Manual de Procedimientos Pro Fa Hem 015

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
OPERATIVOS ESTANDARIZADOS
HEMATOLOGIA Y COAGULACION
CONTROL DE COMUNICACION
FECHA DE APROBACION:
FECHA DE
COMUNICACIÓN:
CONTROL DE EMISIÓN
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Nombre Biotec. Teresa Mendoza Dr. Eduardo Aranda Dra. Elma Rossell Sìmon
Firma
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
Nombre del documento: CODIGO: POE-FA-HEM-
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA 015
REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS Y DE
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
Norma NB ISO 15189:2004 Página 2 de 971112-2
e97 97
INDICE
1. Objetivos 3
2. Alcance 3
3.Responsables 3
4. Condiciones/normativas 3
5. Descripción de las actividades 3
Definiciones, Conceptos y actividades. 3
I. Recuento de eritrocitos. 3
II. Cuantificación de hemoglobina. 8
III. Determinación de hematocrito. 12
IV. Determinación de índices hematimetricos. 16
V. Recuento de reticulocitos. 20
VI. Determinación de hierro sérico y su capacidad de
combinación. 23
VII. Recuento de leucocitos. 29
VIII. Determinación de la fórmula leucocitaria. 32
IX. Recuento de plaquetas. 41
X. Velocidad de sedimentación o Eritrosedimentación 45
XI. Determinación de grupos sanguíneos y Rh. 41
XII. Prueba de Coombs (directa e indirecta). 52
XIII. Análisis por citometría de flujo. 56
XIV. Hemostasia y coagulación. 68
XV. Determinación de Proteína C y Proteína S. 71
XVI. Determinación de Dímero D. 75
XVII. Determinación de Tiempo de tromboplastina parcial activado 79
XVII. Determinación de Tiempo de protrombina. 83
XIX. Determinación de Anticoagulante lúpico. 88
6.Referencias de consulta y registros 91
7. Registros 91
8.Glosarios 92
9. Anexos 93
CONTROL DE DOCUMENTOS
Elaborado por: Revisado por: Autorizado por:
Nombre Biotec. Teresa Mendoza Dr. Eduardo Aranda T. Dra. Elma Rossell Sìmon
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA

REALIZAR ANALISIS HEMATOLOGICOS
Y DE COAGULACION
1. Objetivo
Instruir a los responsables de los análisis hematológicos, mediante directrices

específicas para la realización apropiada de los métodos descritos en el presente
manual.
2. Alcance
El procedimiento operativo estandarizado tiene como alcance a todo el personal

responsable y asignado al Area de Hematología y coagulación de LABCLINICS.
3. Responsables
a. Responsables y auxiliares designados según calendario de actividades

para la realización de análisis de Hematología y coagulación de
LABCLINICS.
b. Gerente de Calidad.
4. Condiciones/normativas:
a. Norma NB ISO 15189 :2004

b. Norma NB ISO 9001:2000
c. Manual de Calidad de LABCLINICS
5. Descripción de las actividades
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COAGULACION
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I. RECUENTO DE HEMATÍES Ó GLOBULOS ROJOS Ó ERITROCITOS
1. Propósito del análisis:
El propósito del análisis es el recuento de glóbulos rojos. Estas células

sanguíneas tienen forma de discos redondeados, bicóncavos y con un diámetro
aproximado de 7,5 micras.
En el ser humano y la mayoría de los mamíferos los eritrocitos maduros carecen

de núcleo; en algunos vertebrados son ovales y nucleados.
Los eritrocitos, o glóbulos rojos de la sangre, son los transportadores primarios

del oxígeno de las células y de los tejidos corporales. La forma bicóncava del
eritrocito es una adaptación que hace el área superficial, para facilitar el
intercambio del oxígeno por dióxido de carbono, en condiciones óptimas. Su
forma y la membrana plasmática flexible del eritrocito, le permite penetrar en los
capilares más pequeños.
2. Principio del procedimiento: Se basa en realizar una dilución sanguínea en

una pipeta dilutora y proceder al recuento de células en cámara de Neubauer con
la ayuda de un microscopio.
3. Sistema de muestra primaria: La muestra debe ser sangre total obtenida con
anticoagulante EDTA K3, preferentemente.
4. Tipo de recipiente y aditivo: Tubo al vacío con tapa color lila y que contiene
anticoagulante EDTA K3.
5. Equipo y reactivos requeridos:
a) Líquido de dilución.(Neutro o isotónico o de Hayen)

b) Pipetas dilutoras.
c) Cámara cuenta-glóbulos.
d) Microscopio óptico.
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6. Procedimiento de calibración: La pipeta de Thoma debe encontrarse bien

calibrada.
7. Pasos del procedimiento:
 Primeramente aspirar la sangre total hasta la marca 0.5 de la pipeta de

Thoma sin formar burbuja alguna.
 Enrasar con el líquido de Hayen hasta la marca 101 de la pipeta de Thoma,
logrando una dilución de 1/200.
 Agitar muy suavemente por 45 a 60 segundos y dejar en reposo por no
menos de 5 minutos. Antes de vaciar a la cámara, eliminar las 3 primeras
gotas.
 Cargar la cámara de Neubauer y dejar reposar por 5 minutos.
 Observar en el microscopio con el objetivo de 40 X.
 El recuento se realiza contando los hematíes depositados sobre 80
cuadraditos pequeños de cualquiera de los retículos, lo cual se consigue
de distinta forma según sea la cámara utilizada; si se emplean las cámaras
de Neubauer o de Thoma se encuentra 5 grupos de 16 cuadraditos cada
uno, incluyendo los 4 de las esquinas y el central en uno de los retículos.
8. Procedimientos de control de calidad: Realizar un doble recuento para

verificar la resultados similares entre sí.
9. Interferencias y reacciones cruzadas:
- Durante el embarazo existe disminución fisiológica.

- Las personas que viven a grandes alturas presentan un recuento alto de
eritrocitos.
- La deshidratación incrementa el número de eritrocitos.
10. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre.
El número de eritrocitos contados se calcula de la siguiente forma:

Área total de los cuadrados analizados =80 x 1/400mm 2 = 1/5mm2
Volumen de la cámara =1/10mm=1/5mm 2x1/10mm =1750mm2
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Se han contado, por tanto todos los eritrocitos contenidos en un

volumen de 1/50mm2, por lo que si el número obtenido es de 50
bastará multiplicar este valor (A x 50) por 65 (como factor de dilución)
para obtener el número de eritrocitos presentes en un milímetro cúbico
de sangre total.
11. Intervalos biológicos de referencia:

ERITROCITOS
SEXO VALORES UNIDADES
MASCULINO 4.7 – 6.4 *1003 I :1
FEMENINO 4.3 – 5.7 *1003 I :1
NIÑOS 3.8 – 5.5 *1003 I :1
12. Valores de alerta o críticos:
Menor de 4.000 o mayor a 6.500 *1003 I :1
13. Interpretación del laboratorio:
1. El aumento de número de glóbulos rojos se denomina policitemia. Puede

presentarse en la diarrea grave, en la policitemia vera, en ciertas enfermedades
crónicas del corazón, en intoxicaciones agudas y en personas que viven en la
altura (policitemia de altura).
2. La disminución de los glóbulos rojos constituye la oligocitemia. Se observa en

todas las anemias, en la leucemia y después de las hemorragias, cuando el
volumen sanguíneo ha sido recuperado.
14. Precauciones de seguridad:
Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de

Bioseguridad.
15. Fuentes potenciales de variabilidad:
 Pipetas dilutoras mal calibradas o sucias.

 Llenado incompleto o deficiente de la pipeta dilutora.
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 Falta de suficiente agitación del a la sangre diluida en la pipeta.

 No desechar las tres primeras gotas de la pipeta.
 Cámara cuenta-glóbulos mal ajustada
 Llenado incompleto de la cámara cuenta-glóbulos.
 Células mal distribuidas en el fondo de la cámara.
 Recuento de un número insuficiente de células.
 Errores al efectuar el cálculo.
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II. CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA
El propósito del análisis es la cuantificación de la hemoglobina, proteína

pigmentada de los glóbulos rojos que tiene como función principal el transporte de
oxígeno desde los pulmones a las células del organismo, captando a su vez
dióxido de carbono que es transportado a los pulmones para ser eliminado hacia
el exterior. Normalmente interviene en todo análisis hematológico, porque da una
pauta de salud o enfermedad; en combinación con la cifra del hematocrito se
obtiene un índice muy importante en todo proceso clínico. La determinación de la
concentración de hemoglobina es el criterio fundamental para el diagnóstico de
una anemia; debido a ello la metodología empleada debe ser precisa y fiable.
2. Principio del procedimiento:
Los métodos empleados hasta la actualidad se han basado siempre en

determinadas propiedades fisicoquímicas de la hemoglobina destacando entre
ellos los colorimétricos basados en la medida de la absorbancia lumínica de la
propia hemoglobina o de algunos de sus derivados en solución, mediante
fotocolorímetro o espectrofotómetro.
Este método tiene como fundamento la trasformación previa de la hemoglobina

en cianmetahemoglobina, cuya absorbancia es determinada mediante un
fotocolorímetro o espectrofotómetro con lectura a 540 nm y comparada con la de
un patrón cuyo valor corresponde a una concentración conocida de hemoglobina.
La transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina tiene lugar según

el siguiente proceso:
 Hemoglobina + ferricianuro potásico = metahemoglobina (meta-Hb)
 Meta-Hb + cianuro potásico = cianmetahemoglobina (cianmeta-Hb)
3. Especificaciones de desempeño:
Linealidad: hasta 25 g/L
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4. Sistema de muestra primaria:
Sangre total
5. Tipo de recipiente y aditivo:
Tubo tapa lila con anticoagulante EDTA K3.
a) Espectrofotómetro o fotocolorímetro capaz de leer a longitud de onda de 540

nm.
b) Tubos de ensayo 12 x100mm.
c) Pipetas volumétricas calibradas.
d) Reactivo de Drabkin modificado (absorbancia 540 nm).
7. Procedimiento de calibración:
Elaboración de la gráfica o recta de calibración.
La gráfica de calibración tiene como finalidad calibrar un instrumento para una

lectura determinada calculando la corrección existente entre los valores de
absorbancia leídos por el mismo y los valores correspondientes de concentración
hemoglobínica.
Para elaborar la gráfica patrón se preparan 5 soluciones de concentración de
cianmetaHb conocida y decreciente a partir del patrón de cianmetaHb, mediante
diluciones sucesivas de la misma en reactivo de Drabkin modificado.
La concentración de hemoglobina correspondiente de cada tubo es determinada a
partir del grado de dilución y del valor indicado en la ampolla del patrón de
cianmeta Hb. Una vez preparada las soluciones patrón, se inicia la lectura a
540nm del tubo que contiene solo reactivo y se ajusta a cero la absorbancia del
instrumento.
A continuación y partiendo de las soluciones de cianmetaHb concentrada, se leen
las restantes soluciones patrón. Finalmente, la relación entre los valores de
absorbancia obtenidos y los correspondientes a una concentración de
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COAGULACION
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hemoglobina se representan en una gráfica colocando en ordenadas los valores

de absorbancia transitoria y en abscisas, los de hemoglobina.
 Homogenizar bien la muestra de sangre mediante agitación suave con un

sistema automatizado.
 Pipetear 5 ml de reactivo de Drabkin, en un tubo de vidrio, luego añadir 20
microlitros de sangre homogenizada, agitar bien 4 o 5 veces el tubo que
contiene la muestra y el reactivo.
 Esperar 15 minutos para que se vaya a producir una hemólisis total y se
complete la transformación de toda la hemoglobina en cianmeta
hemoglobina.
 Luego leer la absorbancia a 540 nm.
9. Procedimientos de control de calidad:
Para realizar el control de calidad con precisión debemos usar controles

comerciales con valores conocidos y procesarlos como si fuera la muestra de un
paciente más.
Las soluciones de cianuro de hemoglobina obtenidas con este estándar cumplen
las especificaciones del International Committee for the Standardization in
Haematology (ICSH): relación DO= 1,61; turbiedad: menor que 0.002 D.O. y
concuerdan con la preparación de referencia de Cianuro de Hemoglobina obtenida
del “Rijksinstituut voor Volksgezondheid”.
- Durante el embarazo los niveles bajan levemente.

- La vida a grandes alturas eleva los niveles.
- Algunos fármacos.
11. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre:
La concentración de Hb (g/dl) = Abs muestra X (St)

Abs estandar
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COAGULACION
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Abs estándar

MASCULINO 14 -19.4 g/dl
FEMENINO 12.5 – 17.0 g/dl
NIÑOS 11.0 – 16.0 g/dl
13. Intervalo reportable de los resultados del paciente:
De 11 a 19.4 g/dl ó 110 a 194 g/L.
Menor de 5 g/dl o mayor a 20 g/dl (ó menor de 50 g/L ó mayor a 200 g/L.
1. Cuando se detectan niveles bajos de hemoglobina pueden ser consecutivos a:

problemas de alimentación, linfomas, embarazo, cáncer, anemias primarias,
enfermedades renales ó autoinmunes, hemorragias, etc.
2. Encontramos niveles altos de hemoglobina cuando existen cardiopatías,

enfermedades pulmonares crónicas, deshidratación, etc.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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Bioseguridad.
o Coagulación parcial de la sangre.

o Empleo de pipetas volumétricas mal calibradas.
o No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del
microcapilar antes de introducir el reactivo.
o Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o caducado.
o Lectura con antelación al tiempo necesario para la completa transformación
de la hemoglobina en cianmeta-Hb.
o Lectura a una densidad óptica inapropiada.
o Errores de extracción
o Empleo de anticoagulante no recomendado.
III. DETERMINACION DE HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR
El propósito del análisis es la obtención del valor del hematocrito que corresponde
a la relación entre el volumen ocupado por los hematíes y el correspondiente a la
sangre total, dependiendo principalmente de la concentración de hemoglobina.
Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno
con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total.
La relación porcentual entre ambos es la que describe el hematocrito reflejando el
porcentaje de células transportadoras de oxígeno con respecto al volumen total
de sangre.
El análisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completo de
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes.
Es de uso constante en toda actividad médica, para valorar globalmente la

condición general de la sangre de un paciente. No siempre el hematocrito refleja
el número de glóbulos rojos, porque éste depende de su tamaño que es pequeño
en las anemias microcíticas y más grande en las macrocíticas.
Sangre total.
a. Tubo capilar de vidrio desechable de 1 mm de diámetro interior, 7.5 cm de

longitud y paredes de 0.2 mm de grosor.
b. Cera o plastilina para cerrar uno de los extremos del tubo capilar una vez
lleno de sangre.
c. Centrífuga de microhematocrito con radio superior de 8 cm, que permite
aplicar fuerza centrifuga que varia entre 10.000 y 15.000 r.p.m. durante un
tiempo de control automático.
d. Sistema de lectura o lector de hematocrito.
Se realiza por centrifugación.
Procedimiento de la técnica:
 Obtenida la sangre venosa o capilar, el tubo se llena hasta 1 cm. del otro
extremo, y este se cierra a la llama o se tapona con arcilla o plastilina.
 Se centrifuga a alta velocidad de 5.000 a 10.000 r.p.m. durante 4 minutos.
 Después se lee la proporción del volumen ocupado por los hematíes con una
regla milimétrica o el dispositivo que acompaña a la centrifugadora.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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La determinación del hematocrito debe realizarse por duplicado y la diferencia

entre los dos valores obtenidos deben ser: ±1%
a) Extracción de sangre en condiciones defectuosas (hemoconcentración,

hemodilución o hemólisis)
b) Oxigenación excesiva de la sangre (descenso erróneo del hematocrito).
c) Retraso en la relación de la determinación después de extraída la sangre
(falso incremento del hematocrito)
d) Cuando la sangre se colecta directamente de un catéter puede producirse
su dilución por el suero o liquido de perfusión.
e) Homogenización defectuosa de la sangre antes de llegar al tubo capilar.
Finalizada la centrifugación se emplea un lector de hematocrito colocando el

extremo inferior de la columna de sangre en la línea correspondiente a 0 y el
extremo superior en la línea correspondiente al 100%
HEMATOCRITO

MASCULINO 43 -58 %
FEMENINO 40 – 53 %
NIÑOS 31 - 43 %
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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Menor a 15 o mayor a 60%.
Un valor bajo de hematocrito puede deberse a: anemia, insuficiencia medular,

embarazo, hemorragias, hipotiroidismo, hemólisis de distinta naturaleza,
leucemias, trastornos reumáticos con manifestaciones extra-articulares,
desnutrición.
Un valor alto de hematocrito puede deberse a: cardiopatías cianógenas,

deshidratación, eclampsia, trastornos pulmonares crónicos, eritrocitosis,
policitema vera, choque (no hipovolémico).
Se deben seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y

de Bioseguridad.
1. Mala proporción de sangre/ anticoagulante.

2. Sangre con coágulos.
3. Muestra mal agitada al momento de cargar el tubo capilar.
4. Centrifugación breve o a bajas revoluciones.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
IV. DETERMINACION DE INDICES HEMATIMETRICOS
El propósito del análisis es la obtención de los índices hematimetricos para la

identificación del tipo de anemia.
Es indispensable el estudio de la serie roja en el hemograma; los índices

eritrocitarios proporcionan una información sobre el tamaño del hematíe (VCM),
la cantidad (CHM) y la concentración (CHCM) de hemoglobina de los hematíes.
Estos datos se obtienen rutinariamente en todo hemograma completo.
Para calcularlos es necesario e indispensable tener el dato del número de

hematíes, el hematocrito y la determinación de la hemoglobina; los índices
eritrocitarios permiten clasificar las anemias en normocíticas, microciticas o
macrociticas.
Sangre total.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Cálculo de los índices hematimétricos mediante fórmulas utilizando valores de

hematocrito, número de glóbulos rojos y hemoglobina.
a) Cálculo erróneo de las fórmulas respectivas.

b) Obtención equívoca de valores de hemoglobina, hematocrito y recuento de
glóbulos rojos.
Tomar los valores adecuados para calcular con la fórmula.
7.1. Volumen corpuscular medio (VCM)
El VCM es el valor medio del volumen de cada hematíe; se calcula a partir del
hematocrito y del número de hematíes mediante la siguiente fórmula:
Volumen de cada hematíe (VCM) = hematocrito X 100

Nº glóbulos rojos
7.2. Hemoglobina corpuscular media (HCM)
La HCM expresa el valor medio del contenido de hemoglobina que existe en cada
hematíe; se determina mediante la siguiente fórmula:
Hemoglobina de cada hematíe (HCM) = hemoglobina X 100

Nº de hematíes
7.3. Concentración corpuscular media de hemoglobina (CCMH)
La CCMH corresponde a la concentración de hemoglobina en los hematíes.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
CCMH = Hemoglobina X 100

Hematocrito
VCM

MASCULINO 86 – 96 fL
FEMENINO 88 – 98 fL
NIÑOS 80 – 95 fL
HCM

MASCULINO 27-34 pg
FEMENINO 26 -33 pg
NIÑOS 31 – 37 pg
CHCM

MASCULINO 30 -37 g/dl
FEMENINO 29 -36 g/dl
NIÑOS 32 - 36 g/dl
VCM permite clasificar en anemia microcitica, macrocítica o normocítica.

HCM posibilita sospechar en una anemia hipocrómica.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
CHCM se eleva si se incrementa el contenido hemoglobínico

intraeritrocitario.
 La macrocitosis puede deberse a deficiencia de ácido fólico, de vitamina

B12, enfermedades hepáticas, alcoholismo, etc.
 La microcitosis puede deberse a anemia ferropriva o a talasemias.

 La hipocromia suele coincidir con la microcitosis observada en deficiencia de
hierro o en las talasemias.
 La hipercromia asociada a microcitosis es secundaria a deficiencia de ácido
fólico, de vitamina B12, enfermedades hepáticas, alcoholismo, etc.
 El VCM refleja el tamaño medio de los hematíes y se incrementa en anemias
megaloblásticas.
 En anemias ferropénicas o talasemias los hematíes son más pequeños y
puede haber microcitosis.
 La HCM es la proporción real que corresponde a cada glóbulo rojo, siendo
baja si el valor es inferior a 27 picogramos (micromicrogramos) en anemias
hipocrómicas ferropénicas y se observan cifras superiores a 32 pg en anemias
megaloblásticas como la perniciosa.
 También puede determinarse la concentración de hemoglobina en cada
eritrocito, en relación con la concentración de hemoglobina corpuscular media
(CHCM) con un promedio de 35 g/dL y límites entre 32 a 36 g/dL.
 En anemias hipocrómicas, el valor es inferior a 32 g/dL y en las hipercrómicas
con cifras superiores a 36 g/dL.

Bioseguridad.
11. Fuentes potenciales de variabilidad.
- Tamaño anómalo de los eritrocitos.

- Las células grandes pueden elevar los valores de VCM.
- La presencia de crioaglutininas.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
V. RECUENTO DE RETICULOCITOS
Determinar el número de reticulocitos presentes en sangre periférica, como reflejo

del grado de actividad eritropoyética.
Los reticulocitos son hematíes que contiene restos de ARN (ribosomas) , que es
un compuesto que precipita en presencia de colorantes vitales, tales como el azul
de cresil brillante (ACB) o el nuevo azul de metileno (AMN) y da lugar a imágenes
filamentosas fácilmente visibles mediante el microscopio óptico.
No todos los reticulocitos presentan un mismo grado de madurez; así los más
inmaduros poseen abundante precipitado citoplasmático, mientras que los mas
maduros, por el contrario poseen un fino y escaso precipitado, que muchas veces
suele pasar inadvertido. En condiciones normales, los reticulocitos permanecen
en la médula ósea durante 2 a 3 días y terminan su maduración en 24 horas
aproximadamente, una vez ya en sangre periférica.
El recuento de reticulocitos debe realizarse a partir de la sangre total con
anticoagulante y de ser posible, dentro de las dos primeras horas de la
extracción. Debe recordarse que los reticulocitos maduros se hallan in vitro por lo
que el recuento será realizado con la mayor prontitud posible, luego de su tinción
con los colorantes mencionados.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Sangre total que contiene EDTA K3.
Tubo de hemólisis y colorante.
 Microscopio,
 Colorante azul brillante de cresil ó
 Nuevo azul de metileno
Mediante una pipeta de Pasteur se añade a un tubo de hemólisis 3 gotas de

solución colorante y 3 gotas de sangre total bien homogenizada. En caso de
valores muy bajos de hematocrito, debe colocarse doble cantidad de sangre total
en relación a solución colorante.
1. La suspensión (sangre I colorante) se agita suavemente y se deja a 37°C

durante 15 minutos. Transcurrido este tiempo, se toma una pequeña gota de
la suspensión y se extiende sobre un portaobjetos. Luego se procede a la
contra-tinción, por lo que, una vez seca, la extensión puede ser observada al
microscopio.
2. Mediante el objetivo de inmersión se busca en primer lugar, el área más

adecuada para realizar el recuento y que corresponde a la zona de extensión,
donde los hematíes se hallan bien individualizados y regularmente
distribuidos.
Debido a que la reproductividad de este método de recuento presenta
coeficientes de variación relativamente elevados, es importante que se realice
con el mayor número posible de hematíes.
En general se considera la cifra de 1.000 hematíes como aceptable para
deducir a partir de ella el porcentaje correspondiente a reticulocitos
observados.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Realizar el recuento por duplicado.
 Eritrocitos con cuerpos de Howell-Jolly.

 Embarazo, por incremento fisiológico en los valores de reticulocitos.
Cálculo de resultados:
Reticulocitos (%) = Nº de reticulocitos contados X 100

N° de hematíes observados
VALORES UNIDADES
Recién nacido 2.0 – 6 %
Adultos y niños 0.2 - 2 %
Recuento obtenido mayor a 2%.
1.- Disminución de la cifra de reticulocitos. (reticulocitopenia)
 Aplasia medular
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 Anemias carenciales (megaloblástica y ferropénica)

 Anemias diseritropoyéticas ( adquiridas y congénitas)
2.- Aumento de la cifra de reticulocitos (reticulocitosis)
 Anemias hemolíticas
 Anemias post-hemorrágicas
 Anemias carenciales en convalescencia.

Bioseguridad.
o Empleo de una relación sangre-colorante insuficiente.

o Realizar el recuento en un extendido grueso.
o Confundir el precipitado del colorante con los reticulocitos.
o Embarazo donde se incrementan los valores de reticulocitos.
VI. DETERMINACION DE HIERRO SÉRICO Y TIBC
Determinar la concentración sérica de hierro para definir el tipo de anemia o

hipersideremia que pueda tener el paciente.
El hierro es un metal fundamental en el metabolismo celular, ya que forma parte

de la estructura de gran número de proteínas con importantes funciones
biológicas (hemoglobina, mioglobina, citocromos y ciertas enzimas tales como la
catalasa y las peroxidasas).
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Estas proteínas dejan de sintetizarse o carecen de acción biológica si no es en

presencia de niveles adecuados de hierro.
El hierro contenido en los alimentos se absorbe a nivel del duodeno, para lo cual
es necesario que se halle en forma reducida (Fe ++); este hierro rara vez se
encuentra en forma libre siendo necesaria la digestión de los mismos para que
deje de formar complejos con otros compuestos.
Una vez libre el hierro es reducido por otras substancias también ingeridas con
los alimentos, entre las que destaca la vitamina C. El intestino absorbe el 5 a 10 %
del total de hierro ingerido, siendo eliminado el resto por las heces.
Repitiendo la misma muestra diez días después se obtuvo un coeficiente de

variación de 4.2%.
Linealidad:
Hierro sérico hasta 1000 µg/dl.

Capacidad total de combinación de hierro hasta 500 µg/dl.
Suero
Tubo Vacutainer, tapa roja sin ningún aditivo.
Espectrofotómetro
Kit para la determinación de hierro sérico.
Trabajar con un estándar de concentración conocida.
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HIERRO:
BLANCO ESTANDAR MUESTRA (D)

Agua destilada 500 µl - -
Suero del paciente - - 500 µl
500 µl
Estándar - -
Buffer 2 ml 2 ml 2 ml
 Leer en el espectrofotómetro a 560 nm, llevando a cero con agua destilada.
 Luego agregar una gota del reactivo PBTS a los 3 tubos. Mezclar.
 Incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
 Volver a leer en el espectrofotómetro a 560 nm llevando la lectura a cero con
agua destilada.
TIBC:
 En un tubo poner 500 microlitos del suero del paciente, luego añadir 500
microlitros de Ia solución saturante.
 Incubar 5 minutos a 37° C, añadir el polvo hasta enrasar (agitar fuerte y
constantemente) durante 5 minutos.
 Centrifugar por 15 minutos a 4000 rpm.
 Trabajar con el sobrenadante siguiendo el mismo procedimiento anterior del
hierro total.
 Las lecturas se realizan dos veces, la primera es el blanco y la segunda
después de la reacción.
Trabajar con dos sueros control (nivel bajo y alto) procesando en forma paralela a
las muestras desconocidas.
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o Suero con restos de eritrocitos.

o Muestras hemolizadas.Material reutilizado.
o Micropipetas descalibradas.
Corregir las lecturas de S y D restándoles los blancos correspondientes.

S –B = S corregida.
D – (B + BS)= D corregida
Fe (µg/dl) = D corregida X f
Donde: f = 100 µg/dl

S corregida
Porcentaje de saturación de la transferrina, que se calcula de la siguiente manera:
Saturación % = Hierro sérico(µg/dL) x100

Transferrina (µg/dL)
HIERRO SERICO

MASCULINO 65 – 170 µg I dl
FEMENINO 50 – 170 µg I dl
NIÑOS 50 – 120 µg I dl
TIBC

MASCULINO 250 – 450 µg I dl
FEMENINO 250 – 450 µg I dl
NIÑOS 250 – 400 µg I dl
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Saturación de transferrina = 20 – 55%.
Ferropenia
Tipo Causas Mecanismos

Fisiológica
-Embarazo -Hiperconsumo
-Crecimiento -Hiperconsumo
-Menstruación -Pérdida
Patológica
-Hernia de hiato y- Pérdida crónica por
várices esofágicas micro sangrado
-Ingesta de aspirinas digestivo
-Neoplasia digestiva - Pérdida crónica por
Hemólisis micro sangrado
intravascular crónica. digestivo
- Pérdida crónica por la
Orina (hemosiderinuria)
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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Cuando el resultado es menor a lo normal se denomina ferropenia y puede

deberse a embarazo, hemorragia, anemia ferropénica, deficiencia de hierro o
directamente a que exista una mala absorción en la dieta.
Cuando el resultado es mayor a lo normal puede deberse a: poliglobulia,

desórdenes en la síntesis de hemoglobina, fenómenos hemolíticos o en casos de
terapias transfusionales.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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14. Precaución de seguridad:

Bioseguridad.
Las transfusiones recientes de sangre pueden alterar los resultados de la prueba.

La ingesta reciente de alimentos con contenido elevado de hierro.
Las enfermedades hemolíticas pueden asociarse con niveles de hierro
artificialmente elevados.
- Errores de extracción
- Empleo de anticoagulante no recomendado.
- Coagulación parcial de la sangre.
- Empleo de pipetas volumétricas mal calibradas
- No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del

micro-capilar antes de introducir el reactivo.
- Dilución incompleta de la sangre en el reactivo.
- Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o caducado.
- Lectura antes de tiempo necesario para la completa transformación de la

hemoglobina en cianometa-Hb.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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VII. RECUENTO DE LEUCOCITOS ó GLOBULOS BLANCOS

Los leucocitos son una de las defensas celulares del organismo, frente a la
invasión de agentes infecciosos y tóxicos. Existen dos grupos de glóbulos
blancos: la serie granulocitica (polimorfonucleares) y la serie agranulocitica
(mononucleares).
Por medio de los leucocitos podemos diagnosticar una serie de enfermedades;

además el porcentaje leucocitario nos ofrece información para muchos
diagnósticos.
El recuento de los leucocitos puede realizarse mediante métodos ópticos con

cámara cuenta glóbulos y a través de métodos electrónicos.
Se realiza en tubos normales, en los cuales se coloca el reactivo para glóbulos

blancos, y luego la muestra; esto para obtener mayor precisión y reducir el error.
La muestra debe ser sangre total
Microscopio, micropipeta, reactivo de Tuerk.
- Colocar en un tubo pequeño 0.5 ml del líquido de Tuerk, luego añadir 20 µl de

la muestra (sangre total bien homogenizada).
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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- Luego proceder al cargado a la cámara de Neubauer.
- Realizar el conteo de los cuatro cuadrantes externos de la cámara que es para

glóbulos blancos.
- Se cuentan los leucocitos en cada uno de los cuadrados secundarios de los

cuatro mas grandes de las esquinas, empezando en el extremo izquierdo de la
fila superior y siguiendo hacia la derecha, luego se pasa a la segunda fila
hacia la izquierda por sus cuatro cuadrados secundarios, luego a la tercera
pasando hacia la derecha por sus cuadrados, y finalmente se pasa a la cuarta
que se recorre desde la derecha hacia la izquierda hasta contar todos los
leucocitos en los 16 cuadrados secundarios. Solo se incluyen las células que
toquen las líneas divisorias de la izquierda y arriba; las que toquen las líneas
de la derecha y abajo se omiten.
- La suma de los leucocitos encontrados en los 16 cuadrados secundarios da el

número de ellos por un milímetro cuadrado. Se suman los números
encontrados en los cuatro cuadrados de las esquinas de cada cámara.
Número de leucocitos por mm3 =recuento de leucocitos X 65 (factor de

dilución)
Realizar un doble recuento para verificar la repetibilidad.
 Muestras con hilos de fibrina.

 Diluciones erradas de la sangreó del anticoagulante.
 Imprecisión en el pipeteo del reactivo de Tuerk.
 Imprecisión en el pipeteo de la muestra sanguínea.
 Diluciones inexactas.
 Falta de agitación de la muestra.
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 Micropipeta descalibrada.
Recuento con objetivo de 10x , de los cuatro cuadrados laterales de la cámara de

Neubauer.
El número contado de leucocitos multiplicar por 65 (factor de dilución).
LEUCOCITOS

MASCULINO 5 – 10 *103/ mm3
FEMENINO 5 – 10 *103/ mm3
NIÑOS 6.2 – 12 *103/ mm3
Leucocitos contados con un valor menor a 2.500 o mayor a 30.000/mm 3.
Leucocitosis:
El número de glóbulos blancos excede de 10.000 por mm3. Puede ser de

carácter fisiológico, como por ejemplo, después de una intensa actividad física o
mental ó también, en los primeros meses de vida o durante el embarazo.
Leucopenia:
Es el descenso de la cifra de leucocitos por debajo de 5.000 por mm 3. En
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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general la reducción se realiza a expensas de los granulocitos neutrófilos

segmentados, de lo cual resulta, una linfocitosis relativa. Producen leucopenia el
paludismo, ciertas anemias graves (aplasia, anemia perniciosa), el sarampión,
influenza, tuberculosis ganglionar, los estados graves de desnutrición, las
intoxicaciones crónicas (éter, arsénico mercurio, saturnismo), la fiebre
ondulante, etc.

de Bioseguridad.
- El embarazo y el parto.
- La actividad física y el estrés.
- La ingesta de fármacos.
VIII. DETERMINACION DE LA FORMULA LEUCOCITARIA
1. Propósito del análisis
La práctica del frotis sanguíneo es de gran importancia en Hematología, ya que el

diagnóstico de muchas enfermedades hematológicas puede realizarse con solo
observar las características morfológicas de las células sanguíneas.
Debido a ello la técnica de realización del frotis debe ser impecable procurando
que este no sea muy fino ni excesivamente grueso.
Con ellos se conseguirá una distribución adecuada de las células en diferentes

áreas del frotis cuyo conocimiento es fundamental tanto para la observación de la
morfología eritrocitaria como para la realización de la fórmula leucocitaria ó
recuento diferencial de leucocitos. La fórmula leucocitaria es el recuento
diferencial de cada uno de los leucocitos presentes en la sangre periférica.
Los leucocitos se clasifican en dos grandes grupos:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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POLIMORFONUCLEARES:
 Neutrófilos
 Eosinófilos
 Basófilos
MONONUCLEARES:
 Linfocitos
 Monocitos
La formula leucocitaria junto con la determinación de los restantes parámetros

hematológicos básicos, continúan siendo un procedimiento diagnóstico de gran
valor.
Esto es así porque la formula leucocitaria suministra a la clínica la información
sobre
el estado de las células de la sangre, así como la eventual presencia de células
que normalmente no deben circular en sangre, tales como: blastos, mielocitos,
células plasmáticas, linfocitos reactivos, eritroblastos y otros).
Existen tres procedimientos para realizar el frotis sanguíneo:
a) método de los dos portaobjetos
b) método de los dos cubreobjetos
c) método automático mediante extensor de frotis por centrifugación (Spinner).
En cualquiera de estos métodos deberá tenerse siempre en cuenta las siguientes

precauciones:
1. Todo material a emplearse (portaobjetos y cubreobjetos) debe estar

escrupulosamente limpio y desengrasado.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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2. Si se parte de punción digital, no deberá emplearse nunca la primera gota.
3. Si se parte de punción venosa, el frotis deberá hacerse con la máxima

rapidez posible con sangre no tratada con anticoagulante.
La imposibilidad técnica en muchos casos de realizar los frotis en la misma

cabecera del enfermo, debido al empleo cada vez más extendido de sistemas
automáticos para la realización del mismo, obliga a utilizar sangre tratada con
anticoagulante.
En este caso el anticoagulante de elección es el EDTA-K 3, debido a su escasa
acción sobe la morfología de las células sanguíneas.
El frotis siempre debe ser realizado dentro de las dos primeras horas de
practicada la extracción, ya que si no es así el efecto del anticoagulante sobre los
leucocitos produce hinchamiento nuclear con falso aumento de número de
neutrófilos no segmentados (bandas) vacuolización citoplasmatica y aparición de
diversos artefactos.
 sangre venosa
 sangre de pulpejo del dedo
 sangre con anticoagulante EDTA-K3
 sangre sin anticoagulante.
Tubo capilar con o sin heparina. Tubo Vacutainer con tapa lila que contiene
anticoagulante EDTA K3.
 Microscopio
 Colorante Wright, Giemsa , May Grunwald, Camco Quick.
 Aceite de inmersión
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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I. Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjetos,

empleando para ello el canto esmerilado de otro portaobjetos, formando
un ángulo de 45° y desplazarlo suavemente hacia atrás hasta que
alcance la gota de sangre.
II. Esperar a que por capilaridad toda la sangre se distribuya uniformemente.
Es recomendable que la sangre no llegue a los lados del portaobjetos
sobre el que se realizará el extendido.
III. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjetos inclinado

sobre el otro en sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede
bien extendida sobre la superficie del primer portaobjetos.
El grosor del frotis sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen
entre si ambos porta-objetos.
Así, si es superior a 45° la extensión obtenida será gruesa y corta; por lo
contrario, si es inferior a 45° será larga y fina.
Secado del frotis a temperatura ambiente y en posición horizontal.
IV. Realizar la tinción elegida, con el reactivo correspondiente.
El frotis sanguíneo, una vez seco, se somete a un proceso de fijación y

posteriormente a una tinción mediante un colorante adecuado. En el laboratorio
se utiliza Camco Quick Satín II.
1.- Colorante Camco Quick Satín II: introducir la placa tres minutos en la cubeta
del colorante, otros tres minutos en la cubeta con agua destilada y luego lavar en
agua corriente.
Metanol CAS 89%

Colorante Wright-Giemsa <1%
Alcohol soluble
Buffers
Agente solubilizante
Agente estabilizante.
2.- Colorante de Giemsa
Giemsa seco (polvo) 1g

Glicerina 66ml
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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Calentar a 50° por 2 horas

Alcohol metílico absoluto y totalmente libre de acetona 56 ml
Dejar a temperatura ambiente por 7 a 14 días (maduración)
Filtrar antes de su empleo.
3. - Colorante de May-Grunwald
May -Gruwald seco (polvo) 0.3g

Alcohol etílico absoluto libre de acetona 100 ml
Calentar la mezcla 56° hasta la disolución completa del
colorante.
Dejar enfriar en nevera a 4°C durante 24 horas, agitando de vez
en cuando.
Filtrar antes de su empleo.
4.-Colorante de Wright
1. Wright seco (polvo) 1 g
2. Alcohol etílico absoluto y libre de acetona 600ml
Tanto la eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de
pH de las diferentes estructuras celulares de forma que las que tienen carácter
básico fijan mayoritariamente la eosina (colorante ácido), mientras que las que
poseen propiedades ácidas fijan principalmente el azul de metileno (colorante
básico).
Existe diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmáticas por dichos

colorantes y ello permite clasificar los leucocitos en tres grandes grupos:
a) Granulocitos eosinófilos: en los que la granulación específica contiene

sustancia de intenso carácter básico, que fijan fundamentalmente los colorantes
ácidos y se tiñen de color rojo naranja
b) Granulocitos basófilos: en los que la granulación especifica posee sustancias

de fuerte carácter ácido (heparina principalmente) que fijan los colores básicos
(basofílicos) como el azul de metileno y se tiñen de color azul oscuro.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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c) Granulocitos neutrófilos: en los que la granulación específica posee

compuestos de carácter neutro, que fijan ambos colorantes simultáneamente.
Debido a ello se tiñen de un color pardo (neutrofilia).
V. Llevar al microscopio, emplear el objetivo de mayor aumento (de

inmersión).
VI. Leer, diferenciar a los leucocitos. Finalmente el número de células
observadas tiene valor para la interpretación de los hallazgos y ese
recuento se realiza con cien leucocitos.
Origen = zona de linfocitos
Cuerpo = zona ideal
Cola = zona de neutrófilos y monocitos.
Esquema de un frotis con indicación de las diferentes áreas que lo componen

y la distribución de las mismas.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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1.- Zona excesivamente gruesa: Se halla en la región inmediatamente al

punto de partida de la extensión (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento
de los linfocitos.
2.- Zona excesivamente fina: Corresponde al final de una extensión y termina

con una área donde las células adoptan una disposición acordonada (barbas). En
esta región existe un exceso de granulocitos y monocitos.
3.- Zona ideal: Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un
reparto equilibrado de las células.
Asimismo, en todas estas zonas, la morfología eritrocitaria puede variar también

ampliamente. En las zonas excesivamente gruesas, los hematíes forman
aglomerados. Se debe seleccionar la zona ideal, ya que corresponde a aquella en
la que los hematíes se hallan bien separados entre sí y en cada uno de ellos se
observa bien diferenciada la zona clara central.
Realizar dos placas del mismo paciente con sus respectivos recuentos.
 Frotis gruesos.
 Frotis pequeños.
 Frotis calamonados.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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 Tinción con precipitado.
 Muestras guardadas por más de tres horas.
 Leucocitos deformados por el excedente de anticoagulante.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Se realiza el recuento de 100 células diferenciadas para informar en

porcentaje.
Obtener una buena placa teñida para realizar el recuento diferencial sin ninguna
dificultad e informar en porcentajes.
SERIE
HOMBRES (%) MUJERES (%) NIÑOS (%)
BLANCA
Neutrófilos 40 - 70 40 - 70 20 - 40
Eosinófilos 0-4 0-4 0-5
Basófilos 0-2 0-2 0-4
Cayados 0-3 0-3 0-5
Linfocitos 20 - 40 20 - 40 45 - 70
Monocitos 2 - 10 2 - 10 2 - 10
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
SERIE BLANCA VALORES ELEVADOS VALOR DISMINUIDOS

Neutrófilos Infecciones agudas; procesos - Sarampión- anemia
inflamatorios (neumonía, aplástica - anemia hemolítica
escarlatina, difteria, congénita - septicemia tóxica
meningitisaguda, leucemia, - Leucemia.
reumatismo articular)
Eosinófilos - Infecciones agudas - enfermedades infecciosas

- Enfermedades alérgicas febriles (tioidea, neumonía,
- neumonía sarampión)
-asma bronquial -parasitosis
-urticaria -trastornos hematopoyéticos
Basófilos - leucemia mieloide

-policitemia vera
-algunas anemias hemolíticas
- Enfermedad de Hodgkin
Linfocitos -infecciones agudas y crónicas

-fiebre tifoidea
-gripe
-tuberculosís
-Anemia perniciosa y aplásica.
Monocitos - carcinomas
-tuberculosis
-Leucemia monocítica
-intoxicaciones por tetracloruro
de carbono.

de Bioseguridad.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
- Embarazo y parto.
- Actividad física y estrés.
- Ingesta de fármacos.
IX. RECUENTO DE PLAQUETAS
El recuento plaquetario es el recuento del número de plaquetas por milímetro

cúbico (ó por microlitro) de sangre. Se realiza a todos los pacientes que presentan
petequias, hemorragias espontáneas. También se utiliza para controlar el
tratamiento de la trombocitopenia o la insuficiencia de la médula ósea.
Las plaquetas son células producidas por los megacariocitos en la médula ósea
mediante el proceso de fragmentación citoplasmática, circulan por la sangre y
tienen un papel muy importante en la coagulación.
Para ello forman nudos en la red de fibrina, liberan substancias importantes para
acelerar la coagulación y aumentan la retracción del coágulo sanguíneo.
En las heridas las plaquetas aceleran la coagulación, y además al aglutinarse
obstruyen pequeños vasos, y engendran substancias que los contraen.
Las plaquetas por su forma peculiar son inalterables y es fácil observar en el
microscopio, existiendo de varios tamaños.
Sangre total.
Tubo de tapa lila con anticoagulante EDTA K 3.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Microscopio, líquido diluyente (oxalato de amonio al 1%).
1. En un tubo de hemólisis cargar líquido diluyente 1.98 ml
2. Tomar 20 microlitros de sangre total y mezclar en el tubo con el líquido.

3. Mezclar y dejar en reposo durante 10 minutos.
4. Desechar las 5 primeras gotas y luego cargar en lacCámara de Neubauer y
en el interior de una cámara húmeda por 10 a 15 minutos.
5. Observar al microscopio.
6. Para el recuento de plaquetas, se eligen dos cuadriculados situados en
ángulos opuestos del retículo de Neubauer y se cuentan las plaquetas
depositadas sobre 8 cuadraditos de los 16 que existen en cada cuadriculado.
Realizar un doble cargado y recuento de plaquetas.
 Muestras con coágulo(s).

 Pacientes tratadas con quimioterapia
 Deficiente preparación del reactivo diluyente.
El valor obtenido del recuento en la cámara, se multiplica por 2 para tener el

número correspondiente a un cuadrado (16 cuadraditos = volumen 0.1 mm 3). El
valor obtenido se multiplica por 10 (1 mm 3), después por 100 (factor de dilución) y
finalmente por 106.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
PLAQUETAS

MASCULINO 150 -400 *103/ mm3
FEMENINO 150 – 400 *103/ mm3
NIÑOS 100 – 400 *103/ mm3
Tomar en cuenta los valores menores a 50.000 o mayores a 1.000.000/mm 3.
La disminución en el número de plaquetas (por debajo del límite menor normal) se

denomina trombocitopenia y el aumento en el número de las mismas (superior al
límite normal más alto) se llama trombocitosis.
Cuando existe una trombocitopenia aislada, la causa más común es la
destrucción inmune, pero existen trombocitopenias asociadas a un gran número
de otras enfermedades como son:
 Coagulación Intravascular diseminada (C.I.V.)

 Anemia hemolítica microangiopática
 Hiperesplenismo (exceso de función del bazo)
 Disminución de la producción en el caso de anemia aplástica.
 Invasión de la médula ósea por enfermedades malignas como leucemias,
neuroblastoma, linfoma.
 Quimioterapia por cáncer.
 Púrpura trombocitopénica idiopática (PTI)
 Leucemia
 Prótesis de válvula coronaria
 Transfusión de sangre
 Choque anafiláctico
 Algunas infecciones que producen hemorragias (púrpuras con
trombocitopenia), en las que se hallan muy disminuidas.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
La trombocitosis es el aumento en el recuento de plaquetas y puede ser

secundaria a diversas causas, destacando las infecciones virales bacterianas o
por Mycoplasma sp, pero existen muchas otras enfermedades que se asocian a
trombocitosis como son:
 Anemia por deficiencia de hierro

 Enfermedad de Kawasaki
 Síndrome nefrótico
 Síndrome post-esplenectomía (tras extraer el bazo)
 Traumatismos
 Tumores
 Trombocitosis primaria

de Bioseguridad.
 Aumenta cuando se vive a grandes alturas.

 Cargado deficiente en la pipeta de Thoma.
 Ejercicio intenso (incremento de plaquetas)
 Menstruación (disminución transitoria de plaquetas)
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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X. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN O ERITROSEDIMENTACION
Aunque se trata de una prueba, la velocidad de sedimentación de los eritrocitos o

eritrosedimentación es ampliamente usada en clínica ya que tiene valor en el
diagnóstico de diversas condiciones patológicas.
Se han descrito gran número de métodos para su determinación, los que se

diferencian por los anticoagulantes empleados, las dimensiones del tubo, el
volumen de sangre y el tiempo utilizado.
Esta velocidad depende del fibrinógeno y, en menor grado, de la globina y de la

diferencia que existe entre la densidad del plasma y la masa de glóbulos rojos;
así cuanto mas grande sea la diferencia mencionada, mayor será la velocidad de
eritrosedimentación.
Método de Westergren: es casi universal y es el mas empleado por su sencillez.

Se utiliza una pipeta de vidrio con 2mm de diámetro interno, de 30 cm. de longitud
y calibrada de O a 200mm.
Sangre total.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
 Soporte de Westergren,
 Pipetas de Westergren
 Reloj cronometro
 Cargar la pipeta de Westergren con sangre que contenga el anticoagulante

que puede ser EDTA K3.
 Se llena la pipeta hasta la señal O y se pone en una gradilla apretando
bien el fondo de la pipeta contra un tapón de goma antes de quitar el dedo
del borde superior del tubo y se deja en posición exactamente vertical
sujeta por la pinza superior.
 Estas gradillas se comercializan para 10 pipetas.
 Se lee la altura en milímetros y de los eritrocitos depositados en los 60
minutos.
 Se realizan dos lecturas: a la primera hora y otra a la segunda hora,
aunque este último valor (para calcular el índice de Katz) ya es obsoleto.
Cargar la muestra por duplicado.
- Pueden producirse valores bajos cuando la muestra recogida permanece

inmóvil por más de tres horas antes de su procesamiento.
- Embarazo (incremento)
- Menstruación (disminución)
- Policitemia (incremento)
- La menstruación eleva.
- En la policitemia se acelera.
No se realiza ningún cálculo, se informa lo que se lee en la pipeta de Westergren
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
después de 60 minutos y en milímetros.
VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACION
SEXO VALORES VALORES UNIDADES
1ª hora 2ª hora
MASCULINO 1–5 5 – 10 mm
FEMENINO 1–8 8 – 15 mm
NIÑOS 1 – 10 10 – 21 mm
Lecturas superiores a 14 mm en la primera hora.
 Se observa disminuída: en policitemia vera, algunas infecciones

bacterianas.
 Se observa incrementada: en todas las enfermedades infecciosas agudas

o crónicas, en periodos evolutivos, en las infecciones purulentas.

de Bioseguridad.
 Pipetas con restos de sangre o detergente.

 Pipetas mojadas.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
 Mala agitación de las muestras.
XI. DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS Y Rh
Debido a la presencia de aglutininas naturales en el plasma y de antígenos de

grupo en los eritrocitos es necesario determinar el grupo sanguíneo de cada
persona.
El sistema de clasificación de la sangre humana se basa en los componentes

antigénicos de los glóbulos rojos.
GRUPO SANGUÍNEO ABO
El más importante de los diversos sistemas de clasificación de la sangre es el del

grupo sanguíneo ABO. Los cuatro tipos sanguíneos que se contemplan en esta
clasificación son el A, el B, el AB y el O.
Las células sanguíneas del grupo A tienen el antígeno A en su superficie.

Además, la sangre de este grupo contiene anticuerpos contra el antígeno B
presente en las células rojas de la sangre del grupo B. La sangre de este último
grupo tiene la composición inversa al grupo A.
En el suero del grupo AB no existe ninguno de los dos anticuerpos previos, pero
los glóbulos rojos contienen los antígenos A y B.
El grupo O carece de estos antígenos en los eritrocitos, pero este suero es capaz
de producir anticuerpos contra los hematíes que los contengan. Si se transfunde
sangre del grupo A a una persona del grupo B, los anticuerpos anti-A del receptor
destruirán los glóbulos rojos de la sangre transfundida. Como los eritrocitos de la
sangre del grupo O no contienen ningún antígeno en su superficie, la sangre de
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
este grupo puede ser empleada con éxito en cualquier receptor. Las personas del
grupo AB no producen anticuerpos, y pueden por tanto recibir transfusiones de
cualquiera de los cuatro grupos. Así, los grupos O y AB se denominan “donante
universal” y “receptor universal”, respectivamente.
GRUPO SANGUÍNEO Rh
Este sistema se basa en la existencia o no de diversos aglutinógenos, los factores

del sistema Rh en los glóbulos rojos. Es otro sistema de grupo sanguíneo de
transmisión hereditaria que tiene gran importancia en obstetricia y que también
hay que tener muy en cuenta en las transfusiones sanguíneas.
Al igual que en el sistema ABO, también está implicado un antígeno que se

localiza en la superficie de los eritrocitos.
El grupo Rh+ posee este antígeno en su superficie (D); el Rh- no lo posee y es

capaz de generar anticuerpos frente a él, por tanto, se puede desencadenar una
respuesta inmune cuando se hace una transfusión de sangre de un individuo Rh+
a uno Rh-, aunque no al contrario.
También puede aparecer respuesta inmune entre la madre y el feto: la madre Rh-
se inmuniza por vía placentaria contra los antígenos del hijo Rh+. La inmunización
resulta del paso de los glóbulos rojos fetales a la madre, y, al igual que en el caso
de las transfusiones, no ocurre cuando la madre es Rh+, de ahí su importancia en
Obstetricia.
La inmunidad en la madre se mantiene durante toda la vida. En posteriores

embarazos, si el feto es Rh+, se genera la denominada incompatibilidad feto
materna, de forma que los anticuerpos matemos atraviesan la placenta y se fijan
a los antígenos que portan los glóbulos rojos fetales. El resultado es una
enfermedad denominada eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién
nacido.
Sangre total.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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Tubo tapa lila con EDTA K3.
 Centrífuga
 Sueros: Anti A, Anti B, Anti D
 Solución fisiológica al 0.9%
- Método del tubo (de Landsteiner modificado por Schiff): Sirve para
determinar cualquier clase de aglutinina de tipo salino.
- Método del portaobjetos (Lee Vincent): se coloca 1 gota de suero anti A y al
otro lado anti B.
Procedimiento de la técnica en tubo:
En un tubo de hemólisis realizar una dilución, con 1 mI de solución fisiológica y 50

µl de sangre total, se mezcla para obtener una suspensión homogénea; en tres
tubos de hemólisis se coloca 50 µl de la suspensión de glóbulos a cada tubo,
luego al tubo titulado A se coloca una gota de suero anti-A, en otro marcado como
B, una gota de suero anti-B y en el tercer tubo marcado como “D” una gota de
suero anti-D; luego, centrifugar por 30 segundos.
Se observa agitando suavemente los tubos si se presenta aglutinación (+), o de

lo contrario la mezcla presenta un aspecto homogéneo (-). Incubando los tubos a
37°C se puede eliminar la crioaglutinación si se sospecha la presencia de
aglutininas frías.
Cuando el tubo de anti D no presenta aglutinación realizar la prueba de Coombs

para confirmar el factor Rh.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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Realizar pruebas de los antisueros con eritrocitos conocidos.
Excedente del antisuero o excedente de los eritrocitos.
Grupo Anti Anti B Anti AB

sanguíne A
o
O - - -
A + - +
B - + +
AB + + +

de Bioseguridad.
- Tubos mal lavados.

- Restos de detergente.
- Utilización de “tips” sucios.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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XII. PRUEBA DE COOMBS DIRECTA E INDIRECTA
Se basa en que los dos anticuerpos llamados incompletos pueden encontrarse

revistiendo los eritrocitos o bien estar en suspensión en el plasma.
Como corresponden a la fracción gammaglobulina de las proteínas séricas, un

suero antigamma globulina humana de conejo (suero de Coombs) aglutina
directamente con los eritrocitos, cuando estos están revestidos, pero no cuando
los anticuerpos están en suspensión ó en el plasma o suero.
De esta diferencia surgen 2 tipos de pruebas de Coombs: la directa y la indirecta.
Prueba de Coombs directa: Su principal utilidad es para comprobar la carga de

los eritrocitos con anticuerpos bloqueadores incompletos, especialmente para el
diagnóstico de las anemias hemolíticas adquiridas por auto-anticuerpos, para
descubrir los accidentes transfusionales, así como para la comprobación de
combinaciones Rh-anticuerpos en los eritrocitos del recién nacido con
eritroblastosis.
Prueba de Coombs indirecta: Se demuestra presencia de anticuerpos

incompletos circulantes en el suero. En la inmunización materno-fetal el factor Rh
puede poner de manifiesto anticuerpos en el suero de la madre antes del parto.
Es de mucho valor para seguir el curso de sensibilizantes postransfusionales,
frente al factor Rh u otros grupos sanguíneos y resulta positiva en algunas
anemias hemolíticas adquiridas.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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Sangre total para Coombs directo; y sangre sin anticoagulante para Coombs
indirecto.
Coombs directo: Tubo tapa lila con EDTA K3

Coombs indirecto: Tubo sin anticoagulante.
Centrífuga, baño maría, suero anti-globulina ó de Coombs.
Prueba de Coombs directa: Revela anticuerpos adheridos (eritrocitos

revestidos)
1. Lavar glóbulos rojos del paciente, con solución salina, tres veces.
2. Tomar una gota de glóbulos rojos lavados al 5% en tubo de hemólisis y

agregar una gota de suero antigammaglobulina.
3. Se centrifuga por 30 segundos a 1.000 r.p.m. Se observa si presenta

aglutinación en el fondo del tubo y se efectúan breves movimientos de
inclinación en busca de grumos de eritrocitos.
Prueba de Coombs indirecta: Revela anticuerpos en suspensión en el suero.
1. Se prepara una suspensión al 5% de eritrocitos lavados tres veces del

grupo “O” factor Rh-positivo con solución salina isotónica.
2. Se coloca en un tubo de hemólisis una gota de suspensión de eritrocitos y

una gota del suero en estudio.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
3. Se incuba a 37° C en baño maría durante una hora.
4. Lavar (eritrocitos + suero) tres veces con solución salina isotónica.
5. Se añade una gota de suero de Coombs. Centrifugar y observar si

presenta aglutinación.
Utilizar eritrocitos control, normales, no sensibilizados y otros eritrocitos

sensibilizados con IgG.
Para estandarizar el suero antiglobulina realizar cuatro diluciones, a cada tubo
añadir una gota de eritrocitos sensibilizados con Ig G, al tubo “2” eritrocitos
sensibilizados con complemento, al tubo “3” eritrocitos no sensibilizados.
Mezclar, centrifugar por 45 segundos y leer macroscópicamente.
Falsos positivos:
- Lavado insuficiente de eritrocitos.
- Elevada reticulocitosis en la muestra de sangre analizada.
- Contaminación bacteriana.
- Restos de detergente en el tubo.
Falsos negativos:
- Tiempo de incubación insuficiente.
- Dilución incorrecta.
- Alteración del suero antiglobulina.
- Eliminación de los auto-anticuerpos fijados en la superficie eritrocitaria.
9. Principios del procedimiento:
Realizar diluciones (1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, 1/1024),
en caso de presentar aglutinación para informar en forma cuantitativa.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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Informar de acuerdo a la aglutinación que presenta en el último tubo.
Los resultados normales son negativos, no presentan aglutinación.
Anormalidades:
Prueba de Coombs directa:
a. diagnóstico de las anemias hemolíticas

b. accidentes transfunsionales
c. Leucemia linfocítica
d. Lupus eritematoso diseminado
Prueba de Coombs indirecta:
Algunas anemias hemolíticas adquiridas.
12. Precaución de seguridad:

de Bioseguridad.
- Empleo de eritrocitos caducados.

- Empleo de material húmedo o sucio.
- Utilizar eritrocitos que no sean O Rh +
- Suero antiglobulina caducada o mal conservada.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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XIII. ANALISIS POR CITOMETRIA DE FLUJO
CELL – DYN 3500 R
La citometría de flujo es un proceso, en el cual las células u otras partículas

biológicas recorren por una corriente de líquidos especiales y a través de un
sensor se miden sus sus caracteristicas físicas o químicas.
Permite examinar rápidamente un gran número de células y tiene una capacidad
superior a los métodos tradicionales.
DESCRIPCIÓN GENERAL:
El sistema CELL-DYN 3500 es un analizador hematológico automático y

multiparamétrico, diseñado para utilizarse en el diagnostico in vitro en laboratorios
clínicos. Existen dos versiones del instrumento:
El sistema CELL-DYN 3500 Modelo SL con un muestreador automático y el

sistema CELL-DYN 3500 Modelo CS con un muestreador manual de tubos
cerrados. En las dos siguientes figuras se muestran un modelo de cada versión.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Figura 1: SISTEMA CELL-DYN 3500 Modelo CS
El sistema CELL-DYN 3500 Modelo SL está provisto de un módulo independiente

con un instrumento automático. Desde el muestreador se genera un procesado
continúo de muestras, en modo cerrado, con una capacidad de hasta 100 tubos
en forma simultánea.
El sistema CELL-DYN 3500 Modelo CS está provisto de un módulo manual
integrado para la aspiración de muestras en tubos cerrados, que se conoce como
muestreador de tubos cerrados. Este aspira la sangre contenida en tubos de
extracción cerrados, introducidos en el módulo muestreador construído
expresamente para ello.
1. Propósito del analizador:
Obtener resultados de los 17 parámetros a partir de una muestra de sangre total.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
El sistema CELL-DYN 3500 efectúa las siguientes mediciones hematológicas en

sangre total con anticoagulante con EDTA:
Recuento de glóbulos blancos o leucocitos.
NEU - Recuento absoluto de neutrófilos y porcentaje de neutrófilos
LYM - Recuento absoluto de linfocitos y porcentaje linfocitos
MONO - Recuento absoluto de monocitos y porcentaje de los mismos
EOS - Recuento absoluto de eosinófilos y porcentaje de esas células
BASO - Recuento absoluto de basófilos y porcentaje de los mismos
RETIC ABS - Recuento absoluto de reticulocitos
El analizador del CELL-DYN 3500, aspira y diluye las muestras de sangre total,
transporta y analiza las diluciones preparadas y lava los tubos para preparar la
siguiente muestra.
Para comenzar el ciclo de análisis de las muestras el CELL-DYN mediante la

aguja, aspirada dentro de la válvula de segmentación, gira con objeto de dividir la
muestra de sangre total en tres segmentos:
 32 microlitros para la dilución de WBC

 20 microlitros para la dilución de WBC I HGB
 0.74 microlitros para la dilución RBC I PL T (eritrocitos I plaquetas)
2.1. Análisis de los leucocitos:
Los leucocitos se analizan en dos canales diferentes: Óptico (WOC) se realiza de

la siguiente manera:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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1.- La jeringa del reactivo envolvente WOC dispensa 1.6 ml de reactivo envolvente
a través de la válvula de segmentación y aspira el segmento de la muestra WOC
con 32 microlitros.
2.- Este segmento de la muestra y el reactivo envolvente son transferidos

después de la cámara de mezcla WOC, en donde la dilución es mezclada por
burbujeo. La dilución final representa 1:51.
Nota: la dilución 1:51 significa en un total de 51 partes y no una parte de más 51
partes.
3.- La bomba peristáltica WOC transfiere la dilución WOC desde la cámara de

mezcla WOC hasta el conducto de inyección de la muestra en la celda de flujo
WOC.
4.- El flujo del reactivo envolvente WOC se dirige hacia la celda de flujo.
5.- La jeringa volumétrica WOC inyecta 78 microlitros de la dilución WOC sobre el

flujo del reactivo envolvente de la celda de flujo. Después, se procede a un
enfoque hidrodinámico de la dilución, creando una corriente estrecha.
6.- Se enfoca en rayo láser hacia la celda de flujo. A medida que el flujo de la
muestra intersecciona con el rayo láser, se mide la luz dispersada por las células
en cuatro intervalos angulares diferentes.
MEDICIÓN WBC
La medición de los leucocitos, mediante recuento por impedancia ( WIC) , se

realiza de la siguiente manera:
1.- La jeringa del diluyente WIC / HGB dispensa 5.25 mI del diluyente hacia la
válvula de segmentación, en donde recoge el segmento de la muestra WIC/HGB
con 20 microlitros.
2.- Este segmento y el diluyente son dirigidos después hacia la cámara de mezcla
en el transductor de von Behrens WIC. Al mismo tiempo, la jeringa del reactivo
hemolizante WICI HGB suministra 0.75 mI del reactivo hemolizante WIC / HGB a
la cámara de mezcla.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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3.- Seguidamente se mezcla la dilución por burbujeo, hasta obtener una dilución
final WIC/HGB de 1:301
4.- La dilución es aspirada a través de la abertura por vacío. El proceso conocido

como medición volumétrica, asegura que se utilicen 200 microlitros de la dilución
para la medición.
5- Para contar los leucocitos, según van atravesando la abertura, se utiliza la

impedancia eléctrica.
6.- Una vez terminada la fase de recuento del ciclo, la abertura es limpiada
automáticamente por el circuito de limpieza de la abertura.
2.2. Análisis de eritrocitos y plaquetas:
1- La jeringa del diluyente para el recuento de eritrocitos dispensa 8.0 mI del

diluyente a la válvula de segmentación, en donde recoge el segmento de la
muestra RBC/ PL T (eritrocitos / plaquetas) con 0.74 microlitros.
2.- El segmento de la muestra y el diluyente son dirigidos, después, hacia la

cámara de mezcla del transductor del canal RBC / PLT de von Behrens, en donde
la dilución es mezclada por burbujeo. Finalmente, se obtiene una dilución de 1:1
0.812.
3.- La dilución es aspirada a través de la abertura por vacío. El proceso de

medición volumétrica asegura que se utilicen 100 microlitros de la dilución para la
determinación.
4.- Para contar las eritrocitos y plaquetas, que atraviesan la abertura, se utiliza la
impedancia eléctrica.
2.3. Análisis de hemoglobina:
1.- Después de medir volumétricamente 200 microlitros de la dilución WIC/ HGB a

través de la abertura WIC, el resto de la dilución es transferida a la celda de flujo
HGB.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
2.- La concentración de HGB se determina por espectrofotometría.
Visualización de los resultados: Todos los datos son transmitidos a la estación de

datos para su análisis.
A continuación, se computan los resultados de todos los parámetros y se

visualizan en la pantalla RUN (procesado) de la estación de datos.
Los resultados también se guardan en un formato de registro, conocido como

registro de datos.
LINEALIDAD:
El recuento de WIC es lineal hasta 99.9 K/µl. Si selecciona el valor WIC para el
informe y este excede de la linearidad, aparecerá un valor leucocitario fuera de
rango (>>>>).
El valor WOC muestra linealidad hasta 250 K/µl. Si se selecciona el valor WOC
para el informe y este excede de la linealidad, el valor leucocitario se notificará
fuera de rango (>>>).
PRECISION:
Las lecturas de fondo deben estar:
WIC < 0.30
WOC < 0.30
RBC < 0.030
HGB < 0.20
PLT < 10.0
Sangre total.
Tubo lila con EDTA K3.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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Cell-Dyn, diluyente, detergente, hemolizante, reactivo envolvente (seheat).
6.1. DILUYENTE:
- Actúa como diluyente para los leucocitos (únicamente para el recuento
por impedancia), los eritrocitos, las plaquetas y la hemoglobina.
- Mantiene estable el volumen celular diluído de cada eritrocito y plaqueta
durante el recuento y la fase de clasificación volumétrica del ciclo de
medición.
- Proporciona una lectura de fondo admisible.
6.2. DETERGENTE:
- Proporciona una solución óptimamente clara y necesaria para obtener el
valor cero de referencia durante el ciclo de medición de la hemoglobina.
- Facilita la formación del menisco apropiado en los tubos volumétricos
WIC y RBC/PLT y lo mantiene durante cada ciclo de procesado.
- Lava la cámara de recuento WIC, el tubo volumétrico WIC, la cámara de
recuento RBC/PLT, el tubo volumétrico RBC/PLT y la celda de flujo de
HGB, con una mínima de burbujas.
6.3. REACTIVO HEMOLIZANTE WIC/HGB:

- Hemoliza rápidamente los eritrocitos y minimiza el estroma resultante.
- Desprende el citoplasma de los glóbulos blancos, dejando intacta la
membrana nuclear, para poder contar los núcleos leucocitarios.
- Transforma la hemoglobina en un complejo modificado de cianuro de
hemoglobina, que puede medirse a 540 nm.
6.4. REACTIVO ENVOLVENTE (SEHEAT):

- Hemoliza los eritrocitos por un mecanismo osmótico.
- Mantiene las propiedades de dispersión de la luz de los leucocitos
durante el periodo de medición.
- Actúa como líquido envolvente en el proceso de enfoque hidrodinámico.
- Proporciona una acción humectante adecuada que impide la
acumulación de burbujas de aire en el sistema de flujo WOC.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Utilizar calibrador de sangre total para sistemas hematológicos CELL-DYN 3500.

- El frasco calibrador atemperar 15 minutos.
- Premezclar con movimientos de rotación en la palma de la mano, luego
invirtiendo el frasco suavemente, sin agitar el mismo.
- Invierta el frasco suavemente 5 veces antes de procesar la muestra.
- Aspire una muestra del frasco.
- Después de procesar en el CELL-DYN en modo abierto, tapar bien el
frasco.
- Guardar el frasco refrigerado cuando todos los procedimientos de
calibración estén completados.
- Iniciar.
- RUN.
- Introducir número de código de barra del paciente correspondiente y los
datos personales.
- Introducir la aguja del autoanalizador al tubo.
- Presionar el sensor y esperar que aspire la cantidad de muestra
necesaria para su procesado.
- Retirar el tubo.
- Imprimir el resultado.
8.1. ANALISIS DE LOS LEUCOCITOS:
Para establecer el valor final de los leucocitos, se incluyen los métodos WOC/WIC
porque permiten que el analizador proporcione un recuento mas exacto, el
algoritmo de Análisis de los datos selecciona el resultado mas apropiado para el
informe.
PROCESO DE MEDICIÓN WIC :
La dilución WIC/HGB 1:301 es transferida a la cámara de mezcla del transductor
del canal WIC en donde se mezcla por burbujeo. Mediante vacío se extrae un
volumen de 200 µl de la dilución a través de la abertura de 100 µm. El recuento
leucocitario se mide por impedancia eléctrica que se basa en la determinación de
los cambios de la corriente eléctrica producidas por partículas, suspendidas en un
líquido conductor, que atraviesan una abertura de dimensiones conocidas . Para
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
e97 97
ello se sumerge un electrodo dentro del líquido a cada lado de la abertura, con
objeto de crear una diferencia de potencial a través de ella.
A medida que cada partícula atraviesa la abertura, se produce un cambio
transitorio de la resistencia entre los electrodos; este cambio genera un impulso
eléctrico mensurable; el número de impulsos generados indica el número de
partículas que atraviesan la abertura. La amplitud de cada impulso es
proporcional al volumen de la partícula que lo produce. Así los impulsos son
clasificados en los distintos canales medidores del tamaño, según su amplitud.
Proceso de medición WOC.

Se basa en la detección con el sistema óptico y análisis de la formula leucocitaria.
Se prepara una dilución 1:51 con el reactivo envolvente. La jeringa volumétrica
WOC inyecta un volumen de esta dilución en la corriente del reactivo envolvente;
luego se produce el enfoque hidrodinámico de la corriente de la muestra, con
objeto de alienar las muestras en una sola hilera, a su paso por la celda de flujo
WOC, que es una cámara de cuarzo óptimamente clara; la fuente luminosa es un
láser de helio-neón con polarización vertical.
La información de las mediciones sirve para separar los leucocitos en cinco
subpoblaciones distintas: neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos.
En el clitómetro de flujo, la suspensión celular es bombeada desde el recipiente
de la muestra, hasta la cámara de flujo que contiene una pequeña abertura en su
extremo. Seguidamente se inyecta la suspensión sobre una corriente de líquido
en movimiento rápido y exento de células; como los dos líquidos viajan a una
velocidad diferente, no se mezclan entre sí y existe un flujo laminar que obliga a
las células se dispongan en una sola hilera. A medida que las células penetran en
el área de visualización específica los rayos láser hacen que las células se
dispersen en ángulos diferentes, que suministran información sobre el tamaño de
las células, la estructura interna, la granularidad y la morfología de superficie.
8.2. ANALISIS DE ERITROCITOS Y PLAQUETAS.
Para determinar los datos eritrocitarios y plaquetarios se utiliza el canal WIC; la

dilución 1:10812 de la muestra se prepara con el diluyente. Las células son
contadas y su tamaño es medido a medida que atraviesan la abertura de 60 x 72
µm del transductor del canal RBC/PLT de von Behrens. El volumen de muestra
para ser analizada es de 100 µl.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
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REQUISITO TECNICO
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8.3. ANALISIS DE LA HEMOGLOBINA.
El canal HGB se utiliza para la determinación calorimétrica de la hemoglobina. La

dilución 1:301 de la muestra se prepara con el diluyente y el reactivo hemolizante
WIC/HGB en la cámara de mezcla del transductor WIC. La fuente luminosa es un
diodo emisor de luz filtrada con una longitud de onda de 540 nm; un detector
fotométrico mide la luz transmitida.
8.4. LAVADO DEL ANALIZADOR:
1. La sonda de aspiración de muestras abiertas se lava interna y

externamente con el diluyente.
2. La aguja utilizada en el modo cerrado de muestreo automático y en el
modo manual se lava interna y externamente con el diluyente.
3. La cámara de mezcla WIC y la cámara de mezcla de eritrocitos y plaquetas
se lavan con el diluyente.
4. La cámara de mezcla de WOC se lava con el reactivo envolvente.
5. El tubo volumétrico WIC y el tubo volumétrico para muestras de eritrocitos
y plaquetas se lavan con el detergente.
6. La celda de flujo HGB se lava con el detergente,
9.1. CONTROLES COMERCIALES:

Introducir los valores predeterminados de los tres niveles de controles de calidad
comerciales al equipo, ingresando a la ventana QC e introducir donde
corresponda los valores del control : bajo, normal, y alto.
Ingresar a “control de calidad” del equipo y procesar como si fuera una muestra
cualquiera.
9.2. CONTROL INTERNO:

Correr una muestra caracterizada por duplicado.
- Microcoágulos y coágulos presentes en el tubo.

- Anticoagulante que no sea EDTA K3.
- Excedente de anticoagulante.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
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- Sangre con burbujas.
11. Principios del procedimiento: cálculos e incertidumbre.
El algoritmo WOC/WIC evalúa los recuentos WIC y WOC para determinar si WIC
es igual o distinto de WOC; todas las demás decisiones se basan en esta
determinación inicial.
- Cuando WIC es igual a WOC, las decisiones posteriores siguen un árbol

de decisión.
- Cuando WIC y WOC difieren, las decisiones siguen un árbol de decisión

diferente. Este algoritmo mide la diferencia y selecciona el valor más
apropiado de los leucocitos.
- Cuando WOC y WIC son iguales se selecciona WOC como valor del
recuento leucocitario
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
HOMBRES MUJERES NIÑOS

Eritrocitos 4.7 - 6.4 *1003/L:1 4.3 -5.7 *1003/L:1 3.8 -5.5 *1003/L:1
Hemoglobina 14.0 -19.4 g/ dL 12.5-17.0 g/ dL 11.0-16.0 g/ dL
Hematocrito 43 – 58% 40 – 53% 31 - 43%

VCM 86 – 96 f L 88 – 98 fL 80 – 95 fL
HCM 27 - 34 pg 26 - 33 pg 31 - 37 pg
CHCM 30 - 37 g/dL 29 - 36 g/dL 32 – 36 g/dL
Leucocitos 5 – 10*103/mm3 5 -10*103/mm3 6.2 – 12*103/mm3
Neutrófilos 40 – 70% 40 – 70% 20 – 40%
Eosinófilos 0 – 4% 0 – 4% 0 – 5%
Basófilos 0 – 2% 0 – 2% 0 – 2%
Cayados 0 – 5% 0 - 5% 0 - 5%
Linfocitos 20 – 40% 20 – 40% 45 – 70%
Monocitos 2 – 10% 2 – 10% 2 – 10%
Plaquetas 150 - 400 * 103/mm3 150 - 400 * 103/mm3 100 - 400 * 103/mm3
Leucocitos, valores menores de 1.000/µL ó mayores a 50.000/µL.

Hematocrito, valores menores de 35% ó mayores a 60%.
Hemoglobina, valores menores de 11 g/dL ó mayores a 20 g/dL.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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XIV. HEMOSTASIA Y COAGULACION
"ACL 9000"
GENERALIDADES
El ACL 9000 es un analizador que es controlado por microprocesadores los

cuales realizan técnicas coagulométricas, colorimétricas e inmunológicas,
coagulación y fibrinólisis.
Este equipo, ACL 9000 se encuentra totalmente robotizado ya que no es

necesaria manipulación alguna.
EQUIPO ACL 9000
Presenta una pantalla táctil, con un software, de fácil aprendizaje.

Este equipo procesa las muestras en el menor tiempo posible para que no se
desestabilice por la temperatura ambiente.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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IDENTIFICACION DE PACIENTES:
El número de identificación es de hasta 15 dígitos y podrá ser cargado en su

memoria; esto incluye:
- Nombre del paciente.
- Número de muestra.
- Fecha de nacimiento.
- Médico.
- Departamento.
AREA DE REACTIVOS:
Existen hasta 18 viales originales pudiendo ser ubicados en dos áreas.

En la zona anterior incluye ocho posiciones y pueden ser viales de distintos
tamaños.
En el anillo interno dispone una segunda área de reactivos donde se ubican hasta
diez viales de reactivos.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
AREA DE MUESTRAS:
Esta área tiene la forma de un plato donde se ponen las muestras, se pueden
colocar hasta 40 muestras; el pipeteo de la muestra se realiza desde el tubo
primario, con extracción de diferentes volúmenes evitándose así el decantado del
plasma.
El vial puede trabajar con 0,5 ml o 2,0 ml de plasma.
LECTOR INTERNO DE CODIGOS DE BARRA:

Este tiene la capacidad de leer automáticamente el código de barras de las
etiquetas, para poder identificar con mayor facilidad al paciente
NUMERO DE PRUEBAS:
La capacidad que tiene el ACL 9000 es de procesar 300 pruebas, de las cuales
pueden tener activas hasta 100 pruebas.
VELOCIDAD ANALlTICA:
TTPA: 110/ hora

PT - FIB: 175 I hora.
TEST COAGULOMETRICOS:
- Tiempo de protrombina
- Tiempo de tromboplastina parcial activada
- Fibrinógeno, como derivado del TP
- Tiempo de trombina
- Proteínas: S y C
- LAC Creen y LAC Confirm.
TESTS CROMOGÉNICOS
- Antitrombina
- Inhibidor de la plasmina
- Plasminógeno
- Heparina
TEST INMUNOLOGICOS:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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- Dímero D
- Factor de von Willebrand
XV. DETERMINACION DE PROTEINAS “C” Y “S"
Las proteínas C y S están involucradas en la regulación de la coagulación

sanguínea y su deficiencia puede llevar a la formación de coágulos de sangre en
venas y arterias.
Un inhibidor importante de la coagulación es la llamada proteína C (vitamina K

dependiente), que inactiva los factores V y VIII activados y a su vez es inactivada
por un inhibidor normalmente presente en el plasma.
Los últimos experimentos sugieren que el déficit o pérdida de este inhibidor

pudiera ser responsable de los déficits combinados de factores V - VIII , ya que
en dichos casos la proteína C estaría permanentemente activada, impidiendo el
funcionamiento normal de los factores V y VIII.
1.1. La proteína C
Es una glucoproteína sintetizada en el hígado, con efecto de proteasa,

dependiente de la vitamina K, que se activa por un cofactor proteíco: la
trombomodulina, dependiendo del endotelio vascular y que inhibe los factores V y
VIII de la coagulación, actuando como anticoagulante fisiológico en presencia de
iones Ca y otro cofactor.
Si hay deficiencia hereditaria de proteína C se genera un estado de
hipercoagulabilidad con riesgo elevado para trombosis venosa.
Su valor se informa como porcentaje de la cantidad esperada en el plasma
normal y por definición, el valor promedio es de 100%, con rango entre 70% y
140%. Al nacimiento, los niveles de proteína C son solo de 35% de los
correspondientes a adultos normales.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
1.2. La proteína S
Es un cofactor requerido para favorecer la actividad anticoagulante de la proteína

C; su deficiencia hereditaria provoca una condición de hipercoagulabilidad con
riesgo elevado de trombosis venosa. Su deficiencia puede ser cuantitativa (tipo I)
ó cualitativa (tipo II).
Existen déficits congénitos y otros adquiridos de este anticoagulante; entre los
últimos, los debidos a hepatopatías, coagulación intravascular diseminada,
neoplasias. "distrés" respiratorio del adulto y síndrome nefrótico.
Se consideran normales los valores entre 76 y 140 en relación aI 100 % de sujetos

sanos (por método antigénico). Ese rango es menor en las mujeres que en
varones. Al nacimiento, los niveles de proteína S (como antígeno total) son solo
del 36% en relación a los adultos.
La proteína C es una proteína dependiente de la vitamina K que está presente en

el plasma como zimógeno; la trombina activa la proteína C en presencia de
trombomodulina e in Vitro la proteína C puede activarse por la fracción proteíca
derivada del veneno de la serpiente Agkistrodon contortrixc.
Test cromogénico automatizado para la determinación cuantitativa de la proteína

C en plasma humano citratado.
Plasma citratado.
Tubo de hemólisis, teniendo como anticoagulante al citrato trisódico.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
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Automatizado ACL 9000, diluyente, activador de proteína C, substrato

cromogénico.
Seguir las instrucciones de la técnica de calibración de acuerdo al manual del

operador de los instrumentos, que realizará diluciones del plasma calibrador que
ya están determinadas en la memoria del fibrómetro.
Al finalizar la calibración el ACL 9000 guardará la curva que servirá para obtener
resultados del control de calidad y de los pacientes.
Utilizar plasma calibrador que sirve para calibrar los sistemas de coagulación IL
para el cálculo del tiempo de protrombina (TP), Fibrinógeno, Factores V y VIII,
Factor de von Willebrand, Antitrombina, Plasminógeno, Inhibidor de la plasmina,
Proteína C, Proteína S y como plasma de referencia, para el TPTA y TT.
- En el ACL 9000 ingresar a “prueba simple”.

- Introducir los datos del paciente.
- Realizar lista de trabajo con la prueba correspondiente.
- Cargar las muestras en el plato y en el orden introducido.
- Revisar los reactivos que se encuentren en el lugar que corresponda.
- Digitar: “empezar”.
- Copiar resultados o imprimir los mismos.
Se recomienda el uso de los controles de plasma, normales y anormales: alto y

bajo de IL para realizar un programa completo de control de calidad.
- Colocar los controles en el plato de muestras
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
- Análisis
- Sesión de “test simple”
- Pulsar la casilla: Nº lista de trabajo
- Colocar el cursor en la posición del plato donde está el control
- Pulsar: Añadir QC
- Seleccionar la ID del control y aceptar
- Pulsar: Grabar lista de trabajo
- Teclear el Nº de la lista de trabajo y aceptar
- Pulsar: empezar.
- Concentraciones de heparina hasta de 2 U/ml , triglicéridos hasta 500

mg/dL y bilirrubinas hasta 5 mg/dL.
- Un dispositivo intrauterino puede causar resultados falsos positivos de la
prueba por el estrés tisular.
El ACL 9000 utiliza la curva de calibración para interpolar el valor y obtener el

resultado de la prueba.
Proteína C: De 69.1 a 134%

Proteína S: De 60 a 150%
Valores obtenidos menores a 68 y mayores a 135 %

Existen déficits congénitos y otros adquiridos de este anticoagulante; entre los
últimos se incluyen aquellos debido a hepatopatías, coagulación intravascular
diseminada, neoplasias. “estrés" respiratorio del adulto y síndrome nefrótico.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Evitar el contacto con los ojos y la piel, no tirar los residuos por el desagüe, porque
el diluyente ázida sódica puede reaccionar con tuberías metálicas.
- Muestras que han sido sometidas por activación de contacto pueden

producir resultados falsos de nivel alto.
- La atropina inhibe la proteína C activada.
- Algunos anticoagulantes como la warfarina, disminuyen los niveles de
Proteína C y proteína S, razón por la cual las mediciones de estas
proteínas pueden ser difíciles de interpretar en pacientes que estén
tomando dichos anticoagulantes orales.
XVI. DETERMINACION DEL DIMERO D
Cuantificación de dímero D mediante inmunoensayo en el cual se utiliza plasma

humano citratado.
Cuando la plasmina queda libre de inhibidores, favorece la fibrina entrelazada

generando una gran variedad de derivados solubles cuyos pesos moleculares
dependen de la extensión de la digestión. Estos productos solubles de la
degradación contienen un neoantígeno (dominio Dímero D) que no está presente
en la molécula original de fibrinógeno, y los productos de degradación de la
fibrina.
La determinación del dímero D es una herramienta cada vez más utilizada para el
diagnóstico de trombosis y para la monitorización de terapia trombolítica.
El reactivo Látex Dímero D es una suspensión de partículas látex de tamaño

uniforme, de poliesteriano y a los cuales se une un anticuerpo monoclonal
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
altamente específico contra el dominio dímero D contenido en los derivados

solubles de la fibrina.
Cuando se mezcla un plasma que contiene dímero D con el reactivo látex y el

tampón de reacción, las partículas tienden a aglutinar.
Plasma citratado.
Tubo de hemólisis, anticoagulante citrato trisódico.
ACL 9000, Látex reagent, Buffer, Calibrador DD, diluyente de factor.

Al finalizar la calibración el ACL 9000 guardará la curva, que servirá para

comparar los resultados de las calibraciones que se realicen por cada corrida de
control de calidad y de los pacientes. Por lo tanto este tipo de calibración es muy
delicado.
- En el ACL 9000 ingresar a test simple.

- Cargar las muestras en el plato y en el orden introducido.
- Revisar los reactivos que se encuentren donde correspondan.
- Digitar “empezar”.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
- Copiar resultados.
Se recomienda el uso de los controles de plasma normales y anormales alto y

bajo de IL para realizar un programa completo de control de calidad.

- Análisis
- Sesión test simple
- Pulsar la casilla: Número lista de trabajo
- Teclear el número de la lista de trabajo y aceptar
- Pulsar: empezar.
- Consumo de ciertos fármacos.

- Niveles elevados de factor reumatoideo pueden causar resultados falsos
positivos.
El ACL 9000 utiliza la curva de calibración para comparar el valor aceptar o

rechazar el resultado obtenido en la corrida.
Negativo (no hay fragmentos dímero D presentes).
12. Intervalo reportable de los resultados del paciente:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
250 ng/ml. (<0,5 µg/mL)
Mayor a 500 ng/ml.
Se encuentra aumentado en:

- Fibrinólisis (ej. Coagulación intravascular diseminada)
- Trombosis venosa profunda.
- Embolismo pulmonar.
- Tromboembolismo arterial.
- Embarazo.
- Neoplasias malignas que cursan con fibrinólisis secundaria.
- Cirugía.
Separar el plasma de las células con la mayor prontitud posible; este plasma
puede mantenerse a temperatura ambiente hasta por 8 horas ó en hielo hasta por
24 horas o puede depositarse congelado.
Manejar el espécimen con precaución como si fuese potencialmente infeccioso.
Evitar el contacto con los ojos y la piel, no tirar los residuos por el desagüe, porque
el diluyente ázida sódica puede reaccionar con tuberías metálicas.
- Los niveles de dímero D pueden aumentar cuando se lisa un coágulo de

fibrina o cuando se utiliza anticoagulante que no sea el citrato.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
XVII. DETERMINACION DE TIEMPO DE

TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO
TPTA O TTP
El tiempo de tromboplastina parcial activado es el tiempo necesario para la

coagulación de un plasma pobre en plaquetas, recalcificado en presencia de
cefalina, que es un fosfolípido similar a factores plaquetarios.
El TPTA utiliza un activador que estimula la producción de factor XIIa; esta

activación se realiza a 37ºC. La adición de cloruro de calcio desencadena las
reacciones posteriores que producirán la formación del coágulo.
3. Especificaciones de desempeño: linealidad, precisión, exactitud,

sensibilidad:
Diferentes estudios han demostrado que el TPTA con sílica liofilizada es sensible
a concentraciones bajas de factores de la vía intrínseca dando un valor
prolongado.
Plasma citratado.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Tubo de hemólisis, con anticoagulante: citrato trisódico.
ACL 9000, Cefalina, Cloruro de calcio.

para el cálculo de tiempo de protrombina, fibrinógeno, Factor von Willebrand,
Antitrombina, Plasminógeno, Inhibidor de la plasmina, Proteína C, Proteína S y
como plasma de referencia para el TPTA y TT.
8.1. Pasos de procedimiento en el equipo ACL 9000

- Cargar las muestras en el plato en el orden introducido.
- Copiar resultados.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
8.2. Pasos del procedimiento manual:
1.- En dos tubos de hemólisis, uno para el paciente y otro para el testigo, se
introducen 0.1 mililitros de plasma pobre en plaquetas (PPP).
2.- A continuación se añade 0.1 ml de la suspensión de cefalina (o cefalina
-activador) y la mezcla se deja incubar durante 3 minutos a 37°C
3.- Terminada la incubación, se añade 0.1 ml de CaCI 2 (equilibrado a 37°C) y
mediante un cronómetro se mide el tiempo necesario para el inicio de la
formación del coágulo.
Se recomienda el uso de los controles de plasma normales y anormales: alto y

bajo de IL , para realizar un programa completo de control de calidad.
- Los controles en el plato de muestras

- Análisis
- Sesión test simple
- Pulsar la casilla: Número lista de trabajo
- Teclear el Número de la lista de trabajo y aceptar
- Pulsar: empezar.
- Consumo de fármacos.
- TTPA 24.9 a 36.8 segundos.
12. Intervalos reportables de los resultados del paciente:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
20 a 40 segundos.
Resultados mayores a 70 segundos.
Niveles aumentados:
- Déficit de los factores de coagulación
- Cirrosis hepática
- Déficit de Vitamina K
- Leucemias
- Coagulación intravascular diseminada
- Tratamiento con heparina
- Hipofibrinogenemia
- Hemofilias
Niveles disminuídos:
- Fase inicial de la coagulación intravascular diseminada
- Neoplasias diseminadas.

Evitar el contacto con los ojos y la piel; no tirar los residuos por el desagüe.
Seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de
Bioseguridad.
- Cuando se utiliza anticoagulante que no sea sal citratada.

- Dilución inexacta sangre/anticoagulante.
- Mala conservación de la muestra.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
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REQUISITO TECNICO
e97 97
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
XVIII. DETERMINACION DEL TIEMPO DE PROTROMBINA
El tiempo de protrombina (TP) se utiliza para valorar la competencia de las vías

extrínseca y común de la cascada de la coagulación, ó sea de los factores I, II, V,
VII y X. Cuando la cantidad de estos factores está reducida el TP revela valores
prolongados.
En la prueba de TP la adición del reactivo al plasma del paciente, en presencia de

iones calcio, inicia la activación de la vía extrínseca de la coagulación. Esto
resulta en la conversión del fibrinogeno a fibrina con la formación de un gel sólido.
3. Especificaciones de desempeño: linearidad, precisión y exactitud.
El estudio de precisión intra-serie y total (serie a serie y día a día) fue realizado en
diferentes series usando muestras normales y anormales, teniendo el cuidado de
utilizar lotes específicos de reactivos y controles.
La linearidad es de 80 a 700 mg/dl.
Plasma citratado.
ACL 9000, Recombiplastin (RTF), solución diluyente.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
7.1. Calibración ACL 9000

operador del instrumento, que realizará diluciones del plasma calibrador que ya
están determinadas en la memoria del fibrómetro.
para el cálculo de TP, Fibrinógeno, factores individuales, factor von Willebrand,
antitrombina, plasminógeno, inhibidor de la plasmina, proteína C, proteína S y
como plasma de referencia, para el TTPA y TT.
7.2. Calibración en el CLOT 2S
Realizar una curva de calibración de acuerdo a las siguientes diluciones del

plasma control:
100 75% 50% 25%

%
Plasma control 100 µl 75 µl 50 µl 25 µl
(pool)
Solución fisiológica - 25 µl 50 µl 75 µl - Pr
o
gramar las corridas de la curva por duplicado.
- Incubar 3 minutos las cubetas con las diluciones y también el reactivo.
- Identificar el número de cubeta en cada corrida.
- Terminado el procedimiento, aceptar o rechazar la curva.
8.1. Pasos del procedimiento en ACL 9000
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97

- Copiar resultados o imprimirlos.
8.2. Pasos del procedimiento en el fibrómetro manual:
1.- En una cubeta se añaden 300 µl de plasma del paciente, incubar a 37ºC en
baño maría y en otra cubeta: 200 µl de tromboplastina.
2.- A continuación se añade a la cubeta que tiene tromboplastina 100 µl del

plasma incubado y mediante el cronómetro del fibrómetro se determina el tiempo
de formación del coágulo.
8.3. Pasos del procedimiento en el Clot 2 S:
- Encender el equipo e ingresar la fecha

- Seleccionar “test ejecución”
- Presionar el número de test (5) y luego: Enter
- En el baño maría incorporado, preparar las cubetas con la barra metálica
introducida en cada una de ellas.
- Cargar las cubetas con 100 µl de plasma
- Atemperar el reactivo
- Correr el tiempo de incubación (tres minutos)
- Presionar “reset”, registrar identificación del paciente y luego: Enter
- Poner la cubeta respectiva al carril y agregar 200 µl del reactivo.
- El cronómetro correr a automáticamente
- Así obtendremos resultados impresos con: el TP, actividad e INR.
9.1. Control de calidad en el ACL 9000:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Se recomienda el uso de controles comerciales de plasma normales, y anormales

alto y bajo, de IL para el ACL 9000, para realizar un completo programa de control
de calidad.

- Análisis
- Sesión: test simple
- Pulsar la casilla: número lista de trabajo
- Pulsar: “empezar”.
9.2. Control de calidad en el procesamiento manual:
Procesar controles de plasma, normales y altos, o trabajar con un “pool” de

plasma.
- La ingesta de alcohol puede prolongar el TP.

- Una dieta rica en grasas puede reducir el TP.
Después de obtener el valor en segundos ubicar en la tabla a qué porcentaje de

actividad corresponde y calcular el INR.
INR = R (ISI)
R = TP paciente = (X) ISI

TP normal
Intervalo central 95%: 10.6 a 12.4 segundos.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
13. Intervalos reportables de los resultados del paciente:
Desde 11 segundos a 17.4 segundos.
Valores mayores a 20 segundos.
Niveles aumentados:
- Cirrosis
- Hepatitis
- Déficit de vitamina K
- Intoxicación por salicilatos
- Obstrucción de la vía biliar
- Coagulación intravascular diseminada
- Transfusión masiva de sangre
- Déficit hereditario de factores.

Bioseguridad.
- Cuando se utiliza anticoagulante que no sea el citrato trisódico.

- Dilución inexacta sangre/anticoagulante.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
XIX. DETERMINACION DE ANTICOAGULANTE LUPICO
La determinación de anticoagulante lúpico sirve para detectar anticoagulantes

circulantes que pueden ocurrir en pacientes con múltiples transfusiones con
deficiencia de factores, asociados a disproteinemias, lupus eritematoso
diseminado, artritis reumatoidea, complicaciones post-parto.
El anticoagulante lúpico es un anticuerpo antifosfolípido que puede inhibir las

pruebas de coagulación dependientes de los fosfolípidos, tales como el tiempo de
tromboplastina parcial activada; es positivo en entidades que cursan con síntomas
trombóticos, tales como trombosis arterial o venosa, abortos.

El anticoagulante lúpico pertenece a un grupo heterogéneo de anticuerpos que
son dirigidos contra fosfolípidos de carga negativa y contra complejos formados
entre fosfolípidos y proteínas (beta-2-glicoproteina 1 o factores de coagulación
como la protrombina).
Estos anticoagulantes interfieren con las pruebas de coagulación en que participan
los fosfolípidos tales como el TTPA.
El anticoagulante lúpico Screen y el Confirm fueron fabricados para la detección
de estos anticoagulantes en evaluaciones clínicas. En presencia de calcio activa
directamente al factor X de la muestra.
3. Especificaciones de desempeño: linealidad, precisión, exactitud,

sensibilidad:
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Plasma citratado.
6. Equipo y reactivos requeridos
ACL 9000, LAC Screen, LAC Confirm.

ya están determinadas en la memoria del ACL 9000.

- Copiar resultados o imprimirlos.
Se recomienda el uso de controles comerciales de plasma normales y anormales

(altos y bajos), de IL para el ACL 9000, para realizar un programa completo de
control de calidad.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97

- Luego: ir a Análisis
- Indicar: Sesión test simple
- Pulsar la casilla: número de lista de trabajo
- Pulsar: “empezar”.
 Concentraciones altas de hemoglobina.

 Presencia de hemólisis en la muestra.
 Concentraciones altas de triglicéridos y/o de bilirrubinas.
Para calcular el “Ratio” del anticoagulante lúpico:

 Para cada lote de anticoagulante debe obtenerse un límite de normalidad.
 Calcular la media de cada límite de normalidad en segundos.
 La media del anticoagulante lúpico con cada límite de normalidad será utilizado
como denominador común para calcular los Ratios.
Ratio LAC = Resultado paciente (seg.)

Media del límite de normalidad (seg.)
Los valores normales de referencia oscilan entre 0 a 12.5.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Resultados con valores mayores a 20.
Valores superiores pueden presentarse en trombosis arterial o venosa, abortos

espontáneos y trombocitopenia.
La heparina y warfarina sódica interfieren sobre el anticoagulante lúpico dando
resultados falsos-positivos.
Manejar con precaución el espécimen como si fuese potencialmente infeccioso.

Bioseguridad.
16. Fuentes potenciales de variabilidad.
- Muestra con presencia de hemólisis.

- Dilución inexacta de la sangre/anticoagulante.
- Plasma lipémico.
6. Documentos de referencias:
1. Manual de la Calidad. LABCLINICS SRL.

2. Norma NB ISO 15189: 2004.
Norma NB ISO 9001:2000
3. Guia de pruebas diagnósticas y de laboratorio.
4. Técnicas de Laboratorio en Hematología.
5. Jacobs DS, DeMott WR, Oxley DK. Laboratory Test Handbook. 3th ed.
Hudson:Lexi-Comp;2004.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
6. Ryan DH. Examination of the blood. En: Lichtman MA, Kipps TJ, Kaushansky K,
Beutler E, Seligsohn U, Prchal JT, eds. Williams Hematology. 7th ed. New
Cork:McGraw Hill;2006. p. 11-9.
7. Paraskevas F. Clinical Flow Cytometry. En: Lee GR, Foerster J, Lukens J,
Paraskevas F, Creer JP, Rodgers GM, eds. Wintrobe´s Clinical Hematology. 10th
ed. Baltimore:Williams & Wilkins;1999. p. 56-71.
8. Manual Cell-Dyn
9. Manual ACL 9000
10. Insertos de los reactivos.
7. Registros
1. Libros de registros
2. Reportes impresos del Cell-Dyn
3. Reportes impresos del ACL 9000.
4. Reportes impresos del CLOT 2S
8. Glosario
Procedimiento operativo: Documento que describe con detalle el desarrollo de

las actividades de un proceso en particular.
Muestra primaria (espécimen): conjunto de una o más partes tomadas
inicialmente de un sistema.
Análisis: Conjunto de operaciones que tiene por objeto determinar el valor o
características de una propiedad.
Medición: Conjunto de operaciones que tienen como objetivo determinar el valor
de una magnitud.
Magnitud: Atributo de un fenómeno, cuerpo o sustancia, que puede ser
identificado cualitativamente y determinado en forma cuantitativa.
Exactitud de la medición: Proximidad de concordancia entre el resultado de una
medición y un valor determinado para cada prueba.
Veracidad de la medición: Proximidad de la concordancia entre el valor promedio
obtenido a partir de una serie grande de resultados de mediciones y el valor
verdadero.
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
Incertidumbre de la medición: Parámetro asociado con el resultado de una

medición, que caracteriza la dispersión de los valores que pudieran ser
razonablemente atribuídos al valor esperado.
Intervalo biológico de referencia: Intervalo del 95% de la distribución de los
valores de referencia.
Trazabilidad: Propiedad del resultado de una medición o del valor de un patrón,
por el cual puede ser relacionado con los patrones de referencia, usualmente
patrones nacionales o internacionales, a través de una cadena ininterrumpida de
comparaciones, teniendo todas ellas, incertidumbres determinadas.
9. Anexo
TABLA DE CORRESPONDENCIA DEL TIEMPO DE PROTROMBINA
Protrombina tiempo en segundos % R=M/T INR=R
11.0 11.5 12.0 12.5 13.0 13.5 100 1.00 1.0

11.2 11.7 12.2 12.7 13.2 13.8 96 1.02 1.0
11.4 12.0 12.5 13.0 13.5 14.0 92 1.04 1.1
11.7 12.2 12.7 13.3 13.8 14.3 88 1.06 1.1
11.9 12.5 13.0 13.5 14.1 14.6 84 1.08 1.2
12.2 12.7 13.3 13.9 14.4 15.0 80 1.11 1.2
2.5 13.1 13.6 14.2 14.8 15.3 76 1.14 1.3
12.8 13.4 14.0 14.5 15.1 15.7 72 1.16 1.3
13.1 13.7 14.3 14.9 15.5 16.1 68 1.19 1.4
13.5 14.1 14.7 15.4 16.0 16.6 64 1.23 1.5
13.9 14.6 15.2 15.8 16.5 17.1 60 1.27 1.6
14.4 15.0 15.7 16.3 17.0 17.6 56 1.31 1.7
14.9 15.6 16.2 16.9 17.6 18.3 52 1.35 1.8
15.5 16.2 17.0 17.7 18.4 19.1 48 1.41 1.9
16.4 17.2 17.9 18.6 19.4 20.1 44 1.49 2.1
17.4 18.2 19.0 19.8 20.6 21.4 40 1.58 2.4
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007
COAGULACION
Revisión: 1
REQUISITO TECNICO
e97 97
18.6 19.5 20.3 21.2 22.0 22.8 36 1.69 2.7

19.3 20.2 21.0 21.9 22.8 23.7 34 1.75 2.9
20.1 21.0 22.0 22.9 23.8 24.7 32 1.83 3.2
21.2 22.1 23.1 24.0 25.0 26.0 30 1.92 3.5
22.3 23.3 24.3 25.4 26.4 27.4 28 2.03 3.8
22.9 24.0 25.0 26.1 27.1 28.2 27 2.09 4.0
23.6 24.7 25.8 26.8 27.9 29.0 26 2.15 4.3
24.3 25.5 26.6 27.7 28.2 29.9 25 2.21 4.5
25.1 26.3 27.4 28.5 29.7 30.8 24 2.28 4.8
26.0 27.1 28.3 29.5 30.7 31.9 23 2.36 5.1
26.9 28.1 29.3 30.5 31.7 33.0 22 2.44 5.5
27.8 29.1 30.4 31.6 32.9 34.2 21 2.53 5.8
28.9 30.2 31.5 32.9 34.2 35.5 20 2.63 6.3
30.1 31.4 32.8 34.2 35.5 36.9 19 2.73 6.8
31.4 32.8 34.2 35.6 37.1 38.5 18 2.85 7.3
Fecha 15/02/2007 15/03/2007 15/03/2007

Manual de Procedimientos Pro Fa Hem 015

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA

Instruir a los responsables de los análisis hematológicos, mediante directrices

El procedimiento operativo estandarizado tiene como alcance a todo el personal

a. Responsables y auxiliares designados según calendario de actividades

a. Norma NB ISO 15189 :2004

5. Descripción de las actividades

I. RECUENTO DE HEMATÍES Ó GLOBULOS ROJOS Ó ERITROCITOS

1. Propósito del análisis:

El propósito del análisis es el recuento de glóbulos rojos. Estas células

En el ser humano y la mayoría de los mamíferos los eritrocitos maduros carecen

Los eritrocitos, o glóbulos rojos de la sangre, son los transportadores primarios

2. Principio del procedimiento: Se basa en realizar una dilución sanguínea en

5. Equipo y reactivos requeridos:

a) Líquido de dilución.(Neutro o isotónico o de Hayen)

6. Procedimiento de calibración: La pipeta de Thoma debe encontrarse bien

7. Pasos del procedimiento:

 Primeramente aspirar la sangre total hasta la marca 0.5 de la pipeta de

8. Procedimientos de control de calidad: Realizar un doble recuento para

9. Interferencias y reacciones cruzadas:

- Durante el embarazo existe disminución fisiológica.

10. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre.

El número de eritrocitos contados se calcula de la siguiente forma:

Volumen de la cámara =1/10mm=1/5mm 2x1/10mm =1750mm2

Se han contado, por tanto todos los eritrocitos contenidos en un

11. Intervalos biológicos de referencia:

12. Valores de alerta o críticos:

Menor de 4.000 o mayor a 6.500 *1003 I :1

13. Interpretación del laboratorio:

1. El aumento de número de glóbulos rojos se denomina policitemia. Puede

2. La disminución de los glóbulos rojos constituye la oligocitemia. Se observa en

14. Precauciones de seguridad:

Se debe seguir todos los pasos establecidos en el manual de procedimientos y de

15. Fuentes potenciales de variabilidad:

 Pipetas dilutoras mal calibradas o sucias.

 Falta de suficiente agitación del a la sangre diluida en la pipeta.

II. CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA

1. Propósito del análisis:

El propósito del análisis es la cuantificación de la hemoglobina, proteína

2. Principio del procedimiento:

Los métodos empleados hasta la actualidad se han basado siempre en

Este método tiene como fundamento la trasformación previa de la hemoglobina

La transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina tiene lugar según

 Hemoglobina + ferricianuro potásico = metahemoglobina (meta-Hb)

 Meta-Hb + cianuro potásico = cianmetahemoglobina (cianmeta-Hb)

Linealidad: hasta 25 g/L

4. Sistema de muestra primaria:

5. Tipo de recipiente y aditivo:

Tubo tapa lila con anticoagulante EDTA K3.

6. Equipo y reactivos requeridos:

a) Espectrofotómetro o fotocolorímetro capaz de leer a longitud de onda de 540

Elaboración de la gráfica o recta de calibración.

La gráfica de calibración tiene como finalidad calibrar un instrumento para una

hemoglobina se representan en una gráfica colocando en ordenadas los valores

8. Pasos del procedimiento:

 Homogenizar bien la muestra de sangre mediante agitación suave con un

9. Procedimientos de control de calidad:

Para realizar el control de calidad con precisión debemos usar controles

10. Interferencias y reacciones cruzadas:

- Durante el embarazo los niveles bajan levemente.

11. Principios del procedimiento: cálculos, incertidumbre:

La concentración de Hb (g/dl) = Abs muestra X (St)

12. Intervalos biológicos de referencia: