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Ara UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS


CARRERA DE INGENIERA BIOQUMICA
LABORATORIO DE BIOLOGA APLICADA

Semestre: Segundo Bioqumica U


Nombre: Felix Jerez, Daniel Gutierrez Fecha: 3/12/2014
DETECCIN DEL PIRUVATO EN LA GLUCLISIS

1. INTRODUCCIN

Una ruta metablica es la sucesin de reacciones qumicas que conducen de un sustrato


(donde acta la enzima) inicial a uno o varios finales, a travs de una serie de metabolitos
intermediarios. Su conjunto da lugar al metabolismo y metabolismo.
Estas rutas pueden ser catablicas, anablicas y anfiblicas. (Tabison A. 2009).

En las rutas metablicas se necesitan numerosas y especficas molculas que van conformando
pasos y productos intermediarios de las rutas. Pero, adems son necesarios varios tipos de
rutas indispensables para su desarrollo final. (Nelson y Cox. 2002).

Una ruta metablica es una serie de reacciones consecutivas catalizadas por un enzima que
produce compuestos intermedios y finalmente un producto o productos, metablica es la
sustancia inicial de otra ruta.
Las rutas metablicas comparten varias caractersticas comunes, por ejemplo la mayora
requiere ATP como fuente de energa, las sustancias intermedias no se almacenan, se
producen los intermedios de otras sustancias en el momento en que es necesario.
(Carrillo A. 2006)

2. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Demostrar la presencia de piruvato en las vas metabolicas mediante la glucolisis

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Detectar el piruvato mediante diferentes soluciones.
Indicar la presencia o ausencia de piruvato en los diferentes casos
3. MATERIALES Y REACTIVOS

Tabla 1.- Materiales, equipos y reactivos

MATERIALES REACTIVOS
o Tubos de ensayo o Sol. glucos a al 10 % (50 ml)
o Vas os de precipitacin o Sus p. levadura al 10 % en Na 2 HPO4 0.5 M (50 ml)
o Pipetas graduadas o Sus p. levadura al 10 % en KH2PO4 0.5 M (50 ml) Sol.
o Probeta cido tricloroactico al 10% (25 ml)
o Centrfuga o Sol. 2,4-dinitrofenilhidracina s aturada en HCl 2 M (25
o Balones volumtricos ml)
o Sis tema de calentamiento o Sol. NaOH al 10 % (25 ml)

Elaborado por: Caguana I.


Fuente: Laboratorio de Qumica General

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a) Formacin de piruvato a partir de glucosa

FORMACIN DE PIRUVATO A
PARTIR DE GLUCOSA

COLOCAR En dos tubos de ensayo (A y


B) 5 ml de solucin de glucosa

Tubo A agregar 5 ml de la
AGREGAR suspensin de levadura en
solucin alcalina de Na 2 HPO4

Tubo B aadir 5 ml de la
AADIR suspensin de levadura en
solucin cida de KH 2 PO4

los tubos en un bao de


COLOCAR agua a 37 C durante 60
minutos

2 ml de la solucin de cido
AADIR tricloroactico

CENTRIFUGAR Durante 10 min a 2500g

SEPARAR Sobrenadante
b) Determinacin de piruvato

DETERMINACIN DE
PIRUVATO

1 ml de solucin s aturada de
2,4-dinitrofenilhidracina
AGREGAR saturada en HCl 2 M y 2 ml del
sobrenadante obtenido en la
parte a).

MEZCLAR

TOMAR
0,5 ml de
mezcla

1 ml de NaOH al 10 % y 4
AGREGAR
ml de agua.

AGREGAR 1 ml de NaOH al 10
% y 4 ml de agua.

OBSERVAR

Elaborado por: Jerez F., Gutierrez D.


Fuente: Laboratorio de Biologia General

5. RESULTADOS
Formacin del piruvato
Una vez elaborado la solucin se mezcla bien, se la somete al bao mara y
procedentemente a la centrifuga, de estas se tomarn cuatro muestras y con dos
sobrenadantes y sus precipitados.
Determinacin del piruvato
Cuando ya se obtiene los tubos se procede a colocar diferentes reactivos en cada tubo,
obteniendo as que aquellos que presentaron un color rosa deba tener presencia de
piruvato, mientras que los obrantes no.

MUESTRA A1 A2 B1 B2

PRESENCIA PIRUVATO + + - -
Elaborado por: Jerez F., Gutierrez D.
Fuente: Laboratorio de Biologia General
PIRUVATO EN TUBOS A Y B
TUBO A SE PRODUJO UN COLOR INTENSO YA QUE LA
LEVADURA Na2HPO4 EN SOLUCION ALCALINA
CUMPLE EL CICLO DE LA GLUCOLISIS
TUBO B La levadura KH2PO4 en medio acido detiene la
actividad de los microorganismos
Elaborado por: Jerez F., Gutierrez D.
Fuente: Laboratorio de Biologia General

6. DISCUSIN

Mediante la prctica se realiz la identificacin del piruvato a partir de levaduras,


comprobando que estas en estas condiciones normales no s pudieron identificar por lo que se
necesit al crear la solucin de glucosa y levadura ligeramente alcalina o acida en el tubo A y
respectivamente, y exponerlo a bao mara se observo que las
soluciones seguan siendo transparentes sin ningn otro cambio. Se llevaron los tubos
a baomara para proporcionarles el medio en el que se efectuaran
las reacciones referentes al proceso de la glucolisis posteriormente a la
centrifugadora, se realiz el experimento con el sobresaliente de la solucin y tambin se
repiti el experimento con el precipitado que se obtuvo, se identifico el piruvato mediante un
cambio de color que debi tornarse en un color al contrario que en nuestro caso se obtuvo con
color levemente rosa. El color rojo se debi dar ya que el piruvato reacciona en bases ms no
en la presencia de acido. Para este caso de la prctica de laboratorio, se utilizaron soluciones
alcalinas y acida de levadura respectivamente las cuales a causa de su pH determinaron la cantidad de
productos que s e o b t u v i e r o n .

7. CUESTIONARIO
7.1. Elabore una representacin de la gluclisis.
7.2. Elabore un cuadro de clasificacin de las enzimas isostricas y alostricas en la
gluclisis.

ISOTERICAS ALOSTERICAS
Oligomerasas Transferasas
Activadoras Oxido reducrasas
Inhibidoras Trazas
Centros activos Hidrotrazas

7.3. Cuantos ATP s e producen durante la gluclisis.

En el catabolismo aerbico la glucosa se degrada por gluclisis y se obtiene 38ATP.


El catabolismo anaerbico no se degrada y se obtiene 38 ATP. (Mathews H. 1999)

8. CONCLUSIONES
o Se demostr como en ciertas sustancias exista la presencia del piruvato mientras que en
otras este no se manifestaba, la causa fue que solo este solo reaccionaba al estar con bases
mas no con cidos.
o Se detecto que la solucin del piruvato, ya separado su sobrenadante mientras que en el
otro fue con el precipitado por lo que se obtuvo tubos de muestra.
o Se indico que de las muestras realizadas solo la mitad no tenan la presencia del piruvato
mientras que los otros si cambiaron levemente de color, a un rosa claro y los dems de
colores base.

9. BIBLIOGRAFA
o Mathews van H. (1999); Bioqumica, Editorial Mc Graw Hill Interamericana.
o Tabison A. (2009); Carbohidratos, UBA, Argentina-Buenos Aires
o Nelson y Cox, Lenhinger (2002); Principios de bioqumica. Editorial Omega. Ediciones
varias.
o Carrillo A. (2007); Metabolismo
Disponible en: http://www.slidshare.net/atavisin/rutas-metabolicas.pdf
[Consultado: 09/07/14]