos

• Costos reducidos (consumibles y tiempo del

personal)
Potenciales contaminantes en los productos recombinantes
derivados de hospederos bacterianos y no bacterianos
 Cultivo bacteriano

Siembra de las Siembra por estría

Preparación bacterias (A partir de por agotamiento
placas de petri stock criopreservado)

Preparación del pre-

Incubación a 37oC o/n inoculo (A partir de
varias colonias Preparación del cultivo a
formadas) mediana escala
Cultivo celular eucariotas
 Prueba de actividad biológica de los alérgenos e hipalérgenos

Allergen

Una herramienta útil para el control de Human

IgE
normalización y lote de extractos de
alérgenos. Human
FcεRI

Debido a su alta sensibilidad, se puede

utilizar para detectar pequeñas
cantidades de proteínas potencialmente
alergénicas, por ejemplo, en los
alimentos procesados.

Además, la prueba puede apoyar el

desarrollo de nuevas vacunas para las Inflammatory
alergias, como las moléculas mediator release
recombinantes hipoalergénicas.

Basófilos humanizados de rato (huRBL)

 Sobrenadante
(suero depletado)

Incubación
o/n a 37°C/7% CO2
Centrifugación Lavar con
huRBL solución
50 µl/pozo Tyrodes/H2
Sueros Suspensión de células O/BSA
Pre-incubación (106 células/mL)
Células AG-8
(Remoción complemento)
1h a 37°C/7% CO2

100 µl de Sln Incubar

de Antigeno 1h a
37°C/7%
CO2

Transferir 50 µl del
sobrenadante

Medir fluorescencia Adicionar 50 mL de solución

360 nm de 0.1 M citrato/4-MUG
Ensayo de medición de degranulación de basófilos
humanizados de ratón (huRBL)
Gracias