Universidad Cooperativa de Colombia

Informe practica laboratorio

Zaryn Dayana Carvajal Sierra

Angie Tatiana Silva Gutierrez

Maria Jose Barrios Vallejo

Nicolas Perez Toledo

Electiva complementaria

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Universidad cooperativa de colombi -Campus Villavicencio

2022 - II
 INTRODUCCIÓN

Por medio del siguiente informe mostraremos los procedimientos realizados en la práctica de
laboratorio realizado en la universidad de los llanos en el cual el tema a trabajar fue la
electroforesis.Esta técnica de laboratorio se usa para separar moléculas de ADN.ARN o
proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica .Se usa una corriente eléctrica para mover
moléculas a través de un gel o de otra matriz, esta se aplica para la identificación de
fracciones proteicas o proteínas particulares por tamaño, como es el caso de la electroforesis
de globulinas, o proteínas séricas; pero, sobre todo, para la identificación de moléculas
particulares empleando posteriormente una reacción antígeno-anticuerpo específica en la
técnica de Western blot. Asimismo, la electroforesis es crucial en técnicas como la
secuenciación, donde tras un corrimiento electroforético de las cuatro reacciones de
elongación con los dideoxinucleótidos.

Solucion preguntas

1. Describa en qué se basa el principio de electroforesis.

Respuesta: Consiste en la migración de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz
de naturaleza porosa, en el cual por la acción de un campo eléctrico estas serán separadas ,
según su peso molecular o su tamaño y constituye parte importante del procedimiento
rutinario de análisis, las moléculas deberán ser teñidas con diferentes colorantes .

2. ¿Qué factores afectan la velocidad de migración del DNA en geles de agarosa?

Respuesta: Estos factores pueden ser por el tamaño del ADN, las moléculas de ADN mas
grande generalmente migran más lento, Concentración de la agarosa, a medida que varía la
concentración de agarosa, la velocidad de la molécula de ADN será diferente, conformación
del ADN, voltaje aplicado, dirección del campo eléctrico, composición de las bases y
temperaturas, presencia de agentes intercalantes, composición del buffer de electroforesis.

3. En qué caso se utiliza la poliacrilamida para la separación de ácidos nucleicos.

Respuesta: La poliacrilamida normalmente se suele usar en situaciones donde se usará

fragmentos de bajo tamaño molecular.
4. ¿Qué es el buffer de carga y qué propósito cumple en la electroforesis?

Respuesta: El buffer de carga es una Solución amortiguadora de carga o “buffer” de carga,en

esta solución se disuelve nuestra muestra utilizando la gel de agarosa o poliacrilamida.Esta
contiene colorante que sirve para visualizar la migración de DNA durante el proceso de
electroforesis.

5. ¿Cuáles son los buffers utilizados en el corrido electroforético? ¿Cuáles son sus
componentes y propiedades?

Respuesta: los buffer que se utilizan son dos : el buffer TBE y el buffer TAE, el buffer
TBE tiene de componente a tris, molécula responsable del taponamiento y regulación del pH.
El buffer TAE tiene dos moléculas de ácido bórico y ácido acético.

6. ¿Por qué se utiliza la luz ultravioleta para visualizar el ADN?

Respuesta: Los ácidos nucleicos absorben eficientemente luz ultravioleta debido a la

presencia de bases aromáticas nitrogenadas a lo largo de las cadenas de DNA. La absorción
de Uv de DNA es una característica de la molécula, que es usada eficientemente para
determinar su concentración.

7. ¿Para qué se utiliza el reactivo Sybr Green?

Respuesta: El Syber Green se utiliza en varias áreas de la bioquímica y la biología

molecular. Se emplea como colorante para la cuantificación de ADN de doble cadena en
algunos métodos de PCR cuantitativa o para la visualización del ADN en la electroforesis con
geles de agarosa.

Pasos Electroforesis

1.Para preparar un gel de agarosa al 1% se debe pesar 1 g de agarosa y este se disuelve en

100 mL de buffer TAE 1X o TBE 1X

2. Caliente la mezcla contenida en un matraz ex profeso, en un horno de microondas dando

pulsos de 30 segundos hasta lograr una mezcla homogénea. NOTA: Evite la ebullición
violenta de la mezcla.

3.Coloque la bandeja en el caster gel y gire la palanca de levas. Cerciórese de que cierra
herméticamente. NOTA: Se debe nivelar el “gel caster” antes de colocar la bandeja.
4.Si no tiene un caster gel puede utilizar cinta adhesiva en ambos extremos de la bandeja .

5.Vacíe con mucho cuidado la mezcla caliente de agarosa/buffer caliente evitando hacer
burbujas y coloque un peine en un extremo. NOTA: No agregar muy caliente la mezcla sobre
la bandeja.

6. Se deja enfriar hasta que polimeriza el gel .

7.Se colocan de 2-20 µg/µL de muestras de ADN en cada pozo con buffer de carga

8.Se corre el gel a 70 voltios por una hora o una hora y media.NOTA: El tiempo y el voltaje
requerirán de una estandarización

9. Se retira el gel y se deja tiñendo 30 min. en la disolución del buffer que anteriormente se
ha seleccionado y se agrega bromuro de etidio (EtBr). El EtBr se agrega a una concentración
entre 200-500 ng/mL en el gel de agarosa. NOTA: El EtBr es mutagénico y por lo tanto se
debe manejar con mucho cuidado. Se puede utilizar SYBR-green desde que se carga la
muestra y es 25 veces más sensible que el EtBr usando un transiluminador estándar a 300 nm.

Evidencia Práctica

Nota: Preparación gel de agarosa al 1% se debe pesar 1 g de agarosa y este se disuelve en

100 mL de buffer TAE 1X o TBE 1X. [Fotografía] Carvajal Zaryn ..(Universidad
Cooperativa de Colombia, 2022).Electiva complementaria. Colombia Villavicencio.
Fotografía Carvajal Zaryn .. (Universidad Cooperativa de Colombia, 2022).Electiva
complementaria . Colombia Villavicencio.
Fotografía Carvajal Zaryn.. (Universidad Cooperativa de Colombia, 2022).Electiva
complementaria. Colombia Villavicencio.
 BIBLIOGRAFÍA

● Método: Gel de electroforesis Agarosa. (2017, octubre 26). Conogasi.

https://conogasi.org/articulos/metodo-gel-de-electroforesis-agarosa/

● Manual de procedimientos de electroforesis. (s. f.). Gob.pe. Recuperado 18 de mayo

de 2022, de https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/38.pdf

● Cuantificación de oligonucleótidos y ácidos nucleicos por espectroscopia uv. (s. f.).

Unam.mx. Recuperado 18 de mayo de 2022, de
http://oldwww.ibt.unam.mx/sintesis/cuantificacion.html