Bioqumica. Practica No. 6.

2012

EXTRACCION Y CUANTIFICACION DE GLUCOGENO EN ORGANISMOS MARINOS O HIGADO.

Calixto Heredia Lidda Mariam Instituto Tecnolgico de La Paz Laboratorio de Bioqumica 2 de mayo de 2012 Resumen: ___________________________________________________________________________________ El glucgeno es una forma que tiene el cuerpo de acumular energa. Es un polmero de la glucosa. Se puede decir que es la gasolina de nuestro organismo. Nuestra fuente de obtencin de glucgeno fue de almeja, se extrajo y cuantifico el glucgeno que se encontraba en esta muestra, arrojando los resultados de positivo con la prueba de lugol, con un 33% de glucgeno. Este tipo de metodologa se recomienda hacerla con un animal que ha sido sacrificado en menos de 24 horas, para que nos de un buen rendimiento. ___________________________________________________________________________________ Introduccin: El glucgeno es una forma que tiene el cuerpo de acumular energa. Es un polmero de la glucosa. Se puede decir que es la gasolina de nuestro organismo.Parte de la energa que absorbemos de la comida (hidratos de carbono) se convierte en glicgeno que se acumula en el hgado (glucgeno-heptico) y en los msculos (glucgeno-muscular). El glucgeno heptico nos interesa menos en el deporte, su funcin es mantener estable la glucosa en la sangre. [1]

Es el polisacrido que se almacena en el organismo animal. A menudo se le designa como almidn animal. Es una estructura mucho ms ramificada que la amilopectina con cadenas de 12 a 14 residuos de alfa-Dglucopiranosa (con enlaces glucosidicos alfa-D-[14]) y ramificaciones unidas por medio de enlaces glucosidicos (16). [2] Se encuentra principalmente en el hgado y en el musculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso hmedo, respectivamente.

El

tratamiento

posterior

con

cido

tricloroactico (TCA) hace que precipiten las protenas y cidos nucleicos de la mezcla. El glucgeno aislado se vuelve a precipitar con etanol, obtenindose una preparacin con un alto grado de pureza. El tratamiento con antrona (que contiene (H2SO4) es un mtodo rpido para la determinacin de hexosas y alopentosas constituyentes de un polisacrido. Mediante este mtodo, el glucgeno es hidrolizado por un cido (H2SO4) hasta sus unidades elementales (monosacridos), que pueden ser luego deshidratadas dando furfural, y ste ltimo, reacciona con la antrona y se forma un producto coloreado (azul-verdoso) con un mximo de absorbencia a 620 nm. El valor resultante se compara con los obtenidos al preparar una recta estndar con glucosa pura, usando el mismo mtodo.[4] El objetivo de esta prctica es el de obtener glucgeno y la estimacin en porcentaje de glucgeno.

Estructura del glucgeno [3]

El glucgeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte (KOH) hasta la destruccin total del tejido. La separacin del glucgeno del tejido se consigue mediante la adicin de etanol (precipita polisacridos y elimina los monosacridos solubles) y sulfato de sodio (coprecipitante). As, se produce un

Metodologa: Digestin

precipitado que contiene una mezcla de glucgeno, protenas y cidos nucleicos, que han resistido el calentamiento anterior.

Se pic lo ms pequeo posible la muestra con la que se trabaj, lo colocamos en un matraz erlenmeyer de 250 ml y se aadi50

ml de KOH 3.0 N, al terminar se calent en bao mara a 80C durante 30 minutos. Despus de transcurrido ese tiempo se enfri y acidulo con H2SO4. Precipitacin

Resultados: La muestra con la que se trabaj peso 20.04 g, al terminar la prctica se volvi a pesar y se obtuvo 8.5 gramos, con un 33% de glucgeno. La prueba de lugol a la muestra extrada dio negativo, para la prueba con el glucgeno al 1% nos dio positiva. A continuacin se muestra un cuadro con los resultados de todos los equipos. Grafica 1 Equip Muestr o 1 2 a Camar n Almeja Hgado de pollo 4 5 6 7 Callo Almeja Almeja Pulpo Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo positivo Negativo Positivo Positivo Negativo Negativo 3 Glucge no al 1% Positivo Glucgenoextr ado Negativo

Se pas la solucin a un vaso de precipitado de 500 ml y se agreg 150 ml de alcohol de 96 . Agitamos con mucho cuidado y se dejo reposar durante 10 minutos. Al terminar se separ el sobrecalentado por decantacin o filtracin y se pas el precipitado a un vidrio de reloj que fue previamente pesado. Al terminar se coloc en un desecador (modelo G01350A1, marca Thermo) y posteriormente se pes. Identificacin

Se disolvi una pequea porcin del precipitado en un poco de agua destilada y se coloc 2 mL de esta en un tubo de ensayo, en otro tubo de ensayo se coloc 2 mL de solucin de glucgeno al 1%. Despus se aadi 5 gotas de solucin de yodo a cada tubo, se procedi a comparar los resultados de los dos tubos y se anot las observaciones.

Tabla de resultados de todos los equipos. Discusin: Las reservas de glucgeno son limitadas y pueden llagar a agotarse, la velocidad con que sucede este agotamiento de las reservas depende de la intensidad que

tenga el ejercicio realizado y de la cantidad de glucgeno que se ha almacenado antes de emprender el entrenamiento. Es por eso que al terminar la prctica, nos dimos cuenta de que algunos resultados dieron negativo. Esto puede deberse a que la fuente de donde se obtuvo el glucgeno ya estaban previamente muertas, y conservadas, es por eso que lo ms eficiente y recomendable es que se sacrifique un animal y al instante extraer el glucgeno. Ya que esta reserva de glucgeno que tiene el organismo es muy limitada, y el cerebro tanto como el musculo necesitan del glucgeno para que el organismo funcione. Conclusin: El glucgeno es una forma que tiene nuestro cuerpo para acumular energa. Estas reservas son limitadas y se llegan a agotar. Es por eso que al extraer y cuantificar glucgeno de algn animal marino o de hgado se necesitan menos de veinticuatro horas para poder extraer aunque sea solo un poco de este polisacrido.[4] Bibliografa: 1. http://www.todonatacion.com/ciencia s-del-deporte/glucogeno.php (30 de abril de 2012) 2. Bioqumica de Harper, David W. Martin Jr., 14 edicin, pg. 171-172 3. http://es.wikipedia.org/wiki/Gluc%C3 %B3geno (30 de abril de 2012) 4. http://www.uco.es/organiza/departam entos/bioquimica-biolmol/pdfs/22%20AISLAMIENTO%20G LUC%C3%93GENO.pdf (30 de abril de 2012)