DETERMINACIÓN DE NITRITOS EN AGUAS MEDIANTE

ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR

Introducción

Los nitritos (NO2-) son compuestos no deseados en la composición de las aguas

potables debido a que la presencia de un exceso de nitritos puede originar en niños
pequeños lo que se conoce como "síndrome del bebé azul" que consiste en la
formación de metahemoglobina por oxidación del hierro de la hemoglobina, impidiendo
el transporte de oxígeno a los tejidos y, por tanto, la muerte. Además, ciertas
investigaciones ponen de manifiesto que los nitritos pueden originar cáncer de
estómago debido a que en su reacción con las aminas secundarias de los alimentos se
producen N-nitrosaminas, algunas de las cuales son cancerígenas.

Debido a que las fuentes de los nitritos en las aguas son la descomposición biológica
del material proteico y la oxidación del amoniaco (NH3) o la reducción de nitratos (NO3-)
por parte de microorganismos, la presencia de nitritos en aguas indica una posible
contaminación orgánica y microbiológica.

En el R. D. 140/2003 de 7 de Febrero que establece los "Criterios de calidad del agua

de consumo humano" los valores paramétricos de nitritos son: 0.5 mg/L en la red de
distribución y 0.1 mg/L a la salida de la potabilizadora y su análisis se realizará si se
aplicaron cloraminas (NH2Cl, NHCl2, NCl3) en el proceso de potabilización.

Espectrofotometría de absorción molecular UV-Vis

El método oficial para la determinación de nitritos en aguas es un método

espectrofotométrico basado en la reacción de nitritos con ácido sulfanílico y N-(1-naftil)-
etilendiamina para generar un compuesto coloreado. La reacción se conoce con el
nombre de Griess-Salzman.

H
H

+ H+

En las condiciones adecuadas, y en función de la reacción descrita, la concentración del

colorante azoico al que se le mide la absorbancia esta directamente relacionada con la
concentración de nitrito presente en la muestra de agua.
Las especies químicas tienen la capacidad de absorber radiación electromagnética a
ciertas longitudes de onda características. En espectrofotometría de UV-VIS la señal
analítica utilizada en la cuantificación es la absorbancia (A). Dicha absorbancia está
relacionada linealmente con la concentración de la especie absorbente, c, y con la
longitud de la trayectoria de la radiación en el medio absorbente o camino óptico, b,
mediante la ley de Lambert-Beer:

La constante de proporcionalidad se denomina absortividad molar (cuando c viene

expresada en mol/L y b en cm), y se designa por el símbolo ε, y, puesto que la
absorbancia es una magnitud adimensional, tendrá unidades de L/cm mol.

El análisis cuantitativo de una especie mediante una técnica instrumental, requiere una
etapa previa de calibración. En este caso, se mide la absorbancia de varias muestras de
concentración conocida, las cuales serán utilizadas para, mediante el uso del calibrado,
calcular la concentración de una muestra problema tras medir su absorbancia.

Para llevar a cabo la etapa de calibración, se representa la absorbancia de las muestras

de concentración conocida (llamadas patrones) a la longitud de onda seleccionada,
frente a la concentración de dichas muestras. De esta manera se obtiene la Curva de
Calibración.

Según la ley de Lambert-Beer, el resultado obtenido será una línea recta, cuya
expresión matemática puede ser obtenida mediante un tratamiento de ajuste estadístico
por mínimos cuadrados.

Instrumentación
- Espectrofotómetro de diodos Hewlett Packard Vectra ES/12

Reactivos
- Nitrito sódico
- Ácido sulfanílico
- Diclorhidrato de N-(1-naftil)-etilendiamina
- Ácido acético glacial

El reactivo colorimétrico se prepara disolviendo 3 g de ácido sulfanílico en 130 mL de

ácido acético glacial. Una vez disuelto se añaden 0.3 g de diclorhidrato de N-(1-naftil)-
etilendiamina y se lleva a un volumen de 1 L con agua destilada.

Para la preparación del calibrado son necesarias dos disoluciones madre de nitrito
sódico que nos aporten la concentración adecuada y perfectamente conocida de NO2-.
La primera, una disolución de 150 mg/L (150 ppm) de nitrito sódico equivalente a 100
mg/L de NO2- (100 ppm). La segunda, obtenida al diluir 100 veces la primera, una
disolución de 1.5 mg/L de nitrito sódico (1.5 ppm) equivalente a 1.0 mg/L de NO2- (1.0
ppm). Ésta última se tomará como origen para preparar el conjunto de patrones de
calibración.
Procedimiento

Calibrado
1.- En matraces aforados de 25.0 mL se ponen 15 mL del reactivo colorimétrico y 0.0;
1.0; 2.0, 4.0; 5.0 y 8.0 mL de la disolución de nitrito de 1.0 ppm para que las
concentraciones finales sean 0.00; 0.040; 0.080; 0.16; 0.20; y 0.32 ppm de NO2-. Todas
las disoluciones se enrasan con agua destilada hasta 25.0 mL. Se dejan estar 15
minutos para que se desarrolle el color (se produzca la reacción) agitando de vez en
cuando.

2.- Se obtiene el espectro de absorción del producto de la reacción para seleccionar la

longitud de onda más adecuada para la determinación.

3.- Se mide la absorbancia de los patrones frente al blanco (el patrón preparado con
0.00 mL añadidos de NO2-) en orden creciente de concentraciones a la longitud de onda
elegida, utilizando la misma cubeta. Para ello, después de cada medida:
a) Se deshecha la disolución patrón ya medida.
b) Se limpia la cubeta con agua destilada varias veces.
c) Se limpia la cubeta con la nueva disolución patrón una vez.
d) Se llena la cubeta con la nueva disolución patrón, se limpia de forma
adecuada y se realiza la medida.

4.- Se representan los valores de absorbancia frente a la concentración de los patrones

(curva de calibrado).

5.- Mediante un ajuste de regresión por mínimos cuadrados, se calcula la ecuación de la

recta obtenida.

Medida de muestras problema

1.- En un matraz de 25.0 mL se ponen 15 mL del reactivo colorimétrico, 8.0 mL de agua
de la muestra problema y se enrasa con agua destilada.

2.- Se mide la absorbancia de la muestra problema con el mismo procedimiento que la

medida de cualquiera de los patrones previos.

3.- Se calcula el contenido en nitritos en la muestra de agua problema, expresando el

resultado en mg/L (ppm) de NO2-.