UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
CTEDRA DE TECNICAS HISTOLOGICAS
DOCENTE: LIC. IVN PEAFIEL
GRUPO N1
INTEGRANTES:
Evelyn Nogales
Kely Gmez
Evelyn Quispe
SEMESTRE:
TERCERO

TEMA: BIOSEGURIDAD; REGLAS NORMAS Y AGENTES DE RIESGOS EN EL

LABORATORIO DE ANATOMIA PATOLOGICA
FUNDAMENTACIN TERICA:

La bioseguridad se define como el conjunto de medidas destinadas a mantener el control de

factores de riesgo por exposicin a agentes biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la
prevencin de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos
procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de estudiantes, docentes, as como de
personal que labora en las diferente reas que implica la manipulacin de agentes patgenos.
En el laboratorio de anatoma patolgica se realizan exmenes de biopsias, citologas

ginecolgicas aplicando distintos mtodos de diagnstico, lo que implica la utilizacin de una

gran cantidad de compuestos qumicos de alta toxicidad, carcinognicos, teratognicos,
corrosivos, irritantes, mutgenos y que posteriormente deben ser eliminados . Por esta razn
es necesario mantener un nivel de cuidado permanente dentro del laboratorio, comenzando por
el personal profesional que est dedicado a desarrollar este tipo de trabajos, asi como tambin
por los auxiliares de servicio. Pero no solamente se debe tener cuidado al trabajar con estos
compuestos peligrosos, sino tambin en su almacenamiento y posterior eliminacin, ya que son
altamente nocivos en el ser humano y el medio ambiente.
Principios de Bioseguridad
El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar materiales
infecciosos en el medio ambiente del laboratorio donde son manipulados o conservados.
El objetivo de la contencin es reducir o eliminar la exposicin de quienes trabajan en
laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes potencialmente
peligrosos.
La contencin primaria, proteccin del personal y del medio ambiente inmediato del
laboratorio de la exposicin a agentes infecciosos, es provista tanto mediante buenas tcnicas
microbiolgicas como a travs del uso de equipos de seguridad adecuados. El uso de vacunas
puede brindar un mayor nivel de proteccin del personal.
La contencin secundaria, proteccin del medio ambiente externo a

laboratorio de la

exposicin a materiales infecciosos, se logra a travs de una combinacin del diseo de la

instalacin y prcticas operativas. Por lo tanto, los tres elementos de contencin incluyen
prcticas y tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseo de la instalacin.

CLASIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS INFECCIOSOS POR GRUPOS

DE RIESGO
Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo)
Nivel de Bioseguridad 1.- Las prcticas, los equipos de seguridad, el diseo y la construccin
de la instalacin del Nivel de Bioseguridad 1 son adecuados para laboratorios destinados a la
educacin o capacitacin secundaria o universitaria, y para otros laboratorios en los cuales se
trabaja con cepas caracterizadas de microorganismos viables que no se conocen como
generadores sistemticos de enfermedades en humanos adultos sanos.

Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)

Nivel de Bioseguridad 2.- Las prcticas, los equipos, el diseo y la construccin de

instalaciones del Nivel de Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios educativos, de
diagnstico, clnicos u otros laboratorios donde se trabaja con un amplio espectro de agentes
de riesgo moderado que se encuentran presentes en la comunidad y que estn asociados con
enfermedad humana de variada gravedad.
Con buenas tcnicas microbiolgicas, estos agentes se pueden utilizar en forma segura en
actividades realizadas en una mesa de trabajo, siempre que el potencial de que se produzcan
salpicaduras o aerosoles sea bajo.

Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)

Nivel de Bioseguridad 3.- Las prcticas, equipos de seguridad y el diseo y la construccin
de las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a instalaciones clnicas, de
produccin, investigacin, educacin o diagnstico, donde se trabaja con agentes exticos con
potencial de transmisin respiratoria, y que pueden provocar una infeccin grave y
potencialmente letal. Mycobacterium tuberculosis, Neisseria Meningitidis, Virus Brucellas,
Virus de la encefalitis de St. Louis, Coxiella burnetii.
Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes estn asociados a la auto
inoculacin, ingestin y exposicin a aerosoles infecciosos.

Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)

Nivel de Bioseguridad 4.- Las prcticas, equipos de seguridad, diseo y la construccin de
instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o
txicos que representan un alto riesgo individual de enfermedades que ponen en peligro la vida,
que pueden transmitirse a travs de aerosoles y para las cuales no existen vacunas o terapias
disponibles.

REGLAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD EN UN LABORATORIO

Mantener el lugar de trabajo en ptimas condiciones de higiene y aseo
No es permitido fumar en el sitio de trabajo.
Debern ser utilizadas las cocinetas designadas por el hospital para la preparacin y el
consumo de alimentos, no es permitido la preparacin y consumo de alimentos en las
reas asistenciales y administrativas.
No guardar alimentos en las neveras ni en los equipos de refrigeracin de sustancias
contaminantes o qumicos.

 Las condiciones de temperatura, iluminacin y ventilacin de los sitios de trabajo deben

ser confortables.
Maneje todo paciente como potencialmente infectado.
Las normas universales deben aplicarse con todos los pacientes independientemente del
diagnstico, por lo que se hace innecesario la clasificacin especfica de sangre y otros
lquidos corporales como infectada o no infectada.
Lvese cuidadosamente las manos antes y despus de cada procedimiento e igualmente
si se tiene contacto con material patgeno.
Utilice en forma sistemtica guantes plsticos o de ltex en procedimientos que
conlleven manipulacin de elementos biolgicos y cuando maneje instrumental o
equipo contaminado en la atencin de pacientes.
Hacer lavado previo antes de quitrselos y al terminar el procedimiento.
Utilice un par de guantes crudos por paciente.
Abstngase de tocar con las manos enguantadas alguna parte de su cuerpo y de
manipular objetos diferentes a los requeridos durante el procedimiento.
Emplee mascarilla y protectores oculares durante procedimientos que puedan generar
salpicaduras o gotitas aerosoles de sangre u otros lquidos corporales.
Use delantal plstico en aquellos procedimientos en que se esperen salpicaduras,
aerosoles o derrames importantes de sangre u otros lquidos orgnicos.
Evite deambular con los elementos de proteccin personal fuera de su rea de trabajo.

Mantenga sus elementos de proteccin personal en ptimas condiciones de aseo, en

un lugar seguro y de fcil acceso.

Utilice equipos de reanimacin mecnica, para evitar el procedimiento boca-boca.

Evite la atencin directa de pacientes si usted presenta lesiones exudativas o dermatitis
serosas, hasta tanto stas hayan desaparecido.
Si presenta alguna herida, por pequea que sea, cbrala con esparadrapo o curitas.
Mantenga actualizado su esquema de vacunacin contra Hepatitis B.
Las mujeres embarazadas que trabajan en ambientes hospitalarios expuestas a factor de
Riesgo Biolgico de transmisin parenteral debern ser muy estrictas en el
cumplimiento de las precauciones universales y, cuando el caso lo amerite, se deben
reubicar en reas de menor riesgo.
Aplique en todo procedimiento asistencial las normas de asepsia necesarias.
Utilice las tcnicas correctas en la realizacin de todo procedimiento.

 Maneje con estricta precaucin los elementos cortopunzantes y deschelos en los

guardianes ubicados en cada servicio.
Evite desenfundar manualmente la aguja de la jeringa.
Deseche completo.
No cambie elementos cortopunzantes de un recipiente a otro.
Abstngase de doblar o partir manualmente la hoja de bistur, cuchillas, agujas o
cualquier otro material cortopunzante.
Evite reutilizar el material contaminado como agujas, jeringas y hojas de bistur.
Todo equipo que requiera reparacin tcnica debe ser llevado a mantenimiento, previa
desinfeccin y limpieza por parte del personal encargado del mismo.
El personal del rea de mantenimiento debe cumplir las normas universales de
prevencin y control del factor de riesgo Biolgico Realice desinfeccin y limpieza a
las superficies, elementos, equipos de trabajo, al final de cada procedimiento y al
finalizar la jornada de acuerdo a el proceso descrito en el manual de limpieza y
desinfeccin.
En caso de derrame o contaminacin accidental de sangre u otros lquidos corporales
sobre superficies de trabajo. Cubra con papel u otro material absorbente; luego vierta
hipoclorito de sodio a 5000 partes por milln sobre el mismo y sobre la superficie
circundante, dejando actuar durante 30 minutos; despus limpie nuevamente la
superficie con desinfectante a la misma concentracin y realice limpieza con agua y
jabn.
El personal encargado de realizar dicho procedimiento debe utilizar guantes, mascarilla
y bata.
En caso de ruptura del material de vidrio contaminado con sangre u otro lquido
corporal los vidrios se deben recoger con escoba y recogedor; nunca con las manos
Los recipientes para transporte de muestras deben ser de material irrompible y cierre
hermtico.
Debe tener preferiblemente el tapn de rosca Manipule, transporte y enve las muestras
disponindolas en recipientes seguros, con tapa y debidamente rotuladas, empleando
gradillas limpias para su transporte. Las gradillas a su vez se transportarn en
recipientes hermticos de plstico o acrlicos que detengan fugas o derrames
accidentales.
Adems, deben ser fcilmente lavables.

 En caso de contaminacin externa accidental del recipiente, ste debe lavarse con
hipoclorito de sodio a 1000 partes por milln y secarse.
En las reas de alto riesgo biolgico el lavamos debe permitir accionamiento con el pi,
la rodilla o el codo.

Restrinja el ingreso a las reas de alto riesgo biolgico al personal no autorizado, al

que no utilice los elementos de proteccin personal necesarios y a los nios.

La ropa contaminada con sangre, lquidos corporales u otro material orgnico debe ser
enviado a la lavandera en bolsa plstica roja.

Disponga el material patgeno en las bolsas de color rojo, rotulndolas con el smbolo
de riesgo biolgico

En caso de accidente de trabajo con material corto punzante haga el autoreporte

inmediato del presunto accidente de trabajo.
Los trabajadores sometidos a tratamiento con inmunosupresores no deben trabajar en
reas de alto riesgo biolgico (HOSPITAL MAURICIO HEYERMANN, 2011)

NORMAS DE BIOSEGURIDAD
ANATOMIA PATOLOGICA

EN

UN

LABORATORIO

DE

Maneje todo tejido o vscera como potencialmente infectado.

Utilice bata, delantal de caucho grueso, doble guante de goma, monogafas, mascarilla
cuando realice procedimientos con vsceras o tejidos.
Todas las superficies y herramientas de trabajo, como sierras, cinceles, tijeras o
cuchillos deben colocarse en una solucin de hipoclorito de sodio a una concentracin
de 5000 ppm durante 20 minutos, luego lavarse con agua y jabn y esterilizarse.
Coloque el material anatomo-patolgico a desechar (tejidos, biopsias, etc.) en bolsa
plstica roja, rotulndola como Riesgo Biolgico - Material Anatomopatolgico,
sellarla y entregarla al personal del Aseo para su disposicin final.
El material contaminado (como guantes, bolsas, frascos) debe ser depositado en bolsa
roja separado del material anatomopatolgico.
Descontamine las superficies de trabajo, de acuerdo a los procedimientos descritos en
el manual de limpieza y desinfeccin. (COVE, 2003)

AGENTES DE RIESGO EN EL LABORATORIO GENERAL DE

ANATOMA PATOLGICA

En los Servicios de Anatoma Patolgica podemos destacar los riesgos ms frecuentes y

evidentes como son: los riesgos biolgicos de contagio de enfermedades infecciosas, riesgo
qumico por manejo de sustancias peligrosas. Vamos a revisar tambin algunos aspectos de los
riesgos fsicos, y psicosociales.
Para calificar los riesgos de deben contemplar dos variables:

1. La probabilidad de que se produzca el dao.

2. La gravedad del dao producido.

Podemos clasificar los riesgos en cuatro grupos principales:

1. Derivados de las caractersticas de los locales, instalaciones y equipos,
2. Derivados de los agentes fsicos, qumicos y biolgicos,
3. Derivados de la carga de trabajo, fsica y mental,
4. Derivados de la organizacin del trabajo

RIESGOS

BIOLGICOS

EN

LAS

REAS

DE

ANATOMA

PATOLGICA
En sta rea existen riesgos biolgicos determinados por:
1. La presencia de objetos punzocortantes, como bistures, sierra de hueso, pinzas, tijeras;
agujas los cuales pueden originar heridas, salpicaduras y aerosoles.
Estos riesgos se pueden producir durante la evisceracin y diseccin en la realizacin de las
necropsias.
2. La manipulacin de diferentes rganos, tejidos y fluidos potencialmente contaminados con
agentes biolgicos de diferentes grupos de riesgos.
Los riesgos para los trabajadores expuestos son la posibilidad de adquirir diferentes infecciones
como: tuberculosis, hepatitis B, C, el Virus de la Inmunodeficiencia Humana, encefalopata
espongiforme, rabia, fiebre amarilla, difteria. Se report que un 10% de los patlogos padecen
tuberculosis.

ACCIDENTE DE TRABAJO CON RIESGO BIOLGICO

Los accidentes con riesgo biolgico deben ser declarados en el Servicio de Prevencin para su
registro.
En funcin del agente y del mecanismo del accidente podemos distinguir:

1. Accidente por agente de transmisin sangunea.

Es el contacto con la sangre o mucosas del trabajador con sangre o fluidos contaminados a
travs de pinchazo, corte o salpicadura.
Hepatitis B: En la mayor parte de casos se trata de una infeccin subclnica. Se puede cronificar
en un 35% de los adultos. Los principales reservorios son pacientes infectados por el virus y
tiene gran poder infectivo. La va de transmisin en el medio laboral es la parenteral por piel a
travs de cortes o heridas con exposicin a sangre contaminada.

2. Accidente por agentes de transmisin area.

Exposicin a agentes biolgicos cuya va de transmisin es area, como consecuencia del
contacto con pacientes con enfermedad aguda.
Tuberculosis es la infeccin de mayor prevalencia en el mundo y contina siendo un problema
grave en la salud pblica. La va de transmisin es la area por gotas de menos de 5 micras
portadoras de bacilos.

3. Agentes Qumicos
Exposicin a agentes qumicos se entiende por la presencia de agentes en el ambiente en
cantidad suficiente para causar dao en la salud. La correcta manipulacin uso, almacenaje y
eliminacin evitar los riesgos en gran medida. Hablamos de agente qumico todo elemento o
compuesto qumico utilizado en la actividad laboral. Un agente qumico es peligroso si
representa un riesgo para la seguridad y salud por sus propiedades fisicoqumicas, qumicas o
toxicolgicas.
Los agentes qumicos se clasifican segn las propiedades y los efectos sobre la salud.

Segn sus propiedades fsico-qumicas: explosivos, comburentes, extremadamente

inflamables, fcilmente inflamables, inflamables.

Segn sus propiedades toxicolgicas: txico, muy txico, nocivo, corrosivo, irritantes
y sensibilizantes.

Segn sus efectos sobre la salud: carcinognicos, mutagnicos, txicos para la

reproduccin

segn sus efectos sobre el medio ambiente: peligroso para el medio ambiente.

AGENTES QUIMICOS ESPECIFICOS

Formol: El formol es una disolucin de formaldehido en agua. El formaldehido es un
gas incoloro de olor sofocante, muy soluble en agua.

Se utiliza en una disolucin al 10%. Por ser el formol un gas diluido en agua, se evapora
fcilmente desde las disoluciones que lo contienen pasando al ambiente. Riesgos para la
salud. El formaldehido tiene un VLA-EC de 0,3 ppm. A bajas concentraciones en el
ambiente, provoca irritacin ocular, del tracto respiratorio y de la piel. La inhalacin de
formaldehido a altas concentraciones provoca severa irritacin del tracto respiratorio e
incluso puede provocar la muerte.

Glutaraldehido: Es un lquido incoloro, poco voltil y soluble en agua. Se utiliza

diluido al 2% como fijador para las muestras de microscopia electrnica.
Riesgos:
Sensibilizacin por inhalacin y por contacto.
En bajas concentraciones puede producir irritacin de los ojos y va area superior.

Ltex: Tambin llamado caucho natural es un producto vegetal. Qumicamente es un

polmero del isopreno. El ltex est presente en multitud de productos como guantes y
sondas, estos pueden producir sensibilizacin por contacto o por inhalacin.
OTROS RIESGOS
No podemos olvidar que en el rea de laboratorio de Anatoma Patolgica el personal conlleva
muchas horas sentados mirando al microscopio y alternando con trabajo con pantallas de
visualizacin. En ambos tipos de actividad compartimos riesgos, por la postura de sedestacin,
utilizacin de las manos con movimientos repetitivos, por la utilizacin de la visin intermedia.
RIESGOS PARA LA VISTA
Modificacin funcional de carcter reversible debido a un exceso e requerimientos de los
reflejos pupilares y de acomodacin-convergencia. Los sntomas de la fatiga visual son:
a. Molestias oculares: sensacin de sentir los ojos, pesadez palpebral, picor, quemazn,
lagrimeo, aumento de parpadeo, ojos secos.
b. Trastornos visuales: borrosidad, dificultad para enfocar, fotofobia, astenopia acomodativa o
de convergencia.
c. Trastornos extraoculares: cefaleas, vrtigos, ansiedad, molestias en la nuca, adopcin de una
postura incorrecta.

RIESGOS PSICOSOCIALES

Las interacciones entre el trabajo, su medio ambiente, y las condiciones de su organizacin por
un aparte y por otra las capacidades del trabajo sus necesidades, cultura y experiencia todo lo
cual, pueden influir en la salud, en el rendimiento y en la satisfaccin en el trabajo.
El estrs en el trabajo es un conjunto de reacciones emocionales, cognitivas, fisiolgicas y del
comportamiento a ciertos aspectos adversos o nocivos del contenido, la organizacin o el
entorno de trabajo.

BIBLIOGRAFA
COVE. (2003). MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS DE BIOSEGURIDAD. Recuperado el 17 de
04 de 2016, de MANUAL DE NORMAS Y PROCEDIMIENTOS DE BIOSEGURIDAD:
http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd49/gc-bioseguridad.pdf
HOSPITAL MAURICIO HEYERMANN. (Mayo de 2011). MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE
RESIDUOS DE ANATOMIA PATOLOGICA DEL HOSPITAL DE ANGOL. Recuperado el 19 de 04 de 2016,
de MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE RESIDUOS DE ANATOMIA PATOLOGICA DEL HOSPITAL
DE ANGOL: http://www.hospitalangol.cl/documentos/ACREDITACION/9.%20SERVICIOS%20DE%20APOYO%20DIAGNOSTICO%20O%20TERAPEUTICO/SERVICIO%20DE%20AN
ATOMIA%20PATOLOGICA/APA%201.4/MANUAL_DE_BIOSEGURIDAD_%20Y_%20MANEJO_%20DE_%
20RESIDUOS.pdf

https://www.seap.es/c/document_library/get_file?uuid=456a8ebc-8bb6-4f46-b8d0c731bb6659a0&groupId=10157
http://www.ilustrados.com/tema/12907/riesgos-biologicos-areas-anatomia-patologicamorgue.html

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
TERCER SEMESTRES

TEMA:
MANUAL DE BIOSEGURIDAD
NORMATIVAS DE SALUD DEL ECUADOR SOBRE EL MANEJO DE DESECHOS
HOSPITALARIOS PICTOGRAMAS DE BIOSEGURIDAD
INTEGRANTES:
DIAZ QUINLLIN DIEGO FERNANDO
NAVARRETE LLAMUCA DAYANARA IVONNE
PAREDES PARCO BYRON PATRICIO
UVIDIA CHUGCHILAN MARITZA LORENA

GRUPO. 3
DOCENTE
Lic Ivn Peafiel

PERIODO ACADMICO
ABRIL - AGOSTO 2016
MANUAL DE BIOSEGURIDAD

NORMATIVAS DEL MINISTERIO DE SALUD DEL ECUADOR SOBRE EL

MANEJO DE DESECHOS HOSPITALARIOS
Desechos Hospitalarios
Son los desechos ms significativos que se generan en los establecimientos de salud, que segn
est definido en el establecimiento para el manejo Manejo de los Desechos Infecciosos para
la Red de Servicios de Salud en el Ecuador, publicada en el rgimen oficial N 338 del 10 de
Diciembre del 2010, son aquellos que contienen grmenes patgenos que implica un riesgo
inmediato o potencial para la salud humana y para el ambiente
REGISTRO OFICIAL
ADMINISTRACIN DEL SEOR RAFAEL CORREA DELGADO
PRESIDENTE DE LA REPBLICA DEL ECUADOR
VIERNES 10 DE DICIEMBRE DEL 2010 R.O. 388
FUNCIN EJECUTIVA
ACUERDO:
MINISTERIO DE SALUD PBLICA:
00000681 REGLAMENTO PARA EL MANEJO ADECUADO DE LOS DESECHOS
INFECCIOSOS GENERADOS EN LAS INSTITUCIONES DE SALUD EN EL
ECUADOR
N 00000681 El seor ministro de salud pblica considerando, DISPONE:
Art. 14.- Se reconoce el derecho de la poblacin a vivir en un ambiente sano y ecolgicamente
equilibrado, que garantice la sostenibilidad y el buen vivir, sumak kawsay;
Art. 15.- El Estado promover, en el sector pblico y privado, el uso de Tecnologas
ambientalmente limpias y de energas alternativas no contaminantes y de bajo impacto. La
soberana energtica no se alcanzar en detrimento de la soberana alimentaria, ni afectar el
derecho al agua;
Art. 32.- La Salud es un derecho que garantiza el Estado, cuya realizacin se vincula al
ejercicio de otros derechos, entre ellos el derecho al agua, la alimentacin, la educacin, la

cultura fsica, el trabajo, la seguridad social, los ambientes sanos y otros que sustentan el buen
vivir;
Que la Ley Orgnica de Salud, manda:
Art.6.- Es responsabilidad del Ministerio de Salud Pblica:
2.- Ejercer la rectora del Sistema Nacional de Salud.
13.- Regular, vigilar y tomar las medidas destinadas a proteger la salud humana ante los riesgos
y daos que pueden provocar las condiciones del ambiente.
14.- Regular, vigilar y controlar la aplicacin de las normas de bioseguridad, en coordinacin
con otros organismos competentes.
16.- Regular y vigilar, en coordinacin con otros organismos competentes, las normas de
seguridad y condiciones ambientales en las que desarrollan sus actividades los trabajadores,
para la prevencin y control de las enfermedades ocupacionales y reducir al mnimo los riesgos
y accidentes del trabajo.
Art. 97.- La autoridad sanitaria nacional dictar las normas para el manejo de todo tipo de
desechos y residuos que afecten la salud humana; normas que sern de cumplimiento
obligatorio para las personas naturales y jurdicas
Art. 100.- La recoleccin, transporte, tratamiento y disposicin final de desechos es
responsabilidad de los municipios que la realizarn de acuerdo con las leyes, reglamentos y
ordenanzas que se dicten para el efecto, con observancia de las normas de bioseguridad y
control determinadas por la autoridad sanitaria nacional. El Estado entregar los recursos
necesarios para el cumplimiento de lo dispuesto en este artculo;
Que; a travs del Acuerdo Ministerial N 001005 publicado en el Registro Oficial N 106 de
10 de enero de 1997, se expidi el Reglamento para el Manejo Adecuado de los Desechos
Infecciosos Generados en las Instituciones de Salud en el Ecuador;
Qu; mediante memorando N SSP-SA-11-166- 2010, el Director de Control y Mejoramiento
en Salud Pblica, solicita la elaboracin del presente Acuerdo Ministerial, y;
EN EJERCICIO DE LAS ATRIBUCIONES CONCEDIDAS POR LOS ARTCULOS
151 Y 154 DE LA CONSTITUCIN DE LA REPBLICA DEL ECUADOR Y EL ART.

17 DEL ESTATUTO DEL RGIMEN JURDICO Y ADMINISTRATIVO DE LA

FUNCIN EJECUTIVA.

ACUERDA
EXPEDIR EL REGLAMENTO SUSTITUTIVO AL REGLAMENTO PARA EL MANEJO
ADECUADO

DE

LOS

DESECHOS

INFECCIOSOS

GENERADOS

EN

LAS

INSTITUCIONES DE SALUD EN EL ECUADOR.

TTULO I DEL MANEJO INTERNO
CAPTULO I DEL MBITO DE APLICACIN
Art.1.- El presente Reglamento se aplicar en todos los establecimientos del Sector Salud en
todo el pas como: hospitales clnicas, centros de salud, subcentros de salud, puestos de salud,
policlnicos, unidades mviles, consultorios mdicos y odontolgicos, laboratorios clnicos, de
patologa y de experimentacin, locales que trabajan con radiaciones ionizantes, morgue,
clnicas veterinarias, centros de esttica y cualquier actividad que genere desechos infecciosos,
corto punzantes y especiales.
CAPTULO II DE LOS OBJETIVOS
Art.2.- Objetivo General.- Establecer lineamientos para la aplicacin de la Ley Orgnica de
Salud: Libro Segundo, CAPTULO II De los desechos comunes, infecciosos, especiales y de
las radiaciones ionizantes y no ionizantes
Art.3. Objetivos especficos.- Son objetivos especficos los siguientes:
a. Definir las responsabilidades de los establecimientos de salud pblicos y privados, en
relacin al manejo de los desechos comunes, infecciosos y especiales.
b. Establecer lineamientos para el correcto manejo interno y externo de los desechos comunes,
infecciosos y especiales.
c. Establecer el funcionamiento de los Comits de Manejo de Desechos de los establecimientos
de salud, a nivel provincial, cantonal e institucional.
d. Establecer permanente coordinacin interinstitucional con entidades involucradas en la
gestin de los desechos en los establecimientos de salud.

CAPITULO III CLASIFICACION DE LOS DESECHOS

Art. 4. Para efectos del presente reglamento, los desechos producidos en los establecimientos
de Salud se clasifican en:
a. Desechos generales o comunes.
b. Desechos infecciosos.
c. Desechos especiales.
a.- Desechos generales o comunes. Son aquellos que no representan un riesgo adicional para la
salud humana, animal o el medio ambiente.
b.- Desechos infecciosos. Son aquellos que contienen grmenes patgenos que implican un
riesgo inmediato o potencial para la salud humana y para el ambiente.
Son desechos infecciosos los siguientes:
b.1 Cultivos de agentes infecciosos y desechos de produccin biolgica, vacunas vencidas o
inutilizadas, cajas de Petri, placas de frotis y todos los instrumentos usados para manipular,
mezclar o inocular microorganismos
b.2 Desechos anatomo-patolgicos: rganos, tejidos, partes corporales que han sido extrados
mediante ciruga, necropsia u otro procedimiento mdico,
b.3 Sangre, sus derivados e insumos usados para procedimientos de anlisis y administracin
de los mismos.
b.4 Fluidos corporales
b.5 Objetos corto punzantes que han sido utilizados en la atencin de seres humanos o animales;
en la investigacin, en laboratorios y administracin de frmacos.
b.6 Cadveres o partes anatmicas de animales provenientes de clnicas veterinarias o que han
estado expuestos a agentes infecciosos en laboratorios de experimentacin.
b.7 Todo material e insumos que han sido utilizados para procedimientos mdicos y que han
estado en contacto con fluidos corporales.
c.- Desechos especiales. Son aquellos que por sus caractersticas fsico-qumicas representan
riesgo para los seres humanos, animales o medio ambiente y son generados en los servicios
auxiliares de diagnstico y tratamiento; entre estos se encuentran:
c.1 Desechos qumicos peligrosos Desechos qumicos peligrosos con caractersticas txicas,
corrosivas, inflamables y/o explosivas.

c.2 Desechos radiactivos contienen uno o varios nucledos que emiten espontneamente
partculas o radiacin electromagntica o que se fusionan de forma espontnea y provienen de
laboratorios de anlisis qumico, radioterapia y radiologa.
c.3 Desechos farmacuticos: envases de frmacos de ms de 5 cm. y de lquidos y reactivos
que generen riesgo para la salud.
CAPTULO IV DE LA GENERACIN Y SEPARACIN
Art. 5.- Se establecen indicadores de generacin de los desechos infecciosos en la institucin
de salud de acuerdo a la complejidad de la misma: a. servicio de hospitalizacin: kilogramo
por cama y por da y por paciente. b. atencin ambulatoria: 250 a 350 gramos por consulta por
da y por paciente.
Art.6.- Todos los profesionales, tcnicos, auxiliares y personal de cada uno de los servicios
son responsables de la separacin y depsito de los desechos en los recipientes especficos.
Art.7.- Los desechos deben ser clasificados y separados en el mismo lugar de generacin
durante la prestacin de servicios al usuario.
Art.8.- Los objetos corto punzantes debern ser colocados en recipientes desechables a prueba
de perforaciones y fugas accidentales.
Art.9.- Los desechos lquidos o semilquidos especiales sern colocados en recipientes
resistentes plsticos y con tapa hermtica, para su posterior tratamiento en el lugar de
generacin.
Art.10.- Los desechos infecciosos y patolgicos sern colocados en recipientes plsticos de
color rojo con fundas plsticas de color rojo.
Art.11.- Los desechos especiales debern ser depositados en cajas de cartn ntegras, a
excepcin de desechos radiactivos y drogas citotxicas que sern almacenados en recipientes
especiales de acuerdo a la normas elaboradas por el organismo regulador vigente en el mbito
nacional.
Art.12.- Los desechos generales o comunes sern depositados en recipientes plsticos de color
negro con funda plstica de color negro.

Art.13.- Los residuos slidos de vidrio, papel, cartn, madera, plsticos y otros materiales
reciclables, no contaminados, sern empacados para su comercializacin y/o reutilizacin y
enviados al rea de almacenamiento final dentro de la institucin.
CAPTULO V DE LOS ALMACENAMIENTOS Y RECIPIENTES
Art.14 .De acuerdo al nivel de complejidad de la institucin de salud existirn los siguientes
sitios de almacenamiento:
a.- Almacenamiento de generacin: es el lugar en donde se efecta el procedimiento y
representa la primera fase del manejo de los desechos infecciosos, corto punzantes, especiales
y comunes.
b.- Almacenamiento intermedio: es el local en el que se realiza el acopio temporal,
distribuido estratgicamente en los pisos o unidades de servicio. (Rige para establecimientos
de ms de 50 camas de hospitalizacin). c.- Almacenamiento final: es el local que sirve de
acopio de todos los desechos generados en la institucin, accesible para el personal de servicios
generales o limpieza, municipales encargados de la recoleccin y para los vehculos de
recoleccin municipal.
Art.15.- La capacidad de los locales intermedios y finales, ser establecida por la institucin
generadora de acuerdo a la produccin diaria de los diferentes tipos de desechos.
Art.16.- Para garantizar la proteccin e integridad de los recipientes que contienen los
diferentes tipos de desechos el acceso debe ser exclusivo para el personal mencionado en el art.
14 literales c
Art.17.- Los recipientes destinados para almacenamiento temporal de desechos radiactivos,
debern cumplir con la reglamentacin del organismo regulador vigente en el mbito nacional.
Art.18.- Los recipientes que contienen desechos comunes e infecciosos deben ser de material
plstico rgido, resistente y con paredes uniformes.
Art. 19.- Los recipientes y fundas deben ser de los siguientes colores: a.- Rojo. Para desechos
infecciosos b.- Negro. Para desechos comunes. c.- Verde. Para material orgnico d.- Gris. Para
material reciclable.

Art. 20.- Las fundas deben tener las siguientes caractersticas: a.- Espesor y resistencia: ms
de 35 micrmetros b.- Material: plstico biodegradable, opaco para impedir la visibilidad. c.Volumen: de acuerdo a la cantidad de desechos generada en el servicio en el transcurso de la
jornada laboral.
Art.21.- Los recipientes para objetos corto punzantes sern de plstico rgido, resistente y
opaco. La abertura de ingreso del recipiente no debe permitir la introduccin de las manos. Su
capacidad no debe exceder los 6 litros.
Art.22.- Los recipientes para los desechos especiales debern ser de cartn.
Art.23.- Los recipientes y fundas debern ser rotulados de acuerdo al tipo de desechos que
contienen, nombre del servicio que los genera, peso, fecha y nombre del responsable del
manejo de los desechos en el servicio.
CAPTULO VI DE LA RECOLECCIN Y TRANSPORTE INTERNO
Art.24.- .La recoleccin y transporte interno de los desechos, desde las fuentes de generacin
hasta los sitios de almacenamiento, deber realizarse mediante el uso de recipientes plsticos
con tapa, ruedas, de fcil manejo y no deben ser utilizados para otro fin.
Art.25.- Se implementarn programas de recoleccin y transporte interno que incluyan rutas,
frecuencias y horarios para no interferir con el transporte de alimentos, materiales y con el resto
de actividades de los servicios de salud.
Art.26.- Los desechos sern recolectados, debidamente clasificados y empacados para
transportarlos desde los sitios de generacin a los almacenamientos intermedio y final.
Art.27.- Las instituciones de salud establecern protocolos para recolectar materiales
potencialmente reciclables, considerando que no representen riesgo alguno para las personas
que los manipulen ni para los usuarios.
CAPTULO VII DEL TRATAMIENTO DE LOS DESECHOS INFECCIOSOS Y
ESPECIALES

Art.28.- El tratamiento de los desechos infecciosos consiste en la inactivacin de la carga

contaminante bacteriana y/o viral en la fuente generadora Art.
Art.29.- Los mtodos de tratamiento de los desechos infecciosos son: a.- Esterilizacin
(autoclave): Mediante la combinacin de calor y presin proporcionada por el vapor de agua,
en un tiempo determinado. b.- Desinfeccin qumica: Mediante el contacto de los desechos con
productos qumicos especficos.
Art.30.- Los residuos de alimentos de pacientes son considerados infecciosos especialmente
de servicios que manejan enfermedades infectocontagiosas los que se sometern a inactivacin
qumica mediante hipoclorito de sodio
CAPTULO VIII DEL TRATAMIENTO DE DESECHOS RADIACTIVOS,
IONIZANTES Y NO IONIZANTES.
Art.31.- Los desechos radiactivos ionizantes y no ionizantes debern ser sometidos a
tratamientos especficos segn las normas vigentes del organismo regulador en el pas, antes
de ser dispuestos en las celdas de seguridad y confinamiento en los rellenos sanitarios.

TTULO II DEL MANEJO EXTERNO

CAPTULO I DE LA RECOLECCIN DIFERENCIADA, TRATAMIENTO
EXTERNO Y DISPOSICIN FINAL
Art.32.- Es responsabilidad de los Municipios el manejo externo de los desechos infecciosos
de conformidad con lo establecido en el Art. 100 de la Ley Orgnica de Salud.
Art.33.- La recoleccin diferenciada es el proceso especial de entrega-recepcin de los
desechos infecciosos y especiales generados en los establecimientos de salud, con UN
VEHCULO EXCLUSIVO de caractersticas especiales y con personal capacitado para el
efecto.
Art.34.- El tratamiento externo se ejecutar fuera de la institucin de salud a travs de mtodos
aprobados por la ley de gestin ambiental.
Art.35.- La disposicin final es un mtodo de confinacin de los desechos infecciosos y
especiales generados en las instituciones de salud, que se realizar de acuerdo a lo establecido

en el presente reglamento. La disposicin final garantizar el confinamiento total de los

desechos infecciosos y especiales, para prevenir la contaminacin de los recursos naturales
agua, suelo y aire y los riesgos para la salud humana.
TTULO III DE LOS COMITS
CAPTULO I DE LOS COMITS DE MANEJO DE DESECHO
Art. 36. COMIT PROVINCIAL. En cada provincia se conformar un comit de manejo de
desechos constituido por un representante de los comits cantonales, presidido por el Director
Provincial de Salud.
Las funciones de los comits provinciales son:
a.- Analizar las normas establecidas por el Ministerio de Salud y vigilar el cumplimiento de las
mismas;
b.- Monitorear las actividades de los comits cantonales;
c.- Capacitar al personal de salud de la provincia en el manejo integral de los desechos
infecciosos y en normas de bioseguridad
d.- Analizar y almacenar la informacin entregada por los comits cantonales sobre el manejo
integral de los desechos infecciosos en las instituciones de salud pblica y privada;
e.- Presentar la informacin anual del cumplimiento de las actividades al Ministerio de Salud
Pblica.
Art. 37. COMITS CANTONALES. Se conformarn con los representantes de las siguientes
entidades: Autoridad sanitaria y ambiental; establecimientos de salud pblicos y privados,
municipios y de control.
Las funciones de los comits cantonales son:
a.- Capacitar al personal de salud y municipal responsable de la gestin integral de los desechos
infecciosos para el cumplimiento del presente Reglamento;
b.- Definir un plan de accin anual;
c.- Coordinar actividades con el Municipio para la gestin integral y ambientalmente saludable
de los desechos infecciosos generados en el cantn.
d.- Monitorear el cumplimiento de este reglamento en las instituciones de salud;
e.- Analizar y entregar la informacin al Comit Provincial y a los Municipios de sus
respectivos cantones.
Art. 38.- COMITS DE LOS ESTABLECIMIENTOS DE SALUD

En las instituciones de la red de salud nacional de acuerdo al nivel de atencin y complejidad

conforme normativa del Ministerio de Salud, se conformar el Comit Institucional de Manejo
de Desechos, cuyos integrantes sern el director o gerente, director o jefe administrativo y
financiero y los jefes de servicios.
En los establecimientos de atencin ambulatoria como consultorios mdicos, odontolgicos,
centros estticos, veterinarios y laboratorios pequeos, es decir aquellos de baja complejidad,
deber existir al menos un responsable del manejo de los desechos.
Las funciones de este Comit son:
a) Realizar el diagnstico anual de la situacin de los desechos y la aplicacin de las normas
de bioseguridad en la institucin
b) Elaborar protocolos para el manejo de los desechos basado en el presente Reglamento c)
Planificar, ejecutar y evaluar el programa de manejo de desechos, tomando en cuenta aspectos
organizativos y tcnicos y la situacin de los recursos humanos y materiales de la institucin
d) Coordinar con el Comit de salud ocupacional, para la investigacin de accidentes y
ausentismo laboral y desarrollando medidas de proteccin que incluyan normas, vacunas y
equipos;
e) Evaluar los ndices de infecciones nosocomiales, mediante la aplicacin de normas de
bioseguridad en los servicios hospitalarios.
f) Coordinar el desarrollo de programas permanentes de capacitacin para todo el personal; g)
Determinar las posibilidades tcnicas y las ventajas econmicas del reuso y reciclaje de
materiales;
h) Prevenir problemas ambientales y de salud ocasionados por una mala gestin integral de los
desechos infecciosos y desarrollar planes de contingencia para casos de contaminacin
ambiental.
Los establecimientos deben contar con un profesional responsable del manejo de los desechos
debidamente capacitado y autorizado por la Autoridad Sanitaria Nacional.

CAPTULO II
TTULO I DE LA DELEGACIN
Art. 39.- El Ministerio de Salud a travs de las Direcciones Provinciales DELEGA a los
miembros de los Comits Cantonales de Manejo de Desechos Hospitalarios, bajo el
cumplimiento de lo establecido en el presente Reglamento, para ejecutar las siguientes
acciones:

a. Asesorar y evaluar a los establecimientos de salud en el manejo de los desechos en todas sus
etapas.
b. Analizar los archivos de los Comits Institucionales de Desechos o documentacin requerida
durante el proceso de evaluacin, para verificar y calificar la Gestin del Comit. c. Asesorar
al prestador de servicios para la recoleccin, transporte y disposicin final diferenciados de los
desechos infecciosos.
d. Evaluar el proceso de transporte, recoleccin, tratamiento y disposicin final de los desechos
infecciosos de acuerdo al Ttulo II Captulo I, de este reglamento.
TTULO III DEL PROCESO DE EVALUACIN Y CONTROL
Art.40.- La evaluacin es la medicin del acatamiento y cumplimiento del presente reglamento
y su normativa en las instituciones del mbito de aplicacin.
1. Evaluacin intra-institucional: Evaluar en los diferentes servicios de la institucin, las fases
de manejo de desechos y que se realizar en tres etapas:
1.1 Evaluacin oficial: evaluacin obligatoria anual a todos los Establecimientos.
1.1.2 Reevaluacin: a los establecimientos que en la primera evaluacin no obtuvieron el
mnimo de calificacin requerido de 70%.
1.1.3 Evaluaciones peridicas de control: realizadas por el Comit de manejo de Desechos de
la institucin, del Comit Cantonal de manera aleatoria y por entidades de control acreditadas.
Art. 41. Evaluacin del manejo externo realizada por la Autoridad Sanitaria Nacional en
coordinacin con el prestador del servicio
1.1 Evaluacin de la recoleccin diferenciada.
1.2 Evaluacin del sistema de tratamiento autorizada por la Autoridad Sanitaria Nacional.
1.3 Evaluacin de la disposicin final (celda de seguridad o relleno sanitario)
Art.42.- Evaluacin del proceso de entrega- recepcin de desechos por las instituciones de
salud al servicio de recoleccin que se realizar anualmente durante la evaluacin oficial y
dentro de los controles peridicos

CAPTULO III
DEL NIVEL DE CUMPLIMIENTO

Art.43.- El proceso de evaluacin se lo realizar mediante los instrumentos oficiales del

Ministerio de Salud de acuerdo a la complejidad de la institucin y cuyos parmetros de
evaluacin estarn dados por:
CATEGORA DENOMINACIN PORCENTAJE
A Adecuado 90-100%
B Bueno 70-89%
C Regular 41-69% D Deficiente 0-40%
La calificacin final ser el resultado del promedio simple de las evaluaciones realizadas dentro
de un mismo perodo.
El nivel de cumplimiento mnimo que acredite a una institucin haber alcanzado un manejo
adecuado de los desechos infecciosos y especiales ser del 70%, para tramitar la renovacin de
su permiso de funcionamiento.
TTULO IV DE LA BIOSEGURIDAD
CAPTULO I
Art.44.- Es Obligatorio que todo el personal que manipula los desechos infecciosos,
cortopunzantes, especiales y comunes utilicen las medidas de proteccin de acuerdo a las
normas nacionales e internacionales.
Art.45.- Es responsabilidad de las instituciones de salud, realizar un chequeo mdico anual a
todos los trabajadores, profesionales y funcionarios que laboren en ellas para prevenir
patologas asociadas al manejo de los desechos infecciosos.
CAPTULO II DE LA ROTULACIN
Art.46.-.Es obligacin de la institucin de salud identificar y rotular en zona visible los
recipientes y fundas de acuerdo al tipo de desecho que contengan de acuerdo a lo norma para
aplicacin de este reglamento.

TTULO VI DE LAS PROHIBICIONES

CAPTULO I

Art. 47.- Con la finalidad de realizar un adecuado manejo de los desechos infecciosos se
prohbe:
a.- La utilizacin de Incineracin como mtodo de tratamiento de los desechos infecciosos,
considerando su potencial peligro al ambiente y a la salud de la comunidad b.- El reciclaje de
desechos biopeligrosos de los establecimientos de salud.
c.- La utilizacin de ductos internos para la evacuacin de desechos, en caso de existir, deben
clausurarse, ya que diseminan grmenes patgenos o sustancias txicas.
d.- Quemar cualquier tipo de desechos a cielo abierto dentro o fuera de las instalaciones del
establecimiento de salud.
e.- Mezclar los desechos comunes con los desechos infecciosos y peligrosos.
f.- La re-utilizacin de fundas que contengan desechos comunes, infecciosos y especiales,
debiendo desechrselas conjuntamente con los residuos que contengan (diariamente).
CAPTULO II
Art.48.- Toda institucin que presente un manejo adecuado de los desechos infecciosos, dando
cumplimiento al artculo 43 de este Reglamento, recibir una Certificacin que avale su
gestin, la misma que tendr validez de un ao, conforme Titulo III Capitulo III de este
Reglamento.
CAPTULO III DE LA RESPONSABILIDAD
Art.49.- Es responsabilidad de la institucin y de sus autoridades garantizar la sostenibilidad
del manejo de los desechos tanto en la fase interna como externa, mediante la asignacin
financiera dentro del presupuesto institucional.
Art.50. Los Directores de los establecimientos de salud, administradores, mdicos, enfermeras,
odontlogos, tecnlogos, farmacuticos, auxiliares de servicios, empleados de la
administracin y toda persona generadora de desechos infecciosos sern responsables del
correcto manejo y vigilancia del cumplimiento de la norma.
Art.51.- La responsabilidad de los establecimientos de salud, se inicia en la generacin y
termina en la entrega de los desechos infecciosos al vehculo recolector diferenciado del
Municipio de acuerdo a la Ley Orgnica, este reglamento y las ordenanzas municipales.
Art.52. Los Comits provinciales y cantonales son los responsables de asesorar, capacitar,
evaluar y monitorear el manejo interno y externo de los desechos infecciosos e informar el

cumplimiento de la normativa sobre el programa a la autoridad competente de acuerdo a los

niveles de jerarqua
CAPITULO IV DE LAS SANCIONES
Art.53. Todas las personas naturales o jurdicas que incumplan con lo establecido en el presente
Reglamento, sern sancionados conforme lo establece la Ley de Salud vigente.
DISPOSICIONES GENERALES PRIMERA.- Todos los establecimientos de salud
independientemente de su complejidad, para solicitar su permiso de funcionamiento debern
cumplir con un 70% o categora B en la calificacin del manejo adecuado de los desechos
infecciosos y especiales ms la certificacin de capacitacin a su personal actualizados.
Documentos que debern ser presentados en Vigilancia Sanitaria del cantn (distrito) de su
jurisdiccin.
SEGUNDA.- Los Municipios debern cumplir con los artculos 13, 14, 97, 98, 99, 100 102 y
103 de la Ley Orgnica de Salud
Art.54.- Dergase el Acuerdo Ministerial N 001005 publicado en el Registro Oficial N 106
de 10 de enero de 1997.
Art.-55 El presente Acuerdo Ministerial entrar en vigencia a partir de la fecha de publicacin
en el Registro Oficial, de su ejecucin encarguese a la Direccin de Control y Gestin en Salud
Pblica.

DADO EN EL DISTRITO METROPOLITANO DE QUITO AL 30 DE NOVIEMBRE

DEL 2010
2010 Dr. David Chiriboga A.
MINISTRO DE SALUD PBLICA

PICTOGRAMAS DE BIOSEGURIDAD

Un pictograma es una composicin grfica que consta de un smbolo y de otros elementos

grficos como un borde un dibujo o color de fondo que sirve para indicar una funcin
especfica. Permite que el individuo est bien informado sobre los productos que puedan causar
daos fsicos graves.
Es conveniente conocer los datos de peligrosidad de los reactivos y saber que los smbolos de
peligro normalizado son los siguientes: llama, llama sobre crculo, bomba explotando,
corrosin, botella de gas, calavera y tibias cruzadas, signo de exclamacin, medio ambiente y
peligro para la salud.
PELIGROSO PARA EL MEDIO AMBIENTE

Se lo representa con la letra N este smbolo se presenta en sustancias y preparados que pueden
ocasionar daos inmediatos para el medio ambiente; debido a su riesgo potencial no debes ser
liberado en las caeras, en el suelo o medio ambiente.

NOCIVO

Su smbolo es Xn; la inhalacin, la ingestin o la absorcin cutnea de estos qumicos pueden

provocar daos para la salud agudos o crnicos. Peligros para la reproduccin, peligro de
sensibilizacin por inhalacin, en clasificacin con R42.
Debe ser evitado el contacto con el cuerpo humano, as como la inhalacin de los vapores.
Ejemplos: etanal, diclorometano, cloruro de potasio, leja.
IRRITANTE

Representado con Xi, son sustancias y preparados no corrosivos que por contacto inmediato,
prolongado o repetido con la piel o mucosas puedan provocar una reaccin Inflamatoria debe
ser evitado el contacto directo con el cuerpo.
Ejemplos: cloruro de calcio, carbonato de sodio

MUY TXICO

Su smbolo es T+ son sustancias y preparados que por inhalacin, ingestin o penetracin

cutnea puedan entraar riesgos extremadamente graves agudos o crnicos e incluso la muerte;
se debe evitar todo el contacto con el cuerpo humano
Ejemplos: cianuro, trixido de arsnico, nicotina, mercurio, plomo, cadmio.
TXICO

Smbolo: T; Sustancias y preparaciones que, por inhalacin, ingestin o penetracin cutnea,

pueden implicar riesgos graves, agudos o crnicos a la salud; todo el contacto con el cuerpo
humano debe ser evitado.
Ejemplos: cloruro de bario, monxico de carbono, metanol.
EXTREMADAMENTE INFLAMABLE

Su Smbolo es F + y son lquidos con un punto de inflamacin inferior a 0C y un punto de

ebullicin de mximo de 35C. Gases y mezclas de gases, que a presin normal y a temperatura
usual son inflamables en el aire se debe evitar contacto con materiales ignitivos (aire, agua).
Ejemplos: hidrgeno, etino, ter etlico
INFLAMABLE

Clasificacin: Sustancias y preparaciones:

Lquidos con un punto de inflamacin inferior a 21C, pero que NO son altamente
inflamables.

Sustancias slidas y preparaciones que por accin breve de una fuente de inflamacin
pueden inflamarse fcilmente y luego pueden continuar quemndose permanecer
incandescentes, gaseosas, inflamables en contacto con el aire a presin normal, y que,
en contacto con el agua o el aire hmedo, desenvuelven gases fcilmente inflamables
en cantidades peligrosas; hay que evitar contacto con materiales ignitivos (aire, agua).

Ejemplos: benceno, etanol, acetona.

COMBURENTE

Representado con la letra O; son sustancias que tienen la capacidad de incendiar otras
sustancias, facilitando la combustin e impidiendo el combate del fuego. Como precaucin se
debe evitar su contacto con materiales combustibles.
Ejemplos: oxgeno, nitrato de potasio, perxido de hidrgeno
EXPLOSIVO

Su smbolo es E, son sustancias y preparaciones que pueden explotar bajo efecto de una llama
o que son ms sensibles a los choques o fricciones que el dinitrobenceno.
Precaucin: Evitar golpes, sacudidas, friccin, flamas o fuentes de calor.
Ejemplos: nitroglicerina
CORROSIVO

Se lo representa con la letra C, estos productos qumicos causan destruccin de tejidos vivos
y/o materiales inertes.
Precaucin: No inhalar y evitar el contacto con la piel, ojos y ropas.
Ejemplos: cido clorhdrico, cido fluorhdrico
CONTAMINANTE BIOLGICO

Representa todos aquellos materiales contaminados con microorganismos biolgicos que al

penetrar en el ser humano ocasionan enfermedades de tipo infeccioso o parasitario. Los
contaminantes biolgicos se clasifican en cuatro grupos. El grupo 1 incluye los contaminantes
biolgicos que resulta poco probable que causen enfermedad en el ser humano. El grupo 2
incluye los contaminantes biolgicos patgenos que puedan causar una enfermedad en el ser
humano; es poco probable que se propaguen a la colectividad y, generalmente, existe una
profilaxis o tratamiento eficaces. El grupo 3 comprende los contaminantes biolgicos
patgenos que puedan causar una enfermedad grave en el ser humano; existe el riesgo de que
se propaguen a la colectividad, pero generalmente, existe una profilaxis o tratamiento eficaces.
El grupo 4 comprende los contaminantes biolgicos patgenos que causan enfermedades
graves en el ser humano; existen muchas probabilidades de que se propaguen a la colectividad,
no existe, generalmente, una profilaxis o tratamiento eficaces.
RADIACTIVOS:

Son sustancias que emiten radiaciones nocivas para la salud, ejemplo de estas son el cobalto
60 empleado en radioterapia y el Yodo 131 utilizado en el tratamiento de cncer y patologas
de la glndula tiroidea.
RIESGO ELCTRICO

El riesgo elctrico es aquel con potencial de dao suficiente para producir fenmenos de
electrocucin y quemaduras. Es producido por instalaciones elctricas, partes de las mismas, y
cualquier dispositivo elctrico bajo tensin, con potencial de dao suficiente para producir
fenmenos de electrocucin y quemaduras.

SITIOS WEB:

Annimo. (21 de 07 de 2013). Pictogramas de seguridad. Recuperado el 20 de 04 de

2016, de http://www.pictogramasdeseguridad.com/pictogramas/
CALVIO, g. (11 de 03 de 2013). Bioseguridad. Recuperado el 20 de 04 de 2016, de
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/file.php/84/Unidad_1__Bioseguridad/Bioseguridad.pdf
Annimo. (30 de noviembre de 2010). Reglamento MSP. Recuperado el 20 de abril de
2016, de Reglamento MSP:
http://simce.ambiente.gob.ec/sites/default/files/documentos/Jackson/Control%20y%2
0mejoramiento%20de%20la%20salud%20p%C3%BAblica%20%20Salud%20Ambiental.pdf.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
TCNICAS HISTOLGICAS

TEMA:
CONTROL DE CALIDAD EN ANATOMA PATOLGICA

INTEGRANTES:
Carla Caiza
Cristian Romero
Estefania Pardo

GRUPO N 4
DOCENTE
LIC. IVAN PEAFIEL

ABRIL- AGOSTO 2016

CONTROL DE CALIDAD EN ANATOMA PATOLGICA

En la actualidad, ms que en otras pocas, el anlisis de los tejidos del cuerpo con propsitos
de diagnstico y terapia ha llegado a ser una parte integral de la prctica mdica. Los mdicos
confan cada vez ms en los diagnsticos histopatolgicos antes de prescribir intervenciones

quirrgicas o teraputicas definitivas para sus pacientes. No es exageracin decir que un buen
preparado histolgico (lmina), ya sea procesado por el mtodo de la parafina u obtenido por
congelacin (biopsia por congelacin), ha salvado la vida del paciente por permitir un
diagnstico histopatolgico certero. Sin tales procedimientos sera difcil para los patlogos
llegar a diagnsticos exactos; por esta razn, la responsabilidad del Laboratorio de
Procedimientos Histolgicos del Departamento de Patologa (DP) ha alcanzado marcada
importancia, el personal del laboratorio seguir mano a mano con el patlogo la toma de
decisiones cruciales, algunas de las cuales son inmediatas e irreversibles. Resultados errneos
pueden costar vidas, cualquier persona que trabaje en el laboratorio deber prepararse para
aceptar este tipo de responsabilidad con decisin y elegancia; tal preparacin incluye un deseo
de aceptar el reto acadmico y tcnico que se presenta en la produccin de preparados
histolgicos de buena calidad.
El laboratorio de Anatoma Patolgica es el responsable de recibir aquellas muestras
histolgicas susceptibles de ser analizadas para procesarlas y emitir un diagnstico preciso,
adems de proporcionar una serie de variables que constituirn factores pronsticos y
predictivos para el tratamiento de la enfermedad. Se calcula que entre un 60-80% del manejo
del paciente est basado en datos de laboratorio. Para el correcto funcionamiento de este
proceso es de vital importancia un estricto control de todo lo que se refiere a la etapa
preanaltica del mismo, a la etapa analtica y a la postanaltica.
La calidad puede referirse a diferentes aspectos de la actividad de un Laboratorio de
Procedimientos Histolgicos del DP: al producto (preparado histolgico), al proceso, a la
produccin o sistema de prestacin del servicio, o puede entenderse como una corriente de
pensamiento que impregna todo el laboratorio.

Concepto de Calidad en el Laboratorio de Procedimientos de Anatoma

Patolgica
El concepto de calidad ha evolucionado a lo largo de los aos y ha dado lugar a que tanto lo
referente a su funcin como a su mbito y objeto de control, hayan variado hasta nuestros das.
En la actualidad, la calidad se configura como un modelo de gestin y un estilo de direccin
implantado tambin en los Laboratorios de Procedimientos Histolgicos de los DP de
hospitales lderes.
Podramos decir que la calidad en el Laboratorio de Procedimientos Histolgicos del DP
consiste en una funcin directiva que se desarrolla a travs de cuatro procesos: planificacin,

organizacin, control y mejora del preparado histolgico, histoqumico e inmunohistoqumico

que satisfaga las necesidades del patlogo.
Sin embargo, tanto en el mbito general como en lo particular, existen algunos criterios
errneos acerca de la calidad y de su control que suponen un obstculo al necesario
entendimiento entre quienes la exigen y los que deben conseguirla.

Un Programa Total del Control de Calidad

Para obtener los mejores resultados posibles en los preparados histolgicos, un programa total
de control de calidad deber incluir distintos aspectos del funcionamiento adecuado del
Laboratorio de Procedimientos Histolgicos del Departamento de Patologa.
Un programa de este tipo tiene que cumplir con los siguientes principios importantes, que se
resumen a continuacin:
1.- Desarrollo de un manual de procedimientos.
2.- Recepcin adecuada de la muestra y de las solicitudes de estudio anatomopatolgico.
3.- Adquisicin de equipos, de productos qumicos y colorantes de calidad para el laboratorio.
4.- Mantenimiento de exactitud y precisin en todos los mtodos.
5.- Procedimientos para la deteccin de errores, tales como lminas patrn, lminas blanco y
sueros negativos en caso de mtodos inmunohistoqumicos.
6.- Decisiones a tomar cuando se presentan resultados fuera de control.
7.- Valoraciones externas.
8.- Mantenimiento preventivo de instrumentos y equipos.
9.- Programas de entrenamiento y actualizacin permanente para el personal del Laboratorio
de Procedimientos Histolgicos del DP.
10.-Documentacin de la ejecucin y resultados del programa de control de calidad.
Este plan de diez puntos puede aplicarse a todos los Laboratorios de Procedimientos
Histolgicos, independientemente de su importancia.

Desarrollo de un manual de Procedimientos

Uno de los documentos ms importantes para dirigir las actividades diarias en el laboratorio es
un manual actualizado de procedimientos. Todas las actividades del laboratorio se deben
consignar claramente en l, y debe estar al alcance de todos sus integrantes en todo momento
para cualquier consulta.

Todos los manuales de procedimientos deben proveer la siguiente informacin:

1.- Apellidos y nombres, direcciones y nmeros telefnicos del jefe del departamento de
patologa, del equipo de patlogos, de los tecnlogos mdicos, bilogos y de todos los
empleados.
2.- Organizacin general y funciones del personal del departamento de patologa.

Laboratorios

Tareas asignadas

Mtodos realizados

Procesamiento de:
Tec. histolgicas
Procedimiento

Biopsias

Hematoxilina

histolgicos

Histoqumica
- Reaccin de PAS

Eosina
Piezas quirrgicas

Tricrmico

de Col. de alcian blue

Masson
Material de autopsias

Impreg.

de Hierro coloidal

Gomori
Biopsias

por Col. de Verhoeef Col. metacromtica

congelacin

Col. de Gram
Col.

de

Col. de carmn de Best

Ziehl Reaccin de Feulgen

Nielsen

Col.

de

Sudan

Col. de Waysson Reaccin de Von Kossa

Impreg.

de Reaccin de Perls

Grocott
Col. de Wolbach
Inmunohistoqumica

Biopsias para estudio Anticuerpos ligados a enzimas Anticuerpos

con anticuerpos poli y ligados a fluorocromos
monoclonales

Citologa

Material de puncin

Coloracin de Papanicolau

Material de citologa Coloracin de Giemsa

exfoliativa
Lquidos orgnicos

Coloracin de Shorr
Citoqumica

Inmunocitoqumica

Tabla N 1.- Modelo Organizativo de la Distribucin de

Tareas del Departamento de Patologa del
Hospital de Apoyo.

EQUIPOS, PRODUCTOS QUMICOS Y COLORANTES DE CALIDAD

PARA EL LABORATORIO
Deben comprobarse todos los equipos e instrumentos antes de comprarlos, a pesar que las casas
comerciales sean de reconocido prestigio.
Todos los equipos utilizados en el laboratorio debern comprobarse peridicamente en relacin
con su funcionamiento adecuado.
Todos los productos qumicos debern cumplir con las especificaciones de la American
Chemical Society, y deben tener la fecha en que se recibieron en el Laboratorio de
Procedimientos Histolgicos y la fecha cuando se abrieron para su uso.
Se deben usar productos qumicos y colorantes de buena calidad en la preparacin de
soluciones colorantes, soluciones buffer y reactivos. stos, una vez preparados, deben ser
apropiadamente identificados, y las etiquetas deben contener la siguiente informacin:
a.- Nombre del reactivo o solucin colorante.
b.- Concentracin del reactivo o solucin colorante.
c.- Requerimiento de almacenamiento (medio ambiente o refrigeracin).
d.- Iniciales de la persona que prepar el reactivo o solucin colorante.
e.- Fecha de preparacin.
f.- Expectativa de duracin y fecha de expiracin.
g.- Peligros potenciales del reactivo o solucin colorante.
El agua usada en el laboratorio debe ser destilada para satisfacer los requerimientos sealados
en los mtodos histolgicos, histoqumicos e inmunohistoqumicos.
En cuanto a la preparacin de fijadores, tomaremos como ejemplo la solucin de formol al
10%. Es importante que el pH de la solucin de formol al 10% no caiga por debajo del valor
6,0. Esta cada se atribuye a la formacin de cido frmico y puede ser prevenida usando formol
neutro al 10% o formol tamponado. Cuando la solucin est por debajo del pH 6,0, el ADN y

ARN se preservan pobremente, las fibras de reticulina son parcialmente hidrolizadas y los
glucosaminoglicanos cidos se hacen ms solubles.
Deben registrarse los datos para preparar apropiadamente el formol neutro al 10% o el formol
tamponado. Se debe establecer definitivamente el volumen de formol comercial (37-40%), el
volumen de agua usada, as como los pesos de las sales amortiguadoras y el pH final.
En el caso de los reactivos, tomaremos como ejemplo el reactivo de Schiff, el cual debe ser
cuidadosamente preparado y reunir una serie de caractersticas que permitan confiar en los
resultados obtenidos. La base de este reactivo es el clorhidrato de p-rosanilina, que es un
componente de la fucsina bsica, la cual debe ser de la mejor calidad.
Dentro de las recomendaciones tenemos:
a.- Evitar la disolucin (ni an con agua destilada), ya que ello lleva como consecuencia la
ruptura del equilibrio inico del reactivo.
b.- Debe evitarse la prdida del anhdrido sulfuroso, por esta razn el reactivo se almacena en
frascos pequeos completamente llenos y hermticamente cerrados, conservandolos en
refrigeracin cuando no estn en uso.
c.- Evitar la aireacin excesiva al tener los frascos del reactivo destapados o agitndose
innecesariamente.
d.- Cuando el reactivo va a ser usado, debe sacarse con anticipacin del refrigerador para que
tome la temperatura del medio ambiente, debe evitarse la elevacin de la temperatura por
medios artificiales.
e.- La recoloracin espontnea o la presencia de precipitados en el reactivo son signos
suficientes para desecharlo.
f.- Si despus de la preparacin del reactivo, ste conserva un color rosado, esto es debido a
que la p-rosanilina usada no es de buena calidad.
g.- El reactivo de Schiff se prueba tomando una alcuota de l, al que se le adiciona unas gotas
de formol; se formar entonces una solucin de color rojo prpura.

Algunos Criterios Errneos sobre la Calidad

Aunque todo el mundo se declara partidario de la calidad, lo cierto es que la mayora de
nosotros sostenemos unos supuestos errneos acerca de ella, que ocasionan problemas entre

quienes exigen la calidad (en este caso el patlogo) y los que deben materializarla (en este caso,
el tecnlogo mdico):
Error 1 Creer que un preparado histolgico (lmina) con calidad es un producto de lujo.
Error 2 La calidad es intangible, y por lo tanto, no mensurable.
Error 3 La clase de trabajo no es diferente.
Error 4 Creer que existe la economa de la calidad.
Error 5 Todos los problemas son originados por los tecnlogos mdicos, bilogos, tcnicos o
auxiliares, del Laboratorio de Procedimientos Histolgicos.

CONTROL DE CALIDAD BAJO LA NORMA ISO: UNE 15189:2007

La norma ISO: UNE 15189 para la certificacin y la acreditacin de los laboratorios clnicos y
de microbiologa tan solo sera de aplicacin en la Anatoma Patolgica en aquellos los
procedimientos diagnsticos de patologa cuantitativa y frmaco-patologa, y aun as tendran
peculiaridades respecto al tipo de material de las muestras utilizadas por su carga gentica que
las convierte en biomuestras fuera del periodo asistencial de 5 aos.
A pesar de ellos algunos laboratorios han cursado su acreditacin por esta va. En las tablas III
y IV incluimos un listado de requisitos adaptados a un laboratorio de anatoma patolgica
moderno.
Especficamente se menciona que uno de los mecanismos que deben utilizarse para ello es el
entrenamiento, adecuado y en profundidad, en los aspectos tcnicos del personal que haga uso
de los mismos.
Como aspectos novedosos se incluyen: la calidad de las imgenes para el diagnstico a
distancia, o para la cuantificacin. Puesta a punto y control de los sistemas de trazabilidad de
la muestra (ver apartado 3). Introduccin y calibracin de las tcnicas automticas de
procesado, tincin, incluida inmunohistoqumica, escaneado automtico y archivo de
preparaciones, screening citolgico autom- tico, diagnstico sobre imagen digital. Adems de
los sistemas de reporte automtico de los informes con reconocimiento de voz, robotizacin de
los procedimientos y respuesta a la voz, solo-pathology, etc...
Cuando la metodologa utilizada todava no tiene estndares reconocidos , como ocurre con
muchos de los procedimientos en anatoma patolgica, debe utilizarse el principio de los
acuerdos entre usuarios, estableciendo claramente cules son los requerimientos de los mismos
y cual es la finalidad del testeo y la calibracin.

1. FASE PRE-ANALTICA
Procesos que comienzan cronolgicamente a partir de la peticin del mdico clnico e incluye
la peticin de los anlisis,la preparacin del paciente, la recogida de la muestra primaria y el
transporte hasta el interior del laboratorio. La etapa preanaltica incluye el envo de la muestra
al laboratorio, la identificacin de la misma con la correcta informacin de filiacin y clnica,
y la fijacin del espcimen o su procesado para otras pruebas que no requieran fijacin. y
terminan cuando comienza el procedimiento analitico.

Procedimientos Pre- Analticos

1. Procedimientos que se realizan fuera del laboratorio:
Solicitud por parte del clnico y hoja de peticin
Extraccin de la muestra por parte del patlogo.
Transporte de la muestra
2. Procedimientos que se realizan dentro del laboratorio
Recepcin, identificacin y registro de muestras
Distribucin de muestras
Procesos de preparacin de la muestra
Estudio macroscpico y tallado
La inclusin en parafina
La confeccin de los bloques
Corte en el microtomo, extensin, adhesin al portaobjetos.

2. FASE ANALTIA
La fase analtica integra los estudios intraoperatorios, el procesado y tallado macroscpico, la
elaboracin del bloque de parafina, secciones histolgicas y tincin de las mismas (ya sea con
tcnicas rutinarias, de inmunohistoqumica o moleculares), y su correcta interpretacin para
llegar a un diagnstico.

Procedimientos Analticos
Esta fase comienza con el manejo de las preparaciones sin tratar ni teir en el
laboratorio y concluye cuando estas han sido recubiertas con el cubreobjetos

3. FASE POST-ANALTICOS
La etapa postanaltica se elabora un informe que se remite al facultativo destinatario y
responsable del manejo del paciente, y se almacena la muestra en condiciones ptimas de
conservacin y de forma que su recuperacin para pruebas adicionales sea fcil.
El aseguramiento de la calidad en el laboratorio de Anatoma Patolgica consiste en evaluar el
cumplimiento en todos los pasos del anlisis, incluyendo las fases preanaltica, analtica y
postanaltica, para promover la excelencia en el resultado de la prctica mdica. Comprende el
control de calidad, que es un componente integral del aseguramiento de la calidad que incluye
los procesos y las tcnicas destinadas a detectar, reducir y corregir las deficiencias en el proceso
analtico, y la mejora de la calidad, que es la prctica continua de la evaluacin y el ajuste en
el rendimiento por medio de procedimientos estadsticos y cientficos validados.
El procedimiento analtico en el laboratorio de Anatoma Patolgica es un proceso complejo y
sometido a la accin de diversas variables, en el que el correcto aseguramiento de la calidad
del mismo garantiza la validez de los resultados que se proporcionan, contribuyendo a la
excelencia en el manejo teraputico del paciente.

Procedimientos Post-Analticos
Incluyen la observacin, interpretacin, informe y validacin de los resultados
La evaluacin de los controles positivos y negativos si los hubiere
La codificacin de los procesos y lesiones
El traspaso del informe al clnico solicitante
La gestin de posibles demoras o reclamaciones durante el proceso
El adecuado archivo de bloques, preparaciones, informes y material gentico si hubiese
sido extrado.

FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS QUE INTERVIENEN EN

LOS ESTUDIOS DE ANATOMA PATOLGICA
Es evidente que una buena prueba diagnstica es la que ofrece resultados positivos en enfermos
y negativos en sanos. Por lo tanto, las condiciones que deben ser exigidas a un test son:

 Validez: Es el grado en que un test mide lo que se supone que debe medir. La
sensibilidad y la especificidad de un test son medidas de su validez.
Reproductividad: Es la capacidad del test para ofrecer los mismos resultados cuando
se repite su aplicacin en circunstancias similares. La variabilidad biolgica del hecho
observado, la introducida por el propio observador y la derivada del propio test,
determinan su reproductividad.
Seguridad: La seguridad viene determinada por el valor predictivo de un resultado
positivo o negativo.

Cuando se estudia una muestra de pacientes, los datos obtenidos permiten clasificar a los
sujetos en cuatro grupos. El resultado de la prueba puede ser correcto (verdadero positivo y
verdadero negativo) o incorrecto (falso positivo y falso negativo). El anlisis de su validez
puede obtenerse calculando los valores de sensibilidad y especificidad.
Sensibilidad: Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo enfermo,
es decir la probabilidad de que para un sujeto enfermo se obtenga en la prueba un
resultado positivo.
Especificidad: Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo sano, es
decir, la probabilidad de que para un sujeto sano se obtenga un resultado negativo.

La seguridad de una prueba diagnstica. Valores predictivos.

Los conceptos de sensibilidad y especificidad permiten, por lo tanto, valorar la validez de una
prueba diagnstica. Sin embargo, carecen de utilidad en la prctica clnica. Tanto la
sensibilidad como la especificidad proporcionan informacin acerca de la probabilidad de
obtener un resultado concreto (positivo o negativo) en funcin de la verdadera condicin del
enfermo con respecto a la enfermedad.
-

Valor predictivo positivo: Es la probabilidad de padecer la enfermedad si se obtiene

un resultado positivo en el test. El valor predictivo positivo puede estimarse, por tanto,
a partir de la proporcin de pacientes con un resultado positivo en la prueba.

Valor predictivo negativo: Es la probabilidad de que un sujeto con un resultado

negativo en la prueba est realmente sano.

Falso Positivo: Ocurre cuando un profesional de Laboratorio de Anatoma Patolgica

comete un error en los resultados de una prueba. Esta persona concluye que un resultado es
positivo cuando en realidad no lo es. Generalmente se le pedir que vuelva hacerse ms
pruebas.
Cuando suceden estas cosas, provocan una serie de problemas, ya que si se recibe una noticia
de un resultado Falso Positivo, el paciente tiene que someterse a una serie de pruebas para as
reafirmar o eliminar que en realidad existe un cncer.

Falso Negativo: Es cuando una persona recibe un resultado negativo de una prueba, pero
en realidad est enferma.
En los falsos positivos, es necesario realizar pruebas diagnsticas, para confirmar o descartar
la existencia de cncer a personas que realmente estn sanas. En los falsos negativos se deja de
diagnosticar a una persona con cncer con el consiguiente riesgo de que dicho tumor progrese,
ya que no se le administra tratamiento.
Es fundamental ofrecer servicios de calidad elevada tanto de diagnstico, tratamiento y
atencin posterior a las personas cuyas pruebas den un resultado positivo.

LINKOGRAFIA:
http://www.supersalud.gob.cl/observatorio/575/articles-7297_recurso_1.pdf
http://apatologicaehistoria.ugr.es/pages/anatomia_patologica/pdf_cursos/fasepreanaliticajosea
neirosfernandez/!

http://www.ecancerlatinoamerica.org/modulo/diagnostico/que-significa-los-resultados-falsospositivos-y-falsos-negativos
http://www.fisterra.com/mbe/investiga/pruebas_diagnosticas/pruebas_diagnosticas2.pdf
http://www.patologia.es/volumen42/vol42-num2/pdf%20patologia%2042-2/42-02-02.pdf
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/anales/v59_n2/ccalidad.htm
BIBLIOGRAFA:
DAZ, N, Manual de Procedimientos en Anatoma Patolgica, DISPONIBLE EN:
http://www.netlab.com.ec/publicaciones/MANUAL-PROCEDIMIENTOS-ANATOMIAPATOLOGICA.pdf

ANNIMO,

Libro

Blanco

de

la

Anatoma

Patolgica

de

Espaa,

DISPONIBLE

EN:http://www.seap.es/documents/10157/37371/Suplemento+Libro+Blanco+de+Anatom%C3%ADa
+Patol%C3%B3gica+2011

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO
CTEDRA DE TCNICAS HISTOLGICAS
GRUPO N 5

TEMA:
Reconocimiento del rea fsica de un Laboratorio de Anatoma Patolgica
DOCENTE:

LIC. IVN PEAFIEL

INTEGRANTES:

IRENE LARA
MARA GUAMN
SANDY MORALES

NIVEL: TERCER SEMESTRE

PERIODO ACADMICO: ABRIL 2016 AGOSTO 2016
FECHA DE ENTREGA: XX DE ABRIL DEL 2016
Reconocimiento del rea fsica de un Laboratorio de Anatoma Patolgica
REA DE RECEPCIN DE MUESTRAS
Es el rea donde sern recibidas las muestras con sus respectivas solicitudes de estudio
histopatolgico, registradas e identificadas con el nmero interno correspondiente; y, adems,
ah deben ser entregados los informes finales de las muestras.
Deber contar con una mesa de trabajo (escritorio), un contenedor o rea especial para la
colocacin transitoria de las muestras, el material de papelera y cmputo necesarios

(impresora) para el registro de ingresos de las piezas y de informes finales entregados, adems
de un archivero para los informes finales (resultados) pendientes de entrega.
En quirfanos o en la consulta, se dispondr de recipientes de diferentes tamaos, plsticos con
tapa hermtica y fijador (formol buferado al 10%) cuando la pieza quirrgica requiere de
fotografas, esta debe preservarse en refrigeracin a 4C, para evitar de esta manera los cambios
histolgicos y no alterar los tejidos.

Comprobacin de datos: Consiste en comprobar que los datos del informe del paciente
y del envase donde viene la biopsia coinciden. El lquido fijador en el que habitualmente
vienen fijadas las biopsias es formol al 10%.

Registro de la muestra: Realizada por el personal administrativo, dndole un nmero

de identificacin al informe, que deber coincidir con el envase de la biopsia.

-Numeracin y registro de la muestra: Cuando las muestras llegan al laboratorio de Anatoma

Patolgica, estas son matriculadas, procedimiento que consiste en verificar y registrar (en
forma manual y/o en el sistema informtico si lo hubiere) la siguiente informacin:

Nmero de orden correspondiente.

Nombre del paciente.

Edad.

Gnero.

Nmero de cdula de identidad.

Nmero de afiliacin.

Nmero de historia clnica.

Servicio Mdico.

Datos de orientacin diagnstica.

Nombre y sello del mdico solicitante.

Fecha de recepcin de la muestra.

Examen transoperatorio, y

Observaciones, si las hubiere.

Los datos debern ser ingresados en el computador y en el libro de registro, y ser impresos por
duplicado en etiquetas -idealmente con cdigo de barras-, que se adhieren al formulario de
solicitud del examen y al recipiente de la muestra.
La numeracin respetar un orden secuencial. Un sistema que se recomienda es comenzar la
numeracin con 001 desde el 1 de enero, y aadir un guin seguido de los ltimos dgitos del
ao en curso.

Este nmero ser la identificacin para los bloques de parafina, laminillas, informes,
fotografas, archivo y almacenamiento de datos para todos los exmenes. Para el caso de
pruebas especiales se podrn anteponer las siguientes siglas:
H

Histoqumica

IQ

Inmunohistoqumica

ICQ

Inmunocitoqumica

IF

Inmunofluorescencia

ME

Microscopa Electrnica, o las siglas propias del laboratorio.

Modo de envo de muestra

Las muestras que se reciben en el Laboratorio de Anatoma - Patolgica, deben remitirse en
envases o recipientes de plstico de boca ancha y tapa a rosca o en bolsas especiales plsticas
con un sistema de cierre inviolable, en solucin fijadora (solucin de formol al 10%), la cual
debe ser aproximadamente 10 veces el volumen del material remitido a temperatura ambiente,
pudiendo conservarse de esta manera, por tiempo indefinido. Nunca se debe guardar en fro
(heladera +4C o freezer) el material que ya contiene formol, debido que el mismo congelado
forma cristales que alteran las estructuras hsticas impidiendo, de esta manera, el ulterior
estudio microscpico.

Los lquidos corporales (pleurales, pericrdicos, peritoneales), estos deben ser

remitidos antes de las 24hs en envases de plsticos, con tapa a rosca y conservados en
fro (heladera +4C) o bien con el agregado al material de alcohol 96 o formol a
temperatura ambiente.

Para el estudio de plancton, el mismo se puede llevar a cabo en muestras de sangre

obtenidas por puncin de las cavidades cardacas izquierdas, de la mdula sea y en el
agua del lugar del hecho, debiendo ser colocadas en envases limpios y secos. La
remisin del material se debe hacer respetando la cadena de fro (heladera +4C).

Los pelos deben ser remitidos en sobres o bolsas de papel a temperatura ambiente.

En lo que respecta a preparados histolgicos y tacos de parafina, deben ser remitidos

en cajas y embalados a temperatura ambiente. (VIVAR, 2010)

REA DE MACROSCOPA
Sitio en donde, al llegar la muestra codificada, se realiza el procesado de muestras e
intraoperatorias, incluyendo zonas diferenciadas.

Cuando se efecta la interpretacin de una lesin macroscpica, se debe eliminar la tendencia

subjetiva en la observacin, es decir, se debe ver el material que se estudia tal como es y no
como se lo quiere ver.
Para ello es necesario prestar la mayor atencin a la totalidad de la pieza y a los detalles de la
misma, efectuando una observacin sistemtica y detallada para no pasar por alto datos
importantes.
El anlisis de las imgenes permitir interpretarlas.
Se sugiere la revisin de conceptos anatmicos normales y fisiolgicos vinculado con las piezas
en estudio.

Pautas generales de procedimiento:

1-Definir con qu tipo de material est trabajando.
Para ello, se observa si el frasco contiene:

Uno o ms rganos completos o partes de ellos o si trata de piezas complejas que

incluyan varias vsceras o fragmentos de vsceras.

Reconocer el (los) rgano (s), identificando sus caracteres morfolgicos normales.

Podr tratarse de:

-rganos macizos, como bazo, hgado y riones.

-rganos huecos, como intestinos.
-rganos macizos con cavidades, como encfalo.
-rganos esponjosos, como pulmones.
En todos los casos se observa la superficie externa para reconocer si se trata de una serosa:
pleura o peritoneo visceral, que normalmente es lisa, brillante (debido a la humedad de su
superficie) y transparente (lo que permite apreciar algunas caractersticas del tejido
subyacente). La serosa est ntimamente adherida al rgano y no puede ser separada de l sin
desgarrarlo.
Algunos rganos carecen de serosa, como por ejemplo el esfago, el cual se halla
externamente recubierto por tejido fibroadiposo laxo, que constituye una adventicia.
En otras oportunidades los rganos estn revestidos por una cpsula de aspecto fibroso,
laminar y firme. Tratndose del rin, se le ver fina y ser, en condiciones normales,
fcilmente decolable.
o Observar si existe hilio y/o pedculo vascular.
Tener en cuenta la forma del rgano y su tamao (tomar las medidas de longitud, ancho y
espesor en cm).

o Analizar la configuracin de la superficie de corte, reconociendo estructuras

vasculares, canaliculares, etc.
o Si se trata de fragmentos de rganos, interpretar el plano de seccin efectuado, el cual
puede ser:
*Segn el eje mayor del rgano:
Longitudinal (paralelo a l)
*Segn el eje corporal:
Posterior. (a la izquierda).
Transversal (perpendicular a l).
Frontal (plano longitudinal que separa la mitad anterior de la Sagital)

2- Descripcin de hallazgos patolgicos.

-Alteracin del tamao y forma, que afecta a parte o la totalidad de la pieza.
-Color. Suelen poseer color gris- blanquecino, debido a la conservacin en formol al 10%.
El contenido de sangre de una vscera juega un papel importante en la determinacin de su
color: la escasa vascularizacin le confiere tonalidad griscea y los focos de hemorragia
adquieren coloracin pardo-azulada. La presencia de pigmentos, supuracin, depsito de
fibrina o calcificacin modifica asimismo la coloracin.
-Superficie externa. Puede ser irregular: mamelonada, lobulada, con protusiones, depresiones.
La superficie serosa que la reviste puede ser: translcida (grado menor de transparencia) u
opaca. Puede adems la serosa presentarse despulida con adherencias firmes o laxas.
-Superficie de corte. Puede verse deprimida o sobreelevada sobre el plano de seccin, ser lisa
o tener relieves. Puede presentar prdida de tejidos, impregnacin hemorrgica, etc.
En el estudio de las lesiones se deber tener l cuenta:
-Nmero: En este caso si existe una sola, la lesin ser focal.
Si existen varias, con tejido sano que las separa, ser multifocal.
Si afecta todo el tejido, sin respetar reas conservadas, ser difusa.

Aspecto:

- Lesin maciza nodular es de forma oval o esfrica.

-Lesin maciza cuneiforme o piramidal.
-Lesin cavitada.
-Lesin ulcerada.

-Tamao. Medidas en cm. Tomando en cuenta la mayor y menor, en caso que sean mltiples
y de tamao diferentes.
-Lmites
Netos (separacin franca entre zona sana y afectada). Estos pueden ser rectilneos, geogrficos,
policclicos.
Indefinidos. Se confunde el tejido lesionado con el sano.
-Localizacin topogrfica en el rgano.
-Friabilidad. Resistencia del tejido a ser destrudo por la presin ejercida por el dedo ndice y
pulgar.
-Consistencia. (Evaluada, en el caso de piezas contenidas en frascos, slo a travs de la
inferencia).
Esta puede ser:
Duro-ptrea.
Blando-elstica.
-Relacin con estructuras normales adyacentes y modificaciones que puede imprimirle:
compresin, desplazamiento, infiltracin, distorsin, destruccin, etc.
~rganos huecos

En ellos se describe:
1- Superficie externa.
2- Pared (superficie de corte)
3- Superficie interna.
4- Cavidad
1-Superficie externa
Puede presentar, segn el rgano una serosa visceral o una adventicia (la descripcin de ambas
ya fue considerada)
2- Pared.
Se debe medir su espesor y reconocer las distintas capas que la conforman.
Un ejemplo especial a destacar es el corazn. La medicin debe considerar la pared libre de
cada una de sus cmaras, teniendo especial cuidado, en que aquella se realice en una zona donde
el corte sea perfectamente transversal.

Se incluye en esta medida, el espesor del miocardio, que se extiende desde la zona
inmediatamente subyacente al pericardio visceral hasta la base de los msculos papilares.
Los distintos procesos patolgicos que afectan a la pared de un rgano, pueden adelgazarla o
engrosarla. En ambos casos se debe determinar, si ello ocurre en forma difusa, focal o
multifocal, su localizacin topogrfica y a expensas de qu capa o capas ha ocurrido.
Es necesario reconocer la causa de dicha afectacin.
Si se halla adelgazada analizar cuidadosamente a qu puede deberse.
En caso de engrosamiento, observar si ste ocurre debido al aumento de tejidos propios del
rgano o a la presencia de tejidos o sustancias extraas.
Para todo esto es importante tener en cuenta el aspecto, distribucin, color, consistencia y
friabilidad de los tejidos y reconocer si los lmites son netos o se confunden imperceptiblemente
con el tejido normal.
3- Superficie interna.
Es imprescindible reconocer las caractersticas normales de la superficie interna de los
distintos rganos huecos para luego poder observar sus modificaciones, por ej la ntima de
los vasos es lisa, rosada y brillante. La mucosa del tubo digestivo presenta pliegues de
direccin y espesor variables, segn el segmento considerado.
Las lesiones de la superficie interna pueden ser:
a) Lesiones que protruyen, es decir que se proyectan hacia la luz.
b) Lesiones excavadas.
c) Lesiones a nivel de la superficie.

a) Lesiones que protruyen. Segn su conformacin pueden encontrarse:

Placa.
Masa vegetante (fungiforme, en forma de coliflor).
Plipo: ssil (sin tallo o pedculo) o pediculado.
En todos estos casos se deber mencionar: nmero, localizacin topogrfica, distribucin
(siguiendo algn patrn o al azar), color, consistencia, friabilidad.
b) Lesiones excavadas.
Erosin: prdida superficial del tejido. Por ejemplo en el tubo digestivo se refiere a prdida
de sustancia que se extiende hasta la muscular de la mucosa (muscularis mucosae).
lcera: cuando la lesin es de mayor profundidad.
Adems, en estos casos: caractersticas de bordes, paredes y fondo.

Bordes: Pueden estar a nivel de la superficie o ser prominentes. Ser lisos (en sacabocado) o
mamelonados.
Paredes: Pueden ser lisas, rectas u oblicuas.
Fondo: Limpio o sucio (ocupado por sangre, pus, restos necrticos, etc) Adems puede ser
liso o mamelonado.
c) Lesiones a nivel de la superficie: En ocasiones, el proceso patolgico no modifica el relieve
de la superficie interna, quedando la lesin a nivel de aquella.
4- Cavidad.
Se debe considerar:
Tamao.
Forma
a) Tamao: la cavidad puede estar aumentada (dilatada), disminuda o ausente.
b) Forma: conservada o deformada.
c) Contenido: vaca u ocupada en forma parcial o completa. Por ejemplo clculos, exudados,
cogulos, trombos, parsitos, segn el rgano y el proceso patolgico en cuestin.
rganos macizos En ellos se describe:
Superficie exterior.
Superficie de corte
-Superficie exterior: segn el rgano que se considere puede presentar una serosa visceral y/o
una cpsula.
-Superficie de corte: Es importante recordar las caractersticas macroscpicas normales de
cada rgano, la configuracin del hilio y del pedculo vascular, que podrn contribuir a la
identificacin de la pieza.
Las lesiones pueden disponerse en forma focal, multifocal, o difusa y estar representadas por
una modificacin de la arquitectura y/o coloracin del tejido.
Dichas lesiones pueden ser slidas y tener distinta configuracin morfolgica, afectando a
mayor o menor superficie del tejido y adoptando el aspecto de ndulos (de 1cm. o ms de
dimetro) o nodulillos (menores de 1cm. de dimetro).
Pueden ser cavitadas, presentando una pared (propia o no) de espesor variable, cuya superficie
interna puede adoptar distintas caractersticas, por ejemplo lisa, granular, anfractuosa, etc. La
luz puede estar ocupada total o parcialmente por un contenido de aspecto variable segn la
patologa que represente.

En todos los casos se debe consignar el nmero, tamao, localizacin topogrfica, distribucin
(por ej confluente, lobulillar, al azar) coloracin y caractersticas de los lmites con el tejido
sano adyacente.

REA DE PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

Es en donde se realiza el proceso de los tejidos; la inclusin; el corte; la desparafinacin de los
cortes; la coloracin y el montaje de los preparados. Debe contar adems con criostato si el
laboratorio ofrece el servicio de consultas intraoperatorias (biopsias por congelacin).

Mtodos diagnsticos utilizados en Anatoma Patolgica.

La palabra Biopsia, proviene del griego Bios: Vida, Opsis: Ver, es decir la visualizacin de un
tejido extrado de un organismo vivo, e implica no solo su obtencin sino su anlisis
microscpico. El origen de la palabra "Biopsie" se sita en el ao de 1879, al ser sugerida por
el dermatlogo francs Ernest Hemri Besnier; existen antecedentes de que Virchow, habl
sobre los fundamentos de la biopsia y su valor diagnstico de los tumores malignos.

Aplicacin de las Biopsias

El objetivo fundamental de cualquier biopsia es obtener un diagnstico anatomopatolgico,
que apoye o corrobore un diagnstico realizado clnicamente.
Pero este no es la nica utilidad de una biopsia, ya que como veremos a continuacin, existe
una amplia variedad de aplicaciones de las mismas:

Diagnstico de lesiones patolgicas.

Valoracin de la malignidad de tumores, no solo con fines diagnsticos, sino

tambin para poder realizar un pronstico y la eleccin adecuada del tratamiento.

Reconocimiento o exclusin de metstasis tumorales en cualquier tejido.

Evaluacin del resultado de diversas terapias para procesos malignos y no malignos.

Evaluacin del estado de funciones corporales, como lo es el estudio de los efectos

hormonales en el epitelio vaginal.

Tipos de biopsias

La diversidad de tcnicas para obtener tejidos para su estudio, mismas que crecen conforme
avanza la ciencia, hacen que las clasificaciones sean artificiosas. Las biopsias se pueden
clasificar basndose en la forma en que se obtuvieron y tambin segn el instrumento que se
utiliz para su obtencin. A continuacin, se presenta, ms que una clasificacin, una revisin
de las formas de biopsia ms comunes que se utilizan en la actualidad.

Incisional: Es el tipo de biopsia en la que solo se extrae solo uno o varios fragmentos
de la lesin, Solo permitindonos realizar el diagnstico.

Escisional: En este tipo de biopsia, la lesin es removida por completo, con un anillo
perifrico de tejido sano y con ello, no solo es un procedimiento diagnstico sino
teraputico. La decisin para realizar una u otra, depende del tamao de la lesin
principalmente y de su accesibilidad.

Biopsia con Sacabocados: En esta se utiliza una pinza para obtener el tejido, como en
el caso de las biopsias de cuello uterino, recto, etc.

Biopsia por Aspiracin: Es la extraccin o aspiracin con una jeringa de lquidos de

cavidades corporales (derrames pleurales, ascitis) o cavidades tumorales, para el
estudio de su contenido celular.

Biopsia por Trepanacin: Se utiliza para obtener una porcin de hueso o cartlago,
por ejemplo, un condroma. Una biopsia por trepanacin tambin es aquella en la que se
realiza un trepano en la bveda craneal para obtener tejido cerebral.

Biopsia por Raspado: Cuando se realiza la remocin de elementos superficiales de un

tumor, ya que estos por su proliferacin, desprenden fcilmente elementos celulares.

Biopsia Transoperatoria: Esta es la que se realiza durante una ciruga y es enviada en

forma inmediata al patlogo para su estudio y emitiendo este un diagnstico, que
permitir al cirujano tomar una decisin con relacin a cmo continuar con la ciruga.
Estos tejidos, son procesados por congelacin, por ello deben enviarse solo cubiertos
en un medio hmedo, no se fijan.

Obtencin
Aunque cada caso en particular exige lineamientos especficos, es posible marcar reglas
generales para la obtencin ptima de un tejido, con la finalidad de lograr un diagnstico
correcto. En primer trmino, se exponen los lineamientos inherentes a la tcnica misma y, en
segundo trmino, a los puntos que es necesario tomar en cuenta respecto al tejido del que se
obtendr la biopsia.

Con relacin a la tcnica, en primer lugar, hay que apegarse estrictamente a las indicaciones
para la realizacin de una biopsia en cada caso en particular. El estrecho seguimiento de las
indicaciones

los

objetivos

de

la

muestra

misma

(diagnstico,

pronstico,

seguimiento, etc.) har menor el nmero de biopsias inadecuadas. Es fundamental contar con
el instrumental adecuado y en buen estado, para poder obtener una muestra de tejido adecuado
para su estudio.
Por ms pequea que vaya a ser la biopsia, no se deben de relajar las medidas de asepsia, ya
que es muy lamentable que un procedimiento menor se complique con una infeccin. Adems,
siempre que la extensin de la lesin extrada lo necesite, hay que suturar la herida, ya que as
cicatrizar mejor.
Se debe hacer una buena exposicin de la regin de donde se obtendr la muestra, de tal forma
que se tenga una visin directa del procedimiento para poder hacerlo en forma adecuada. Nunca
hay que olvidar, que el mdico no puede estimar, que se causar poco o mucho dolor al
paciente, por lo que siempre hay que ofrecerle una anestesia adecuada antes de realizar el
procedimiento.
Al obtener el tejido, este debe manipularse lo menos posible. Cuando se trata de tumores, el
procedimiento mismo puede desprender mbolos tumorales si es mal efectuado. Por otra parte,
la manipulacin excesiva de un tejido, puede dejar a este inutilizable para su estudio
o causar tal distorsin, que los artefactos causen un
diagnstico incorrecto.
En lo que respecta al tejido en s, existen reglas bsicas que hay que seguir para obtener una
buena biopsia. Algunas de estas resultan tan obvias, que son frecuentemente ignoradas.
Mientras mayor sea la lesin, hay que considerar si es necesario tomar mayor nmero de
muestras, debido a la variabilidad de patrones que puede tener el tejido.
En los casos de lesiones ulceradas, la obtencin de tejido del centro de la lcera slo mostrar
necrosis e inflamacin, siendo ms ilustrativa aquella biopsia que contiene tanto tejido
patolgico como sano, sin embargo, no debe ser tan perifrica que solo muestre reas normales.
La biopsia debe ser lo suficientemente profunda como para que pueda ser valorada
correctamente la relacin entre tumor y estroma.
Algunas lesiones profundas se acompaan de intensas reacciones tisulares perifricas como
inflamacin, fibrosis, calcificacin, formacin metaplsica de hueso, etc. de tal forma que, si
la biopsia no es lo suficientemente profunda, solo se observar dicha reaccin.
Cuando se obtienen numerosos fragmentos de tejido, todos ellos deben ser enviados para su
estudio microscpico, de preferencia separados e indicando el sitio del que se obtuvo cada uno.

Ya que en el menor y ms insignificante de estos pueden encontrarse los elementos para hacer
el diagnstico.

Preservacin
Es frecuente, que el mdico al tomar una biopsia, tenga la necesidad de revisar por s mismo el
aspecto macroscpico del espcimen, en un esfuerzo de encontrar evidencia que apoye su
diagnstico, llegando incluso a seccionarlo para observar su estado.
Si se decide hacer lo anterior, hay que realizarlo de tal forma que no se deje inutilizable la
muestra para su procesamiento y su estudio. Esto coincide con el accionar del patlogo, pues
hay que recordar que una parte del diagnstico de ste, es el anlisis macroscpico de la pieza,
y en ocasiones la informacin de la observacin macroscpica de la misma es muy til para el
diagnstico.
Hay que evitar el excederse en la manipulacin del tejido durante su obtencin, su anlisis
macroscpico y su procesamiento, ya que se puede modificar su arquitectura macro y
microscpica.
En pocas ocasiones, cuando el mdico obtiene un tejido, no est preparado con alguna solucin
para preservarlo en forma adecuada, enviando el tejido al patlogo solo sumergido en
solucin fisiolgica y en el peor de los casos en seco en una bolsa de plstico.
Todos los tejidos que sean obtenidos (con excepcin de las biopsias transoperatorias, que sern
sometidas a cortes por congelacin), aun cuando vayan a ser enviados de inmediato para su
estudio histopatolgico, debe de ser colocados en alguna solucin fijadora.
En forma general, se utiliza como solucin fijadora al Formol al 10%, ya que es barato, de fcil
manejo y preparacin.
La proporcin entre la solucin fijadora y el
tejido a preservar, debe ser en forma ideal de 10:1, es decir que debe haber 10 partes de volumen
de la solucin para cada parte de volumen del tejido aproximadamente.
Si no es posible respetar esta proporcin, cuando menos, hay que buscar que el tejido
permanezca completamente sumergido en la solucin fijadora. Aunque el uso de soluciones
fijadoras como el formol, modifica la morfologa macroscpica de los tejidos (cambios en la
coloracin y consistencia) y excluye la posibilidad de cultivar el tejido en caso de ser necesario
(antes de fijar los tejidos, tomar muestras para cultivo si son requeridas), pero de cualquier
forma es preferible, ya que el no realizar esto, modificar la morfologa del tejido en mayor
grado, sometindolo adems a los procesos de descomposicin, lo que dificultar finalmente
el correcto procesamiento e identificacin de la muestra.

Cuando no se cuente con formol para fijar las biopsias, es posible recurrir a otro
tipo de soluciones fijadoras. Entre ellas podemos utilizar una solucin alcohlica para
preservar los tejidos. En los casos de biopsias de tejidos delicados como las de hgado, se
utiliza la solucin de Bowin.
Cuando la biopsia es una transoperatoria, no hay que olvidar, que se enva al patlogo solo
cubierta de una gasa hmeda, sin ningn tipo de solucin fijadora.

Errores y omisiones frecuentes

Muestra Inadecuada: La biopsia puede ser inadecuada para su estudio por diversas
razones: tamao inadecuado; ser demasiado perifrica a la lesin y contener solo piel,
grasa, tejido de granulacin o fibrosis; haber sido tomado en un solo sitio en caso de
lesiones extensas y solo contener tejido normal.

Extravo de la Muestra: Una de las situaciones clnicas ms molestas para el paciente

que se ha sometido a un procedimiento diagnstico como una biopsia, es el saber que
dicha biopsia ha sido perdida.

Por ello el mdico debe seguir una conducta bien establecida y formal. La muestra debe ser
enviada inmediatamente al servicio de Anatoma Patolgica para su procesamiento.

Rotulacin Errnea de la Muestra: Otro error frecuente es, que, al rotular la muestra,
se le ponga el nombre de otro paciente, o que se seala que el tejido proviene de otro
sitio del que realmente proviene. Los frascos que contendrn las biopsias se deben de
rotular en forma previa a que se obtengan las mismas, para evitar este tipo de error.

Mala Fijacin de la Muestra: Los tejidos que no son fijados, sufren un proceso de
autlisis y descomposicin, procesos que pueden distorsionar la muestra demasiado y
hacer ms difcil su estudio. Los lquidos obtenidos de cavidades o aquellos obtenidos
de lavados como los bronquiales, si no es posible fijarlos, deben de ser enviados lo ms
pronto posible para su estudio.

Deformaciones de la Muestra: Para evitar esto, no hay que tomar con pinzas la
muestra que se ha obtenido, ni cauterizarla en exceso, como sucede con los conos
cervicales obtenidos con asa diatrmica con voltaje excesivo. El buen manejo de la
muestra, redundar en un estudio microscpico ms fcil y acertado.

CITOLOGA EXFOLIATIVA
Aunque con frecuencia muchos mdicos olvidan que este es otro tipo de biopsia, constituye
uno de los tipos ms utilizados. En ella, se realiza un raspado sobre una superficie epitelial con
la finalidad de obtener elementos celulares del mismo, los que se extienden en un portaobjetos
y son teidos con la tcnica de Papanicolaou para su estudio. Este es el mtodo de obtencin
ms frecuente y su amplia utilizacin en el mundo es principalmente en el tracto genital
femenino con el fin de hacer diagnstico temprano de cncer de crvix.
Extendidos citolgicos obtenidos por expresin: La realizacin de este tipo, requiere de la
aplicacin de un masaje, para lograr que el tejido libere material para su estudio. El mejor
ejemplo es la obtencin de material de los conductos mamarios a travs del pezn despus de
un masaje.
Aspirado de lquidos corporales: Este mtodo de obtencin de clulas descamadas de
superficies corporales es muy til cuando las condiciones del paciente no permiten realizar un
procedimiento quirrgico, la obtencin de lquidos de cavidades corporales tales como
peritoneo, pleura y pericardio se llevan a cabo a travs de aspirado directo de dicho lquido a
travs de procedimientos como la Paracentesis (Abdomen); toracentesis (trax) y la
pericardiocentesis (pericardio).
Extendidos citolgicos por examen Directo: Tal es el caso del estudio al que se someten el
esputo y secreciones, siendo teidas con la tcnica de Papanicolaou.
Mtodo de la Esponja: Se pasa o se comprime sobre la lesin una esponja, luego se enjuaga
la esponja con solucin y este lquido se centrifuga y se estudia el sedimento en busca de
elementos celulares.
Cepillados y/o raspados endoscpicos: En los tiempos recientes y gracias a los avances en la
tecnologa de fibra ptica flexible, ha sido posible acceder al interior de cavidades corporales
que eran de difcil acceso, tales como el rbol bronquial o el tubo digestivo, sin tener que hacer
un procedimiento quirrgico extenso y mrbido. Con el perfeccionamiento del endoscopio
flexible, se puede con el mismo instrumento inspeccionar las mucosas y con aditamentos
especiales realizar un lavado, cepillado y aspiracin de clulas exfoliadas de los sitios
sospechosos de procesos patolgico para su diagnstico.
La autopsia, Necropsia o estudio post mortem
Desde la poca de los grandes anatomistas, el estudio del cuerpo humano desarrollo los grandes
avances de la Medicina, sin embargo, no es preciso cuando los anatomistas dejaron de estudiar
la Anatoma Normal y se enfocaron ms en la Anatoma Patolgica.

El trmino autopsia surge del griego: autos que significa uno mismo y oasis: ver u observar,
as, una de las frases clsicas de Andreas Tesalios ver por m mismo es adoptada
posteriormente por los Anatomistas para describir el estudio del Cadver con fines diagnsticos
y para determinar las causas de la muerte.
El estudio Post Mortem tambin llamado obduccin, en la actualidad sufre diferentes retos en
todo el mundo. Ya que, con los avances en el diagnstico clnico, perfeccionamiento en la
tecnologa de imgenes y sistemas analticos, la utilizacin de la autopsia ha decado en nmero
durante los ltimos aos, respecto de su auge en la poca organicista.
Entonces es as que definimos Autopsia: como el procedimiento mdico que emplea la
diseccin, con el fin de obtener informacin anatmica sobre la causa, naturaleza, extensin y
complicaciones de la enfermedad que sufri en vida el sujeto autopsiado.
La palabra necropsia proviene de las voces griegas /nekrs/ 'cadver' y /psis/
'observar', que significa 'observar un cadver'.
Es el procedimiento tcnico y cientfico de diseccin anatmica sistemtica de un animal
despus de su muerte para dilucidar la causa de la misma. Es igual a un examen post mrtem
(en humanos se le llama autopsia).
La diferencia entre los dos trminos es que la necropsia se realiza para confirmar las
causas de la defuncin en un Hospital y la autopsia para averiguar las causas cuando fallecen
de forma sbita y sin enfermedad aparente. La palabra necropsia es, en un sentido mejor
aceptada por algunos de los estudiosos porque sta, etimolgicamente es el estudio de la
muerte en un trmino general; no slo en animales.
Las razones por las que se realiza una necropsia o autopsia (en humanos) es para saber
causas exactas de muerte del sujeto; desde posibles envenenamientos, padecimientos que
lo aquejaban u otras causas.

Tipos de Autopsia:
Autopsia clnica. Se realiza con fines cientficos, para corregir diagnsticos clnicos o
esclarecer casos dudosos, este tipo de autopsia es el que se hace en pacientes hospitalizados y
bajo tratamiento mdico.
Autopsia Mdico-legal. Se realiza por ley y con fines judiciales, para determinar
responsabilidades. En sujetos cuyas causas de muerte no son claras o precisas, y an en
pacientes hospitalizados cuyas circunstancias de fallecimiento implique una responsabilidad
jurdica.

Autopsia psicolgica: Es la reconstruccin de la vida de la persona fallecida, enfatizando

aspectos como estilo de vida, personalidad, estrs reciente, enfermedad
mental y comunicacin de ideas de muerte, a travs de informacin recogida mediante la
entrevista a personas allegadas y la revisin de documentos
Autopsia histrica: Es la investigacin mdico-legal de las causas y las circunstancias de una
muerte con inters histrico, que se sustenta en la interpretacin crtica, armnica, jerarquizada
y objetiva del conjunto de la informacin aportada por documentos y testimonios, cuando no
se tuvo acceso directo al cadver o a los restos seos

LA TCNICA HISTOLGICA
Con el perfeccionamiento de los instrumentos de microscopa en el siglo XVI y el apogeo de
la poca tisular como herramienta para el diagnstico de las enfermedades, se hizo presente
tambin la necesidad de perfeccionar la tcnica en la preservacin y proceso de los tejidos a
examinar.
En este apunte se revisaran en forma breve cuales son los principales pasos que conforman el
proceso histolgico para el corte de tejidos y su tincin para ser observables al microscopio.
La tcnica que usualmente se utiliza es la de cortes por parafina y que a continuacin se
describe.

FIJACIN
Uno de los pasos ms importantes de la tcnica histolgica lo es sin duda el de la fijacin de
los tejidos, el cual lleva como principal objetivo el evitar la descomposicin natural de los
mismos.
El formaldehdo, tambin conocido como Formol, o cido frmico, es el agente fijador por
excelencia, ya que sus caractersticas los sitan como la primera eleccin dentro de los
reactivos de su gnero. El formol acta sobre los tejidos bsicamente evitando la
desnaturalizacin de las protenas, adems de un poder indurante sobre los tejidos.
Siempre se utiliza a una concentracin baja a diluciones que van del 5% hasta el 20%
dependiendo de las necesidades y caractersticas de los tejidos a fijar, la dilucin ms utilizada
y estndar es al 10%.
El procedimiento es por dems simple, el tejido debe de colocarse en un frasco,
preferentemente de vidrio y de boca ancha, ya que en algunas ocasiones, se utilizan frascos de
boca angosta , que cuando se deposita el tejido este entra con facilidad pero una vez fijado, este
endurece y no puede salir, lo que obliga a romper el mismo, corrindose el riesgo de accidentes

para el patlogo y maltrato para la muestra, incluso alguno de los fragmentos de vidrio roto
pueden quedar entremezclados con el tejido y al momento de ser cortados al micrtomo estos
pueden daar la cuchilla y artefactar al tejido, daando su observacin.
El alcohol es otra agente fijador de uso comn, sin embargo comparado contra formol, este
agente fijador endurece los tejidos Existen adems otros agentes que se preparan con distintas
sustancias incluido el formol y se les denominan fijadores compuestos tales como Fijador de
Zenker, Bowin y el lquido de Carnoy. Cuando se realiza tcnica para microscopa electrnica
se fijan en tetraxido de osmio glutaraldehdo. Y para realizar tcnicas de inmunofluorescencia
el tejido no se fija usualmente ya que se hacen cortes por congelacin.
Otra de las excepciones de usar agentes fijadores es el estudio transoperatorio, ya que el tejido
tendr que ser cortado por congelacin y deber de ser enviado al laboratorio de patologa en
fresco para poder ser procesado con esta tcnica.

DESHIDRATACIN
Para poder comprender el porqu de este paso es necesario recordar que el 70% de la clula es
agua, por lo que es preciso sustituir esta con una agente deshidratante
Una vez fijados los tejidos estos inician su procesamiento con la deshidratacin del tejido, este
procedimiento se realiza con varios cambios del tejido en alcoholes de distintas concentraciones que
van desde diluciones al 80% hasta llegar al alcohol absoluto o anhidro de 100 GL (grados Gay

Lussac) usualmente este proceso se lleva entre 4 y 6 horas. Adems del alcohol se utiliza en
algunas ocasiones acetona como agente deshidratante, con la desventaja que la utilizacin de
la misma hace que el tejido se torne quebradizo o que deforme la arquitectura tisular por
contraccin violenta de las clulas sometidas a este tipo de deshidratacin

ACLARAMIENTO
Este paso del proceso de tejidos implica que una vez que hemos sustituido el agua intracelular
con alcohol este a su vez deber de ser substituido por un solvente orgnico, con el objeto de
que posteriormente pueda ser impregnado con parafina.
Los agentes que se utilizan son principalmente tres el benceno, el xileno y el tolueno, los cuales
tienen dos propiedades fundamentales, sustituir el alcohol intracelular y aclarar el tejido, esto
es, que durante este paso el tejido se torna transparente en su totalidad, lo que indica que el
tejido estar listo para ser impregnado con parafina. El tiempo usual de este paso es de 2 a 3
horas.

Otro agente aclarador adems de los mencionados es el cloroformo, el cual ha cado en desuso
debido a su toxicidad.

IMPREGNACIN
Una vez que el tejido ha sido aclarado deber entrar en las etapas finales del proceso, y es
cuando el contenido intra y extracelular es impregnado con parafina, la cual deber de
permanecer en su punto de fusin que comprende el rango de entre 58 a 65 grados centgrados,
y debe de impregnarse aproximadamente entre1 a 3 horas.
En la actualidad tambin suelen usarse algunas parafinas plsticas y polmeros, que mejoran
en mucho la calidad en el corte de los tejidos.

INCLUSIN
Para poder hacer manejable el tejido este debe de ser incluido en un bloque de parafina para
poder ser cortado con el micrtomo, para ello se utilizan por lo general moldes de aluminio o
acero en donde se orienta la posicin del tejido para ser cortado de acuerdo a las necesidades
diagnsticas, tratando de abarcar la mayor cantidad de tejidos en dicha orientacin.

CORTE
La microtoma es uno de los pasos importantes en el proceso, ya que de su precisin depende
que las imgenes obtenidas del espcimen examinado.
El grosor de las secciones histolgicas va desde 1 hasta 50 micras, siendo el grosor estndar
utilizado en microscopa de luz 5 micras.
En el caso de la tcnica para microscopa electrnica se utiliza la llamada ultramicrotoma, en
donde el grosor de los tejidos se corta en Amstrongs. Y el proceso de inclusin en lugar de
hacer en parafina se hace en resina epoxica.
Una vez que se realiza el corte con el micrtomo, de ah se obtiene una fina banda continua
que contiene los cortes, los cuales para evitar que permanezcan con arrugas, se flotan en un
bao de agua tibia y se extienden cuidadosamente, adems de que ah se seleccin
visualmente las mejores muestras y se descartan las que han sido artefactadas o estn mal
cortadas. Una vez hecha la seleccin del corte se toma un portaobjetos y cuidadosamente se
pescan y se auto adhieren al mismo. Se colocan en una canastilla porta especmenes y se
dejan secar por unos minutos.
En algunas ocasiones para garantizar que el tejido no se vaya a desprender del portaobjetos se
le agrega a este una fina pelcula de albmina de Meyer como adhesivo.

Para los casos de cortes por congelacin se cuenta con el Criostato, que fundamentalmente es
un micrtomo convencional dentro de una cmara congelada, que alcanza temperaturas de
corte de menos 30 grados centgrados, a fin de poder congelar en un par de minutos un tejido
en fresco y as posibilitar un corte rpido.

TINCIN
Una vez que los cortes se han adherido perfectamente al portaobjetos, se deben de teir, a fin
de contrastar las distintas estructuras propias de los tejidos como los son los ncleos, los
citoplasmas, las substancias intercelulares, las fibras de la matriz extracelular entre otras
estructuras.
La tcnica estndar utilizada para la tincin de tejidos es la de Hematoxilina y Eosina, la cual
se encuentra ampliamente difundida en todo el mundo. Los resultados de este mtodo son los
siguientes, los citoplasmas de las clulas se tien usualmente de un color rosa en varias tonalidades que
se denominan como eosinfilas, mientras que los ncleos y algunas fibras se tien de tonalidades
moradas o prpuras, incluso alguna de color azul oscuro, denominndose basfilas por esta

caracterstica.
Finalmente, una vez teido el tejido, para mejorar sus ndices de refraccin se debe de hacer
un montaje del espcimen, utilizndose para ello un cubreobjetos y como medio de refraccin
una resina sinttica o tambin blsamo del Canad.
Es importante sealar que es prudente esperar un tiempo perentorio de cuando menos una hora
para que esta resina seque y as no derramar resina sobre la platina del microscopio y as evitar
arruinar los carros de deslizamiento de la platina.
(Castaeda, 2015)

FUENTE DE CONSULTA:
~ALBACETE, U; Obtenido de:

http://www.chospab.es/publicaciones/protocolosEnfermeria/documentos/5cad810c4f849a5f3
c62e56635f32c01.pdf
~CASTAEDA, a. (30 de 07 de 2015). DocSlide. Recuperado el 19 de 04 de 2018, de
DocSlide:
http://myslide.es/documents/metodos-de-estudio-de-la-patologia.html
ANEXO:

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO E HISTOPATOLGICO
TEMA:
RECONOCIMIENTO DEL REA FSICA DE UN LABORATORIO DE ANATOMA
PATOLGICA, DISTRIBUCIN DE CADA EQUIPO, MATERIALES E INSUMOS
NECESARIOS EN EL REA DE HISTOTECNOLOGA, REA DE INCLUSIN DE
TEJIDOS EN PARAFINA, REA DE MICROTOMA Y REA REA DE TINCIN Y
MONTAJE.

ASIGNATURA DE TCNICAS HISTOLGICAS

GRUPO N6
LIC. IVN PEAFIEL
INTEGRANTES:
JACKELINE MULLO
ELIZABETH OVANDO
MARCO ROJAS

ABRIL AGOSTO, 2016

LABORATORIO DE ANATOMA PATOLGICA

El laboratorio de anatoma patolgica es uno de los apartados de un hospital en los que se
asienta el conocimiento mdico, ya que se encarga del estudio morfolgico de las lesiones
producidas por la enfermedad, visualizndolas, hacindolas asequibles a nuestro anlisis
mediante el estudio de las estructuras daadas. De esta manera puede extraerse informacin
muy valiosa sobre las causas (etiologa) de las enfermedades, mecanismos (patogenia) y su
relacin con las manifestaciones clnicas, Estas lesiones pueden encontrarse a nivel molecular,
celular, tisular, del cuerpo humano. La utilidad de la Anatoma Patolgica es a diferentes

niveles, como el diagnstico y el estudio de la patogenia de las lesiones: el conjunto de los

procesos que conducen a la aparicin de las lesiones, por qu se producen y sus consecuencias.
Las lesiones pueden ser ms o menos especficas a enfermedades por tanto ms o menos tiles
a la hora del diagnstico. La Anatoma Patolgica utiliza ciertas herramientas, como el examen
de necropsia, biopsia y la citologa. En este laboratorio lo que ms se analizan son muestras
citolgicas, aproximadamente en un 80% de las muestras analizadas pertenecen a este tipo.

Las habitaciones que un laboratorio de anatoma patolgica debera tener son:

rea de Recepcin :
Se encargar de la recepcin de los pedidos de estudios y del material remitido con los mismos,
controlando que figuren todos los datos del paciente, clnicos, quirrgicos, de estudios por
imgenes, de laboratorio, etc., que correspondan.
a) Nombrar la muestra y el pedido de estudio en forma manual o informatizada.

b) Ordenar el material y las boletas de pedido en el rea de Macroscopa.

c) Recibir del mdico patlogo los protocolos ya diagnosticados y confeccionar el informe y
lo entrega al mdico patlogo para que lo controle y lo firme.
d) Archivar los preparados de citologa e histopatologa.
e) Entregar los informes segn una rutina preestablecida.
f) Esta actividad estar comprendida dentro del marco regulatorio del ejercicio profesional de
la salud.

Archivo:
Ser un rea con clima y condiciones fsicas adecuadas para resguardar de forma ordenada
(por nmero de identificacin interno y fecha), segura y accesible, solicitudes de estudio,
copia del informe final, laminillas, bloques de parafina y las libretas de registro de mnimo
los dos aos anteriores al corriente de todas las reas del laboratorio (estas libretas pueden
incluir: recepcin, almacn, archivo, proceso, diagnstico).
El mobiliario depender de la cantidad de material a resguardar y deber ser especial
(ejemplo: archiveros metlicos de laminillas, cajas de cartn y anaqueles metlicos).
Organiza de forma funcional y controla el archivo de bloques, laminillas, solicitudes y
resultados finales.
Registra el material que ingresa y sale del archivo.

Almacn:
Ser el rea destinada para tener de forma ordenada, controlada y segura los insumos para
el proceso del laboratorio (material, reactivos, etctera).

Idealmente debe tener clima controlado e iluminacin adecuada, pues algunos reactivos se
degradan o se modifican con cambios ambientales.

El equipo principal sern anaqueles metlicos; pueden ser necesarios refrigeradores y

vitrinas cerradas.

Organiza el resguardo funcional y seguro del material y reactivos del laboratorio.

Realiza el inventario, registrando existencias, entradas y salidas de material.

Hace los pedidos peridicos de abastecimiento.

Laboratorio:
Es el rea donde se realizan los procesos macroscpico, qumico, de corte, de tincin,
montaje y tcnicas especiales (de acuerdo con la capacidad tcnica de cada laboratorio).
Deber contar con una mesa de trabajo y tomas de agua por cada proceso que realice el
laboratorio

(inclusin

en

parafina,

corte,

tincin,

montaje,

histoqumica,

inmunohistoqumica, descripcin macroscpica, etctera).

Invariablemente sern necesarios sistemas especiales para el manejo de los vapores,
lquidos, desechos qumicos y tejido residual producidos durante el procesamiento de las
muestras (Ejemplo: extractores de aire, contenedores para residuos biolgico-infecciosos y
punzo cortantes, etc.).
Dependiendo de la organizacin de cada laboratorio: auxilia en los procesos de laboratorio
que no involucren decisiones diagnsticas, si es necesario esto incluir el control del archivo
y almacn.
Se encarga del proceso histopatolgico de las muestras tcnica histolgica y finalmente
entrega de las laminillas a los citotecnlogos y patlogos.
Realiza tcnicas especiales de histoqumica y de acuerdo con sus capacidades acadmicas,
tambin de inmunohistoqumica y otras.
Realiza el mantenimiento preventivo de todos los aparatos que maneja en el proceso y de
los carros de tincin, as como la preparacin de reactivos necesarios, conforme con los
lineamientos establecidos.

rea de Diagnstico: encargado: Patlogo.

Realiza la descripcin e inclusin macroscpica de las piezas, el anlisis microscpico y
el diagnstico final.

Realiza el mantenimiento preventivo del microscopio.

Realiza diagnsticos de interconsulta y el diagnstico final de la citologa crvico vaginal

positiva para lesiones intraepiteliales o cncer.

Redacta y valida con su nombre y firma todos los informes finales de histopatologa y la
citologa positiva a lesiones intraepiteliales o cncer.

rea de diagnstico: encargado: Citotecnlogo.

Realiza el anlisis microscpico y diagnstico final de la citologa crvico vaginal negativa,

as como el diagnstico inicial de la citologa positiva para lesiones o cncer.
Realiza el mantenimiento preventivo del microscopio.
Si las necesidades del laboratorio lo requieren y cuenta con la experiencia necesaria realizar
el control de calidad interno de la citologa crvico vaginal negativa.

SUBREAS DE UN LABORATORIO DE ANATOMA PATOLGICA

Sala de macroscopa: procesado de muestras e intraoperatorias: Incluye 4 zonas
diferenciadas:
1. Zona de macroscopa o tallado es donde se realiza estudios macroscpicos e inclusin;
El Servicio cuenta con 2 puestos de macroscopia situados en dos salas independientes. La
sala 1 est equipada con impresora de casetes de alta capacidad (200 casetes) y dictfono.
Cada sala cuenta con un ordenador con puesto cliente del sistema de informacin de
anatoma patolgica.
2. Zona de fotografa macroscpica: Se encuentran en las salas de microscopa arriba
descritas. Cada una de estas salas est equipada con un sistema digital de fotografa
macroscpica y estativo.
3. Zona de estudios intraoperatorios: 2 criostatos, bateras de tincin rpida, sistema de
congelacin mediante nitrgeno lquido. Se encuentra situada dentro del rea de tallado
general.
4. Zona de procesamiento de tejidos: Dos procesadores de tejidos, con capacidad de hasta
500 casetes de tejidos. Se encuentra situada dentro del rea de tallado general.

 Sala de elaboracin de bloques y microtoma: Esta sala es donde se confeccionan los

bloques de parafina, que posteriormente son sometidos al proceso de microtoma en esta
misma sala. Dispone de cuatro puestos fijos de microtoma.
rea de laboratorio general: Est dividida en 3 zonas, cada una de:
-

Zonas de citologa, tcnicas generales: Est situada en un rea especfica del laboratorio
general. Est equipada con sistemas de citologa Hologic (citologa ginecolgica y
general), cytospin, centrfuga. Cuenta con 4 campanas de extraccin.

Zona de tincin general, montaje y clasificacin de preparaciones: Cuenta con un

teidor automtico, y un montador automtico de cubreobjetos.

Zona de tcnicas especiales (inmunohistoqumica, inmunofluorescencia y extraccin

de patologa molecular): Est situada en la zona de tinciones del laboratorio general.
Cuenta con un teidor automtico de gran capacidad, un teidor Dako Artisan para
tcnicas especiales, dos immuno teidores automticos Dako Autosatainers con
conexin Dakolink.

Sala de patologa molecular: rea de amplificacin de cidos nucleicos y lectura de

resultados de estudios de patologa molecular para sistemas PCR convencional y RTLAMP.
Sala de extraccin de ganglio centinela y lavado de utillaje: Extraccin de ARN para
estudios de ganglio centinela, limpieza de material general, fuente de lavado de ojos y rea
de desenmascaramiento antignico para inmunohistoqumica.
Sala de autopsias: Incluye rea central de diseccin de cadver, con mesa de autopsias
regulable, zona de diseccin de rganos y estudio macroscpico con mesa de tallado con
aspiracin y zona de fotografa digital.
Sala de macroscopa, procesado de muestras e intraoperatorias: Seleccin y
congelacin de muestras
Sala de arcones frigorficos: Dos arcones frigorficos (-80) dedicados exclusivamente a
Biobanco del HGUCR.

Fuera del laboratorio de anatoma patolgica:

Encontramos la sala de espera, almacenes y el despacho de diagnstico mdico, en el cul es

frecuente que se renan los mdicos para hacer preguntas.
Tambin encontramos al personal que es muy variado y formado por: tcnicos en el laboratorio
de anatoma, a mdicos que son anatomopatlogos, a jefes de servicio, a secretarios, tcnicos
de limpieza y celadores que por lo general se encargan de las salas de necropsias.
Aunque cada laboratorio de anatoma patolgica presenta caractersticas distintas de estructura
y equipamiento, todos ellos deben cumplir ciertos requisitos mnimos, definidos
principalmente en funcin de su carga de trabajo y del tipo de procedimientos tcnicos que
realicen, adems de una distribucin y organizacin funcional y dinmica.

REA DE INCLUSIN DE TEJIDOS EN PARAFINA

El rea de inclusin de tejidos en parafina tiene como finalidad proporcionar al tejido un
soporte slido que posibilite realizar un corte muy fino, por lo que es de suma importancia que
el medio utilizado para la inclusin penetre al interior del tejido. Aqu se forman bloques de
parafina dentro de los cuales estn las muestras a estudiar. Tambin hay mquinas
especializadas para la inclusin en parafina de tejidos. Despus de su inclusin y posterior
secado, estos se deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte. Puede llevarse
a cabo en Parafina.
Evitar llenar excesivamente los moldes de inclusin, porque esto puede interferir con la
alineacin correcta de la cara del bloque durante el corte. Cualquier exceso de parafina en la

parte exterior del molde de inclusin debera ser eliminado antes de sujetarlo, para asegurarse
de que el bloque est sujeto con firmeza durante el seccionamiento.
Las parafinas son hidrocarburos saturados provenientes de la destilacin del petrleo.
Generalmente son sustancias slidas a temperatura ambiente. Existen diferentes tipos de
parafina que se caracterizan por sus puntos de fusin. Estos oscilan entre 40 y 60 C. La
parafina hierve a 300 C. y emite vapores que son muy inflamables.

Las parafinas se clasifican en:

Esquema de la inclusin en parafina de una muestra de tejido previamente

fijada. Los tiempos de incubacin en cada sustancia pueden variar en
funcin del tamao de la muestra, tipo de tejido o, por ejemplo, el lquido
intermediario. Sin embargo, los pasos son comunes a cualquier inclusin en
parafina.

Blandas:Tienen un punto de fusin de 45 C - 52 C. Son recomendables para incluir tejidos

en los se detectaron antgenos mediante inmunohistoqumica.

 Semiduras: Sus puntos de fusin son de 54 C - 58 la parafina que se emplea con mayor
frecuencia en los laboratorios donde se realiza tcnica histolgica. De acuerdo a la
temperatura del medio, se recomienda su uso pues se pueden obtener secciones de 5 a 7 de
m.
Duras: Tienen un punto de fusin de 60o C - 65 Son parafinas que deben usarse en
ambientes con climas de temperaturas altas. La penetracin de la parafina al interior de los
tejidos se efecta cuando sta se encuentre en estado lquido. En el comercio las parafinas
se expenden en forma de bloques discoidales, escamas, tabletas rectangulares o en forma de
grumos pequeos.
Las parafinas, se disuelven usando estufas que las mantienen en ese estado. Las estufas
permanecen a una temperatura constante, generalmente de 2 C a 4 C por encima del punto
de fusin de la parafina a emplear. La inclusin o formacin del bloque de parafina se efecta
empleando moldes de diversos materiales y diferentes reas y profundidades. Pueden ser de
papel, metal o plstico.
El bloque de parafina debe contener la muestra 25 correctamente se llena con parafina caliente
pura orientada para facilitar la obtencin de las secciones o cortes. El molde elegido; con una
pinza calentada en un mechero se toma una pieza de tejido del tercer recipiente y se orienta una
de sus superficies (aquella que se pondr en contacto con el filo de la navaja) se sumerge al
interior del molde, en el que la parafina ha empezado a solidificarse y se le aplica una leve
presin. Despus los moldes se enfran de inmediato (se sumergen en agua fra o se introducen
en el refrigerador) para que la parafina se solidifique de manera homognea. Todos los
procedimientos mencionados, desde la deshidratacin hasta la infiltracin en los dos o tres
recipientes de parafina lquida, se pueden efectuar de manera automtica. Existen una serie de
procesadores automticos que facilitan estas tareas.

REA DE MICROTOMIA

Se realiza cortes histolgicos muy delgados segn lo requerido a lo acostumbrado del

laboratorio donde se realice la tcnica. los cortes van desde 0.5 micras hasta 8 u 10 micras los
cortes. Los cortes se echan al bao de flotacin y se pescan con un portaobjetos, se marca con
la flecha el tipo de tejidos y la tincin con la que va ser procesada. El ngulo del corte entre el
cuchillo y el microtomo y el bloque a de estar entre 10 y 15 . Una vez realizado el corte se
da un bao de agua destilada para que la parafina se estire, un buen corte histolgico debe tener
de 3 a 5 micras para que sea fcilmente atravesado por la luz del sol que atraviesan los poros
celulares.
Los micrtomos para cortar material incluido en parafina son probablemente los ms usados
en los laboratorios de histologa. Todos poseen varias partes comunes: una cuchilla, un
portabloques y un sistema mecnico que permite acercar el bloque de parafina a la cuchilla, a
una distancia que se corresponde con el grosor de la seccin que pretendemos obtener, y
realizar el corte.
Hay dos tipos de microtomo para parafina: el de rotacin y el de deslizamiento. El micrtomo
de rotacin provoca el corte gracias a la transformacin de un movimiento de rotacin en otro
de ascenso y descenso del portamuestras. En el movimiento de bajada sobre la cuchilla se
produce un acercamiento del portamuestras hacia la cuchilla segn el grosor de corte
seleccionado. En el portamuestras existe un sistema mecnico que permite orientar la superficie
de corte de la muestra respecto a la cuchilla. En estos micrtomos la cuchilla se mantiene fija
durante el proceso de corte, pero puede regularse el ngulo de ataque, es decir, el ngulo de la
hoja de la cuchilla respecto a la superficie de la muestra. Con el micrtomo de deslizamiento
se obtienen cortes mediante un movimiento de deslizamiento del bloque sobre la cuchilla, o
viceversa. En estos micrtomos el movimiento lo proporciona directamente la mano y es de
ida y vuelta, siendo en la vuelta cuando se eleva la posicin del bloque, o de la cuchilla, una
distancia que nos dar el grosor del corte.
Tanto el micrtomo de rotacin como el de deslizamiento tienen ventajas e inconvenientes.
La principal ventaja del de rotacin es su precisin, la posibilidad de obtener secciones
seriadas con facilidad y la automatizacin del proceso de corte mediante motores elctricos.
Los micrtomos de deslizamiento son ms sencillos mecnicamente y su disposicin permite
cortar bloques ms grandes o bloques de celoidina, aunque estn cayendo en desuso.

Hay que llevar a cabo una serie de procesos sobre el bloque de parafina antes de hacer el primer
corte til a nuestra muestra. En primer lugar hay que detallar el bloque hasta hacer una pirmide
truncada. Antes de retallar hay que considerar cul de las caras laterales de esta pirmide ser
el frente de ataque, es decir, cul ser la que primero se ponga en contacto con la cuchilla. Esta
cara deber ser ms ancha que la opuesta, y ambas han de ser paralelas. Con el retallado se
consigue una buena orientacin de nuestra muestra en las secciones, la diferencia en el tamao
de las caras permite que cada nuevo corte arrastre sin problemas al previamente cortado y, por
ltimo, las caras paralelas hacen que se obtengan tiras rectas de cortes. Una vez detallada la
pirmide, y antes de obtener secciones de nuestra muestra, es necesario un proceso de
desbastado, es decir, la eliminacin del espesor de parafina que hay entre la superficie del
bloque y nuestra muestra.
A veces es necesario detallar el bloque de parafina.

Otro aspecto que hemos de tener en cuentan antes de empezar a cortar es el ngulo de ataque
o inclinacin de la cuchilla respeto a la superficie de corte de la pirmide. Lo normal es
orientar la cuchilla con un ngulo de uno 10 respecto a la superficie de corte, aunque se
puede modificar segn nuestras necesidades.
Una vez comenzado el corte de nuestra muestra se obtienen tiras de secciones unidas por las
caras paralelas a la cuchilla. Estas tiras se suelen manipular con pinceles o lancetas y, antes
de su fijacin definitiva en la superficie de un portaobjetos, han de estirarse para que nuestro
tejido quede perfectamente extendido. Aprovechando la hidrofocidad de la parafina, las
secciones se colocan sobre agua calentada a unos 35 C a 40 C y el calor las hace extenderse
sin llegar a su punto de fusin, que est en torno a los 60 C. El estiramiento se puede realizar
en baos de agua con regulacin trmica o sobre los propios portaobjetos cubiertos de agua
y colocados sobre una plancha trmica regulable.
Como dijimos al comienzo existen mltiples variaciones sobre este esquema general de
procesamiento histolgico. Por ejemplo, se pueden observar tejidos con el microscopio
electrnico de barrido sin necesidad de incluir ni cortar, pero slo observaremos superficies.

En las siguientes pginas veremos con cierto detalle algunas de las tcnicas ms empleadas
para la observacin de los tejidos.
Caractersticas

Tcnicas en el contexto de la histologa, aunque ms habitualmente, tales muestras de tejidos

suelen ser tejidos con patologas, removidos previamente por biopsia, y se desea saber de cual
patologa se trata, con fines mdicos.
Los rdenes de seccin de corte habituales en la microtoma son de 1 a 50 micras, pero varan
segn el tipo de muestra y segn el microscopio en el que se desee observar la muestra.
Debido a que los tejidos blandos son imposibles de cortar de manera uniforme, se procede
siempre a su endurecimiento.
La forma de obtener este endurecimiento distingue los tres tipos principales de tcnicas de
microtoma:
Tcnica histolgica tradicional: Los tejidos son endurecidos sustituyendo el agua por

parafina utilizando la tcnica de infiltracin y teidos para aumentar la visibilidad de las

estructuras celulares. Los cortes en esta tcnica suelen tener un grosor entre 2 y 10
micrmetros. Esta tcnica es lenta y laboriosa, requiriendo al menos de 15 o 16 horas para
obtenerse una muestra vlida para el corte.

Crioseccin: En esta tcnica los tejidos son endurecidos por congelacin. Esta tcnica se
utiliza para los tejidos que no soportan el proceso impuesto por la tcnica histolgica
tradicional, o cuando se requiere de resultados inmediatos (esta tcnica es mucho ms
veloz que la primera, 5-10 minutos). Se usa una variante del micrtomo denominada
criostato, alojado en una cmara de congelacin, que puede alcanzar temperaturas de hasta
-35 C segn el modelo. Se suele trabajar a temperaturas de entre -20 y -25 C.

Microscopa electrnica: Los tejidos son embebidos en resina epxica y luego se utiliza
un microtomo equipado con una hoja de vidrio o diamante para cortar secciones muy finas

(tpicamente de 60 a 100 nanmetros). Las secciones se tien y se examinan con un

microscopio electrnico de transmisin. A menudo a este instrumento se lo denomina
ultramicrotomo.

REA DE TINCIN Y MONTAJE (RUTINA):

La realizacin de tinciones es la prctica habitual en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas
las muestras, al no ser considerado procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en
los que se detecte mediante anlisis previos alguna alteracin.
Por lo general las placas se tien con la tcnica de hematoxilina/eosina u otra especial. La
muestra debe desparafinar y pasar por una serie de soluciones.y Finalmente, las muestras se
deshidratan y se montan para ser vistas al microscopio
La correcta realizacin, as como una buena interpretacin de lo observado, permite en muchos
casos el diagnstico de hemopatas.
Montaje: frecuentemente implica adherir los cortes histolgicos a un portaobjetos de vidrio
para su observacin al microscopio o anlisis. En algunos casos, se puede cultivar a las clulas
directamente sobre le portaobjetos.
En muestras de clulas sueltas, como las que se presentan en un extendido de sangre o de
fluidos biolgicos, la muestra puede ser aplicada directamente sobre el portaobjetos. Para
piezas de tejido de mayor tamao, se utiliza un micrtomo que corta la muestra en rodajas
sumamente delgadas. Estas rodajas son luego adheridas al portaobjetos por medio de una
sustancia que funciona como pegamento, ya sea una resina transparente, gelatina o clara de
huevo.
El montaje tiene por finalidad aumentar la resistencia mecnica de una muestra que de otra
manera sera extremadamente frgil, para que soporte el proceso de teido conservando lo ms
posible su estructura original.

Las tcnicas de tincion para histotecnologa se pueden clasificar en:

TCNICAS TINTORIALES
Tcnicas de rutina:
Se denominan de rutina o rutinarias aquellas tcnicas de uso comn y frecuente en el
laboratorio de Anatoma Patolgica, bien para la tincin de muestras tisulares o bien para la
tincin de muestras citolgicas. Constituyen uno de los pilares fundamentales del trabajo diario
y por ello su conocimiento terico y prctico son imprescindibles y exigibles, sirviendo para
evaluar de modo primario las habilidades profesionales de quien las ejecuta.
Debido a que el patlogo necesita una buena tcnica para realizar su trabajo, exigir al tcnico
la excelencia de la misma; por tanto, una buena tcnica no slo ser la carta de presentacin
del tcnico sino una de los principales motivos de conflicto en el caso de que la calidad no
alcance los niveles mnimos exigibles.

Tcnicas tintoriales en histologa. Hematoxilina-Eosina:

Es el ms conocido y utilizado cada da en todos los hospitales del mundo por poseer gran
poder de resolucin, por ser una tcnica econmica, y por tanto eficiente, y por ser fcil de
realizar.

La tincin manual con hematoxilina-eosina est siendo relegada al desuso debido a la

emergente introduccin en los laboratorios de Anatoma Patolgica de teidores automticos
que simplifican el trabajo. No obstante, el TEAP debe de conocer el protocolo o pasos a seguir
para la realizacin de dicha tcnica, y es lgica esta aseveracin.
La

Hematoxilina

es

un

colorante

natural

que

se

extrae

del

rbol

del

Hematoxyloncumpechianum, palo de campestre o palo azul de Centroamrica. Al oxidarse,

adquiere un color morado oscuro, pasando a ser denominado hematena. Al proceso de
oxidacin tambin se le conoce como maduracin de la hematoxilina.
La hematoxilina se utiliza en histologa para teir componentes aninicos (cidos) de los
tejidos, a los que aporta una coloracin violeta (tie intensamente los ncleos de las clulas, ya
que estos contienen cidos nucleicos ricos en radicales cidos). Tal como se obtiene de la
planta, e incluso tras sufrir el proceso de oxidacin, su capacidad de tincin es muy limitada.
Por lo tanto, debe combinarse con iones metlicos, especialmente sales de hierro o aluminio,
que acta como mordiente; de ah la importancia que tienen tanto una buena oxidacin como
un buen mordiente y su proporcin adecuada.
Las hematoxilinas que ms se utilizan son: la hematoxilina de Harris y la hematoxilina de Gill.
-

Hematoxilina de Harris: composicin

Hematoxilina................................................................................................. 500 gr.

Alumbre aluminio potasio sulfato 12-hidrato.................................................. 10 gr.
-

Hematoxilina de Gill II: composicin

Hematoxilina................................................................................................ 400 gr.

Alumbre aluminio sulfato 18-hidrato........................................................... 3.52 gr.
En cuanto a la eosina, se utiliza para teir los citoplasmas que son los componentes bsicos de
la clula, a los que aporta una coloracin rosada anaranjada.
Tie intensamente el citoplasma de las clulas y los componentes extracelulares. Se emplea en
solucin acuosa y alcohlica; centrmonos en la solucin alcohlica.
El resultado final de la tincin depender mucho de la manipulacin y la conservacin de los
reactivos, especialmente en el caso de la eosina pues la hematoxilina generalmente se

suministra en soluciones prediluidas con lo cual, el riesgo de prdida de intensidad de tincin

tras su uso es menor.
La eosina alcohlica es una frmula que est comercializada; aunque la calidad de contraste no
es la misma, es preciso valorar otros aspectos interesantes como pueden ser: el ahorro de tiempo
y de espacio (no se almacenan tantos reactivos), y la prdida de calidad tintorial debida a una
mala manipulacin del colorante.
Adems de los dos colorantes base de la tincin, la realizacin de la tcnica requiere:
alcoholes de diferentes graduaciones (70, 96, 100), xileno, alcohol cido, carbonato de litio
y agua corriente.
Realizacin de la tcnica:
1. Retirar los restos de parafina: utilizaremos un disolvente siendo el xileno el ms utilizado.
2. Hidratacin de la muestra: despus de la retirada de la parafina, hay que hidratar esa
preparacin y lo haremos con una batera de alcoholes de gradacin decreciente: 100 o
absoluto, 96, 70.
3. Coloracin nuclear con hematoxilina.
4. Diferenciacin: ahora nos tocara retirar el exceso de hematoxilina con alcohol cido
(eliminamos tincin no selectiva a de baja afinidad). La retirada del sobrante tiene como
finalidad dejar libre la entrada al colorante citoplasmtico.
5. Viraje: este paso hace que la coloracin morada de la hematoxilina se intensifique.
6. Coloracin citoplasmtica con eosina: en este paso hay que tener cuidado con el exceso de
eosina, para que haya un buen contraste ncleo-citoplasma.
7. Deshidratacin: retiraremos el agua del tejido para poder ms tarde poder introducir el medio
de montaje.
8. Aclarado: se llama as al paso anterior al montaje y consiste en pasar los cortes histolgicos
por xileno, que los limpiar de restos de alcohol absoluto y al mismo tiempo servir como
medio de disolucin para el DPX (medio de montaje).
9. Montaje: el montaje se realizar despus de haber pasado la muestra con anterioridad por el
disolvente, para la retirada de los alcoholes.

Tras su montaje, las preparaciones histolgicas son revisadas, etiquetadas y presentadas al

patlogo, quien en ltima instancia valorar la calidad de la tcnica.

Tcnicas utilizadas en citologa:

Las ms utilizadas son la tincin de PAPANICOLAOU y el PANPTICO RPIDO.

Las tcnicas nombradas con anterioridad se diferencian en el tiempo de respuesta ante el
diagnstico aunque su finalidad sea la misma.
-

Tcnica de Papanicolau La tcnica de Papanicolau (Pap):

Tcnica de eleccin para la tincin de las muestras de citologa ginecolgica exfoliativa

requiere una fijacin previa de las muestras, labor que debe de ser ejercida en el mismo
momento de la toma.
Generalmente es el personal auxiliar o el mismo facultativo quien realiza la fijacin. Para ello
slo hace falta disponer de un fijador en spray (cytospray o similar) siendo asimismo posible
realizar una fijacin utilizando lacas comunes.
-

Tcnica del panptico rpido:

Como su denominacin indica, se trata de un mtodo de tincin rpido y eficaz, utilizado

principalmente en aquellos casos en los que urge hacer un diagnstico o bien hacerse una idea
de las caractersticas generales de la muestra. Es por ello por lo que su uso principal se
desarrolla tanto en el acto intraoperatorio como en las muestras obtenidas por PAAF.
Esta tincin se practica principalmente sobre material sin fijar si bien puede ser aplicada a
muestras fijadas, previamente deshidratadas mediante inmersin en solucin alcohlica de 70.
Se trata de una de las variantes de la tincin de Romanowski, morada, que permite observar
la morfologa nuclear pero no la estructura del ncleo.
Realizacin de la tcnica:
1. Sumergir la/s preparaciones en la solucin 1 (fijador) durante 30 s.
2. Sumergir la/s preparaciones en la solucin 2 (colorante citoplasmtico) 15 s.
3. Sumergir la/s preparaciones en la solucin 3 (colorante nuclear) 30 s.

Posteriormente se realiza un bao con agua destilada.

Los portaobjetos se dejan secar al aire libre para proceder a continuacin a su montaje (este
montaje puede diferirse a un segundo tiempo tras la visualizacin del patlogo). En aquellos
casos en los que nos urja en exceso la visualizacin de la muestra, podemos realizar un bao
de diez pasadas o inmersiones en cada una de las soluciones previas a la aclaracin con agua.

WEBGRAFA
GUEVARA, V. (s.f.). UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO. Obtenido
de

Laboratorio

Patolgico:

https://es.scribd.com/doc/299272308/Informe-de-

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LIC.

MARTNEZ,

CHIMBORAZO.

Eliana.

Obtenido

(2015).
de

UNIVERSIDAD

Inclusin

de

NACIONAL

tejidos

en

DE

Parafina:

http://dspace.unach.edu.ec/bitstream/51000/1320/1/UNACH-EC-LAB.CLIN-20150016.pdf
TORRES, j; MARTNEZ, a; FERNNDEZ, p; GONZLEZ, r. (Octubre de 2011).
Obtenido de Metodologa y tcnicas del trabjo en el Laboratorio de Anatoma
Patologca : http://www.fatedocencia.info/3008/3008.pdf
WIKIPEDIA. (24 de Marzo de 2016). WIKIPEDIA, LA ENCICLOPEDIA LIBRE.
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https://es.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_histol%C3%B3gica
LABORATORIO Citopatolgico. (2016). INFORMACIN CITOPATOLGICA.
Obtenido

de

Laboratorio

de

Anatoma

Patolgica:

https://icpwiki.wikispaces.com/Laboratorio+de+Anatom%C3%ADa+Patologica

BIBLIOGRAFA:
ROSS, Pawlina; (2008/06); HISTOLOGA; Texto y Atlas color con Biologa Celular y
Molecular;

Quinta

Edicin;

Editorial

Mdica

Panamericana;

info@medicapanamericana.com / www.medicapanamericana.com

Disponible

en:

FIJADORES HISTOLOGICOS
En anatoma patolgica el primero objetivo consiste en observar la estructura histolgica lo
ms parecido posible a como se encuentra en el organismo, por lo tanto, el rgano debe ser
fijado despus de su extirpacin con el fin de que se conserve lo ms veraz posible sus
estructuras celulares,
Para de esta manera observar tanto el buen funcionamiento y estructuras que componen del
rgano, as como la patologa de mismo.
Pea ello se debe mantener toda su estructura qumica lo ms inalterada posible, de tal forma
que sus componentes celulares mantengan las mismas caractersticas que cuando dicho ser o
tejido estaban vivos.
Pea ello se debe mantener toda su estructura qumica lo ms inalterada posible, de tal forma
que sus componentes celulares mantengan las mismas caractersticas que cuando dichos tejidos
estaban vivos.
Los objetivos de la fijacin son:

Mantener las estructuras en el estado ms parecido al que posean en vivo.

Evitar la lisis celular y la proliferacin bacteriana

Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijacin detiene los procesos vitales,
pero en ciertas condiciones mantiene las actividades de algunos componentes
moleculares, por ejemplo, la actividad de algunas enzimas

Caractersticas de un Fijador Ideal

Las caractersticas que debe tener un buen fijador son las siguientes

Debe tener la capacidad de bloquear la autolisis inmediatamente (Destruccin celular)

Debe poseer efecto microbicida, impidiendo la accin bacteriana, la cual provoca la

degradacin del tejido

No debe provocar retracciones o distorsiones las cuales pueden alterar sus

arquitecturas

Debe cuidar la textura y composicin tisular que favorezca la inclusin, el corte y la

coloracin de la materia histolgica

CLASIFICACIN DE FIJADORES CON FORMOL Y SIN FORMOL

Los fijadores se clasifican en fijadores qumicos y fsicos:

FIJADORES QUMICOS
Dependiendo del mecanismo de actuacin sobre los tejidos podemos clasificar los fijadores en
cuatro lquidos simples:
FIJADORES POR DESHIDRATACIN TISULAR
Alcohol etlico y acetona.
Son sustancias altamente higroscpicas es decir absorben agua actan eliminando tanto el agua
libre como el agua ligada a las protenas de forma que estas ltimas precipitan y disminuyen
su solubilidad. Este cambio proteico es conocido con el nombre de desnaturalizacin y provoca
importantes alteraciones en la organizacin y estructura celular y tisular, por tanto, estos
agentes fijadores inducen grandes cambios en la morfologa orgnica sobre todo si se emplean
como agentes fijadores aislados. Alguno de ellos como por ejemplo la acetona, altera poco la
estructura antignica tisular y ello se debe a que estos fenomenitos inducidos son reversibles
en parte tras la rehidratacin.
El fundamente molecular de la accin deshidratante de los alcoholes y la acetona, est en la
competicin que establecen con las protenas por las molculas de agua cuando se encuentra
en soluciones concentrada, los principales agentes fijadores por deshidratacin son alcoholes
metlico y etlico, acetona y cloroformo.
-

Alcohol etlico: lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor

agradable. En el comercio se puede encontrar puro en cuyo caso tiene fuertes gravmenes
tributarios para evitar su utilizacin clandestina para evitar la fabricacin de bebidas
alcohlicas, o bien lo tenemos desnaturalizado diluido al 90 o 70 %. Como fijador nico
utilizaremos alcohol a unas concentraciones entre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 70-90
ml de alcohol puro y se lleva hasta 100 con agua destilada.

La fijacin ms potente va a corresponder a las soluciones ms concentradas, pero a altas

concentraciones la capa externa del tejido se endurece en exceso, lo que impide la penetracin
del fijador a la parte interna de la pieza.
El tiempo de fijacin correspondiente a una pieza de 5mm de espesor es dos a cuatro horas
renovando unas 3 veces el lquido.
Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas enzimas titulares, fija los
pigmentos y se emplea en las extensiones citolgicas. Como altera escasamente la estructura
antignica de los tejidos es un buen agente fijador para Inmunohistoqumica.
Entre las ventajas del alcohol estn:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo
Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la anterior propiedad
aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable agente bactericida y por tanto
un buen conservante.
Entre sus desventajas tenemos los siguientes:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo: es incompatible con muchos fijadores: KCr2 o el OsO3
lo que limita su participacin en muchas mezclas fijadoras.
No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos nucleicos y adems disuelve
parcialmente los lpidos.
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae de los
tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente
Prepara ms la tincin porque carece de efecto mordiente
Puede dar origen a fenmenos de desplazamiento de sustancias.

Acetona: es un lquido transparente, inflamable, muy voltil y de olor dulzor.

Deshidrata rpidamente y considerable el tejido por lo que es poco utilizable. El tiempo de

fijacin nunca exceder de dos horas y en piezas delgadas son recomendables 20 minutos. Su
uso como fijador est prcticamente limitado a los mtodos hito qumicos e
Inmunohistoqumica porque conserva muy bien la estructura antignica y la actividad
enzimtica, a veces tambin se utiliza en microscopia electrnica para la fijacin del material
que se va a incluir en resinas acrlicas. Se emplea generalmente sin diluir a 4C, entre sus
inconvenientes ms notables provocan una gran contraccin tisular y por tanto grandes
artefactos que suelen hacer intil su empleo en el microscopio ptico convencional otro de sus
inconvenientes es que debido a su rapidez de accin y a su capacidad de endurecimiento es
imprescindible controlar el tiempo de fijacin.
FIJADORES QUE ACTAN POR CAMBIOS EN EL ESTADO COLOIDAL DE
LAS PROTENAS
Las protenas son molculas anfteras (pueden comportarse como cidos o bases, segn el pH)
cuyo punto isoelctrico se encuentra en torno a un pH de 5.8. En este punto la estabilidad de
las molculas es mnima y su disociacin mxima. sta escasa estabilidad molecular se debe a
que las protenas en este punto se desprenden del agua lquida o endgena. Por este motivo las
protenas precipitan en presencia de determinadas cidos que disminuyen el pH de la disolucin
hasta alcanzar el punto isoelctrico.
Todos los fijadores de este grupo son de carcter cido y se emplean formando parte de mezclas
fijadores. Poseen adems una gran velocidad d penetracin en los tejidos y algn poder de
descalificacin. Entre los principales fijadores tenemos:
-

cido actico: Lquido transparente y fuerte olor avinagrado. Sus vapores son muy

inflamables en estado puro se denomina: c. Actico glacial. Cuando la temperatura ambiente

disminuye o aumenta, disminuye por debajo de los 10C tiende a solidificarse en forma de
agujas cristalizadas muy custicas. Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y 5 %
formando parte de mezclas fijadores o de soluciones decalcificantes. Entre las ventajas que
tiene es el fijador ideal para ncleo protenas y acido nucleicos y otra es precipitar protenas
sin sustraer el agua de los tejidos porque no es giroscpico y produce cierto edema intersticial
que compensa la excesiva refraccin pausado por otros agentes fijadores. Entre los
inconvenientes es mal fijador de citoplasma y membranas celular y destruye mitocondrias.

cido tricloroactico: Son cristales incoloros custicos, solubles en agua en solucin

al 5 % fija los nervios de 8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido
porque el edema que produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se usa
mezclado con otras sustancias.
-

cido sulfosaliclico: Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las

coloraciones endurece ptimamente los tejidos, pero no los contrae despus hay que lavar el
tejido con agua, pero la fijacin debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas.
-

cido crmico: Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras,

se utiliza bastante en microscopia electrnica entre las ventajas que tiene:

Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean colorantes
bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con fijadores habituales como el
formol y alcohol; escasa velocidad de penetracin en trozos pequeos tarde varios das en
penetrar en la pieza e impregna de coloracin verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos
abundantemente en agua destilada tras el uso de ese acido, los tejidos quedan excesivamente
blandos.
FIJADORES POR FORMACIN DE SALES CON LOS TEJIDOS
En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o un
derivado orgnico como el cido pcrico que son susceptibles de formar con los tejidos sales
denominados protenatos metlicos o picratos por lo general todos los agentes d este grupo
poseen gran velocidad de penetracin y fijacin porque la formacin de la sel, se produce
instantneamente.
Se origina un efecto barrero al actuar los proteinatos formados superficie como dos
mecanismos obstaculizando penetracin fijadora adems se produce sobre el tejido
precipitacin metlica lo que provoca un notable endurecimiento que obliga a emplearlo en
mezclas fijadoras que amortigen este efecto. Entre los principales fijadores tenemos:
-

Cloruro de mercurio o sublimado: es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay

que usarlo bajo campana se usa en soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la
combinacin de los iones de Mercurio con los grupos cidos de las protenas especialmente

con los de carcter carboxlico, hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos fosfricos de las
nucleoprotenas.
Ventajas:
Es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el de eleccin
para patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se apoya normalmente en la
observacin de finos detalles nucleares y citoplasmticos.
Es un excelente mordiente por lo que produce intensa y brillante coloracin nuclear y
citoplasmtica.
Desventajas:
No es un buen bactericida por lo que no es un buen lquido conservante tiene escasa capacidad
de penetracin por lo que requiere fraccionamiento cuidadoso del tejido. Otro de los
inconvenientes es que si se prolonga demasiado tiempo de actuacin contrae y endurece los
tejidos hasta dificultar el corte en el micrtomo, por eso nunca deben sobrepasarse las 4 horas
de fijacin. Tras haber cumplido esta y comn paso previo a la inclusin, los tejidos pueden
conservarse indefinidamente en alcohol etlico al 70%. Otro de los inconvenientes es que de
origen a precipitados metlicos de color pardo sobre los tejidos lo cual dificulta su observacin
al microscopio estos precipitados pueden eliminarse mediante tratamiento del tejido previo a
la coloracin con soluciones alcohlicas yodales semejantes al LUGOL yodadas.
-

Dicromato Potsico: es un polvo amarillento que reacciona con las protenas para

formar cromatos, se utiliza en disolucin acuosa al 1-2%, fija las protenas por lo que las
mitocondrias quedan perfectamente conversadas y da un aspecto homogneo al ncleo despus
de la fijacin del dicromato deben lavarse abundantemente con agua.
Ventajas:
Es que tiene un fuerte efecto mordiente excelente fijador para lapidar complejos para mielina,
mitocondrias y aparato de Golgi que los contienen en abundancia. Su utilizacin es
indispensable para tcnicas de impregnacin argntica de las clulas del sistema nervioso
central.
Desventajas:

El primero de ellos es incompatible con alcohol y formol, posee baja velocidad de penetracin
y endurece escasamente los tejidos lo que puede dificultar el corte en el micrtomo. Otro:
provoca artefactos titulares como la aparicin de vacuolas citoplasmticas, retracciones y
cambios en la morfologa nuclear. Otro: disuelve la cromatina por lo que es necesario en estos
casos asociarlo con cido actico dentro de mezclas fijadoras.
Los tejidos han de ser lavados despus de fijados en una solucin salina o tamponada para
evitar el depsito de pigmento verde que puede producirse en el curso de la inclusin o
coloracin posterior.
-

cido Pcrico: En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color

amarillo muy txicas de carcter explosivo.

Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las confieren gran
apetencia por colorantes cidos. Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un excelente fijador
estructural que conserva adecuadamente la composicin proteica de los tejidos. Controlando
adecuadamente el tiempo de fijacin produce una ptima contraccin de los tejidos que
favorece su procesamiento histolgico.
Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no disuelve el glicgeno
ni los lpidos es el fijador de eleccin para estas sustancias.
Posee una leve accin decalcificante por lo cual puede emplearse como fijador para las
muestras de tejido seo.
Se maneja fcilmente en soluciones debido a la gran estabilidad que tiene.
Desventajas:
En estado puro el cido pcrico es explosivo si se somete a color hay que mantenerlo alejado
de fuentes de color, tampoco deben dejarse evaporar sus disoluciones para evitar la formacin
de precipitados. Si se prolonga el efecto de fijacin que es de 4-18 horas dependiendo de
tamao pieza aparecen inconvenientes por una excesiva retraccin tisular. Sobre todo, si la
pieza ha sido inadecuadamente lavada en agua y luego deshidratada.

Tie los tejidos de color amarillo y si no se elimina completamente antes de la inclusin en

parafina provoca un continuo deterioro de la estructura tisular que pueda hacer imposible su
estudio histopatolgico algunas semanas despus del procesamiento.
La eliminacin se realiza mediante lavados sucesivos en alcohol etlico al 70-80% o en una
solucin saturada de LiCO4 en alcohol de 70 es incompatible en la inclusin en celoidina.
-

Acetato de uranilo: Es una sal soluble en agua, cristalizado de color amarillo, se

descompone con la luz, no endurece los tejidos, se usa en soluciones al 2-3% normalmente
mezclado con OsO3 y despus de la fijacin hay que lavar el tejido abundantemente con agua.
FIJADORES QUE ACTAN POR RETICULARIZACIN DE LAS PROTENAS
El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la
desnaturalizacin de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el agente
que provoca el fenmeno induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno determinantes
de la estructura helicoidal de las molculas proteicas, con la formacin posterior de una malla
reticular polipeptdica por asociacin qumica entre los grupos activos desenmascarados por el
lquido fijador.
Entre los principales fijadores tenemos:
-

Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se vuelve lquido a 21C, es txico

y con un olor caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y en ste estado en concentraciones

entre 35-40% y estabilizado con metanol se denomina formalina pura o formol con la accin
del fro la formalina pura tiende a precipitar y esta situacin suele ser reversible aadiendo unas
gotas de NaOH y concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo se emplea a
una concentracin del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta concentracin
se obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en formacin salina o
tampn.
Ventajas:
Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina en
Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura tisular.

Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio ptimo para
conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del sublimado
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la coloracin
tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como agente
de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier impregnacin argntica.
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes modificando
la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador completa a partir de las 36
horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3 horas. Por este motivo la formalina es un
fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas en tcnicas de histotecnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en Anatoma
patolgica.
Desventajas:
Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa nasal.
Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en cido frmico
y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromatina nuclear por eso con el
paso del tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma para evitar este
inconveniente el formol debe guardarse en frascos opacos o emplearse en forma de solucin
neutra o tamponado.
Se incorpora progresivamente al tejido con lo cual se consumen durante el proceso de fijacin
por lo que debe encontrarse en exceso
Es debido a que se incorpora al tejido y que tiene baja presin osmtica provoca la
incorporacin de agua a los espacios intratisulares por lo que el peso y el volumen del tejido
una vez fijado se aumenta de manera notable. Este efecto se puede prevenir utilizando formol
salino o tamponado.

Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que contienen hierro
y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les dan una coloracin verdosa.
Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido frmico confiere
a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha sangre da origen a un pigmento
formlico que es negro o pardo oscuro que precipita en aglomeraciones irregulares sobre
estructuras preexistentes. Este pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en alcohol
absoluto saturado con cido pcrico compuesto por 10, 12 gramos de pcrico en alcohol etlico
al 95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol amonacal que es el de
1 a 5 partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al 70%. En este caso se tratan
los cortes durante 15 minutos, seguidos de dos baos de agua destilada y despus otro de
alcohol al 70% de 5 minutos de duracin cada uno.
Adems, existen soluciones fijadoras simples que contienen formol:
Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de
disoluciones de formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de cloruro
sdico en 1000 mililitros de formalina al 10%.
Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una
pequea cantidad de carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del
recipiente neutraliza esta sal el exceso de cido frmico que se produce y aunque puede
utilizarse todava para la formacin de tejidos en la prctica ha sido desplazada por las
soluciones tamponadas.
Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque
osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento
formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se preparada la siguiente manera, como
amortiguador se emplea el tampn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula:
FORMALINA PURA100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**) 6.5 gr.
AGUA DESTILADA...900.0 gr.

Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas

de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial a 9 partes
de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.
-

4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.

Anhidro: hay que hidratarlo despus.

Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas

tcnicas de histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una solucin de

formalina neutra o tamponada al 10%
Las soluciones de mezclas fijadoras son de 2 tipos:
-

Formaldehdo: fue introducido como fijador en 1896 por el bilogo Federic Blum,

durante un experimento que realizaba con ratones que presentaban antrax, mientras los trataba
con distintos desinfectantes. Su frmula molecular es H2CO. El formaldehdo es un gas
incoloro de olor picante. Es muy soluble en agua y licua en recipiente cerrado a 19C,
alcanzando una concentracin final del 40% p/v. El formaldehdo se lo conoce tambin como
formalina, metanal o formol, aunque esta ltima denominacin ha llevado a serias discusiones,
ya que el sufijo ol se lo emplea para designar alcoholes y el formol es un aldehdo. En estado
monomrico, el formaldehdo se presenta en agua como metilenglicol (HO-CH2-OH), el cual
se une entre dos protenas muy prximas, a modo de puente o, entre dos sitios compatibles de
una misma protena. Si la solucin queda estacionada durante largo tiempo, comienza a
polimerizar dando origen a un polmero de peso molecular mltiple (de 6 a 100 unidades),
conocido

como

paraformaldehdo:

HO-CH2O- (CH2-O-CH2-O-CH2-O-CH2)n -OCH2-OH (Polmero lineal)

Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios se encuentra en disolucin al 25%.

Mecanismo de actuacin es el mismo que el formaldehdo y como fijador se emplea en

concentraciones entre el 1 y el 3%.
Acta sobre las protenas, asegurando su mxima preservacin qumica y espacial. Sus
potenciales de oxidacin estn prximos al formol. Son compuestos miscibles en agua y el
poder de penetracin es mayor, a pesar que los pesos moleculares de estos son mayores que el
correspondiente al formol.

Ventajas:
Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una excepcional
capacidad para preservar la morfologa celular.
Se emplea para fijacin de tejidos por perfusin en patologa.
Desventajas:
Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos de tejido no pueden tener
volumen superior a unos pocos milmetros cbicos.
Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que impide prolongar el tiempo
de fijacin por encima de las 3 horas.

Tetraxido de Osmio: OsO4: En el comercio se encuentra en forma de cristales

amarillentos solubles en agua, muy voltiles y txicas. Acta igual que el formol y se prepara
como agente fijador al 1% en tampn fosfato.
Ventajas:
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa electrnica
especficamente como 2 fijador.
Desventajas:
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en recipientes opacos
y oscuridad.
Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que se trabaja
Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa respiratoria. Su
manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de gases para prevenir la aparicin
de queratitis.
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben tener muy poco
volumen.

Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar

abundantemente los tejidos tras utilizarlo.
Es que inactiva por completo las enzimas y altera notablemente la composicin antignica del
tejido.
La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas
mezclas fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus
inconvenientes. Desde un punto de vista general se clasifican en dos grupos: fijadores con
formol y sin formol.

FIJADORES QUE CONTIENEN FORMOL

Lquido de Bouin (1897): Solucin muy usada como alternativo a la formalina cuando
queremos fijar ciertos Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y tejido embrionario
en general. Sin embargo, no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los cuales
provoca una severa distorsin.
Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO...750.0 ml
FORMALINA CONCENTRADA...250.0 ml
C. ACTICO GLACIAL...50.0 ml
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN2 A 24 HORAS
El lquido de Bouin es un buen fijador que debe preservar la estructura del tejido con una
textura suave y delicada. Suele ser tejido formalina-fijo mordantada con solucin de Bouin
para mejor resultado en la coloracin del manchas trichrome. El cido actico en este
fijador lisis glbulos rojos y disuelve pequeos depsitos de hierro y calcio en el tejido.
Cuando se utiliza la solucin de Bouin, pueden surgir varios problemas potenciales. Debido al
formol en la solucin, pigmento de formol puede estar presente al ver las secciones de tejido
bajo el microscopio. Tejido mojado debera fijarse en solucin de Bouin durante menos de 24

horas. Exceso de cido pcrico se deben lavar de tejido usando varias soluciones de alcohol y
agua o tincin de calidad puede deteriorarse con el tiempo.
Tejido mojado fijada en solucin de Bouin debe almacenarse en un alcohol y solucin de agua
en lugar de solucin de Bouin. Puesto que la solucin de Bouin contiene formaldehdo, cido
pcrico y el cido actico, deben tomarse las precauciones de seguridad apropiadas para estas
sustancias y regulaciones seguido. En particular, teniendo en cuenta que el cido pcrico puede
ser explosivo, sensible a la friccin y el choque cuando se seca y en contacto con algunos
metales puede formar picrates metales inestables.
Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido de Bouin especialmente
indicado para la fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible
controlar el tiempo de fijacin de la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso
conservar las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.
Se prepara de la siguiente manera:
ACETATO NEUTRO DE COBRE2.5 gr.
C. PCRICO4.0 gr.
FORMALINA CONCENTRADA10.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL1.5 ml.
AGUA DESTILADA100.0 ml.
Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se aade
el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial.
Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila
entre 48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin
Bouin alcohlico (fijador de Dubas-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin
cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad de
penetracin mucho ms elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin especfica
de sustancias hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su disolucin.
Se prepara de la siguiente manera:

ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.

C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA...30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5
milmetros es de 2 a 3 horas.
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico
con la adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los
fijadores de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre.
Se prepara de la siguiente manera:
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.
Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua
corriente durante unas horas.
Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de
tejido nervios. Se prepara de la siguiente manera:
Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.
Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN STOCK90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA10.0 ml.
El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos
han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70%.

 Lquido de Karnovsky (1946): o tambin conocido como Glutaraldehidoparaformaldehido, se utiliza especialmente para la fijacin de muestras destinadas al estudio
con microscopio electrnico.
Este fijador est compuesto por:
FORMALDEHDO AL 10%20 ml
GLUTARALDEHDO AL 50%. 10 ml
CACODILATO DE SODIO 0.2M70 ml
Tcnica para el uso del lquido de Karnovski:
Aadir 10 ml de glutaraldehido al 50%.
Verter a la solucin, hasta alcanzar los 100 ml con tampn fosfato 0,1 M y pH 7.2
Concentraciones menores de esta mezcla dan lugar a resultados deficientes para la observacin
de cortes en microscopa electrnica de transmisin. Ello se debe a que el contenido hdrico de
las vacuolas es alto y al penetrar el fijador, su concentracin intracelular desciende
considerablemente. De este modo estructuras que rpidamente degeneran, como las
membranas, no se aprecian con nitidez, por una deficiente fijacin.
El fijador se lleva al campo en nevera porttil para asegurarnos que no sobrepasen los 4C. El
tiempo de fijacin en esta mezcla nunca debe ser inferior a 12 horas para las muestras que
nosotros manipulamos, aunque frecuentemente no se observa hundimiento de estas en el fijador
hasta pasadas 20 horas. Podemos decir lo mismo que se indicaba para el fijador anterior en lo
referente a la dificultad de penetracin por la naturaleza de las flores y los pelos hidrfobos; es
recomendable, sobre todo para las flores con un grado de madurez elevado fijar al vaco, esto
supone una dificultad aadida al tener que mantener las muestras a baja temperatura en nevera;
utilizamos para ello recipientes hermticos en los que se hace el vaco con una bomba de vaco
manual y luego pasamos a la nevera.
Hay que lavar el fijador, como mximo, a las 24 horas, para evitar el excesivo endurecimiento.
El lavado se lleva a cabo en tampn fosfato 1 molar a pH 7.2. Se pasan las muestras a un frasco

con abundante tampn y se hacen 5 cambios de 1/2 hora cada uno. En el tampn y en nevera
podemos mantener las muestras durante varios das sin que se aprecie ninguna alteracin.
Lquido de Gendre (1937): constituye una variante de la mezcla de Bouin y se la
emplea con muy buenos resultados para la fijacin de Glucgeno. Tras fijar, las muestras se
deben lavar con varios baos de etanol al 70.
Este fijador est compuesto por:
ACIDO PCRICO......80 ml (Solucin etanlica saturada)
FORMALDEHDO PURO...15 ml
CIDO ACTICO GLACIAL5 ml
Lquido de Lewitsky (1958): esta mezcla permite la preservacin de depsitos grasos
de tejidos animales y, en especial, de vegetales. En nuestro laboratorio se lo utiliza con el
mismo propsito en tejidos embrionarios con muy buenos resultados de fijacin.
Este fijador est compuesto por:
ACIDO CRMICO AL 1%50 ml
FORMOL AL 10%...... 50 ml
Lquido Anatech Ltd. o Formol-zinc (1988): esta mezcla no tamponada es un
excelente fijador para inmunohistoqumica. La solucin tamponada se prepara agregando 1.6
gr de cloruro de zinc a 1000 ml de Formol-PBS pH 7,2.
Este fijador est compuesto por:
FORMALDEHDO......100 ml
CLORURO DE SODIO...4.5 gr
SULFATO DE ZINC...1.6 gr
AGUA DESTILADA...900 ml

 Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia

casi idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de
Zenker.
La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor utilidad
de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de hecho, la fijacin en
una mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente imprescindible para el
diagnstico morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Es debido a
la gran importancia que se da a la observacin de finos detalles nucleares como es la presencia
o no de hendiduras o repliegues nucleares y del nuclolo para catalogar un tumor maligno de
ganglios linfticos, o de mdula sea (leucemias) como de alto o bajo grado de malignidad y
por tanto recomendar la teraputica ms oportuna. Adems, estas soluciones B5 Zenker formol
son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo y para fibrina.
Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor
conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.
Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo
reduce el sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de
un precipitado blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que
posee el sublimado, el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems, el espesor
mximo de las muestras no debe superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de la
mezcla fijadora. Debido a la aparicin de precipitados mercricos sobre los tejidos las
secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de ser sometidas a un tratamiento especfico
mediante soluciones que eliminan estos depsitos. Tras la fijacin los tejidos se pueden
conservar indefinidamente en alcohol etlico al 70-80%
SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA 2.0 ml.
ELIMINACIN DEL PIGMENTO MERCRICO O DESZENKERIZACIN
Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones yodadas y
utilizamos:
-

Solucin de LUGOL:

YODURO POTSICO2gr.
CRISTALES DE YODO 1gr.
ALCOHOL ETLICO 70-80%................................................100 ml.
- Solucin de tiosulfato sdico:
TIOSULFATO SDICO5gr.
-AGUA DESTILADA...100ml.
Despus de la desparafinacin hay que tratar los cortes durante diez minutos con la solucin
yodada a continuacin lavar bien en agua destilada despus decolorar durante dos minutos en
la solucin en agua corriente durante 10 minutos antes de realizar la coloracin.

FIJADORES QUE NO CONTIENEN FORMOL

Lquido de Zenker: Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y del
dicromato potsico. En la prctica habitual ha sido sustituido por B5. Su empleo ha quedado
prcticamente restringido al proceso de refinacin-decalcificacin a que son sometidas las
biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin inicial con B5.
Este fijador est compuesto por:
SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL 5.0 ml.
El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca
progresivamente, por lo que debe recomponerse antes de su uso.
El tiempo de fijacin puede ser ms prolongada que con la solucin de b5 porque el cido
actico que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobrepasar las 48
horas. Tras la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2 horas.
Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para
los hidratos de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin
fijadora es extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo,

produce una excesiva retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos, as como una
pobre conservacin estructural del ADN.
Este fijador est compuesto por:
ETANOL ABOSLUTO60.0 ml.
CLOROFORMO30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL10.0 ml.
El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse
directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar
demasiado la deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol
en la composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin tisular, y para
conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto. (SPUNIC, s.f.)

LAVADO POSTFIJACIN
Es el aclarado que se realiza despus del proceso de fijacin para eliminar los residuos del
agente fijador, con el fin de limitar el tiempo de contacto entre el fijador y el tejido o impedir
el contacto del fijador con los medios de inclusin utilizados, para proseguir el tratamiento de
la muestra, a veces algunos colorantes alteran su efecto si la pieza contiene restos de
determinados fijadores, como es el caso por ejemplo del cido pcrico. No todos los fijadores
deben lavarse igual:
-

Las piezas fijadoras en formalina se lavan con agua prolongadamente.

Fijadas por cido pcrico hay que introducir las piezas hasta quitar color amarillo.

Fijadas por tricloroactico hay que introducirlas en alcohol de 90%.

CONSERVACIN DE TEJIDOS
Cuando se practica un estudio histolgico, solo se incluyen una pequea porcin del material
remitido para el anlisis. El resto se guarda de reserva para estudios complementarios. Casi
nunca es posible conservar el tejido en el mismo lquido utilizado para la fijacin.

La solucin conservante ms indicada en la mayor parte de los casos es el alcohol etlico al

70% en l adems de iniciarse la deshidratacin, el tejido una vez fijado puede conservarse
durante meses sin apenas sufrir cambios, como alternativa ms simple y siempre que no se
desee preservar el tejido para posteriores estudios inmunohistoqumicos, pueden usarse como
conservante una solucin de formalina neutra o tamponada al 10%.
Cuando lo que se produce exclusivamente es derramar la intrusin del tejido en parafina sobre
todo para pequeas muestras delicadas se puede realizar la deshidratacin completa en
alcoholes crecientes y conservarlos en butanol que permite una conservacin indefinida y
mejora la textura tisular.
Cuando se deseen conservar rganos completos procedentes de necropsias podemos utilizar las
soluciones de JORES.

JORES I:
SULFATO SDICO22 gr.
SULFATO POTSICO1 gr.
CLORURO SDICO9 gr.
BICARBONATO SDICO18 gr.
FORMOL 10%.............................................................................................50 ml.
SOLUCION ACUOSA SATURADA DE HIDRATO DE CLORAL50 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P.1000 ml.
JORES II:
ACETATO POTSICO300 gr.
GLICERINA600 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P. 1000 ml.

En recipiente bien cerrado se conserva hasta aos.

RESULTADOS E INTERPRETACIN DE LA FIJACIN

En todo proceso de fijacin es indispensable saber juzgar crticamente la calidad de los
resultados obtenidos. Para la correcta preservacin de las estructuras es fundamental que las
relaciones espaciales de los diferentes componentes del tejido no se modifiquen. As, por
ejemplo, un trombo debe permanecer adherido a la pared del vaso o una costra a la piel. Estos
componentes tisulares difcilmente se desprendern si la fijacin se hizo adecuadamente.
Uno de los cambios ms frecuentes que ocurren durante la fijacin son las dehiscencias de los
tejidos, que, por lo general, se producen por cambios rpidos y evidentes en la posicin relativa
de unas zonas respecto a otras. Esto sucede, por ejemplo, entre un tejido denso, con bajo
contenido en agua y otro menos compacto rico en agua, tal como sucede entre la capa muscular
y la submucosa del intestino. Aqu es comn que durante la fijacin se produzca una
dehiscencia que separa casi completamente ambas capas. Esto es debido a que el grado de
contraccin de los tejidos producido por el fijador es distinto en cada uno.
Si las fuerzas que tienden a disociar estos tejidos son considerables, aparecen pequeas grietas
tisulares dando lugar a espacios tan reducidos que pueden inducir a error y ser considerados
como autnticos componentes del tejido. Un caso particular suele observarse debajo de los
epitelios, donde se originan espacios artificiales y que fueron considerados durante largo
tiempo como algo real. Por el contrario, durante mucho tiempo se discuti sobre el carcter
artificial de los espacios de Disse en el hgado y de los espacios de Virchow-Robin en el
cerebro.
En muchas ocasiones, los cambios de volumen de los tejidos provocados por accin del fijador
se producen de manera uniforme; sin embargo, en otras, de forma irregular. La calidad de una
imagen microscpica se considera buena, si la informacin que proporciona el corte histolgico
concuerda con la naturaleza real del tejido en estudio. Para ello, es indispensable ajustarse
siempre a las mismas pautas de trabajo, que permitan lograr uniformidad y reproducibilidad de
imgenes histolgicas para llegar a un diagnstico valedero.

LAVADO DE LAS MUESTRAS FIJADAS

Una vez que las muestras biolgicas han permanecido en el reactivo fijador el tiempo
suficiente, se deben retirar del mismo y se procede al lavado en abundante lquido, con el
propsito de eliminar los restos del agente fijador. Una accin muy prolongada en estos
reactivos podra perjudicar, en trminos generales, la coloracin ulterior de los cortes, incluso
alterar la estructura del tejido por maceracin. De esta manera, se debe considerar que cuando
los especmenes se fijan con xidos de osmio o cromo para grasas se deben lavar con agua
comn durante 24 horas; mientras que las fijadas con cido pcrico se deben colocar en etanol
a 70 hasta que las piezas biolgicas no liberen ms cido. Los cortes histolgicos de muestras
que han sido fijadas con sales de mercurio se deben deszenkerificar con lugol y luego lavar con
tiosulfato de sodio, a fin de eliminar este metal bivalente que produce leucocompuestos en los
mtodos

de

tincin

de

rutina.

Cuando las muestras estn destinadas a estudios de biologa molecular, tales como hibridacin
in situ, PCR in situ, deteccin de apoptosis (tcnica TUNEL o Annexin V, Bcl-Bax, Caspase
3), inmunohistoqumicos, y son fijadas con reactivos aldehdicos (formol, glutaraldehdo,
glioxal), los cortes se deben lavar con soluciones buffer a pH 7.2, a fin de eliminar el fijador y
preservar los sitios qumicos del tejidos que han de reaccionar con los reactivos
correspondientes. Asimismo, las muestras fijadas con etanol, metanol o acetona, los cortes se
deben lavar con soluciones buffer. Los especmenes destinados a microscopa electrnica y
fijados con mezcla de Karnovsky se deben lavar con varios baos de buffer cacodilato de sodio
y luego con agua destilada, a fin de evitar precipitados del osmio que se utiliza durante la
posfijacin.
Se recomienda que las muestras de tejido nervioso fijadas en formol para la realizacin de
mtodos argnticos, deban lavarse con agua comn adicionada con unas gotas de piridina o
amonaco. Sin embargo, he observado que los resultados obtenidos con impregnaciones
argnticas de tejido nervioso fueron satisfactorios sin el agregado de estas sustancias. (
TOMASI Vctor , s.f.)

WEBGRAFA:
TOMASI

Vctor

(s.f.).

BLOGS.

Obtenido

de

Fijadores

Qumicos:

http://educacionhistotecnologiafijaciondos.blogspot.com/
SPUNIC.

(s.f.).

EL

RINCN.

Obtenido

de

Fijadores

(Procesado

de

Tejidos):

http://html.rincondelvago.com/fijadores_procesado-de-tejidos.html

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO CLINICO E HISTOPATOLOGICO

TCNICAS HISTOLGICAS
TEMA:
Fijadores en Formol
INTEGRANTES:

 Kelly Gmez
Evelyn Nogales
Evelyn Quispe
DOCENTE:
Lic. Ivn Peafiel Mndez
FECHA:
30/05/2016
PERIODO
Abril Agosto

Fijadores en formol
Funcionamiento del proceso de fijacin tisular.
En anatoma patolgica el primer objetivo consiste en observar la estructura tisular. Lo ms
parecido posible a como nos lo encontraos en el organismo, pero al no poder estudiarla dentro
de este organismo sino separarla, el rgano de este estudio ha comenzado ya su proceso de
descomposicin por lo que para un mejor estudio de este rgano ha de ser fijado despus de su
extirpacin con el fin de que se conserve lo ms veraz posible de esta, manera se observaran
tanto el buen funcionamiento y estructura del rgano como la patologa de esta.
Los fiadores adems de conservar intacta la estructura durante un periodo de tiempo paralizan
todos los procesos orgnicos. (Montero, 2008)

Fijadores simples:

No coagulantes: Producen un efecto aditivo con las protenas: Formaldehdo.

FIJACIN

Con la palabra fijacin queremos indicar, en este campo de la Anatoma Patolgica, el

procedimiento mediante el cual detenemos la destruccin, la autlisis de las clulas y el
material extracelular, que se producira en las biopsias y, en general, en cualquier muestra de
material orgnico, una vez separado del organismo al que perteneca, por la accin de las
enzimas liberadas por los lisosomas destruidos. Pero no es slo esto (esto lo podramos llamar
conservacin); con la FIJACIN se pretende adems, mantener la ordenacin espacial
tridimensional de clulas y fibras ( Baker, 1963)
La FIJACIN pretende no slo la conservacin de la microanatoma, sino adems de los
componentes qumicos tisulares.
Las clulas y los tejidos separados del organismo comienzan a experimentar alteraciones
estructurales debido a la anoxia, modificaciones del ph, procesos de autlisis por accin
enzimtica, que, conforme transcurre el tiempo, se acentan.
Por eso, para conseguir preparaciones duraderas se somete a los tejidos a la accin de sustancias
qumicas que detengan en forma rpida esos procesos y que, al mismo tiempo, conserven la
estructura que los elementos histolgicos presentan en vida. Los reactivos que cumplen esta
finalidad se denominan fijadores.
Son generalmente sustancias qumicas que coagulan o precipitan los prtidos celulares,
endurecen los tejidos y facilitan el tratamiento posterior. Un buen fijador impide la alteracin
de las estructuras no dando alteraciones artefactuales, no debe dificultar la coloracin posterior,
sino conservar o acrecentar su afinidad con los colorantes, no debe retraer excesivamente los
tejidos, ni volverlos friables o quebradizos, poseer alto poder de penetracin para asegurar una
fijacin correcta y econmica. El empleo de fijadores reductores (formol, alcohol metlico y
etlico) permite resultados satisfactorios tanto en el ncleo como el citoplasma celular.

FORMOL
Compuesto qumico altamente voltil y muy inflamable. Su frmula es H2 C=O (un tomo de
carbn unido a dos tomos de hidrgeno y unida a un tomo de oxgeno). Su descubridor fue
el qumico alemn August Wihelm von Hofmann, en 1867. Se le conoce tambin como
metaldehdo, xido de metileno y oxometano.
Es gaseoso en estado puro, se vuelve lquido a 21C, es txico y con un olor caracterstico. Se
disuelve fcilmente en agua y en ste estado en concentraciones entre 35-40% y estabilizado
con metanol se denomina formalina pura o formol con la accin del fro la formalina pura
tiende a precipitar y esta situacin suele ser reversible aadiendo unas gotas de NaOH y
concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo se emplea a una concentracin

del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta concentracin se obtiene
diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en formacin salina o tampn.

CARACTERISTICAS
Un buen fijador de rutina es el formol. La formalina pura es una solucin concentrada al 40%
del gas formaldehido en agua. Se prepara una solucin al 10% o al 15% (10 o 15ml de solucin
de formaldehido, 90ml de agua corriente para hacerla ms alcalina).
La fijacin se realiza a temperatura ambiente y de un tiempo aproximado en 24-48hs
aproximadamente. Hay otros fijadores como el Bouin y de Carnoy (este ltimo disuelve la
mayor parte de la grasa y es til para la identificacinm de ganglios linfticos en las piezas de
reseccin radical).
El volumen del fijador debe ser al menos diez veces el del tejido. El tejido no debe ser
congelado una vez que ha sido colocado en solucin fijadora porque se producir una distorsin
en cristales de hielo. El punto de congelacin de la solucin de formalina al 10% es de -3C.
Se estima la velocidad de fijacin en 1mm/hora. A veces, con el fin de acelerar la fijacin, se
recomienda hacerlo entre los 35C y 40C.

FORMALDEHIDO
Es un fijador ampliamente usado por la buena preservacin del tejido, acta como conservante,
produce poca retraccin tisular, es compatible con la mayora de las tinciones histolgicas,
incluidas las de inmunocitoqumica e hibridacin de cidos ribonucleicos.
El formaldehdo se une a grupos funcionales de las protenas formando grupos hemiacetales.
Esta unin hace que muchos enzimas queden inactivas lo que ayuda a evitar la degradacin del
tejido por las enzimas hidrolticas. Los grupos a los que se une son amino, sulfidrilos,
guanidilos, grupos hidroxilos alifticos, etctera. La unin a uno de estos grupos produce un
grupo hidroximetileno. Es el hidroximetileno el que reacciona con grupos de otra, o de la
misma, protena para la formacin de puentes. La fijacin normalmente es de 24 a 50 h, aunque
puede ser de 1 a 2 semanas. Si el tejido va destinado a histoqumica es suficiente con
12-24 h a 4C. Fijaciones muy prolongadas endurecen el tejido y pueden prolongar
inestabilidad de los cidos nucleicos. Parte del fijador del tejido se puede eliminar mediante
lavados prolongados.

EL FORMOL BUFERADO Y CMO EST CONSTITUDO

El formaldehdo (HCHO, P.M. 30,03), es un gas incoloro de olor sofocante, muy soluble en
agua. Su solucin acuosa, habitualmente del 37 al 50%, es conocida como formol o formalina,
siendo
esta
solucin
la
utilizada
como
conservante.
Si bien no es el nico, en el laboratorio de AnatomaPatolgica, el ms corriente es el Formol
al 10%, que se obtiene al agregarle a una parte de Formol al 40%, nueve de agua destilada. An
no siendo el mejor fijador, rene ciertas condiciones tales como bajo precio, fcil preparacin,
gran poder de penetracin, endurecimiento rpido de los tejidos y conservacin de los lpidos.
Lo ideal es usar el Formol bufferado al 10% - 15% (10 o 15ml desolucin de formaldehido,
90ml
de
agua
corriente
para
hacerla
ms
alcalina).
Cuando las piezas quirrgicas son pequeas o las muestras son obtenidas por aspiracin y
de no existir indicaciones de realizar improntas, frotis para citologa, estudios
inmunohistoqumicos o de microscopa electrnica que requieran fijacin especial se
colocarn inmediatamente en formol buferado al 10% en una relacin de10 a 1 fijador/muestra.
Para una mejor fijacin las piezas no deben exceder de un espesor de 3 mm y un tamao de 3
x 2 cm.
Formol tamponado: Es la solucin mas empleada hoy en da para prevenir el choque osmtico
que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento formlico
que ocurre a un pH inferior a 6. Se preparada la siguiente manera, como amortiguador se
emplea el tampn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula:
FORMALINA PURA..100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.
AGUA DESTILADA....900.0 gr.
Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas
de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial a 9 partes
de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.
* 4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.
** Anhidro: hay que hidratarlo despus.
Mezclas fijadoras.
Se usan diferentes fijadores en una sola mezcla para facilitar la fijacin de ciertas estructuras.
Relacin del volumen del tejido a fijarse con el volumen del fijador:
Es necesario que los trozos a fijar sean de un espesor no mayor de 0.5 mm. Para una buena
fijacin es necesario que la relacin volumen del tejido volumen del fijador sea de 1/40.

Tiempos de fijacin:
Depende del tejido, su volumen y el fijador usado, cuando se usa el formol las piezas pequeas
requieren algunas horas y ya a las 24 horas se fijan bien. La fijacin se puede controlar a simple

vista por el cambio de color del tejido y su consistencia (se endurece) pero una buena fijacin
solo se aprecia en el corte ya preparado observando al microscopio ptico.

Lavado:
Despus de la fijacin el tejido debe ser convenientemente lavado con agua o bien con otras
sustancias que eliminan restos de fijadores especiales.

Concentracin del fijador.

Mencionamos con anterioridad que la fijacin preserva los componentes del tejido al evitar la
autlisis y nos asegura, adems, que la disposicin espacial de las estructuras histolgicas
permanezca fija cuando stas se enfrenten a otras fuerzas qumicas, ejercidas durante
tratamientos ulteriores (por ejemplo durante la deshidratacin de la muestra o su inclusin en
parafina). Sin embargo, si la concentracin del fijador no es la adecuada, ste podra actuar
sobre el tejido produciendo deformaciones importantes.

Poder de penetracin.
La velocidad con que el reactivo fijador alcanza las capas ms profundas del espcimen,
responde a las Leyes de Difusin y depende tanto de la fluidez del lquido fijador como de la
reactividad qumica que se produce entre ste y el tejido (en este caso se habla de fijadores
aditivos, tales como el formol, cloruro de mercurio, cido pcrico, entre otros). A fin de conocer
el poder de penetracin de estos reactivos se ha establecido un valor K de difusin para cada
sustancia fijadora y se debe aplicar segn el tamao de la muestra. Si "d" es la distancia
infiltrada, "t" el tiempo de fijacin y K la constante de difusin, de valores conocidos, resulta
que:
Grafico N 1

Fuente: Caamao, D. (2011). Exposicin laboral a Formaldehdo . Gestin Prctica de Riesgos Laborales, 30.
Descripcin: frmula para conocer el poder penetracin.

Esta ecuacin nos permite determinar el tiempo de fijacin si consideramos que "d" se mide en
milmetros y K representa la distancia infiltrada en una hora. Como lo que vara es el tamao

de la muestra, el cual se puede medir con una regla milimtrica, slo nos queda por determinar
el tiempo de exposicin en horas para que la muestra se fije correctamente:

Tabla N 1
Figador

Constante K

Formaldehido

3.6

Glioxal

3.3

cido pcnico

0.8

cido Acetico

2.75

Glutaraldehido

3.4

Etanol

1.3

Metanol

1.45

Fuente: Caamao, D. (2011). Exposicin laboral a Formaldehdo . Gestin Prctica de Riesgos Laborales, 30.
Descripcin: tiempo de exposicin para que la muestra se fije correctamente

Temperatura de fijacin.
En la mayora de los mtodos descriptos, la temperatura que se utiliza para fijar una muestra
biolgica se encuentra entre los 15 y 25C. No es recomendable trabajar con temperaturas
superiores a la indicada, ya que se producen alteraciones importantes en el tejido. Se hace
excepcin a una tcnica, que en Anatoma Patolgica se denomina "Biopsia por Congelacin",
donde la solucin de formol tiene una temperatura de 60C para acelerar el proceso de fijacin.
En estudios enzima e inmunohistoqumicos, hibridizacin in situ y PCR se recomienda fijar a
temperaturas bajas (4 C).

Tamao de la muestra.
Mientras ms pequeos son los fragmentos a procesar, menor ser el tiempo de exposicin.

SOLUCIONES FIJADORAS SIMPLES QUE CONTIENE FORMOL:

Formol Salino

Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de disoluciones de

formaldehido en agua destilada y se prepara disolviendo en 9 gramos de cloruro sdico en 1000
mililitros de formaldehido al 100%

Formalina Neutra
Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 100% una pequea cantidad de carbonato
de calcio insoluble que queda depositado en el fondo del recipiente neutraliza esta sal e exceso
de cido frmico que se produce y aunque puede utilizarse todava para la formacin de tejidos
en la prctica ha sido desplazada por las soluciones tamponadas.
Formol tamponado: Es la solucin ms empleada hoy en da para prevenir el choque
osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento
formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se preparada la siguiente manera, como
amortiguador se emplea el tampn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente frmula:
FORMALINA PURA..100.0 ml.
FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.
FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.
AGUA DESTILADA....900.0 gr.
Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas tcnicas
de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial a 9 partes
de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.
-

4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.

Anhidro: hay que hidratarlo despus.

Formol clcico o solucin de Baker

Se emplea como fijador de eleccin en algunas tcnicas de histoenzimilogia y se prepara
aadiendo cloruro clcico al 1% a una solucin formalina neutras al 10%

FIJADORES QUE CONTIENEN FORMOL

 Lquido de Bouin (1897): Solucin muy usada como alternativo a la formalina cuando
queremos fijar ciertos Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y tejido embrionario
en general. Sin embargo no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los cuales
provoca una severa distorsin.
Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO...750.0 ml
FORMALINA CONCENTRADA....250.0 ml
C. ACTICO GLACIAL....50.0 ml
PH. FINAL...2.2
TIEMPO DE FIJACIN....2 A 24 HORAS
El lquido de Bouin es un buen fijador que debe preservar la estructura del tejido con una
textura suave y delicada. Suele ser tejido formalina-fijo mordantada con solucin de Bouin
para mejor resultado en la coloracin del manchas trichrome. El cido actico en este
fijador lisis glbulos rojos y disuelve pequeos depsitos de hierro y calcio en el tejido.
Cuando se utiliza la solucin de Bouin, pueden surgir varios problemas potenciales. Debido al
formol en la solucin, pigmento de formol puede estar presente al ver las secciones de tejido
bajo el microscopio. Tejido mojado debera fijarse en solucin de Bouin durante menos de 24
horas. Exceso de cido pcrico se deben lavar de tejido usando varias soluciones de alcohol y
agua o tincin de calidad puede deteriorarse con el tiempo.
Tejido mojado fijada en solucin de Bouin debe almacenarse en un alcohol y solucin de agua
en lugar de solucin de Bouin. Puesto que la solucin de Bouin contiene formaldehdo, cido
pcrico y el cido actico, deben tomarse las precauciones de seguridad apropiadas para estas
sustancias y regulaciones seguido. En particular, teniendo en cuenta que el cido pcrico puede
ser explosivo, sensible a la friccin y el choque cuando se seca y en contacto con algunos
metales puede formar picrates metales inestables.
Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del lquido de Bouin especialmente
indicado para la fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible

controlar el tiempo de fijacin de la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso

conservar las 48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.
Se prepara de la siguiente manera:
ACETATO NEUTRO DE COBRE.2.5 gr.
C. PCRICO..4.0 gr.
FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.
AGUA DESTILADA..100.0 ml.
Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se aade
el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial.
Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin oscila
entre 48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin
Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin
cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad de
penetracin mucho ms elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin especfica
de sustancias hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su disolucin.
Se prepara de la siguiente manera:
ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.
C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5
milmetros es de 2 a 3 horas.

 Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de

tejido nervios. Se prepara de la siguiente manera:
Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.
Se prepara de la siguiente manera:
SOLUCIN STOCK..90.0 ml.
FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml.
El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos
han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70%.
Lquido de Karnovsky (1946): o tambin conocido como Glutaraldehidoparaformaldehido, se utiliza especialmente para la fijacin de muestras destinadas al estudio
con microscopio electrnico.
Este fijador est compuesto por:
FORMALDEHDO AL 10%.....20 ml
GLUTARALDEHDO AL 50%.. 10 ml
CACODILATO DE SODIO 0.2M..70 ml
Tcnica para el uso del lquido de Karnovski:
Aadir 10 ml de glutaraldehido al 50%.
Verter a la solucin, hasta alcanzar los 100 ml con tampn fosfato 0,1 M y pH 7.2
Concentraciones menores de esta mezcla dan lugar a resultados deficientes para la observacin
de cortes en microscopa electrnica de transmisin. Ello se debe a que el contenido hdrico de
las vacuolas es alto y al penetrar el fijador, su concentracin intracelular desciende
considerablemente. De este modo estructuras que rpidamente degeneran, como las
membranas, no se aprecian con nitidez, por una deficiente fijacin.

El fijador se lleva al campo en nevera porttil para asegurarnos que no sobrepasen los 4C. El
tiempo de fijacin en esta mezcla nunca debe ser inferior a 12 horas para las muestras que
nosotros manipulamos, aunque frecuentemente no se observa hundimiento de estas en el fijador
hasta pasadas 20 horas. Podemos decir lo mismo que se indicaba para el fijador anterior en lo
referente a la dificultad de penetracin por la naturaleza de las flores y los pelos hidrfobos; es
recomendable, sobre todo para las flores con un grado de madurez elevado fijar al vaco, esto
supone una dificultad aadida al tener que mantener las muestras a baja temperatura en nevera;
utilizamos para ello recipientes hermticos en los que se hace el vaco con una bomba de vaco
manual y luego pasamos a la nevera.
Hay que lavar el fijador, como mximo, a las 24 horas, para evitar el excesivo endurecimiento.
El lavado se lleva a cabo en tampn fosfato 1 molar a pH 7.2. Se pasan las muestras a un frasco
con abundante tampn y se hacen 5 cambios de 1/2 hora cada uno. En el tampn y en nevera
podemos mantener las muestras durante varios das sin que se aprecie ninguna alteracin.
Lquido de Gendre (1937): constituye una variante de la mezcla de Bouin y se la
emplea con muy buenos resultados para la fijacin de Glucgeno. Tras fijar, las muestras se
deben lavar con varios baos de etanol al 70.
Este fijador est compuesto por:
ACIDO PCRICO......80 ml (Solucin etanlica saturada)
FORMALDEHDO PURO....15 ml
CIDO ACTICO GLACIAL5 ml

Lquido de Lewitsky (1958): esta mezcla permite la preservacin de depsitos grasos

de tejidos animales y, en especial, de vegetales. En nuestro laboratorio se lo utiliza con el
mismo propsito en tejidos embrionarios con muy buenos resultados de fijacin.
Este fijador est compuesto por:
ACIDO CRMICO AL 1%.....50 ml
FORMOL AL 10%...... 50 ml

 Lquido Anatech Ltd. o Formol-zinc (1988): esta mezcla no tamponada es un

excelente fijador para inmunohistoqumica. La solucin tamponada se prepara agregando 1.6
gr de cloruro de zinc a 1000 ml de Formol-PBS pH 7,2.
Este fijador est compuesto por:
FORMALDEHDO......100 ml
CLORURO DE SODIO...4.5 gr
SULFATO DE ZINC...1.6 gr
AGUA DESTILADA...900 ml

Ventajas y Desventajas de fijadores con Formol

Ventajas
El formol es quiz el nico fijador cuyo mecanismo es conocido en detalle.
Tiene un solo componente (formaldehdo) y por ello la fijacin nica.
En los fijadores compuestos cada uno penetra y fija a una tasa diferente y los tejidos
sonfijados primero por los que penetran ms rpido y despus por los ms lentos.
La imagen microscpica que produce es el estndar de oro, reconocida por todos los
patlogos.
La mayora de los mtodos de tincin se crearon para tejidos fijados con formol.
Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina
en Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura
tisular.
Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio
ptimo para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del
sublimado

 Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la

coloracin tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como
agente de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier
impregnacin
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes
modificando la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador completa
a partir de las 36 horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a555C en solo 33 horas. Por este
motivo la formalina es un fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas
en tcnicas de histotecnnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente con la
mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en Anatoma patolgica

Desventajas
El cancergeno con un nivel de toxicidad muy alto.
La fijacin con formol es un proceso muy lento y en tres etapas: penetracin (muy
rpida) que detiene la autolisis,
La unin covalente que es 12 veces ms lenta que la penetracin, y
El cruzamiento o cross-linking que es 4 veces ms lento que la formacin de la unin
covalente.
El cruzamiento (cross-linking) completo requiere un mnimo de 48 horas de fijacin
afectando el tiempo de finalizacin (TAT).
Afecta la recuperacin del ADN, mARN y la eficacia de las pruebas moleculares y
genticas.
La neutralizacin siempre es incompleta.
El reciclaje aumenta la exposicin.
Produce abundante vapores de carcter irritante sobr la conjuntiva y muciosa nasal.
Por la accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en
acido frmico y esta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromtica
nuclear por eso con el paso del tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto
fantasma para evitar este inconveniente el formol debe graduarse en frascos opacos o
emplearse en forma de soluciones neutra o tamponado.

 Se incorpora progresivamente al tejido con el cual se consumen durante el proceso de

fijacin por lo que debe encontrase en exceso
Es debido a que se incorpora al tejido y que tiene baja presin osmtica provoca la
incorporacin de agua a los espacios intratisulares por lo que el peso y el volumen del
tejido una vez fijado se aumenta de manera notable.
Este efecto se puede prevenir utilizando formol salino o tamponado
Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que
contienen hiero y los derivados de las bilirrubinas, a estos ltimos les da una coloracin
verdosa
Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que convierte en cido frmico
confiere a las piezas un tiente grisceo y en tejidos que tiene mucha sangre da origen a
un pigment formo lico que es negro o pardo oscuro que precipita en aglomeraciones
irregulares sobre estructuras preexistentes. Este pigmento se puede eliminar
sumergiendo los cortes en alcohol absolutamente saturado con cido pcrico compuesta
por 10, 12 gramos

DAOS PARA LA SALUD

La principal va de entrada del FORMALDEHDO en el organismo es la va inhalatoria, la
absorcin cutnea es reducida y la ingestin accidental es muy poco probable.
El formaldehdo es sensibilizante, es decir, puede ocasionar una reaccin de
hipersensibilidad de tipo alrgico y una vez producida la sensibilizacin exposiciones
de muy baja concentracin pueden causar reacciones alrgicas severas de la piel, los
ojos, el tracto respiratorio e incluso generalizado como el choque anafilctico.
Es muy irritante para el Sistema Respiratorio
Es muy irritante para la piel y en funcin de la concentracin puede llegar a tener efectos
corrosivos (quemaduras graves).
Es irritante ocular desde concentraciones muy bajas, pudiendo producirse quemaduras
graves con ulceraciones (daos permanentes) en caso de contacto directo por
salpicaduras.
En el Sistema Nervioso Central (SNC): Se pueden producir efectos como irritabilidad,
alteraciones del sueo, la memoria, el equilibrio y destrezas, fatiga, mareo, nuseas y
dolor de cabeza.
Se sospecha que provoca cncer. Se le relaciona con cncer nasofarngeo, y tambin
con seno-nasal, leucemia mieloide y pulmonar. Est clasificado de categora 2 segn

elReglamento (CE) 1272/2008, y de categora 1 (carcingeno en humanos) segn

IARC(International Agency for Research on Cancer).

Exposicin
Inhalacin
Puede provocar sensacin de quemazn, tos, dolor de cabeza, nuseas y jadeo.
El olor del formaldehdo y las propiedades irritantes proporcionan generalmente una alarma
adecuada de concentraciones peligrosas. Puede ocurrir una fatiga olfatoria y tolerancia. Pero,
las personas que estn sensibilizadas al formaldehdo pueden reaccionar a concentraciones por
debajo del umbral del olor. El formaldehdo es ligeramente ms pesado que el aire y puede
causar asfixia en espacios poco ventilados, situados en nivel bajo, o cerrados.
Ingestin
La ingestin de soluciones acuosas puede dar como resultado una lesin grave corrosiva del
esfago y estmago. Puede provocar nuseas, vmitos diarrea y dolor abdominal. Despus de
una exposicin grave puede ocurrir ulceracin, edema de la glotis, asfixia, y fallo respiratorio
y cardiovascular. (Caamao, 2011)
Contacto con la piel
El vapor de formaldehdo o soluciones acuosas pueden causar irritacin y quemaduras en la
piel Contacto con los ojos Puede causar enrojecimiento, dolor y visin borrosa.
Efectos para la salud
Aparato respiratorio
La exposicin a bajas concentraciones de formaldehdo causa generalmente dolor de garganta
y tos. Con la inhalacin de altas concentraciones de gas o vapor de formaldehdo, se puede
producir un rpido de agotamiento de la respiracin con dolor de pecho, disnea, espasmo
larngeo y edema pulmonar.
La lesin pulmonar se puede generar a lo largo de varias horas. Despus de una exposicin
grave, se puede producir un fallo respiratorio y cardiovascular.
Sistema ocular
Concentraciones bajas de gas causan molestias por quemadura, parpadeo espasmdico o cierre
involuntario de los prpados, enrojecimiento y lagrimeo. A altas concentraciones o con
exposicin a soluciones acuosas pueden producirse quemaduras de la crnea.
Sistema drmico

Dolor por quemaduras, enrojecimiento, inflamacin, ampollas y quemaduras de la piel y de las

membranas mucosas pueden ser causadas por vapor o soluciones acuosas concentradas de
formaldehdo. (Caamao, 2011)

Tabla N 2

Fuente: (Caamao, 2011)

Descripcin: efectos en la salud ante la ex pocin de vapor de formaldehido

Si el paciente sobrevive las primeras 48 horas despus de la exposicin, es probable la

recuperacin. Despus de una exposicin aguda, la funcin pulmonar vuelve a su estado normal
en 7 a 14 das. Aunque es frecuente la recuperacin completa, pueden persistir los sntomas y
deficiencias pulmonares. La hiperreactividad de las vas respiratorias a irritantes no especficos
pueden persistir, provocando broncospasmos e inflamacin crnica de los bronquios. El
sndrome de disfuncin de las vas respiratorias reactivas puede persistir durante aos. Las
secuelas de la destruccin y cicatrices en el tejido pulmonar pueden conducir a una dilatacin
crnica de los bronquios y a una gran susceptibilidad de infeccin. Puede desarrollarse una
sensibilizacin de la piel. Despus de la ingestin puede ocurrir una disfagia y estenosis del
esfago y estmago. (Caamao, 2011)

Acciones
Instrucciones generales
Los pacientes expuestos slo al gas o vapor de formaldehdo no son un riesgo significativo de
contaminacin secundaria. Los pacientes cuya ropa o piel estn contaminadas con una solucin

acuosa de formaldehdo pueden contaminar secundariamente al personal de rescate y mdico

por contacto directo o a travs de la evaporacin de formaldehdo
El vapor de formaldehdo es irritante si entra en contacto con los ojos, piel y tracto respiratorio
superior causando irritacin de los ojos, tos, dolor del pecho y disnea. Puede provocar
laringospasmos y signos de edema pulmonar (falta de respiracin, cianosis, expectoracin, tos)
No existe antdoto que pueda suministrarse para contrarrestar los efectos del formaldehdo. El
tratamiento consiste en medidas de apoyo. El formaldehdo es un sensibilizador potente de la
piel.

Bibliografa
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Riesgos Laborales, 30.
Montero, C. (2008). Manual de tecnicas Hitologias. Bogota: Editorial Omeg
Grizzle WE. The use of fixatives in diagnostic pathology. J. Histotechnol.
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Fuentes de Consulta
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http://www.corporate.basf.com
http://uprl.unizar.es/procedimientos/petmaternidad.html