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CURSO
INMUNLOGÌA GENERAL
DOCENTE
ALUMNO
NRC:
4473
TRUJILLO – PERÙ
2021 - 02
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MANUAL DE PRACTICAS INMUNOLOGIA BASICA
PRÁCTICA 01
INTRODUCCIÓN
Nivel de Bioseguridad 1: En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro
mínimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. En este nivel no se requiere
equipo especial ni tampoco un diseño específico de las instalaciones. El laboratorio no
está necesariamente aislado de las demás instalaciones del edificio. El trabajo se realiza
generalmente en mesas de trabajo abiertas. Por lo general, los materiales contaminados
se desechan en recipientes de residuos abiertos. Incluye varios tipos de bacterias y virus
como la hepatitis canina, Escherichia coli no patógena, Staphylococcus epidermidis,
Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus lactis, Sacharomyces cerevisiae, Penicillium
roqueforti, así como algunos cultivos de células.
Nivel de Bioseguridad 4: Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes
biológicos que representan un alto riesgo individual de contagio y que además son un
riesgo para la vida. Por lo regular los científicos que trabajan aquí, utilizan trajes
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especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que además tienen una leve
sobrepresión para evitar que entren partículas infecciosas al mismo si es que éste llega
a desgarrarse. Además, las instalaciones están en un edificio separado o en un área
controlada dentro de un edificio, que está completamente aislado de las demás áreas
del edificio. Las enfermedades infecciosas que se manejan en el nivel 4 son: Virus de
la viruela, Virus de la fiebre hemorrágica de Crimea (Congo), Virus de Marburg, Virus
Ébola.
OBJETIVO GENERAL
• Aprender las normas de bioseguridad aplicadas al laboratorio de inmunología.
Objetivos Específicos.
• Familiarizar al estudiante con las normas de bioseguridad en el laboratorio de
inmunología.
• Hacer conocer la importancia de los riesgos biológicos del manejo de material
infeccioso.
• Aplicar los conocimientos en la resolución de casos de accidente ocupacional
con material infeccioso.
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ACCIDENTES:
Los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI), son los que contienen bacterias,
hongos, virus, parásitos, microorganismos capaces de causar infecciones, efectos
nocivos para la salud y el medio ambiente.
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Color y tipo de envase requerido para cada uno de los tipos de RPBI:
SEÑALIZACIÓN EN EL LABORATORIO
Requisitos de utilización
CLASIFICACIÓN DE PICTOGRAMAS:
1. Señales de advertencia
• Forma triangular.
• Pictograma negro sobre fondo amarillo, bordes negros.
2. Señales de prohibición.
• Forma redonda
• Pictograma negro sobre fondo blanco, bordes y banda rojos
3. Señales de obligación.
• Forma redonda
• Pictograma blanco sobre fondo azul
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TAREAS DE LABORATORIO:
1. Esquematizar dos pictogramas de cada uno de los 5 tipos expuestos
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PRÁCTICA 02
INTRODUCCIÓN
Los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas que conforman la sangre se
producen en la parte esponjosa (médula roja) de algunos huesos del esqueleto (esos
son: el esternón, los huesos del cráneo, las costillas, el hueso ilíaco y las terminaciones
de los huesos de los miembros superiores e inferiores.
Usualmente en adultos se utilizan las venas del pliegue antecubital del brazo, pero
también pueden ser otras zonas como, por ejemplo: del antebrazo, dorso de la mano,
dorso del pie, etc.
MATERIAL Y MÉTODOS
1. Equipo necesario para la venopunción: Equipo Vacutainer.
• Tubos de vacío diseñados para llenarse con un volumen predeterminado de
sangre por medio de vacío, esto garantiza una adecuada relación entre sangre y
anticoagulante. Los tapones de goma están codificados por color de acuerdo con
el aditivo que contienen así, por ejemplo, los tubos morados (EDTA) son los más
utilizados para hematología rutinaria y los tubos celestes (citrato) para pruebas
de coagulación.
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Un adecuado etiquetado de los tubos es esencial para que los resultados de los
análisis concuerden con el paciente correcto. Los elementos clave en el
etiquetado para garantizar la calidad de la muestra pre-analítica son:
• Nombre o iniciales del paciente
• Número de identificación del paciente
• Fecha y hora de la toma de muestra
• Iniciales del flebotomista
3. Punción venosa
La punción venosa permite extraer una mayor cantidad de sangre para las
pruebas necesarias en hematología. Las venas de elección suelen ser las de la
cara anterior del antebrazo (vena cubital, vena cefálica y la vena basílica)
porque resulta fácil acceder a ellas.
4. Punción capilar
Metodología
• Tome la muestra de las yemas de los dedos o lóbulo de la oreja.
• Desinfecte el sitio de la punción, séquelo y puncione la piel con una
lanceta estéril que no debe penetrar más de 2 mm.
• Deseche la primera gota de sangre. Tome las gotas subsecuentes en un
microtubo y prepare las laminillas con esa muestra.
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Las agujas más usadas para la venopunción son las agujas de 0.8 mm (21G), de ese
modo se podrá obtener la sangra para el hemograma.
2. ¿Por qué se utiliza una ligadura en el brazo para realizar la extracción sanguínea?
Se debe introducir la aguja con el bisel hacia arriba, porque permite una mejor
absorción de la sangre, también para detener una posible hemorragia en el momento
de la extracción.
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Suero: Es la parte de la sangre que queda una vez que se han eliminado los factores
de coagulación como fibrina.
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PRÁCTICA 03
EL HEMOGRAMA
INTRODUCCIÓN
En los frotis muy gruesos, los leucocitos son pequeños, difíciles de teñir, siendo
imposible su reconocimiento. Aun en los mejores frotis, a causa de la diferencia de
tamaño, densidad, etc., los leucocitos muestran una distribución particular. Los
monocitos grandes y los polimorfonucleares (PMN) predominan en los bordes y al
final de la extensión, mientras que los linfocitos, más pequeños, se distribuyen en
forma más uniforme en la parte media.
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Por ejemplo:
Si se tiene 60% de neutrófilos segmentados y el recuento total de leucocitos es
de 20 000, entonces el valor absoluto de neutrófilos segmentados sería: 60/100
x 20 000 = 12 000.
MATERIAL Y MÉTODOS:
1. PREPARACIÓN DE EXTENDIDOS:
MATERIAL:
• Sangre total (con anticoagulante).
• Láminas portaobjetos.
PROCEDIMIENTO:
• Preparar una lámina cuyo ancho se ha reducido unos 5 mm. y que servirá como
"lámina extensora".
• Colocar a 1 cm. del extremo de una lámina bien limpia y seca, una gota pequeña
de sangre total o directamente de la aguja, jeringa o del dedo; por delante de
ella colocar un extremo de la lámina extensora en ángulo de 30º y retroceder
hasta que toque la gota que se extenderá a lo ancho de la primera lámina, luego
deslizar la lámina extensora siempre en ángulo de 30º, en forma rápida y
uniforme hacia el otro extremo.
• Si el ángulo entre las láminas es mayor, el frotis será más grueso y viceversa.
• Dejar secar las láminas a temperatura ambiente y rotular.
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO:
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MATERIAL:
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO:
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Fórmula Leucocitaria:
Como los granulocitos generalmente están en los márgenes del extendido y los
linfocitos en el centro, se recomienda el método utilizado por Schíling, que consiste en
tomar cuatro puntos marginales distintos recorriendo el campo en zig-zag desde el
borde hacia la parte central, y contar 25 a 50 elementos en cada uno de los cuatro
puntos.
TIPO CELULAR %
Linfocitos 20 a 45
Monocitos 4a8
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Estas cifras pueden variar por condiciones climáticas, altura, raza, emociones, dolor,
edad, etc. Conociendo la relación numérica y la cantidad total de leucocitos por
milímetro cúbico, es fácil establecer la fórmula absoluta de cada tipo celular de la
siguiente manera:
CÁMARA DE NEUBAUER
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TÉRMINOS USADOS:
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CUESTIONARIO
Si 100 GR → 25 plaquetas
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PRÁCTICA 04 – SEMANA 04
FAGOCITOSIS IN VIVO
INTRODUCCIÓN
Es en ese punto de movilización lenta cuando los fagocitos, atraídos por gradientes de
concentración de las quimiocinas, atraviesan el epitelio vascular hacia el foco de
infección patógena. Los receptores sobre la membrana de los fagocitos actúan como
mecanismos de adherencia sobre los microorganismos, sea a productos microbianos
específicos o sobre opsoninas (opsonización) del sistema inmune del hospedador.
OBJETIVO
1. Comprender el proceso de fagocitosis in vivo y aplicar los conocimientos en
casos de daño tisular, o invasión de múltiples microorganismos o sustancias.
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MATERIAL Y MÉTODOS:
1. De laboratorio:
• Tubos de ensayo.
• Mechero y asa bacteriológica, en anillo.
• Centrífuga
• Solución salina fisiológica estéril
• Tubo Nº 3 de Mc. Farland
• Estufa y Baño María
• Agujas hipodérmicas
• Tabla de disección
• Estuche de disección
• Láminas porta-objetos
• Soporte de coloración
• Colorante de Wright y azul de metileno
• Agua destilada
• Microscopio
• Aceite de cedro
2. Biológico:
• Cultivo de Escherichia coli
• Rata blanca adulta
PROCEDIMIENTO:
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TAREA DE LABORATORIO
Se inocula primero el germen muerto con la finalidad de que el sistema inmunitario del organismo
reaccione como si fuera una infección normal, de ese modo los glóbulos blancos se dirigirán a los
gérmenes muertos, presentarán sus epítopos y posteriormente se formaran anticuerpos. Cuando se
forman estos nuevos anticuerpos, el organismo ha desarrollado nuevas defensas para ese germen o
enfermedad.
2. ¿Cuál es el papel de la saponina?
Las saponinas tienen una acción irritante sobre las células. En el parénquima pulmonar se traduce
en una acción expectorante, sobre las células renales produce una acción diurética y sobre los
glóbulos rojos una acción hemolítica. Como norma general, las drogas con saponinas producen una
acción expectorante, diurética, depurativa, tónico-venosa y de disminución del colesterol
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COLORACIÒN
Tinción de Wright
AUMENTO
FAGOCITO
100x
COLORACIÒN
H–E
AUMENTO
100x
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PRÁCTICA 07 – SEMANA 03
INTRODUCCIÓN
Lanomenclaturaaceptadaen1928porla LigadelasNacionesfueladeJansky,quienpropuso
cuatro grupossanguíneos:(A, B, O, AB). Eldescubrimientodelosgrupossanguíneosrevolucionó
laprácticade la transfusión sanguíneapuestoqueyaconestehallazgo eraposibleseleccionar los
donantes mediante pruebas pretransfusiónales in vitro. El avance en la tecnología permitió el
almacenamiento seguro de sangre y dio lugar a la formación del primer banco de sangre en
Estados Unidos en el Cook Country Hospital de Chicago en 1937. En los últimos años se ha
logrado avanzar al grado de permitir la transfusióndemúltiplesfraccionesdesangre.
Las membranas de las células del organismo humano, incluyendo los eritrocitos, están
formadas por varias capas de moléculas lipídicas, proteicas, y carbohidratos distribuidos en tal
forma que permiten una separación entre elmedio intracelular yelmedio extracelular. Muchasde
estassustancias, esdecir, glicolípidos yglicoproteínas tienencapacidad antigénica yconstituyen
los llamados grupos sanguíneos. Se cree también que algunos grupos sanguíneos son
proteínas puras, pero es posible que dichas sustancias solo sean las portadoras de los
determinantes antigénicos y que siempre necesiten de lípidos o carbohidratos para efectuar
como antígenos completos.
Estos antígenos de la membrana están determinados genéticamente. Los genes que
controlan la estructura de un antígeno en particular, ocupan un lugar correspondiente
(loci) en un par de cromosomas homólogos, en esta forma para todos los genes que se
encuentran en cromosomas autosómicos un individuo puede ser homocigoto o
heterocigoto. El único grupo sanguíneo que no es autosómico es el sistema XG
cuyos genes están en el cromosoma X.
Estos antígenos pueden formar parte de la membrana del glóbulo rojo como ser el
antígeno Rh que es una lipoproteina o estar adherido a la superficie de los glóbulos rojos,
como los antígenos ABO que químicamente son lipopolisacáridos. Algunos antígenos
sanguíneos (Ej. ABO) están presentes en la mayoría de los tejidos y líquidos corporales
y otros como el Rh, K, etc. limitados y formando parte de las membranas de los glóbulos
rojos. Hoy en día se conocen más de 15 sistemas de grupos sanguíneos distintos como
muchas variantes dentro de cada sistema, la mayoría tienen 2 o 3 alelos pero por ejemplo
el Rh tiene por lo menos 28 alelos.
Los antígenos A y B son glicoproteínas, producidas por genes alelicos en un locus único,
localizados en la parte proximal del brazo corte del cromosoma 9. Los antígenos
correspondientes se encuentran aparentemente adheridos a la membrana de los glóbulos
rojos. La especificidad antigénica es conferida por el azúcar, terminal; Ej. Azúcar N-
aceteilgalactosamina proporciona la especificidad antigénica A y el azúcar galactosa
determina la actividad B. Los antígenos ABO están presentes en todos los tejidos excepto
el sistema nervioso central, de donde se deduce la importancia de dicho sistema en
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OBJETIVOS
1. Adiestrar al alumno en la determinación del grupo sanguíneo ABO y Rh
2. Capacitar al alumno en la interpretación clínica de resultados en relación al sistema
ABO y Rh
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
TAREA DE LABORATORIO
1. Explique a qué tipo de reacción serológica corresponde la determinación del grupo
sanguíneo.
2. Explique porque una persona del grupo A no puede ser donador para un receptor del
grupo B.
Una persona del grupo sanguíneo no puede donar a una persona del grupo
sanguíneo B porque el grupo A contiene anticuerpos que reaccionaran contra el
grupo B.
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Porque el grupo “AB” no presenta anticuerpo ni para “A”, ni para “B”, ni para “O”, por ello
puede aceptar de cualquiera de estos grupos, considerándolo como receptor universal.
7. Con esquemas, explique en qué consiste la eritroblastosis fetal, proceso que puede
presentarse en algunos embarazos como consecuencia del factor Rh.
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Grupo Genotipo
"A" AA, AO
"B" BB, BO
"AB" AB
"O" OO
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INTRODUCCIÓN:
LA PROTEINA C-REACTIVA (PCR); es una proteína sanguínea que forma parte de las
denominadas Proteínas de Fase Aguda que tiene la propiedad de precipitar los
polisacáridos somáticos de los neumococos. La PCR comúnmente se encuentra
aumentada en artritis reumatoidea activa, infecciones virales, tuberculosis, fiebre
reumatoidea activa, infarto agudo del miocardio, luego de una operación quirúrgica y de
transfusiones sanguíneas. La determinación de PCR indica la intensidad de la
enfermedad y la respuesta del paciente a un tratamiento dado. La PCR se detecta en
suero por reacción con un anticuerpo específico adsorbido sobre un soporte inerte de
látex. La PCR se une a los anticuerpos adsorbidos produciendo la aglutinación de las
partículas de látex, visible macroscópicamente.
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MATERIAL Y MÉTODOS:
2. PROTEÍNA C – REACTIVA
Los sueros positivos pueden titularse efectuando diluciones seriadas de: 1:40,
1:80, 1:160, etc.
3. ARTRITEST:
• Diluir una muestra de suero 1: 20 con buffer glicina. En una placa de vidrio
colocar separadamente el suero diluido 1 gota (50 uL) y una gota de reactivo
de látex-globulina. Mezclar con un palillo descartaba hasta obtener una
suspensión uniforme,
• Inmediatamente disparar el cronómetro, balanceando suavemente la placa de
vidrio observando el resultado dentro de los dos minutos.
• Para la titulación de los sueros se hacen diluciones en tubos, colocando 1,9
mL de buffer glicina en el primer tubo y 1 mL en los restantes.
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Negativo: No se ve aglutinación.
Positivo: Aglutinación dentro de los dos minutos.
Título: Inversa de la máxima dilución en la que se produce aglutinación.
4. ANTIESTREPTOLISINA-O (ASO)
• Llevar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente. Agitar el Reactivo A
antes de usar, vaciando previamente la pipeta del gotero.
• En uno de los sectores delimitados de la placa adjunta al equipo colocar: 1
gotadel Reactivo A(25ul) más la muestra ycontroles25ul.
• Mezclar con palillo descartable (uno para cada muestra) hasta obtener una
suspensión uniforme en la superficie delimitada de la placa.
• Inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y
observar macroscópicamente el resultado dentro de los 2 minutos.
• En una lámina colocar una gota de suero más una gota del reactivo RPR,
agitar constantemente por 5 minutos y observar floculación visible.
• Para titulación del suero se hacen diluciones en SSF al ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32,
colocando una gota del suero diluido más una gota del reactivo RPR.
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TAREA DE LABORATORIO:
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▪ REACCION DE AGLUTINACION:
- Aglutinación Directa: Se utiliza para detectar Ac en suero contra los Ag de membrana en la célula.
Se evidencia en tubos o placas Ej.: tipificación de tipos sanguíneos
- Aglutinación Indirecta: Utilizan células tratadas o partículas inertes recubiertas de antígenos que
actúan como portadores pasivos. Ej.: aglutinación en látex.
▪ REACCION DE PRECIPITACIÓN:
Se utiliza de antígenos solubles que se difunden frente a los anticuerpos. La unión Ag-Ac forman
unos macro complejos moleculares, formándose como una red y a causa del tamaño precipita y
establecer la presencia de anticuerpos específicos.
Una reacción de aglutinación pasiva, es aquella donde los anticuerpos se dirigen contra moléculas
que se han adherido intencionalmente a una partícula que actúa como medio de soporte pasivo
(látex).
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SEMANA 06
PROCEDIMIENTO
FUNDAMENTO
La técnica de Acción Hemolítica del Complemento mide la capacidad del suero del paciente para
lisar una suspensión de eritrocitos cubiertos con anticuerpos.
- Esta lisis, mediada por el C’ se denomina inmuno hemólisis y refleja la integridad funcional de los
componentes del sistema.
- Si existiera un déficit, no se activaría correctamente y habría ausencia de lisis, que se observa a
simple vista o por espectrofotometría.
- Hemólisis menores de 50% indican deficiencia del complemento, pero no permite determinar qué
componente es el que está deficitario.
- SIGNIFICADO CLÍNICO
Las pruebas no treponémicas son aquellas que no determinan anticuerpos específicos contra T.
pallidum, en su lugar detectan anticuerpos contra antígenos generados comúnmente por los tejidos
dañados por este microorganismo. Las pruebas treponémicas, son las que detectan anticuerpos IgG
e IgM específicos contra T. pallidum, gracias a que utilizan antígenos de la membrana externa del
protozoo y antígenos recombinantes
La VDRL (prueba de laboratorio para enfermedades venéreas) y RPR (reagina plasmática rápida),
son pruebas clasificadas como no treponémicas, las cuales detectarán la presencia de la reagina
que se unirá a desechos originados por la infección dada por esta bacteria. Por otro lado, las cuales
se detectarán anticuerpos que se unirán específicamente a los epítopos de la bacteria. Pruebas
Treponémicas como ELISA Ig G, TPHA, FTA-ABS 200 y Captia syphilis.
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