Tinción de Gram

Se clasifica tinción diferencial cuando se visualiza más de un

Tinciones color porque se utiliza más de un colorante, (Gram o Ziehl-
diferenciales Neelsen)

La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en

el lugar donde se sospecha una infección, como la garganta, Tinción
los pulmones, los genitales o las lesiones en la piel. Las
tinciones de Gram también se pueden usar para detectar
bacterias en ciertos fluidos corporales, como la sangre o la
de Gram
orina.
Las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram
negativas. Están formadas por una pared más fina formada por menos capas de
peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción
Gram), al microscopio aparecen incoloras. Las Gram positivas tienen una pared
celular mucho más gruesa, formada por un gran número de capas de
peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un color violeta
intenso al microscopio y se clasifican como Gram +. Se visualizarán de color
violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.

PROCEDIMIENTO DE LA TINCIÓN DE GRAM

Material
 Placa Petri con agar
chocolate
 Asa de siembra o material
estéril para sembrar
 Mechero de alcohol
 Agua destilada
 Colorantes de tinción Gram
(cristal violeta, lugol, alcohol-
acetona 1:1, safranina)
 Cristalizador y varillas de
tinción
 Portaobjetos
 Alcohol 96º
 Papel secante
 Microscopio óptico
 PROCEDIMIENTO
En primer lugar, para realizar una tinción, lo que tenemos que tener son microorganismos
sembrados. Dichos microorganismos los hemos el día anterior mediante la técnica de siembra
de estría múltiple, los hemos dejado incubar durante 24 horas a 37ºC en la incubadora para así
obtener las colonias de los diferentes microorganismos. En este caso son microorganismos de
la orofaringe.
Siempre que “destapemos” una placa
con colonias, deberá hacerse en
condiciones de esterilidad. Para
conseguir estas condiciones podemos
utilizar un mechero Bunsen o un
mechero de alcohol. Con el mechero,
conseguiremos que se forme un
ambiente de esterilidad alrededor de la
llama, por lo tanto, si trabajamos cerca
A la hora de comenzar con la tinción, lo
del mechero, tendremos un ambiente
primero que hay que realizar es un frotis
estéril.
del microorganismo, para ello hay que
añadir una gota pequeña de agua
destilada (cuanto mayor sea la gota,
tardará más tiempo en secarse).

Debemos tomar la muestra con el asa

bacteriológica previamente esterilizada.
Para ello encendemos el mechero de
alcohol y ponemos el asa en posición
vertical encima del mechero hasta que el
hilo del extremo del asa se quede
totalmente incandescente.
Después debemos esperar a que se
enfríe porque si tocamos con el hilo
incandescente las colonias podemos
matar al microorganismo. Abrimos la
placa con las bacterias y con el asa
tocamos en el agar para comprobar que
éste está frío.

A continuación, tomaremos unas

colonias de las bacterias y las
extendemos sobre la gota de
agua destilada.

Una vez fijada la muestra apagamos el

mechero por seguridad. Ahora, vamos a teñir
nuestra siembra de microorganismos en el
portaobjeto con diferentes tipos de tinciones
para poder visualizar cada microorganismo
(bacteria) al microscopio. Las tinciones se
realizan en un cristalizador, también
utilizamos varillas de tinciones y el porta con
la muestra. Vamos a utilizar diferentes reactivos
para la tinción. En primer lugar el
cristal violeta, en segundo lugar el
lugol.

Usaremos también alcohol de 96º (el

decolorante puede estar formado por una
mezcla de alcohol, alcohol-acetona y por
diferentes mezclas).
Y por último la
safranina.