BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO.

MICROBIOLOGÍA

ACTIVIDADES UNIDAD 3

DR. CARLOS CABRERA MALDONADO

SALAZAR VÉLEZ ALMA LIZZET 201962961

FECHA DE ENTREGA
04/09/2021
Concepto de medio de cultivo.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad
de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal
adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con
exclusividad.

Diseña un cuadro comparativo de la función de cada uno de los

componentes de los medios de cultivo.

Agar Se utiliza como agente gelificante para

dar solidez a los medios de cultivo. En
el agar bacteriológico el componente
dominante es un polisacárido que se
obtiene de ciertas algas marinas y que
presenta la indudable ventaja de que,
a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es
utilizado como nutriente. Un gel de
agar al 1-2% se licua alrededor de los
100ºC y se gelifica alrededor de los
40ºC, dependiendo de su grado de
pureza.
Extractos Su preparación consiste en que ciertos
órganos o tejidos animales o vegetales
(p.e. carne, hígado, cerebro, semillas,
etc.) son extraídos con agua y calor y
posteriormente concentrados hasta la
forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son a
menudo empleados en la elaboración
 de los medios de cultivo. Los más
utilizados son el extracto de carne, de
levadura y el de malta.
Peptonas Son mezclas complejas de
compuestos orgánicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por
digestión enzimática o química de
proteínas animales o vegetales (soja
caseína carne, etc.). Las peptonas son
muy ricas en pépticos y aminoácidos,
pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales
minerales.
Fluidos Corporales Con frecuencia es necesario añadir a
los medios de cultivo de algunos
patógenos sustancias como sangre
completa, sangre desfibrinada, plasma
o suero sanguíneo, sobre todo para
conseguir el primer aislamiento a partir
del hospedador. La sangre no puede
ser esterilizada, y por tanto debe de
ser obtenida en condiciones asépticas
directamente de un animal sano, y
adicionada al medio de cultivo después
de que este haya sido auto clavado.
Los fluidos corporales no solo aportan
factores de crecimiento, sino que
también aportan sustancias que
neutralizan a inhibidores del
crecimiento de algunas bacterias. Un
ejemplo podría ser la catalasa
presente en las células sanguíneas
 destruye el peróxido de hidrógeno que
algunas bacterias que no poseen este
enzima acumulan como producto del
metabolismo del oxígeno.
Sistemas Amortiguadores Para mantener el pH dentro del rango
optimo del crecimiento bacteriano a
veces, es necesario añadir algunos
componentes al medio de cultivo.
Debido a que la mayoría de las
bacterias son neutrófilas, se suelen
emplear sales del tipo de los fosfatos
bisodicos ò bipotásicos u otras
sustancias como las peptonas para
prevenir la desviación del pH.
Indicadores de pH Con el objeto de poder detectar
variaciones en el pH debido a
fermentaciones u otros procesos, se
hace necesario a veces añadir
indicadores acido-base que nos lo
indiquen.
Agentes Reductores Con el objetivo de crear en los medios
de cultivo condiciones que permitan el
desarrollo de los gérmenes
microaerofilos ò anaerobios se añaden
estos agentes reductores siendo, los
más empleados la cisteína y el
tioglicolato entre otros.
Agentes Selectivos La adición de determinadas sustancias
a un medio de cultivo puede convertirlo
en selectivo. Así, por ejemplo, la
adición de cristal violeta, sales biliares,
azida sódico, telurito potásico,
 antibióticos, etc., a la concentración
adecuada hará que actúen como
agentes selectivos frene a
determinados microorganismos.
Diseña cuadros comparativos para clasificar a los medios de cultivo, en
base:

A) Contenido cuali-cuantitativo de sus elementos (sintéticos, complejos)

y ejemplos

Sintéticos Son medios compuestos por

productos químicos conocidos y se
utilizan para realizar estudios
metabólicos, por ejemplo: agar blando,
caldo nutritivo, agar eosina azul de
metileno, etc.
Complejos Los medios que contienen algunos
ingredientes cuya composición química
se desconoce se denominan medios
complejos. En los medios complejos, la
energía, el carbono, nitrógeno y azufre
son provisto principalmente por las
proteínas.

B) Concentración del agente gelificante (caldos, semigelificados,

gelificados.) y ejemplos

Caldos Son medios líquidos que favorecen o

permiten la multiplicación de las
bacterias cuando la muestra obtenida
es muy pobre.
Semigelificados Se utilizan para estudiar la
motilidad de las bacterias. Tienen
un menor porcentaje de agar, por
 lo que no solidifican totalmente a la
temperatura ambiente.
Gelificados Se utilizan para obtener bacterias
aisladas por la formación de
colonias sobre la superficie del medio
de cultivo y para el estudio de la
morfología de las colonias, lo que no
permiten los medios líquidos. Se
diferencian porque tienen una
sustancia de sostén, que puede ser
agar.

C) Uso (transporte, simple, enriquecidos, de enriquecimiento, selectivos,

diferenciales, de caracterización bioquímica, de conservación).

Transporte Es capaz de mantener viva una

muestra o cepa de microorganismos
por un periodo prolongado,
manteniendo a los microorganismos
vivos y sobre todo sin alterar su
concentración.
Simple Medios simples o comunes, a los que
se le añaden ciertos elementos como
sangre, suero, líquido ascítico, huevo,
glucosa, vitaminas, etc.
Enriquecidos Permiten el crecimiento de sólo un tipo
de microorganismo.
De enriquecimiento Contiene los nutrientes necesarios
para apoyar el crecimiento de una
amplia variedad de microorganismos
entre ellos algunos de los más
exigentes. Se utilizan comúnmente
 para la cosecha de diferentes tipos de
microbios que están presentes en la
muestra
Selectivos Permiten el crecimiento de sólo un tipo
de microorganismo.
Diferenciales Son medios de cultivo que
permiten establecer diferencias entre
diferentes tipos microorganismos
De conservación Demostró tener la capacidad de
mantener la viabilidad de los
microorganismos durante un período
de 30 días con plena seguridad y hasta
100 días con el 90 % de probabilidad
de supervivencia

De la clasificación de los medios de cultivo por su uso, escribir 5 ejemplos

de cada uno de ellos.

Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los
que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).

Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo

determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).

Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo

medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc. (por
ejemplo, medio de MacConkey).

Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el

crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la
cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.

Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el

crecimiento de una especie.
Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a
especímenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su
concentración simple.

Transporte: Caldo de Tioglicolato para anaerobios estrictos. Medio de transporte

Stuart. Venkat-Ramakrishnan (VR). Amies-carbón.

De enriquecimiento: Agar sangre, Agar chocolate, Agar selenito, Agar CLED, Agar
DLA.

Selectivos: Caldo selenito, Agar MacConkey, Thayer-Martin.

Diferenciales: Agar TSI, Agar citrato, Agar urea, Caldo peptonado, Caldo MR-VP
Clasificación de las bacterias, en base a: los requerimientos gaseosos,

temperatura, consumo de azúcar o sal, luz.

Clasificación en base a la temperatura

Psicrófilas: criófilas crecen a temperaturas bajas, alrededor de 0ºC, pero el

desarrollo óptimo es entre 10 y 15ºC, existen especies que tienen desarrollo hasta
- 15ºC. Su temperatura máxima es de 18-20ºC.

Psicrótrofas: Crecen a temperaturas mínimas de -5ºC, su desarrollo óptimo es

entre 20 y 30ºC. La temperatura máxima que resisten es de 35-40ºC.

Mesófilas: Tienen temperatura de desarrollo alrededor de los 25 a 42ºC, en este

grupo se encuentran casi todas las bacterias patógenas.

Termófilas: Tienen temperatura óptima de desarrollo entre los 45ºC y a

temperatura de 70ºC.

Termófilas facultativas: Termotolerantes desarrollan bien a menos de 45ºC y a

temperaturas superiores.

Termófilas extremo: Temperatura óptima de crecimiento es 65ºC (termos

acuáticos). Hipertermófilo: Temperatura óptima de crecimiento es 80-100ºC.
Temperatura de crecimiento óptimo: Es la temperatura en que se obtiene el
máximo desarrollo en el tiempo mínimo (de 12 a 24 hrs. en general). Esta
temperatura puede no ser la óptima para el desarrollo de diversas características
del microorganismo, como: Pigmentación y Morfología.

Clasificación en base a requerimientos gaseosos

Aerobias: Necesitan para su desarrollo la presencia de oxígeno libre. Ej.:

Mycobacterium tuberculosis, Pseudomonas sp, Bacillus, etc.

Microaerófilas: Son bacterias aerobias facultativas que crecen mejor con

incremento de CO2 al 5-10%, y tensión de O2 reducido. Ej.: Neisseria gonorreae.

Anaerobias estrictas: Sólo desarrollan en ausencia de oxígeno libre, la presencia

de este gas induce a la formación de peróxidos letales. Ej.: Clostridium tetani,
Bacteroides.

Anaerobios Facultativos: Son los microorganismos que desarrollan en presencia

de oxígeno y en su ausencia. Ej.: Enterobacterias.

Las Bacterias Aerotolerantes: tienen el mismo perfil metabólico que las

anaerobias, pero las distingue su capacidad de tolerar el O 2 del aire no tolerado
por las anaerobias estrictas. Ej.: Clostridium perfringens.

Clasificación en base a consumo de azúcar o sal, luz

Luz: los microorganismos fotoautotróficos: necesitan luz para el desarrollo de la

fotosíntesis.

Sales: los microorganismos Halófilos necesitan altas concentraciones de cloruro

de sodio para desarrollar (aproxim. 15%).

Halófilos: discretamente halófilos 1-6%.

Halotolerantes: 6-15% ClNa

Halófilos extremos: 15-30% ClNa

Osmófilos: crecen en altas concentraciones de azúcares.

Xerófilos: m.o. que crecen en ambientes muy secos.

¿Qué requerimientos son necesarios para cultivar bacterias en el laboratorio

en condiciones in vitro?

Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los resultados
obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes
requisitos:

 Disponibilidad de nutrientes.
 Consistencia adecuada del medio.
 Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases.
 Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorífico).
 Luz ambiental.
 pH adecuado.
 Temperatura.
 Esterilidad.
Analizar las técnicas para el cultivo de microorganismos indicadores y
patógenos de interés sanitario.

La detección en el laboratorio de los microorganismos patógenos puede ser muy

complicada, muy lenta y/o muy costosa para determinaciones rutinarias. Además,
es concluyente cuando se encuentra un microorganismo patógeno, pero puede
haber casos en que no se detecte por razones circunstanciales como el clima o la
cantidad de individuos infectados que están contaminando, a pesar de que el
manejo del alimento implique el riesgo de que el patógeno aparezca en cualquier
momento. En todo caso, la investigación de microorganismos patógenos en
alimentos no facilita un enfoque preventivo. Por esas razones, las normas en
materia de alimentos generalmente establecen la calidad microbiológica en
términos de microorganismos indicadores. Éstos son organismos (o grupos) que
advierten oportunamente de un manejo inadecuado o contaminación que
incrementan el riesgo de presencia de microorganismos patógenos en alimentos.
Además de que su detección en el laboratorio es más sencilla, rápida y/o
económica, los microorganismos indicadores permiten un enfoque de prevención
de riesgos, puesto que advierten manejo inadecuado y/o contaminación. Los
principales microorganismos indicadores en alimentos son:

− Indicadores de condiciones de manejo o de eficiencia de proceso: mesófilos

aerobios (o cuenta total) cuenta de hongos y levaduras cuenta de coliformes
totales

− Indicadores de contaminación fecal: coliformes fecales, E. coli enterococos. Cl.

perfringens La selección de indicadores en un alimento depende
fundamentalmente de los riesgos implicados y de lo que se requiera saber para
liberar, controlar o mejorar el alimento, manteniendo el enfoque preventivo.

Tubos con agar inclinado: Previo a la siembra y con posterioridad a esta es

importante pasar la boca del tubo (sin la tapa) por la llama del mechero
(flameado). Esta operación genera corrientes de convección que previenen que
los contaminantes del aire caigan dentro de los recipientes. El calentamiento
puede también matar los microorganismos que se encuentren en la boca de los
recipientes. Para realizar la siembra se puede utilizar el ansa, realizando un
movimiento suave sobre la superficie del agar en forma de zigzag, desde el fondo
hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.

Siembra en placas: Puede ser en superficie (utilizando espátula de Drigalski,

ansa o hisopo) o por mezcla (el inóculo con el medio de cultivo agarizado aún
fundido, a temperatura de unos 45ºC, se mezclan y se vierte en la placa de Petri)
Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio
puede provocar condensación en la tapa de esta durante la incubación y si cae
sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente. En
medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra
en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además
para contar y aislar.
Cultivo en medio semisólido: Se utilizan tubos sin inclinar. Se siembra por
picadura o punción utilizando un hilo. Este tipo de medio contiene una proporción
menor de agar que los medios sólidos. El medio queda inoculado al introducir el
hilo en profundidad, pero sin tocar el fondo del tubo, retirándolo posteriormente por
la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura. En medio semisólido se podrá
comprobar si el microorganismo es o no móvil, ya que en el primer caso se
observará que el crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo la
picadura, detectándose turbidez.

Investiga 5 características que forman parte de la morfología colonial

Al desarrollarse las colonias bacterianas sobre los medios sólidos las células en
división no se dispersan, por lo que la población está en forma compacta o densa.
Los nutrientes en el centro de la colonia pronto escasearan, de esta forma los
microorganismos dejaran de reproducirse, pero en la periferia de la colonia las
células continúan desarrollándose. La colonia bacteriana no se extiende en forma
indefinida sobre la superficie del medio de cultivo, sino que representa un borde, el
cual por su forma es característico para ciertas especies de bacterias. Las
bacterias aisladas y bien definidas se desarrollan a partir de una célula bacteriana
individual por lo que puede considerarse que todas las bacterias en la colonia son
idénticas desde el punto de vista genético. Las características de la morfología
colonial bacteriana que nos ayudan a seleccionar e identificar a estos
microorganismos son: 

 tamaño en mm
 color
 forma: puntiforme, circular, filamentosa, ameboide, alargada o
fusiforme.
 Elevación: plana, elevada, convexa, pulvinada y umbonada.
 Borde o margen: entero, ondulado, lobulado, filamentosa, enrollado o
festoneado.
 Superficie: lisa o rugosa.
 Aspecto: húmeda o seca.
  Transmisión de la luz: traslucida, opaca o transparente.
 Reflexión de la luz: brillante o mate.
 Consistencia: butirosa o blanda, dura o friable.  
¿Cuáles son las condiciones que deben mantenerse las placas con medio de
cultivo, tubos con caldo, pruebas bioquímicas dentro de la estufa
bacteriológica?

Al incubar las bacterias deben estar el tiempo y temperatura de

incubación adecuados para cada bacteria (si no se indica lo contrario, 37 °C, 24
horas)

La estufa bacteriológica tiene que mantenerse a 37ºC para desarrollo de los

cultivos bacterianos, hay algunas incubadoras que tienen tensión de oxígeno para
anaerobios facultativos. El nombre común es incubadora bacteriológica. Uso y
Manejo del Equipo Lo único que se debe hacer, después de tener preparado el
cultivo, es verificar que el termómetro marque 37 grados centígrados, que es
la temperatura a la cual debe estar, y colocar el cultivo, luego de lo cual, se cierra
la incubadora, y se revisa el cultivo cada 24 horas para verificar si el crecimiento
es positivo o negativo. Partes del Equipo-Controlador de temperatura-Panel de
control-Gabinete externo.

Investiga los métodos para cultivar bacterias anaerobias estrictas en el

laboratorio

El cultivo de bacterias anaerobias requiere de una atmósfera libre de oxígeno, que

puede lograrse mediante remoción o consumo de este gas y sustitución de la
atmósfera con gases libres de oxígeno como bióxido de carbono, nitrógeno o una
mezcla de ambos. Es necesario contar con equipo de laboratorio que no es de uso
común, tal como cilindros de gases (poco prácticos), jarras y sobres de
anaerobiosis tipo Gas Pak (que en nuestro medio son costosos) o una cámara
anaeróbica (de muy alto valor y uso muy restringido).

Para el aislamiento primario de los anaerobios suelen combinarse medios de

cultivo no selectivos con medios selectivos y diferenciales. Los medios más
usados son - Agar sangre para anaerobios. Se usa agar Brucella o agar Schaedler
con un 5% de sangre de carnero, a los que se añade vitamina K1 y hemina (la
mayoría de estos microorganismos requieren estos factores para su crecimiento).
En este medio crecen los anaerobios, pero también los facultativos. - Un medio
selectivo para anaerobios, como el agar sangre con alcohol fenil-etílico (PEA).
Inhibe los bacilos Gram negativos facultativos, así como el crecimiento en velo de
algunos clostridios (C. septicum). Se usa si se sospecha infección mixta. - Un
caldo de enriquecimiento (tioglicolato sin indicador, suplementado con vitamina K1
y hemina), como ya vimos en lo referente a la inoculación de las muestras.

- Agar sangre selectivo para Bacteroides Hay varios tipos:

 SNV (agar Schaedler con neomicina y vancomicina).

 SKV (agar Schaedler con kanamicina y vancomicina).

 ASLKV (agar sangre lacada con kanamicina y vancomicina).

Permiten el crecimiento de los Bacteroides del grupo fragilis, así como de algunas
especies de Prevotella. La vancomicina inhibe el crecimiento de la mayoría de los
grampositivos y especies de Porphyromonas, mientras que los aminoglucósidos lo
hacen con los facultativos.

Bibliografía.

 Brooks, G. F., Butel, J. S., Carroll, K. C., Morse, S. A., & Mietzner, T. A.
(2016). Jawetz, Melnick y Adelberg Microbiología Médica (27 ed.). México:
Mc Graw Hill.
 Microbiologiaitt - 5. Morfología Colonial y Cultivo en Medio Líquido. (s. f.).
microbiologiaitt. Recuperado 3 de septiembre de 2021, de
https://microbiologiaitt.es.tl/5-.--Morfolog%EDa-Colonial-y-Cultivo-en-
MedioL%EDquido.htm#:%7E:text=Las%20caracter%C3%ADsticas%20de
%20la%20morfolog%C3%ADa,%2C%20ameboide%2C%20alargada%20o
%20fusiforme.
 Rodríguez, de la Cruz, E. E. (1999). Un método sencillo para generar
anaerobiosis en tubos de cultivo. Revista biomédica, 10(2), 103-106.