METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACARIDOS Y

POLISACARIDOS)

1. RESUMEN

Las propiedades bioquímicas y las reacciones características de las diferentes

biomoléculas dependen de los distintos grupos funcionales que las constituyen. En
esta práctica se analizó una de las principales macromoléculas (Carbohidratos) y se
realizaron algunas reacciones químicas específicas que permitió la identificación de
dicho grupo.

2. INTRODUCCION

Los carbohidratos también llamados azúcares, osas o sacáridos, son

polihidróxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos poliméricos que por
hidrólisis producen polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas. Según el número de
unidades de azúcares sencillos que posean se clasifican en:

MONOSACÁRIDOS o azúcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS

cuando contienen el grupo aldehído o CETOSAS cuando contienen el grupo
cetona. Los monosacáridos naturales pertenecen a la serie D de los azúcares
y pueden tener entre tres y hasta siete átomos de carbono.

DISACÁRIDOS que están formados por dos monosacáridos unidos entre sí

por enlaces glucosídicos.

OLIGOSACÁRIDOS que tienen entre tres y diez monosacáridos unidos

también por enlaces glucosídicos.

POLISACÁRIDOS que son polímeros naturales con varios miles de unidades

de azúcar sencillo ligadas entre sí. De acuerdo con lo anterior, además de
reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es
necesario diferenciar si se trata de un monosacárido tipo aldosa o cetosa, si
es fácilmente oxidable o no, es decir si es un AZÚCAR REDUCTOR o no lo es,
si es de cinco átomos de carbono (pentosa) o de seis átomos de carbono
(hexosa), si es disacárido o polisacárido.

Una secuencia que permite hacer el reconocimiento y diferenciación de

carbohidratos se esquematiza en:

Ensayo de Molish: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de

carbohidratos en el que los polisacáridos y disacáridos se hidrolizan con
 ácido sulfúrico concentrado hasta monosacáridos y se convierten en
derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con a-
naftol formando un color púrpura violeta.

Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de

carbohidratos reductores. Al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict
contiene ion cúprico en medio alcalino que se reduce hasta óxido cuproso en
presencia de azúcares con el hidroxilo hemiacetálico libre.

Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacáridos y

disacáridos reductores, también contiene ion cúprico que se reduce hasta
óxido cuproso más rápidamente con los monosacáridos que con los
disacáridos.

Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y
yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la
formación de una coloración azul-violeta intensa y el glicógeno y las
dextrinas por formación de coloración roja.

Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la

conversión de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensación
con resorcinol formando así complejos coloreados.

Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en ácido clorhídrico, el

cual forma complejos de coloración sólo con las pentosas.

A través de esta práctica se logro la identificación por métodos colorimétricos

cuantitativos de carbohidratos: monosacáridos, disacáridos y polisacáridos.

3. MATERIALES Y METODOS

 12 tubos de ensayo
 Pipeta de 10 o 5 ml
 Pipeta de 1 ml
  Estufa para baño de Maria
 microscopio

Reactivos:
 Molish
 Barfoed
 Bial
 Seliwanoff
 Fenilhidrazina
 H2SO4

Mediante los siguientes procedimientos se analizó un carbohidrato (sustancia

problema), continuando con el estudio de Hidrólisis ácida de disacáridos
respectivamente (Maltosa y Sacarosa).

3.1. Análisis para monosacáridos, disacáridos y polisacáridos.

Sustancia Prueba Volumen Procedimiento

problema
ml
1 Molish 2 gotas Se llevo a baño de María por 10 minutos, y se
observaron resultados
1 Barfoed 2.5 ml Se mezclo y se llevo a baño de María, una vez
apareció el precipitado rojo, se sacaron del calor
y se anotaron los resultados
1 Bial 1.5 ml Se llevo a baño de María durante 3 min y se
observaron los resultados.
1 Seliwanoff 2 ml Se llevo a baño de María por 10 minutos, y se
observo la coloración que indicaba la presencia de
pentosa
2 Fenilhidrazi 0.5 ml Se llevo a baño de María durante 10 min y
na posteriormente se enfrió el tubo en agua y se dejo
reposar durante 5 min, para identificar bien los
cristales se examinaron con ayuda de un
microscopio

3.2. Hidrólisis ácida de disacáridos.

tubo solución disacárido HCl H2O Neutraliza
(ml) 1N (ml) ción
(ml) 0.5 ml de
Se Hirvieron benedict y
simultánea se llevo a
mente a baño de
baño de María por 2
María + min
1 Maltosa 1 1 0 7 gotas de
2 Sacarosa 1 1 0 NaOH 1N
3 Maltosa 1 0 1 7 gotas de
4 Sacarosa 1 0 1 agua

Se observó y se registró los resultados obtenidos.

4. RESULTADOS Y DISCUCIONES

4.1. Análisis para monosacáridos, disacáridos y polisacáridos.

Identificación de carbohidrato
Prueba Cambios Resultado
Molish Anillo violeta carbohidrato
Barfoed Precipitado rojo antes de los Monosacáridos
6 minutos
Bial No cambio su color naranja Hexosa
Seliwanof Leve coloración Glucosa o galactosa
fenilhidrazina Cristales en forma de palma GLUCOSA
Tabla1

Se realizó la prueba con el reactivo de Molish y se observo una reacción con la

solución problema. Por lo tanto se infirió que este reactivo sirve para la
identificación general de carbohidratos (hidrólisis de polisacáridos y disacáridos con
el ácido sulfúrico hasta monosacáridos).

Seguidamente se aplicó el reactivo de Barfoed a la solución problema y se obtuvo

que la solución en estudio correspondió a un Monosacárido, puesto que no tardo
más de 6 minutos en presentarse un precipitado rojo; esto se debe a la rapidez con
que el ácido cúprico es reducido a oxido cuproso. (Mayor rapidez de oxidación en
presencia de monosacáridos que en presencia de disacáridos).
Después de esto, se mezclo la solución problema con el reactivo de Bial y no se
percibió ningún cambio de coloración, lo cual indico que la solución problema era
una hexosa. (Este reactivo sólo toma coloración en presencia de pentosas).

Cuando se realizó la prueba con Seliwanoff, se determinó solo una leve coloración
en la solución, lo cual evidenció la ausencia de grupos cetonicos, por lo que se podía
tratar de Glucosa o Galactosa (solución problema).

Para finalizar se realizó la mezcla de solución problema con el reactivo de

fenilhidrazina y se logró demostrar que nos encontrábamos en presencia de un
azúcar reductor GLUCOSA.

4.2. Hidrólisis ácida de disacáridos.

Hidrolisis acida de carbohidratos

Disolución de disacárido Cambio observado
Maltosa (HCl-NaOH) Rojo ladrillo
Sacarosa (HCl-NaOH) Naranja ladrillo
Maltosa (Agua) Naranja zanahoria
Sacarosa (Agua) No cambio color (verde claro)

Tabla2

El fundamento de esta reacción radicó en que en un medio alcalino (NaOH),

el ión cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) fue capaz de reducirse por efecto del
grupo aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observó como
un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).

El medio alcalino facilitó que el azúcar se tornara a su forma lineal, puesto que el
azúcar en solución forma un anillo piranósico. Una vez que el azúcar se encontró
linealmente, su grupo aldehído pudo reaccionar con el ion cúprico en solución.

En este ensayo se observo que la Maltosa fue capaz de dar positivo. Esto ocurrió
por las condiciones en que se realizó la prueba: en un medio alcalino caliente este
disacárido se tautomeriza a glucosa (que es capaz de reducir al ion cúprico).

La sacarosa (enlace α (1 → 2) O), es un disacárido que no posee carbonos

anoméricos libres puesto que están siendo utilizados en el enlace glucosídico, por lo
que carece de poder reductor. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la
sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en
los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores. La
prueba que se realizó demostró la hidrólisis de este disacárido dando un resultado
positivo: aparición de un precipitado naranja ladrillo, lo cual demuestra que se
rompió el enlace O-glucosídico de esta.
5. CONCLUSIONES

1. Monosacáridos como la glucosa y disacáridos como la maltosa a excepción

de la sacarosa son azucares reductores.

2. La maltosa presenta en su estructura el OH hemiacetálico por lo que es un

azúcar reductor, es decir tienen su OH anomérico libre, y éstos son los que
dan positivo en la prueba de Benedict.

3. La sacarosa no es un azúcar reductor, pero en presencia de HCl (medio ácido

caliente) esta puede hidrolizarse a sus monosacáridos que la componen
(Glucosa- Fructosa) lo que da positivo en la prueba de Benedict.

4. En la reacción con el ácido sulfúrico los disacáridos y polisacáridos se

hidrolizan logrando la identificación de los monosacáridos que los
componen.

6. PREGUNTAS

1. Cuáles son las aplicaciones prácticas de las pruebas estudiadas

Ayudan a la determinación específica de carbohidratos en general sin

importar si son monosacáridos, disacáridos o polisacáridos (Molish). Las
demás pruebas son usadas para la determinación especifica de azucares
según sus grupos funcionales y el número determinado de sus carbonos.

2. Escriba la glucosa en forma de silla

3. Defina los siguientes términos: carbono anomérico, centro quiral,

levorrotatorio.
 Carbono anomérico: hace referencia al carbono carbonílico que se
transforma en un nuevo centro quiral tras una ciclación hemicetal o
hemiacetal.

Centro quiral: es un átomo unido a cuatro sustituyentes diferentes. Una

molécula que posee. Un centro quiral tiene una imagen especular no
superponible con ella, denominada enantiómero.

Levo rotatorio: (levo: griego, al contrario) o levógiro Se denomina así a los

monosacáridos que poseen actividad óptica y desvían el plano de la luz
polarizada hacia la izquierda, en sentido opuesto a las manecillas del reloj,
y se indica con el signo (-) o la letra “l”.

4. Dibuje los monosacáridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa, clasifíquelos

según el número de átomos de carbono y la función principal.

Hexosas Función Pentosa función

es la fuente principal de energía de las
Glucosa células, mediante la degradación
catabolica
La galactosa se convierte en glucosa en
el hígado e intestinos, de manera que
sirva de combustible metabólico para Principal
Galactosa las células. Es sintetizada en las fuente de
glándulas mamarias para la producción Ribosa energía
de lactosa. Además es constituyente de para el
glucolipidos y glucoproteinas. corazón

La fructosa se convierte en glucosa en

el hígado e intestinos, de manera que
Fructosa
sirva de combustible metabólico para
las células.
5. Efectué un enlace hemiacetalico y uno hemicetalico, escriba las diferencias
entre ambos enlaces.

El enlace hemiacetalico se forma por reacción entre el carbonilo de un grupo

cetona con un grupo hidroxilo de un alcohol. Y el enlace hemicetalico se da
entre el carbonilo de un grupo aldehído con un hidroxilo de un alcohol.

6. Escriba las funciones: aldehidica, cetonica, alcohólica, acida, colóquelas en

orden de reactividad y explique el por qué de ese orden.
7. Explique en qué consiste la hidrólisis acida de disacáridos

Disacáridos: (ejemplo, la sacarosa), producen dos moléculas de

monosacárido por hidrólisis. Rompimiento de enlace glucosidico.
La sacarosa (enlace α (1 → 2) O), es un disacárido que no posee carbonos
anoméricos libres puesto que están siendo utilizados en el enlace
glucosídico, por lo que carece de poder reductor. Sin embargo, en
presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora
una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la
forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores, lo cual demuestra que
se rompió el enlace O-glucosídico de esta.

8. Escriba y compare las formulas de la maltosa y la trealosa.

La maltosa resulta de la unión de dos glucosas de manera que el

carbono anomérico de una se une al grupo -OH en el carbono 4 de
otra, quedando la primera de ellas en configuración a-. Por eso el
nombre sistemático de la maltosa es a-D-glucopiranosil- (1,4)-D-
glucopiranosa. Al quedar el carbono anomérico libre en la segunda, la
maltosa tendrá propiedades reductoras y formas anoméricas a- y b-.

La trehalosa es un disacárido formado por dos glucosas unidas por su

carbonos anoméricos respectivos. Al no quedar ningún carbono
anomérico libre, la trehalosa recibe el siguiente nombre
sistemático: a-D-glucopiranosil -a-D-glucopiranósido. Obsérvese el
sufijo ósido para indicar su carácter no reductor; igualmente, al hacer
la denominación sistemática hay que nombrar el carácter anomérico
de ambos residuos (a- y a- en este caso)
 9. Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor, cite
ejemplos.

Azucares reductores: son los monosacáridos (todos las aldosas, es

decir aquellos que presentan un grupo aldehído en su estructura
lineal, por ejemplo: glucosa, manosa, fructosa, galactosa, ribosa, etc.)
y los disacáridos (no todos, ejemplos son la maltosa, lactosa y
celobiosa).
Experimentalmente se puede demostrar que son reductores
mediante un ensayo sencillo como Fehling o Tollens.

Azucares no reductores: Los azúcares No Reductores son aquellos

que se unen por enlaces glucosídicos de tipo Alfa o Beta, cuando 2
monosacáridos iguales o diferentes se unen forman un Disacàrido, los
Disacàridos por condensación liberan una molécula de agua y son
azúcares no reductores ya que el grupo Oxidrilo ( OH ) de una hexosa
se combina con el grupo Aldehído ( CHO ) de otra hexosa liberando 1
molécula de H20, el licor de Feeling no tiene efecto sobre ellos lo cual
los determina como azúcares no reductores, por ej la Sacarosa
( glucosa + fructosa ) Maltosa ( 2 unidades de alfa glucosa), Trehalosa,
etc.

10. Cuál es la importancia energética del almidón.

El almidón es la sustancia con la que las plantas almacenan su alimento en raíces

(yuca), tubérculos (patata), frutas y semillas (cereales). Pero, no sólo es una
importante reserva para las plantas, también para los seres humanos tiene una alta
importancia energética, proporciona gran parte de la energía que consumimos los
humanos por vía de los alimentos. Se encuentra en las patatas, el arroz, los cereales,
las frutas, etc. En una dieta sana, la mayor parte de la energía la conseguimos a
partir del almidón y las unidades de glucosa en que se hidroliza.

11. Efectué un enlace glucosídico.

BIBLIOGRAFIA

 CHANG WILLIAMS, Raymond. QUIMICA SEPTIMA EDICION. Colombia;

McGraw-Hill MAYO 2005.

 HORTON ROBERT. BIOQUIMICA. Mexico; Prentice-hall Hispanoamericana,

1995.

 Briceño, C.O y Rodríguez de Cáceres Lilia. Química General. Curso

universitario De Pime, 1988.