UNIVERSIDAD CATÓLICA SANTA MARÍA

ÁREA DE LA SALUD

MEDICINA

PRACTICA N 7 y 8

BIOQUÍMICA PRÁCTICAS

NOMBRES: FÁTIMA BRUNELLA

APELLIDOS: CONDORI ARIAS

AÑO: PRIMER AÑO

DOCENTE: CATERINE LUCY CHARA BARREDA

AREQUIPA-2023
 PRACTICA N° 7

GLUCÓGENO HEPÁTICO

RELACION DE EXPERIMENTOS

1. Determinación de glucógeno hepático en animal alimentado

2. Determinación de glucógeno hepático en animal en ayunas
3. Determinación de glucógeno hepático en animal tratado con adrenalina
4. Determinación de glucógeno hepático en animal tratado con aloxano

INTRODUCCIÓN

El glucógeno es una forma de almacenamiento de glucosa fácilmente movilizable. Al

igual que la amilopectina del almidón, es un polisacárido ramificado, constituido por
unidades de D-glucosa unidas mediante enlaces alfa (1-4) , y ramificaciones ligadas por
enlaces alfa (1-6). Las ramificaciones están separadas unas de otras por lo menos cuatro
residuos en las porciones más centrales de la molécula haciéndola más compacta.

El glucógeno, polisacárido de reserva, se encuentra en los tejidos animales, pero

abunda especialmente en el hígado y en el músculo. Aparece en las células como
partículas discretas, las cuales evidentemente son agregados de moléculas con un peso
molecular que varia alrededor de 2 X 10 7. La cantidad de glucógeno varia ampliamente,
no solamente entre diferentes tejidos, sino también dentro de un mismo tejido,
dependiendo del suministro de glucosa y de la demanda metabólica de energía. El
hígado y el músculo contienen los más grandes depósitos de glucógeno, por lo que
nosotros nos ocuparemos de su metabolismo en estos órganos.

En general la dieta afectará más el contenido de glucógeno del hígado que el del
músculo, mientras que el ejercicio físico afectará más el contenido de glucógeno
muscular que el del hígado. Además los depósitos de glucógeno hepático y muscular
tendrán diferentes roles. El glucógeno muscular esta presente para servir como una
reserva de combustible para la síntesis de ATP dentro del músculo, mientras que el
glucógeno hepático funcionará como una reserva de glucosa para el mantenimiento de
la concentración de glucosa en sangre (glicemia).

Un valor típico para el contenido de glucógeno hepático en una persona bien

alimentada es alrededor de 6,5g/100g de tejido; hay mucho menos después del ayuno y
mucho más después de una dieta rica en carbohidratos. El músculo esquelético
típicamente tiene 1,4g/100g de tejido, el cual no cambia mucho después del ayuno
nocturno o con una dieta rica en carbohidratos.

El glucógeno hepático puede formarse a expensas de glucosa y otros monosacáridos

(glucogénesis), como también de residuos provenientes del metabolismo intermediario
de los hidratos de carbono, proteínas y lípidos (gluconeogénesis). Las vías de síntesis de
glucógeno (glucogénesis) y de degradación hasta glucosa (glucogenolisis), son
independientes, lo que determina que los mecanismos regulatorios del metabolismo del
glucógeno actúen independientemente.

La glucógeno sinteasa y la glucógeno fosforilasa son las enzimas regulatorias de

síntesis y degradación de glucógeno respectivamente. Ellas son reguladas
recíprocamente; cuando una es estimulada, la otra es inhibida, nunca están
completamente activas simultáneamente.

Síntesis de glucógeno favorecida

GLUCOGENO SINTEASA A ACTIVA OH

GLUCOGENO FOSFORILASA B INACTIVA OH

Pi ATP

H2O ADP
GLUCOGENO FOSFORILASA A ACTIVA O-P

GLUCOGENO SINTEASA B INACTIVA O-P

Degradación de glucógeno favorecida

Regulación recíproca de la glucógeno sinteasa y la glucógeno fosforilasa por

fosforilación y defosforilación. Los grupos seril fosforilados se muestran como -O-P

OBJETIVOS:
1. Realizar la determinación de glucógeno hepático
2. Cuantificar los niveles de glucógeno hepático en diferentes estados nutricionales
y hormonales:
 - Animal alimentado normalmente (ad libitum)
- Animal en ayunas
- Animal tratado con adrenalina
- Animal Diabético (tratado con aloxano)

PROCEDIMIENTO:

1. PREPARACION DE LOS ANIMALES EXPERIEMNTALES

a) Rata A: Que recibirá su alimentación habitual sin restricción alguna.

b) Rata B: Que permanecerá en ayunas por lo menos 24 horas antes del
experimento.

2. EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO

Método: Método de krisman

Fundamento:

Se trata un trozo de tejido hepático con una base fuerte (KOH) en caliente, siendo
degradadas las proteínas y otros constituyentes; quedando preservado el glucógeno, el
cual es precipitado con etanol y se le hace reaccionar con el yodo para hacer su
determinación colorimétrica. Se aumenta la sensibilidad de esta reacción con la
presencia del cloruro de calcio.

Reactivos:
1. Solución iodo-iodurada: Pesar 0,26 g de yodo y 2,6 g de yoduro de potasio.
Disolver en 10 ml de agua destilada
2. Cloruro de calcio saturado a temperatura ambiente. Pesar 97,7 g de cloruro de
calcio, disolver en 100 ml de agua. Filtrar antes de usar
3. Reactivo de yodo: Mezclar 130 ml de la solución de cloruro de calcio con 0,5
ml de la solución iodo-iodurada. Guardar en frasco oscuro a 0 °C, durante siete
días máximo.

Procedimiento:

1. En un tubo de centrífuga medir 0,9 ml de KOH al 33 % y colocarlo en un baño

maría hirviente
2. Sacrificar los animales por decapitación y tan rápido como sea posible extraer
el hígado y pesar 100 mg de él. Colocar inmediatamente el trozo de hígado en
la solución de KOH que se encuentra en el baño hirviente y dejarlo allí por 20
minutos, agitando de vez en cuando para permitir la disgregación del tejido.
3. Retirar el tubo del baño y enfriar. Añadir 1,3 ml de etanol al 96% mezclar y
calentar la solución hasta la ebullición teniendo cuidado que no se proyecte.
Enfriar inmediatamente en baño de hielo por 5 minutos, para permitir la
precipitación del glucógeno
4. Centrifugar a 3000 rpm por 15 minutos y decantar el sobrenadante. Colocar el
tubo boca abajo sobre un papel filtro
5. Neutralizar el exceso de álcali añadiendo 0,2 ml de cloruro de amonio saturado
y mezclar cuidadosamente con una varilla de vidrio permitiendo que la
solución añadida entre en contacto con toda la pared interna del tubo

6. Preparar un blanco para lo cual se mide 0,4 ml de agua destilada y 2,6 ml del
reactivo de yodo; proceder enseguida igual que las muestras problema.
7. Colocar el tubo en baño maría hirviente durante 15 minutos y enfriar. Añadir
0,2 ml de agua destilada y 2,6 del reactivo de yodo. Si la cantidad de
glucógeno precipitado es grande, hacer en esta etapa una dilución apropiada.
8. Medir la absorbancia utilizando filtro verde
 9. Para preparar las soluciones estándar se pueden medir 0,4 ml de soluciones que
contengan 0,06 mg, 0,18 mg 0,24 mg de glucógeno. A cada una de estas tres
soluciones estándar, añadir 2,6 ml del reactivo de iodo , mezclar y proceder de
la misma forma que la señalada para la muestra de hígado.

Resultados.
1. Anotar el aspecto y tamaño del hígado de los animales de experimentación
Rata A (alimentada): 2,280 Rata B (ayunación): 1,164
FACTOR DE CALIBRACIÓN
= Concentración de
2. Observar la cantidad de precipitado después de centrifugar. Glucógeno/ Absorbancia neta

Absorbancia Absorbancia Concentración Factor de

bruta neta de Glucógeno calibración
ABSORBANCIA
(mg)
NETA BLANCO 0.118
=Estándar - blanco
ESTANDAR 1 0.192 0,074 0,06 0,81
ESTANDAR 2 0.338 0,22 0.18 0,82 0,81
ESTANDAR 3 0.416 0,98 0.24 0.81

Calcular el factor de calibración: 0,81

3. Graficar la curva de calibración con los datos anteriores.

1.2

1 0.98
Absorbancia neta

0.8

0.6

0.4

0.2 0.22

0.074
0
0,06 0.18 0.24
Concentración de Glucógeno (mg)
 4. Calcular la concentración de glucógeno en cada una de las muestras. Expresar
los resultados en mg de glucógeno por 100 mg, 200 mg y en el peso total del
CONCENTRACIÓN tejido hepático
EN 100mg
= FC x Ab Neta Peso del Ab Ab CONCENTRACION en mg
hígado Bruta Neta / 200 mg / 100 mg / Hígado
(mg) Hígado Hígado Total
Rata A
(Alimentada) 15,5 2,280 2,162 3.50 A= 1,75 271.25
Rata B
(ayunas) 7,6 1, 164 1,046 1.70 A= 0.85 64.6

A ------- 0,1g hígado

X ------- g hig.

5. Calcular el porcentaje de disminución del glucógeno en 100 mg de hígado con

relación al animal alimentado 1.75 mg glucógeno A___ 100%
0,85 mg glucógeno B ___ x
X = 48,57 %

mg de glucógeno/ Porcentaje de disminución en

100 mg de hígado relación al animal alimentado
RATA A 1.75 48,57%
RATA B 0,85 51,43%

6. Haga la interpretación de los resultados para cada rata:

Rata A (Alimentada): Esta rata tiene más cantidad de glucógeno, por lo tanto,
se activa la insulina, la cual tiene la función de reserva.

Rata B (ayunas): Tiene muy poca cantidad de glucógeno, en la cual se activa

el glucagón el cual al tener niveles bajos de glucógeno genera que se produzca
más.
INTEROGANTES
1. ¿Qué ventaja tiene la fosforólisis del glucógeno en comparación con la
hidrólisis?

La ventaja principal de la fosforólisis del glucógeno en comparación con la hidrólisis es que la

fosforólisis permite una liberación más rápida y eficiente de glucosa-1-fosfato, que puede ser
utilizado de inmediato en la glucólisis para la producción de energía. Algunas de las ventajas
específicas de la fosforólisis del glucógeno son:

a) Mayor velocidad de liberación de glucosa: Durante la fosforólisis, la enzima

glucógeno fosforilasa cataliza la ruptura de los enlaces glucosídicos en el glucógeno,
liberando glucosa-1-fosfato. Este proceso permite una liberación más rápida de
glucosa en comparación con la hidrólisis, donde se rompen los enlaces mediante la
adición de agua.

b) Evita la dilución intracelular: La fosforólisis del glucógeno ocurre dentro de la célula,

evitando así la entrada de agua extracelular, lo que podría diluir el contenido celular.
La hidrólisis, por otro lado, requiere la entrada de agua extracelular para la ruptura de
los enlaces, lo que puede llevar a la dilución intracelular no deseada.

c) Producción de glucosa-1-fosfato: Durante la fosforólisis, se produce glucosa-1-

fosfato, que es un sustrato directo para la glucólisis. La glucosa-1-fosfato se puede
convertir rápidamente en glucosa-6-fosfato y entrar en la vía de la glucólisis para la
generación de energía. En contraste, durante la hidrólisis, se liberan glucosa libre que
luego debe ser fosforilada para ingresar a la vía glucolítica.

En resumen, la fosforólisis del glucógeno proporciona una forma más eficiente y rápida de
liberar glucosa-1-fosfato, que puede ser utilizada directamente en la glucólisis para la
producción de energía, evitando la dilución intracelular y aprovechando la disponibilidad
inmediata de sustratos en el metabolismo energético.

2. ¿Qué diferencia hay entre la acción

glucogenolítica de la adrenalina y glucagón en el
hígado y en el músculo?
 Adrenalina Glucagón

Acción en el Estimula la glucogenólisis Estimula la glucogenólisis y gluconeogénesis

hígado
Mecanismo de Activa la vía de señalización de PKA Activa la vía de señalización de AMPc y PKA
acción
Enzimas Activación de la glucógeno fosforilasa Activación de la glucógeno fosforilasa y
involucradas inhibición de la glucógeno sintasa
Efecto en la Inhibe la síntesis de glucógeno Inhibe la síntesis de glucógeno
síntesis de
glucógeno
Acción en el Estimula la glucogenólisis Efecto mínimo en la glucogenólisis
músculo
Efecto en la Inhibe la captación de glucosa en el Inhibe la captación de glucosa en el músculo
captación de músculo
glucosa

3. Represente esquemáticamente el mecanismo de acción de la adrenalina sobre la

regulación en el metabolismo del glucógeno.

4. Si se administra leucina marcada con C-14 será factible a la identificación

posterior de glucógeno marcado con C-14.

Sí, si se administra leucina marcada con C-14, es

factible identificar posteriormente el glucógeno
marcado con C-14.
La leucina es un aminoácido que puede ser utilizado
como precursor en la síntesis de glucógeno. Cuando
se administra leucina marcada con C-14, el átomo
de carbono-14 se incorpora en la molécula de
glucosa producida a partir de la leucina.
Para identificar el glucógeno marcado con C-14, se
puede realizar un análisis de espectrometría de masas o autoradiografía. La
espectrometría de masas permite detectar y cuantificar la presencia de isótopos
radiactivos, como el carbono-14, en las muestras de glucógeno. La autoradiografía
implica el uso de películas sensibles a la radiación para registrar la emisión de partículas
radiactivas, como el carbono-14, y así visualizar la localización y distribución del
glucógeno marcado.
Al identificar el glucógeno marcado con C-14, se puede obtener información sobre la
síntesis y el destino del glucógeno en diferentes tejidos y órganos. Este enfoque puede
ser útil para estudiar el metabolismo del glucógeno y comprender cómo se utiliza y se
almacena en el organismo.

5. ¿Cómo se explica que el animal diabético tenga menores niveles de glucógeno

hepático que su contraparte normal?
El hecho de que un animal diabético tenga
menores niveles de glucógeno hepático en
comparación con su contraparte normal
puede explicarse debido a la disfunción en
la regulación del metabolismo del
glucógeno causada por la diabetes.
En condiciones normales, la hormona
insulina es responsable de estimular la
síntesis de glucógeno en el hígado y otros
tejidos. La insulina promueve la absorción
de glucosa y su conversión en glucógeno, lo
que aumenta los niveles de glucógeno
hepático. Sin embargo, en la diabetes, ya sea debido a la falta de producción de insulina
(diabetes tipo 1) o a la resistencia a la insulina (diabetes tipo 2), este proceso se ve
afectado.
En la diabetes tipo 1, la falta de producción de insulina por parte del páncreas impide la
estimulación adecuada de la síntesis de glucógeno. Como resultado, la capacidad del
hígado para almacenar glucógeno se ve comprometida, lo que lleva a niveles reducidos
de glucógeno hepático.
En la diabetes tipo 2, la resistencia a la insulina impide que los tejidos respondan
adecuadamente a la insulina, incluyendo el hígado. Esto afecta la capacidad del hígado
para captar glucosa y convertirla en glucógeno. Además, la resistencia a la insulina
también puede llevar a un aumento de la producción de glucosa por parte del hígado a
través de la glucogenólisis y la gluconeogénesis, lo que agota aún más los niveles de
glucógeno hepático.
En resumen, en la diabetes, ya sea debido a la falta de producción de insulina o a la
resistencia a la insulina, se produce una disfunción en la regulación del metabolismo del
glucógeno. Esto lleva a menores niveles de glucógeno hepático en comparación con los
individuos no diabéticos.

6. Represente esquemáticamente el mecanismo de acción de la insulina sobre el

metabolismo del glucógeno.

BIBLIOGRAFÍA:
Que ventaja tiene la fosforolisis del glucogeno en comparacion con la hidrolisis

Question from @Paulacorre5016. (s. f.). kudo.tips. https://kudo.tips/que-

ventaja-tiene-la-fosforolisis-del-glucogeno-en-comparacion-con-la-

hidrolisis.html

Guerra, J. J. M. (s. f.). Acción de la adrenalina sobre la síntesis y degradación del

glucógeno hepático | LIBRO ELECTRÓNICO DE BIOQUÍMICA | Juan José

Martínez Guerra. https://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-12-otras-vias/accion-

de-la-adrenalina.html