UNVERSIDAD DEL VALLE NORMA: VERSIÓN:

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA 01
LABORATORIO DE ANÁLISIS FECHA DE REVISIÓN:
INSTRUMENTAL
Determinación de acetaminofén en un medicamento por
HPLC
ELABORADO POR: REVISADO POR: APROBADO POR:
Jorge Ivan
Saavedra Cruz
Agosto- 2020

1. OBJETIVOS

 Afianzar los conceptos básicos sobre cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC, por sus
siglas en inglés) reconociendo sus partes y funcionamiento mediante simulaciones.
 Adquirir destrezas en la preparación de muestras para HPLC y la configuración del equipo.
 Mostrar la aplicación práctica del HPLC como método de separación y cuantificación,
determinando de la concentración de un compuesto orgánico en una muestra problema
utilizando un patrón externo.

2. COMPETENCIAS

 Comprender el funcionamiento del HPLC y su uso en el análisis cuantitativo, utilizando

estándares externos.
 Adquirir destrezas en la preparación de muestras y estándares para el análisis por HPLC.
 Manipulación de sistemas cromatográficos para la separación y determinación de un
compuesto en una muestra problema.

3. PUNTOS A CONSIDERAR

Para iniciar la búsqueda bibliográfica y el posterior análisis, tenga en cuenta lo siguiente:

 Funcionamiento de un equipo de HPLC, inyectores, tipos de columnas y detectores.

 Conceptos de: fase normal, fase reversa, intercambio iónico, afinidad (par iónico), exclusión
por tamaño y quiralidad.
 Detectores para HPLC en la región UV y tipos de moléculas que absorben en este rango.
 Conceptos de estándar externo, adición estándar, estándar interno.
 Representatividad de una población (de pastillas en un paquete comercial).

4. METODOLOGIA

Para la práctica virtual, determinar los parámetros cromatográficos para resolver los
compuestos A y B, en la plataforma http://www.colby.edu/chemistry/NMR/hplc.html,
mencionado el efecto de cada uno. Usar los coeficientes de partición que vienen por defecto.

Para la práctica experimental, preparar 5 mL de una solución patrón de 200 mg/L de acetaminofén
(disolver con metanol y enrazar con agua). A partir de la solución patrón, preparar una curva de
calibración entre 2.0 y 16.0 mg/L.

A partir de una cantidad de pastillas de acetaminofén que sean representativas de un paquete,

preparar la muestra de tal manera que su concentración estimada esté dentro de la curva de
calibración. Preparar un blanco.

Establecer las condiciones (columna, fase móvil, velocidad de flujo, etc) requeridas por el equipo
de HPLC, para realizar las mediciones (inyectar: la muestra, la curva de calibración y el blanco).

Tratar o almacenar los desechos de forma adecuada, procurando siempre generar la menor cantidad
posible.

Nota: filtrar todo lo que se valla a inyectar en el equipo.

5. CÁLCULOS Y RESULTADOS

a) Entregar un formato con todos los datos experimentales obtenidos (organizados de la manera
más clara y ordenada posible al docente encargado.
b) Graficar la concentración de la curva de calibración vs señal obtenida y determinar la ecuación
de la recta. Calcular el límite de detección cuantitativo (LDC) del método.
c) Calcular la concentración media de la muestra y su el intervalo de confianza.
d) Determinar si hay diferencia significativa del valor obtenido para la muestra y el valor de
referencia.
e) Reportar los resultados con las cifras significativas correctas.

6. CUESTIONARIO

a) ¿Por qué en HPLC una curva de calibración con patrón externo es precisa mientras que
para GC es conveniente usar patrón interno?
b) ¿Cuál en la composición de la columna C-18? ¿Qué otros tipos de comunas se usan?
c) ¿Qué es el punto isoeléctrico pI? ¿Qué efecto tendría el pH de la fase móvil en el orden de
elución?
d) ¿Cómo se da la separación de las mezclas en la columna?
e) ¿Qué otros tipos de detectores generalmente se acoplan a los quipos de HPLC?

7. BIBLIOGRAFÍA

HARRIS, D.C. Quantitative Chemical Analysis. 9th Edition. New York: W. H. Freeman and
Company, 2016.
MILLER, J Y MILLER, J. Statistics and Chemometrics for Analytical Chemistry, 6th Edition.
Madrid: Pearson education, S.A. 2010.
SKOOG, D. A; WEST, D. M and HOLLER, F. J. Fundamentos de química analítica. 9 ed.
México: Cengage Learning Editores, S.A. de C.V. 2015.
Gary D. Christian, Analytical Chemistry, 7th Edition, Wiley, 2013.
AYRES, G. Análisis Químico Cuantitativo. México: Harla, 2003.