UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
BIOLÓGICA Y FISIOLOGÍA ANIMAL

CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA

P7. - CONSUMO DE GLUCOSA EN AEROBIOSIS POR

Saccharomyces cerevisiae.
INTRODUCCIÓN

Catabolismo: proceso orgánico

mediante el cual moléculas complejas
se simplifican a sus formas más
sencillas, liberando energía que luego
es usada para diferentes tejidos u
órganos del organismo
La energía de los alimentos se extrae en tres etapas

Grandes moléculas de alimentos se fragmentan hasta

moléculas más pequeñas.
Etapa de preparación → no se genera energía útil.

Estas numerosas moléculas Pequeñas se degradan

hasta unas pocas unidades simples (papel central en
el metabolismo).
Se genera algo de ATP (menos que en 3ra etapa).

Se produce ATP a partir de la oxidación completa del

fragmento acetilo del acetil-CoA.
CAC y FO → Vías finales comunes en la degradación
de las moléculas combustibles.
 Catabolismo

Respiración
Oxidación total de la materia
orgánica
Los productos de reacción no
contienen energía
Se libera toda la energía
Fermentación
Oxidación parcial de la materia orgánica
Los productos de reacción contienen todavía
energía
Se libera poca energía
El aceptor final de electrones es una molécula
orgánica

Aerobia Anaerobia Alcohólica Láctica

Aceptor final Aceptor final
el O2 molécula
inorgánica
distinta del O2
ATP: es una molécula altamente energética que es sintetizada a partir del catabolismo de
moléculas como glucosa, lípidos, y rara vez proteínas. El ATP es la principal fuente de energía
para las diferentes funciones celulares como la síntesis de otras moléculas, el transporte a
través de las membranas celulares, entre muchas otras funciones.
Una reacción termodinámicamente favorable puede dirigir otra desfavorable

¿Cómo se agrupan las reacciones individuales para formar un vía específica?

1. Las reacciones individuales deben ser

específicas.
Una vía debe cumplir al
menos dos criterios:
2. El conjunto de las reacciones que forman la
vía debe ser termodinámicamente favorable.

A B+C ΔG°´= +21 KJ mol¯¹ (+5 Kcal mol¯¹)

B D ΔG°´= -34 KJ mol¯¹ (-8 Kcal mol¯¹)

A C+D ΔG°´= -13 KJ mol¯¹ (-3 Kcal mol¯¹)

Una reacción termodinámicamente desfavorable puede ser dirigida por una

termodinámicamente favorable a ella.
El ATP es la divisa universal de energía libre en los sistemas biológicos

Cuando el ATP se hidroliza → se desprende una gran cantidad de energía libre

La energía desprendida se utiliza para impulsar reacciones que

requieren un aporte de energía libre. A su vez se puede formar ATP (a
partir de ADP y Pi) cuando se oxidan las moléculas combustibles

El ciclo ATP-ADP, es la forma fundamental de intercambio

de energía en los seres vivos.
La piruvato deshidrogenasa conecta la
glicólisis con el ciclo del ácido cítrico

El CAC no genera una gran

cantidad de ATP ni incluye al
Oxígeno como reactante.
 Saccharomyces cerevisiae

Es un microorganismo facultativo que

emplea la respiración aerobia al igual
que la fermentación alcohólica para
metabolizar la glucosa como fuente
de energía y de carbono.

Es la especie de levaduras utilizada

por excelencia para la obtención de
etanol a nivel industrial debido a que
es un microorganismo de fácil
manipulación y recuperación
Metabolismo de Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae puede llevar a cabo
un metabolismo respiratorio o fermentativo de
acuerdo con concentración de oxígeno.

En condiciones aerobias: aumenta la biomasa

En condiciones anaeróbicas: el crecimiento
celular es lento y la producción de etanol es alta.

Por esta razón, la oxidación completa de la fuente

de carbono a CO2 y H2O presenta una producción
celular óptima, donde el oxígeno es el aceptor final
de electrones en la fosforilación oxidativa durante
la respiración.

Es así, que en concentraciones altas de oxígeno

disuelto la fermentación de azúcar a etanol es
inhibida.

Esta situación fue observada por Pasteur en 1967,

y se denomina el efecto Pasteur .
El efecto Pasteur

Cuando los cultivos anaerobios de levaduras que metabolizaban

glucosa se exponían al aire, se reducía drásticamente la tasa de
utilización de glucosa.

Se obtiene mucha más energía a partir de la oxidación completa

de la glucosa que sólo a partir de la glucólisis.

El efecto Pasteur se produce en microorganismos capaces de

realizar metabolismo fermentador y respiración aerobia
(anaerobios facultativos).

En presencia de O2 utilizan la respiración aeróbica, pero pueden

emplear la fermentación si no hay O2 libre en su medio ambiente.

Pasteur fue el primero en observar que el azúcar es convertido

en alcohol y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que en
presencia de aire se forma muy poco o nada de alcohol, siendo
el CO2 el principal producto final de esta reacción aeróbica. Este
efecto indica el mayor rendimiento energético de la respiración
sobre la fermentación.
Un gran número de levaduras pueden
metabolizar los azucares en aerobiosis y en
anaerobiosis.

Para un mejor rendimiento celular, se consume

menos azúcar en aerobiosis que en
anaerobiosis, o dicho de otro modo, la
aerobiosis implica una disminución del consumo
de azúcar y una disminución de la fermentación .

Esta inhibición de la fermentación por la

respiración se llama “Efecto Pasteur”.
EFECTO PASTEUR
COMPETENCIA
Piruvato descarboxilasa (fermentación) que Piruvato deshidrogenasa (respiración)
tiene una baja afinidad por el piruvato (KM = 3 que tiene una gran afinidad ( 0,1 – 0,2
– 4 mM) mM).

Únicamente cuando la cantidad de piruvato sobrepasa la capacidad de la piruvato

deshidrogenasa puede entonces acumularse para permitir el funcionamiento de la
piruvato descarboxilasa y, de este modo, hacer posible la fermentación.

La importancia del efecto Pasteur varía según las

especies de levaduras. Es tanto más marcado
cuanto más importante es el metabolismo
respiratorio en las cepas.
El efecto Pasteur es más notorio en Candida
troicalpis. En Saccharomyces cerevisiae, el efecto
Pasteur bien está ausente, o bien tiene una
amplitud muy débil.
Respiración
aerobia
 BALANCE ENERGÉTICO DE LA OXIDACIÓN COMPLETA DE UNA
MOLÉCULA DE GLUCOSA
AEROBIOSIS

Glucosa → 2 Piruvato (Glucólisis) ---- citoplasma

ATP netos = 02 ATP (04 ATP – 02 ATP)
NADH + H= 02 NADH

según la Lanzadera del NADH → electrones a mitocondria

Glicerol 3-Fosfato → 2 FADH2 mit → F.O. → 3 ATP a
Malato-Aspartato → 2 NADH mit → F.O. → 5 ATP

02 Piruvato → 2 Acetil – CoA ----- mitocondria

NADH + H= 02 → F.O. → 5 ATP

2 Acetil – CoA → 2 Ciclo de Krebs ---mitocondria

Por Ciclo = 10 ATP
NADH + H= 03 → F.O. → 7,5 ATP
Ciclo FADH2= 01 → F.O. → 1,5 ATP
01 GTP = 01 ATP Dos ciclos = 20 ATP

F.O.: Fosforilación Oxidativa TOTAL = 30 a 32 ATP

 Balance de los procesos de la respiración aerobia

Proceso Sustancia inicial Sustancia final Coenzimas ATP totales

reducidas y ATP

Glucolisis Glucosa 2 ácido pirúvico 2 NADH 3 a 5 ATP (AER: F.O.)

2ATP 2ATP (a nivel de
sustrato)
Descarboxilación 2 ácido pirúvico 2 acetil Co- A 2 NADH 5 ATP (F.O.)
del ácido pirúvico 2 CO2

Ciclo de Krebs 2 Acetil Co-A 4 CO2 6 NADH 15 ATP (F.O.)

2 FADH2 3 ATP (F.O.)
2 GTP 2 ATP (Aerobiosis)

Balance global Glucosa 6CO2 30 a 32 ATP

6CO2 6H2O
+1 +2
Ind (red)
Solución fosfomolibdica
ácido fosfomolíbdoso

+3 +1
Ind (oxi)
Solución fosfomolibdica

ácido fosfomolíbdico
precipitado rojo-ladrillo
OBJETIVO

La presente experiencia práctica de laboratorio, tiene como

finalidad la demostración del consumo de glucosa en
anaerobiosis y aerobiosis por Saccharomyces cerevisiae.
MATERIALES
❑Buffer de acetato 0.1 M
pH 5
❑Glucosa 0.2 M.
❑Ácido sulfúrico 2/3 N.
❑Tungstato de sodio 10
%
❑Solución cúprico
alcalina.
❑Solución fosfomolibdica.
❑Agua destilada.
MÉTODO
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN:

1.8 mL
12.0 mL 1.5 mL
Glucosa 0.2 M
Buffer acetato Suspensión de
en buffer
0.1 M pH 5 levadura 1% en
acetato 0.1 M
buffer acetato
pH 4.6
SISTEMA DE INCUBACIÓN
AEROBIO:

tomar una
alícuota de 1 mL 1 mL de H2SO4
2/3 N t=0
tomar una
alícuota de 1 mL

inyectar el aire con un aireador

durante todo el tiempo de
incubación
1 mL de H2SO4
incubación, 2/3 N
durante
una hora

t=60
SISTEMA DE INCUBACIÓN
AEROBIO: 1 mL
tungstato de
de

sodio 7 mL de
(Na WO ) al 10
2 4
agua
%. destilada

Mezclar y Mezclar mezclar por Recolectar

dejar en vigorosamente y inversión y filtrado
reposo por 2 dejar en reposo filtrar.

t=0 minutos por 2 minutos

1 mL de
tungstato de
sodio 7 mL de
(Na WO ) al 10
2 4
agua
%. destilada

t=60 Mezclar y Mezclar mezclar por Recolectar

dejar en vigorosamente y inversión y filtrado
reposo por 2 dejar en reposo filtrar.
minutos por 2 minutos
B.DETERMINACIÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:
t=0 t=60
Aerobio 1 ml 0,5 ml 0,5 ml

Agua
destilada B I II

0,5 ml

t=0
I

0,5 ml

t=60 II
B.DETERMINACIÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:

t=0 t=60
Aerobio
1 ml 1 ml 1ml

B I II

Mezclar y colocar en baño de agua hirviendo por 8 minutos.

Al termino de este tiempo enfriar en agua corriente
B.DETERMINACIÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:

Aerobio

t=0 t=60
7ml
1 ml 1 ml 1ml
Solución
fosfomolíbdica
B Agua
I II
destilada

mezclar enérgicamente y dejar en reposo 3 minutos

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

AEROBIO

B I II

¿Cómo se explica el consuo los cambios de color ?