Universidad Autónoma de San Luis Potosí

Facultad de Ciencias Químicas

Ingeniería de Bioprocesos
Laboratorio de Ingeniería Genética

CUESTIONARIO PRE-LABORATORIO 2
Martínez Pruneda José de Jesús
Juárez Correa Héctor Ariel
Ortiz Córdoba Jesús Misraim

1. ¿Qué aplicaciones biotecnológicas puede tener el transformar genéticamente a

una bacteria? (Valor 0.6)
La transformación genética de bacterias tiene una amplia variedad de aplicaciones
biotecnológicas debido a la capacidad de estas células para expresar genes foráneos de
manera eficiente. Algunas de las aplicaciones biotecnológicas más comunes incluyen:
• Producción de proteínas recombinantes: Las bacterias transformadas
genéticamente pueden utilizarse para producir proteínas recombinantes de interés,
como insulina, enzimas industriales, factores de crecimiento y más. Estas proteínas
se producen en grandes cantidades y se utilizan en medicamentos, alimentos y
procesos industriales.
• Ingeniería metabólica: Las bacterias pueden modificarse genéticamente para
mejorar su capacidad de producir metabolitos o compuestos específicos, como
bioplásticos, biocombustibles o productos químicos de interés industrial.
• Estudios de genética y genómica: La transformación genética de bacterias es una
herramienta valiosa para la investigación en genética y genómica. Puede usarse
para estudiar funciones de genes específicos, regulación génica y secuenciación del
ADN.
• Producción de vacunas y terapias génicas: Las bacterias genéticamente
modificadas pueden utilizarse para producir antígenos de vacunas y terapias
génicas que estimulan respuestas inmunológicas específicas.
• Producción de péptidos y antibióticos: Las bacterias transformadas pueden
producir péptidos antimicrobianos y antibióticos con aplicaciones en la industria
farmacéutica y médica.
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2. ¿Cómo se puede manipular a una bacteria para que alcance su “estado de

competencia”? (Valor 0.6)
La manipulación de una bacteria para que alcance su estado de competencia, es decir, su
capacidad de tomar ADN exógeno del entorno, puede lograrse mediante varios métodos,
siendo uno de los más comunes el proceso de transformación bacteriana:
1. Preparación de bacterias receptivas: Las bacterias receptoras se cultivan
en un medio de crecimiento adecuado hasta que alcancen una fase de
crecimiento temprana, generalmente en la fase logarítmica. Esto asegura
que las células estén en un estado activo y se dividan rápidamente.
2. Preparación del ADN exógeno: El ADN que se desea introducir en las
bacterias se prepara. Puede ser un plásmido, un fragmento de ADN
genómico u otro material genético de interés. El ADN se purifica y se
concentra.
3. Tratamiento térmico: En la técnica de transformación por choque térmico,
las bacterias se someten a un tratamiento térmico, generalmente un breve
choque de calor a una temperatura elevada (por ejemplo, 42-45°C) durante
un corto período de tiempo. Este choque térmico aumenta temporalmente la
permeabilidad de la membrana celular, lo que permite que el ADN exógeno
pueda entrar en la célula.
4. Incubación con ADN: Después del choque térmico, el ADN exógeno se
mezcla con las bacterias y se incuba a una temperatura más baja (por
ejemplo, 37°C) durante un período de tiempo. Durante esta incubación,
algunas bacterias tomarán el ADN exógeno y lo incorporarán en su genoma
o lo mantendrán como un plásmido.
5. Selección y crecimiento: Después de la incubación, las bacterias se
extienden en placas de agar con un medio de cultivo que contiene un
antibiótico específico al cual solo las bacterias transformadas deberían
resistir gracias al gen de resistencia presente en el ADN exógeno.
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3. ¿Cuáles son los parámetros críticos para considerar durante la electroporación?

(Valor 0.6)
• Voltaje
• Constante de tiempo
• Capacitancia
• Resistencia
• Concentración de ADN
• Tipo de electrodos
• Medio de electroporación
• Temperatura
• Pulsos múltiples
La optimización de estos parámetros críticos es esencial para lograr una electroporación
exitosa y eficiente en las células de interés. Estos parámetros pueden variar según el tipo
de célula y el equipo utilizado, por lo que es importante realizar pruebas y ajustes
específicos para cada experimento.

4. ¿Cuál es la función de los siguientes elementos del vector pBI-121 (ver figura
2)? (Valor 0.17 cada uno)
a) oriV: se refiere al origen de replicación de la región viral de pTi (plásmido de
transferencia de Tumor-inductor) de Agrobacterium tumefaciens. Este origen de
replicación permite que el vector sea replicado en Agrobacterium, que luego puede
utilizarse para transferir el gen de interés a las células vegetales.
b) ColE1 ori: Origen de replicación de ColE1 es un origen de replicación presente en
el plásmido. Permite la replicación del plásmido en bacterias, lo que es esencial para
mantener y amplificar el vector en el laboratorio.
c) RB y LB: RB (Right Border) y LB (Left Border) son secuencias de ADN que
flanquean el gen de interés en el vector. Estas secuencias son reconocidas por
Agrobacterium tumefaciens y son esenciales para la transferencia del gen al
genoma de la planta huésped.
d) nptII: El gen nptII codifica la enzima neomicina fosfotransferasa II, que confiere
resistencia a los antibióticos como la kanamicina o la neomicina. Se utiliza como
marcador de selección en bacterias y plantas transgénicas. Las plantas que han
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incorporado el gen nptII sobrevivirán en presencia del antibiótico, lo que permite

seleccionar las plantas transformadas.
e) Nos ter: El término “Nos ter” generalmente se refiere a la secuencia de terminación
del gen 3’ del octopina sintetasa del plásmido de Agrobacterium. Esta secuencia se
utiliza en la construcción de vectores para asegurar la correcta terminación de la
transcripción de los genes introducidos en plantas.
f) pCAMV35S: Este promotor, obtenido del virus del mosaico de la coliflor (CaMV), es
un potente promotor de la expresión en plantas. Se utiliza para dirigir la transcripción
de los genes de interés en el vector.
g) uidA: El gen uidA codifica la enzima β-glucuronidasa (GUS). La enzima GUS se
utiliza comúnmente como marcador para verificar la expresión de genes en plantas
transgénicas. Cuando se inserta un gen de interés junto al promotor pCAMV35S, la
GUS se expresa y permite detectar visualmente la actividad del promotor en las
plantas transformadas.

Bibliografía

• Chávez-Camacho M, Valadez-Moctezuma E, Carrillo-Castañeda G, Lozoya-Gloria

E. (2002) Expresión transitoria del gen de la beta-glucoronidasa y efecto del
bombardeo en tejido de crisantemo (Dendrathema grandiflorum) Revista Chapingo
Serie Horticultura 8: 107-121.
• Froger A, Hall JE. (2007) Transformation of plasmid DNA into E. coli using the heat
shock method. J Vis Exp, 6:253-256.
• Genes VIII, Lewis B., Pearson, Prentice Hall (2007).