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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL

DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALURGIA

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE


INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

BIOTECNOLOGÍA (TA 559)

PRÁCTICA Nº 01

“PREPARACIÓN DE MATERIALES Y MEDIO DE CULTIVO PARA


AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS”

PROFESOR : Ing. Tiburcio REYNOSO ALBARRACIN.

INTEGRANTES : AYALA GOMEZ, ROCIO.

GRUPO DE PRÁCTICA : Lunes 7– 10 am.

FECHA DE EJECUCIÓN : 27/09/10

FECHA DE ENTREGA : 14/10/10

AYACUCHO PERÚ
2010
I. OBJETIVOS
 Selección de materiales para aislamiento de de microorganismos.
 Selección de medio de cultivo para un tipo de microorganismos.
 Preparación de solución.
 Preparación para esterilización.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

ESTERILIZACION

La esterilización implica la destrucción de todos los microorganismos,


incluyendo los esporos. La desinfección supone la destrucción de los microorganismos
vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de
alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfección no mata
necesariamente a los esporos.

Los métodos utilizados corrientemente en los laboratorios microbiológicos son:

 Calor al rojo (flameado).


 Calor seco (aire caliente).
 Vapor a presión (esterilización al autoclave).
 Vapor fluente (tyndallización).
 Filtración.

Autoclave Shearer modelo 150DC

Este modelo cumple la función de esterilizado y secado gracias a su diseño de doble


cámara. Las dimensiones de las cámaras de esterilizado pueden ajustarse a las
necesidades del cliente. Las mismas son construidas en acero inoxidable 316L o cobre
electrolítico de máxima pureza.

Este equipo presente válvula de alivio a contrapeso sobre tapa, para trabajar a 121ºC,
128ºC ó 134ºC (para otro valor de esterilización consultar). Posee manómetro
incorporado. Dos alternativas de calefacción: a gas o eléctrica, a elección.

Principales características:

Permite la esterilización por vapor saturado.


Construido con cámaras cilíndricas de cobre o acero inoxidable 316L.
Camisa externa de hierro esmaltado pintado o acero inoxidable.
Doble válvula de alivio a contrapeso.
Manómetro indicador de presión en cámara exterior.
Manómetro indicador de presión y vacío en cámara de esterilización.
Llave esférica de alta temperatura con asiento de teflón.
Trampa de vacío para etapa de secado o bomba de vacío de doble anillo líquido.
Termostato regulador de temperatura del generador de vapor.
Tubo nivel visor, permite visualizar nivel de agua del generador de vapor.
Permite efectuar esterilización sucesiva, sin agregar agua.
 calefacción a gas o eléctrica.
CARGA DEL AUTOCLAVE

Una buena esterilización por autoclave depende de la eliminación de todo el aire de la


cámara y de la carga, y los materiales que van a esterilizarse deben colocarse sin
apretar. Los artículos limpios pueden ponerse en cestillos de alambre, pero el material
contaminado (cultivos desechados) deben estar en recipientes de fondo sólido en una
altura no mayor de 8 cm. Deben dejarse grandes espacios de aire alrededor de cada
recipiente y ninguno debe estar cerrado.

Tiempos de esterilización en autoclave:

Del tiempo, temperatura y presión usadas en la esterilización depende el éxito


alcanzado. Generalmente los datos presión y temperatura son fijados, y el único factor
que se varía es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilización
dependiendo de su textura, porosidad, y otras características propias de cada material.
Algunos materiales como el hule, necesitan poco tiempo, mientras otros como el metal
quirúrgico necesitan más. Los siguientes datos han sido tomados para una temperatura
de esterilización de 250ºF (121ºC) a 15-20 PSI.

• Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos

• Sondas (base tejida) 15 minutos

• Sondas (látex) 15 minutos

• Frascos de Vidrio, Cristalería en General 20 minutos

• Agua en frascos 20 minutos

• Jeringas de Vidrio 20 minutos

• Bandeja 30 minutos

• Equipo de transfusión 30 minutos

• Paquetes de maternidad 30 minutos

• Ropa 30 minutos

• Torundas 30 minutos

• Paquete quirúrgico 45 minutos

• Instrumental de acero inoxidable 45 minutos

*Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que
haya

Buena penetración de vapor en el material.

No incluir dentro del mismo paquete material con diferentes tiempos de esterilización.
Ej. : Lencería y Vidrio.

El método utilizado para envolver los paquetes deberá garantizar el mantenimiento de


las condiciones de esterilidad de los materiales durante su almacenamiento.

Como Cargar el Autoclave

a) Se deben acomodar los bultos o paquetes de tal forma que haya una libre circulación
de vapor entre ellos (no tratar de llenar el autoclave hasta sobrecargarlo).

b) Colocar de lado las botellas, frascos y cualquier clase de recipiente no poroso de


material seco. Esto permite un pronto desplazamiento del aire y un rápido contacto del
vapor con las superficies de las vasijas y su contenido. También facilita el secado.

c) Esterilizar los líquidos separándolos de otros materiales.


d) Cuando se esterilizan líquidos, debe hacerse con los recipientes destapados.

e) La cristalería deberá esterilizarse colocando los recipientes boca abajo u horizontales


(nunca con la boca hacia arriba).

AGAR−AGAR
Sustancia mucilaginosa que se extrae de algunas algas rojas o Rodofíceas,
frecuentes en el Océano Atlántico, Pacífico e Índico. Es una sustancia amorfa. Se
emplea como medio de cultivo en bacteriología, como apresto de sedas, como sustituto
de la gelatina, etc.
La forma seca del Agar−Agar se conoce de mediados del siglo XVIII, cuando un
japonés descubrió, accidentalmente, la manera de purificarlo y secarlo. Fue llevado de
China a Europa y traído a América a mediados del siglo XIX, para utilizarse,
principalmente, como substituto de la gelatina en la confección de postres gelatinosos.
Químicamente, el Agar−Agar es una mezcla compleja de sales de polisacáridos,
fundamentalmente, galactósidos. Las grandes moléculas que lo constituyen determinan
sus cualidades sobresalientes, como coloides y espesantes, que lo han hecho hasta ahora
insustituible.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO


Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo al porcentaje de Agar en tres
grupos:

1. Medios sólidos: Su proporción de Agar es siempre por encima del 15%.


2. Medios semisólidos: Son medios intermedios entre los medios líquidos y sólidos,
su proporción de Agar suele ser suele ser inferior al 5%, pero siempre suele
presentar cierta cantidad que le proporcione una consistencia semisólida.
3. Medios líquidos o caldos: No contiene Agar y su composición (además de agua)
suele contener al menos una fuente de carbono, sales minerales, y a veces según las
características de medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, aminoácidos,
entre otros.

Composición

 Medios sintéticos o químicamente definidos: Llevan fuentes de carbono, nitrógeno,


sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca, etc.), otros elementos como estimuladores
de crecimiento pero siempre a concentraciones conocidas.
 Medios complejos o de composición indefinida: Estos medios llevan ingredientes
como extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. que
contienen nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composición
cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes.
 Medios de enriquecimiento: Son medios complejos, normalmente, con aditivos
adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos
(particularmente heterótrofos exigentes). Tales como: adicción de sangre, suero o
extractos de tejidos de animales y plantas.
 Medios selectivos: Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento
específico de un microorganismo particular o grupo de microorganismos. Es de gran
utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población
microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es selectivo para
autótrofos, adicionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+),
utilizando maltosa como única fuente de carbono sólo crecerán los que usen
maltosa.
 Medios diferenciales: Son aquellos destinados a facilitar la discriminación de
microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en
dichos medios. Ejemplo: Agar sangre diferencia hemolíticos de no hemolíticos;
McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (−).
 Medios de mantenimiento: Suelen ser distintos a los de crecimiento óptimo ya que
el crecimiento rápido y prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las células. Por
ejemplo: al añadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen ácidos,
acidificándose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los medios de
mantenimiento.

III. MATERIALES Y MÉTODOS


 2 placas petri.
 1 aza de kole.
 2 matraces de Erlenmeyer de 250 ml.
 1Bagueta.
 1Pipeta de 10 ml.
 1 probeta de 100 ml.

Agar saburo
 Peptona 1g.
 Glucosa 2g.
 Agar agar 5g.
 Agua destilada 100 ml.

PROCEDIMIENTO
Lavar los materiales: Matraz, vasos, pipetas, probetas, bagueta, etc, secar los
materiales lavados luego las placas petri, envolver con papel periódico y
empacar para esterilizar, los matraces taponear con algodón la boca, todo estos
materiales esterilizar utilizando un autoclave.

Preparación de de solución de Agar Agar: En un matraz de 250 ml limpio


introdusca 1g de peptona, 2g de glucosa y 5 gramos de Agar Agar, luego añada
100 ml de agua destilada disuleva todos los sólidos utilizando la Bagueta, a
continuación tape la boca de la boca del matraz con algodón y empaque con
papel amarrando con un hilo, luego introduzca en el autoclave justamente con
los otros materiales.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN


Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura
adecuada. A partir de allí se cuenta el tiempo de esterilización, luego del cual se
debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa
del autoclave nuevamente.

Figura Nº 1: En las imágenes que se muestran en esta


figura, fueron sometidas al lavado, secado y empacado para
ser esterilizados en una autoclave de laboratorio.

Las bacterias se matan más fácilmente por el calor


húmedo (vapor saturado) que por el calor seco. El vapor
mata las bacterias por desnaturalización de sus proteínas.
Una condición de seguridad convenida para la esterilización
es utilizar vapor a 121ºC durante 15 minutos. Esta
temperatura es adecuada para medios de cultivo, soluciones
acuosas, tratamiento de cultivos y muestras desechadas, etc.
Así mismo el Agar de tipo saburo preparado en la presente
práctica se sometió a la esterilización juntamente con los
materiales.

Los medios de cultivos permiten el crecimiento y


desarrollo de microorganismos, gracias a que proporcionan
sustancias nutritivas. Los medios de cultivos se pueden
clasificar de acuerdo al porcentaje de Agar en tres grupos: medios sólidos, medios
semi−sólidos y medios líquidos. El medio de cultivos que trabajamos en el laboratorio
corresponde a un medio semisólido, es decir que contiene un 5% de Agar, este es el
Agar SABURO que se caracteriza por ser un medio diferencial para la detección,
aislamiento y enumeración Staphylococcus aureus.
También se utilizan los diferentes tipos de desinfectantes y usos en el laboratorio

Existe un espectro aproximado de sensibilidad de los microorganismos a los


desinfectantes. Los más sensibles son las bacterias vegetativas, los hongos y los virus
que contienen lípidos. Las mycobacterias y los virus que no contienen lípidos son
menos sensibles y los esporos son por lo general resistentes.

En la elección de los desinfectantes, deben tenerse en cuenta algunas consideraciones


acerca de su toxicidad y de los efectos perjudiciales que pueden tener sobre la piel, ojos
y vías respiratorias. Únicamente se tratan aquí aquellos desinfectantes que tienen
aplicación en el laboratorio.

IV. CONCLUIONES

 Se realizó la selección de materiales para aislamiento de de


microorganismos.
 Se Seleccionó el medio de cultivo para un tipo de microorganismos.
 Se logró preparar la solución de Agar.
 Se preparó los diferentes materiales correctamente para la esterilización.

V. BIBLIOGRAFÍA

 Cappuccino G. James, Sherman Natalie, Microbiology A Laboratory,


Edición Benjamín/ Cummings, New York, quinta edición.
 Collins C.H, Lyne Patricia, Métodos Microbiológicos Edición Acribia, S.A,
Zaragoza, España, quinta edición.
 Salvat Básico, Diccionario Enciclopédico, Edición Carvajal S.A., tercera
reimpresión, 1988. Manual de Microbiología y Parasitología, 2006.

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