UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
BIOLÓGICA Y FISIOLOGÍA ANIMAL

CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA

P8. Determinación del glucógeno en hígado.

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

▪ Cuantificar el glucógeno hepático que hay en el hígado de un

cobayo en estado posprandial y otro en ayunas.

▪ evaluar los valores encontrados relacionándolos con los

factores que determinan su síntesis y degradación.
INTRODUCCION

Amilopectina
El glucógeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos
reducidos (glucosas) de la glucosa en los tejidos animales. se encuentra
principalmente en el hígado y en el musculo representando hasta un 6% y
10 % y un 1-2 % de su peso húmedo ,respectivamente .

Glucógeno
 INTRODUCCION
El hígado
▪ El hígado regula la disponibilidad de los
combustibles metabólicos.

▪ Se encarga de controlar la glucemia,

▪ Cuando la glucemia es alta, el hígado retira glucosa

sérica, almacenándola en forma de glucógeno.

▪ Por otra parte, cuando la glucemia es baja, el hígado

libera glucosa degradando el glucógeno y activando
la gluconeogénesis.
▪ El glucógeno actúa como regulador de la glucosa
sanguínea:

▪ En su estructura, se almacena la glucosa después de

una alimentación abundante en carbohidratos
(glucogenogénesis)

▪ A partir de él, se libera glucosa por fosforolisis

(glucogenólisis) durante el ayuno, ya que en esta
situación no hay absorción intestinal de glucosa.

▪ La duración del glucógeno hepático en ayunas es de

aproximadamente 24 h. A partir de este momento, la
concentración en sangre se mantiene por síntesis de
glucosa a partir de sustancias distintas a los
carbohidratos (gluconeogénesis).
INTRODUCCION SÍNTESIS DE GLUCÓGENO (GLUCOGÉNESIS)
DEGRADACIÓN DEL GLUCÓGENO (GLUCOGENÓLISIS)
MATERIALES

MATERIAL BIOLÓGICO
• Homogeneizado de hígado en ayunas (estado preprandrial).
• Homogeneizado de hígado después de ingerir alimento (estado posprandrial).

MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

• Gradilla para tubos
• Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
• Pipetas de 1 mL, 2 mL, 5 mL
• Baño maría, centrifugadora, espectrofotómetro.

REACTIVOS Y SOLUCIONES
Según el método de Pflugüer modificado, que se usará para la extracción de
glucógeno, son los siguientes:
• Hidróxido de sodio. . Alcohol absoluto . Sulfato de sodio.
• Fenol . Ácido sulfúrico concentrado.
 METODO
Tabla 1. Sistema para la extracción del glucógeno hepático.
COMPONENTES (mL)

Homogeneizado de hígado en ayunas (preprandial)

Homogeneizado de hígado posprandial (después de ingesta).
Destruye las membranas celulares KOH 60%
(saponificación), se libera el Calentar los tubos a 100°C por 10 minutos.
glucógeno.
Hace la Rx más agresiva, máx.
Alcohol al 98%
liberación de glucógeno. Na2SO4
Precipita al glucógeno. Mezclar y dejar en reposo 1 hora. Centrifugar a 3500 rpm
Co-precipitante. Eliminar el sobrenadante y colocar boca abajo los tubos sobr
minutos.
Agua Destilada
Disolver al precipitado por agitación
 METODO
Tabla 2. Cuantificación del glucógeno extraído.

TUBOS
COMPONENTES (mL)
I II B
Muestra de tubo I (Paso anterior) 1,0 - -
Muestra del tubo II (Paso anterior) - 1,0 -
Agua destilada 1,0 1,0 2,0
Fenol 80% 0,1 0,1 0,1
Mezclar y colocar los tubos en agua helada durante 5 minutos
H2SO4(Concentrado) 5,0 5,0 5,0
(Sin retirar tubos del baño helado agregarle el ácido gota a gota en el centro del tubo
y mezclar). Dejar en el baño helado durante 5 minutos. Leer a 540 nm.

El método fenol-ácido sulfúrico es un método colorimétrico que detecta virtualmente todas las clases de carbohidratos,
incluyendo mono-, di-, oligo- y polisacáridos. Aunque el método detecta casi todos los carbohidratos, la absorción de los
diferentes carbohidratos varía (en este caso para el glucógeno se lee a 540 nm).
Todos los carbohidratos tanto oligosacáridos como polisacáridos pueden ser determinados, pues bajo
hidrólisis ácida (con H2SO4) producen monosacáridos, además, el H2SO4 provoca la deshidratación de los
carbohidratos con la eliminación de tres moles de agua, con esta reacción se forman derivados del
furfural y el 5-hidroximetilfurfural (HMF). La presencia del fenol y su interacción con el HMF facilita la
formación de complejos que permiten la coloración de la solución y en consecuencia facilitan la
cuantificación de los carbohidratos a través de la espectrofotometría

HMF

HMF + FENOL COMPUESTO COLOREADO

 RESULTADOS
Tabla 3. Resultados de absorbancia para cuantificar la cantidad de glucógeno.

TUBOS ABSORBANCIA

Blanco
BLANCO 0,048

TUBO 1 0,327

TUBO 2 0,794

Tubo 1 Tubo 2
¿Cómo cuantificar el glucógeno en la muestra de hígado?
Paso 1. Corregir el valor de absorbancia
Absorbancia corregida = Absorbancia muestra – absorbancia blanco

ABSORBANCIA
TUBOS ABSORBANCIA
CORREGIDA

BLANCO 0,048 -

TUBO 1 0,327 0,279

TUBO 2 0,794 0,746

Paso 2. Cuantificar el glucógeno
Glucógeno (g glucógeno/100 g tejido húmedo)= Absorbancia corregida x Factor de conversión
Factor de conversión = 0,014

Glucógeno extraído (g
ABSORBANCIA
TUBOS glucógeno/100 g tejido
CORREGIDA
húmedo)
TUBO 1 0,279 0,0039

TUBO 2 0,746 0,0104

 TUBO 1
0,0039 g glucógeno 3,9 𝑚𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜
[GLUCÓGENO] (AYUNAS O PREPRANDIAL) = =
100 g tejido húmedo 100 𝑔 𝑡𝑒𝑗𝑖𝑑𝑜 ℎú𝑚𝑒𝑑𝑜

Durante el ayuno, disminuye la concentración de glucosa en sangre (hipoglucemia),

por lo que el hígado, libera glucosa a la sangre, mediante fosforolisis del glucógeno
(glucogenólisis), disminuyendo su concentración en el hígado.

TUBO 2
0,0104 g glucógeno 10,4 𝑚𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜
[GLUCÓGENO] (POSPRANDIAL) = =
100 g tejido húmedo 100 𝑔 𝑡𝑒𝑗𝑖𝑑𝑜 ℎú𝑚𝑒𝑑𝑜

En un animal bien alimentado la glucosa es transformada en glucógeno en el

hígado (glucogenogénesis), lo que aumenta su concentración en este tejido.
¿PREGUNTAS?