Parte 2: ELECTROFORESIS DE DNA

INVESTIGACIÓN PREVIA

1. ¿Qué es la agarosa?
R= Es un polisacárido lineal formado por la D-galactosa y 3,6-anhidro-L-
galactosa.
https://www.youtube.com/watch?v=gPNZzIsMLOc
2. ¿Qué ventajas tienen los geles de poliacrilamida respecto a los de
agarosa?
R= Los geles de poliacrilamida poseen un poder mucho mayor de
resolución respecto a los de agarosa
Fierro Fierro Francisco .S.f.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/electroforesis.pdf

3. ¿Para qué propósito se utiliza una electroforesis en gel de poliacrilamida?

R= Para obtener una mejor resolución que con la técnica de agarosa pese
a que tiene mayor limitación en cuanto a tamaño de fragmentos que se
pueden separar (5-600pb). Permitiendo la separación de moléculas que
difieren en un sólo par de bases
Fierro Fierro Francisco .S.f.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/electroforesis.pdf

4. ¿Cuál es la diferencia entre usar TAE y TBE?

R= La diferencia entre ambas es que el TAE nos va a servir para
fragmentos entre 900 y 2000bp mientras que el TBE nos sirve para
fragmentos de 100 a 500bp, el TAE no permite reciclarlo por mas de tres
corridas electroforéticas y en el TBE su efectividad permanece inalterada
durante 3 o 4 días
https://www.youtube.com/watch?v=gPNZzIsMLOc
5. ¿Para qué sirve el buffer de carga?
R= Es un buffer mixto de Glicerol, que debido a su densidad contribuye a
que la muestra se quede en los pocillos sin dispersarse, el Azul de
bromofenol es un compuesto coloreado y con carga que se utiliza para
comprobar el progreso de la electroforesis ya que gracias a su color tan
visible ayuda a detener la electroforesis con la confianza de que las
moléculas de DNA no se hayan salido del gel, de esta manera podemos
observar que nuestra electroforesis se haya llevado de manera correcta, el
Xilen- cianol es un colorante que se mueve aproximadamente con las
moléculas de DNA de 9000bp permite detener la electroforesis gracias a su
color azul visibles con la confianza de que las moléculas grandes de DNA
no se hayan salido del gel
https://www.youtube.com/watch?v=gPNZzIsMLOc
6. ¿Cuál es la utilidad del marcador de peso molecular?
R= Determinan el tamaño de los fragmentos de DNA obtenidos,
pudiéndolos medir en Kb (kilo bases) o pares de bases
https://www.youtube.com/watch?v=gPNZzIsMLOc
7. Fundamento de la tinción con bromuro de etidio y GelRed
R= Tienen el mismo fundamento, son colorantes que se intercalan entre las
bases de DNA que al aplicar la luz UV emiten fluorescencia revelando la
presencia de DNA
https://www.youtube.com/watch?v=gPNZzIsMLOc