MEDIOS DE CULTIVO.

2021/11/10

• Normalmente siempre se estudia a los microorganismos en forma pura, es decir, mezclados

unos con otros, por eso hay que colocarlos aislados para propagarlos por separado y hacer
el estudio de sus características fisiológicas, químicas, etc.

• MEDIOS DE CULTIVO. Por su

estado físico los medios de cultivo
pueden ser divididos en medios
líquidos, solidos y semisólidos.

• LOS MEDIOS LÍQUIDOS son los

que simulan un caldo, está preparado a
base carne, verduras, etc. si a ese caldo
se le pone agar y se hierve porque el polisacárido no se hidrata fácilmente (4-5min).

• Cuando ese caldo se enfría comienza a solidificar, entonces recibe el nombre de

CULTIVOS SÓLIDOS.

• Si el medio de cultivo lleva una cantidad intermedia de solidificante se obtiene un MEDIO

SEMISÓLIDO.

• Ejemplo de medio de cultivo: caldo de pollo.

Para solidificar un medio líquido se pueden emplear diferentes agentes que le confieran consistencia
al medio, como son el agar, la grenetina los alginatos y algunos otros polisacáridos, también la
sílica e incluso tierra.

Sin embargo, los más empleados son aquellos que cumplen con los requisitos de un agente
gelificante ideal:

Transparentes, estables a las temperaturas de incubación, inertes, difíciles de ser degradados por los
microorganismos, que no afecten el pH, que mantengan la humedad y el intercambio de gases, entre
otras.

• OTRA FORMA DE CLASIFICAR A LOS MICROORGANISMOS:

Por su composición los medios de cultivo pueden ser divididos en complejos y sintéticos.
MEDIOS DE CULTIVO COMPLEJOS

Los complejos son aquellos elaborados de extractos celulares e hidrolizados de macromoléculas y

que no tienen una composición química bien definida, es decir no conocemos las cantidades exactas
de los nutrimentos que estamos proporcionando y son difíciles de igualar, varían de lote a lote que
se prepara.

• EXTRACTOS CELULARES se refiere a cuando nosotros agarramos y metemos a un pollo

en agua y en esa agua cada una de las células que se encuentra en el pollo va a tener un
problema de presión de osmótica porque no tienen pared celular por lo tanto van a ser
susceptibles a reventarse. Si además se calienta se favorece la salida del citoplasma de las
células del pollo hacia el medio que lo rodea. Existen extractos de pollo, carne, soya,
pescado, etc (todo lo que no tiene pared celular).
• La composición química de los extractos es todo lo que contenía la célula al reventarse
(DNA, fosfolípidos, coenzimas, enzimas, etc), esta mezcla no es predecible.
• En la actualidad estos extractos ya no se hacen por ebullición sino básicamente se someten
a congelación y descongelación para lograr reventar las células eucariotas, el cual será
capaz de proporcionarle los nutrientes a un microorganismo procariota siempre y cuando
sea un microorganismo que pueda usar la materia orgánica como fuente de carbono y
energía.
• En el medio de cultivo sintético se tiene un control total de todos los componentes de la
célula. Se elabora pesando cada una de las sustancias que se quieren que tenga el medio de
cultivo.
• Para crecer a un microorganismo quimiolitótrofo no se puede utilizar un extracto de pollo o
de carne, pescado o levadura, porque estos extractos tienen materia orgánica y los
organismos quimiolitótrofos obtienen su energía a partir de la oxidación de compuestos
inorgánicos, en vez de esto se obtiene un extracto del suelo, es decir se coloca tierra en
agua, después se agita bien para que se disuelva lo que es soluble en agua, se filtra, después
se centrifuga y el líquido que queda es el extracto de suelo.
• Para hacer crecer los microorganismos del mar se hace un extracto con agua de mar y arena.
• HIDROLIZADOS, en el caso de la leche si se acidifica se van a precipitar las proteínas,
esas proteínas van a formar una cuajada que se conoce por el nombre de queso, si a ese
queso se le ponen enzimas proteolíticas estas van a transformar el queso y van a provocar
que se produzcan proteínas más pequeñas de tal manera que se está hidrolizando a la
proteína con enzimas para obtener péptidos mas pequeños que van a ser más asimilables
por los microorganismos, este microorganismo tiene que lanzar enzimas proteolíticas para
que se terminen de degradar esos péptidos.
• Al hidrolizado de proteínas se conoce como peptonas, generalmente se obtienen por
enzimas proteolíticas (enzimas microbianas, es decir cultivar un microorganismo para que
produzca exoenzimas y que van a degradar compuestos que se encuentran en el medio
ambiente, exoenzimas de bacterias o utilizar enzimas en células eucariotas como en la piña
que hay proteasas muy activas que son las responsables del picor que sentimos en la lengua,
kiwi, higos o animales sacrificados en el rastro, se le extrae la vesícula biliar y el páncreas
de donde se obtienen enzimas proteolíticas para degradar la carne que sea y para degradar
proteínas como el queso.
 • Otra forma de hidrolizar proteínas es que en el último de los casos se puede tomar a la
proteína y se le coloca ácido sulfúrico o sosa, se calienta y se hidrolizan los enlaces
peptídicos teniendo puros aminoácidos.
• Otra forma de clasificar a los medios de cultivo es con base a los componentes. A los
nutrientes se les adiciona un indicador de pH, el cual indica el pH del medio de cultivo,
pero cuando los microorganismos crecen metabolizan a los productos desechando el medio
que los rodea que son compuestos que en muchas ocasiones tienen carácter acido o básico
lo que permite ver y diferenciar a los microorganismos. A estos medios de cultivo se les
llama DIFERENCIALES.
• También se pueden adicionar cosas que inhiban al crecimiento de microorganismos lo que
los vuelve SELECTIVOS es decir que va a inhibir un grupo de microorganismos y va a
permitir que otro grupo de microrganismos crezca.
• Medio de cultivo complejo.

COMPONENTE CANTIDAD FUNCIÓN DEL

COMPONENTE
Extracto de carne 1.5 g Fuente de vitaminas y otros
factores de crecimiento,
Extracto de levadura 3.0 g Fuente de vitaminas y otros
factores de crecimiento.
Peptona 6.0 g Fuente de aminoácidos, N, S y
P.
Glucosa 1.0 g Carbono y fuente de energía
Agar 15.0 g Agente solidificante inerte.
Agua 1000 ml
pH 6.6

* La imagen de la derecha es un agar nutritivo.

• El tener los componentes permite elaborar el medio de cultivo.

• En la caja petri que se tiene dividida en tres partes se adicionó cristal violeta el cual inhibe a
los gram positivos, en la parte amarilla se coloca otro inhibidor en donde van a crecer otros
microorganismos y en la última parte no hay nada.
MEDIOS DE CULTIVO SINTÉTICOS

Los medios de cultivo sintéticos se preparan con los precursores que constituyen a los seres vivos
como son los mono, di o tri sacáridos, aminoácidos, vitaminas, bases púricas y pirimidinas, así
como sales inorgánicas altamente purificadas que le confieren al medio de cultivo una alta
reproductibilidad (es decir se pueden pesar las mismas cantidades y el medio de cultivo va a salir
igual que la última vez que se hizo) cada vez que se preparan.

• Se tienen que preparar con ciertas reglas como disolver sales en ciertos volúmenes de agua
y adicionar una a una desde las sales de más bajo peso molecular hasta el más alto peso
molecular, de lo contrario es frecuente que haya reacción entre estas sales y precipiten
provocando que ya no haya disponibilidad en los microorganismos.
• EN GENERAL SE TIEDEN A USAR MAS LOS MEDIOS DE CULTIVO
COMPLEJOS QUE SINTETICOS.
• Ejemplo de un medio químicamente definido SINTÉTICO para el crecimiento de un
microorganismo heterotrófico.

• Cada uno de los componentes se puede conseguir altamente purificado.

• Se emplea agua destilada, proporciona una cantidad muy pequeña de microelementos, de
pH, pero lo necesario para que crezcan.

Por el uso al que los destinamos los podemos dividir en:

• Generales
• Diferenciales
• Selectivos

• MEDIOS DE CULTIVO GENERALES. Son aquellos que proporcionan los nutrimentos

para soportar el desarrollo de la mayoría de los microorganismos, por lo general se emplean
como medios de propagación o de mantenimiento.
• MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES. Son aquellos que también soportan el
crecimiento de la mayoría de los microorganismos, pero a los cuales se les adiciona un
sustrato y algún tipo de indicador de pH, puede ser oxido reductor incluso para saber si los
microorganismos son capaces de metabolizarlo, lo cual nos permite diferenciar a los que lo
metabolizan de los que no lo hacen, se emplean para mostrar diferencias metabólicas de los
microorganismos.

• MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS. Son aquellos medios de cultivo a los cuales se

les adiciona o se les quita de alguna sustancia lo que limita a muchos microorganismos, que
no pueden crecer bajo esas condiciones y solo los que lo pueden hacer, crecen. Se emplean
para aislamientos de microorganismos que se encuentran formando parte de mezclas
complejas.

• Ejemplo de adición es la penicilina, los microorganismos que van a crecer los que sean
resistentes a los ataques de la penicilina.

EJEMPLOS DE MEDIO DE CULTIVO

• Los medios de cultivo que son las cajas petri rojas y amarillas son medios de cultivo a los
que se les adicionó colorantes y por lo tanto son MEDIOS DIFERENCIALES. El pH va a
tener el color y si el microorganismo lo metaboliza va a cambiar de color.
• El de los tubos de ensayo es un medio de cultivo kliegler hierro agar, contiene glucosa,
lactosa, sales de hierro, agar y peptona. Cuando el microorganismo crece normalmente es
de color ROJO. En este medio hay microorganismos que no pueden metabolizar a la
glucosa. No producen tanto ácido. El resto del tubo está ligeramente alcalino. El
microorganismo metabolizo a la glucosa produciendo ácido, no tiene una enzima que
permita el paso de la lactosa al interior, entonces el microorganismo usa una fuente alterna
 de carbono como los aminoácidos, el grupo amino se lanza al exterior alcalinizando el
medio de cultivo. En conclusión, el microorganismo es glucosa + y lactosa -.
• Cuando el microorganismo se siembra y crece va a metabolizar tanto a la glucosa como a la
lactosa y la cantidad de ácido producido será muy abundante por lo tanto será de color
AMARILLO. Además, se desprendió del tubo lo que hace referencia a la producción de
gases, es un microorganismo glucosa +, lactosa +, gas +.
• En algunos casos ya se vio que los microorganismos son capaces de usar como aceptor final
de electrones al oxígeno, se produce agua. También usan a los sulfatos (sulfato ferroso), el
azufre se consume en la cadena transportadora de electrones reduciendo a sulfito y luego a
sulfuro, este último reacciona con las sales de fierro provocando una coloración NEGRA.

• MEDIOS DIFERENCIALES.
Permiten revelar características fisiológicas
de los microorganismos.
Agar Mac Conkey: (análisis de medio de
cultivo)
Lactosa (fuente de carbono principal)
Peptona de gelatina (pedacitos de gelatina
hidrolizados por una enzima)
Peptona especial (carne, pollo o pescado)
Cristal violeta (inhibidor de gram +)
Sales biliares (inhibir microorganismos que
no crecen en el intestino)
Rojo neutro (inhibidor de gram +), asegura que los gram + no van a crecer ahí.
NaCl
Agar
• Es un medio de cultivo sólido, pesando el polvo, adicionando agua, hirviéndolo,
esterilizándolo y llevarlo a cajas petri. Las colonias que se alcanzan a ver de color rosa es
decir los microorganismos están acidificando al medio, en otro lado el medio de cultivo las
colonias son ligeramente transparentes de color amarillo que están alcalinizando el medio
de cultivo.
• Si el microrganismo es lactosa + va a acidificar, como lo es en la colonia rosa que están
fermentando a la lactosa.
• Los de color amarillo no tienen la enzima que permite entrar a la lactosa a las células, para
poder crecer usan dos fuentes de carbono que son peptona de gelatina y peptona especial.
Al usar la peptona el grupo amino no le sirve porque se va a alcalinizar el citoplasma.
• El cristal violeta al ser inhibidor de gram + se deduce que el microorganismo que está
creciendo en ambos son gram -.
• Al usar las sales biliares es porque se asume que son microorganismos que pueden crecer
en el intestino.
• El NaCl se encuentra en una concentración bajita, este hará que los microorganismos que
sean sensibles al NaCl no crezcan.
 • En este medio de cultivo que es un
Agar Mac Conkey se sembró una mezcla
de microorganismos.
• Las colonias de Escherichia coli
son un microorganismo de lactosa + por
lo que va a fermentar a la lactosa y va a
producir acido. Tiene color.
• En el caso de Klebsiella
pneumoniae es lactosa +. Tiene color.
• En Salmonella spp. Es un
microorganismo lactosa -, crece sin
color.

• MEDIOS SELECTIVOS:
Manitol sal agar (Fuente primaria de carbono). Es un
carbohidrato, hexosa. No todos los microorganismos lo pueden
metabolizar.
Extracto de carne bovina 1,0 g (Fuente secundaria de carbono)
Digerido pancreático de caseína 5,0 (Proteína de la leche digerido
por enzimas pancreáticas) (Fuente secundaria de carbono)
Digerido péptico de tejido animal 5,0 (Tejidos animales
desconocidos digerido por enzimas pancreáticas) (Fuente
secundaria de carbono)
Cloruro sódico 75,0
D-manitol 10,0
Rojo fenol 0,025
Agar 15,0
pH 7,4 ± 0,2
• Es un medio de cultivo sólido, se pesa el material, se disuelve en agua, se calienta para
disolver el agar, se esteriliza y se va a la caja petri.
• Crecen colonias de un solo microorganismo.
• El rojo de fenol a pH neutro es rojo, pH ácido es amarillo, a pH alcalino es violeta. Como
no hay cambio a amarillo se entiende que el microorganismo no pudo usar D-manitol con
fuente de carbono, pero si resistió las concentraciones de NaCl tan elevadas, el hecho de
que este creciendo con una tonalidad ligeramente violácea indica que se está alimentando
de la caseína y la peptona de tejido animal alcalinizando el medio.
TIEMPO DE GENERACIÓN

Tiempo requerido por una población de células al duplicarse.

• Cuando se coloca a un microorganismo en un medio de cultivo, tiene como función

principal de duplicar la información genética.
• Lo primero que hace es sintetizar una serie de enzimas que van a degradar el medio
ambiente que los rodea con el fin de que los nutrientes puedan penetrar.
• Una vez que penetran los nutrientes existen precursores de materia orgánica para el
microorganismo. Va a empezar a sintetizar más ribosomas y demás cosas que se encuentran
en el citoplasma de la célula. Pero lo mas importante es que el DNA se va a replicar.
• Cuando el DNA se duplica entonces se va a formar el septum por la proteína FtsZ.
• Se van a separar originando dos células, las cuales si encuentran que las condiciones del
medio ambiente son favorables van a volver a sintetizar precursores y DNA.
• El tiempo el que se tarda en una célula se convierta en dos células se le llama TIEMPO DE
GENERACION.
• CRECIMIENTO MICROBIANO: Aumento del número de células, en cantidad no el largo.

• VELOCIDAD DE CRECIIMIENTO: Es el cambio en el número de células por unidad de

tiempo.
• TIEMPO DE DUPLICACIÓN: Tiempo requerido para que a partir de una célula se formen
dos células se formen dos células o el tiempo requerido para duplicar una población.
 • Puede ser de minutos, días u horas.
• Este tiempo depende del microorganismo y de las condiciones del medio ambiente por
ejemplo Escherichia Coli, su medio de cultivo adecuado tarda 20 min en duplicarse.
Escherichia Coli es una bacteria gram -, tiene una membrana externa e interna,
peptidoglucano, citoplasma complejo, etc. puede obtener rápidamente nutrientes.
• Tuberculosis puede tardar horas y días en un medio de cultivo no adecuado.

CRECIMIENTO EXPONENCIAL

• En la imagen se muestra lo que ocurre en la replicación de una célula.

• A partir de una célula se hacen dos, esas dos se nutren, tienen su material para formar
componentes celulares y se vuelven a duplicar cada una de ellas.
• Se llama crecimiento exponencial porque el número de células duplicadas va aumentando al
doble.
CRECIMIENTO ESPONENCIAL EN UNA POBLACIÓN DE BACTERIAS

• Si se tuviera un experimento en donde solamente se colocara una bacteria el tiempo de

replicación fuera de unos minutos, durante las primeras etapas no podríamos medir la
variación en cuanto a células durante los primeros minutos u horas porque han estado
aumentando de 1 a 2. No se puede percibir un cambio del número de las células.
• A partir de las 6 horas hay un cambio en el número de células.
• En un medio de cultivo liquido lo que se hace notar es que cambia la turbidez, primero es
muy transparente y conforme pasa el tiempo se va volviendo turbio debido al crecimiento
celular del caldo del medio líquido. La cantidad de células se mide con la turbidez.
• En el caso de las colonias en las primeras horas no se observan estas mismas sino hasta las
diez horas.
• Esto crece de manera exponencial.
TIEMPO DE GENERACIÓN

• Tiempo que toma una célula en dividirse o en una población de células al duplicarse.
• Rango de bacteria de 11 minutos a varias horas.

BACTERIA MEDIO TIEMPO DE

GENERACIÓN
(MINUTOS)
Escherichia coli Sales de glucosa 17
Bacilus megaterium Sales de Sucralosa 25
Streptococuslactis Leche 26
Staphylooccus aureus Caldo de infusion de corazón 27-30
Streptococus lactis Caldo de lactosa 48
Lactobacilus acidophilus Leche 66-87
Rhizobium japonicum Extracto de levadura de sales 344-461
de manniotol
Mycobacteriumtubreculosis Sintético 792-932
Treponema pallidum Testículos de conejo 1980
• El medio de cultivo es determinante para que el microorganismo crezca más rápido o más
lento. Muchos de los microorganismos que crecen en los alimentos no nos percatamos de
que crecen ahí por ejemplo en el caso de los alimentos refrigerados es porque las
condiciones de temperatura no son favorables sin embargo si están creciendo, pero a una
manera más lenta.

ESTIMACION DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

Para estimar el crecimiento la formula normal es:

𝑁 = 𝑁𝑜2𝑛

• 𝑁 = 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠. (Cuántas células se inoculan)

• 𝑁𝑜 = 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎.
• 𝑛 = 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠.

𝑔 = 𝑡/𝑛

• 𝑔 = 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛.
• 𝑡 = 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑒𝑥𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎𝑙.

Esta formula sirve para predecir el número de microorganismos que va a crecer a partir de una
cantidad inicial de células o de enzimas y del tiempo.
CICLO DE CRECIMIENTO DE POBLACIONES.

• Aquí se muestra un experimento por ejemplo del que pasa si se deja un sándwich a
exposición del medio ambiente favorable para el crecimiento de microorganismos.
• Este tenía 20 estafilococos por gramo de jamón.
• No se lo pudieron comer en toda la mañana hasta el mediodía, el momento en el cual se
preparó el sándwich fue a las 7 de la mañana.
• Transcurrieron de 7-12, 5 horas. Si el microorganismo se reproduce cada media hora
significa que tarda media hora en duplicarse. Originalmente tenía 20 conforme va
aumentando la media hora aumenta este número.
• Cuando se requiere estudiar un microorganismo se tiene que observar su comportamiento
en un medio de cultivo.
• La parte donde no se perciben cambios en el número de células aparentemente es la fase
lag.
• La pase donde empiezan a duplicarse y por ende en aumento, se llama fase exponencial. El
crecimiento es sumamente acelerado.
• La parte donde este crecimiento se desacelera y se mantiene en un crecimiento constante se
llama fase estacionaria.
• Donde hay una disminución en el número de células se produce la muerte de las células.
Hay declinación.
CURVA DE CRECIMIENTO

Producción de curva normal.

CURVA DE CRECIMIENTO GRÁFICO SEMILOGARÍTMICO

Producción de curva normal que se puede graficar. Se puede calcular el tiempo de generación
calculando la pendiente de la recta.

• FASE DE LATENCIA: Fase de adaptación. Supuestamente no cambia el número de

células. También se mide la cantidad de RNA mensajero que se está produciendo en las
células además del número de células por si solo. Este RNAm va en aumento lo cual
significa que las células están sintetizando material proteínico, ese crecimiento se puede
cuantificar y determinar.

• FASE EXPONENCIAL: Mayor velocidad de crecimiento, esta se encuentra influenciada

por diferentes factores ambientales o características genéticas del microorganismo.

¿ QUÉ LIMITA EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL?

1. FALTA DE NUTRIENTES
2. ACUMULACION DE SUSTANCIAS TOXICAS
3. FALTA DE ESPACIO