UNIVERSIDAD DE ORIENTE.

NUCLEO BOLIVAR.
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD.
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLOGICAS.
CATEDRA: LAB. BIOQUIMICA.
GRUPO LUNES “A”

PRÁCTICA 5: METABOLISMO INTERMEDIARIO.

EFECTO DEL AYUNO SOBRE EL CONTENIDO DEL
GLUCÓGENO HÉPATICO

Licdo.: Bachilleres:

Douglas Bermúdez. -Hernández Robert CI: 23.498.176

-Mejía Giohanlis CI: 26.048.465

-Nasser Karem CI: 25.446.640

-Portillo, Fabiana CI: 26.933.374

-Quiroz Ana CI: 23.551.376.

-Ramírez Luisaurys CI: 26.786.912

-Ramírez Roicelis CI: 26.499.627

-Sarli, María CI: 25.914.281

Ciudad Bolívar, Enero del 2016.

 Índice

Pág.

Introducción………………………………………………….………………….…….….3

Metodología………………………………………………………………………………4

Resultados…………………………………………………………...…………………...5

Conclusión y Discusión……………………………..……………………………………6

Referencias Bibliográficas………………………………………………………………..7

Anexos………………………………………….…………….8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15

2
 Introducción

El glucógeno es un polisacárido de reserva energética (de los mamíferos)

formado por cadenas ramificadas de glucosa; es insoluble en agua. Las
Carbohidratos se almacenan en mayor parte en glucógeno y principalmente en el
hígado y en el musculo. Su función principal el mantenimiento de la concentración
de glucosa en sangre. Se deposita aproximadamente 10% del peso del Hígado, y
duran de 12-24hrs durante el ayuno. El glucógeno muscular es utilizado como
combustible de reserva para la contracción muscular, aproximadamente el
depósito de glucógeno es de 1-2% del peso del musculo. El Hígado tiene mayor
de concentración de glucógeno que en el musculo pero como se tiene mayor
masa muscular dobla la cantidad de glucógeno contenido en él en comparación
con el hígado. La síntesis del glucógeno se le denomina glucogénesis. Y la
glucogenólisis es la vía por la cual se degrada el glucógeno, que permite disponer
de la glucosa que esta almacenada en forma de glucógeno.

En esta práctica se va a observar el efecto que tiene el Ayuno tanto en el

Hígado como en el musculo de un animal de experimentación (Hámster) el cual se
va a comparar con otro que estará alimentado, y de esta manera poder observar
las diferencias en ambos tejidos y que efectos se pueden concluir en base a los
resultados producen el ayuno prolongado en el animal de experimentación.

La determinación del grado de pureza de la preparación obtenida se puede

realizar mediante el tratamiento con antrona y comparando con una solución
estándar de glucógeno. El tratamiento con antrona (que contiene (H2SO4) es un
método rápido para la determinación de hexosas y alopentosas constituyentes de
un polisacárido. Mediante este método, el glucógeno es hidrolizado por un ácido
(H2SO4) hasta sus unidades elementales (monosacáridos), que pueden ser luego
deshidratadas dando furfural, y éste último, reacciona con la antrona y se forma un
producto coloreado (azul-verdoso). El valor resultante se compara con los
obtenidos al preparar una recta estándar con glucosa pura, usando el mismo
método.

3
 Metodología

Sacrificar Desangrar Extraer hígado y musculo

esquelético

Pesar 0,5 Gr de cada tipo de Colocar Se Agregar

tejido (tanto hepático como 4ml de deja 7ml de
muscular) KOH enfriar etanol al
30% 95%

Calentar en baño Precipitado: Sobrenadante:

Enfriar Evaporar en descartar
de agua hirviendo
alcohol
por 15 min
Remanente

El glucógeno obtenido en el tubo se debe disolver en 10ml de agua

En animales alimentados se En animales ayunados se toman

toman 0,5 ml de la solución de 0,5 ml de la solución de
glucógeno glucógeno

Se agrega 9,5
Se toman 2,5 ml de Se agrega 2,0 ml con agua
ml con agua
esta solución destilada
destilada

Se cuantifica por el método de la Antrona. Se cuantifica por el método de la Antrona.

4
 Resultados

Tabla N° 1: Absorbancia de los tubos experimentales.

5
 Discusión y Conclusión

En esta práctica pudimos observar los efectos que tiene el ayuno en el

Hígado como en el musculo de un animal de experimentación (Hámster) el cual se
comparó con otro que estuvo alimentado, y se pudo obtener el contenido de
glucosa y glucógeno tanto hepático como muscular.

El glucógeno se extrajo del tejido (hepático y muscular) mediante KOH

(30%) hirviente. Posteriormente, cuando se adicionó el etanol, el glucógeno se
hizo insoluble y los otros compuestos permanecieron en la solución como
sobrenadantes. Una vez que el tejido fue sometido a digestión con KOH y
precipitación con etanol, el glucógeno se determinó espectrofotométricamente
mediante la reacción con antrona para determinar la cantidad de absorbancia para
cada uno de los tubos.

Una vez obtenido los resultados de la ABS, procedimos a realizar la gráfica

de tendencia de la Glucosa la cual se expresa con la ABS de los tubos de
patrones de Glucosa P1, 2, P3, P4, P5, Vs la cantidad de Glucosa la cual se
obtuvo como la cantidad de Glucosa en cada tubo patrón expresado en ml,
multiplicado por 2mg de glucosa, dividido entre 1ml, con lo cual pudimos trazar la
gráfica con estos valores.

Una vez trazada la gráfica, de acuerdo a la absorbancia para Dx1, Dx2,

Dx3, Dx4 se extrapoló a la cantidad de glucosa para cada uno de ellos. Para lo
cual Dx1 y Dx2 representó la cantidad de glucosa obtenida en el Hígado para el
animal alimentado y el de ayuno respectivamente, Dx3 y Dx4 representó la
cantidad de Glucosa obtenida en el Músculo para el animal alimentado y el de
ayuno respectivamente. Luego procedimos a los cálculos para la cantidad de
Glucosa y Glucógeno del hígado y del musculo tanto para el animal alimentado
como para el animal en ayuno.

Se obtuvo que para el Hámster en ayuno los valores del Glucógeno

hepático fueron de 3.02gr y el muscular 0,036gr. Los valores de la Glucosa
hepática fueron de 3,36gr y la glucosa en el muscular de 0,04gr.

Para el hámster alimentado los valores del Glucógeno hepático fueron de

8,13gr y el muscular de 8,64gr. Los valores de la glucosa hepática fueron 9,04 y
muscular 0,048gr.

6
 Referencias Bibliográficas

 Desconocido. ''Extraccion_Cuantificacion''
(SF)http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras/bioquimica/09%20_e
xtraccion_cuantificacion.pdf

 Georman, Daltan L. ''Bioquímica informe ayuna'' Julio 2015.

http://documents.tips/documents/bioquimica-informe-ayuna-nosotros.html

 Lehninger,Albert L. "Bioquímica. Las Bases Moleculares de la Estructura y

Función Celular". 1991. 2da. Edición. Editorial: Ediciones Omega S, A.
Barcelona. Páginas: 272,443,444,445,659,660,661,823,824,825,826

 Lynch,M.J., Rápale, S.S., Mellor, L.D., Spare, P.D., Inwood, M.J.H.

"Métodos de Laboratorio" 1991. Tercera edición. Editorial: Interamericana,
México,D.F. Página 554M.Dolores Delgado. Bioquimica-1° De Medicina
(SF)http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioqumica/material-de-clase-
1/Tema17-Glucogeno08-09.pdf.

 Miguel Calvo. Bioquímica de los alimentos (SF)

http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/lipidos/acidosgrasos.html.

 Murray, Robert K., Granner, Daryl K., Mayes, Peter, A., Rodwell, Víctor
W.F. "Bioquímica de Harper". 1992. 14a. edición. Editorial: El Manual
Moderno. Páginas:
132,133,150,164,172,173,174,175,176,177,178,179,647.

 http://bioquimica2usc.blogspot.com/2013/05/tema-8-gluconeogenesis-y-su-
regulacion.html “Harper De Bioquímica”

7
 ANEXOS

El glucógeno hepático constituye una reserva importante en la reposición de

unidades de glucosa para mantener la concentración sanguínea dentro del rango
fisiológico para cada especie (norglicemia) en períodos de restricción de
alimentos. De esta manera, el hígado puede contener un gran porcentaje de
glucógeno después de una ingesta rica en glucosa, representando hasta un 10 %
de su peso húmedo. Sin embargo, después de 12-18 horas de ayuno, el hígado
sufre una depleción significativa de glucógeno. El glucógeno muscular disminuye
de manera significativa sólo después de un ejercicio vigoroso prolongado y rara
vez se encuentra por encima del 2% de su peso húmedo.

La regulación del metabolismo del glucógeno está influenciada por un

equilibrio entre las enzimas que participan en la glucogénesis o glucogenogénesis
y en la glucogenólisis, las cuales a su vez están bajo el control hormonal de la
insulina y glucagón o adrenalina, respectivamente.

El glucógeno hepático sirve en gran parte para exportar unidades de

hexosa para la conservación de la glucosa sanguínea, en particular entre comidas.
Después de 12 a 18 horas de ayuno, el hígado casi agota su reserva de
glucógeno. El glucógeno muscular sólo disminuye de manera significativa después
de ejercicio vigoroso prolongado.

Preguntas de la Guía

1.- ¿Cuál es el fundamento teórico de la reaccion de la antrona?

La antrona se encuentra disuelta en ácido sulfúrico concentrado, este ácido

tiene por objeto hidrolizar los enlaces glucosídicos del glucógeno, liberando
glucosa; la cual se va a transformar en 5-OHCHfurtural, por deshidratación, y va a
reaccionar con el oxidrilo de dos moléculas de antrona dando un compuesto
coloreado.

La antrona es un derivado fenólico que forma complejo coloreado con todos

los carbohidratos, excepto alditoles y amino azúcares. La reacción de los glúcidos
con antrona es muy sensible y tiene como fundamento la conversión en medio
ácido de los carbohidratos en derivados furfúricos, los cuales reaccionan con la
antrona produciendo un color azul verdoso.

2. ¿Por qué se utiliza el factor 0,9 para la conversión de glucógeno a glucógeno?

Al cuantificar la glucosa a través de la absorbancia y multiplicarla por un

factor de 0,9 se puede obtener la cantidad de glucógeno. Esto se debe a que por

8
cada enlace glucosídico que se rompe se forma un mol de producto que será
glucosa + H20, el agua regresa a la molécula original y se restablece la siguiente
relación:

1 mol de producto= gr de glucosa – gr de H20

La glucosa posee un peso molecular de 180g/mol y el agua tiene un peso

molecular de 18g/mol entonces:

(180 -18) g/mol= 0,9

180g g/mol

Una vez utilizado este factor podemos obtener la cantidad de glucógeno en

el tejido.

3. ¿Qué otras sustancias tienen efecto glucogenolítico?

Insulina, glucógeno, epinefrina, entre otros.

4. ¿Qué sucede con el glucógeno del tejido muscular durante el ayuno?

Si el ayuno no va acompañado con contracción muscular, el glucógeno

permanece igual, ya que solo es degradado cuando existe la contracción vigorosa
del músculo y el ATP intracelular se encuentra disminuido, entonces este
glucógeno se vuelve necesario para la producción de energía.

5. ¿Cuál es la fuente de energía una vez consumido el glucógeno?

Los ácidos grasos los cuales son ácidos orgánicos monoenoicos, que se
encuentran presentes en las grasas, raramente libres, y casi siempre esterificando
al glicerol y eventualmente a otros alcoholes. Son generalmente de cadena lineal y
tienen un número par de átomos de carbono.

9
Glucogenólisis

Factores:

 Esta vía se estimula por niveles bajos de glucosa, glucagón y

catecolaminas (adrenalina, noradrenalina y norepinefrina)
 Cuando estamos en periodo de ayudo el páncreas libera la hormona
glucagón, la cual llega al hígado dándole una señal que le indica que hay
bajos niveles de glucosa, activando esta vía metabólica, degradando el
glucógeno y dejando que la glucosa este disponibles hacia los tejidos y la
sangre
 Igualmente pasa con la adrenalina, noradrenalina y norepinefrina
(catecolaminas) que tienen el mismo efecto durante el ayuno prolongado
 El glucógeno del musculo tiene por finalidad suministrar glucosa para
degradación oxidativa y obtención de ATP para la actividad muscular. Su
diferencia con el hepático que este no se utiliza para tejido extrahepáticos
 El glucógeno del hígado sirve como fuente de glucosa para los tejidos
extrahepáticos, incluido el músculo esquelético ante un descenso de
glicemia.

Efecto Hormonal:

La proteína quinasa A es activada por la elevación de los niveles de

AMPcíclico producidos por:

Adrenalina en músculo: ejercicio

Glucagón en hígado: ayuno

Al unirse se unen a receptores específicos de membrana desencadenando

la cascada del AMP cíclico, que amplifica los efectos de las hormonas.

En hígado, además de esta cascada la adrenalina se une a un segundo

receptor específico activando una segunda cascada de señalización (cascada del
fosfoinosítido) que induce la elevación de los niveles de calcio: glucagón y
adrenalina dan lugar a la máxima movilización del glucógeno hepático. Otra
cascada de señalización desfosforila a la fosforilasa quinasa y glucógeno
fosforilasa (enzimas implicadas en la glucogenólisis) y activa la síntesis de
glucógeno. Evitando así su desperdicio cuando se cubren las necesidades
energéticas.

10
Gluconeogénesis

Factores:
 Permite la biosíntesis de glucosa a partir de precursores no glucídicos
 Incluye la utilización de varios aminoácidos, lactato, piruvato, glicerol y
cualquiera de los intermediarios del ciclo de los ácidos tricarboxílicos (ciclo
de Krebs) como fuentes de carbono para la vía metabólica.
 Todos los aminoácidos, excepto la leucina y la lisina, pueden suministrar
carbono para la síntesis de glucosa.
 Los ácidos grasos de cadena impar proporcionan carbono para la síntesis
de glucosa.
 La gluconeogénesis tiene lugar casi exclusivamente en el hígado (10% en
los riñones).
 Se activa a partir de 18 horas de ayuno
 La ruta puede llevarse a cabo tanto en la mitocondria como en el
citoplasma, según donde se encuentren los sustratos.

Regulación Hormonal:
 Niveles de glucosa en sangre. Se trata de una regulación hormonal
(insulina & glucagón)
 Alostérico, a través de metabolitos (ATP, Citrato, AMPc) El control por
metabolitos se ejerce (activación o inhibición) sobre las enzimas
reguladoras en cada una de las vías. En la gluconeogénesis sobre las :
piruvato carboxilasa y Fructosa-2, 6-bisfosfatasa
 Transcripcional (genes implicados en la ruta): Actúan en el núcleo
regulando la expresión de genes específicos que codifican enzimas de las
rutas glucolítica y gluconeogénica. La insulina y glucagón actúan de
manera antagonista en la activación de estos factores de transcripción, con
lo que activan e inhiben gran número de genes. La insulina está regulada a
nivel de la transcripción por más de 150 genes.
 Este proceso es dependiente de la concentración de ATP; al disminuir la
concentración de ATP, la fosforilación también se observa disminuida y
viceversa. En el hígado, este proceso aumenta al aumentar la síntesis
de glucocinasa, proceso que es promovido por la insulina. La membrana de
los hepatocitos es muy permeable a la glucosa, en el músculo y el tejido
adiposo la insulina actúa sobre la membrana para hacerla permeable a ella.
 El control hormonal que activa la fosforilación (adrenalina, glucagón) o la
desfosforilación (insulina) se ejerce sobre la enzima bifuncional PFK2 / F-
2,6-BPasa

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 Cálculos para la gráfica de tendencia de la cantidad de la glucosa para
los tubos patrones P1, P2, P3, P4 y P5.
0,1𝑚𝑙 𝑥 2𝑚𝑔 0,4𝑚𝑙 𝑥 2𝑚𝑔
= 0,2 mg = 0,8 mg
1𝑚𝑙 1𝑚𝑙

0,2𝑚𝑙 𝑥 2𝑚𝑔 0,5𝑚𝑙 𝑥 2𝑚𝑔

= 0,4 mg = 1 mg
1𝑚𝑙 1𝑚𝑙

0,3 𝑚𝑙𝑥 2𝑚𝑔

= 0,6 mg
1𝑚𝑙

Una vez trazada la gráfica, de acuerdo a la absorbancia para Dx1, Dx2,

Dx3, Dx4 se extrapoló a la cantidad de glucosa los siguientes resultados.

Dx1= 0,565 mg

Dx2=0,210 mg

Dx3=0,60 mg

Dx4=0,50 mg

Hámster Alimentado

Concentración de Glucosa en el Hígado.

2,5ml 0,565mg 0,5ml 2,26mg

10ml X=? 10ml X=?

X=2,26 mg X=45,2 mg

0,5ml 45,2 mg

100ml X=? 9040𝑚𝑔⁄1000 = 9,04% gr. De

Glucosa.
X=9040 mg

12
Concentración de Glucógeno en el Hígado

0,9 X 0,565mg= 0,5085mg 0,5ml 2,034 mg

2,5ml 0,5085mg 10ml X=?

10ml X=? X= 40,68mg

X= 2,034 mg

0,5ml 40,68 mg

100ml X=?

X= 8136 mg 8136𝑚𝑔⁄1000 = 8,13 % gr. De Glucógeno.

Concentración de Glucosa en el músculo.

2,5ml 0,60mg 0,5ml 2,4 mg

10ml X=? 10ml X=?

X= 2,4mg X= 48mg

48𝑚𝑔⁄1000= 0,048 gr. De Glucosa.

Concentración de Glucógeno en el Músculo.

0,9 X 0,60 mg= 0,54mg 0,5ml 2,16 mg

2,5ml 0,54 mg 10ml X=?

10ml X=? X= 43,2 mg

X= 2,16 mg

13
0,5ml 43,2 mg

10ml X=? 8640𝑚𝑔⁄1000= 8,64% gr. De

Glucógeno.
X= 8640 mg

Hámster Ayuno

Concentración de Glucosa en el Hígado.

2,5ml 0,210 mg 0,5ml 0,84 mg

10ml X=? 10ml X=?

X= 0,84 mg X= 16,8 mg

0,5ml 16,8 mg

100ml X=? 3360𝑚𝑔⁄1000= 3.36% gr de Glucosa.

X= 3360 mg

Concentración de Glucógeno en el Hígado.

0,9 X 0,210mg= 0,189 mg. 0,5ml 0,756 mg

2,5ml 0,189 mg 10ml X=?

10ml X=? X= 15,12 mg

X= 0,756 mg

0,5ml 15,12 mg

100ml X=? 3024𝑚𝑔⁄1000= 3,02% gr. De

Glucógeno
X= 3024 mg

14
Concentración de Glucosa en el músculo.

2,5ml 0,50mg 0,5ml 2 mg

10ml X=? 10ml X=?

X= 2mg X= 40 mg

40𝑚𝑔⁄1000= 0,04 %gr

Concentración de Glucógeno en el musculo.

0,9 x 0,5= 0,45 0,5ml 1,8mg

2,5ml 0,45mg 10ml X=?

10ml X=? X= 36 mg

X= 1,8 mg 36𝑚𝑔⁄1000= 0,036% gr. De

Glucógeno.

Resultados obtenidos en animales de experimentación en ayunas y

alimentados con respecto a los valores de glucógeno en seres humanos.

Tejido Experimentados Experimentados Seres Humanos

en Ayuno en (Hombre Adulto
Alimentados 70kg)
Glucógeno 3.02gr 8,13 % gr 72gr
Hepático
Glucógeno 0.036gr 8.64gr 245gr
Muscular
Glucosa 3.36gr 9.04gr ---
Hepática
Glucosa 0.04gr 0.048gr ---
Muscular