Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Edoc - Tips Guaa Practica 8 Fermentacian Alcoholica
Edoc - Tips Guaa Practica 8 Fermentacian Alcoholica
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
PRACTICA Nº 8
Objetivo General
Objetivos Específicos
Marco Teórico
Los almidones (de maíz, yuca, papas y raíces de plantas) deben ser primero hidrolizados a
azúcares fermentables por tratamiento con ácidos o por la acción de enzimas. La celulosa (de
madera, residuos agroindustriales, desechos de licor de sulfito de pulpa de las industrias de
papel) debe ser igualmente convertida a azúcares fermentables, por la acción de ácidos o de
enzimas.
Una vez los azúcares simples son formados, los microorganismos pueden rápidamente
fermentarlos a etanol. La fermentación de etanol es un proceso metabólico de carácter
anaeróbico en el cual los azúcares simples (glucosa, sacarosa, xilosa, etc.) son parcialmente
oxidados a compuestos como etanol y CO2. En este proceso los compuestos intermedios actúan
como aceptores finales de electrones.
La Fermentación alcohólica de define como el proceso bioquímico por el cual las levaduras
transforman los azúcares del mosto en Etanol y CO2. Para que la fermentación se realice de
manera eficiente, el mosto debe hallarse en condiciones anaerobias. En condiciones aerobias las
levaduras se multiplican abundantemente con un rendimiento en biomasa muy alto ya que se
PRÁCTICA 8 DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA PARA INGENIEROS
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
consiguen 1g de levadura por cada 4g de azúcar consumidos, pero los productos obtenidos son
muy poco etanol, agua y CO2.
En condiciones anaerobias las levaduras realizan la fermentación; es decir degradan los azúcares
de forma incompleta generando Etanol, CO2 y energía.
En estas condiciones el rendimiento en biomasa es de tan solo 1g de levadura por cada 100g de
azúcares consumidos.
Tanto levaduras como bacterias han sido utilizadas para la producción de etanol.
Saccharomyces cerevisiae es la levadura más comúnmente utilizada. El Etanol es inhibitorio a
altas concentraciones y la tolerancia al alcohol de las levaduras es crítica para obtener
rendimientos altos
Una de las tecnologías contemporáneas que son más promisorias para la fermentación de etanol,
es la fermentación en continuo usando células de levaduras inmovilizadas. Los sistemas de
fermentación en continuo con células inmovilizadas aunque inicialmente exitosos, fueron
condenados a fallar por varias razones. Estas incluyen problemas de ingeniería (como biomasa
en exceso, problemas con la remoción de CO2, optimización de las condiciones de operación,
obstrucciones y generación de canales de flujo en el biorreactor), inalcanzables costos (en los
precios de los soportes) y desventajas (en operación inestable y procesos complejos). Sin
embargo, recientes desarrollos en el diseño de biorreactores y la comprensión de la fisiología de
las células inmovilizadas, junto con la aplicación de materiales de soporte novedosos,
proporcionan un nuevo estímulo en la investigación y la aplicación de esta promisoria
tecnología.
La mayor parte del etanol es producido mediante fermentaciones por lotes. La concentración de
sustrato al inicio del proceso es de 15-25% (p/v) y el pH se ajusta a un valor de 4-5 para
disminuir los riesgos de infección. El proceso se lleva a cabo a 30-35ºC. Generalmente el
rendimiento es del 90% del máximo teórico. El resto de sustrato es convertido en biomasa y
otros metabolitos.
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
Existen factores tanto físicos como químicos que inciden positiva o negativamente en el
transcurso de la fermentación alcohólica, ya sea actuando sobre el desarrollo de las levaduras o
incidiendo directamente sobre la propia fermentación. Los más relevantes son los siguientes:
Oxigeno: Aunque la fermentación es un proceso anaeróbico, las levaduras mantienen una leve
respiración utilizando para ello el oxígeno disuelto en el mosto.
PROCEDIMIENTO
1. Preparación de inoculo
Realizar centrifugación (10 minutos a 5000 rpm) para obtener la biomasa para la
inmovilización.
Para realizar la inmovilización de las células de S. cerevisiae se emplean soluciones estériles de:
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
REACTIVOS
• Agua destilada
• 3 gr de Levadura Saccharomyces cerevisiae Ethanol RED
MATERIALES Y EQUIPOS
• 1 baño de maría
• Centrifuga y accesorios
• 2 Beakers estériles de 400 mL
• 2 Erlenmeyer estériles de 500 mL
Para las fermentaciones se empleó el siguiente medio (valores por litro): 50g o 30 g de azúcares
totales reductores (ATR) (glucosa o jarabe glucosado de almidón de maíz), 1g de MgSO4.7H2O,
2g de KH2PO4, 3g de (NH4)2SO4, 4g de extracto de levadura y 3,6g de peptona. Se ajusta pH a
5 y se esteriliza durante 15 minutos a 15 psi (121ºC).
Fermentación 1:
Fuente de carbono: Jarabe Glucosado
Concentración: 50 g/L
PRÁCTICA 8 DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA PARA INGENIEROS
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
Fermentación 2:
Fuente de carbono: Glucosa
Concentración: 50 g/L
Fermentación 3:
Fuente de carbono: Jarabe Glucosado
Concentración: 30 g/L
Fermentación 4:
Fuente de carbono: Glucosa
Concentración: 30 g/L
La cantidad de etanol producido se cuantifica de manera indirecta a partir del CO2 liberado
durante la fermentación, apoyados en la relación estequiométrica:
La cantidad de CO2 que se libera no sólo proviene de la reacción de fermentación sino también
de la reproducción del microorganismo gracias al oxígeno disponible inicialmente en el reactor.
Debido a que la cantidad de oxígeno es relativamente baja comparada con la cantidad de
azúcares presentes en el medio, puede suponerse que la liberación de CO2 es proporcional a la
concentración de alcohol en el medio. Así, tras una medición en el cambio de peso en intervalos
sucesivos durante el proceso fermentativo, se puede establecer el perfil de concentración de
etanol en el medio como una función del tiempo.
El equipo utilizado para tal fin, “fermentómetro”, consiste en un sistema de vidrio que es
conectado al reactor por medio de un tapón que evita el intercambio de aire con los alrededores.
Este dispositivo se llena con una cantidad de agua para evitar el ingreso de otras sustancias
hacia el medio de fermentación y permitir sólo el escape de CO2 al ambiente. Además, luego de
consumirse la cantidad de oxígeno disponible en el medio durante el crecimiento del
microorganismo, se garantizan condiciones anaeróbicas favorables para la producción de etanol.
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
Mediante la relación estequiométrica de la reacción de fermentación se sabe que por cada mol
de CO2 (44,01g) que se libera, se produce 1 mol de etanol (46,07g); lo que permite determinar la
cantidad de etanol equivalente (g/L), conociendo el volumen de líquido en el interior del reactor,
así:
Fermentación 1:
Fuente de carbono: Jarabe Glucosado
Concentración: 50 g/L
Fermentación 2:
Fuente de carbono: Glucosa
Concentración: 50 g/L
Fermentación 3:
Fuente de carbono: Jarabe Glucosado
Concentración: 30 g/L
Fermentación 4:
Fuente de carbono: Glucosa
Concentración: 30 g/L
Toma de muestra
Se debe tomar muestra cada hora, en los cuales se realizará el siguiente procedimiento:
1. Tomar el cultivo del agitador y llevarlo a la cámara de flujo laminar.
2. Tomar dos muestras de 1 ml cada una con una micro pipeta.
3. Tomar una de la muestras y medir absorbancia a 600 nm para determinar concentración
de biomasa (Esta absorbancia se relaciona con la concentración de biomasa según la
Figura 1).
PRÁCTICA 8 DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA PARA INGENIEROS
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
Fermentación en Biorreactor
Esterilizar el biorreactor de 250 mL, realizar las conexiones de las mangueras para la
alimentación y la descarga del medio desgastado y sellar con algodón y aluminio para la
esterilización del equipo completo.
Llenar la columna con el medio de cultivo preparado y mantener durante 8 – 12 horas el proceso
en batch, operar el reactor a 30 °C y tomar muestra de 2mL al inicio (tiempo 0, correspondiente
al lunes 5:00 pm) del proceso de fermentación y al final (tiempo 6, correspondiente al martes
6:00 am), para realizar análisis de azúcar y determinación de la concentración de etanol.
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
ANÁLISIS DE RESULTADOS
4. Compare los resultados obtenidos en las fermentaciones hechas con los datos
reportados. Determine posibles causas de error.
5. A partir de los objetivos planteados, cuáles son sus conclusiones?
PRÁCTICA 8 DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA PARA INGENIEROS
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
ANEXO 1
Reactivos:
Procedimiento
1. Preparación del reactivo DNS
a. En un vaso de precipitado de 200 ml disolver 1,6g de NaOH con 50ml de agua
destilada.
b. A la solución anterior adicionar 43,8g de tartrato de sodio y potasio tetra hidratado, y
disolver perfectamente.
c. Adicionar 1g de DNS lentamente agitando hasta disolución total. Esta etapa debe
realizarse protegida de la luz.
d. Completar a 100ml con agua destilada y guardar en botella ámbar en la oscuridad.
e. Se puede utilizar después de 24 horas.
Determinación de Glucosa
a. Preparar 100 ml del medio de cultivo sin jarabe glucosado y esterilizarlo en autoclave
b. Adicionar 0.1 g de glucosa al medio estéril para obtener una concentración de 1g/l
(Stock 1)
c. Realizar disoluciones con agua destilada en tubos de ensayo como se ve en la siguiente
tabla:
Conc. g/l 1 0,75 0,5 0,25 0,125 0
Stock(ml) 1 0,75 0,5 0,25 0,125 0
Agua(ml) 0 0,25 0,5 0,75 0,875 1
Para analizar las muestras problema, seguir el procedimiento anterior desde el literal d., a partir
de la muestra centrifugada (5min a 5000 rpm) y diluida, según sea necesario.
PRÁCTICA 8 DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA PARA INGENIEROS
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
1. David Ocampo
2. Marcela Zuleta
3. Daniel Hoyos - Laura
4. Elizabeth Gaviria
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
D. Marcela
Tubular
5:30 pm A. Edison Vargas
B. Marcela Olarte
C. Melissa
D. María Claudia - Alvaro
Tubular
8:00 am A. Silvana
B. Natalia Ballesteros
C. Diego Perez
D.
9:30 am A. Ana Maria Palacio
B. Paula Giraldo
C. Camilo
D. Ana Maria