METODOS

METODOS DIRECTOS:
DIRECTOS:
TECNICAS
TECNICAS INMUNOLOGICAS
INMUNOLOGICASYY
MICROSCOPIA
MICROSCOPIA ELECTRONICA
ELECTRONICA
Integrantes:
- Quispe Lero Maria del Cielo Deby
- Candia Rodriguez Alisdely
- Peredo Alba Neza
- Viruez Antelo Mariely
- Siles Suarez Elmer
- Villegas choque Yuli
- Marisol flores colque

Grupo : B1 Subgrupo: 3 Virologia – BQM 405 2021 - Santa Cruz


Detección de Antígenos
Técnica Inmunológicas
Se utiliza un anticuerpo
especifico antiviral(por
general IgG). Pueden utilizarse
tanto para la detección de
antígenos (método directo)
como anticuerpo (método
indirecto)
Microscopia Electrónica
Es una de las técnicas mas antiguas y de uso mas
difundido en el laboratorio clínico. Esta técnica se
Inmunofluorescencia directa(ID) puede utilizar para una identificación rápida del
virus directamente sobre la muestra
Es un método simple aveses se •Detectar antígeno de
rotavirus en heces
Test de Aglutinación usa para la detección de
Usado para
antígenos virales en muestras •Para detectar
clínicas antígenos de adenovirus
Los EIA para la detección de antígenos se basan habitualmente en la
Enzimoinmunoanalisis captura del antígeno
Por esta técnica se puede procesar gran numero de muestra en forma
rápida y automatizada
Mediante el microscopio electrónico es posible observar la morfología
de los viriones presentes en muestras clínicas
Radioinmunoensayo (RIA) Es la inhibición competitiva de la unión de un Ag radioactivo
conocido como trazador
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 Tecnicas Inmunológicas
Técnicas Inmunologicas
O inmunoensayos son técnicas analíticas basadas en la reacción especifica Antígeno-Anticuerpo, que permiten tanto la
detección, identificación, tipificación y cuantificación de microorganismos Ag y Ac de grupos sanguíneos. Y también la
detección y cuantificación de enzimas microbianas y toxinas de origen microbiano.

Los antígenos son sustancias extrañas en el organismo,
generalmente proteínas que dan lugar a la formación de
anticuerpos con el que reacciona específicamente.
Los anticuerpos son sustancias (inmunoglobulina)
producidas principalmente por el tejido linfático del
hombre su función es proteger al organismo contra
agentes extraños como las enfermedades en si es una
respuesta inmune al organismo y ahora nos enfocaremos
en nuestro tema.

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Entre las técnicas más utilizadas se encuentran
Clasificacion
Clasificación
●Lectura directa: Aglutinación y Precipitación
●Lectura indirecta:
Reacción de fijación de complemento
Neutralización

Inmunomarcado

Radioinmunoensayo (RIE)

Enzimoinmunoensayo (ELISA)
Inmunofluorescencia
Cada una de ellas presenta diferencias pero conservan el fundamento
general que es el reconocimiento de la unión antígeno-anticuerpo, por
lo que presentamos las características mas importantes de dichas
pruebas.

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Inmunofluorecencia Directa
Inmunofluorecencia Directa
Es una de las técnicas más antiguas y de uso más difundido en el laboratorio
clínico.

El principio básico de la inmunofluorescencia directa se basa en detectar la

presencia de antígeno en las muestras clínicas, que al reaccionar con el
anticuerpo monoclonal marcado con FICT, forma el complejo antígeno-
anticuerpo. Después de la incubación y los lavados se visualiza con el
microscopio de inmunofluorescencia.

La reacción se visualiza con el microscopio de fluorescencia por la aparición

del color verde manzana.

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Esta técnica se puede utilizar para una identificación rápida del virus
directamente sobre la muestra.

Por ejemplo, se pueden observar células eluidas de un lavado nasal o de un

isopado nasofaríngeo, se la puede usar para confirmación de un efecto
citopático observado en cultivos celulares.

Los anticuerpos monoclonales conjugados con isotiocianato de fluoresceína

pueden utilizarse para identificar el virus Respiratorio Sincicial (VRS),
Influenza A y B, Parainfluenza 1,2, 3 y Adenovirus entre otros.

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 Ventajas
Ventajas yy Desventajas
Desventajas
VENTAJAS DESVENTAJAS

• Se necesitan pocos pasos. • Menor sensibilidad.

• Se pueden obtener resultados • El anticuerpo puede perder
rápidos. afinidad.
• Alta especificidad.
.

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 Test
Test de
de Aglutinación
Aglutinación
Es una prueba que se realiza para comprobar la presencia de
anticuerpos en la sangre.
Tiene como propósito identificar previamente un
microorganismo patógeno y como el individuo es capaz de
actuar frente a éste.

PARA QUE SIRVE EL TEST DE AGLUTINACION

• Sirven para detectar anticuerpos.
• Sirve para investigar problemas con el sistema
inmunológico.
• Se utiliza para detectar infecciones y también para mirar
que tanto puede ser inmune o resistente un individuo ante
una infección o enfermedad especifica.
• Se utiliza para descartar sospechas de una infección.

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 Aglutinación Directa
Aglutinación Directa
• Se pueden hacer en tubo,
portaobjetos, placa. enfrentan las
partículas microbianas (generalmente
muertas) en suspensión con el suero
del paciente.

• Si el suero del paciente posee

anticuerpos frente a la bacteria, se
forman agregados visibles en el fondo
del tubo o en el porta o en fondo de la
microplaca.

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Como
Como se se realiza
realiza la la prueba?
prueba?
Se desinfecta el área donde se va realizar el tomado de Prueba
Prueba de
de Combs
Combs Directa
Directa
sangre.
Se introduce la aguja y se llena el recipiente donde será Utiliza los eritrocitos del paciente Que tienen unidos anticuerpos
almacenada la sangre, luego se retira la aguja.
Luego de haber obtenido la muestra se procede a llevarla
al laboratorio.
Se forman coágulos visibles constituidos por los
anticuerpos u otras partículas que se fijan.

COMBS
UTILIDAD CLINICA DE LA PRUEBA DE COMBS DIRECTO

Sífilis
FACTORES QUE INFLUYEN

Los principales factores que influyen sobre la aglutinación son la carga de

partículas
Concentración de electrolitos y la viscosidad , el tipo de anticuerpo , el
numero de determinantes antigénicos y la temperatura.

EN VIROLOGIA EL TEST DE AGLUTINACION

A veces se usa para la detección de antígenos virales en muestras clínicas.

Los ensayos de aglutinación, dependen de la fijación inicial de anticuerpos
antivirales específicos sobre eritrocitos o partículas de látex. Luego este
reactivo se incuba con la muestra clínica en la cual se investiga el antígeno y
las partículas se aglutinan si el antígeno adecuado se encuentra presente.
Estas pruebas en general se complementan o se confirman por medio de
otros ensayos debido al elevado porcentaje de reacciones inespecíficas. El
test de aglutinación ha sido usado para detectar antígeno de Rotavirus en
heces (el más importante) mostrando una buena sensibilidad cuando se lo
compara con el EIA para Rotavirus. Además es una técnica rápida y barata.
También se la ha usado para detectar antígenos de Adenovirus.

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 Radioinmunoensayo (RIA)
El principio general del RIA es la INHIBICIÓN COMPETITIVA de
la unión de un Ag radioactivo, conocido como trazador, a sus
Ac específicos por parte del Ag no marcado:

Ac + Ag* <—————> Ac-Ag*

Ac + Ag <—————> Ac-Ag
se han utilizado varios isótopos productores de radiaciones
gama y beta. Una proteína u otro material inmunológico
pueden ser marcados sin que se pierda su capacidad de
reaccionar inmunológicamente. El isótopo mas utilizado es
I125.

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RIA directo: a la fase sólida se une una cantidad conocida de Ac.
Diferentes concentraciones conocidas de antígeno marcado se
incuban con una concentración constante de la muestra de la
que se desea conocer la concentración del antígeno en cuestión.

El RIA de inhibición: también sería una técnica competitiva de

análisis, pero lo que se une a la fase sólida es una cantidad fija
de antígeno.

Sandwich: en la cual se une un Ac en cantidades constantes a la

fase sólida. Una vez realizado el bloqueo, se añade el antígeno en
concentraciones variables. Posteriormente se añade un segundo
anticuerpo contra el antígeno, pero esta vez marcado

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Enzimoinmunoanalisis (EIA)
Enzimoinmunoanalisis (EIA)
Inmunoanálisis ligado a enzimas

Técnica de laboratorio que usa anticuerpos ligados a enzimas

a fin de detectar y medir la cantidad de una sustancia en una
solución, como el suero. La prueba se hace usando una
superficie sólida a la que los anticuerpos y otras moléculas se
adhieren.

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 Tipos
Tipos de
de ELISA
ELISA
• ELISA directo;

• ELISA indirecto

• ELISA del bocadillo

• ELISA competitivo

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La
La Prueba
Prueba Elisa
Elisa
La Prueba
puede
puede
Elisa puede
usarse
usarse
usarse para
para
diagnosticarpara
diagnosticar
diagnosticar
las siguientes afecciones:
las
las
siguientes
siguientes afecciones:
afecciones:

Virus de VIH Enfermedad de lyme

Rickettsiosis Carcinoma Escamoso

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Procedimientos
Se añade la sangre a una placa de Petri que contiene el
antígeno específico (que es una sustancia extraña, como
un virus, que provoca una respuesta del sistema
inmunitario) relacionado con la afección que se desea
detectar con la prueba. Si la sangre del paciente contiene
anticuerpos contra el antígeno, ambos se fusionarán. Para
verificar esta fusión, el técnico agregará una enzima a la
placa de Petri y observará cómo reaccionan la sangre y el
antígeno. Si el contenido de la placa cambia de color, usted
quizás tenga la afección en cuestión. Según los cambios
causados por la enzima, el técnico podrá determinar la
presencia y la cantidad del anticuerpo.

PUNCION VENOSA

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 Ventajas
Ventajas yy Desventajas
Desventajas
VENTAJAS DESVENTAJAS

La ventaja principal de ELISA es alta sensibilidad Puesto que la cuantificación se basa en la

y especificidad, convenientes para descubrir las
moléculas del objetivo incluso en los niveles del
pictograma. Se utiliza con frecuencia para la
investigación de la alto-producción debido a
procedimientos exigentes fáciles y los menos
experimentales.
ELISA puede también ser utilizado para
cuantificar las moléculas del objetivo en una
variedad de muestras, incluyendo el suero,
plasma, orina, saliva, célula o los extractos de
tejido, etc.
reacción del sustrato enzimático, el marco de
tiempo para la detección es muy corto. Además,
solamente un periodo de información limitado tal
como presencia o el periodo de una molécula del
objetivo se puede obtener a través de ELISA.
Relacionado con la información a la actividad de
una molécula no puede ser obtenido por esta
técnica

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 Microscopía
Microscopía Electrónica
Electrónica Microscopía Electrónica

• Líquido vesicular
• Biopsia de tejidos
Coronavirus • Verrugas
Adenovirus
• Orina o Suero

Calcivirus

VIRONES
Rotavirus
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 Microscopía Electrónica
Microscopía Electrónica Microscopía Electrónica

Existen dos tipos de microscopio electrónico de uso común; el de

transmisión y el de rastreo.
Ambos tienen una columna con un filamento de tungsteno que
genera un haz de electrones que migra por la columna gracias al
poder de magnetos que actúan como si fuesen condensadores de
luz. Así, el haz es enfocado y concentrado sobre la muestra por un
juego de bobinas capaces de crear campos magnéticos de
intensidad controlable, equivalentes a "lentes electromagnéticos" .

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION ( MET )

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

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 Inmunoelectromicroscopía
Inmunoelectromicroscopía
Uno de los mayores obstáculos es el de lograr la fácil
penetración de anticuerpos al interior de la célula sin alterar o
destruir su ultra estructura. Enfatizándose que para la
localización de antígenos superficiales a nivel de membranas o
intracelulares la preservación de los determinantes
antigénicos es de primordial consideración, ya que sin ello
otros parámetros importantes, tales como especificidad
inmunológica, carecen de valor.
METODOS DE INMUNOELECTROMICROSCOPIA
Dos clases de soluciones:
1. Método de pre-inclusión: se refiere a la aplicación de
los procedimientos inmunocitoquímicos antes de ser
embebidos los tejidos en las resinas plásticas usadas
como medio de inclusión en microscopía electrónica.
2. Método de post-inclusión: consiste en la aplicación de
los procedimientos inmunocitoquímicos después de la
inclusión de los tejidos en las resinas plásticas.
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Uso
Uso de marcadores Inmunocitoquimicos
de marcadores Inmunocitoquimicos en en Microscopia
Microscopia
Uso de marcadores Inmunocitoquimicos en Microscopia Electrónica
Electrónica
Electrónica
Un buen marcador para inmunoelectromicroscopía debe cumplir las
siguientes condiciones:

1. Ser electro-opaco o electrodenso.

2. El tamaño de su molécula debe de estar en un rango que permita su
fácil penetración a través de las membranas celulares
3. Su conjugación a moléculas IgG debe ser sumamente estable.

Muy pocas substancias cumplen completamente los

anteriores requisitos, sin embargo se ha descrito
esencialmente el uso de las siguientes:

• Ferritina
• Peroxidasa
• Oro coloidal

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 Bibliografia
Bibliografía
• https://www.medigraphic.com/pdfs/revedubio/reb-2014/reb143b
• https://www.binasss.sa.cr/revistas/rmhnn/v13n11978/art4.pdf
• https://www.academia.edu/38826934/T%C3%A9cnicas_Inm
unol%C3%B3gicas
• http://higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%208.pdf

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