Segunda Unidad Metabolismo de Carbohidratos

- INFLUENCIA DE LA DIETA EN LA FORMACION Y ALMACENAMIENTO DE GLUCOGENO --

INTRODUCCION:
El glucógeno se encuentra en el citosol hepático, considerado como un homopolisacárido formado por residuos de glucosa ligados
por enlaces glucosídicos alfa 1,4 y las ramificaciones por enlaces glucosídicos alfa 1,6 los cuales se presentan con una frecuencia
aproximada de uno por cada 10 residuos.

El glucógeno es una forma de almacenamiento de glucosa de fácil disponibilidad. Se encuentra o se puede sintetizar en cualquier
célula del organismo, pero las concentraciones varían en los diferentes tejidos correspondiendo las concentraciones más altas al
hígado y al músculo esquelético, lugares principales de almacenamiento.

En el hígado, el glucógeno se incrementa después de la ingesta de alimentos (período posprandial) llegando a límites máximos,
la dieta rica en carbohidratos incrementa la glicemia; favoreciendo la liberación de insulina, la cual aumenta la glucogénesis. En
el ayuno en cambio, predomina la glucogenólisis hepática a fin de proveer de glucosa al cerebro y los hematíes principalmente,
la cual es activada por acción del glucagón disminuyendo el depósito de glucógeno.

FUNDAMENTACIÓN DE LA TECNICA:
El glucógeno puede ser aislado de los tejidos por digestión con soluciones de hidróxido de potasio caliente en los cuales los
enlaces no reductores alfa 1,4 y alfa 1,6 son estables. El glucógeno es también fácilmente hidrolizable por alfa y beta amilasa
para rendir glucosa y maltosa respectivamente. La acción de la beta amilasa también rinde una dextrina límite.

FINALIDAD:
▪ Cuantificar el glucógeno en ayunas y después de la ingesta de alimentos.
▪ Evaluar los valores encontrados relacionados con los factores que determinan sus síntesis y degradación.

MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS:

▪ Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
▪ Material biológico: Homogenizado de hígado de rata al 10% (pesar 10 gramos de hígado y homogenizar con agua destilada).
▪ Equipos: centrífuga, espectrofotómetro.
▪ Reactivos:
• Hidróxido de potasio (KOH) al 60%
• Sulfato de sodio (Na2SO4): solución saturada.
• Alcohol absoluto.
• Fenol al 80%
• Ácido sulfúrico concentrado.

PROCEDIMIENTO:
1) Armar el siguiente sistema y extraer el glucógeno hepático.
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml) 13 x 100 mm I II
I II
Homogenizado de hígado en ayunas 0.5 ml ---
Homogenizado de hígado posprandial --- 0.5 ml
KOH al 60 % 0.5 ml 0.5 ml
Calentar los tubos a 100 °C en baño maría (ebullición) por 10 minutos.
Alcohol al 98% 5.0 ml 5.0 ml
Na2SO4 solución saturada 0.1 ml 0.1 ml
Mezclar por agitación.
Dejar en reposo por 1 hora
Centrifugar a 3500 RPM por 10 minutos.
Eliminar el sobrenadante y colocar boca abajo los tubos sobre papel de filtro por 5 min.
Agregar agua destilada 5.0 ml 5.0 ml
Disolver el precipitado por agitación.
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2) Armar el siguiente sistema y realizar la cuantificación del glucógeno hepático por el método colorimétrico.
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II Blanco
Muestra del tubo I del sistema anterior 1.0 ml --- ---
Muestra del tubo II del sistema anterior --- 1.0 ml ---
Agua destilada --- --- 2.0 ml
Fenol al 80 % 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml
Mezclar por agitación.
Colocar los tubos en agua helada durante 5 min y sin retirar los tubos del baño helado:
Añadir H2SO4 gota a gota en el centro del tubo 5.0 ml 5.0 ml 5.0 ml
Mezclar y dejar en el baño de agua helada durante 5 minutos más. Leer en el
espectrofotómetro a 540 nm.

I II B

RESULTADOS:
1) Lecturas del espectrofotómetro: de las muestras del hígado de rata en ayunas y posterior a ingesta de alimentos:

2) Factor = 7 g%

ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO:

1) Cálculos de los resultados:
▪ Cálculo de la concentración de glucógeno. (de cada una de las muestras).
Glucógeno (g%) = (Lectura del Tubo – Lectura del blanco) x F

2) Explique bioquímicamente lo encontrado.

PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) ¿Cuál fueron los objetivos de la práctica?
2) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
3) Identifique los componentes químicos empleados en la práctica y señale sus principales características.
4) ¿Cómo espera encontrar la concentración de glucógeno en la muestra en condiciones de ayuno? Proporcione las razones
metabólicas que expliquen su resultado.
5) ¿Cómo espera encontrar las concentraciones de glucógeno en la muestra en condiciones pos-ingesta alimenticia?
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6) Grafique las relaciones metabólicas que controlan los procesos de síntesis y degradación del glucógeno.
7) ¿Cuál es el mecanismo metabólico por el que el glucógeno se incrementa cuando la concentración sérica de glucosa es
mayor de 150 mg/dl?
8) ¿Porqué razones el hígado no puede almacenar más del 6% de glucógeno?

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.