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Universidad de Guanajuato
División de Ciencias e Ingenierías
Biología Celular

Laboratorio de Biología Celular

Práctica 7:
“inmunohistoquímica”

Dr. Gustavo Basurto Islas

Alumno:
Eduardo Ramírez de la Fuente

lunes 18 de mayo 2020

Práctica 7
“inmunohistoquímica”
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Objetivo
Observar y realizar varias pruebas de inmunohistoquímica a varias muestras.
Introducción
[1]​La inmunohistoquímica es un procedimiento que tiene como objetivo detectar,
amplificar y hacer visible un antígeno específico, que generalmente es una
proteína. Esta técnica permite identificar la localización de una sustancia específica
a nivel tisular o celular.
Fundamento teórico
[2]​Inmunohistoquímica es una técnica de laboratorio que sirve para la aplicación
de proteínas en un tejido (dentro o fuera de la célula mediante anticuerpos que
reconocen antígenos) a través de un sistema de detección y relaciona tres
ciencias: histología (morfología),reacción bioquímica e histoquímica. “Es una
técnica que combina metodologías inmunológicas y bioquímicas para la
detección de un antígeno celular o tisular, mediante el uso de un anticuerpo
específico y un sistema marcador”.Inmunocitoquímica:
Es esta misma técnica de reconocimiento en células y no en tejidos por ejemplo en
células de cultivo, fríos o punciones.Inmunofluorescencia: Misma técnica que está
conjugado con urocromo que serán sanciones & uorescentes (compuesto por &u
oro foro) en vez de enzimas. No hay revelado,se observa directamente.DAB
(marrón) / AEG (rojo) / Nitotretablue -> Cromógenos (Sistema revelador).

En la IHQ tenemos una célula o un tejido, con diferentes proteínas unidas a

anticuerpos primarios que son comerciales y ultra específicos para esta
proteína que se quiere indicar.Normalmente se ene un anticuerpo
secundario (también comercial) que reconoce al anticuerpo primario pero
que es menos específicos ya que se puede utilizar para reconocer diferentes
anticuerpos primarios y que está conjugado con una enzima (Por ejemplo
el HRPO provoca una reacción con un cromógeno como el DAB, haciendo
que se vuelva un compuesto coloreado insoluble de color marrón mediante un
proceso de oxidación en presencia de un sustrato como el peróxido de
hidrógeno que lo reduce y hace que precipite cerca de la reacción enzimática). En
la IMF simplemente se pone un anticuerpo primario o uno secundario va
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conjugado con urocromo que se podrá detectar a través de la señal del &u otro
foro que lo compone con una luz en un microscopio de fluorescencia que emite
una longitud de onda específica. Es un proceso mucho más rápido.
Métodos de amplificación
•Fluorescentes
•Enzimáticos
•InmunometálicosHay:
1. Métodos directos.
2. Método indirecto:
Complejo PAP Método de Adivina-Biona
Método del polímero marcado
Método Estreptavidina-Biotina
Materiales

1. cubreobjetos
2. portaobjetos
3. tejido(muestra)
4. proteínas receptoras
5. microscopio de microfluorescencia
Procedimiento

[2]​Pasos básicos: Se pueden utilizar diferentes tejidos y según esto

dependerá el procedimiento.1. Desparanaje e hidratación. 2. Recuperación
antigénica (Que sirve para desenmascarar los epítopes del antígeno por acción de
esto que se hace generalmente con el uso de buEy especiales con un ph específico
y calor, puede también hacerse mediante acción enzimática pero es mucho más
compleja porque esta destruye el tejido por lo tanto se debe controlar muy bien
los tiempos y temperaturas). 3. Bloqueo de enzimas endógenas (Se bloquean para
que no se produzca una reacción inespecífica a diferencia de la histoquímica se
quieren eliminar, también otras moléculas que participen el proceso de detección).
4. Bloquear sitios inespecíficos. (Se bloquean proteínas que podrían tener similitud
con las proteínas que se quieren indicar para evitar que el ac se una
por error especí camente a estas, se hace un bloqueo general y como los ac son
tan especí cos son capaces de traspasar esa barrera de bloqueo).
5. Incubación con anticuerpo primario, lleva una temperatura y un tiempo
determinado. Si Se incuba una hora o media hora se hace a T° ambiente o con un
poquito de calor,mientras que si yo hago una incubación larga en la noche se debe
poner frío para que la reacción vaya más lenta (se mete al refrigerador).6.
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Incubación con anticuerpo secundario, que es el anticuerpo que va ir a reconocer

el anticuerpo primario, la cual siempre se hace a temperatura ambiente durante
una hora, seis más lenta siempre es más específica. La inmunofluorescencia
siempre se hace en oscuridad a partir de esta etapa.7. Revelado (Con o sin
método de amplificación), se utiliza cromógeno para que reacciones la
enzima ya conjugada con el ac secundario. Acá se realiza la parte
histoquímica, se pone el cromógeno con el sustrato y se deja el cromógeno que
está unido al ac secundario reaccione de manera que precipite en la unción
angenot cuerpo.Esto puede haber sido antecedido por un proceso de
amplificación para un proceso más sensible.-Enzima.-Fluoro Foro.-Metales.8.
Contraste de núcleos con H-E, en caso del ac que nosotros vamos a utilizar
reconozca una proteína nuclear no se hace contraste. 9. Deshidratación y montaje,
lo ideal es que al otro día de cubrir se visualice para que no se vea borrosa la señal.
En el caso de la IMF se utiliza un medio acuoso especial para fluorescencia
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Resultados

la primera corresponde a los receptores de estrógenos y la segunda a

progesterona. Ambas imágenes se hacen para un carcinoma mamario, en el que se
tienen que tomar el nivel de estrógenos y progesterona, en ambos casos los
niveles parecen altos aunque eso no debería pasar.

La primera imagen es un riñón, en el cual está marcada las células endoteliales

del glomérulo y de los vasos. En la segunda imagen podemos observar
marcados los macrofagos, vistos como celulas espumosas y globosas.
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En la primera imagen vemos marcado componen muscular en músculo esquelético

y en la segunda, cerebelo donde vemos marcados los núcleos neuronales.

En la primera imagen con un revelado rojo vemos piel con ac nucleolina

que marca componente nucleares y en la segunda marcadores de
pronóstico que marcan la proliferación.
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vi que si un tratamiento funcionaba, en el caso de los túbulos seminíferos, si había

poca cantidad estrógenos el tratamiento no sería efecto, al contrario si se
encuentra una gran cantidad se podrá producir el bloqueo y se tendrá una mejor
evolución.

Discusión

Los procedimientos por medio de lo que nos mostraron los videos eran muy

precisos y específicos por lo que facilitó el entendimiento de todo el proceso.

Conclusión
La técnica de inmunohistoquímica nos sirve para observar cual y cuantas proteinas
tiene la muestra, la cual nos ayuda a la observación y diagnóstico de varias
enfermedades.
Bibliografía

[1] ​https://es.wikipedia.org/wiki/Inmunohistoqu%C3%ADmica
[2​]​https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-de-valparaiso/inmunoh

istoquimica/apuntes/introduccion-a-la-inmunohistoquimica/4828395/view
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