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Determinación de Proteína Por Método Kjeldahl
Determinación de Proteína Por Método Kjeldahl
I. INTRODUCCIÓN
El término proteína fue utilizado por primera vez por el químico Alemán Gerardus
Johannes Mulder, en 1838, para nombrar a un grupo específico de sustancias muy
abundantes en todas las plantas y animales. Mulder pronosticó correctamente la
importancia de las proteínas; tomó este nombre del vocablo griego proteios que
significa primordial o de nivel primario. (Boyer, 2000). En 1883 el investigador
danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad para el
análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno
orgánico.
En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los
alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El
nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de
amonio. La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente.
El amoniaco liberado es arrastrado por destilación y recogido en una solución de
ácido bórico. Los aniones del borato así formado se titulan con HCl estandarizado
para determinar el nitrógeno contenido en la muestra (Bohinski, 1991).
El contenido proteínico de los alimentos puede determinarse por medio de diversos
métodos. El método Kjeldahl se basa en la determinación del nitrógeno. La
determinación del contenido de nitrógeno en muestras de naturaleza orgánica es
importante en muchos campos de análisis, como los relacionados con las industrias
agroalimentaria o farmacológica o con el medio ambiente, entre otros (Dominic et
Wong, 1995).
La forma más habitual es su cuantificación de forma indirecta y aproximada, bien a
partir del contenido en nitrógeno de la muestra, o bien deduciendo su cantidad a
partir del contenido de uno o dos aminoácidos particulares que conforman la
proteína, fáciles de identificar y de cuantificar por su reactividad química específica.
Este segundo procedimiento conlleva una mayor inexactitud. Desde hace más de 100
años se está utilizando el método Kjeldahl para la determinación del nitrógeno en una
amplia gama de muestras (alimentos y bebidas, piensos, forrajes, fertilizantes) para el
cálculo del contenido en proteína. También se utiliza el método Kjeldahl para la
determinación de nitrógeno en aguas residuales y suelos.
Es un método oficial descrito en múltiples normativas: AOAC, USEPA, ISO,
Farmacopeas y distintas Directivas Comunitarias (Morrison et Boyd, 1998).
OBJETIVOS
Comprender los fundamentos del método Kjeldahl para la determinación del
contenido en proteína de un alimento.
Conocer el procedimiento experimental del análisis de proteínas por el
método de Kjeldahl, recogiendo el nitrógeno sobre ácido bórico y
valorándolo con una disolución de ácido clorhídrico o sulfúrico.
II. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
2.1 Método
El método más tradicional de determinación de nitrógeno fue desarrollado hace
más de 130 años por el dinamarqués Johan Kjeldahl, que estudiaba proteínas en
granos. Titulado como Método Kjeldahl, es ampliamente utilizado en la
determinación de nitrógeno total, que, indirectamente, posibilita la
determinación de la proteína bruta. A pesar de algunos cambios a lo largo de los
años, la esencia de la metodología permanece la misma hasta los días actuales
(Agrícola, 2020).
2.1.1 Etapas
2.1.1.1 Digestión
La muestra ya homogeneizada (después de molida) que seguirá para
la digestión es previamente pesada en la balanza analítica y
mezclada en la proporción necesaria de ácido sulfúrico concentrado
en un tubo en borosilicato. Es adicionado catalizador que actuará en
la aceleración de la digestión (Gerhardt, 2015).
2.1.1.2 Destilación
2.1.1.3 Titulación
Determinación
Indicador Shiro-Tashiro.
Datos:
W muestra = 4.8919
G(HCl) muestra =6.75
G(HCl) muestra = 0.2
N(HCl) = 0.25
Remplazamos datos para hallar el porcentaje de nitrógeno:
0.25∗[ 6. 55 ]∗0.014∗100
%N =
4.8919
%N =0.469
% Proteina=%N∗(6,38)
%Proteina=0.469∗( 6,38 )
%Proteina=2.99
IV.2 DISCUSIONES
Según Jhonás A. Vega, (2016):
V∗N∗0.014∗100
%Nitrogeno=
m
Donde:
V. CONCLUSIONES: