2020

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN DE AREQUIPA

FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE INDUSTRIAS

ALIMENTARIAS

PRACTICA N° 2: CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

CURSO: BIOTECNOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS

DOCENTE: Dra. Sonia Jackeline Zanabria Gálvez

INTEGRANTES:
- ESQUIVEL JUCHARO, DELAO
- FLORES CHINO, ZYLIN JIMENA
- MEDINA CACERES, MIREYA
- TAPARA MANTILLA, RUBEN ALEXANDER

AREQUIPA-PERÚ
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CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

I. OBJETIVOS

- Diferenciar cada una de las fases del crecimiento de la levadura:

Saccharomyces cerevisae, mediante la caracterización cualitativa de su
crecimiento.

II. RESUMEN

En la práctica se colocó agua en tres vasos transparentes a diferentes

temperaturas: fría, caliente y tibia en una cantidad de 200ml, donde se agregó
media cucharadita de azúcar y también media de levadura, y se llevó a
ebullición y al atemperar se agregó otra vez 1/2 cucharadita de levadura y se
tapó con papel aluminio o bolsas haciéndole tres agujeros. Al observar los
cambios a diferentes tiempos: 0, 1, 2, 3, 5, 7, 9, 10, 24h. se pudo observar que
no se produjo ningún cambio ni una fermentación.

III. INTRODUCCION

La sacharamyces servicae tiene una reproducción asimétrica (no bipartición),

tienen una vida replicativa limitada, donde la medida de los tamaños de las
células crece con la edad (Viteri et al, 2016).

Figura 1. Reproducción de la levadura Saccharomyces cerevisiae.

Fuente: Viteri et al, 2016.

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Una parte de la bioquímica microbiana es la curva de crecimiento de un cultivo

microbiano donde este se desarrolla, se puede subdividir básicamente en cuatro
fases:
 Fase latencia. Periodo de adaptación de los microorganismos al medio.
En esta fase el número de microorganismos permanece constante e
incluso puede que disminuya.
 Fase exponencial. En este periodo los microorganismos se multiplican
activamente y su número aumenta en progresión geométrica.
 Fase estacionaria. En esta fase el número de microorganismos permanece
prácticamente constante estableciéndose un equilibrio entre la
reproducción.
 Fase de muerte: En esta fase las condiciones prevalecientes no pueden
sostener más crecimiento y el número de células que mueren supera a las
que se forman.
El tiempo de duplicación se calcula estableciendo el número de duplicaciones
que se producen durante un intervalo de tiempo determinado (CEUPE, 2017).
IV. MATERIALES Y METODOS

3.1. MATERIAL, INSTRUMENTAL Y EQUIPOS.

3.1.1. Material a ensayar, insumos y reactivos, los requeridos son:

- levadura
- azucar
- agua
- vasos
- tela o papel aluminio

3.1.2. Equipos e Instrumental, se requieren los siguientes:

- Cocinilla.
- Olla
- Vasos de vidrio
3.2. PROCEDIMIENTO.

a) Caracterización del crecimiento, observaciones:

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Figura 1. Diagrama de flujo

Medida de Adición de
Preparación de volumen azúcar y
Materiales (200ml) levadura

Segunda
Observación de
Ebullición adición de
Levadura resultados

Fuente: Elaboración propia, 2020.

V. RESULTADOS

a) Características de la levadura: Experimental Cuadro 1.

Capacidad fermentativa de la levadura.

OBSERVACION Agua fría Agua tibia Agua caliente

Condiciones Uniforme uniforme Uniforme

homogéneas al
inicio
Solubilización Lenta Inmediata Inmediata

Formación de Nula Nula Nula

espuma
Altura de la 0.3 mm 0.3 mm 0.3 mm
levadura en el
sedimento

Fu ente: Elaboración propia, 2020.

b) Características de la levadura: Bibliográfico

Para la evaluación del crecimiento de la levadura Saccharomyces cerevisiae se

utilizaron tres medios de cultivo: caldo de extracto de malta
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(YM), caldo de glucosa y levadura (YGB) y caldo de sacarosa y levadura

(YPS). Para lo cual se adicionó el inóculo de Saccharomyces cerevisiae activada
a cada uno, realizando muestreos periódicos de 5 ml caca 5 horas por un lapso
de 35 horas (Rocha, 2011).

Grafica 1. Cinética de crecimiento para la levadura Saccharomyces cerevisiae

en diferentes medios de cultivo.

Fuente: Rocha, 2011.

VI. DISCUSION

Como se puede apreciar en los resultados, no hay inicios de crecimiento por

parte de la sacharomyces cervisiae, es puede ser porque la levadura liofilizada
que se usó ya estaba abierta y posiblemente el lugar donde se almaceno no fue
el óptimo. Serrano (2006), indica que los factores intrínsecos necesarios para el
crecimiento de las levaduras son:

a) Actividad de agua: las levaduras obtienen casi todos los nutrientes

disueltos en agua disponible en el sustrato.

b) pH: varía según la especie, para el caso de la S. cervisiae se obtiene

mayor producción entre 4 y 6.

c) Nutrientes: levaduras como la S. cervisiae, tienen la habilidad de

fermentar maltotriosas, maltosa, sacarosa, glucosa y fructuosa.

Los factores extrínsecos para el crecimiento de las levaduras son:

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a) Temperatura: comprendida entre 5 – 30°C, para la S. cervisiae es de 48

– 53°C, si es menor de esta disminuye su crecimiento, si es mayor puede
matar a la levadura.

b) Tensión superficial de oxigeno: en condiciones anaerobias la producción

de biomasa es bajo y el coeficiente de producción es generalmente
0.075, en cambio en aerobiosis la producción es alta y el coeficiente de
producción es de 0.54.

Por otro lado, como se puede apreciar en el trabajo realizado por Rocha en el
2011, hay una fose exponencial de 5 – 10 h, sin embargo, se observó que la
levadura aún continúa en crecimiento hasta las 20 horas, que es cuando se inicia
la fase estacionaria, en la cual permanece hasta las 35 horas de incubación. Así
mismo se puede apreciar que el sustrato que se usa puede influenciar en el
crecimiento, siendo el caldo de sacarosa donde la levadura se desarrolló mejor.

VII. CUESTIONARIO

1. ¿En qué tiempos observa diferencias de fases del crecimiento

microbiano?

En la prueba para el crecimiento de la S. Cervisiae con la sacarosa realizada

por Rocha (2011), se observa que, a partir de las 5 h hasta las 10 h, inicia la
fase exponencial.

2. ¿Al realizar una gráfica porque encuentra diferencias en la

curva?

En la curva se puede apreciar 4 faces: latencia, exponencial, estacionaria y

de muerte. La diferencia que hay es porque al inicio las levaduras se adaptan
al medio, luego estas se reproducen por gemación, hasta llegar a la fase
estacionaria y finalmente mueren.

3. ¿Cuáles son las técnicas para evaluación de crecimiento

microbiano?

Según Rojas (s.f.) y UNAM (s.f.) mencionan

- Métodos directos:
 Número de células: 1) Cuenta directa en microscopio (Cuenta en
Breed, cámara de Neubauer y cámara de Prettof Hausser) , 2)
Cuenta en placa (solo células viables)
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 Masa celular: 1) Peso seco (filtración, centrifugación), 2)

Turbidez (DO de una suspensión de células)
- Métodos indirectos:
 Consumo de sustrato
 Formación de productos
 Métodos cinéticos
 Componentes celulares
 Actividades enzimáticas

4. ¿Cuáles son los medios de cultivo y metabolitos de

Sacharomyces cerevisae?

- Medios de cultivo: Agar, galactosa, glucosa, lactosa, peptosa,

extracto de patat, cloruro de sodio, sorbitol, tryptona, extracto de
levadura. (IBIAN, 2020)
- Metabolitos:
Etanol, metanol, glicerol
Metabolitos secundarios: aminoácidos, ácidos nucleicos y vitaminas,
sulfitos,
El metabolismo del azúcar produce acetaldehído, ácido acético,
diacetilo, ácido succínico compuestos volátiles (Zumárraga y Barbero,
s.f.)

5. ¿Qué es ComBase?
Es una herramienta en línea para microbiología cuantitativa de alimentos, su
enfoque es describir y predecir la sobrevivencia y crecimiento de los
microorganismos (ComBase, 2020)

VIII. CONCLUSION

- Experimentalmente no se logró diferenciar cada una de las fases del

crecimiento de la levadura: Saccharomyces cerevisae, mediante la
caracterización cualitativa de su crecimiento debido a los posibles factores
extrínsicos e intrínsicos.
- Bibliográficamente se logró conocer y diferenciar cada una de las fases de
crecimiento de la levadura Saccharomyces cerevisae.
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IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

CEUPE. (12 de Mayo de 2017). Desarrollo Microbiano. Obtenido de Centro

Europeo de Postgrado: https://www.ceupe.com/blog/desarrollo-
microbiano.html
ComBase. (2020). Sobre ComBase. Obtenido de ComBase https://www.combase.cc/index.php/en/
IBIAN. (2020). Productos Formedium para cultivo de levaduras. IBIAN Technology.
Obtenido de https://www.ibiantech.com/productos-formedium- para-cultivo-de-
levaduras/
Rocha, J. (2011). Producción de biocombustibles utilizando Spirulina sp como
fuente de carbono. Trabajo de Grado. UANL, México. Obtenido de
https://core.ac.uk/download/pdf/76586841.pdf
Rojas, C. (s.f.). Microbiología general. Universidad Autíónoma de Madrid.
Obtenido de
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/crl/Microbiologia/16P/TEMA_8.pdf
UNAM. (s.f.). Medición del crecimento microbiano. Departamento de fisicoquímica.
Universidad Autónoma de México. Obtenido de
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4b_MedicionCrecimiento_198
37.pdf
Serrano, R. (2006).
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3555/rsc1de1.pdf?sequence=1.
Obtenido de Mecanismos de adaptacion de Saccharomyces cervisiae a la alcalinizacion
ambiental. Trabajo de Grado, UAB, España. :
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3555/rsc1de1.pdf?sequence=1
Viteri et al. (2016). Modelización del crecimiento de una población microbiana en
medio líquido y su implicación en el estudio de la morfología celular a
través del análisis digital de imágenes. . Obtenido de
https://jornadasmoma5.blogs.upv.es/files/2016/06/Marta.pdf
Zumárraga, M. y Barbero, F. (s.f.). Saccharomyces cerevisae: Contribución
organolépticas en la vinificación. Revista Oficial de la Asociación de
Bodegas de Rioja Alavesa. Obtenido de
http://www.guserbiot.com/pdf/Guserbiot_art_Ondare.pdf
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ANEXO I
A partir de los siguientes datos:

 Elaborar la curva e identificar fases de crecimiento

 Calcular el tiempo de duplicación.

TABLA 1. Datos de tiempo y X microorganismos

T (h) X (g/L)
0 1
2 1.22
4 1.49
6 1.81
8 2.21
10 2.69
15 4.41
20 7.24
25 11.87
30 19.4
35 25.4
40 25.6
50 25.3
60 25.1
70 24.8
80 24.6
90 24.3
100 24.1

GRAFICO 1. Identificación de fases en la curva de crecimiento

Tiempo vs Xcelulas)
FASE ESTACIONARIA
30
25

20 MUERTE CELULAR
x celulas

15

10

5 FASE EXPONENCIAL

0 20 40 60 80 100 120
0
Tiempo (h)

TABLA 2. Datos para calcular el tiempo de generación

Fuente: Elaboración propia
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T (h) X (g/L) Ln(X)

0 1 0
2 1.22 0.19885086
4 1.49 0.39877612
6 1.81 0.59332685
8 2.21 0.79299252
10 2.69 0.98954119
15 4.41 1.48387469
20 7.24 1.97962121
25 11.87 2.47401421
30 19.4 2.96527307
35 25.4 3.23474917
40 25.6 3.24259235
50 25.3 3.2308044
60 25.1 3.22286785
70 24.8 3.21084365
80 24.6 3.20274644
90 24.3 3.19047635
100 24.1 3.18221184
Fuente: Elaboración propia (2020)

GRAFICO 2. rva de desarrollo para calcular el de generación

Cu tiempo

Creciemiento
4
3.5
3
ln (x)

2.5
2
1.5
1
0.5 y = 0.0746x +
0 0.5126 35 40 45
0 5

10 15 20 25 30
Tiempo (h)

Fuente: Elaboración propia (2020)

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CALCULOS

lnX= 0.693 t/g + lnXo

Y= mx + b

Ecuación:
Y= 0.0746 X+0.5126

Por lo tanto
t/g= 0.693/m
t/g=0.693/0.0746
t/g= 9.28954424

El tiempo de duplicación es de 9.3 horas.

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ANEXO II
EVIDENCIAS EXPERIMENTALES
Tabla Nº1: Metodología de Experimentación
PREPARACION DE MATERIALES DE EXPEIMENTACION
Agua Azúcar Levadura
Fig1 Fig2 Fig3

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Adición de Azúcar Adición de Levadura
Fig4 Fig5

RESULTADOS FINALES LUEGO DE24 HORAS

Fig6

Fuente: Elaboración propia (2020)