2° Clase teórica

Enzimas de restricción
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Métodos moleculares de identificación de bacterias y levaduras
Virus
Cultivos in vitro
Víctor Vásquez Villalobos
vvasquez@unitru.edu.pe
Enzimas de restricción

https://www.youtube.com/watch?v=B-_HnDcTKlk
Clonación del ADN – copias idénticas de un fragmento de ADN
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
PCR en tiempo real
 PCR convencional vs PCR en tiempo real

• La PCR convencional consume más tiempo, ya que utiliza electroforesis en gel para analizar
los productos de PCR amplificados. ...
• La PCR en tiempo real recopila datos en la fase de crecimiento exponencial de la PCR,
mientras que la PCR tradicional recopila datos en el punto final de la reacción.
• Los resultados del punto final de la PCR convencional pueden no ser muy precisos, pero los
resultados de la PCR en tiempo real son muy precisos.
Video complementario:
https://www.youtube.com/watch?v=C_luFY8mG2g
Métodos moleculares para identificación de bacterias
Actualización en caracterización molecular de levaduras
de interés industrial
Amplificación o análisis por enzimas de restricción de una porción del ADN genómico de levadura

incluye pruebas interespecíficas:

• Análisis de restricción o RFLP para las regiones ITS2, ITS1-5.8, D1/D2 de los genes 26S ribosomal DNA

• Amplificación aleatoria del ADN polimórfico (RAPD)

• Análisis cromosómico por electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE)
• Análisis de restricción del ADN mitocondrial (ADNmt- RFLP)
• Análisis por mini / micro satélites
• Huella genética de ADN por amplificación de regiones interdelta de los transposones Ty
Representación esquemática de las regiones 26S D1/D2 e ITS de rADN de levaduras
Biología molecular con levaduras en alimentación
Liti, G. (2015). The Natural History of Model Organisms: The
fascinating and secret wild life of the budding yeast S.
cerevisiae. Elife, 4, e05835.
 Virus

https://www.wisc-online.com/learn/natural-science/life-science/sce404/viruses
 Métodos para obtener plantas libres de virus
Termoterapia
El tratamiento con calor a vegetales para liberarlos de patógenos son aplicados como tal antes del uso
del cultivo de meristemas. Muchos virus son eliminados por medio de esta técnica. Los materiales
usados para los tratamientos pueden ser partes vegetales en dormancia, o bien en crecimiento
vegetativo. En el primer caso se suele utilizar agua caliente ( 35 a 54 °C) durante minutos u horas,
según los casos. Para los restantes el calor se aplica mediante aire ( 35 a 42 °C). La termoterapia puede
utilizarse combinada con el cultivo de meristemas, siendo a veces la única posibilidad de regenerar
plantas libres de virus. En los casos en que no es imprescindible, permite aumentar el tamaño de los
explantos mejorando la tasa de regeneración de plantas.
 Quimioterapia

Debido a que la multiplicación de virus y el metabolismo de los hospedantes están íntimamente

asociados, los intentos que se han hecho para interferir selectivamente la replicación viral no han dado
resultados satisfactorios. Sin embargo, desde hace algunos años está siendo utilizada con éxito el
Ribavirín (1-b-dribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamida). Este producto, también denominado
Virasole, no es fácil de conseguir y su precio es elevado. En ensayos realizados utilizando ribavirín al
medio de cultivo de meristemas in vitro se ha conseguido mejorar significativamente la obtención de
plantas libres de virus.
 Quimioterapia y tratamiento por frío
Debido a que la multiplicación de virus y el metabolismo de los hospedantes están íntimamente
asociados, los intentos que se han hecho para interferir selectivamente la replicación viral no han dado
resultados satisfactorios. Sin embargo, desde hace algunos años está siendo utilizada con éxito el
Ribavirín (1-b-dribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamida). Este producto, también denominado
Virasole, no es fácil de conseguir y su precio es elevado. En ensayos realizados utilizando ribavirín al
medio de cultivo de meristemas in vitro se ha conseguido mejorar significativamente la obtención de
plantas libres de virus.

En algunos pocos casos citados el tratamiento con frío parece tener un efecto similar al de la termoterapia para
eliminar virus de plantas.
Cultivos in vitro
Explantes
(134) Cultivo in vitro. Definición y preparación. | 20/48 | UPV – YouTube

https://www.youtube.com/watch?v=mR_hkX3x8XE

https://www.youtube.com/watch?v=FpOu60dC3So
 2° Clase teórica
Enzimas de restricción
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Métodos moleculares de identificación de bacterias y levaduras
Virus