COORDINACIÓN DEL MEI'ABOLISMO MICROBIANO

Para crecer y permanecer vivos, los microorganismos deben realizar un

número inmenso o reacciones catalizadas por enzimas. Si una celda se coloca en un
ambiente que contiene un polímero como almidón más amoníaco y
sales minerales , primero debe hidrolizar el almidón a glucosa, llevar la glucosa
en la celda. degradar la hexosa a compuestos de tres • y dos carbonos, y
alimentar estas moléculas más pequeñas en el ciclo del ácido tricarboxílico para proporcionar
energía e intermedios (Fig. 1.1). Los intermedios formados por este y
otras secuencias de reacción deben convertirse en bloques de construcción como 20
aminoácidos , 4 ribonucleótidos. 4 desoxirribonucleótidos. 10 o más vitaminas,
ácidos grasos, azúcares, alcoholes de azúcar. ácidos de azúcar y hexosam: nep. La
los bloques de construcción deben convertirse en aproximadamente 2000 proteínas, ADN,
tres tipos de ARN, mucopeotidcs. polisacáridos , coenzimas y
lípidos . Estas moléculas luego se utilizan para formar estructuras celulares como núcleos,
ribosomas , flagelos, paredes celulares, membranas y mitocondrias.
 
Obviamente, deben formarse cientos de enzimas y también deben funcionar.
de manera integrada para que las moléculas se produzcan en las proporciones correctas
y los nutrientes valiosos no se desperdician. Solo en una celda tan altamente coordinada
¿ Podemos esperar tiempos de generación tan cortos como 20 minutos? Dado que una
bacteria típica
La célula tiene el potencial genético para producir más de 1000 enzimas, metabólicas
La coordinación asegura en cualquier momento en particular que solo las enzimas necesarias
sean
hecho , que se hace la cantidad correcta de cada uno, y que una vez producido su
las actividades están reguladas por activación e inhibición.
 
1.1 REGULACIÓN METABÓLICA
El ADN de la célula microbiana dicta la síntesis detallada de la eti 's rnatic
maquinaria . A pesar de su genotipo constante, los microbios son increíblemente flexibles.
en su capacidad para alterar su composición y metabolismo en respuesta a
cambios gnvirontnentales . El medio ambiente no cambia la genética.
composición de la célula, pero afecta marcadamente la expresión fenotípica de la
 
genes . En virtud de los mecanismos de regulación metabólica (Fig. 1.2), microbi
Las células generalmente no sintetizan en exceso los metabolitos a pesar del entorno
profundo.
variaciones mentales . Algunos de los mecanismos de control que posibilitan
dicha coordinación se describe en este capítulo.
1.1. Yo inducción
De las miles de enzimas que una célula es capaz de producir, una cierta insensibilidad
siempre están presentes en una concentración sustancial. independientemente de lo que
mediu
en el que el organismo está creciendo. Ejemplos de dicha enzima "constitutiva"
son las enzimas que convierten la glucosa en piruvato. Otras enzimas se forman
sólo cuando su sustrato (o un compuesto estrechamente relacionado) está presente en t
medio . La inducción enzimática se define como un aumento relativo en la tasa
síntesis de una enzima específica, resultante de la exposición a una sustancia química
postura — el inductor. Los análogos del sustrato suelen ser excelentes
Sin ser sustratos. Estos se denominan inductores gratuitos. Sometin
el producto de la reacción es el inductor. Las enzimas inducibles son necesarias;
cuando el organismo se encuentra limitado, por ejemplo, a un polisacárido,
Oligosacárido, o un aminoácido como su única fuente de carbono y energía.
La inducción asegura que la energía y los aminoácidos no se desperdicien en mak
enzimas innecesarias , pero que, cuando sea necesario, estas enzimas se pueden formar
rápidamente .
Jacob: modelo BVmod. El modelo o inducción más ampliamente aceptado es que
ideado por Jacob y Monod (1961), y está respaldado por muchos factores genéticos y
datos fisiológicos . En este esquema, como se muestra en la Figura 1.3, hay en
al menos cuatro genes en el cromosoma (ADN) que instruyen a los ribosomas a
hacer una enzima particular. El gen regulador (R) codifica para la producción de un
proteína represora . Este represor es capaz de unirse al gen operador
(O). que controla el funcionamiento del gen estructural vecino (S).
El gen promotor (P) es el sitio de inicio de la ARN polimerasa, la enzima
que cataliza la transcripción del ADN en ARN mensajero (ARNm).
Si la proteína represora se combina con O, la ARN polimerasa no se puede mover y
no se produce ARNm complementario a la secuencia de ADN de S (parte superior
 
del diagrama). Por tanto, no se produce ninguna enzima. Cuando O no es cornmnea wun Su
proteína represora , la ARN polimerasa puede moverse desde P y transcribir el gen S,
como en la parte inferior del diagrama. Las mutaciones en el gen R o O pueden interferir
con formación o unión de represores y eliminan la necesidad de un inductor.
Estas mutaciones se denominan "constitutivas". Las enzimas constitutivas son elaboradas por
sistemas en los que R no funciona o produce una proteína represora inactiva,
o en el que el gen O no tiene afinidad por la proteína represora. Inducible
enzimas , por otro lado, se producen mediante la adición de un inductor, que
puede eliminar o inactivar la proteína represora. Dado que los genes estructurales
de enzimas inducibles suelen estar en el estado reprimido, es decir, apagadas por el
interacción del represor proteico con el gen operatoq, la inducción también es
llamado desrepresión.
En muchos casos, más de un gen estructural está controlado por un solo
operador . Los genes estructurales, el operador. y el promotor constituyen
un operón.
Se han aislado varias proteínas represoras del intestino.
bacteria , Escherichia coli. La proteína represora del operón lac (el
"-complejo galactosidasa) es un tetrámero de 150.000daltons, alrededor de 10 moléculas
de los cuales se producen por gen R (Riggs et 1970). Aunque el crecimiento en
la lactosa da como resultado la inducción del operón lac. lactosa (1-4-0-ß-D-galacto-
piranosil-D-glucosa) no es el verdadero inductor; primero debe convertirse a
alolactosa (1-6-0-ß-D-galactopiranosil-D-glucosa) (Jobe y Bourgeois,
1972). El mejor inductor para el operón lac es el inductor gratuito, isopropilo.
DD-tiogalactósido. Otros compuestos estabilizan al operador represor
complejas y, por tanto, funcionan como antiinductores. Un compuesto que actúa como tal
en el operón lac está el fenil-ß-D-galactósido.
La inducción en el modelo Jacob-Monod es un tipo de control negativo en
que el producto del gen regulador (es decir, el represor de proteínas) previene
transcripción . En los últimos años se ha descubierto otro tipo de regulación
que es de naturaleza positiva. Aquí el producto del gen R es una proteína, que en
la presencia del inductor se convierte en un activador de la transcripción.
Por tanto, el producto del gen R es necesario para la transcripción. El mejor-
ejemplo conocido de inducción positiva es el operón ara, que es responsable
para la utilización de L-arabinosa en E. coli (Irr y Englesberg, 1971).
1.1.2 Regulación de catabolitos
Cuando mas que el
• el robo. Podría producir enzimas para metabolizar
micro
un sustrato, pero en cambio, la célula produce enzimas para utilizar el mejor sustrato presente
( generalmente glucosa). de Chepnmacy.subsvruvg.arg.gp.ø — es
formado para el catabolismo o el sustrato secundario.
(Fig. De
El caso clásico es la represión catabólica de la "-galactosidasa
(en realidad, el operón lac) por el crecimiento de E. coli en glucosa (Nakada y
Magasanik. 1964).
Efecto glucosa. La represión de catabolitos se conoce históricamente como glucosa
efkt . Debe tenerse en cuenta, sin embargo, que otras fuentes de carbono pueden ser tan
represiva , o incluso más represiva, que la glucosa, y que en algunos organismos
la glucosa es la fuente de carbono cuyo metabolismo se reprime. Por ejemplo, en
Pseudomonas aeruginosa. se prefiere el citrato sobre la glucosa como fuente de carbono,
s enz mes de luco
eres un
1969). La potencia o t Inducción y represión de catabolitos en una célula
asegura que las enzimas inducibles se produzcan solo en presencia de sustrato.
Si hay varios sustratos presentes, solo las enzimas que actúan sobre el
Se producirá un sustrato capaz .
Otro tipo de regulación de catabolitos es la inhibición de catabolitos, en la que
El catabolismo de una fuente de carbono de uso rápido inhibe la actividad de ciertos
enzimas (Paigen y Williams. 1970).
Deficiencia de c'AMP . La represión de catabolitos está mediada por una deficiencia de
monofosfato cíclico de 3'.5'-adenosina (CAMP). Mas o menos. carbón
fuentes que apoyan bajas tasas de crecimiento conducen a niveles intracelulares más altos de
c'AMP Ihan utilizado rápidamente fuentes de carbono. Por ejemplo, en E. coli,
el metabolismo de la glucosa reduce el contenido de c'AMP de las células en 1000 • veces,
mientras que el metabolismo del acetato no represivo tiene poco efecto sobre la
concentración de CAMP. € AMP estimula la síntesis o un gran número
de enzimas y es necesario para la síntesis o ARNm correspondiente a todos
operones inducibles en E. coli. El nucleótido está unido al gen promotor.
por una proteína especial (proteína de unión CAMP) y aumenta la afinidad de
ARN polimerasa para el gen P, lo que aumenta la frecuencia de trans-
cripción (Pastan y Perlman. 1970). El gen promotor parece bc
compuesto por al menos dos elementos. uno que se une a la ARN polimerasa y
el otro, que se une al complejo de unión proteína-CAMP. Encuadernación del
El complejo c'A MP en su sitio aparentemente es necesario para la unión o poli-ARN
metase en su sitio.
Aunque el nivel de c'AMP en la célula es una función de la adenil ciclasa
( La enzima de conversión de ATP a c' AMP) y "' AM p fosfodiesterasa. El
El mecanismo involucrado en la reducción de la concentración de c'AMP aún no se ha
comprendido.
se puso de pie . Dado que las células bacterianas absorben tantos carbohidratos a través de
sistemas de permeación inducible . que es fácil entender por qué los mutantes de E. coli,
 
 
 
Regulación
que no pueden producir una proteína de unión a € AMP o adenil ciclasa eficaz.
no crecen o crecen mal con lactosa. maltosa , arabinosa. manitol . glicerol .
y otros azúcares. Por otro lado, los mutantes que carecen de c'AMP fosfo-
La diesterasa es insensible a la represión de catabolitos (Monard ct 1969).
I. Regulación de retroalimentación
Mientras que las enzimas degradativas suelen estar reguladas por inducción y
regulación de catabolitos . las enzimas biosintéticas que convierten el metabolismo
los intermedios de los componentes básicos de las macromoléculas se controlan
principalmente
por regulación de retroalimentación. Se conocen dos tipos principales de regulación de
retroalimentación:
inhibición por retroalimentación y represión por retroalimentación Inhibición por
retroalimentación
es el fenómeno por el cual el metabolito final de una secuencia bioquímica
inhibe la acción de una enzima temprana (generalmente la primera) de esa
La represión por retroalimentación se refiere a la inhibición de la formación de enzimas.
se logra mediante una derivada del producto final de la
Ambos mecanismos actúan para ajustar la tasa de producción.
productos a la tasa de síntesis de macromoléculas.
En la inhibición por retroalimentación, el inhibidor es el producto final y no un derivado •
tivo . En contraste con la inhibición competitiva clásica, donde el isostérico
( misma forma) inhibidor se asemeja al sustrato, el inhibidor de retroalimentación y
el sustrato no necesariamente se parecen entre sí en tamaño, forma. o cobrar.
La inhibición en este caso se denomina allostertc (otros alostéricos
Las enzimas a menudo se componen de dos tipos de subunidades de proteínas: el suthtrate-
subunidad de unión que lleva el sitio catalítico activo y la subunidad reguladora
que posee el sitio de unión para el inhibidor de retroalimentación. Ocupación del
sitio inhibidor por el producto final distorsiona la molécula de la enzima y por lo tanto
interfiere con la unión del sustrato en su sitio de unión. Este tipo
de efecto se conoce como efecto alostérico, es decir. dos moléculas se unen a un pr0-
tein en diferentes sitios, pero la unión de uno cambia la conformación de la
proteína y por lo tanto afecta la unión de la otra.
Con enzimas que están sujetas a represión por retroalimentación, el gen R es
postulado para producir una proteína represora (aporepresor). El compresor
está inactivo pero puede ser activado por un corepressor, que es el producto final o
la vía biosintética (Fig. 1.4). La proteína represora activada entonces
interactúa con el gen O y evita la transcripción del gen S en
ARNm . Ocasionalmente, un derivado del producto final. en lugar del final
producto en sí, es el Corepressor. Por ejemplo. en Salmonella typhimurium.
el correpresor del his (para la biosíntesis de histidina) es un complejo
formado por histidina con ARN de transferencia de histidina.
El aporepresor de la vía biosintética del triptófano parece
una proteína o dalton, 10 moléculas de las cuales se producen por E. coli
 
 
celular (Zubay et 1972). La represión por retroalimentación es un fenómeno generalizado
regulando la síntesis de aminoácidos, nucleótidos purina y pirimidina.
y otras moléculas que son los componentes básicos de las macromoléculas. En
Además , la síntesis de vitaminas también se controla mediante la represión por
retroalimentación. Eso
Es importante controlar las vías de las vitaminas, ya que solo una pequeña cantidad de
Las moléculas de vitamina son células necesarias (probablemente 1000-2000 moléculas) en
comparación con los aminoácidos (probablemente TAN millones de moléculas de un
aminoácido ). Si las enzimas formadoras de vitaminas se produjeran a la misma velocidad
y eran tan activos como las enzimas productoras de aminoácidos. tremendo exceso
se produciría una síntesis de vitaminas.
 
 
| .1.4 Regulación en vías ramificadas
Surgen problemas especiales para el microorganismo cuando más de un extremo
El producto surge de una secuencia metabólica común que se ramifica en uno o
más puntos. En estos casos, la célula debe tener más mecanismos involucrados para
Evitar que un producto final interfiera con la producción de otros.
derivado de la secuencia metabólica común. Sin tales mecanismos
resultaría una situación caótica. Por ejemplo. la presencia de un extremo
el exceso de producto podría privar a la célula de otros productos finales. Aunque
muchos dispositivos reguladores han evolucionado. sólo tres comunes se
descritos aquí y se muestran en la Figura 1.5. Cada tipo es aplicable a cualquiera
inhibición por retroalimentación o represión por retroalimentación.
Regulación diferencial por isoenzimas. Varias enzimas son
cada uno de los cuales cataliza la misma reacción pero es controlado por un
. producto . Un ejemplo bien conocido ocurre en la formación del ácido anüno 'de
la familia del ácido aspártico en E. coli. Tres catalizan la inicial
reacción de la vía. Una isoenzima está regulada por lisina. otro por
treonina , y el tercero por metionina.
Regulación de retroalimentación concertada. Solo una enzima está involucrada pero más
de un producto final debe estar presente en exceso para inhibir o reprimir. Un
el producto final individual produce poco o ningún efecto negativo. Este tipo de
 
 
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Coordinación del metabolismo microbiano
El control también se conoce como regulación de retroalimentación cooperativa o
multivalente.
En la secuencia ramificada que conduce a la valina, se ejerce 11, isoleucina. leucina .
y ácido pantoténico en Salmonella lyphimurium.
Regulación de retroalimentación acumulativa. Cada producto final es capaz de solo un
pequeño grado de inhibición o represión por sí mismo incluso cuando se agrega en exceso.
Las combinaciones de productos finales muestran ellCcts acumulativos, por lo tanto, si un
efector
causa SO 0.1 inhibición y otra causa 25%, la combinación mostrará
inhibición . Con glutannnc sintetasa, ocho compuestos causan
grados limitados de inhibición. La biosíntesis de los ocho implica la glutamina.
Cada inhibidor actúa de forma independiente, pero los efectos combinados son acumulativos.
Así por el uso de isoenzimas. regulación concertada de retroalimentación. o cumu-
Regulación de retroalimentación lativc el exceso de un producto final no causa una
efecto inhibitorio drástico sobre la producción o los demás. Debería ser re-
Aquí recordé que después de cada punto de ramificación, las vías individuales actúan
como rutas biosintéticas. Es decir, el producto final generalmente inhibe la
primera enzima después del punto de ramificación y reprime una o más de las enzimas.
1.1 Regulación de aminoácidos S de la síntesis de ARN
Cuando un mutante que requiere aminoácidos agota su suministro de aminoácidos
en su medio de crecimiento. no solo se detiene la síntesis de proteínas, sino que también lo
hace
Síntesis de ARN. Este control "estricto" de la síntesis de ARN por aminoácidos
es económico para la célula ya que la formación de ARN en ausencia de proteína
la síntesis sería un desperdicio. Ciertas cepas mutantes, sin embargo, continúan
producir ARN en ausencia de un aminoácido requerido. Se dice que tienen
un control más relajado que estricto de la síntesis de ARN. La propiedad de
mapas de control estrictos o relajados en un solo locus genético, el RC (para ARN
control ) gen.
La inhibición de la síntesis de ARN por cepas rigurosas se debe a su pro-
ion de conducto de tetrafosfato de guanosina (ppGpp) y pentafosfato de guanosina
( pppGpp ) en condiciones de limitación de aminoácidos. Las cepas relajadas no pueden
producen estos nwcleótidos porque las cepas carecen de la enzima que forma
ppGpp del PIB y pppGpp de G TP. La estructura de ppGpp es
guanosina 5'-tfosfato-3'-difosfato. Los nucleótidos están formados por
una reacción de "inactividad" en los ribosomas que no pueden llevar a cabo la translocación
paso de síntesis de proteínas o falta de una molécula de ARN de transferencia cargada. La
enzima involucrada tiene un peso molecular o daltons y se llama
"el factor estricto" (Cochran y Byrne, 1974). De alguna manera desconocida,
los nucleótidos inhiben la síntesis de ARN, probablemente al inhibir la transcripción
de genes que codifican R NA ribosómico. El contenido de ppGpp en la celda es
inversamente proporcional al contenido de ARN y la tasa de crecimiento.