Fecha emisión:

PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE
19-08-2005
ACIDOS GRASOS SATURADOS,
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MONOINSATURADOS, POLIINSATURADOS
Y ACIDOS GRASOS TRANS
Método Cromatografía Gaseosa (GC-FID) Fecha revisión:
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1. OBJETIVO
Determinar el perfil de los ácidos grasos, incluidos los isómeros de ácidos grasos trans (AGTs)
en grasas y aceites de origen vegetal y animal.

2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

El método está diseñado para evaluar el perfil de ácidos grasos en aceites y grasas vegetales y
animales.

3. FUNDAMENTO
Los ácidos grasos metilados de las muestras son separados y cuantificados por cromatografía
gaseosa con detector FID en columna capilar de fase reversa.

4. REFERENCIAS
ISO 15304 ”Animal and vegetable fats and oils – Determination of the content of trans fatty acid
isomers of vegetable fats and oils – Gas chromatographic method.

5. TERMINOLOGÍA
Ácidos grasos trans: isómeros de configuración trans de todos aquellos ácidos grasos que
contienen dobles enlaces.

6. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.1 MATERIALES Y EQUIPOS
6.1.1 Cromatógrafo de gases equipado con detector FID, muestreador automático, helio como
gas carrier
6.1.2 Balanza de precisión 0.001 g
6.1.3 Agitador mecánico de tubos
6.1.4 Micropipeta de 1000 µL
6.1.5 Viales con tapa de 2 mL para autosampler
6.1.6 Columna capilar DB-23 fase reversa, 60 m, 0.25 mm i.d., 0.25 µm de film
6.1.7 Tubo de vidrio tapa rosca de 10 mL
6.2 REACTIVOS
6.2.1 Éter de petróleo p.a.
6.2.2 Solución de hidróxido de potasio en metanol, 2 M
6.2.3 Estándar mezcla de 37 ésteres metílicos de ácidos grasos.
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7. DESARROLLO
7.1 Preparación de la muestra
Antes de tomar la muestra, mezclar completamente. Fundir las muestras sólidas para asegurar
una buena homogeneización, a no más de 60 °C.

7.1.1 Preparación de los ésteres metílicos: Pesar entre 100 y 250 mg de muestra en un tubo de
vidrio con tapa rosca.
7.1.2 Agregar 500 µL de hidróxido de potasio en metanol, 2 M.
7.1.3 Agregar 5 mL de éter de petróleo.
7.1.4 Agitar 2 min en vortex, reposar 1 hora.
7.1.5 Trasvasijar a los viales del muestreador automático.
7.1.6 Inyectar.

7.2 Condiciones cromatográficas

-T° detector: 250 °C
-T° inyector: 250 °C
-Flujo gas carrier: 33 psi
-Split: 1:100
-Volumen de inyección: 1 µL
-Programa de temperatura del horno: 120 °C por 5 min,
Aumentar la temperatura a razón de 10 °C/min hasta 180 °C, mantener por 30 min.
Aumentar nuevamente a razón de 10 °C/min hasta 210 °C y mantener por 21 min.
(total 65 min).

7.3 Expresión de resultados

7.3.1 Identificación
Para la identificación de los ácidos grasos, hacer la relación respecto al tiempo de retención del
ácido graso C16:0 y comparar con los obtenidos para los estándares. Usar la siguiente formula:

_____tr ácido graso____

tr ácido graso C16:0

donde : tr = Tiempo de retención

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7.3.2 Cuantificación

Para cuantificación de los ácidos grasos trans, hacer zoom en la zona de los C18, entre los 24 a
34 min.
La fracción de masa relativa de cada ácido graso se calcula determinando el área corregida del
peak correspondiente dividiéndola por la suma de las áreas corregidas de todos los peaks.
El área corregida por Peak se calcula obteniendo el factor de respuesta FID (FX) y el factor de
corrección FID (fX) para cada ácido graso (ver anexo adjunto). Se informa el porcentaje de área
> 0,01 del porcentaje total corregido para cada ácido graso. Para el cálculo de la fracción de
masa relativa, considerar la siguiente formula :

wx = Ax * fx *100 % _
At

wx = masa relativa del componente x, en porcentaje por área del Peak.

Ax = área del peak correspondiente al componente x, en unidades de área.
fx = factor de corrección para el componente x
At =suma de las áreas corregidas para todos los peaks, excluyendo el área del solvente, en
unidades de área.

(para el cálculo del factor de corrección y factor de respuesta de FID ver Anexo N° 1).

Cálculo de AGTs en aceites y grasas refinadas : Calcular los isómeros trans como la suma de
las fracciones de masa relativa de los esteres metílicos de C18:1 trans, C18:2 trans y C18:3 trans,
El máximo de peaks posibles de encontrar son C18:1 trans (1 peak), C18:2 trans (2 peak) y
C18:3 trans (4 peak). Se expresa con 2 decimales.

Cálculo de AGTs en Aceites y grasas parcialmente hidrogenadas: Calcular los isómeros trans
como la suma de todas las fracciones de masa relativa de todos los esteres metílicos de los ácidos
grasos que contienen dobles enlaces con configuración trans, relativo a la suma de los ésteres
metílicos de todos los ácidos grasos. Se expresan con 2 decimales.
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ANEXO N° 1

Cálculo de fracción de masa relativa de cada componente para la determinación de ácidos

grasos saturados, monoinsaturados, poliinsaturados y ácidos grasos trans

La fracción de masa relativa de cada componente se calcula a partir de la determinación del

área corregida del peak relativo correspondiente, considerando la suma total de las áreas
corregidas de todos los peaks. La corrección es necesaria para compensar la respuesta del FID
para cada componente. Para eso, es necesario calcular el factor de respuesta de FID y el factor de
corrección de FID.

Cálculo del factor de respuesta del FID

Calcular el factor de respuesta para cada componente según la ecuación:

Fx =_ Mx___
(nx-1)Ac
Donde:

Fx = Factor de respuesta para el componente x

Mx = masa molecular relativa del componente x
nx = número de átomos de carbono del ácido graso metilado del componente x
Ac = masa atómica relativa del carbono (12,01)

Cálculo de factor de corrección FID

Calcular el factor de corrección FID para cada componente según la ecuación:

fx= _Fx_
Fr
Donde:

fx = es el factor de corrección para el componente x

Fx = Factor de respuesta para el componente x
Fr = es el factor de respuesta para el C16:0 (Fr = 1,407)
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El factor de respuesta de FID para C16:0 (Fr = 1,407) es considerado como referencia (fx =
1,00). Todos los otros factores corregidos FID usados en los calculos son relativos a ese valor .
Por ejemplo, el factor de corrección para C10:0 es 1,10.

Cálculo de la fracción de masa relativa

wx = Ax * fx *100 % _
At

wx = masa relativa del componente x, en porcentaje por área del Peak.

Ax = área del peak correspondiente al componente x, en unidades de área.
fx = factor de corrección para el componente x
At =suma de las áreas corregidas para todos los peaks, excluyendo el área del solvente, en
unidades de área

Tabla Resumen.
Factores de Respuesta FID y Factores de Corrección FID

Número de átomos
Masa Factor de Factor de
de carbono del
Molecular Respuesta Correccion FID
ácido graso
(Mx) FID (Fx) (fx)
metilado (nx-1)
C4:0 102,13 4 2,13 1,51
C6:0 130,18 6 1,81 1,28
C8:0 158,23 8 1,65 1,17
C10:0 186,28 10 1,55 1,10
C11:0 200,30 11 1,52 1,08
C12:0 214,33 12 1,49 1,06
C13:0 228,35 13 1,46 1,04
C14:0 242,38 14 1,44 1,02
C14:1 240,36 14 1,43 1,02
C15:0 256,40 15 1,42 1,01
C15:1 254,39 15 1,41 1,00
C16:0 270,42 16 1,41 1,00
C16:1 268,41 16 1,40 0,99
C17:0 284,45 17 1,39 0,99
C17:1 282,44 17 1,38 0,98
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C18:0 298,47 18 1,38 0,98

C18:1 296,46 18 1,37 0,97
C18:2 294,45 18 1,36 0,97
C18:3 292,43 18 1,35 0,96
C18:4 290,42 18 1,34 0,95
C20:0 326,52 20 1,36 0,97
C20:1 324,51 20 1,35 0,96
C20:2 322,50 20 1,34 0,95
C20:3 320,48 20 1,33 0,95
C20:4 318,47 20 1,33 0,94
C21:0 340,55 21 1,35 0,96
C20:5 316,45 20 1,32 0,94
C22:0 354,57 22 1,34 0,95
C22:1 352,56 22 1,33 0,95
C22:2 350,55 22 1,33 0,94
C22:5 344,50 22 1,30 0,93
C22:6 342,49 22 1,30 0,92
C23:0 368,60 23 1,33 0,95
C24:0 382,62 24 1,33 0,94
C24:1 380,61 24 1,32 0,94