2.

Espectrofotometría
Espectrofotómetro
• Fuente de radiación
Una simple bombilla con filamento de tungsteno puede servir como
fuente de radiación para trabajar en la región del visible.
Para la región del ultravioleta se usa como fuente de radiación un tubo
de descarga en el que se encuentra un gas (hidrógeno o deuterio). Estas
lámparas se agotan con el tiempo y es necesario tomar la precaución
de apagarlas si no se utilizan.
• Selector de longitud de onda
Se pueden utilizar simples vidrios coloreados como son los filtros. A los
aparatos que utilizan filtros se le denomina fotómetros. Los filtros se
eligen del color complementario a la solución. Si tenemos una solución
de color verde (amarillo + azul), elegimos un filtro de color rojo que es
el complementario del verde.
En los espectrofotómetros se utiliza el monocromador de prisma que
consta de:
- Prisma: cuando pasa la radiación a través de un prisma se refracta y el
efecto es una separación en distintas longitudes de onda (colores).
- Rendijas de entrada y salida: se utilizan para restringir el paso a la
radiación no deseada.
- Lentes colimadoras: proporcionan un haz de radiación paralela
• Recipientes para la muestra
Son cubetas de cuarzo o de vidrio de alta calidad. En general son de
un ancho de 1 cm, aunque puede haber de 2 y 0,5 cm. También
existen cubetas de plástico, pero sólo sirven para trabajar en el visible,
no deben utilizarse cuando se trabaja en la región del ultravioleta.
• Detector de Radiación
Cuando el ojo humano es el detector y el cerebro el amplificador el
aparato se denomina colorímetro.
Una célula fotoeléctrica puede servir como detector. A más radiación
mayor emisión de electrones y por tanto más corriente. Tiene la
ventaja de ser barata, pero el inconveniente es que se "cansa" y no da
siempre la misma respuesta. En su lugar en los espectrofotómetros
actuales se emplean los fototubos, que son múltiples células
fotoeléctricas que multiplican la radiación incidente.
Los espectrofotómetros pueden ser de:
- Simple haz: la radiación procedente de la fuente de radiación incide
sobre la muestra o sobre el disolvente (blanco). La posición de la
cubeta se cambia para hacer la medida.

- Doble haz: la radiación pasa a través de la muestra y el disolvente

alternativamente, comparándose continuamente el que pasa a través
de la muestra con el que pasa a través de la solución.
Espectrofotómetro
Figura. Partes básicas de un espectrofotómetro de absorción
espectrofotómetro de UV-vis
https://www.youtube.com/watch?v=Zd620RpH1vI&t=262s
• Cómo usar el Espectrofotómetro UV visible
https://www.youtube.com/watch?v=DJj3REnxNUs
Método de trabajo
• Selección de longitud de onda
Se toma una solución de concentración intermedia y se determina la
absorbancia para un intervalo de longitudes de onda (estos datos
proporcionan el espectro de absorción). Este barrido de longitud de
onda se puede hacer automáticamente o manualmente, seleccionando
longitudes de onda a intervalos de 2, 5 ó 10 nm. La longitud de onda
óptima es aquella donde la absorbancia es mayor (transmitancia
menor).
Figura. Longitud de onda vs Absorbancia
• Medida de la concentración de la muestra
1. Se selecciona la longitud de onda recomendada en el procedimiento
o la obtenida experimentalmente por el método anterior.
2. Se ajusta el cero con el disolvente (suele ser agua con todos los
componentes de la muestra, pero sin ella).
3. Se mide la absorbancia de las soluciones patrón de concentración
conocida, éstas deben estar preparadas con sustancias lo más puras
posible. Es importante que las concentraciones estén en el rango donde
se cumpla la ley de Beer (absorbancia menor de 1,5), es decir, donde
haya proporcionalidad entre A y C.
4. Se mide la absorbancia de la muestra. Si no entra dentro del rango
de concentración será necesario diluirla.
5. Se representa gráficamente absorbancia (ordenadas) frente a
concentración (abscisas) de los patrones y se ajusta mediante una
recta. Esta recta representa la curva de calibrado.
6. Se determina la concentración de la muestra, mediante la curva de
calibrado.
Figura. Concentración vs Absorbancia
Ejercicio 1.
Determinar la longitud de onda de máxima absorbancia
• De una solución de concentración conocida medir la absorbancia a
diferentes longitudes de onda
• Hacer la gráfica de longitud de onda vs Absorbancia
• Hacer la gráfica de longitud de onda vs Absorbancia
 Ejercicio 2.
Medir la Absorbancia de la serie patrón

Concentración 0 20 40 60 80 100 A1 A2
ug Cu

A(λ= ) 0,010 0,130 0,250 0,385 0,515 0,655 0,345 0,550

Determinar la cantidad de Cobre en ug de las muestras A1 y A2

 Medir la Absorbancia de la serie patrón

Concentración 0 20 40 60 80 100 A1 A2
ug Cu

A(λ= )

Determinar la cantidad de Cobre en ug de las muestras A1 y A2

Ejercicio 1. Se hace el análisis espectrofotométrica para determinar la
cantidad de hierro, y se tienen los siguientes datos:

Calcular:
a) Hallar la ecuación de la recta y el R^2
b) Determinar la cantidad de hierro en ug de la muestra problema A1
Ejercicio 2. De la muestra A1. Calcular a) los g de Fe/kg de muestra y b)
ppm de Fe.
Se tiene 0,250 g de la muestra A1/litro de solución, se tomó una
alícuota de 10 ml y se llevó a una fiola de 100 ml de esta solución se
utilizó 3 ml para hacer el análisis. (Continuación del ejercicio 1).
Ejercicio 3. Para determinar Cu^2+ se tienen los siguientes datos
ugCu/50 ml 0 30 60 90 120 150
Absorbancia 0,000 0,125 0,267 0,382 0,509 0,649

a) Hallar la ecuación de la recta y R^2

b) Determinar la cantidad de cobre en ug de la muestra problema M1,
Datos n M1 (Absorbancia)
1 0,480
2 0,475
3 0,482
Promedio o media
Ejercicio 4. De la muestra problema M1. Calcular a) los g de Cu/kg de
muestra y b) ppm de Cu.
Se tiene 0,1255 g de la muestra problema M1/litro de solución, se
tomó una alícuota de 20 ml y se llevó a una fiola de 100 ml de esta
solución se utilizó 10 ml para hacer el análisis. (Continuación del
ejercicio 3).