2014

USP 37 FARMACOPEA
,
AME RICA
DE LOS ESTADOS UNIDOS DE

NF 32 FORMULARIO NACIONAL

Volumen 4 Autorizados por la Convención de la Farmacopea de

los Estados Unidos de América. Preparados por el Consejo
de Expertos y sus Comités de Expertos

Oficial desde el 7º de mayo de 20 74

La designación "USP NF 2014" en la cubierta de esta publicación es sólo para

fines de identificación. La publicación contiene dos compendios separados: la
Farmacopea de los Estados Unidos de América, Trigésima Séptima Revisión, y el
Formulario Nacional, Trigésima Segunda Edición.

THE UNITED STATES PHARMACOPEIAL CONVENTION

12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852,
Estados Unidos de América
 GUÍA DE IMPLEMENTACIÓN DEL PERÍODO DE SEIS MESES

La Farmacopea de los Estados Unidos de América-Formulario Nacional y sus suplementos son oficiales a los seis meses
después de su publicación al público. Los compendios USP-NF, publicados el 1 º de noviembre de cada año, son oficiales
desde el 1 º de mayo del siguiente año. Se ha adoptado la implementación de este plazo de seis meses para que los usuarios
dispongan de más tiempo para lograr que sus métodos y procedimientos cumplan con los requisitos nuevos y revisados de
USP-NF.
La tabla siguiente indica las fechas oficiales de los compendios USP-NF y sus suplementos. Los compendios de USP 36-NF
31, de 201 3 y sus suplementos, Anuncios de Revisión Intermedia (IRA, por sus siglas en inglés) y Boletines de Revisión (Revision
Bulletins) de la mencionada edición, serán oficiales hasta el lº de mayo de 2014, fecha en la que los compendios USP 37-NF
32 serán oficiales.

Fecha de
Publicación Publicación Fecha Oficial Oficial hasta
USP 37-NF 32 1º de noviembre de 1° de mayo de 2014 1ºde mayo de 2015 (excepto cuando sean reemplazados por suple-
2013 mentas IRAs v Boletines de Revisión)
Primer Suplemento de 1º de febrero de 2014 1º de agosto de 2014 1ºde mayo de 2015 (excepto cuando sean reemplazados por el
USP 37-NF 32 Seaundo Sunlemento IRAs y Boletines de Revisión)
Segundo Suplemento de 1º de junio de 2014 1º de diciembre de 1ºde mayo de 2015 (excepto cuando sean reemplazados por IRAs y
USP 37-NF 32 2014 Boletines de Revisión)
USP 38-NF 33 1º de noviembre de 1º de mayo de 2015 1ºde mayo de 2016 (excepto cuando sean reemplazados por suple-
2014 mentas IRAs Y Boletines de Revisión)

La siguiente tabla proporciona detalles de los IRAs que aplicarán a los compendios de USP 37-NF 32.

Fecha de Publicación Fecha de Entrega de Fecha de Publicación

IRA de PF los Comentarios de IRA Fecha Oficial de IRA
40(1) 2 de enero de 2014 31 de marzo de 2014 30 de mayo de 2014 1º de iulio de 2014
40(2) 3 de marzo de 2014 31 de mayo de 2014 31 de iulio de 2014 1º de septiembre de 2014
40(3) 1º de mayo de 2014 31 de iulio de 2014 26 de septiembre de 2014 1 º de noviembre de 2014
4014) 1º de iulio de 2014 30 de seotiembre de 2014 26 de noviembre de 2014 1º de enero de 2015
4015) 2 de seotiembre de 2014 30 de noviembre de 2014 30 de enero de 2015 1º de marzo de 2015
4016) 3 de noviembre de 2014 31 de enero de 2015 27 de marzo de 2015 1º de mayo de 2015

Los Boletines de Revisión publicados en el sitio Web de la USP serán oficiales a partir de la fecha especificada en el Boletín de
Revisión.

OBSERVACIONES Y ADVERTENCIAS

En relación con los Derechos de Patentes o Marcas de los EE.UU.-La inclusión en la Farmacopea de los Estados Unidos o en el
Formulario Nacional de una monografía sobre cualquier fármaco respecto al cual puedan existir derechos de patentes o de
marcas no se considerará, ni pretende ser, una garantía de derecho o privilegio protegido por dicha patente o marca, ni una
autoridad para ejercer dicho derecho o privilegio. Tales derechos y privilegios están adjudicados al propietario de la patente o
marca y ninguna otra persona podrá ejercerlos sin permiso expreso, autoridad o licencia otorgados por el propietario de
dicha patente o marca. ·
Con relación al Uso de Textos de la USP o del NF-Se destaca el hecho de que los derechos de autor de los textos de la USP
y el NF están debidamente protegidos. Los autores y demás personas que deseen usar partes del texto deberán solicitar
permiso al Secretario de la junta Directiva de la Convención de la USP (USPC).
Copyright © 2014 The United States Pharmacopeial Convention
12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852
Todos los derechos reservados.
ISSN: 1930-2924
ISBN: 978-1-936424-25-2
Impreso en los Estados Unidos de América por United Book Press, lnc., Baltimore, Maryland
USP 37-NF 32 Contenido iii

Contenido

VOLUMEN 1 Artículos Nuevos que Aparecen en USP 3 7 Ausentes

en USP 36 y sus Suplementos .......... xxxviii

Artículos Incluidos en USP 36 Ausentes

en USP 3 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxxix
Misión y Prefacio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii
Lista Detallada .......................... xi

Integrantes del Ciclo de Revisión

2010-2015 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . XV Advertencias
Funcionarios ............................ xv Advertencias y Requisitos Generales . . . . . . . . . . 1

junta Directiva .......................... xv

Capítulos Generales
Consejo de Expertos ...................... xv
Ver página 2 9 para detalles del contenido
Comités de Expertos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvi
Pruebas y Valoraciones Generales . . . . . . . . . . . 33
Grupos Asesores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxiii
Requisitos Generales para Pruebas y
In Memóriam . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxiii Valoraciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
Miembros de la United States Equipos para Pruebas y Valoraciones . . . . . . . . . 53
Pharmacopeial Convention,
a partir del 31 de mayo de 2013 .. xxiv Pruebas Microbiológicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58

Reconocimiento para los Donantes de Pruebas y Valoraciones Biológicas . . . . . . . . . . . 92

Materiales de Referencia Pruebas y Valoraciones Químicas. . . . . . . . . . . 1 71
y Monografías en 2012 ............ xxx
Pruebas y Determinaciones Físicas . . . . . . . . . . 341

Acta Constitutiva .................. xxxii Información General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 637

Gobierno de la USP ................ xxxiii Suplementos Dietéticos. . . . . . . . . . . . . . . . . 1639

Estatutos ............................. xxxiii

Normas y Procedimientos ................ xxxiii

Reactivos, Indicadores y
Soluciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1101
Políticas de la USP ...................... xxxiii
Especificaciones de Reactivos . . . . . . . . . . . . . 1 706

Indicadores y Papeles Indicadores . . . . . . . . . 1 779

Incorporaciones .................. xxxvii Soluciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1781
Artículos Incorporados a USP 37 mediante Soluciones Amortiguadoras . . . . . . . . . . . . 1781
Suplementos ......................... xxxvii
iv Contenido USP 37-NF 32

Soluciones Calorimétricas . . . . . . . . . . . . . 1 783 Índice

Soluciones Reactivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 783 Índice Combinado de USP 37 y NF 32 ....... 1-1
Soluciones Volumétricas. . . . . . . . . . . . . . . 1 792

Columnas Cromatográficas . . . . . . . . . . . . . . 1801

VOLUMEN 3
Tablas de Referencia
Envases para Dispensar Cápsulas y Tabletas. . 1805 Guía para los Capítulos Generales. . . . vii
Descripción y Solubilidad Relativa de Artículos
de la USP y del NF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1815
Advertencias
Solubilidades Aproximadas de Artículos de la
Advertencias y Requisitos Generales .......... xi
USP y del NF . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1878

Pesos Atómicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1887

Tabla Alcoholimétrica . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1892

Tabla de Viscosidad Intrínseca . . . . . . . . . . . . 1894

U5P 37
Equivalencias de Temperatura . . . . . . . . . . . . 1896

Monografías
Índice Monografías Oficiales de USP 37, 1-Z . . . . . . 3831
Índice Combinado de USP 3 7 y NF 32 . . . . . . . 1-1

Índice
Índice Combinado de USP 37 y NF 32 ....... 1-1

VOLUMEN 2
VOLUMEN 4
Guía para los Capítulos Generales. . . . vii
Guía para los Capítulos Generales. . . . vii

Advertencias
Advertencias y Requisitos Generales .......... xi
Advertencias
Advertencias y Requisitos Generales .......... xi

U5P 37
Suplementos Dietéticos
Monografías Oficiales . . . . . . . . . . . . . . . . . . 581 7
Monografías
Monografías Oficiales de USP 3 7, A-H . . . . . . 1899
USP 37-NF 32 Contenido v

Excipientes
NF 32
Excipientes USP y NF, Agrupados por
Categoría . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6446

Incorporaciones
Monografías
Artículos Incorporados a NF 32 mediante
Suplementos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6443 Monografías Oficiales de NF 32. . . . . . . . . . . 6455

Artículos Nuevos que Aparecen en NF 32 Ausentes

en NF 31 y sus Suplementos . . . . . . . . . . . 6443 Índice
Artículos Nuevos que Aparecen en NF 32 . . . 6443 Índice Combinado de USP 3 7 y NF ~) 1- 1
Lista Detallada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6444
1
USP 37
Guía para los Capítulos
Generales
(Para obtener la lista alfabética completa de los capítulos generales de esta Farmacopea, consulte "Capítulos Generales" en el
PRUEBAS Y VALORACIONES GENERALES
Requisitos Generales para
Pruebas y Valoraciones
(1) Inyectables ............................. 33
(2) Medicamentos Orales-Pruebas de Calidad de
Productos ............................. 39
(3) Medicamentos Tópicos y Transdérmicos-Pruebas de
Calidad de Producto ..................... 45
(11) Estándares de Referencia USP ............... 50
Equipos para Pruebas y Valoraciones
(1 7) Etiquetado de Envases de Medicamentos de Venta
Bajo Receta Médica ..................... 53
(21) Termómetros .......................... 56
(31) Aparatos Volumétricos .................... 56
(41) Pesas y Balanzas ........................ 57
Pruebas Microbiológicas
(51) Pruebas de Eficacia Antimicrobiana ........... 58
(55) Indicadores Biológicos-Pruebas de Resistencia .. 60
(61) Examen Microbiológico de Productos No Estériles:
Pruebas de Recuento Microbiano ........... 63
(62) Examen Microbiológico de Productos No Estériles:
Pruebas de Microorganismos Específicos ...... 70
(63) Pruebas para Micoplasmas ................. 78
(71) Pruebas de Esterilidad .................... 84
Pruebas y Valoraciones Biológicas
(81) Antibióticos-Valoraciones Microbiológicas ..... 92
(85) Prueba de Endotoxinas Bacterianas .......... 111
(87) Pruebas de Reactividad Biológica, In Vitro ..... 11 7
(88) Pruebas de Reactividad Biológica, In Vivo ..... 119
(90) Suero Fetal Bovino-Atributos de Calidad y
Pruebas de Funcionalidad ................ 125
(91) Valoración de Pantotenato de Calcio ......... 129
(92) Factores de Crecimiento y Citokinas Usados en la
Fabricación de Productos de Terapia Celular ... 131
(111) Diseño y Análisis de Valoraciones Biológicas ... 1 35
(115) Valoración de Dexpantenol ............... 151
(121) Valoración de Insulina .................. 153
(123) Pruebas de Identidad Biológica de Glucagón .. 155
(1 30) Atributos de Calidad de la Proteína A ....... 158
(151) Prueba de Pirógenos ................... 166
(161) Equipos para Transfusión e Infusión y
Dispositivos Médicos Similares ........... 168
(1 71) Valoración de Actividad de Vitamina B12 ..... 168
Guía para los Capitulas Generales vii
índice.)
Pruebas y Valoraciones Químicas
Pruebas de Identificación
(181) Identificación-Bases Orgánicas Nitroge-
nadas ............................. 171
(191) Identificación-Pruebas Generales .......... 1 72
(193) ldentificación-Tetraciclinas .............. 1 75
(197) Pruebas de Identificación Espectrofoto-
métrica ............................ 1 76
(201) Prueba de Identificación por Cromatografía en
Capa Delgada ....................... 1 77
Pruebas de Límite
(206) Aluminio ............................ 178
(207) Prueba para el Derivado 1,6-Anhidro de
Enoxaparina Sódica ................... 1 79
(208) Valoración de Anti-Factor Xa y Anti-Factor
lla para Heparinas No Fraccionadas y Heparinas
de Bajo Peso Molecular ................ 185
(211) Arsénico ............................ 189
(221) Cloruros y Sulfatos .................... 191
(223) Dimetilanilina ........................ 191
(226) 4-Epianhidrotetraciclina ................. 192
(228) Oxido de Etileno y Dioxano .............. 193
(231) Metales Pesados ...................... 195
(232) Impurezas Elementales-Límites ........... 198
(233) Impurezas Elementales-Procedimientos ..... 200
(241) Hierro .............................. 205
(251) Plomo ............................. 205
(261) Mercurio ............................ 206
(267) Porosimetría por Intrusión de Mercurio ...... 209
(268) Porosidad Mediante Adsorción-Desorción
de Nitrógeno ....................... 212
(271) Prueba para Sustancias Fácilmente Carbo-
nizables ........................... 216
(281) Residuo de Incineración ................. 216
(291) Selenio ............................. 21 7
Otras Pruebas y Valoraciones
(301) Capacidad Neutralizante de Ácido ......... 218
(311) Valoración de Alginatos ................. 219
(341) Agentes Antim[crobianos-Contenido ....... 220
(345) Valoración de Acido Cítrico/Citrato y Fosfato .. 223
(351) Valoración de Esteroides ................. 224
(361) Valoración de Barbitúricos ............... 225
(371) Valoración de Cobalamina con Marcador
Radioactivo ......................... 225
(381) Tapones Elastoméricos para Inyectables ...... 226
viii Guía para los Capítulos Generales
(391) Valoración de Epinefrina ................. 232
(401) Grasas y Aceile,s Fijos ................... 233
(411) Valoración de Acido Fólico ............... 248
(413) Análisis de Impurezas en Gases Medicinales ... 248
(415) Valoración de Gases Medicinales ........... 249
(425) Antibióticos-Valoración Yodométrica ....... 252
(429) Medición del Tamaño de Partícula por Difracción
de Luz ............................ 253
(431) Determinación de Grupos Metoxilo ........ 259
(441) Valoración de Niacina o Niacinamida ....... 260
(451) Volumetría con Nitrito .................. 263
(461) Determinación de Nitrógeno ............. 264
(466) Impurezas Comunes ................... 265
(467) Disolventes Residuales .................. 266
(471) Combustión en Matraz con Oxígeno ....... 282
(481) Valoración de Riboflavina ................ 282
(501) ~ales de Bases Orgánicas Nitrogenadas ...... 283
(503) Acido Acético en Péptidos ............... 284
(511) Valoración de un Esteroide Aislado ......... 285
(525) Dióxido de Azufre ..................... 285
(531) Valoración de Tiamina .................. 291
(541) Volumetría .......................... 292
(551) Valoración de Alfa Tocoferol .............. 295
(561) Artículos de Origen Botánico ............. 296
(563) Identificación de Artículos de Origen
Botánico ........................... 31 O
(565) Extractos Botánicos .................... 321
(5 71) Valoración de Vitamina A ................ 324
(581) Valoración de Vitamina D ................ 330
(591) Determinación de Cinc ................. 340
Pruebas y Determinaciones Físicas
(601) Aerosoles, Atomizadores Nasales, Inhaladores
de Dosis Fija e Inhaladores de Polvo Seco ... 341
(61 O) Métodos de Muestreo Microbiológico
Alternativos para Productos Nasales
e Inhaladores No Estériles ............... 370
(611) Determinación de Alcohol ............... 372
(616) Densidad Aparente y Densidad por Asenta-
miento de los Polvos .................. 374
(621) Cromatografía ........................ 377
(631) Color y Acromatismo ................... 387
(641) Totalidad de la Disolución ............... 389
(643) Carbono Orgánico Total ................. 389
(645) Conductividad del Agua ................. 391
(651) Temperatura de Solidificación ............. 394
(659) Requisitos de Envases y Almacenamiento ..... 396
(660) Envases-Vidrio ....................... 399
(661) Envases-Plásticos ..................... 405
(670) Envases-Componentes Auxiliares .......... 412
(671) Envases-Pruebas de Desempeño .......... 414
(691) Algodón ............................ 419
(695) Cristalinidad ......................... 421
(696) Caracterización de Sólidos Cristalinos por Micro-
calorimetría y Calorimetría de Disolución .... 421
(698) Volumen de Entrega ................... 424
(699) Densidad de Sólidos ................... 427
(701) Desintegración ....................... 429
(711) Disolución .......................... 431
(721) Intervalo de Destilación ................. 441
(724) Liberación de Fármacos ................. 442
(726) Electroforesis ......................... 447
(729) Distribución del Tamaño de Glóbulos en Emul-
siones Inyectables de Lípidos ............ 451
(730) Espectroquímica de Plasma .............. 454
(731) Pérdida por Secado .................... 462
(733) Pérdida por Incineración ................ 462
(735) Espectrometría de Fluorescencia de Rayos X .. 463
(736) Espectrometría de Masas ................ 468
(741) Intervalo o Temperatura de Fusión ......... 474
(751) Partículas Metálicas en Ungüentos
Oftálmicos ......................... 476
(755) Llenado Mínimo ...................... 477
USP 37
(761) Espectroscopía de Resonancia Magnética
Nuclear ............................ 477
(771) Ungüentos Oftálmicos .................. 488
(776) Microscopfa Optica .................... 488
(781) Rotación Optica ...................... 491
(785) Osmolalidad y Osmolaridad .............. 492
(786) Estimación de la Distribución del Tamaño de
Partícula por Tamizado Analítico .......... 495
(788) Partículas en Inyectables ................ 499
(789) Partículas en Soluciones Oftálmicas ......... 503
(791) pH ................................ 504
(795) Preparación Magistral-Preparaciones No
Estériles ............................ 506
(797) Preparación Magistral-Preparaciones
Estériles ............................ 51 5
(801) Polarografía ......................... 565
(811) Finura de Polvos ...................... 569
(821) Radioactividad ........................ 570
(823) Fármacos para Tomografía de Emisión de Posi-
trones para Uso en Preparaciones Magistrales,
, Investigación Clínica y Estudios Científicos ... 581
(831) Indice de Refracción ................... 592
(841) ~eso Específico ....................... 592
(846) Area Superficial Específica ................ 593
(851) Espectrofotometría y Dispersión de Luz ...... 597
(861) Suturas-Diámetro .................... 606
(871) Suturas-Sujeción de Agujas .............. 606
(881) Resistencia a la Tensión ................. 607
(891) Análisis Térmico ...................... 608
(905) Uniformidad de Unidades de Dosificación .... 612
(911) Viscosidad-Métodos del Viscosímetro
Capilar ............................ 616
(912) Métodos del Reómetro Rotatorio .......... 618
(913) Método del Viscosímetro de Bola Rodante .... 623
(921) Determinación de Agua ................. 625
(941) Caracterización de Sólidos Cristalinos
y Parcialmente Cristalinos por Difracción
de Rayos X sobre Polvo (DRXP) ........... 629
INFORMACIÓN GENERAL
(1005) Emisión Acústica ..................... 637
(101 O) Datos Analíticos-Interpretación y Trata-
miento ........................... 641
(1015) Aparatos Automatizados de Síntesis
Radioquímica ....................... 657
(1024) Suero Bovino ........................ 659
(1027) Citometría de Flujo ................... 673
(1030) Capítulos de Valoraciones Biológicas-Infor-
mación General y Glosario ............. 691
(1031) Biocompatibilidad de los Materiales Usados en
Envases de Medicamentos, Dispositivos
Médicos e Implantes ................. 703
(1 032) Diseño y Desarrollo de Valoraciones Bioló-
gicas ............................. 714
(1033) Validación de Valoraciones Biológicas ...... 734
(1034) Análisis de Valoraciones Biológicas ......... 751
(1035) Indicadores Biológicos para Esterilización .... 765
(1041) Productos Biológicos .................. 770
(1043) Materiales Auxiliares para Productos Celulares,
Génicos y de Ingeniería Tisular .......... 771
(1 045) Artículos Obtenidos por Biotecnología ...... 780
(1046) Productos Derivados de Células y Tejidos .... 796
(1047) Productos de Terapia Génica ............ 829
(1048) Calidad de Productos Biotecnológicos: Análisis de
la Construcción Expresable en Células Usadas
para la Producción de Productos Proteínicos
Obtenidos con ADN Recombinante ....... 861
(1049) Calidad de Productos Biotecnológicos: Pruebas
de Estabilidad de Productos Biotecnológicos
o Bioló9icos ........................ 864
(1050) Evaluacion de la Seguridad Viral en Productos
Biotecnológicos Obtenidos de Líneas
Celulares de Origen Humano o Animal .... 869
USP 37
(1 051) Limpieza de Material de Vidrio ........... 883
(1 052) Artículos Obtenidos por Biotecnología-
Análisis de Aminoácidos ............... 884
(1053) Electroforesis Capilar .................. 898
(1 054) Artículos Obtenidos por Biotecnología-
lsoelectroenfoque .................... 905
(1 055) Artículos Obtenidos por Biotecnología-
Mapeo de Péptidos .................. 908
(1056) Artículos Obtenidos por Biotecnología-
Electroforesis en Gel de Poliacrilamida ..... 915
(1057) Artículos Obtenidos por Biotecnología-
Valoración de Proteínas Totales .......... 922
(1058) Calificación de Instrumentos Analíticos ..... 927
(1059) Desempeño de Excipientes .............. 933
(1061) Color-Medición Instrumental ........... 955
(1065) Cromatografía lónica .................. 958
(1066) Ambientes Físicos que Promueven el Uso Seguro
de los Medicamentos ................. 961
(1072) Desinfectantes y Antisépticos ............ 969
(1074) Guías para la Evaluación de la Seguridad
Biológica de los Excipientes ............. 975
(1078) Buenas Prácticas de Fabricación para Excipientes
Farmacéuticos a Granel ................ 979
(1079) Buenas Prácticas de Almacenamiento y
y Distribución para Medicamentos ........ 997
(1080) Excipientes Farmacéuticos a Granel-
Certificado de Análisis ................ 1007
(1081) Consistencia del Gel de Gelatina ......... 1016
(1084) Análisis de Glicoproteínas y Glicanos-
Consideraciones Generales ............ 1016
(1086) Impurezas en Fármacos y Productos
Farmacéuticos ..................... 1027
(1087) Disolución Intrínseca Aparente-Procedi-
mientos de Pruebas de Disolución para
Disco Rotatorio y Disco Estacionario ..... 1030
(1088) Evaluación In Vivo e In Vitro de Formas
Farmacéuticas ..................... 1035
(1090) Evaluación de Desempeño del Producto Farma-
céutico-Biodisponibilidad, Bioequivalencia
y Disolución ...................... 1047
(1091) Etiquetado de Ingredientes Inactivos ...... 1056
(1092) Procedimiento de Disolución: Desarrollo
y Validación ....................... 1056
(1097) Procedimientos para el Muestreo de Polvos
a Granel ......................... 1065
(1102) Métodos de Pruebas Inmunológicas-
Consideraciones Generales ............ 1079
(1103) Métodos de Pruebas Inmunológicas-
Ensayo por lnmunoadsorción Ligado a
Enzimas (ELISA) .................... 1087
(1104) Métodos de Pruebas Inmunológicas-
Análisis por lnmunotransferencia ........ 1099
(1105) Métodos de Pruebas Inmunológicas-
Resonancia de Plasmón Superficial ....... 1111
(1106) Ensayos de lnmunogenicidad-Diseño y
Validación de lnmunoensayos para Detectar
Anticuerpos Antifármacos ............. 1128
(1111) Examen Microbiológico de Productos No
Estériles: Criterios de Aceptación para
Preparaciones Farmacéuticas y Sustancias
de Uso Farmacéutico ................ 1146
(1112) Determinación de Actividad de A9ua en
Productos Farmacéuticos No Esteriles ..... 1147
(111 3) Caracterización, Identificación y
Tipificación de Cepas Microbianas ....... 1150
(1116) Control Microbiológico y Monitoreo de
,Ambientes de Procesamiento Aséptico .... 1155
(111 7) Optimas Práticas de Laboratorio Microbioló-
gico ............................ 1169
(1118) Dispositivos de Monitoreo-Tiempo, Tempe-
ratura y Humedad .................. 11 76
(1119) Espectroscopía en el Infrarrojo Cercano .... 1182
(1120) Espectroscopía Raman ................ 1189
(1121) Nomenclatura ...................... 1198
Guia para los Capítulos Cenera/es ix
(1125) Técnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Generalidades ..................... 1200
(1126) Técnicas Basadas en Ácidos Nucleicos-
Extracción, Detección.y Secuenciación ..... 1206
(1127) Técnicas Basadas en Acidos Nucleic.o~-
Amplificación ...... · ................ 121 7
(1128) Técnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Micromatrices ..................... 1228
(1129) Técnicas Basadas en Ácidos Nucleicos-
Genotipificación .... · ................ 1235
(1130) Técnicas Basadas en Acidos Nucleis:os-
Enfoques para Detectar Trazas de Acidos Nucleicos
(Análisis de ADN Residual) ............. 1240
(11 36) Envasado y Reenvasado-Envases Unitarios .... .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1243
(1151) Formas Farmacéuticas ................ 1253
(1160) Cálculos Farmacéuticos en la Preparación
Magistral de Prescripciones ............ 1282
(1163) Garantía de Calidad en la Preparación
Magistral ......................... 1297
(1171) Análisis por Solubilidad de Fases ......... 1 304
(1174) Fluidez de Polvos .................... 1307
(1176) Balanzas y Aparatos Volumétricos para Prescrip-
ciones ........................... 1311
(11 77) Buenas Prácticas de Envasado ........... 1 31 3
(1178) Buenas Prácticas de Reenvasado ......... 1316
(1180) Plasma Humano .................... 1319
(1181) Microscopía Electrónica de Barrido ....... 1344
(1184) Pruebas de Sensibilización ............. 1349
(1191) Consideraciones sobre Estabilidad en la Práctica
de Dispensación .................... 1 360
(1195) Guía sobre Cambios Significativos en Excipientes
Farmacéuticos a Granel ............... 1 365
(1196) Armonización Farmacopeica ............ 1 377
(1197) Buenas Prácticas de Distribución para Exci-
pientes Farmacéuticos a Granel ......... 1 385
(1207) Envasado de Productos Estériles-Evaluación
de Integridad ...................... 1409
(1208) Pruebas de Esterilidad-Validación de Sistemas
Aisladores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1412
(1209) Esterilización-Indicadores e Integradores
Químicos y Fisicoquímicos ............ 1417
(1211) Esterilización y Garantía de Esterilidad de
Artículos Farmacopeicos .............. 1419
(1216) Friabilidad de las Tabletas .............. 1425
(121 7) Fuerza de Ruptura de las Tabletas ........ 1426
(1222) Productos Farmacéuticos con Esterilización
Terminal-Liberación Paramétrica ....... 1429
(1223) Validación de Métodos Microbiológicos
Alternativos ....................... 1433
(1224) Transferencia de Procedimientos Analíticos .. 1437
(1225) Validación de Procedimientos Farma-
copeicos ......................... 1440
(1226) Verificación de Procedimientos Farma-
copeicos ......................... 1445
(1227) Validación de Recuperación Microbiana en
Artículos Farmacopeicos .............. 1447
(1229) Esterilización de Artículos Farmacopeicos ... 1451
(1229.1) Esterilización con Vapor de Agua por
Contacto Directo ................. 1457
(1229.2) Esterilización con Calor Húmedo de
Líquidos Acuosos ................. 1460
(1229.3) Monitoreo de la Biocarga ............ 1465
(1230) Agua para Uso en Hemodiálisis .......... 1469
(1231) Agua para Uso Farmacéutico ........... 1470
(1235) Vacunas para Uso Humano--Consideraciones
Generales ........................ 1500
(1237) Métodos de Pruebas Virológicas ......... 1518
(1238) Vacunas para Uso Humano-Vacunas Bac-
terianas .......................... 1540
(1241) Interacciones Agua-Sólido en Sistemas
Farmacéuticos ..................... 1554
(1251) Pesada en una Balanza Analítica ......... 1559
(1265) Información Escrita de los Medicamentos
Recetados-Guías ................... 1564
x Guía para los Capítulos Generales
(1601) Productos para Nebulización-Pruebas de
Caracterización ....................
(1644) Teoría y Práctica de Mediciones de
Conductividad Eléctrica de Soluciones ....
(1 660) Envases de Vidrio-Evaluación de la
Durabilidad de la Superficie Interna ......
(1724) Medicamentos Semisólidos-Pruebas de
Desempeño .......................
(1761) Aplicaciones de la Espectroscopía de
Resonancia Magnética Nuclear .........
(1 788) Métodos para la Determinación de Partículas
en Inyectables y Soluciones Oftálmicas ....
(1911) Reometría .........................
SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2021) Pruebas de Recuento Microbiano-Suplementos
Nutricionales y Dietéticos ............. 1639
USP 37
(2022) Procedimientos Microbiológicos para Comprobar
1566 la Ausencia de Microorganismos Específicos-
Suplementos Nutricionales y Dietéticos ... 1644
1570 (2023) Atributos Microbiológicos de los Suplementos
Nutricionales y Dietéticos No Estériles .... 1651
1577 (2030) Información Complementaria para Artículos de
Origen Botánico .................... 1654
1583 (2040) Desintegración y Disolución de Suplementos
Dietéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1664
1596 (2091) Variación de Peso de Suplementos
Dietéticos ........................ 1672
1617 (2232) Contaminantes Elementales en Suplementos
1632 Dietéticos ........................ 1673
(2750) Prácticas de Fabricación para Suplementos
Dietéticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 680
USP 37
Advertencias y Requisitos
Aplicables a las Normas, Pruebas,
Valoraciones y Otras Especificaciones
de la Farmacopea de los Estados Unidos
1. Título y Revisión ...................... xiii
2. Estado Oficial y Reconocimiento
Legal .................................. xiii
2. H>. Texto Oficial .......................... xiii
2.20. Artículos Oficiales ...................... xiii
2.30. Reconocimiento Legal ................... xiii
3. Cumplimiento de las Normas .......... xiv
3.1 O. Aplicabilidad de las Normas ............... xiv
3.20. Indicación de Cumplimiento ............... xiv
4. Monografías y Capítulos Generales .... xv
4.1 O. Monografías .......................... xv
4.20. Capítulos Generales ..................... xv
5. Componentes de las Monografías ..... xv
5.1 O. Fórmulas Moleculares .................... xv
5.20. Sustancias Agregadas .................... xv
5.30. Descripción y Solubilidad ................. xvi
5.40. Identidad ............................ xvi
5.50. Valoración ............................ xvi
5.60. Impurezas y Sustancias Extrañas ........... xvii
5.70. Pruebas de Desempeño ................. xvii
5.80. Estándares de Referencia USP ............. xvii
6. Prácticas y Procedimientos de
Prueba . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.1 O. Prácticas Seguras de Laboratorio . . . . . . . . . . .
6.20. Procedimientos Automatizados ............
6.30. Métodos y Procedimientos Alternativos y
Armonizados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.40. Con Respecto a la Sustancia Seca, Anhidra,
Incinerada o Exenta de Disolventes. . . . . . . . . . . .
6.50. Preparación de Soluciones ...............
6.60. Unidades Necesarias para Completar una
Prueba ................................
Advertencias Generales xi
Generales
6.70. Reactivos ............................ xviii
6.80. Equipo ............................. xviii
7. Resultados de Pruebas ............... xvix
7.1 O. Interpretación de los Requisitos ............ xvix
7.20. Reglas para Redondeo .................. xvix
8. Términos y Definiciones .............. xvix
8.1 O. Abreviaturas ......................... xvix
8.20. Aproximadamente .................... xvix
8.30. Contenido de Alcohol ................... xx
8.40. Pesos Atómicos ....................... xx
8.50. Determinaciones con Blancos ............. xx
8.60. Concomitantemente .................... xx
8.70. Desecador ........................... xx
8.80. Logaritmos ........................... xx
8.90. Cepas Microbianas ..................... xx
8.1 OO. Inapreciable .......................... xx
8.110. No menos de (NLT) y No más de (NMT) ..... xx
8.120. Olor ............................... xx
8.1 30. Por ciento ........................... xx
8.140. Concentraciones Porcentuales ............. xx
8.150. Presión ............................. xx
8.160. Tiempo de Reacción .................... xx
8.1 70. Peso Específico ....................... xx
8.180. Temperaturas ........................ xx
8.190. Tiempo ............................. xx
8.200. Transferir ............................ xx
8.21 o. Vacío .............................. XX
xvii 8.220. Desecador al Vacío ..................... xx
xvii 8.230. Agua .............................. xx
xvii 8.240. Pesos y Medidas ...................... xx
xvii 9. Prescripción y Dispensación .......... xxii
9 .1 O. Uso de Unidades Métricas . . . . . . . . . . . . . . . xxii
xvii 9.20. Cambios en Volumen ................... xxii
xviii
...
XVIII
xii Advertencias Generales USP 37

1 O. Conservación, Envasado, Almacena- 1 0.1 O. Envasado y Almacenamiento . . . . . . . . . . . . . . xx

miento y Etiquetado ................... xx 1 0.40. Etiquetado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xx
USP 37
ADVERTENCIAS Y
REQUISITOS GENERALES
La sección de Advertencias y Requisitos Generales (en lo
sucesivo, Advertencias Generales) presenta las suposiciones
básicas, definiciones y condiciones que se usan por defecto
para la interpretación y aplicación de la Farmacopea de Jos
Estados Unidos de America (USP, por sus siglas en inglés) y
del Formulqr!o Nacional (NF, por sus siglas en inglés).
Los requ1s1tos establecidos en estas Advertencias Generales
se aplican a todos los artículos reconocidos en la USP y en el
NF (en lo sucesivo, los "compendios") y a todos los capítu-
los generales, a menos que se especifique algo diferente.
Cuando los requisitos de una monografía individual sean di-
ferentes a los de las Advertencias Generales o de un capítulo
general, los requisitos de la monografía se aplicarán y reem-
plazarán a los requisitos de las Advertencias Generales o del
capítulo general, aunque la monografía no haga mención
expresa de las diferencias.
Cambio en la redacción:
1. TÍTULO Y REVISIÓN
El título completo de esta publicación (que consiste en
cuatro volúmenes e incluye sus Suplementos) es: Farmacopea
de los Estados Unidos de América, Trigésima Séptima Revisión
y Formulario Nacional, Trigésima Segunda Edición. Estos títu-
los pueden abreviarse a USP 37, a NF 32, y a USP 31-NF 32.
La Farmacopea de los Estados Unidos, Trigésima Séptima Revi-
sión, y el Formulario Nacional, Trigésima Segunda Edición,
reemplazan a todas las revisiones anteriores. Cuando se em-
plean las siglas "USP", "NP' o "USP-NP' sin ningún otro
calificativo, las mismas se refieren únicamente a USP 37, NF
32, y a sus Suplementos, durante el tiempo que estos com-
pendios estén vigentes. Los mismos títulos, sin ninguna dis-
tinción, se aplican tanto a la presentación impresa como a
la electrónica de este contenido. Aunque la USP y el NF se
publican en forma conjunta y comparten estas Advertencias
Generales, cada uno de ellos constituye por sí mismo un
compendio separado.
Esta revisión es oficial a partir del 1º de mayo de 2014, a
menos que se indique algo diferente mediante un texto
específico.
Los Suplementos de la USP y el NF se publican
periódicamente.
Los lnterim Revision Announcements (Anuncios de Revisión
Intermedia) son revisiones de la USP y del NF que se publi-
can en el sitio Web de la USP. Los lnterim Revision Announce-
ments contienen revisiones oficiales y sus fechas de entrada
en vigencia. Asimismo, el sitio Web de la USP, en el apar-
tado "New Official Text" (Nuevo Texto Oficial) incluye
anuncios de disponibilidad de nuevos Estándares de Referen-
cia USP y anuncios de pruebas o procedimientos que se
mantienen en suspenso por falta de los Estándares de Refe-
rencia USP requeridos.
Los Revision Bulletins (Boletines de Revisión) son revisiones
del texto oficial o aplazamientos que requieren de publica-
ción expedita. Se publican en el sitio Web de la USP y, por
lo general, se oficializan inmediatamente, a menos que se
indique algo distinto en el Boletín de Revisión.
La Errata (Fe de Erratas) comprende las correcciones a ar-
tículos publi~ados erróneamente que no han sido aprobados
por el Conse¡o de Expertos y que no reflejan los requisitos
oficiales. "'J1.usp31
Advertencias Generales x111
2. ESTADO OFICIAL Y RECONOCIMIENTO LEGAL
2.1 O. Texto Oficial
El Texto Oficial es el texto contenido en la USP y el NF,
incluidas las monografías, los capítulos generales y estas Ad-
vertencias Generales. Las revisiones al texto oficial se presen-
t~~ en los s.uplementos,, lnterim Revision Announcemen,t~ y Re-
v/Slon Bulletms. Los cap1tulos generales con numeracion del
1000 al 1999 se consideran explicativos y están destinados a
definir, describir o informar sobre un tema en particular. No
contienen requisitos obligatorios aplicables a ningún artículo
oficial a menos que sean referidos por las Advertencias Gene-
rales, una monografía o un capítulo general con numeración
inferior a 1000. Los capítulos generares con numeración su-
perior a 2000 aplican únicamente a artículos destinados
p~ra, s.u uso como ingredientes dietéticos y suplementos
d1etet1cos.
2.20. Artículos Oficiales
Un artículo oficial es un artículo reconocido en la USP o el
NF. Se considera que un artículo está reconocido e incluido
en un compendio cuando se publica su monografía en el
compendio y se le asigna una fecha oficial a la misma en
forma específica o general.
El título especificado en una monografía es el título oficial
para ese artículo. Los nombres que se consideren sinónimos
de títulos oficiales no pueden ser utilizados para sustituir a
los nombres oficiales.
Los artículos oficiales incluyen tanto sustancias oficiales
como productos oficiales. Una sustancia oficial es un fármaco,
excipiente, ingrediente dietético u otro ingrediente, o un
componente de un dispositivo terminado para el cual el tí-
tulo de la monografía no incluye indicación alguna sobre la
naturaleza de la forma terminada.
Un producto oficial es un producto farmacéutico, suple-
mento dietético, preparación magistral, o dispositivo termi-
nado para el cual se provee una monografía.
2.30. Reconocimiento Legal
Los compendios USP y NF están reconocidos por las legis-
laciones y reglamentaciones de muchos países del mundo.
Las autoridades reguladoras pueden hacer cumplir las nor-
mas presentadas en la USP y el NF; no obstante, debido a
que el reconocimiento de los compendios USP y NF puede
variar de país a país, se recomienda que los usuarios conoz-
can las legislaciones y reglamentaciones aplicables. En los
Estados Unidos, de acuerdo con la Federal Food, Drug, and
Cosmetic Act (Ley Federal de Alimentos, Medicamentos y
Cosméticos o FDCA), tanto la USP como el NF están recono-
cidos como compendios oficiales. Un medicamento con un
nombre reconocido en USP-NF debe cumplir con las normas
farmacopeicas de identidad o se le considerará adulterado,
rotulado incorrectamente (misbranded) o ambos. Ver, p.ej.,
la FDCA § 501 (b) y 502(e)(3)(b); ver también las reglamen-
taciones de la FDA, el Título 21 del CFR § 299.5(a&b). Para
evitar que se les considere adulterados, los medicamentos
deben cumplir además con las normas farmacopeicas de
contenido, calidad y pureza, a menos que se declaren en el
etiquetado todos los aspectos en los que el medicamento
difiere. Ver, p.ej., FDCA § 501 (b) y Título 21 del CFR §
299.5(c). Asimismo, para evitar que se les considere rotula-
dos incorrectamente, los medicamentos reconocidos en los
compendios USP-NF deben también envasarse y etiquetarse
de conformidad con las normas farmacopeicas. Ver la FDCA
§ 502(g).
xiv Advertenrias Generales
Un suplemento dietético ql!e dec!ara cumplir ~on las ~s­
pecificaciones de USP se considerara como un alimento in-
correctamente rotulado (misbranded food) si incumpliera
con las mismas. Ver la FDCA § 403(s)(2)(D).
La ejecución de las normas USP es responsabilidad de la
FDA y demás autoridades gubernamentales en los EE.UU. y
demás países. La USP no desempeña ningún papel en la
ejecucion de las normas.
Cambio en la redacción:
3. CUMPLIMIENTO DE LAS NORMAS
3.1 O. Aplicabilidad de las Normas
Las normas para un artículo reconocido en 4 1?s comp~n­
dios (USP-NF) 4 usp3 1 se expresan en la monograf1a del arti-
culo, en los capítulos generales apli~ables y en las Adverten-
cias Generales. La identidad, contenido, calidad y pureza de
un artículo se determinan mediante pruebas, procedimien-
tos y criterios de aceptación ?ficiales, incluidos ya sea ~n su
monografía, en las Advertenoas Generales o ~n los capitulas
generales aplicables, a menos que se exceptue en alguna
otra parte de los compendios. Está permitida la adopción
temprana de las normas revisadas. Cuando las normas revi-
sadas para un artículo existente hayan sido publicadas como
"texto oficial" aprobado (conforme a lo aprobado en la sec-
ción 2.1 O) pero aún no sean oficiales ~~eis meses ~e~pués de
su publicación, a m~,nos que se espec1f!q~e algo distinto; ver
"fecha oficial," secoon 2.20), el cumplimiento con la norma
revisada no excluirá una determinación o indicación de
cumplimiento con las normas •farmacopeicas..,uSPJ1, a menos
que la USP especifique algo distinto rrohibiendo la adop-
ción temprana en una norma en particular.
Las normas en la monografía, capítulo(s) general(es) y Ad-
vertencias Generales pert~nentes son aplicables e~, todo mo-
mento de la vida del articulo, desde su producc1on hasta su
caducidad. Las especificaciones del fabricante y las buenas
prácticas de fabricación (incluyendo, p.ej., iniciativ_as de Cali-
dad por Diseño), por lo general, se desarrollan y siguen para
asegurar que el artículo cumpli~á con_ las normas farmaco-
peicas hasta su fecha de caducidad, siempre que se alma-
cene de acuerdo con las instrucciones dadas al respecto. Por
consiguiente, se espera que todo artículo ?ficial cumpla CO_!l
las normas farmacopeicas en caso de analizarse, y todo arti-
culo oficial analizado según se indica en la monografía perti-
nente debe cumplir con tales normas para demostrar el
cumplimiento. . ,
En ocasiones, las normas farmacope1cas toman el caracter
de,procedimien~os estadísticos ~ua_ndo implican. ur:iidades
multiples y, posiblemente, un diseno d~ proced1m1en~o se-
cuencial que permite al usuario determina~ q_~e el articulo
analizado cumple o no con la norma. La s1m1litud con pro-
cedimientos est,adísticos podría_ sugerir u,n intento de infe-
rencia para algun grupo de unidades mas grande, pero en
todos los casos, las declaraciones sobre si se ha cumplido
con la norma farmacopeica sólo aplica a las unidades anali-
zadas. Los compendios no indican ni prohíben las repeticio-
nes, las mediciones múltiples, el rechazo estadístico de valo-
res aberrantes o las extrapolaciones de los resultados a
poblaciones más grandesi _n! tampoco la. necesidad y fre-.
cuencia adecuada del analis1s de las partidas. La frecuenoa
del análisis y el mues!reo se de¡·a libre a las prefere,n_c~as o
instrucciones de aquellos que 1evan a cabo los anal1s1s P?ra
determinar el cumplimiento con las normas y a los ciernas
usuarios de USP-NF, incluidos fabricantes, compradores o
autoridades regluladoras.
Los productos oficiales se prepara~ d~ acuerdo c_on ~9s
principios reconocidos de buenas practicas de fabncaoon y
a partir de ingredient~s que cumplan con_ las n?rmas _de USP
o NF, siempre que existan normas para dichos 1ngred1entes
(para suplementos dietéticos, ver la secci?n 3._l 0._2~).
Las sustancias oficiales se elaboran segun pnnc1p1os reco-
nocidos de buenas prácticas de fabricación con ingredientes
que cumplen con las especificaciones establecidas para ase-
USP 37
gurar que las sustancias resultantes cumplan con los requisi-
tos de las monografías oficiales.
3.10.1 O. Aplicabilidad de las Normas a Productos
Farmacéuticos, Fármacos y Excipientes
Las normas correspondientes de los compendios USP o NF
se aplican a cualquier artículo comercializado en los Estados
Unidos que (1) se reconozca en el compendio y (2) que se
destine o etiquete para su uso como medicamento o como
ingrediente de un medicamento. •Dichos artículos (pro~uc­
tos farmacéuticos, fármacos y excipientes) incluyen medica-
mentos para humanos (ya sea dispensados con receta, "de
venta libre" o de otro tipo), así como medicamen~os para.
animales. 4 u5p37 Las normas correspondientes se aplican a di-
chos artículos, independientemente de que se agr~gue o no
la denominación "USP" o "NF". Las normas se aplican por
igual a los artículos con títulos oficiales o nombres deriv,ados
por transposiciones de las palabras que componen los titulas
oficiales, o por transposicion en el orden de los nombres de
dos o más ingredientes activos en los títulos oficiales, o
cuando se usen sinónimos con la intención o efecto de su-
gerir un grado significativo de identidad con el título o
nombre oficial.
3.10.20. Aplicabilidad de las Normas a Dispositivos
Médicos, Suplementos Dietéticos y a sus Componentes e
Ingredientes .
Un artículo reconocido en la USP o el NF debe cumplir
con las normas farmacopeicas si el artículo_ es u_n_ dispo,si~ivo
médico, componente destinado para un d1spos1t1vo_ medico,
suplemento dietético, ingrediente dietético, u otro ingre-
diente destinado para su incorporación en un s~pl~mento
dietético, y si declara en su etiquetado el cumplimiento con
los compendios USP o NF. , . .
En general, los suplementos dietet1cos se elaboran con_ in-
gredientes que cumplen con las normas de los compendios
USP NF o Food Chemicals Codex. Cuando no existen tales
norfnas: las sustancias pueden usarse en suplemen~os di~t.é­
ticos siempre que hayar:i. mostrado ser de gr~d<;> alimenticio
de calidad aceptable utilizando otros proced1m1entos
adecuados.
3.20. Indicación de Cumplimiento
Un producto farmacéutico, fármaco o excipien,te pue9~
usar la denominación "USP" o "NF" junto a su titulo of1c1al
o en otra parte de la etiqueta únicamente cuando: (1) exi~te
una monografía en el compendio especificado y (2) el a_rt1-
culo cumpTe con la identidad estipulada en el compendio
co~~~~~ , . ,
Cuando se determina que un producto farmaceutic~, far-
maco o excipiente di~iere de las normas LfSP o NF pertinen-
tes de contenido, calidad, o pureza al aplicar las pruebas,
procedimientos y criterios de acepta~ión es_tablecidos_ en. el
compendio correspondiente, estas d1ferenc1as deben indi-
carse de forma clara en la etiqueta.
Cuando un producto farmacéutico, fármaco o excipi~nte
no cumple con la identidad estipulada en los compendios
USP o NF o se le ha agregado una sustancia que interfiere
con las pruebas y pr~ced1mientos establecid?s! se le debe
asignar un nombre d1ferent_e y totalmente d1st1r:ito de cual-
quier otro nombre reconocido en los compendios USP o NF.
Un dispositivo médico, suplemento dietético o ingredi~nte
o componente de un dispositivo médico o suplemento die-
tético puede usar la denominación ''.USP" o ,"".'JF" junto a su
título oficial o en otra parte de la, etiqueta, urncam_ente .
cuando: (1) existe una monograf1a en el compendio espeo-
ficado y (2) el artículo cumple con las normas de_ la mono-
grafía y demás normas aplicables en el compendio
correspondiente.
La denominación "USP" o "NF" en la etiqueta de un artí-
culo no debe ni puede interpretarse como un aval por p~rte
de la USP ni tampoco debe interpretarse c,omo una confir-
mación por parte de la USP de que tal articulo c~~¡:>le con
las normas pertinentes de la USP. La USP puede 1rnoar una
acción lega si se declara o presenta u~ articulo como ~n
artículo oficial en uno de los compendios de la USP y esta
determina que tal aseveración no fue hecha de buena fe.
USP 37
La denominación "USP-NF" puede usarse en la etiqueta
de un artículo, siempre que dicha etiqueta también lleve
una frase tal como "Cumple con las normas NF publicadas
por la USP", indicando el compendio particular que corres-
ponde aplicar.
Cuando se usan las siglas "USP " "NF " o "USP-NF" en la
etiqueta de un artículo para indic ar que' el artículo cumple
1
con las normas farmacopeicas, las siglas deben aparecer
junto al título oficial del artículo. Las siglas no deberán apa-
recer dentro de símbolos, como por ejemplo círculos, cua-
drados etc., y deberán estar en letras mayúsculas.
Si un suplemento dietético no cumple con todos los re-
quisitos farmacopeicos aplicables, pero contiene uno o más
ingredientes dietéticos u otros ingredientes reconocidos en
los compendios USP o NF, se puede indicar que tales ingre-
dientes individuales cumplen con las normas USP o NF o
que son de calidad USP o NF siempre y cuando la denomi-
nación se limite a los ingredientes individuales y no se insi-
núe que el suplemento dietético cumple con las normas en
USP.
Cambio en la redacción:
4. MONOGRAFÍAS Y CAPÍTULOS GENERALES
4.1 O. Monografías
Las monografías establecen el nombre, definición, especi-
ficaciones y demás requisitos relacionados con el envasado,
almacenamiento y etiquetado del artículo. Las especificacio-
nes consisten en pruebas, procedimientos y criterios de
aceptación que ayudan a asegurar la identidad, contenido,
calidad y pureza del artículo. Para los requisitos generales
relacionados con secciones específicas de la monografía, ver
la sección 5, Componentes de las Monografías.
Debido a que, en ocasiones, las monografías no propor-
cionan normas para todas las características relevantes, algu-
nas sustancias oficiales pueden ajustarse a las normas USP o
NF, pero diferir en lo que respecta a propiedades no norma-
lizadas que son relevantes para su uso en preparaciones es-
pecíficas. Para asegurar la intercambiabilidad en esos casos,
se recomienda a los usuarios comprobar la equivalencia fun-
cional o determinar tales caractensticas antes de su uso.
4.10.1 O. Aplicabilidad de los Procedimientos de Prueba
Una sola monografía puede incluir distintas pruebas, pro-
cedimientos y/o criterios de aceptación que reflejen atribu-
tos de diversos artículos del fabricante. Tales alternativas
pueden presentarse para distintos casos de formas polimórfi-
cas, impurezas, hidratos y disoluciones. Las monografías in-
dican las pruebas, procedimientos y/o criterios de acepta-
ción que se deben usar, así como el etiquetado requerido.
Una prueba en una monografía puede contener y requerir
procedimientos múltiples. Sin embargo, se pueden incluir
múltiples procedimientos en monografías particulares especí-
ficamente con el objetivo de asegurar la disponibilidad de
un procedimiento adecuado para un producto en particular.
En dichos casos, se incluirá en la monografía una declara-
ción de etiquetado que indique la aplicación adecuada de
los procedimientos. No se requiere una declaración en el
etiquetado si se usa la Prueba 1 .
•4.10.11. Pruebas de Disolución, Desintegración y
Liberación de Fármacos
La monografía puede incluir múltiples pruebas de Disolu-
ción, Desintegración o Liberación de Fármacos. El orden en
el que se presentan estas pruebas en la monografía se basa
en el orden en el que fueran aprobadas por el Comité de
Expertos pertinente para su inclusión en la monografía. ~a
Prueba 1 no es necesariamente la prueba para el producto
innovador o para el producto de referencia. El cumplimiento
con alguna de las pruebas no garantiza la bioequivalencia ni
la biodisponibilidad .... usm
4. 10.20. Criterios de Aceptación
Los criterios de aceptación consideran errores analíticos y
variaciones inevitables durante la fabricación y preparación
magistral, así como el deterioro hasta un grado considerado
Advertencias Generales xv
aceptable en condiciones prácticas. La existencia de criterios
de aceptación farmacopeicos no constituye razón para ase-
verar que una sustancia oficial cuya pureza se aproxima al
100 por ciento "excede" la calidad farmacopeica. De igual
manera, el hecho de que un artículo se haya preparado
usando criterios más estrictos que los especificados en la
monografía no constitu,ye una razón válida para aseverar
que el artículo "excede' los requisitos farmacopeicos.
Un producto oficial debe formularse con la intención de
suministrar el 100 por ciento de la cantidad de cada ingre-
diente declarado en la etiqueta. Cuando debido a requisitos
legales aplicables, se requiera que la cantidad mínima de
una sustancia presente en un suplemento dietético sea ma-
yor que el criterio de aceptación inferior permitido por la
monografía, el criterio de aceptación superior de la mono-
grafía puede incrementarse en una cantidad
correspondiente.
Los criterios de aceptación especificados en las monogra-
fías individuales y en los capítulos generales para preparacio-
nes magistrales se basan en los atributos de calidad que se
espera podrían caracterizar un artículo preparado magistral-
mente a partir de fármacos e ingredientes a granel de
acuerdo con los procedimientos establecidos o con los prin-
cipios reconocidos de buenas prácticas de preparación ma-
gistral descritos en estos compendios.
4.20. Capítulos Generales
A cada capítulo general se le asigna un número que apa-
rece entre paréntesis angulares junto al título (p.ej.: Croma-
tografía (621 )). Los capítulos generales pueden contener lo
siguiente:
• Descripciones de pruebas y procedimientos para su apli-
cación en monografías individuales,
• Descripciones y especificaciones de condiciones y prác-
ticas de preparacion magistral,
• Información general para la interpretación de requisitos
farmacopeicos,
• Descripciones de prácticas generales de almacena-
miento farmacéutico, dispensación y envasado, o
• Guías generales para fabricantes de sustancias oficiales o
productos oficiales.
Cuando una monografía hace referencia a un capítulo ge-
neral, los criterios de aceptación pueden presentarse des-
pués de dos puntos.
Algunos capítulos pueden servir como descripciones gene-
rales introductorias de una prueba o técnicas analíticas. Ade-
más, pueden hacer referencia a otros capítulos generales
que contengan técnicas, detalles de los procedimientos y,
en ocasiones, criterios de aceptación.
Cambio en la redacción:
5. COMPONENTES DE LAS MONOGRAFÍAS
5. 1O. Fórmulas Moleculares
Las fórmulas moleculares de los ingredientes activos que
se usan en la definición del contenido requerido de un artí-
culo farmacopeico tienen por objeto designar las entidades
químicas, tal como aparecen en el nombre químico com-
pleto del artículo, con una pureza absoluta (100 por ciento).
5.20. Sustancias Agregadas
Las sustancias agregadas se presumen inadecuadas para
su inclusión en un artículo oficial y por lo tanto quedan
prohibidas siempre que: (1) excedan la cantidad mínima re-
querida para lograr el efecto deseado; (2) su presencia
afecte la biodisponibilidad, la eficacia terapéutica o la seguri-
dad del artículo oficial; o (3) interfieran con las pruebas o
valoraciones prescritas para determinar el cumplimiento de
las normas farmacopeicas.
El aire contenido en el envase de un artículo oficial puede
extraerse o reemplazarse por dióxido de carbono, helio, ar-
gón o nitrógeno, o una mezcla de estos gases, siempre que
sea apropiado. No es necesario declarar en el etiquetado el
uso de alguno de dichos gases.
xvi Advertencias Generales
5.20.10. Sustancias Agregadas, Excipientes e Ingredientes
en Sustancias Oficiales
Las sustancias oficiales pueden contener únicamente las
sustancias agregadas específicas permitidas por la monogra-
fía individual. Si se permite tal adición, la etiqueta debe indi-
car los nombres y las cantidades de las sustancias
agregadas.
5.20.20. Sustancias Agregadas, Excipientes e Ingredientes
en Productos Oficiales
A menos que se especifique algo diferente en la monogra-
fía individual, pueden agregarse sustancias y excipientes
adecuados tales como agentes antimicrobianos, bases far-
macéuticas, transportadores, recubrimientos, saborizantes,
conservantes, estabilizantes y vehículos a un producto oficial
para mejorar su estabilidad, utilidad o apariencia, o para fa-
cilitar su preparación.
Se pueden emplear excipientes y sustancias agregadas ex-
clusivamente para impartir color a los productos oficiales,
excepto para aquéllos destinados a la administración paren-
teral u oftálmica, siempre que cumplan con las reglamenta-
ciones de la FDA para el uso de colorantes y que sean ade-
cuadas en todos los otros aspectos. (Ver también Sustancias
Agregadas en Inyectables (1 )).
En la preparación de ungüentos y supositorios, se pueden
variar las proporciones de las sustancias que constituyen la
base para mantener la consistencia adecuada en diferentes
condiciones climáticas, siempre que no se varíe la concen-
tración de los ingredientes activos y que no se afecte la
biodisponibilidad, la eficacia terapeutica o la seguridad de la
preparación.
5.20.20.1. En Preparaciones Magistrales
Las preparaciones magistrales para las que se proporciona
una composición completa deben contener únicamente los
ingredientes indicados en las fórmulas, a menos que se ex-
ceptúe específicamente en este documento o en la mono-
grafía individual. Se pueden presentar desviaciones en los
procesos especificados o en los métodos de preparación ma-
gistral, pero no en sus ingredientes o proporciones, siempre
que la preparación final cumpla con las normas pertinentes
y se prepare siguiendo el proceso especificado.
Cuando la monografía de una preparación magistral exige
una cantidad de un ingrediente expresada con respecto a la
sustancia seca, no es necesario secar el ingrediente antes de
utilizarlo, siempre que se tome debida cuenta del agua u
otras sustancias volátiles presentes en la cantidad utilizada.
Existen formulaciones de alcohol especialmente desnatura-
lizado que se usan de acuerdo con los estatutos y reglamen-
taciones federales de la Interna! Revenue Service, (IRS, por
sus siglas en inglés, Oficina de Recaudación de Impuestos
del Gobierno de los Estados Unidos). Una formulación apro-
piada de alcohol especialmente desnaturalizado puede susti-
tuir al Alcohol en la fabricación de preparaciones farmaco-
peicas destinadas para uso interno o para uso tópico,
siempre que el desnaturalizante sea volátil y no quede en el
producto terminado. Un producto terminado destinado a
aplicación tópica sobre la piel puede contener alcohol espe-
cialmente desnaturalizado, siempre que el desnaturalizante
sea un ingrediente normal en la preparación o una sustancia
agregada permitida; en ambos casos, el desnaturalizante se
debe identificar en la etiqueta de la preparación tópica.
Cuando se indique un proceso en la monografía individual,
toda preparación elaborada magistralmente con alcohol des-
naturalizado debe ser idéntica a la que se obtiene mediante
el proceso indicado.
5.20.20.2. En Suplementos Dietéticos
Pueden agregarse ingredientes adicionales a los productos
de suplementos dietéticos siempre que tales ingredientes:
(1) cumplan con los requisitos reglamentarios aplicables y
(2) no interfieran con las valoraciones y las pruebas prescri-
tas para determinar el cumplimiento de las normas
farmacopeicas.
USP 37
5.30. Descripción y Solubilidad
Una prueba cuantitativa de solubilidad se considerará
como una prueba de pureza, únicamente cuando se des-
cribe y designa como tal en una monografía.
Una monografía puede incluir información relacionada
con la descripción del artículo. La información de "descrip-
ción y solubilidad" correspondiente a un artículo también
aparece en la tabla de referencia Descripción y Solubilidad
Relativa de Artículos de la USP y del NF. La tabla de referencia
indica sólo las propiedades de los artículos que cumplen con
las normas de la monografía. La tabla de referencia está
destinada principalmente para aquéllos que usan, elaboran y
dispensan fármacos y/o artículos relacionados. Aunque la in-
formación proporcionada en las monografías y la informa-
ción en la tabla de referencia puede ayudar indirectamente
a la evaluación preliminar de un artículo, dicha información
no constituye en sí misma una norma o prueba de pureza.
La solubilidad aproximada de una sustancia farmacopeica
se indica mediante uno de los siguientes términos
descriptivos:
Partes de Disolvente
Requeridas para
Término Descriptivo 1 Parte de Soluto
Muv soluble Menos de 1
Fácilmente soluble De 1a10
Soluble De 10 a 30
Moderadamente soluble De 30 a 100
Poco soluble De 100 a 1000
Muv poco soluble De 1000 a 1O 000
Prácticamente insoluble o Mayor que o igual a
Insoluble 10000
5.40. Identidad
La prueba farmacopeica bajo el título Identidad o Identifi-
cación se proporciona como una ayuda para verificar la
identidad de los artículos según se indica, p.ej., en la eti-
queta de sus envases, y para establecer si se trata del artí-
culo nombrado en USP-NF. La prueba de Identidad o Identi-
ficación para un artículo en particular puede comprender
uno o más procedimientos. Cuando se lleva a cabo una
prueba farmacopeica de Identidad o Identificación, se deben
cumplir todos los requisitos de todos los procedimientos es-
pecificados para satisfacer los requisitos de la prueba. El in-
cumplimiento de un artículo con los requisitos de una
prueba de Identidad o Identificación prescrita (es decir, que
no cumpla con los requisitos de todos los procedimientos
especificados que componen dicha prueba) indica que el
artículo está rotulado incorrectamente y/o adulterado.
5.50. Valoración
Las pruebas de valoración para preparaciones ma9istrales
no han sido concebidas para evaluar una preparacion ma-
gistral antes de su dispensación, sino como pruebas oficiales
para casos en los que exista duda o controversia acerca de
la conformidad de la preparación con las normas oficiales.
5.50.1 O. Unidades de Potencia (Biológica)
Para las sustancias que no pueden ser caracterizadas com-
pletamente por medios químicos y físicos, puede ser necesa-
rio expresar la actividad en unidades de potencia biológica,
definidas por un estándar de referencia designado como pa-
trón oficial.
Las unidades de potencia biológica definidas por la Orga-
nización Mundial de la Salud (OMS) mediante Estándares
Biológicos Internacionales y Preparaciones Biológicas Inter-
nacionales de Referencia se denominan Unidades Internacio-
nales (UI). Las monografías se refieren a las unidades defini-
das mediante Estándares de Referencia USP como "Unidades
USP". Para los productos biológicos, existan o no Unidades
Internacionales o Unidades USP (ver Productos Biológicos
(1041 )), las unidades de potencia se definen mediante los
correspondientes Estándares de los Estados Unidos (U.S.
Standards) establecidos por la FDA.
USP 37
5.60. Impurezas y Sustancias Extrañas
Las pruebas para determinar la presencia de sustancias ex-
trañas e impurezas se establecen para limitarlas a cantidades
que no sean objetables en las condiciones normales de em-
pleo del artículo (ver también "impurezas en Fármacos y Pro-
ductos Farmacéuticos (1086)).1>.usm
Además de las pruebas prescritas en la monografía indivi-
dual, se deben aplicar otras pruebas y criterios de acepta-
ción adecuados para detectar y controlar impurezas que pu-
dieran resultar de cambios en los métodos de
procesamiento o que provengan de fuentes externas,
cuando su presencia no concuerde con las buenas prácticas
de fabricación o las buenas prácticas farmacéuticas
aplicables.
5.60.10. Otras Impurezas en los Artículos de la USP y el
NF
Cuando una monografía de los compendios USP o NF in-
cluye una valoración o prueba de impurezas orgánicas cro-
matográfica, diferente de una prueba de disolventes resi-
duales, y el procedimiento de la monografía no detecta una
impureza presente en la sustancia, se deben expresar la can-
tidad e identidad de la impureza, si fueran ambas conoci-
das, bajo el encabezado Otra(s) lmpureza(s) en el etiquetado
(certificado de análisis) de la sustancia oficial.
La presencia en una sustancia oficial de cualquier impu-
reza no declarada en el etiquetado constituye una desvia-
ción de la norma si el contenido es de O, 1o/o o mayor. La
suma de las Otras Impurezas combinada con las impurezas
detectadas por los métodos de la monografía no puede ex-
ceder del 2,0% (ver Impurezas Comunes (466)), a menos
que en la monografía se indique algo diferente.
Las siguientes categorías de fármacos quedan excluidos de
los requisitos de Otras Impurezas:
• productos de fermentación y derivados semisintéticos
obtenidos a partir de ellos,
• radiofármacos,
• productos biológicos,
• productos obtenidos por biotecnología,
• péptidos,
• productos botánicos y
• productos crudos de origen animal o vegetal.
No debe incluirse ninguna sustancia conocida como tó-
xica en Otras Impurezas.
5.60.20. Disolventes Residuales en los Artículos de la USP
y el NF
Todos los artículos de los compendios USP y NF están su-
jetos al control pertinente de disolventes residuales, incluso
cuando la prueba no esté indicada en la monografía indivi-
dual. Los disolventes que se empleen durante los procesos
de fabricación deben ser de calidad adecuada. Asimismo, se
debe tomar en consideración la toxicidad y el nivel residual
de cada disolvente y limitar los disolventes conforme a los
principios definidos y los requisitos especificados en Disol-
ventes Residuales (467), según los métodos generales indica-
dos en dicho capítulo u otros métodos adecuados.
5.70. Pruebas de Desempeño
Cuando las determinaciones de uniformidad de contenido
se hayan efectuado usando la misma metodología analítica
especificada en la Valoración, tomando debida cuenta de las
diferencias en la preparación de la muestra, el promedio de
todas las determinaciones individuales de uniformidad de
contenido puede usarse como el resultado de la Valoración.
5.80. Estándares de Referencia USP
Los Estándares de Referencia USP son materiales auténti-
cos que han sido aprobados como adecuados para su uso
como estándares de comparación en las pruebas y valora-
ciones de la USP o el NF. (Ver Estándares de Referencia USP
(11 )). "Cuando una prueba o valoración de los compendios
USP o NF indique el uso de un Estándar de Referencia USP,
sólo se considerarán concluyentes los resultados obtenidos
usando el Estándar de Referencia USP especificado.1>.usm
Cuando un procedimiento exija el uso de un artículo oficial
y no de un Estándar de Referencia USP como material de
referencia, se debe utilizar una sustancia que satisfaga todos
Advertencias Generales xvii
los requerimientos indicados para dicho artículo en la mo-
nografía oficial. Si alguna norma nueva de la USP o del NF
requiere el uso de un Estándar de Referencia USP nuevo que
aún no esté disponible, dicha parte de la norma que con-
tiene el requisito no será oficial hasta que el material de
referencia USP especificado esté disponible.
Salvo que la etiqueta del estándar de referencia indique
una potencia o contenido específicos, se asume que el es-
tándar de referencia tiene una pureza del 100,0% para la
ªflicación oficial. A menos que se indique algo diferente en
e procedimiento de la monografía individuar o en un capí-
tulo general, los Estándares de Referencia USP deben usarse
de acuerdo con las instrucciones de sus etiquetas.
Cambio en la redacción:
6. PRÁCTICAS Y PROCEDIMIENTOS DE PRUEBA
6.1 O. Prácticas Seguras de Laboratorio
Al realizar procedimientos farmacopeicos, se deben seguir
prácticas seguras de laboratorio, las cuales incluyen medidas
precautorias, equipo de protección y prácticas de trabajo
acordes a las sustancias químicas y procedimientos usados.
Antes de realizar cualquier procedimiento descrito en los
compendios, el analista debería conocer los peligros asocia-
dos con las sustancias químicas y las técnicas y medios de
protección contra dichos riesgos. Estos compendios no tie-
nen como objetivo describir tales peligros o medidas de
protección.
6.20. Procedimientos Automatizados
Los procedimientos automatizados y manuales que em-
plean los mismos fundamentos químicos se consideran equi-
valentes.
6.30. Métodos y Procedimientos Alternativos y
Armonizados
Se pueden usar métodos y/o procedimientos alternativos
que proporcionen alguna ventaja en cuanto a exactitud,
sensibilidad, precisión, selectividad o adaptabilidad a la au-
tomatización o a la reducción de datos computarizados o en
otras circunstancias especiales. Dichos métodos y procedi-
mientos alternativos se deben validar según se describe en
el capítulo general Validación de Procedimientos Farmacopei-
cos (1225) y se debe demostrar que proporcionan resultados
equivalentes o mejores. Solamente aquellos resultados obte-
nidos por los métodos y procedimientos suministrados en
los compendios serán concluyentes.
Se recomienda remitir a la USP los procedimientos alter-
nativos para su evaluación como reemplazos potenciales o
para agre$larlos a las normas (ver la sección 4.1 O.
Monograf1as).
En ciertos capítulos generales se indica que el texto en
cuestión está armonizado con el texto correspondiente de la
Farmacopea Europea y/o la Farmacopea japonesa y que estos
textos son intercambiables. Por ello, si el cumplimiento de
un requisito de una sustancia o preparación fuera determi-
nado usando un método intercambiable de una de estas
farmacopeas, también debería cumplir los requisitos de la
USP. Sin embargo, si apareciera una diferencia, o en el caso
de controversia, sólo el resultado obtenido mediante el pro-
cedimiento y/o método dado en la USP será concluyente.
6.40. Con Respecto a la Sustancia Seca, Anhidra,
Incinerada o Exenta de Disolventes
A menos que se especifique algo diferente, todos los cál-
culos se efectúan con respecto a la sustancia "tal como se
encuentra".
Se pueden realizar los procedimientos de las pruebas so-
bre la sustancia sin secar o sin incinerar y calcular los resul-
tados con respecto a la sustancia seca, anhidra o incinerada
siempre que la monografía indique una prueba para Pérdida
por Secado, Determinación de Agua o Pérdida por Incineración,
respectivamente. Cuando la presencia de humedad u otro
material volátil puede interferir con el procedimiento, la mo-
nografía individual especifica que es necesario secar la sus-
tancia con anterioridad, paso que es obligatorio.
xviii Advertencias Generales
La expresión "exenta de disolventes" significa que se de-
ben corregir los cálculos por la presencia de disolventes co-
nocidos, según se determinan usando los métodos descritos
en Disolventes Residuales (467), a menos que la monografía
proporcione una prueba de límite de disolventes residuales.
La expresión "previamente secada(o)" sin otro calificativo
si9nifica que la sustancia se debe secar según se indica en
Perdida por Secado (731) o Determinación de Agua (921) (de-
terminación gravimétrica).
Cuando se indique secar al vacío sobre un desecante, se
debe utilizar un desecador al vacío, una pistola para secado
al vacío u otro instrumento apropiado para secado al vacío.
6.40.10. Incinerar hasta Peso Constante
"Incinerar hasta peso constante" significa que deberá con-
tinuarse la incineración a 800 ± 25º, a menos que se indique
algo diferente, hasta que dos pesadas consecutivas, la se-
gunda de las cuales se realiza después de un periodo adicio-
nal acorde con la naturaleza y cantidad del residuo, no difie-
ran en más de 0,50 mg por g de sustancia tomada.
6.40.20. Secado hasta Peso Constante
"Secado hasta peso constante" significa que deberá conti-
nuarse el secado hasta que dos pesadas consecutivas, la se-
gunda de las cuales se realiza después de un periodo adicio-
nal de secado acorde con la naturaleza y cantidad del
residuo, no difieran en más de 0,50 mg por g de sustancia
tomada.
6.50. Preparación de Soluciones
6.50.1 O. Filtración
Cuando en un procedimiento se indica "filtrar" sin otro
calificativo, el líquido se debe pasar a través de un papel de
filtro adecuado o dispositivo equivalente hasta que el fil-
trado sea transparente. Dados los posibles efectos del filtro,
se pueden desechar los volúmenes iniciales del filtrado.
6.50.20. Soluciones
A menos que se especifique de otro modo, todas las solu-
ciones deben prepararse con Agua Purificada. Las soluciones
para mediciones cuantitativas deben prepararse usando ana-
litos medidos o pesados con exactitud (ver la sección 8.20.
Aproximadamente).
Una expresión tal como "(l en 1O)" significa que 1 parte
en volumen de un líquido debe diluirse con "'.11.usp31 una canti-
dad suficiente de diluyente o disolvente para que el volu-
men de la solución final sea de 1O partes medidas en volu-
men. Expresiones similares a "(20:5:2)" significan que los
números respectivos de partes, medidas en volumen, de los
líquidos señalados deben mezclarse, a menos que se indique
algo diferente.
6.50.20.1. Ajuste de Soluciones
Cuando un procedimiento exige una concentración espe-
cífica, se puede usar una solución con otra normalidad o
molaridad, siempre que se tenga en cuenta la diferencia en
la concentración y no se aumente el error de la medición.
"'En las pruebas y valoraciones se pueden tomar cantida-
des proporcionalmente mayores o menores que los especifi-
cados de las sustancias a analizar y los correspondientes Es-
tándares de Referencia, siempre y cuando las mediciones
resulten con una exactitud equivalente o mejor..11.usP31
A menos que se indique algo diferente, las concentracio-
nes de analitos deben prepararse de modo que queden den-
tro del diez por ciento (10%) del valor indicado. En el caso
particular de que un procedimiento se adapte al intervalo
de trabajo de un instrumento, las concentraciones de las
soluciones pueden diferir del valor indicado en más de diez
por ciento (10%), realizando los cambios apropiados en los
cálculos asociados. Todo cambio realizado debe quedar den-
tro del intervalo validado del instrumento.
Cuando se indica el ajuste del pH mediante un ácido o
base y no se indica la concentración, se pueden usar con-
centraciones apropiadas de dicho ácido o base.
6.50.20.2. Soluciones Reactivo
La información acerca de las Soluciones Reactivo (SR) se
encuentra en el apartado Soluciones Reactivo en la sección
Reactivos, Indicadores y Soluciones de los compendios
USP 37
USP-NF. El uso de una Solución Reactivo alternativa o cam-
bios en la Solución Reactivo utilizada puede requerir de
validación.
6.50.20.3. Soluciones Indicadoras
Cuando se especifica el uso de una SR indicadora en un
procedimiento, se deben agregar aproximadamente 0,2 mL
ó 3 gotas de dicha solución, a menos que se indique algo
diferente.
6.60. Unidades Necesarias para Completar una Prueba
A menos que se especifique algo diferente, se debe tomar
un número suficiente de unidades para asegurar un resul-
tado analítico adecuado.
6.60.10. Tabletas
Cuando en el procedimiento de una monografía de Table-
tas se indica pesar y reducir a polvo fino no menos de un
cierto número de Tabletas, se entiende que se debe pesar y
reducir a polvo un número contado de Tabletas. La porción
tomada de Tabletas reducidas a polvo debe ser representa-
tiva del total de Tabletas y pesada con exactitud.
6.60.20. Cápsulas
Cuando en el procedimiento de una monografía de Cáp-
sulas se indique vaciar, tan completamente como sea posi-
ble, el contenido de no menos de cierto número de Cápsu-
las, se entiende que se debe abrir cuidadosamente un
número contado de Cápsulas y se debe retirar cuantitativa-
mente, combinar, mezclar y pesar con exactitud el conte-
nido de las mismas. La porción tomada del contenido de las
Cápsulas debe ser representativo del contenido total de las
Cápsulas y pesado con exactitud.
6.70. Reactivos
La ejecución adecuada de las pruebas y valoraciones far-
macopeicas y la confiabilidad de los resultados dependen,
en parte, de la calidad de los reactivos utilizados en estos
procedimientos. A menos que se especifique algo diferente,
se deben usar reactivos que cumplan con lo establecido en
las especificaciones de la edición vigente de Reagent Chemi-
cals publicada por la American Chemical Society (ACS).
Cuando tales especificaciones no existan o cuando por dis-
tintas razones la pureza requerida de un reactivo fuera dife-
rente, se suministran especificaciones farmacopeicas de reac-
tivos de calidad aceptable (ver la sección Reactivos,
Indicadores y Soluciones en USP-NF). Los reactivos no trata-
dos por ninguna de estas especificaciones deben ser de
grado adecuado para la realización del método de valora-
ción o prueba en cuestión.
La inclusión en los compendios de estos reactivos, indica-
dores y soluciones empleadas como reactivos, no implica
que tales sustancias tengan utilidad terapéutica. Cualquier
referencia a la USP o el NF en sus etiquetados debe incluir
también el término "reactivo" o "grado reactivo". La USP
puede proveer reactivos en caso de que no se encuentren
comercialmente disponibles.
6.80. Equipo
A menos que se indique algo diferente, la especificación
de un tamaño o tipo definido de recipiente o de aparato es
sólo una recomendación. Es posible usar otras dimensiones
o tipos siempre que sean adecuados para el uso pretendido.
6.80.1 O. Aparatos de Medición
Cuando se indique el uso de matraces volumétricos u
otros dispositivos para medir, pesar o clasificar en forma
exacta, se deben emplear estos equipos u otros que posean,
al menos, una exactitud equivalente.
6.80.10.1. Pipeta
Cuando se especifica el uso de una pipeta, ésta se puede
sustituir por una bureta adecuada. Cuando se indica el uso
de una pipeta calibrada "para contener", ésta se puede sus-
tituir por un matraz volumétrico adecuado.
6.80.10.2. Protección contra la Luz
Cuando se indique el uso de recipientes con protección
actínica o resistentes a la luz, se pueden utilizar recipientes
especialmente tratados para proteger el contenido contra la
luz, o recipientes transparentes que se hayan recubierto o
envuelto adecuadamente para volverlos opacos.
USP 37
6.80.20. Instrumentos
Es posible sustituir el instrumento especificado por otro
instrumento siempre que el instrumento sustituto se base en
los mismos principios fundamentales de operación y tenga
una sensibilidad y exactitud equivalente o mayor; tales ca-
racterísticas se deben calificar como apropiadas. Si se men-
cionara una marca o un proveedor de un material, un ins-
trumento o una pieza de equipo, o el nombre y la dirección
de un fabricante o distribuidor (por lo general pueden apa-
recer como notas al pie de página), esta información se
brinda sólo por conveniencia y no implica aprobación, aval
o certificacion.
6.80.20.1. Columnas y Tubos Cromatográficos
El término "diámetro" se refiere al diámetro interno (DI).
6.80.20.2. Otros Tipos de Tubos y Tuberías
El término "diámetro" se refiere al diámetro externo (DE).
6.80.20.3. Baño de Vapor
Cuando se indique ef uso de un baño de vapor, se usa
vapor vivo fluente u otra fuente de calor regulado a una
temperatura equivalente.
6.80.20.4. Baño de Agua
A menos que se especifique algo diferente, un baño de
agua requiere agua en ebullición vigorosa.
•6.80.30. Dispositivos de Medición de Temperatura
Los dispositivos de medición de temperatura adecuados
para las pruebas Farmacopeicas cumplen con especificacio-
nes que son rastreables a un estándar del NIST (Instituto
Nacional de Normas y Tecnología de los EE.UU.) o equiva-
lente. Los dispositivos de medición de temperatura pueden
ser del tipo hquido en vidrio o un tipo de indicador de
temperatura análogo o digital, tal como un dispositivo de
temperatura con resistencia, termistor o termopar. La estan-
darización de termómetros se lleva a cabo en una frecuencia
de análisis establecida con una temperatura estándar rastrea-
ble al NIST. Por ejemplo, se puede consultar la edición vi-
gente de las normas El de la ASTM para termómetros de
líquido en vidrio .... usm
7. RESULTADOS DE PRUEBAS
7 .1 O. Interpretación de los Requisitos
Los resultados analíticos observados en el laboratorio (o
los calculados a través de determinaciones experimentales)
se comparan con los criterios de aceptación especificados
para determinar si el artículo cumple con los requisitos
farmacopeicos.
El valor de informe, que por lo general se obtiene combi-
nando valores de varias determinaciones individuales, se
compara con los criterios de aceptación. El valor de informe
es el resultado final de un procedimiento completo de medi-
ción, según se ha documentado.
Cuando los criterios de aceptación se expresan de forma
numérica en estas Advertencias Generales mediante la espe-
cificación de un límite superior y/o inferior, los valores per-
mitidos incluyen a los valores especificados, pero no los va-
Ejemplos de Redondeo de Valores Numéricos
oara Comoaración con los Reauisitos
Reauisito Farmacooeico Valor Sin Redondear
Límite de valoración 298,0% 97,96%
97,92%
97 95%
Límite de valoración Sl 01,5% 101,55%
101,46%
101 45%
Prueba de límite S0,02% 0,025%
0,015%
0027%
Prueba de límite s3 ppm 3,5 ppm
3,4 ppm
2,5 ppm
Advertencias Generales xix
lores fuera del límite o límites. Los criterios de aceptación se
consideran significativos hasta el último dígito señalado.
7.10.5. Concentraciones Nominales en Ecuaciones
Cuando se especifica una "concentración nominal", calcu-
lar la concentración basándose en la cantidad declarada en
la etiqueta. En los procedimientos de valoración, la correc-
ción por contenido de agua típicamente se indica en la De-
finición y en la etiqueta del Estándar de Referencia USP. Para
otros procedimientos, la corrección por contenido y/o po-
tencia valorados se realiza antes de usar la concentracion en
la ecuación provista en la monografía.
7.10.10. Equivalencia en Procedimientos Volumétricos
Las instrucciones de los procedimientos volumétricos con-
cluyen con una declaración de equivalencia entre el peso
del analito y cada mL de solución volumétrica normalizada.
En tales equivalencias, se entenderá que el número de cifras
significativas en la concentración de la solución volumétrica
corresponde al del número de cifras significativas en el peso
del analito. Siempre que corresponda, se deben hacer co-
rrecciones en todas las valoraciones volumétricas basándose
en la determinación con un blanco (ver Volumetría (541 )).
7.20. Reglas para Redondeo
Los valores observados o calculados deben redondearse al
mismo número de decimales que el expresado para el lí-
mite. No deberá efectuarse el redondeo antes de concluir
los cálculos correspondientes para obtener el valor de in-
forme. Los cálculos intermedios (p.ej., la pendiente de la
curva de linealidad) pueden redondearse para propósitos de
informe, pero si se requiere realizar cálculos adicionales se
deben utilizar los valores originales sin redondear. Los crite-
rios de aceptación son números fijos y no se redondean.
Cuando se requiere redondear una cifra, se considera so-
lamente el dígito que se encuentra a la derecha del último
lugar decimal en la expresión del límite. Si este dígito es
menor de 5, se elimina sin cambiar el dígito que lo precede.
Si este dígito es igual o mayor a 5, se elimina y el d1gito
que lo precede se aumenta en 1.
Cambio en la redacción:
8. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
8.1 O. Abreviaturas
• ER corresponde a un Estándar de Referencia USP.
• SC corresponde a una Solución Calorimétrica.
• SR se refiere a una Solución Reactivo.
• SV corresponde a una Solución Volumétrica estandari-
zada de conformidad con las instrucciones provistas en
la monografía individual o en la sección Reactivos, Indi-
cadores y Soluciones de USP-NF.
8.20. Aproximadamente
El término "aproximadamente" indica una cantidad que
puede variar dentro del 10%.
Resultado Redondeado Cu mole
98,0% Sí
97,9% No
980% Sí
101,6% No
101,5% Sí
101 5% Sí
0,03% No
0,02% Sí
o 03% No
4 ppm No
3 ppm Sí
3 ppm Sí
xx Advertencias Generales
Si se especifica una medición como "medida con exacti-
tud" o "pesada con exactitud" se deben seguir las especifi-
caciones de los capítulos generales Aparatos Volumétricos
(31) y •Balanzas (41 )•usP37, respectivamente.
8.30. Contenido de Alcohol
Los porcentajes de alcohol, como los indicados en Conte-
nido de Alcohol, son porcentajes en volumen de C2H10H a
15,56º. Cuando se exige el uso de alcohol, alcohol etílico o
etanol en una fórmula, prueba o valoración, se debe usar el
artículo de la monograf1a Alcohol de la USP. Cuando se hace
referencia a "C2H,OH", significa etanol absoluto (1 00 por
ciento). Cuando un procedimiento exige alcohol deshidra-
tado, alcohol absoluto o alcohol anhidro, se debe usar el
artículo de la monografía Alcohol Deshidratado de la USP.
8.40. Pesos Atómicos
Los pesos atómicos usados para calcular pesos molecu-
lares y los factores en las valoraciones y en otras partes
donde éstos aparezcan, son los establecidos por la Commis-
sion on Atomic Weights and lsotopic Abundances de la IU-
PAC (Comisión de Pesos Atómicos y Abundancias Isotópicas
de la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada).
8.50. Determinaciones con Blancos
Cuando se indique realizar "cualguier corrección necesa-
ria" por medio de una determinacion con un blanco, tal
determinación debe efectuarse usando las mismas cantida-
des de los mismos reactivos tratados de la misma manera
que la solución o mezcla que contiene la porción de sustan-
cia en análisis, pero omitiendo dicha sustancia.
8.60. Concomitantemente
El término "concomitantemente" indica que las determi-
naciones o mediciones deben efectuarse en sucesión
inmediata.
8.70. Desecador
La instrucción "en un desecador" indica el uso de un reci-
piente cerrado herméticamente, de tamaño y diseño ade-
cuados, que mantiene una atmósfera de bajo contenido de
humedad mediante un desecante adecuado, por ejemplo,
cloruro de calcio anhidro, perclorato de magnesio, pentó-
xido de fósforo o gel de sílice. Ver también la seccion 8.220.
Desecador al Vacío.
8.80. Logaritmos
Los logaritmos empleados son logaritmos en base 1 O.
8.90. Cepas Microbianas
Cuando se cita e identifica una cepa microbiana por el
número de catálogo ATCC, la cepa específica debe em-
plearse directamente o, si se hacen cultivos sucesivos, no
deben usarse más de cinco pasajes a partir de la cepa
original.
8.1 OO. Inapreciable
El término "inapreciable" indica una cantidad que no ex-
cede de 0,50 mg.
8.110. No menos de (NLT) y No más de (NMT)
Las siglas en inglés "NLT" (not less than) significan y se
traducen como "no menos de". Las siglas en inglés "NMT"
(not more than) significan y se traducen como "no más
de".
8.120. Olor
Los términos "inodoro," "prácticamente inodoro," "con
un débil olor característico" y expresiones semejantes, indi-
can la evaluación de una cantidad adecuada de material re-
cientemente abierto después de la exposición al aire durante
15 minutos. La asignacion de un olor es sólo descriptiva y
no deberá considerarse como una norma de pureza para un
lote particular de un artículo.
8.130. Por ciento
La expresión "por ciento" usada sin otros calificativos
significa:
• Porcentaje peso en peso, para mezclas de sólidos y
semisólidos;
• Porcentaje peso en volumen, para soluciones o suspen-
siones de sólidos en líquidos;
USP 37
• Porcentaje volumen en volumen, para soluciones de lí-
quidos en líquidos; y
• Porcentaje peso en volumen, para soluciones de gases
en líquidos.
Por ejemplo, una solución al 1 por ciento se prepara disol-
viendo 1 g de un sólido o semisólido, o 1 mL de un líquido,
en disolvente suficiente para obtener 100 mL de solución.
8.140. Concentaciones Porcentuales
Las concentraciones porcentuales se expresan según se in-
dica a continuación:
• Porcentaje Peso en Peso (p/p) se define como el número
de g de un soluto en 100 g de solución.
• Porcentaje Peso en Volumen (p/v) se define como el nú-
mero de g de un soluto en 1 00 mL de solución.
• Porcentaje Volumen en Volumen (v/v) se define como el
número de mL de un soluto en 100 mL de solución.
8.150. Presión
La presión se determina usando un manómetro o baró-
metro adecuado, calibrado en términos de la presión ejer-
cida por una columna de mercurio de la altura indicada.
8.160. Tiempo de Reacción
El tiempo de reacción es de 5 minutos a menos que se
especifique algo diferente.
8.170. Peso Específico
El Peso específico es el peso de una sustancia en aire a
25º dividido por el peso de un volumen igual de agua a la
misma temperatura.
8.180. Temperaturas
A menos que se indique algo diferente, las temperaturas
se expresan en grados centígrados (Celsius) y todas las me-
diciones se hacen a 25º. Cuando se especifica calor mode-
rado, se indica toda temperatura no mayor de 45º (113º F).
8.190. Tiempo
A menos que se especifique algo diferente, las reglas para
redondeo, según se describen en la sección 7.20. Reglas
para Redondeo, se aplican a todos los tiempos especificados.
8.200. Transferir
El término "transferir" indica una manipulación
cuantitativa.
8.21 O. Vacío
El término "al vacío" especifica la exposición a una pre-
sión menor de 20 mm de mercurio (2,67 kPas), a menos
que se indique algo diferente.
8.220. Desecador al Vacío
Un "desecador al vacío" es un desecador gue mantiene
una atmósfera de baja humedad a una presion reducida de
no más de 20 mm de mercurio (2,67 kPas) o a la presión
indicada en la monografía individual.
8.230. Agua
8.230.10. Agua como Ingrediente de un Producto Oficial
Cuando aparece como un ingrediente en un producto ofi-
cial, el agua cumple con los requisitos de la monografía de
agua adecuada en la USP o el NF.
8.230.20. Agua en la Fabricación de Sustancias Oficiales
En la fabricación de sustancias oficiales, se puede usar
agua que cumpla con los requisitos para agua potable
(drinking water) establecidos en las reglamentaciones de la
U.S. Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
ción Ambiental de Estados Unidos).
8.230.30. Agua en un Procedimiento Farmacopeico
Cuando se exige agua en un procedimiento farmaco-
peico, se entiende que debe emplearse el artículo Agua Puri-
ficada de la USP, a menos que se especifique algo diferente.
Las definiciones de Agua de Alta Pureza y Agua Exenta de
Dióxido de Carbono se encuentran en Envases-Vidrio (660).
Las definiciones de otros tipos de agua se encuentran en
Agua para Uso Farmacéutico (1231 ).
8.240. Pesos y Medidas
En general, se emplea el Sistema Internacional de Unida-
des (SI) para pesos y medidas, de acuerdo con lo estable-
cido y revisado por la Conférence générale des poids et mesu-
res (Conferencia General de Pesos y Medidas). A los fines de
usr 37 Advertencias Generales xxi

los compendios, el término "peso" se considera como sinó- Unidades Símbolo Comentarios
nimo de "masa". microlitro ul
La molalidad se representa por medio del símbolo m pre- Tempera-
cedido por un número que es el número de moles de soluto tura - -"--------- ----·
contenidos en 1 kilogramo de disolvente.
Celsius 'C
La molaridad se representa por medio del símbolo M pre-
cedido por un número que es el número de moles de soluto Cantidad
contenidos en una cantidad de disolvente suficiente para de Sus-
preparar 1 litro de solución. tancia
La normalidad se representa por medio del símbolo N Históricamente referido
precedido por un número que es el número de equivalentes como peso molecular
de soluto contenidos en una cantidad de disolvente sufi- en gramos o peso
ciente para preparar 1 litro de solución mol mol atómico en ararnos
Álistado de Símbolos y Prefijos comúnmente usados para milimol mmol
unidades métricas del SI y otras unidades: micromol umol
femtomol fmol
Unidades Símbolo Comentarios También referido corno
Lonaitud peso equivalente en
metro m gramos. Se usa en el
centímetro cm cálculo de concentra-
ción de sustancia en
milímetro mm
unidades de normali-
Anteriormente referido dad. Esta unidad ac-
micrómetro um como micrón tualmente ya no
Anteriormente se usaba representa la de uso
el símbolo mµ (para preferido en química
nanómetro nm milimicrón) eauivalente Ea analítica o metroloaía.
Ánastrom Á laual a O 1 nm mili-
Masa equivalen-
kiloaramo ka te mEa
a ramo a Presión osmótica de
miliaramo ma una solución, relacio-
nada con la concen-
El símbolo µg se usa en
tración de una
la USP y el NF para re-
osmol Osmol sustancia
presentar microgra-
rnos, pero los miliosmol müsmol
microgramos se pue- Presión
den representar como oascal Pa
"mcg" para propósi- kilooascal kPa
tos de etiquetado y libras por psi
prescripción. El térmi- pulgada
no "gamma", simboli· cuadrada
zado por la letra
milímetro Igual a 133,322 Pa
griega y, se usa con
de mer-
frecuencia para desig-
curio mm Ha
nar al micrograrno en
microgra- la literatura de bioquí- Unidades
mo ua mica. eléctricas
nanoaramo na amoerio A
oicoaramo DO voltio V
También referido como milivoltio mV
la unidad de masa hercio Hz Unidad de frecuencia
atómica unificada y es kilohercio kHz
igual a 1/12 veces la meaahercio MHz
masa de un átomo no electronvol-
enlazado de carbono- tío eV
dalton Da 12.
kiloelec-
kilodalton kDa tronvoltio keV
Tiemoo megaelec-
seaundo s tronvoltio MeV
minuto min Radiación
hora h Unidad del SI para la
Volumen actividad de radionu-
1 L es igual a 1000 becouerelio Ba cleidos
cm3 (centímetros cú- kilobecque-
litro L bicos). relio kBa
decilitro dl megabec-
1 ml es igual a 1 cm3, auerelio MBa
en ocasiones se deno- gigabec-
mililitro ml mina ce. auerelio GBn
xxii Advertencias Generales USP 37

--- -----
_Jl!!idades Símbolo Comentarios 10.40. Etiquetado
Unidad para la activi- El término "eUquetado_" se refiere a todas las etiquetas o
dad de radionucleidos marbetes y ciernas matenales escritos, impresos o gráficos
que no forma parte que aparezcan directamente sobre el envase primario de un
curio Ci del SI. a_rt1culo, sobre o_ dentro del empaque o envoltorio, secunda-
milicurio mCi rio, con excepc1on de los embalajes externos destinados
~------
para el transporte. El término "etiqueta" designa la parte del
microcurio nCi
etiquetado que se encuentra sobre el envase primario.
nanocurio nCi ~os embalajes para el transporte que contengan un solo
Otros articulo se etiquetan por lo menos con la identificación del
aceleración producto (excepto los artículos controlados), el número de
debida a Usada para expresar la lote, la fecha de caducidad y las condiciones de almacena-
la grave- velocidad de centrifu- miento y distribución, salvo que dicho envase sea también
dad n, aación. el envase primario o la parte exterior del empaque desti-
revolucio- Usada para expresar la nado al consumidor.
nes por velocidad de centrifu- Además de los requisitos de etiquetado establecidos en
minuto rom aación. es~os compendios, los artículos están sujetos al cumpli-
miento _de otras normas de etiquetado que puedan promul-
gar entidades gubernamentales.
Prefijos Seleccionados del SI 1O.~_ü.1 O. Cantidad de Ingrediente por Unidad de Dosifi-
cac1on
Nombre Símbolo Factor
El _contenido de un producto farmacéutico se expresa en
nioa G 109 la et1qu~~a del envase en términos de porcentaje, microgra-
meoa M 106 m_os,_ mi11gramos o gramos del fármaco, o de su parte tera-
kilo k 101 peut1camente activa, de acuerdo con la forma usada en el
deci d 10-1 título del artfculo,. ª·menos que se indique algo diferente en
centi c 10-2 la monograf1a ind1v1dual. En el etiquetado se indican los
nombres y cantidades equivalentes tanto del fármaco como
mili m 10 3
de su parte activa.
micro u 10-6 Los artículos oficiales en cápsulas, tabletas u otras unida-
nano n 10·9 des de dosificaci~'m deberán etiquetarse de forma tal que
oico o 10-12 exprese~ la cantidad de cada ingrediente activo o nutriente
femto f 10-15 reconocido c~nten1do en cad~ unidad; excepto cuando se
trate de soluciones o suspensiones orales envasadas en dosis
&USP37 ~ni~as, ya sea que ~stas s~ suministren como preparaciones
9. PRESCRIPCIÓN Y DISPENSACIÓN l19~1das o prepar~c.19nes liquidas reconstituidas a partir de
solidos, por la ad1c1on de un volumen dado de un diluyente
9.1 O Uso de Unidades Métricas
específico, cuyas etiquetas indicarán la cantidad de cada in-
Las prescripciones de artículos farmacopeicos se escribirán grediente activo o nutriente reconocido extraíble en las con-
usando unidades métricas para indicar la cantidad y/o con- diciones indicadas en Volumen de Entrega (698). Para los
tenido desea_dc;>s, 9 .menos que se i~_dique alg~ diferente en productos farma~~uti~?s oficiales que no se presentan en
la monograf1a ind1v1dual (ver tamb1en la seccion 5.50.1 O.
unidades de dos1f1cac1on se debe expresar en el etiquetado
Unid.ades de Potencia [Biológicaf). Si la prescripción de una
la cantidad de ingredien~e activo por mililitro o por gramo,
cantidad se hace en otro sistema de medidas, se debe dis-
pensar sólo u_na cantidad equivalente a la prescrita usando º·el porcentaje de cada ingrediente (ver 8.140. Concentra-
ciones Porcentuales), excepto en el caso de los líquidos ora-
el sistema metnco. No se deben usar unidades del sistema les, o los sólidos que se reconstituyan para producir líquidos
apotecario en el etiquetado. orales, que se pueden etiquetar alternativamente en térmi-
9.20 Cambios en Volumen no~ de la cantidad de ingrediente activo por 5 mL del lí-
. En la dispensación de medicaciones prescritas, pueden ob- q_u.1do o del p~eparado reconstituido. A menos que se espe-
v1ar~e los pegu~ños cambios de volumen que se producen c1f1qu_e algo _diferente en una monografía o en un capítulo,
debido a vanac1ones en la temperatura ambiente. tales 1nd1cac1ones de contenido o cantidad deberán decla-
rarse sólo en unidades métricas. Ver también 5.50.1 O. Uni-
dades de Potencia (Biológica).
Cambio en la redacción:
10.40.20. Uso de Ceros al Comienzo y al Final de una
10. CONSERVACIÓN, ENVASADO, ALMACENAMIENTO Y Cantidad
ETIQUETADO Con el fin de minimizar la posibilidad de errores en la
"'[NOTA-Se han omitido las disposiciones relacionadas dispensación y administración de medicamentos, cuando la
con el almac~namiento y envasado previamente tratadas en cantidad de ingrediente activo se exprese en números ente-
las Advertencias Generales, excepto la breve disposición pro- r<;>s, se de_be _indicar sin coma decimal seguida de ceros (por
puesta a continuación en el apartado 10.1 O; para compo- ei_emplo, indicar 4 mg [no 4,0 mg]). La cantidad de ingre-
nentes de envasado y condiciones de almacenamiento ver diente activo que sea un número decimal menor de 1 se
el nuevo capítulo general (659). De manera similar la; dis- escribirá con un cero antes de la coma decimal (por ejem-
posiciones relacionadas con el etiquetado también 'están plo: 0,2 mg [no ,2 mg]).
s!e;ido trasladadas a un nuevo capítulo general (7) y se omi- 10.40.30. Etiquetado de Sales de Fármacos
t1ran en un futuro.],,.usp31 Es un principio establecido que los artículos oficiales de-
10.1 O. "'Envasado y Almacenamiento ben tener un único título oficial. Con el objeto de ahorrar
Todos los artículos en los compendios USP o NF están espacio en las etiquetas, y dado que los símbolos químicos
su{etos a los requisjtos de envasado y almacenamiento espe- de las _sales inorgánicas más comunes son conocidos por los
cificados ~n el capitulo general Requisitos de Envasado y Al- profesionales de la salud como sinónimos de sus formas es-
r:iacenam1ento (659), a menos que se provean requisitos dis- critas, se p~rmiten l_as siguientes alternativas para el etique-
tintos en una monografía específica. 6 u1r 37 tado de articulas of1c1ales que son sales: HCI para clorhi-
drato; HBr pa;a bromhidrato; Na para sodio y K para
potasio. Los s1mbolos Na y K se usan para abreviar el nom-
bre de las sales de ácidos orgánicos; sin embargo, estos sím-
USP 37
bolos no deben usarse cuando se emplea la preposición
"de" en el título oficial, es decir cuando se denominan ofi-
cialmente "de sodio" o "de potasio" (con el metal al co-
mienzo de la denominación oficial en inglés), (p.ej., Feno-
barbital Sódico, que se denomina Phenobarbital Sodium en
inglés, se puede abreviar a Fenobarbital Na, pero no se de-
berá escribir Salicilato de Na para abreviar Salicilato de So-
dio, el cual se denomina Sodium Salicylate en inglés).
10.40.40. Etiquetado de los Productos con Vitaminas
La etiqueta de los productos farmacéuticos oficiales debe
indicar su contenido de vitaminas expresado en unidades
métricas por unidad de dosificación. Los contenidos de vita-
mina A, D y E también se pueden expresar en Unidades
USP. Las cantidades de vitamina A expresadas en unidades
métricas hacen referencia a las cantidades equivalentes de
retinol (alcohol de vitamina A). La etiqueta de los suplemen-
tos nutricionales debe incluir un número identificatorio de
lote, de control o de partida.
10.40.50. Etiquetado de los Productos Botánicos
La etiqueta de una hierba u otro producto botánico desti-
nado para uso como suplemento dietético contiene la le-
yenda "Si está embarazada o en período de lactancia, con-
sulte a un profesional de la salud antes de usar este
producto".
10.40.60. Etiquetado de Preparaciones Parenterales y
Tópicas
La etiqueta de una preparación para uso parenteral o tó-
pico debe especificar el nombre de todas las sustancias
agregadas (ver 5.20. Sustancias Agregadas y ver Etiquetado
en Inyectables (1 )) y, en caso de preparaciones para uso pa-
renteral, también debe especificar sus cantidades o propor-
ciones, excepto en el caso de sustancias agregadas sólo para
ajustar el pH o para lograr isotonicidad, para las cuales
puede mencionarse simplemente su presencia y la razón por
la cual se agregan.
10.40.70. Etiquetado de Electrólitos
La concentración y dosificación de electrólitos para tera-
pias de reemplazo (p.ej., cloruro de sodio o cloruro de pota-
sio), debe especificarse en la etiqueta en miliequivalentes
(mEq). Asimismo, la etiqueta del producto debe indicar la
cantidad del ingrediente o ingredientes, expresada en térmi-
nos de peso o concentración porcentual.
10.40.80. Etiquetado de Alcohol
El contenido de alcohol en una preparación líquida debe
especificarse en la etiqueta como porcentaje (v/v) de
C2HsOH.
10.40.90. Cápsulas y Tabletas Especiales
La etiqueta de cualquier Cápsula o Tableta destinada para
una administración que no sea la ingestión oral de la unidad
entera, debe llevar una indicación bien visible sobre el modo
de uso.
10.40.1 OO. Fecha de Caducidad y Fecha Límite de Uso
(N. del T. Las expresiones "fecha de caducidad", "fecha
de expiración" y "fecha de vencimiento" son equivalentes.)
La etiqueta de un producto farmacéutico oficial, o de un
suplemento nutricional o dietético oficial, debe llevar una
fecha de caducidad. Todos los productos deben exhibir la
fecha de caducidad de manera tal que pueda ser leída por
una persona común en las condiciones normales de compra
y uso. La fecha de caducidad debe aparecer en forma pro-
minente, contrastando claramente con el fondo, o grabada
en relieve con nitidez, y debe ser fácilmente comprendida
(p.ej., "EXP 6/08," "Exp. junio de 2008", o "Caduca el 6/
08"). [NOTA-Para obtener información adicional, consultar
los Voluntary Codes and Guidelines of the Self-Medication ln-
dustry de la Consumer Healthcare Products Association.]
Las monografías para ciertas preparaciones especifican
cómo se debe determinar la fecha de caducidad que apa-
rece en la etiqueta. En ausencia de un requisito específico
en las monografías individuales de un producto farmacéu-
tico o un suplemento nutricional, la etiqueta debe llevar una
fecha de caducidad asignada para dicha formulación y em-
paque en particular del artículo, con la siguiente excepción:
Advertencias Generales xxiii
no es necesario exhibir la fecha de caducidad en el caso de
productos farmacéuticos o suplementos nutricionales enva-
sados en envases destinados a la venta sin receta médica, en
cuyo etiquetado no se establezcan limitaciones de dosifica-
cion y que se mantengan estables durante un período de no
menos de 3 años, siempre que se almacenen en las condi-
ciones prescritas.
En el caso de artículos oficiales que deban exhibir una
fecha de caducidad, tales artículos deben dispensarse en un
envase, o a partir de un envase, etiguetado con fecha de
caducidad, y la fecha de dispensacion del producto debe ser
anterior a la fecha de caducidad declarada. La fecha de ca-
ducidad identifica el período durante el cual se estima que
el artículo cumple con los requisitos de la monografía oficial,
siempre que se conserve en las condiciones de almacena-
miento prescritas. La fecha de caducidad limita el tiempo
durante el cual un artículo puede ser dispensado o usado.
En los casos en que se indica sólo el mes y el año de caduci-
dad, se entiende que la fecha se refiere al último día del
mes indicado. La fecha límite de uso es la fecha después de
la cual no se debe utilizar un artículo. Basándose en la infor-
mación provista por el fabricante y las Advertencias Genera-
les, el dispensador debe colocar una fecha límite de uso
adecuada en la etiqueta del envase del artículo recetado
para limitar el uso del mismo por parte del paciente. La
fecha límite de uso colocada en la etiqueta no debe ser
posterior a la fecha de caducidad del envase del fabricante.
Para los artículos que requieran ser reconstituidos antes de
su uso, se debe colocar en el etiquetado una fecha límite de
uso apropiada para el producto reconstituido.
Para todas las otras formas farmacéuticas en las que se
deba determinar el período posterior a la dispensación du-
rante el cual es prudente que un paciente conserve un me-
dicamento prescrito, el dispensador debe tener en conside-
ración, además de cualquier otro factor relevante: la
naturaleza del medicamento; el envase en el que fue enva-
sado por el fabricante y su fecha de caducidad; las caracte-
rísticas del envase para el paciente, si el artículo se reenvasa
para su dispensacion; las condiciones de almacenamiento
esperadas o inusuales a las que el artículo puede ser ex-
puesto y el período estimado para la duración del trata-
miento. Considerando todo lo anterior, el dispensador debe
colocar en la etiqueta de un envase de unidades múltiples
una fecha límite de uso adecuada, a fin de limitar la utiliza-
ción del artículo por parte del paciente. A menos que se
especifique algo diferente en la monografía individual, o en
ausencia de datos de estabilidad, esa fecha límite de uso no
podrá ser posterior a: (a) la fecha de caducidad indicada en
el envase del fabricante, o (b) un año a partir del momento
en que se dispense el medicamento, lo que represente un
período menor. Para formas farmacéuticas líquidas y sólidas
no estériles que están envasadas en envases unitarios y de
dosis única, la fecha límite de uso debe ser de 1 año a partir
de la fecha de envasado del medicamento en envases unita-
rios o de dosis única, o la fecha de caducidad indicada en el
envase del fabricante, lo que represente un período menor,
a menos que los datos de estabilidad o el etiquetado del
fabricante indiquen algo diferente.
El dispensador debe mantener las instalaciones donde se
envasan y almacenan las formas farmacéuticas a una tempe-
ratura cinética media no mayor de 25º. El material de plas-
tico usado para envasar debe brindar una mejor protección
que la que ofrece el cloruro de polivinilo, que no brinda una
adecuada protección contra la permeación de la humedad.
Se deben guardar registros de la temperatura del lugar
donde se almacenan las formas farmacéuticas y de los mate-
riales plásticos usados en el envasado.
10.40.100.1. Preparaciones Magistrales
La etiqueta del envase o empaque que contiene una pre-
paración magistral oficial debe llevar una fecha límite de
uso. La fecha límite de uso es la fecha después de la cual no
debe usarse la preparación magistral. Debido a que las pre-
paraciones magistrales están destinadas a administrarse in-
mediatamente o luego de un período de almacenamiento
xxiv Advertencias Generales
corto, las fechas límite de uso pueden determinarse basán-
dose en criterios distintos a los utilizados para determinar las
fechas de caducidad de los productos farmacéuticos fabrica-
dos en forma industrial.
La monografía de una preparación magistral oficial in-
cluye, por lo general, un requisito de límite de uso que es-
pecifica el período desde la fecha de preparación durante el
cual, en condiciones de almacenamiento adecuadas, se
puede usar la preparación. En caso de que no haya datos de
estabilidad aplicables a un fármaco y preparación específi-
USP 37
cos, se han desarrollado recomendaciones de fecha límite de
uso máxima para preparaciones magistrales no estériles en-
vasadas en envases impermeables y resistentes a la luz, al-
macenadas a temperatura ambiente controlada, a menos
que se especifique algo diferente (ver Criterios de Estabilidad
y Determinación de la Fecha Límite de Uso en Estabilidad de
Preparaciones Magistrales en el capítulo de pruebas generales
Preparación Magistral-Preparaciones No Estériles (795)).
"'.11.U5P37
USP 37
Suplementos Dietéticos
Agregar lo siguiente:
•N-Acetllglucosamlna
CsH1sN06
2-(Acetylamino)-2-deoxy-o-glucose;
N-Acetil-D-glucosamina [7512-17-6).
DEFINICIÓN
La N-Acetilglucosamina contiene no menos de 98,0% y no
más de rQ2,0% de N-acetilglucosamina (CaH1sNO.,), cal-
culado con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICA9ÓN . Muestras: Solución estándar y Solución muestra
• A. AISORCION EN EL INFRARROJO (197K)
• B. .Cumple con los requisitos de la prueba de Rotación
Óptica, Rotación Específica (781 S).
• C. El tiempo de retención del pico principal de la Solu·
ción muestra corresponde. al de la Soluc:;ión estándar, se-
gún se obtienen en la Valoración.
VALORACIÓN
• PRoCEDIMIENTO
Solución amorti9uadora: Transferir 315 g de fosfato di-
básico de potasio a un matraz volumétrico de 1 L y
agre9ar suficiente agua para disolver. Agregar 0,25 ml
de hidróxido de amonio, diluir con agua a volumen y
mezclar. Ajustar con ácido fosfórico a un pH de 7,5.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solución de aptitud deí sistema: 1,0 mg/ml de ER N-
Acetilglucosamina USP y 0,6 mg/ml de ER Clorhidrato
de Glucosamina USP en Diluyente
Solución estándar: 1,0 mg/ml de ER N-Acetilglucosa-
mina USP en Diluyente
Solución muestra: 1,0 mg/mL de N-Acetilglucosamina
en Diluyente
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Suplementos Dietéticos/ N-Acetilglucosamina 5817
Monografías Oficiales
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del Sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Sofución
estándar
[NOTA-los tiempos de retención relativos para N-acetil-
glucosamina y glucosamina son 1,0 y aproximada-
mente 2,8, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Relación señal-ruido: No menos de 1Opara el pico
221,21 de glucosamina, Solución de aptitud del sistema
Resolución: No menos de 5,0 entre los picos de N-
acetilglucosamina y glucosamina, Solucion de aptitud
del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Calcular el porcentaje de N-acetilglucosamina
(CsH1sN06) en la porción de N-Acetilglucosamina
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentracíón de ER N-Acetilglucosamína USP
en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración de N-Acetilglucosamina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 98,0%-102,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN {281): No más de 0,1%
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221): No más de 0,1%
• IMPUREZAS ELEMENTALEs-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1 µg/g
Plomo: No más de 1O µg/g
• COMPUESTOS RELACIONADOS
Solución amortiguadora, Fase móvil, Diluyente, Solu-
ción de aptitud del sistema, Sistema cromatográfico
y Aptitud del sistema: Proceder según se indica en la
Valoración.
Solución muestra: 2,5 mg/ml de N-Acetilglucosamina
en Diluyente
 5818 N-Acetilglucosamina /Suplementos Dietéticos USP 37

Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porción N-Acetiltirosina
de N-Acetilglucosamina tomada:
o
Resultado= (ru/rr) x 100 ~.~. il
rí '!
,.-/-...... 0..--'
Í
HN
OH
CH,
ru = respuesta del pico de cada impureza de la HO ~ '['.'

Solución muestra
rr = suma de las respuestas de los picos de la
Solución muestra
Criterios de aceptación
Impureza individual: No más de 0,5%
, Impurezas totales: No más de 2,0%
• LIMITE DE GLUCOSAMINA
Solución amortiguadora, Fase móvil, Diluyente, Solu-
ción de aptitud del sistema, Sistema cromatográfico
y Aptitud del sistema: Proceder según se indica en la
Valoración.
Solución estándar: 0,6 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente
Solución muestra: 50 mg/ml de N-Acetilglucosamina
en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de glucosamina en la porción de
N-Acetilglucosamina tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C5/Cu) x (M,/M2) x 100
o
C11 HnNÜ4 223,2
,Y-Acetyl-L-tyrosine;
Acido (25)-2-( acetilam ino )-3-( 4-hidroxifenil)propanoico
[537-55-3].
DEFINICIÓN
La N-Acetiltirosina contiene no menos de 98,5% y no más
de_ 10~ ,0% de N-acetiltirosina (C11 H13 N0 4), como N-acetil-
L-t1rosina, calculado con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCJÓN,EN EL INFRARROJO (197K)
• B. ROTACION OPTICA, Rotación Específica (781 S)
Solución muestra: 1O mg/ml
Cri~erios de aceptación: No menos de +46,0º y no
mas de +49,0º, determinada a 20º
• C. El valor RF de la mancha principal de la Solución mues-
tra en la prueba de Impurezas Orgánicas corresponde al
de la Solución estándar 7.

ru = respuesta del pico de glucosamim1 de la VALORACIÓN

Solución muestra
rs = respuesta del pico de glucosamína dé la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Soludón estándar
(mg/ml) · (Ver Volumetría (541 ).)
Cu = concentración de N-Acetilglucosamina en la
Solución muestra (mg/ml)
= peso molecular de glucosamina, 179, 17
=peso molecular de clorhidrato de ghJcosamfna,
215,(;i3
Criterios de aceptación: No más de 1,0%
PRUEBA~ ES,PECÍFICAS
• ROTACION OPTICA, Rotación EspeCJ1ica (7815)
Solución muestra: 20 mg/ml en agua; realizar la medi-
ción 3 horas después de la preparación de la muestra.
Criterios de aceptación: +39,0° a +43,0°
• PH (791}
Solución muestra: 1Omg/ml. en agua
S:riterios de aceptación: 6,0-8,0
• PERDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 0,5%
• INTERVALO O TEMPERATURA DE FUSIÓN (741 ): 196°-205°
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 103 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g .
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia co/i.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER N-Acetilglucosamina USP
ER Clorhidrato de Glucosamina USP .t..usPJ1
• PROCEDIMIENTO
Solución muestra: Disolver aproximadamente 180 mg
de N-Acetiltirosina, pesada, en 50 ml de agua exenta
de dióxido de carbono.
Sistema volumétrico
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Hidróxido de sodio O, 1 N SV
Detección del punto final: Potenciométrica
Equivalencia: Cada ml de hidróxido de sodio O 1 N
SV equivale a 22,32 mg de N-acetiltirosina '
(C 11 HnNÜ4).
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de o, 1%
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Muestra: 0,7 g
Estándar: 0,40 ml de ácido clorhídrico O 01 N
Criterios de aceptación: No más de 20Ó ppm
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Muestra: 1,2 g
Estándar: 0,25 ml de ácido sulfúrico 0,020 N
Criterios de aceptación: No más de 200 ppm
• HIERRO (241 ): No más de 20 ppm
• METALES PESADqs, Método 7 (231 ): No más de 1o ppm
• IMPUREZAS 0RGANICAS
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
mat0<;.irafía de 0,25 mm
Solucion madre del estándar 1: 8 mg/ml de ER N-
Acetil-L-tirosina USP en una mezcla de agua, ácido acé-
tico glacial y alcohol (3:3:94)
Solución estándar 1: Diluir Solución madre del estándar
7 con alcohol hasta obtener una solución con una con-
centración conocida de aproximadamente 0,4 mg/ml .
Solución estándar 2: 0,8 mg/ml de ER L-Tirosina USP
disuelta en una mezcla de ácido acético glacial y agua
(1: 1), y diluida con alcohol
Solución muestra: Transferir 0,8 g de N-Acetiltirosina a
un matraz volumétrico de 1O ml, disolver en 6 ml de
una mezcla de ácido acético glacial y agua (1 :1 ), y di-
luir con alcohol a volumen.
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Una mezcla de amoníaco y 2-propanol
(3:7)
USP 37
Solución reveladora: Disolver 0,2 g de ninhidrina en
100 ml de una mezcla de butanol y ácido acético 2 N
(95:5).
Análisis: Proceder según se indica en Cromatografía
(621 ), Cromatografía en Capa Delgada. Despues de secar
la placa al aire, repetir el proceso de desarrollo. Después
de secar al aire por segunda vez, observar la placa bajo
luz UV de longitud de onda corta y registrar las man-
chas principales y secundarias. Rociar la placa con Solu-
ción reveladora y calentar a una temperatura entre 100º
y 1 05º durante aproximadamente 15 minutos. Observar
la placa bajo luz blanca y registrar las manchas princi-
pales y secundarias.
Criterios de aceptación: Bajo luz UV de longitud de
onda corta, ninguna mancha secundaria observada de
la Solución muestra es de mayor tamaño o intensidad
que la mancha principal de la Solución estándar 7. Des-
pués de aplicar la Solución reveladora bajo luz blanca,
ninguna mancha secundaria en el sitio de tirosina de la
Solución muestra es de mayor tamaño o intensidad que
la mancha principal de la Solución estándar 2.
Impurezas individuales: No más de 0,5%
Límite de tirosina: No más de 1,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 105º durante 3 horas.
Criterios de aceptación: No más de O, 1 %
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerpdos. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER N-Acetil-L-tirosina USP
ER L-Tirosina USP
Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-
metionina
Título anterior: Disulfato Tosilato de Ademetionina
C22H34N6016S4 766,80
S-(Adenosyl)-L-methionine disulfate tosylate;
Disulfato-metilbencenosulfonato de (3S)-5'-[(3-amino-3-car-
boxi propil)metilsulfon io ]-5'-desoxiadenosi na [9 7540-22-2].
DEFINICIÓN
El Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina es la sal mixta
de disulfato-tosilato de una mezcla de diastereoisómeros
del ión de S-adenosil-L-metionina. Contiene no menos de
95,0% y no más de 105,0% de disulfato tosilato de S-
adenosil-L-metionina (C22Hi4N6016S4) calculado con el
contenido de S-adenosil-L-metionina (C1sHnN60 5 S+) calcu-
lado con respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de S-adenosil-L-metionina en
la Solución de aptitud del sistema, según se obtienen en
Contenido de S-Adenosil-L-metionina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE S-ADENOSIL-L-METIONINA
Solución A: 1 O ml de ácido acético glacial en 500 ml
de agua. Agregar 2,06 g de 1-hexanosulfonato de sodio
y diluir con agua hasta 1 000 ml.
Suplementos Dietéticos / Adenosil 5819
Fase móvil: Acetonitrilo y Solucion A (15:85)
Solución de aptitud del sistema: 400 pg/ml de ER Di-
sulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina USP y de ER
S-Adenosil-L-homocisteína USP
Solución estándar A: 400 pg/ml de ER S-Adenosil-L-ho-
mocisteína USP
Solución estándar B: 200 pg/ml a partir de Solución
estándar A
Solución estándar C: 80 pg/ml a partir de Solución es-
tándar A
Solución muestra: 20 mg de Disulfato Tosilato de S-
Adenosil-L-metionina en 40 ml de agua. Mezclar du-
rante 30 minutos, luego diluir con agua hasta 50,0 ml.
Transferir 1,0 ml de la solución a un tubo de microcen-
trífuga de 1,5 ml y centrifugar durante 1 minuto. Usar
una porción del sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3 pm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
tándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para S-ade-
nosil-L-homocisteína y S-adenosil-L-metionina son apro-
ximadamente 0,68 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre S-adenosil-L-ho-
mocisteína y S-adenosil-L-metionina
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución están-
dar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
S-adenosil-L-homocisteína, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
[NOTA-Registrar los cromatogramas y medir el área
del pico de S-adenosil-L-homocisteína en las tres Solu-
ciones estándar y el pico de S-adenosil-L-metionina en
la Solución muestra.]
Graficar una curva de calibración del área del pico de
las Soluciones estándar en función de la concentración
correspondiente de S-adenosil-L-homocisteína, en
mg/ml, y trazar la recta que mejor se ajuste a los tres
puntos. A partir de la curva de calibración y usando
el área del pico de S-adenosil-L-metionina del croma-
tograma de la Solución muestra, determinar la con-
centración, C, en mg/ml, de S-adenosil-L-metionina
como S-adenosil-L-homocisteína en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de CisHnN60sS+ en la porción
de S-Adenosil-L-metionina tomada:
Resultado = (C/Cu) X (Mri!Mr2) X 1 00
C = concentración de S-adenosil-L-metionina como
S-adenosil-L-homocisteína obtenida a partir
de la línea de regresión lineal (mg/ml)
Cu = concentración de Disulfato Tosilato de 5-
Adenosil-L-metionina en la Solución muestra
(mg/ml)
Mr1 = peso molecular de S-adenosil-L-metionina,
399,44
Mr2 = peso molecular de S-adenosil-L-homocisteína,
384,41
Criterios de aceptación: 49,5%-54,7% con respecto a
la sustancia anhidra, equivalente a 95,0%-105,0% de
disulfato tosilato de S-adenosil-L-metionina con respecto
a la sustancia anhidra
• CONTENIDO DE SULFATO
Fase móvil: Carbonato de sodio 8,0 mM y bicarbonato
de sodio 1,0 mM en agua
5820 Adenosil / Suplementos Dietéticos USP 37

Solución estándar: O, 18 mg/ml de sulfato de potasio Análisis

Solución muestra: 0,5 mg/ml de Disulfato Tosilato de Muestras: Solución estándar y Solución muestra
S-Adenosil-L-metionina Identificar los picos de los isómeros S,S y R,S en la
Sistema cromato9ráfico Solución muestra por comparación con la Solución es-
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) tándar, y calcular el porcentaje del isómero S,S:
Modo: HPLC
Detector: Detector iónico con conductividad Resultado = [rss/(rss + rRs)] x 100
suprimida
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L74 de 7 µm r,, = áreas de los picos correspondientes al isómero
Temperatura de la columna: 30º S,S en la Solución muestra
Velocidad de flujo: 1 ml/min rRs = áreas de los picos correspondientes al isómero
Volumen de inyección: 25 µL R,S de la Solución muestra
Aptitud del sistema Criterios de aceptación: No menos de 60% y no me-
Muestra: Solución estándar nos de la cantidad declarada del isómero S,S
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 8200 platos REQUISITOS ADICIONALES
teóricos • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Factor de asimetría: No más de 1,5 permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un
Desviación estándar relativa: No más de 1,0% refrigerador.
Análisis • ETIQUETADO: Etiquetar indicando el contenido mínimo de
Muestras: Solución estándar y Solución muestra isómero S,S, como porcentaje.
[NOTA--Medir el área del pico de sulfato.] • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Calcular el porcentaje de sulfato (S04) .en. la porción de ER Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina USP
Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-met1ornna tomada: ER S-Adenosil-L-homocisteína USP

Resultado = (ru/rs) x (C1/Cu) x 1 00

ru = respuesta del pico de sulfato de la Solución
muestra Agnocasto
rs = respuesta del pico de sulfato de la Solución
estándar DEFINICIÓN
Cs = concentración de sulfato (S04) en la Solución El Agnocasto consiste en los frutos maduros y secos de Vitex
estándar (mg/ml) agnus-castus L. (F~m. Verbenaceae). Contiene no men.os
Cu = concentración de Disulfato Tosilato de S- de 0,05% de agnosido y no menos de .0,08% de cast1-
Adenosil-L-metionina en la Solución muestra cina, calculado con respecto a la materia seca.
(mg/ml)
Criterios de aceptación: 23,5%-26,5% IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
IMPUREZAS DELGADA
• METALES PESADOS, Método I (231): No más de 20 ppm Solución estándar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de
Agnocasto USP en 1 ml de metanc_:>I. Calentar e.n un
PRUEBAS ESPECÍFICAS baño de agua a 60º durante 1 O minutos. Centrifugar y
• PH (791 ): 1 0-2,0, en una solución acuosa (1 en 20) usar el sobrenadante transparente .
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921 ): No más de Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g del
3,0% material vegetal en polvo a un tubo de centrífuga con
• RELACIÓN ISOMÉRICA tapa de rosca. Agregar 1 O ml de metanol! calentar en
Solución amortiguadora: Transferir 4,2 .~ <:Je ácido cí~ un baño de agua a 60º durante 10-15 minutos, enfriar
trico monohidrato y 2,03 g de fosfato d1ac1do de sodio y filtrar.
dihidrato a un matraz volumétrico de 1 L, disolver, y Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
diluir con agua a volumen. tamaño promedio de particula de 10-15 µm (placas
Fase móvil: 4,0 g de dodecil sulfato de s.odio y 440 ml para TLC) . ., ., ,
de acetonitrilo. Diluir con Solución amortiguadora hasta Volumen de aphcac1on: 90 µL, SoluC1on estandar; .
1 L. 60 µL, Solución muestra; en bandas de 2 cm de longitud
Solución estándar: 1,0 mg/ml de ER Disulfato Tosilato Fase móvil: Acetato de etilo, metano! y agua (77:15:8)
de S-Adenosil-L-metionina USP Solución reveladora: 1 O mg/ml de p-dimetilaminoben-
Solución muestra: 1,0 mg/ml de Disulfato Tosilato de zaldehído en ácido clorhídrico 1 N
S-Adenosil-L-metionina Análisis
Sistema cromato9ráfico Muestras: Solución estándar y Solución muestra
(Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.) Desarrollar hasta una longitud de no menos de 12 cm
Modo: HPLC y secar la placa en una corriente de aire. Rociar la
Detector: UV 254 nm placa con Solución reveladora y calentar durante 1 O
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm minutos a 120º.
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
Volumen de inyección: 20 µL lo siguiente: una zona azul (a un valor RF de aproxima-
Aptitud del sistema damente O 21) debida a la presencia de aucubina y que
Muestra: Solución estándar corresponde en color y valor RF a una zona similar de la
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para el isó- Solución estándar- una zona azul (a un valor RF de apro-
mero R,S e isómero S,S son aproximadamente 0,94 y ximadamente o,44) como resultado de la presencia de
1,0, respectivamente.] agnósido que corresponde en color y valor RF a una
Requisito~ de aptitud . , zona similar de la Solución estándar; y una zona ancha,
Resolucion: No menos de 1,0 entre el 1somero S,S y color violeta en el medio, que está cerca del frente de
el isómero R,S la fase móvil y que corresponde en color y valor RF a
una zona similar de la Solución estándar. Se pueden ob-
servar otras zonas de color de intensidades variables en
la Solución muestra.
USP 37 Suplementos Dietéticos / Agnocasto 5821

• B. En la prueba de Contenido de Casticina, el cromato-
grama de la Solución muestra presenta un pico en el
tiempo de retención correspondiente al del pico de casti-
cina en el cromatograma de la Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CASTICINA
Solución estándar: Aproximadamente 0,05 mg/ml de
ER Casticina USP en metano!, con ultrasonido. Pasar a
través de un filtro de membrana de celulosa con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg
del material vegetal molido en un recipiente con tapón.
Extraer dos veces con 40 ml de metanol, usando un
homogeneizador manual a 19 000 rpm durante 2 mi-
nutos. Filtrar cada sobrenadante y transferir a un matraz
de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el residuo con
metanol y filtrar la solución resultante en el matraz. Eva-
porar el extracto combinado hasta sequedad. Disolver
el residuo en metano!, transferir cuantitativamente a un
matraz volumétrico de 20 ml y diluir con metanol a
volumen. Pasar a través de un filtro de membrana de
celulosa con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución A: Metano!
Solución B: 5,88 g/L de ácido fosfórico en agua
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
mente 0, 125 mg/ml. Pasar a través de un filtro de
membrana de celulosa con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Solución muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg
del material vegetal molido en un recipiente con tapón.
Extraer dos veces con 40 ml de metano!, usando un
homogeneizador manual a 19 000 rpm durante 2 mi-
nutos. Centrifugar y transferir cada sobrenadante a un
matraz de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el resi-
duo con metano! y filtrar la solución resultante en el
matraz. Evaporar el extracto combinado hasta sequedad
y disolver el residuo en 2 ml de Disolvente. Transferir
cuantitativamente la solución a un cartucho de extrac-
ción de fase sólida relleno con óxido de aluminio neu-
tro acondicionado previamente con 5 ml de Disolvente.
Conectar el cartucho a una presión de vacío que no
exceda de 300 mbar y recoger el eluato. Enjuagar el
matraz de fondo redondo con 2 ml de Disolvente, pasar
esta solución a través del cartucho, aplicar el vacío y
recoger el eluato. Enjuagar el cartucho con 4 ml de Di-
solvente y recoger el eluato. Combinar los eluatos del
cartucho, transferir a un matraz volumétrico de 1 O ml y
diluir con Disolvente a volumen.
Solución A: Acetonitrilo
Solución B: 5,88 g/L de ácido fosfórico en agua
Fase móvil: Ver la Tabla 2.

Tabla 1 Tabla 2
Tiempo Solución A Solución B Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (O/o) Cmin) (O/o) lº/o\
o 50 50 o 7 93
o 50 50 06 10 90
13 65 35 5 10 90
18 100 o 7 14 86
23 50 50 13 15 85
Sistema cromato9ráfico 131 100 o
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) 18 100 o
Modo: HPLC 181 7 93
Detector: UV 348 nm 23 7 93
Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 25º Sistema cromato9ráfico
Velocidad de flujo: 1 ml/min (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Volumen de inyección: 1O µL Modo: HPLC
Aptitud del sistema Detector: UV 258 nm
Muestra: Solución estándar Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 µm
Requisitos de aptitud Temperatura de la columna: 25º
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de Velocidad de flujo: 1,3 ml/min
casticina Volumen de inyección: 1O µL
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Aptitud del sistema
el pico de casticina en inyecciones repetidas Muestra: Solución estándar
Análisis Requisitos de aptitud
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Calcular el porcentaje de casticina en la porción de agnósido
Agnocasto tomada: Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de agnósido en inyecciones repetidas
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
ru = respuesta del pico de casticina de la Solución Calcular el porcentaje de agnósido en la porción de
muestra Agnocasto tomada:
rs = respuesta del pico de casticina de la Solución
estándar Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
Cs = concentración de ER Casticina USP en la
Solución estándar (mg/ml) ru = respuesta del pico de agnósido de la Solución
Cu = concentración de Agnocasto en la Solución muestra
muestra (m9/ml) r5 = respuesta del pico de agnósido de la Solución
Criterios de aceptacion: No menos de 0,08% de casti- estándar
cina con respect9 a la materia seca Cs = concentración de ER Agnósido USP en la
• CONTENIDO DE AGNOSIDO Solución estándar (mg/ml)
Disolvente: Metano! y agua (1 :19) Cu = concentración de Agnocasto en la Solución
Solución estándar: Disoíver una cantidad de ER Agnó- muestra (m9/ml)
sido USP en Disolvente, con ultrasonido. Diluir con me- Criterios de aceptacion: No menos de 0,05% de ag-
tano! hasta obtener una concentración de aproximada- nósido con respecto a la materia seca
5822 Agnocasto / Suplementos Dietéticos
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231>: No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561>: Cumple con los
requisitos .
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >: El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias no excede de 103 ufc/g.,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022>: Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchta colt.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Los frutos maduros del Agnocasto son
de forma esférica a ovoide, con un diámetro de
2-4 mm, muy duros y generalmente con un pedicelo
corto. El fruto es de color marrón rojizo a negro, ligera-
mente áspero y cubierto de pelos glandulares. Presenta
cuatro estrías, perpendiculares entre sí, y una ligera de-
presión en el ápice que resulta más evidente en los fru-
tos de mayor tamaño. El i~terior del fruto ~s de color
amarillento. La estructura interna del fruto incluye cua-
tro compartimientos, cada uno de ellos conteniendo
una semilla oblonga de alto contenido graso. Los frutos
maduros también pueden estar acompañados de un
grupo de hasta seis frutos inmaduros, esponjosos y de
color tostado claro. A menudo el fruto está cubierto de
un cáliz tubular, persistente, finamente tomentoso y de
color gris verdoso que posee cinco dientes.
Microscópicas: El exocarpo es estrecho y de color ma-
rrón; consta de células paren<_luimáticas de paredes del-
gadas y células parcialmente hgni!icad_as co_n numerosos
engrosamientos punteados en el mteric:ir. V1s~o des~e la
superficie, el exocarpo muestra una ep1derm1s de celulas
poligonales con engrosamientos irregulares y pelos
glandulares, cada uno de ellos con un pedicE'.,lo corto,
de una sola célula, y una cabeza de cuatro celulas que
contienen aceite esencial. El mesocarpo externo consta
de varias capas de células parenquimáticas isodiamétri-
cas de color marrón. El mesocarpo interno posee células
esclerenquimáticas finamente punteadas; algunas de
ellas de paredes moderadamente engrosadas y otras
formadas por células pétreas isodiamétricas con un pe-
queño lumen. El endocarpo está formado por una capa
de pequeñas esclereidas de color marr?n. Las semillas
son pequeñas y presentan grandes cotiledones rodea-
dos por grandes células parenquimáticas de paredes
delgadas con engrosamientos acastillados. El tejido nu-
tritivo y las células germinales contienen granos de
aleurona y glóbulos de aceite. El almidón está ausente.
La epidermis exter~a del cáliz está compue~ta por célu-
las poligonales cubiertas J?Or abundantes _tricon:ia~ cur-
vados unicelulares o mult1celulares. La ep1derm1s interna
del cáliz es glabra y está compuesta por células rectan-
g1,1lares y alargadas con ,paredes lige~amen!e _ondulad~s.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgamca Extrana
(561>: No más de 3,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731>: Secar 1ga105º durante 2
horas: pierde no más de 10,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561>:
No más de 8,0% , ER Casticina USP en metanol, sometiendo a ultrasonido.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561>: No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente. co~~rolada.
• ETIQUETADO: La etiqueta declara el nombre c1ent1f1co en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo.
USP 37
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11 >
ER Agnósido USP
ER Casticina USP
ER Extracto en Polvo de Agnocasto USP
Agnocasto en Polvo
DEFINICIÓN
El Agnocasto en Polvo es Agnocasto reducido a polvo o a,
polvo muy fino. Contiene no menos de 0,05% de agno-
sido y no menos de 0,08% de casticina, calculados con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 100 mg de ER Extracto en Polvo de
Agnocasto USP en 1 mL de metan<;>I. Calentar e_n un
baño de agua a 60º durante 1O minutos. Centrifugar y
usar el sobrenadante transparente.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Agnocasto en Polvo a un tubo de centrífuga con tapa
de rosca. Agregar 1O mL de metano!, calentar en un
baño de agua a 60º durante 10-15 minutos, enfriar y
filtrar.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 90 µL, Solución estándar; .
60 µL, Solución muestra; en bandas de 2 cm de longitud
Fase móvil: Acetato de etilo, metano! y agua (77:15:8)
Solución reveladora: 1O mg/mL de p-dimetilaminoben-
zaldehído en ácido clorhídrico 1 N
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar hasta una longitud de no menos de 12 cm
y secar la placa en una corriente de aire. Rociar la
placa con Solución reveladora y calentar durante 1O
minutos a 120º.
Criterios de aceptación: La Solución muestra pres~nta
lo siguiente: una zona azul (a un valor RF de aproxima-
damente 0,21) debida a la presencia de aucubina y que
corresponde en color y valor RF a una zona similar de la
Solución estándar; una zona azul (a un valor RF de apro-
ximadamente 0,44) como resultado de la presencia de
agnósido que corresponde en color y valor RF a una
zona similar de la Solución estándar; y una zona ancha,
de color violeta en el medio, que está cerca del frente
de la fase móvil y que corresponde en color y valor RF a
una zona similar de la Solución estándar. Se pueden ob-
servar otras zonas de color de intensidades variables en
la Solución muestra.
• B. En la prueba de Contenido de Casticina, el cromato-
grama de la Soluci(m muestra pr~senta un. pico en el ..
tiempo de retencion correspondiente al pico de cast1c1na
en el cromatograma de la Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CASTICINA
Solución estándar: Aproximadamen_te 0,05 mg/mL ~e
Pasar a través de un filtro de membrana de celulosa con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg
de Agnocasto en Polvo en un recipiente con tapón. Ex-
traer dos veces con 40 mL de metano!, usando un ho-
mogeneizador manual a 19 000 rpm d~rante 2 minu-
tos. Filtrar cada sobrenadante y transferir a un matraz
de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el residuo con
metano! y filtrar la solución resultante en el matraz. Eva-
porar los extractos combinados ha_sta seq~ed~d. Disol-
ver el residuo en metano!, transferir cuant1tat1vamente a
USP 37 Suplementos Dietéticos / Agnocasto 5823

un matraz volumétrico de 20 ml y diluir con metanol a
volumen. Pasar a través de un filtro de membrana de
celulosa con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución A: Metanol
Solución B: 5,88 g/L de ácido fosfórico en agua
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
solvente y recoger el eluato. Combinar los eluatos del
cartucho, transferir a un matraz volumétrico de 1O ml y
diluir con Disolvente a volumen.
Solución A: Acetonitrilo
Solución B: 5,88 g/L de ácido fosfórico en agua
Fase móvil: Ver la Tabla 2.

Tabla 1 Tabla 2
Tiempo Solución A Solución B Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%) Cmln) (%) (%)
o 50 50 o 7 93
o 50 50 06 10 90
13 65 35 5 10 90
18 100 o 7 14 86
23 50 50 13 15 85
131 100 o
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
18 100 o
Modo: HPLC 181 7 93
Detector: UV 348 nm 23 7 93
Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 25º Sistema cromato9ráfico
Velocidad de flujo: 1 ml/min (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Volumen de inyección: 1O µL Modo: HPLC
Aptitud del sistema Detector: UV 258 nm
Muestra: Solución estándar Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 µm
Requisitos de aptitud Temperatura de la columna: 25º
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de Velocidad de flujo: 1,3 ml/min
casticina Volumen de inyección: 1O µL
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Aptitud del sistema
el pico de casticina en inyecciones repetidas Muestra: Solución estándar
Análisis Requisitos de aptitud
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Calcular el porcentaje de casticina en la porción de agnósido
Agnocasto en Polvo tomada: Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de agnósido en inyecciones repetidas
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
ru = respuesta del pico de casticina de la Solución Calcular el porcentaje de agnósido en la porción de
muestra Agnocasto en Polvo tomada:
rs = respuesta del pico de casticina de la Solución
estándar Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
Cs = concentración de ER Casticina USP en la
Solución estándar (mg/ml) ru = respuesta del pico de agnósido de la Solución
Cu = concentración de Agnocasto en Polvo en la muestra
Solución muestra (mg/ml) rs = respuesta del pico de agnósido de la Solución
Criterios de aceptación: No menos de 0,08% de casti- estándar
cina con respect9 a la materia seca Cs = concentración de ER Agnósido USP en la
• CONTENIDO DE AGNOSIDO Solución estándar (mg/ml)
Disolvente: Metanol y agua (1 :19) Cu = concentración de Agnocasto en Polvo en la
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Agnó- Solución muestra (mg/ml)
sido USP en Disolvente, sometiendo a ultrasonido. Diluir Criterios de aceptación: No menos de 0,05% de ag-
con metanol hasta obtener una concentración de apro- nósido con respecto a la materia seca
ximadamente O, 125 mg/ml. Pasar a través de un filtro CONTAMINANTES
de membrana de celulosa con un tamaño de poro de • METALES PESADOS, Método /JI (231): No más de 20 ppm
0,45 µm o menor. • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
Solución muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
de Agnocasto en Polvo en un recipiente con tapón. Ex-
requisitos.
traer dos veces con 40 ml de metanol, usando un ho- • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
mogeneizador manual a 19 000 rpm durante 2 minu- tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g;
tos. Centrifugar y transferir cada sobrenadante a un el recuento total combinado de hongos filamentosos y
matraz de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el resi-
levaduras no excede de 104 ufc/g; y el recuento de ente-
duo con metanol y filtrar la solución resultante en el robacterias no excede de 10 3 ufc/g.,
matraz. Evaporar los extractos combinados hasta seque- • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
dad y disolver el residuo en 2 ml de Disolvente. Transfe- ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
rir cuantitativamente la solución a un cartucho de ex-
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
tracción de fase sólida relleno con óxido de aluminio
neutro, acondicionado previamente con 5 ml de Disol- PRUEBAS ESPECÍFICAS
vente. Conectar el cartucho a una presión de vacío que • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: El Agnocasto en Polvo es
no exceda de 300 mbar y recoger el eluato. Enjuagar el marrón oscuro, con un olor levemente aromático a moho
matraz de fondo redondo con 2 ml de Disolvente, pasar y un sabor similar al de la salvia. Presenta las siguientes
esta solución a través del cartucho, aplicar el vacío y características: fragmentos del cáliz cubiertos con trico-
recoger el eluato. Enjuagar el cartucho con 4 ml de Di- mas y tricomas glandulares sobre la cara externa, y célu-
5824 Agnocasto / Suplementos Dietéticos USP 37

las rectangulares y alargadas con paredes ligeramente de color violeta en el medio, que está cerca del frente
onduladas en la cara interna; fragmentos de exocarpo de la fase móvil y que corresponde en color y valor RF a
con tricomas y células con grandes puntuaciones en la una zona similar de la Solución estándar. Se pueden ob-
pared externa; células parenquimáticas de pared delgada servar otras zonas de color de intensidades variables en
y glóbulos de aceites fijos; células pétreas del mesocarpo la Solución muestra.
con puntuaciones; células de la testa lignificadas, ovoi- • B. En la prueba de Contenido de Casticina, el cromato-
des, con bandas de engrosamientos reticulados; y endo- grama de la Solución muestra presenta un pico en el
sperma y cotiledones con aceites fijos. tiempo de retención correspondiente al de casticina.
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 105º durante 2 • C. En la prueba de Contenido de Agnósido, el cromato-
hor_as: pierde no más de) 0,0% de .su peso. grama de la Solución muestra presenta un pico en el
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561): tiempo de retención correspondiente al de agnósido .
No,más de 8,0% , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido COMPOSICIÓN
(561): No más de 2,0% • CONTENIDO DE CASTICINA
Solución estándar: Aproximadamente 0,05 mg/mL de
REQUISITOS ADICIONALES ER Casticina USP en metanol, sometiendo a ultrasonido.
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Pasar a través de una membrana de celulosa con un
cerrados y almacenar a temperatura ambiente tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
controlada. Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto,
• ETIQUETADO: La etiqueta declara el nombre científico en equivalente a aproximadamente 2,5 mg del contenido
latín, y después de la denominación oficial, la parte de la declarado de casticina, a un matraz volumétrico de
pla,nta de donde se obtuvo en el artículo. 50 ml. Agregar 25 mL de metanol y someter a ultraso-
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) nido en un baño a 40º durante 1O minutos, agitando
ER Agnósido USP para dispersar los sólidos. Enfriar a temperatura am-
ER Casticina USP biente y diluir con metanol a volumen. Centrifugar o
ER Extracto en Polvo de Agnocasto USP pasar a través de un filtro con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor.
Solución A: Metanol
Solución B: 5,88 g/L de ácido fosfórico en agua
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Extracto en Polvo de Agnocasto
Tabla 1
DEFINICIÓN
Tiempo Solución A Solución B
El Extracto en Polvo de Agnocasto se prepara a partir del Cmin) (%) 1%\
Agnocasto mediante extracción con mezclas hidroalcohó-
licas u otros disolventes adecuados. Contiene no menos o 50 50
de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada o 50 50
de casticina y agnósido, calculado con respecto a la ma- 13 65 35
teria seca. Puede contener sustancias agregadas 18 100 o
adecuadas. 23 50 50
IDENTIFICACIÓN Sistema cromato9ráfico
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
DELGADA Modo: HPLC
Solución estándar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de Detector: UV 348 nm
Agnocasto USP en 1 mL de metanol. Calentar en un Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 µm
baño de agua a 60º durante 1 O minutos. Centrifugar y Temperatura de la columna: 25º
usar el sobrenadante transparente. Velocidad de flujo: 1 mL/min
Solución muestra: Agitar una cantidad de Extracto, Volumen de inyección: 1 O µL
equivalente aproximadamente a 1O mg de la cantidad Aptitud del sistema
declarada de agnósido, en 1 O mL de metanol. Calentar Muestra: Solución estándar
en un baño de agua a 60º. Centrifugar o filtrar antes de Requisitos de aptitud
usar. Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un casticina
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
para TLC) el pico de casticina en inyecciones repetidas
Volumen de aplicación: 90 µL, Solución estándar; Análisis
60 µL, Solución muestra; en bandas de 2 cm de longitud Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Fase móvil: Acetato de etilo, metanol y agua (77:15:8) Calcular el porcentaje de casticina, Pe, en la porción de
Solución reveladora: 1 O mg/mL de p-dimetilaminoben- Extracto tomada:
zaldehído en ácido clorhídrico 1 N
Análisis Pe= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar hasta una longitud de no menos de 12 cm ru = respuesta del pico de casticina de la Solución
y secar la placa en una corriente de aire. Rociar la muestra
placa con Solución reveladora y calentar durante 1 O rs = respuesta del pico de casticina de la Solución
minutos a 120º. estándar
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta Cs = concentración de ER Casticina USP en la
lo siguiente: una zona azul (a un valor RF de aproxima- Solución estándar (mg/mL)
damente 0,21) debida a la presencia de aucubina y que Cu = concentración de Extracto en la Solución
corresponde en color y valor RF a una zona similar de la muestra (mg/mL)
Solución estándar; una zona azul (a un valor RF de apro- Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
ximadamente 0,44) como resultado de la presencia de casticina en la porción de Extracto tomada:
agnósido que corresponde en color y valor RF a una
zona similar de la Solución estándar; y una zona ancha, Resultado = (Pe/ L) x 1 00
USP 37 Suplementos Dietéticos /Ajo 5825

Pe = contenido de casticina según se calculó Pa contenido de agnósido calculado

=
anteriormente (%) anteriormente (%)
L = cantidad declarada de casticina (%) L = cantidad declarada de agnósido (%)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% con respecto Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% con respecto
a la materia seca a la materia seca
• CONTENIDO DE AGNÓSIDO
Disolvente: Metanol y agua (1 :19) CONTAMINANTES
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Agnó- • METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 20 ppm
sido USP en Disolvente, sometiendo a ultrasonido. Diluir • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
con metanol hasta obtener una concentración de apro- tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g. El recuento total
ximadamente O, 125 mg/ml. Filtrar a través de una combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
membrana de celulosa con un tamaño de poro de 0,45 cede de 1 03 ufc/g.
µm o menor. • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto, ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
equivalente a aproximadamente 6,25 mg del contenido ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
declarado de agnósido, a un matraz volumétrico de • OTR~S _REQUISITOS: . Cumple con los requisitos en Extractos
50 ml. Agregar 25 mL de Disolvente y someter a ultra- Botamcos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
sonido en un baño a 40º durante 1 O minutos, agitando Plaguicidas.
para dispersar los sólidos. Enfriar a temperatura am-
biente y diluir con Disolvente a volumen. Centrifugar o PRUEBAS ESPECÍFICAS
pasar a través de un filtro con un tamaño de poro de • PÉRDIDA POR SECADO (731 ): No más de 6,0%
0,45 µm o menor. REQUISITOS ADICIONALES
Solución A: Acetonitrilo • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Solución B: 5,88 g/L de ácido fosfórico en agua permeables y almacenar en un lugar fresco. Proteger de
Fase móvil: Ver la Tablo 2. la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Tabla 2 latín, y después de la denominación oficial, la parte de la
Tiempo Solución A Solución B
planta a partir de la cual se preparó el artículo. La eti-
lmin\ 1°/o) (º/o\
queta también indica el contenido de casticina y agnó-
sido, el disolvente de extracción o mezcla de disolventes
o 7 93 que se utilizó en la preparación, la relación entre el mate-
06 10 90 rial vegetal crudo inicial y el Extracto, el porcentaje de
5 10 90 extracto nativo y el nombre y la cantidad de todas las
7 14 86 sustancias agregadas. Cumple con los requisitos en Ex-
13 15 85 tra~tos Botánicos (565), Etiquetado.
131 100 o • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Agnósido USP
18 100 o ER Casticina USP
181 7 93 ER Extracto en Polvo de Agnocasto USP
23 7 93

Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC Ajo
Detector: UV 258 nm
Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 25º DEFINICIÓN
Velocidad de flujo: 1,3 mL/min El Ajo consiste en los bulbos compuestos frescos o secos de
Allium sativum L. (Fam. Liliaceae). Contiene no menos de
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema 0,5% de aliína y no menos de 0,2% de y-glutamil-(S)-alil-
Muestra: Solución estándar L-cisteína, calculado con respecto a la materia seca.
Requisitos de aptitud IDENTIFICACIÓN
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de • A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
agnósido DELGADA
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER L-Metionina
el pico de agnósido en inyecciones repetidas USP en una mezcla de metano! y agua (1: 1)
Análisis Solución estándar B: 0,5 mg/mL de ER Aliína USP en
Muestras: Solución estándar y Solución muestra una mezcla de metanol y agua (1: 1)
Calcular el porcentaje de agnósido, Pa, en la porción Solución muestra: Cortar un bulbo de ajo liofilizado en
de Extracto tomada: trozos pequeños, transferir 1 g de los trozos cortados a
un extractor y extraer con dos porciones de 20 mL de
Pa = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 una mezcla de metanol y agua (1 :1 ), combinando los
ru = respuesta del pico de agnósido de la Solución
extractos. Concentrar hasta un volumen pequeño (apro-
muestra
ximadamente 5 mL), usando un evaporador rotatorio.
rs = respuesta del pico de agnósido de la Solución
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
estándar
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
Cs = concentración de ER Agnósido USP en la
cas para TLC)
Solución estándar (mg/mL)
Volumen de aplicación: 20 µL, aplicados por separado
Cu = concentración de Extracto en la Solución
en bandas de 1 O mm
muestra (mg/mL)
Fase móvil: Alcohol butílico, alcohol n-propílico, ácido
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de acético glacial y agua (3:1:1:1)
agnósido en la porción de Extracto tomada: Solución reveladora: Solución al 0,2% de ninhidrina en
una mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N
Resultado = (Paf L) x 1 00 (19:1)
5826 Ajo / Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa, en una cámara saturada. Retirar la
placa y dejar que la fase móvil se evapore. Rociar con
Solución reveladora, calentar a 100º-105º durante 1O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
RF de aproximadamente 0,89; una zona rosada con un
valor RF de aproximadamente 0,5 y que corresponde en
color y valor RF a la obtenida del cromatograma de la
Solución estándar A; una zona rosada con un valor RF de
aproximadamente 0,43; una zona anaranjada intensa
con un valor RF de aproximadamente 0,38; una zona
violeta rosado con un valor RF de aproximadamente 0,3
y que corresponde en color y valor RF a la del cromato-
grama de la Solución estándar B; y zonas adicionales de
color anaranjado rosado ubicadas muy cerca una de
otra justo por debajo de la zona atribuida a aliína en el
cromatograma de la Solución estándar B.
•B.
Muestra: Aproximadamente 1O g de bulbos de ajo cor-
tados en piezas pequeñas
Análisis: Transferir la Muestra a un matraz adecuado.
Agregar 1O mL de hidróxido de sodio 1 N y 1O mL de
agua, calentar el matraz en agua hirviendo durante 1O
minutos, enfriar y filtrar. Agregar unas pocas gotas de
nitroferricianuro de sodio SR recientemente preparado a
2 mL del filtrado.
Criterios de aceptación: La aparición de un color rojo
o rojo anaranjado indica la presencia de compuestos
que contienen azufre en la Muestra.
• C. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la pr\,Jeba de Contenido de,Aliína.
• D. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Columna de extracción: De fase sólida de 1 cm x
5 cm; contiene relleno de copolímero de estireno-divi-
nilbenceno con un diámetro qe 75 a 150 µm y un ta-
maño de poro de 400 a 600 A. Acondicionar la co-
lumna antes de su uso lavando con 50 mL de metano!
y 50 mL de una mezcla de metano! y agua (3:7).
LNOTA-No dejar que la columna se seque.]
Solución estándar: 0,2 mg/mL de ER /3-Clorogenina
USP y de ER Agigenina USP en metano!
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1O g de
diente de ajo recientemente pelado a un vaso de ho-
mogeneización de 37 mL y homogeneizar con 25 mL
de metano! a la velocidad más alta durante 1 minuto.
Centrifugar la mezcla y decantar el sobrenadante en un
matraz. Agregar 70 mL de agua. Transferir a la Columna
de extracción, dejar que escurra y desechar el eluato.
Lavar la columna con 50 mL de una mezcla de metano!
y agua (3:7), dejar que la mezcla de disolventes escurra
y desechar el eluato. Por último, eluir la fracción de
saponina sin procesar en la columna con 20 mL de me-
tano! y recoger el eluato. Evaporar el disolvente hasta
sequedad. Disolver el residuo en 4 mL de una mezcla
de ácido sulfúrico al 8% y alcohol (1 :1 ), transferir la
solución a un tubo de ensayo con tapa de rosca y ca-
lentar en un baño de agua hirviendo durante 5 horas.
Enfriar el tubo de ensayo, agregar 20 mL de agua y
transferir la solución a una Columna de extracción re-
cientemente acondicionada, dejar que escurra y dese-
char el eluato. Lavar la columna con 30 mL de una
mezcla de metano! y agua (7:3), y desechar el eluato.
Por último, eluir la columna con 50 mL de metano!. Re-
coger el eluato, evaporarlo hasta sequedad y disolver el
residuo en 0,5 mL de metano!.
USP 37
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas de 7 mm
Fase móvil: Cloruro de metileno y metano! (15:2)
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de 4-metoxiben-
zaldehído y 0,5 mL de ácido sulfúrico en alcohol sufi-
ciente para obtener 1O mL.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase móvil se evapore. Rociar la
placa con Solución reveladora, calentar la placa a
100º-l 05º durante 5 minutos y observar la placa.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta, entre varias manchas de color
verde amarillento y grisáceo, una mancha verde grisá-
ceo a un valor RF de aproximadamente 0,4, que corres-
ponde a la mancha verde grisáceo debida a ,B-cloroge-
nina de la Solución estándar. El cromatograma de la
Solución muestra no presenta manchas a un valor RF de
aproximadamente 0,2, que corresponde a agigenina de
la Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ALIÍNA
Solución inhibidora de aliinasa: Disolver 109 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 100,0 mL
de agua.
Solución A: Fosfato monobásico de sodio 0,045 M en
agua, ajustado con hidróxido de sodio 0,2 M a un pH
de 7, l.
Solución amortiguadora: Fosfato monobásico de sodio
0,05 M en agua, ajustado con hidróxido de sodio 0,2
M a un pH de 9,5.
Reactivo de derivatización: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehído en 5 mL de metano!, agregar 100 µL de t-
butiltiol y diluir con Solución amortiguadora hasta
50 ml. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasional-
mente opaco durante la preparación. Almacenar a tem-
peratura ambiente y usar dentro de la primera semana.]
Fase móvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solución A (25: 2,9: 2,2: 69,9)
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Aliína USP en
una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 10,0 g de dientes de ajo recientemente pelados,
pesados con exactitud, a un vaso de homogeneización
de 11 O ml. Agregar 70,0 mL de Solución inhibidora de
aliinasa y mezclar a la velocidad más alta durante 30
segundos. Centrifugar y decantar el sobrenadante en un
matraz volumétrico de 100 mL. Mezclar los sólidos re-
manentes en el vaso con 20 mL de Solución inhibidora
de aliinasa, centrifugar y agregar el sobrenadante al ma-
traz volumétrico. Diluir el contenido del matraz con So-
lución inhibidora de aliinasa a volumen.
Solución muestra: Diluir una porción de la Solución ma-
dre de la muestra 1 en 1O con una mezcla de metano! y
agua (1 :1 ).
Sistema cromato9rático
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
[NOTA-La aliína presenta dos picos principales que re-
presentan sus diastereómeros.]
USP 37
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
cada uno de los picos principales, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Con una jeringa, transferir O, 1 mL de la Solución están-
dar o de la Solución muestra a sendos viales con tapa
de septo y agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatiza-
ción a cada vial. Permitir un tiempo de reacción de no
menos de 2 minutos antes de inyectar en el cromató-
grafo. Registrar los cromatogramas y medir las áreas
de los picos de diastereómeros de aliína.
Calcular el porcentaje de aliína en la porción de Ajo
tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/VV) x O x 100
ru = área del pico de aliína de la Solución muestra
rs = áreas de los picos de diastereómeros de aliína
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Aliína USP en la Solución
estándar (mg/mL)
V = volumen de Solución madre de la muestra (mL)
W = peso de Ajo usado para preparar la Solución
madre de la muestra (mg)
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra, 1 O
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% con res-
pecto a la materia seca , externa consta de esclereidas de células lignificadas, de
• CONTENIDO DE y-GLUTAMIL-(S}-ALIL-L-CISTEINA
Solución A: Disolver 6,80 g de fosfato monobásico de
potasio en 900 mL de agua y ajustar con ácido fosfórico
a un pH de 2,6. Diluir con agua hasta 1000,0 mL y
mezclar.
Fase móvil: Metanol y Solución A (3:17).
Solución estándar: 0,08 mg/mL de ER y-Glutamil-(S)-
alil-L-cisteína USP en una mezcla de metano! y agua
(1 :1)
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1O g de
dientes de ajo recientemente pelados, pesados con
exactitud, a un vaso de homogeneización de 11 O ml.
Agregar 80 mL de una mezcla de metano! y agua (1 :1 ),
y homogeneizar a la velocidad más alta durante 1 mi-
nuto. Centrifugar la mezcla y decantar el sobrenadante
en un matraz volumétrico de 250 ml. Mezclar los sóli-
dos remanentes con dos porciones de 70 mL de una
mezcla de metanol y agua (1: 1), centrifugar y transferir
los sobrenadantes al matraz volumétrico. Diluir el conte-
nido del matraz con una mezcla de metanol y agua
(1 :1) a volumen.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de y-glutamil-(S)-alil-L-cisteína en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de y-glutamil-(S)-alil-L-cisteína en
la porción de Ajo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/VV) x 100
ru = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cisteína de la Solución muestra
Suplementos Dietéticos /Ajo 5827
rs = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cisteína de la Solución estándar
Cs = concentración de ER y-Glutamil-(S)-alil-L-
cisteína USP en la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Ajo usado para preparar la Solución
muestra (me;¡)
Criterios de aceptacion: No menos de 0,2% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Bulbos subglobulares compuestos, de
3-5 cm de ancho, que consisten en 8-20 dientes, ro-
deado en su totalidad por 2-5 capas de hojas escamo-
sas blancas unidas a una base circular aplanada; los
dientes son ovoides con 3 a 4 lados, punta aguda, es-
trechada en una porción similar a un hilo de base fi-
brosa, truncada, cada diente cubierto con una hoja es-
camosa blanca y una epidermis de color blanco rosado,
fácilmente separable de la porción sólida, que consiste
en dos hojas escamosas y dos hojas conduplicadas de
color verde amarillento
Microscópicas: La hoja protectora incluye una epider-
mis que rodea un mesófilo sin clorofila. La epidermis
paredes gruesas con puntuaciones, alargadas, recubier-
tas con una cutícula fina, fibras largas de hasta 500 µm
de longitud y 30 µm de ancho.
Las células corticales tienen paredes gruesas, no lignifi-
cadas, que tienden a colapsarse en su madurez, isodia-
métricas y contienen pigmentos púrpuras. Los haces
vasculares consisten en vasos espiralados y anillados
lignificados. Las hojas de almacenamiento presentan
una epidermis externa de células delicadas y delgadas
con formas variables, colocadas en filas algo irregula-
res, de 60 µm de largo y 30 µm de ancho. Se presen-
tan estomas en la epidermis externa únicamente en la
punta del extremo cerca de la base de las hojas.
El mesófilo consta de células parenquimáticas de alma-
cenamiento hinchadas rellenas de material granular
fino de reserva; se presentan 20 conductos laticíferos
esparcidos en la corteza, de 500-1000 µm de largo.
Los haces vasculares consisten en vasos espiralados y
anillados lignificados estrechos que se distribuyen en
dos series en el mesófilo.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de A9ua (561):
No más de 65,0% para bulbos frescos y no mas de 7,0%
parp bulbos secos ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 5,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561 ): No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados en un lugar fresco y seco. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Agigenina USP
ER Aíiína USP
ER /}-Clorogenina USP
ER y-Glutamil-(S)-alil-L-cisteína USP
ER L-Metionina USP
5828 Ajo / Suplementos Dietéticos
Ajo en Polvo
DEFINICIÓN
El Ajo en Polvo se produce a partir de Ajo que ha sido
cortado, liofilizado o secado a una temperatura que no
exceda de 65 y reducido a polvo. Contiene no menos de
O, 3% de aliína y no menos de O, 1 % de y-glutamil-(S)-alil-
L-cisteína, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/ml de ER L-Metionina
USP en una mezcla de metanol y agua (1 :1)
Solución estándar B: 0,5 mg/ml de ER Aliína USP en
una mezcla de metanol y agua (1 :1)
Solución muestra: Transferir 1 g de Ajo en Polvo a un
extractor y extraer con dos porciones de 20 mL de una
mezcla de metanol y agua (1 :1 ), combinando los ex-
tractos. Concentrar hasta un volumen pequeño (aproxi-
madamente 5 mL), usando un evaporador rotatorio.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL, aplicados por separado
en bandas de 1 O mm
Fase móvil: Alcohol butílico, alcohol n-propílico, ácido
acético glacial y agua (3: 1 : 1 :1)
Solución reveladora: Solución de ninhidrina 0,2 en
100 en una mezcla de alcohol butílico y ácido acético
2 N (19:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa, en una cámara saturada. Retirar la
placa y dejar que la fase móvil se evapore. Rociar con
Solución reveladora, calentar a 100º- l 05º durante 1O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
RF de aproximadamente 0,89; una zona rosada con un
valor RF de aproximadamente 0,5 y que corresponde en
color y valor RF a la obtenida del cromatograma de la
Solución estándar A; una zona rosada con un valor RF de
aproximadamente 0,43; una zona anaranjada intensa
con un valor RF de aproximadamente 0,38; una zona
violeta rosado con un valor RF de aproximadamente 0,3
y que corresponde en color y valor RF a la del cromato-
grama de la Solución estándar B; y zonas adicionales de
color_ anaranjado rosado ubicadas muy cerca una de
otra Justo por debajo de la zona atribuida a aliína en el
cromatograma de la Solución estándar B.
•B.
Muestra: Aproximadamente 1 O g de Ajo en Polvo
Análisis: Transferir la Muestra a un matraz adecuado.
Agregar 1O mL de hidróxido de sodio 1 N y 1 O mL de
agua, calentar el matraz en agua hirviendo durante 1 O
minutos, enfriar y filtrar. Agregar unas pocas gotas de
nitroferricianuro de sodio SR recientemente preparado a
2 mL del filtrado.
Criterios de aceptación: La aparición de un color rojo
o rojo anaranjado indica la presencia de compuestos
que contienen azufre en la Muestra.
• C. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la pryeba de Contenido de Aliína.
• D. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Columna de extracción: De fase sólida de 1 cm x
5 cm; contiene relleno de copolímero de estireno-divi-
USP 37
nilb_enceno con un diámetro eje 75 a 150 µm y un ta-
mano de poro de 400 a 600 A. Acondicionar la co-
lumna antes de su uso lavando con 50 ml de metanol
y 50 ml de una mezcla de metanol y agua (3:7).
(NO~A,-No ?ejar que la columna se seque.]
Soluc1on estandar: 0,2 mg/mL de ER f3-Clorogenina
USP y de ER Agigenina USP en metanol
So!ución muestra: Transferir aproximadamente 1O g de
AJO en Polvo. a un vaso de homogeneización de 37 ml
y homogeneizar con 25 mL de metanol a la velocidad
más alta durante 1 minuto. Centrifugar la mezcla y de-
cantar el sobrenadante en un matraz. Agregar 70 mL de
agua. Transferir a la Columna de extracción, dejar que
escurra y desechar el eluato. Lavar la columna con
50 ml de una mezcla de metanol y agua (3:7), dejar
que la mezcla de disolventes escurra y desechar el
eluato. Por último, eluir la fracción de saponina sin pro-
cesar en la columna con 20 mL de metanol y recoger el
eluato. Evaporar el disolvente hasta sequedad. Disolver
el residuo en 4 mL de una mezcla de ácido sulfúrico al
8% y alcohol (1 :1 ), transferir la solución a un tubo de
ensayo con tapa de rosca y calentar en un baño de
agua hirviendo durante 5 horas. Enfriar el tubo de en-
sayo, agregar 20 mL de agua y transferir la solución a
una Columna de extracción recientemente acondicio-
nada, dejar que escurra y desechar el eluato. Lavar la
columna con 30 mL de una mezcla de metanol y agua
(7:3), y desechar el eluato. Por último, eluir la columna
con 50 ml de metanol. Recoger el eluato, evaporarlo
hasta sequedad y disolver el residuo en 0,5 mL de
metanol.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas de 7 mm
Fase móvil: Cloruro de metileno y metanol (15:2)
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de 4-metoxiben-
zaldehído y 0,5 mL de ácido sulfúrico en alcohol sufi-
ciente para obtener 1O mL.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase móvil se evapore. Rociar la
placa con Solución reveladora, calentar la placa a
100º- l 05º durante 5 minutos y observar la placa.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta, entre varias manchas de color
verde amarillento y grisáceo, una mancha verde grisá-
ceo a un valor RF de aproximadamente 0,4, q_ue corres-
ponde a la mancha verde grisáceo debida a jj-cloroge-
nina de la Solución estándar. El cromatograma de la
Solución muestra no presenta manchas a un valor RF de
aproximadamente 0,2, que corresponde a agigenina de
la Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ALIÍNA
Solución inhibidora de aliinasa: Disolver 109 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 100,0 mL
de agua.
Solución A: Fosfato monobásico de sodio 0,045 M en
agua. Ajustar con hidróxido de sodio 0,2 M a un pH de
7, 1.
Solución amortiguadora: Fosfato monobásico de sodio
0,05 M en agua. Ajustar con hidróxido de sodio 0,2 M
a un pH de 9,5.
Reactivo de derivatización: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehído en 5 mL de metanol, agregar 100 µL de t-
butiltiol y diluir con Solución amortiguadora hasta
50 mL. (NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasional-
mente opaco durante la preparación. Almacenar a tem-
peratura ambiente y usar dentro de la primera semana.]
USP 37
Fase móvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solución A (25: 2,9: 2,2: 69,9)
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Aliína USP en
una mezcla de metanol y agua (1 :1)
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Ajo en Polvo, pesados con exactitud, a
un matraz. Agregar 30,0 mL de Solución inhibidora de
aliinasa y agitar vigorosamente hasta que el polvo se
disperse por completo. Centrifugar hasta obtener una
solución transparente.
Solución muestra: Transferir 5,0 mL de Solución madre
de la muestra a un matraz volumétrico de 1O mL y diluir
con Solución inhibidora de aliinasa a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
[NOTA-La aliína presenta dos picos principales que re-
presentan sus diastereómeros.]
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
cada uno de los picos principales, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Con una jeringa, transferir O, 1 mL de la Solución están-
dar o de la Solución muestra a sendos viales con tapa
de septo, agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatización
a cada vial y mezclar. Permitir un tiempo de reacción
de no menos de 2 minutos antes de inyectar en el
cromatógrafo. Registrar los cromatogramas y medir las
áreas de los picos de diastereómeros de aliína.
Calcular el porcentaje de aliína en la porción de Ajo en
Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x O x 100
ru = área del pico de aliína de la Solución muestra
rs = suma de las áreas de los picos de
diastereómeros de aliína de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Aliína USP en la Solución
estándar (mg/mL)
V =volumen de Solución madre de la muestra (mL)
W = peso de Ajo en Polvo usado para preparar la
Solución madre de la muestra (mg)
O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra, 2
Criterios de aceptación: No menos de 0,3% con res-
pecto a la materia seca , • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
• CONTENIDO DE y-GLUTAMIL-(S)-ALIL-L-CISTEINA
Solución A: Disolver 6,80 g de fosfato monobásico de
potasio en 900 mL de agua y ajustar con ácido fosfórico
a un pH de 2,6. Diluir con agua hasta 1000,0 mL y
mezclar.
Fase móvil: Metanol y Solución A (3:17).
Solución estándar: 0,08 mg/mL de ER y-Glutamil-(S)-
alil-L-cisteína USP en una mezcla de metanol y agua
(1: 1)
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ajo en Polvo, pesados con exactitud, a un matraz
volumétrico de 50 ml. Agregar 30 mL de metanol y
agua (1: 1) y agitar vigorosamente hasta que el polvo se
disperse por completo. Diluir el contenido del matraz
con una mezcla de metanol y agua (1 :1) a volumen.
Centrifugar hasta obtener una solución transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Suplementos Dietéticos /Ajo 5829
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de y-glutamil-(S)-alil-L-cisteína en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de y-glutamil-(S)-alil-L-cisteína en
la porción de Ajo en Polvo tomada:
Resultado = (ru/r1) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cisteína de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cisteína de la Solución estándar
Cs = concentración de ER y-Glutamil-(S)-alil-L-
cisteína USP en la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Ajo en Polvo usado para preparar la
Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de O, 1% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método) (231 ): No más de 1o ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Caracterización del Ajo en
Polvo al microscopio: numerosos fragmentos de parén-
quima con células grandes que contienen cristales de
oxalato de calcio y pequeños espacios intercelulares,
triangulares o cuadrangulares, en las esquinas; vasos espi-
ralados acompañados de células subcuadráticas; células
epidérmicas alargadas con paredes gruesas y punteadas.
• AUSENCIA DE ALMIDÓN: Una suspensión espesa acuosa de
Ajo en Polvo no presenta coloración azul cuando se le
a,grega yodo SR.
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g del artículo a 105º
dur_ante 2 horas: pierde l}O más de _7,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,más de 5,0% , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561 ): No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados en un lugar fresco y seco. Proteger de la luz.
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Agigenina USP
ER Aíiína USP
ER f3-Clorogenina USP
ER y-Glutamil-(S)-alil-L-cisteína USP
ER L-Metionina USP
Extracto en Polvo de Ajo
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Ajo se prepara a partir de bulbos
frescos de Ajo mediante extracción con alcohol. La rela-
ción entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
5830 Ajo / Suplementos Dietéticos
Polvo es 9,5:1-13,5:1. Contiene no menos de 4,0% de
aliína (C 6 H11NO 35). Puede contener Ajo en Polvo u otras
sustancias adecuadas agregadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/ml de ER L-Metionina
USP en una mezcla de metano! y agua (1: 1)
Solución estándar B: 0,5 mg/ml de ER Aliína USP en
una mezcla de metano! y agua (1: 1)
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo, equivalente a aproximadamente 5 mg de
aliína, a un recipiente adecuado. Agregar 40 ml de una
mezcla de metano! y agua (1: 1 ), y agitar hasta que el
polvo se disperse por completo. Centrifugar y decantar
el sobrenadante en un matraz de fondo redondo. Con-
centrar hasta un volumen pequeño (aproximadamente
5 ml) usando un evaporador rotatorio.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL, aplicados por separado
en bandas de 1 O mm
Fase móvil: Alcohol butílico, alcohol n-propílico, ácido
acético glacial y agua (3:1 :1 :1)
Solución reveladora: Solución al 0,2% de ninhidrina en
una mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N
(19: 1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase móvil se evapore. Rociar con
Solución reveladora, calentar a 100º-105º durante 1 O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
RF de aproximadamente 0,89; una zona rosada con un
valor RF de aproximadamente 0,5 y que corresponde en
color y valor Rr a la obtenida del cromatograma de la
Solución estándar A; una zona rosada con un valor RF de
aproximadamente 0,43; una zona anaranjada intensa
con un valor RF de aproximadamente 0,38; una zona
violeta rosado con un valor RF de aproximadamente 0,3
y que corresponde en color y valor R1 a la del cromato-
grama de la Solución estándar B; y zonas adicionales de
color anaranjado rosado ubicadas muy cerca una de
otra justo por debajo de la zona atribuida a aliína en el
cromatograma de la Solución estándar B.
• B. El tiempo de retención del pico de aliína de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Aliína.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ALIÍNA
Solución inhibidora de aliinasa: 1,09 mg/ml de hemi-
clorhidrato de carboximetoxilamina
Solución A: Fosfato monobásico de sodio 0,045 M en
agua, ajustado con hidróxido de sodio 0,2 M a un pH
de 7, 1.
Solución amortiguadora: Fosfato monobásico de sodio
0,05 M en agua, ajustado con hidróxido de sodio 0,2
M a un pH de 9,5.
Reactivo de derivatización: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehído en 5 ml de metano!. Agregar 100 µL de t-
butiltiol, diluir con Solución amortiguadora hasta 50 ml
y mezclar. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasio-
nalmente opaco durante la preparación. Almacenar a
temperatura ambiente y usar dentro de la primera
semana.]
Fase móvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solución A (25: 2,9: 2,2: 69,9)
USP 37
Solución estándar: 0,05 mg/ml de ER Aliína USP en
una mezcla de metano! y agua (1: 1)
Solución muestra: Transferir aproximadamente O, 1 O g
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz volumétrico de 50 ml. Agregar 30 ml de Solución
inhibidora de aliinasa y agitar hasta que el Extracto en
Polvo se disperse por completo. Diluir con Solución inhi-
bidora de a/iinasa a volumen. Centrifugar, transferir
5 ml del sobrenadante transparente a un matraz volu-
métrico de 1 O ml y diluir con Solución inhibidora de alii-
nasa a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
[NOTA-La aliína presenta dos picos principales que re-
presentan sus diastereómeros.]
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
cada uno de los picos principales
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Con una jeringa volumétrica, transferir O, 1 ml de la So-
lución muestra o de la Solución estándar a sendos viales
con tapa de septo y agregar 0,5 ml del Reactivo de
derivatización a cada vial. Permitir un tiempo de reac-
ción de no menos de 2 minutos antes de inyectar en
el cromatógrafo. Registrar los cromatogramas y medir
las áreas de los picos de diastereómeros de ali1na.
Calcular el porcentaje de aliína en la porción de Ex-
tracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru!rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de aliína de la Solución muestra
rs = áreas de los picos de diastereómeros de aliína
de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Aliína USP en la Solución
estándar (mg/ml)
V = volumen de Solución muestra (ml)
W = peso de Extracto en Polvo de Ajo usado para
preparar la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 4,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método I (231 ): No más de 1 o ppm
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ACTIVIDAD DE ALllNASA
Solución inhibidora de aliinasa, Solución A, Solución
amortiguadora, Reactivo de derivatización, Fase mó-
vil, Solución estándar, Sistema cromatográfico y Aná-
lisis: Proceder según se indica en la prueba de Conte-
nido de Aliína.
Solución muestra: Incubar 200 mg de Extracto en
Polvo con 20 ml de agua a temperatura ambiente du-
rante 5 minutos. Inmediatamente después de la incuba-
ción, agregar 80,0 ml de Solución inhibidora de aliinasa,
mezclar y centrifugar.
Criterios de aceptación: El área del pico de aliína de la
Solución muestra es no más de 1 % del área del pico de
aliína de la Solución estándar.
USP 37
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método 11 (611): No más de
0,5%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de Agua (561 ):
No más de 5,0%
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botánicos (565), Envasado y Almacenamiento y Residuos de
Plaguicidas.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, en un lugar fresco. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. La eti-
queta también indica el contenido de aliína, el disolvente
o mezcla de disolventes de extracción usados para la pre-
paración y la relación entre el material vegetal crudo ini-
cial y el Extracto en Polvo. Cumple con los requisitos en
Extractos Botánicos (565), Etiquetado.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Aliína USP
ER L-Metionina USP
Extracto Fluido de Ajo
DEFINICIÓN
El Extracto Fluido de Ajo se prepara según se indica a conti-
nuación. Empapar 1000 g de Ajo, entero o en rodajas, en
un volumen de una mezcla de agua y alcohol (entre
80:20 y 50:50) suficiente para cubrir los dientes. Almace-
nar en un envase adecuado durante un periodo suficiente
para extraer los componentes, evitando cualquier conta-
minación, y luego filtrar. Concentrar el filtrado, si fuera
necesario, a la temperatura más baja posible y agregar
suficiente agua o alcohol para que el producto alcance
1000 mL. [NOTA-Completar la extracción puede tomar
30 días.]
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Columna de extracción: Usar una columna de extrac-
ción en fase sólida que contenga bencenosulfonilpropil
unido a gel de sílice en la forma ácida con una relación
entre la masa del sorbente y el volumen de la columna
de 1 g por 6 mL o equivalente. Acondicionar la co-
lumna antes de usar lavando con 1 O mL de metanol y
1 O mL de agua. [NOTA-No dejar que la columna se
seque.]
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER S-Alil-L-cisteína
USP en una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solución muestra: Mezclar 1 mL de Extracto Fluido y
5 mL de agua, y transferir a la Columna de extracción.
Dejar que escurra y desechar el eluato. Lavar la co-
lumna con 1 O mL de agua y 1 O mL de metano!, dese-
chando los eluatos. Eluir la fracción de aminoácido con
3 mL de solución de hidróxido de amonio en metano!
(7 en 100) y recoger el eluato.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Acetato de etilo, metano!, acetona, ácido
acético glacial y agua (10:4:3:1 :3)
Solución reveladora: Yodoplatinato SR
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase móvil se evapore. Rociar con
Solución reveladora y observar la placa.
Suplementos Dietéticos /Ajo 5831
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta, entre varias manchas amarillas
sobre la placa púrpura, una mancha amarilla a un valor
Rf de aproximadamente 0,4 correspondiente al de la
mancha amarilla obtenida en el cromatograma de la
Solución estándar (presencia de S-alil-L-cisteína).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE S-ALIL-L-CISTEÍNA
Fase móvil: Transferir 15,8 g de citrato de sodio dihi-
drato a 250 mL de agua y agregar cuidadosamente
10,5 mL de ácido clorhídrico. Con ayuda de un medi-
dor de pH, ajustar con hidróxido de sodio 6 N a un pH
de 4,0. Diluir con agua hasta 1000 mL y mezclar.
Reactivo de derivatización: Disolver 0,8 g de o-ftalal-
dehído en 2 mL de 2-mercaptoetanol. Agregar a una
solución que contenga 24,70 g de ácido bórico y
22,35 g de hidróxido de potasio en 1000 mL de agua, y
mezclar.
Solución de reactivación: Hidróxido de sodio 0,2 N.
Preparar disolviendo 0,8 g de hidróxido de sodio en
100 mL de agua.
Solución estándar: 0,01 mg/mL de ER S-Alil-L-cisteína
USP en agua
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Extracto Fluido, pesados con exactitud, a un matraz
volumétrico de 100 mL, diluir con solución de ácido tri-
cloroacético (5 en 1 00) a volumen y mezclar. Centrifu-
gar durante 5 minutos y filtrar el sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Fluorométrico; longitud de onda de excita-
ción de 340 nm y longitud de onda de emisión de
455 nm
Columna: 4,6 mm x 12 cm; relleno L1 7
Temperatura de la columna: 40º
Volumen de inyección: 1 O µL
[NOTA-La Fase móvil y la Solución de reactivación se
bombean por separado, cada una a una velocidad de
0,4 ml/min, usando bombas conectadas a los brazos
opuestos de una T. La salida de la T se conecta al
inyector y a la columna cromatográfica. Conectar la
salida de la columna a una T, cuyo brazo opuesto está
conectado a un tubo desde el cual se bombea cons-
tantemente el Reactivo de derivatización a través del
sistema a una velocidad de 0,6 mL/min. Conectar la
salida de la T a un espiral de reacción de teflón post-
columna, de 0,5 mm x 2,0 m, mantenida a 40º. Co-
nectar la salida del espiral de reacción al detector. Pro-
gramar el sistema para que administre la Fase móvil
durante 1 O minutos, la Solución de reactivación durante
los siguientes 6 minutos y la Fase móvil durante los 24
minutos remanentes antes de la siguiente inyección.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): 2,5-4,5
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
S-alil-L-cisteína
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de S-alil-L-cisteína en inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de S-alil-L-cisteína (C 6 H11 SN) en la
porción de Extracto Fluido tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (VI W) x 100
ru = altura del pico de S-alil-L-cisteína de la Solución
muestra
rs = altura del pico de S-alil-L-cisteína de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER S-Alil-L-cisteína USP en la
Solución estándar (mg/mL)
5832 Ajo / Suplementos Dietéticos
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Extracto Fluido usado para preparar la
Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 0,05% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 1 ppm o ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 103 ufc/
mL, y el recuento total combinado de hongos filamento-
sos y levaduras no excede de 102 ufs:/ml.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las prueba~ para ~eterminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchw co/1.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• RESIDUO DE EVAPORACIÓN: Proceder según se indica en
Extractos Botánicos (565): No menos de 20% de la por-
ción de Extracto Fluido tomada permanece como
residuo.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 3,0% , Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561) No más de 0,2%
• PH (791): 4,5-6,5
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Extractos
Botánicos (565), Requisitos Farmacopeicos Generales, sec-
ciones de Envasado y Almacenamiento, Etiquetado, Resi-
duos de Plaguicidas y Contenido de Alcohol para Extractos
Líquidos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER S-Alil-L-cisteína USP
Ajo, Tabletas de Liberación Retardada
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Liberación Retardada de Ajo se preparan a
partir de Ajo en Polvo o Extracto en Polvo de Ajo y con-
tienen no menos de 90,0% y no más de 140,0% de la
cantidad declarada de aliína (C6H11 N03S) y no menos de
90,0% y no más de 140,0% de la cantidad declarada de
alicina potencial (C6H100S2).
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER L-Metionina
USP
Solución estándar B: 0,5 mg/mL de ER Aliína USP, en
una mezcla de metanol y agua (1 :1)
Solución muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente a 30 mg de aliína, a un
matraz volumétrico de 100 ml. Agregar 70 mL de una
mezcla de metanol y agua (1 :1 ), agitar y centrifugar.
Concentrar hasta un volumen pequeño (aproximada-
mente 5 mL) usando un evaporador rotatorio.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Volumen de aplicación: 20 µL, aplicados por separado
en bandas de 1O mm
Fase móvil: Alcohol butílico, alcohol n-propílico, ácido
acético glacial y agua (3:1 :1 :1)
Solución reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N (19:1)
USP 37
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo. Rociar con
Solución reveladora, calentar a 100º- l 05º durante 1O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
Rr de 0,89; una zona rosada con un valor Rr de 0,5 y
que corresponde en color y valor Rr a la obtenida del
cromatograma de la Solución estándar A; una zona ro-
sada con un valor Rr de 0,43; una zona anaranjada in-
tensa con un valor Rr de 0,38; una zona violeta rosada
con un valor Rr de 0,3 y que corresponde en color y
valor Rr a la del cromatograma de la Solución estánda.r
B; y zonas adicionales de color anaranjado rosado ubi-
cadas muy cerca una de otra justo por debajo de la
zona atribuida a aliína en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Aliína.
un pico de aliína correspondiente a uno de los picos del
par de diasteroisómeros de la Solución estándar.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ALIÍNA
Solución inhibidora de aliinasa: Disolver 109 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 100,0 mL
de a~ua.
Solución A: Disolver 1,24 g de fosfato monobásico de
sodio en 100 mL de agua, ajustar con hidróxido de so-
dio 0,2 M a un pH de 7, 1 y diluir con agua hasta
200,0 ml.
Solución amortiguadora: Disolver l, 38 g de fosfato
monobásico de sodio en 100 mL de agua, ajustar con
hidróxido de sodio 0,2 M a un pH de 9,5 y diluir con
agua hasta 200,0 ml.
Reactivo de derivatización: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehído en 5 mL de metanol, agregar 100 µL de t-
butiltiol y diluir con Solución amortiguadora hasta
50 ml. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasional-
mente opaco durante la preparación. Almacenar a tem-
peratura ambiente y usar dentro de la primera semana.]
Fase móvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solución A (25: 2,9: 2.2: 69,9)
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Aliína USP en
una mezcla de metanol y agua (1 :1) Con una jeringa,
transferir O, 1 mL de esta solución a un vial con tapa de
septo y agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatización ..
Permitir un tiempo de reacción de no menos de 2 mi-
nutos antes de inyectar en el cromatógrafo.
Solución muestra: Pulverizar un número contado de
Tabletas, equivalente a 50 mg de aliína, con un mortero
y mano de mortero. Tra~~ferir una cantidad de P?l".'o,
equivalente a 5 mg de aluna, a un matraz volumetnco
de 100 mL. Agregar 70 mL de Solución inhibidora de alii-
nasa y agitar durante 1 minuto. Diluir con Solución in_hi-
bidora de aliinasa a volumen. Con una jeringa volume-
trica, transferir O, 1 mL de esta solución a un vial con
tapa de septo y agregar 0,5 mL del Reactivo de derivati-
zación. Permitir un tiempo de reacción de no menos de
2 minutos antes de inyectar en el cromatógrafo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
[NOTA-La aliína presenta dos picos principales que re-
presentan sus diastereómeros.]
USP 37
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
cada uno de los picos principales
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Registrar los cromatogramas y medir las áreas
de los picos de diastereómeros de aliína.]
Calcular el porcentaje de aliína en la porción de Table-
tas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = área del pico de aliína de la Solución muestra
rs = suma de las áreas de los picos de
diastereómeros de aliína de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Aliína USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de aliína en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90%-140,0%
• CONTENIDO DE ALICINA POTENCIAL
Solución inhibidora de aliinasa: Disolver 1 09 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 100,0 ml
de agua.
Solución de aliinasa cruda: Homogeneizar 5 g de dien-
tes de ajo crudos con 25 ml de agua. Filtrar y extraer
tres veces con 50 ml de terc-butil metil éter. Desechar
la fase orgánica y retirar el disolvente residual de la fase
acu<?sa medi?nte evaporación rotatoria al vacío durante
5 minutos. Filtrar y almacenar congelada en viales pe-
queños. [NOTA-Esta solución es estable durante 6 me-
ses cuando se almacena según se indica. Descongelar a
temperatura ambiente justo antes de su uso.]
Fase móvil: Metanol y agua (3:2)
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Aliína
USP
Solución estándar: Transferir 1,0 ml de la Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 5 ml que
contenga 1 00 µL de Solución de aliinasa cruda y dejar
en reposo durante 5 minutos a temperatura ambiente.
Diluir con agua a volumen y pasar a través de un filtro
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Sol.u.ción mues.tra: Tra~sferir el equivalente a 5 mg de
~hc1na potencial, a partir de Tabletas reducidas a polvo
fino (no menos de 20), a un matraz volumétrico de
200 ml y agregar 25 ml de agua. Incubar a tempera-
tura ambiente durante exactamente 30 minutos. Dete-
ner la reacción enzimática diluyendo con Solución inhibi-
dora de aliinasa a volumen. Centrifugar una porción de
esta solución, transferir 1,0 ml del sobrenadante a un
matraz volumétrico de 5 ml y diluir con agua a
volumen.
Solución blanco: 1 00 µL de Solución de aliinasa cruda
diluida con agua hasta 1 ml.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 240 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu-
ción blanco
[NOTA-El pico de alicina se identifica comparando los
cromatogramas de la Solución blanco y la Solución
estándar.J
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,0 entre el pico de alicina
y el pico precedente a un tiempo de retención rela-
Suplementos Dietéticos/ Ajo 5833
tivo de 0,80 (tiosulfinatos de alil metilo), Solución
muestra
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar Solución muestra y Solu-
ción blanco '
Calcular el porcentaje de alicina potencial en la por-
ción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C5/Cu) x (M, 7/M,2) x 100
ru = área del pico de alicina de la Solución muestra
corregida por la respuesta de la Solución
blanco
r, = área del pico de alicina de la Solución estándar
corregida por la respuesta de la Solución
blanco
C, = concentración de ER Aliína USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de alicina potencial en
la Solución muestra (µg/ml)
M,1 = peso molecular de alicina, 1 62,26
M,2 = dos veces el peso molecular de aliína, 354,42
Criterios de aceptación: 90,0%-140,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• LIBERACIÓN DE ALICINA: Proceder según se indica en Diso-
lución (711) para el Método A en Aparato 1 y Aparato 2,
Formas Farmacéuticas de Liberación Retardada. Colocar un
número de Tabletas, equivalente a 5 mg de alicina poten-
cial, en cada vaso.
Aparato 2: 1 00 rpm
Tiempo: 60 minutos para la Etapa amortiguada
Solución de aliinasa cruda, Fase móvil, Solución
~la~co y Sistema cromatográfico: Proceder según se
indica en la prueba de Contenido de Alicina Potencia/.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Aliína
USP
Solución estándar: Transferir 1,0 ml de la Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 5 ml que
contenga 1 00 µL de Solución de aliinasa cruda y dejar
en reposo durante 5 minutos a temperatura ambiente.
Diluir con agua a volumen y pasar a través de un filtro
de membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
Solución muestra: Transferir 1,0 ml de la solución en
análisis a un tubo de ensayo que contenga 50 µL de
solución de hemiclorhidrato de carboximetoxilamina
0,21 M.
[NOTA-La solución debe transferirse inmediatamente
una vez retirada del vaso de disolución para inhibir la
enzima aliinasa.]
Volumen de inyección: 1 00 µL
Análisis
[NOTA-No llevar a cabo la determinación de alicina en
la Etapa ácida.]
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de alicina potencial liberada en
la Etapa amortiguada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs x D x VIL) x (M,¡/M, 2) x 100
ru = área del pico de alicina de la Solución muestra
rs = área del pico de alicina de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Aliína USP en la Solución
estándar (µg/ml)
D = factor de dilución de la Solución muestra,
1,050 (1 ml de la Solución muestra + 50 µL
de solución de hemiclorhidrato de
carboximetoxilamina 0,21 M)
V = volumen de medio final, 1000 ml
L = cantidad declarada de alicina potencial
(µg/Tableta)
= peso molecular de alicina, 162,26
= dos veces el peso molecular de aliína, 354,42
5834 Ajo /Suplementos Dietéticos
Tolerancias: Cumplen con los requisitos de la Tabla de
Aceptación 4 en Disolución (711 ). lNOTA-Q es el por-
centaje de la cantidad declarada de alicina potencial li-
berada únicamente en la Etapa amortiguada.]
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ACTIVIDAD DE ALllNASA
Solución inhibidora de aliinasa, Solución A, Solución
amortiguadora, Reactivo de derivatización, Fase mó-
vil, Solución estándar y Sistema cromatográfico:
Proceder según se indica en la prueba de Contenido de
Aliína.
Solución muestra: Transferir el equivalente a 5 mg de
aliína, a partir de Tabletas reducidas a polvo fino (no
menos de 20), a un matraz volumétrico de 100 mL y
agregar 25 mL de agua. Incubar a temperatura am-
biente durante exactamente 5 minutos. Detener la reac-
ción enzimática diluyendo con Solución inhibidora de
aliinasa a volumen. Centrifugar una porción de esta so-
lución y usar una jeringa volumétrica para transferir
O, 1 mL del sobrenadante a un vial con tapa de septo.
Agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatización y permitir
un tiempo de reacción de no menos de 2 minutos an-
tes de inyectar en el cromatógrafo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Proceder según se indica en la prueba de Contenido de
Aliína.
Criterios de aceptación: El área del pico de aliína de la
Solución muestra es no más de 1% del área del pico de
aliína de la Solución estándar.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
impermeables.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del que se prepararon las Tabletas. Etiquetar indi-
cando la cantidad de aliína total, en µg/Tableta, y la can-
tidsid de alicina potencial, en µg/Tableta.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Aliína USP
ER L-Metionina USP
Alanina-ver Alanina en Monografías
Generales
Agregar lo siguiente:
•Holas de Albahaca Santa
DEFINICIÓN
Las Hojas de Albahaca Santa consisten en las hojas secas de
Ocimum tenuiflorum L. (Fam. Lamiaceae). Contienen no
menos de 0,5% de triterpenos, calculados como la suma
de ácido oleanólico y ácido ursólico, con respecto a la
materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Las Hojas de Albahaca Santa cumplen con los requisi-
tos de Pruebas E,specíficas, Características Botánicas.
• B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA , muestra no presenta bandas de color anaranjado amari-
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Acido Rosmarí-
nico USP en metano!
Solución estándar B: 1O mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metanol
USP 37
Solución muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 1 g de Hojas de Albahaca Santa, reducidas a
polvo fino, en 1O mL de metanol durante 1O minutos,
centrifugar y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar una
porción del sobrenadante para la prueba de Identifica-
ción C.]
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 2 µL de Solución estándar A,
4 µL de Solución estándar B y 8 µL de Solución muestra,
en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, ácido fór-
mico y agua (15:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización A: Solución de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo de 5 mg/ml en acetato de etilo
Reactivo de derivatización B: Solución de polietilen-
glicol 400 de 50 mg/mL en diclorometano
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada de alta resolución adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafía (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cámara y secar al aire. Calentar la placa a
100º durante 3 minutos, derivatizar la placa mientras
esté tibia con Reactivo de derivatización A y secar al
aire. Luego, derivatizar con Reactivo de derívatización 8,
secar al aire y observar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta, en el tercio superior, una banda de
color azul fluorescente que corresponde a la banda de-
bida a ácido rosmarínico en el cromatograma de la So-
lución estándar A, y una banda de color azul fluores-
cente menos intensa directamente sobre la banda
debida a ácido rosmarínico, correspondiente a ácido ca-
feico, y una banda de color rojo por encima de la
banda de ácido cafeico. Las bandas debidas a ácido ros-
marínico y ácido cafeico están claramente separadas. El
cromatograma de la Solución estándar B también pre-
senta la banda más intensa, una banda de color na-
ranja, en el tercio inferior del cromatograma; y dos ban-
das de color verdoso en el tercio medio del
cromatograma.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes a bandas similares en el cromatograma de la
Solución estándar 8: una banda de color azul fluores-
cente a un valor RF correspondiente a la banda de ácido
rosmarínico; una banda de color azul fluorescente me-
nos intensa a un valor RF por encima del de la banda de
ácido rosmarínico, correspondiente a ácido cafeico; una
banda de color rojo por encima de la banda de ácido
cafeico; una banda de color rojo en el frente de la fase
móvil debida a clorofila; dos bandas de color verdoso
en el tercio medio del cromatograma; y la banda más
intensa, una banda de color anaranjado, con una banda
de color azul justo por encima en el tercio inferior del
cromatograma (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca y hojas de orégano, todas las
cuales presentan dos bandas de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma; y las hojas de bálsamo
de melisa que carecen de esta banda). La Solución
llento en la sección media del cromatograma (a diferen-
cia de hojas d~ romero y hojas tomillo).
• C. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA ,
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Acido Ursólico
USP en metanol
USP 37
Solución estándar B: 1,0 mg/mL de eugenol en
metano!
Solución estándar C: 1,0 mg/mL de metileugenol en
metano!
Solución estándar D: 1O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solución muestra: Usar la solución preparada en la
prueba de Identificación B.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 2 µL de Solución estándar A,
de Solución estándar B y de Solución estándar C, 4 µL
de Solución estándar D y 8 µL de Solución muestra en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85:15)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriar en un
baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lenta y cuidadosamente 1O mL de ácido acé-
tico y 5 mL de ácido sulfúrico al metano! helado y
mezclar bien. De¡·ar que la mezcla se enfríe a tempera-
tura ambiente y uego agregar 0,5 mL de p-
anisaldeh ído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada de alta resolución adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafía ( 621)). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cámara, secar al aire, derivatizar la placa
con Reactivo de derivatización, calentar a 100º durante
3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda de color violeta. La Solución estándar B y
Solución estándar C presentan cada una una banda ver-
dosa. La Solución estándar D presenta una banda de
color púrpura por encima de la banda de color verde
correspondiente a eugenol o metileugenol en la Solu-
ción estándar o la Solución estándar C.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta la banda más intensa, una banda
de color violeta a un valor RF correspondiente a la
banda de ácido ursólico en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A y la Solución estándar D, y una banda de
color verdoso a un valor RF correspondiente a la banda
de eugenol o la banda de metileugenol en los cromato-
gramas de la Solución estándar B o la Solución estándar
C. [NOTA-Las Hojas de Albahaca Santa pueden presen-
tarse en dos quimiotipos, uno caracterizado por la pre-
sencia de eugenol y el otro por la presencia de
metileugenol.]
•D. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Triterpenos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta dos picos a los tiempos de reten-
ción correspondientes a los picos de ácido ursólico y
ácido oleanólico de las Soluciones estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE TRITERPENOS
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solución
de acetato de amonio de 2,5 mg/mL en agua (67:33)
Suplementos Dietéticos /Albahaca Santa 5835
Solución estándar A: 0, 1 mg/mL de ER Ácido Ursólico
USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera necesa-
rio, hasta disolver.
Solución estándar B: 4,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!. Someter a
ultrasonido, si fuera necesario, hasta disolver. Antes de
la inyección, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Hojas de Albahaca Santa, reducidos a polvo fino y
pesados con exactitud, a un matraz de fondo redondo
de 100 mL equipado con un condensador de reflujo.
Agregar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un
baño de agua durante 20 minutos, enfriar a tempera-
tura ambiente y decantar el sobrenadante. Repetir hasta
que el último extracto sea incoloro. Combinar los ex-
tractos, filtrar, concentrar al vacío y ajustar con metano!
hasta un volumen de 100 ml. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 µm
Velocidad de flujo: 0,3 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP usado.
Resolución: No menos de 1,3 entre los picos de
ácido oleanólico y ácido ursólico, Solucion estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2% para el
P.ico de ácido ursólico, Solución estándar A
Ana lisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, la
Solución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Alba-
haca Santa USP usado, identificar el tiempo de reten-
ción de los picos correspondientes a ácido oleanólico y
ácido ursólico en el cromatograma de la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de triterpenos, ácido oleanólico y
ácido ursólico en la porción de Hojas de Albahaca
Santa tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = suma de las áreas de los picos de ácido
oleanólico y ácido ursóltco de la Solución
muestra
rs = área del pico de ácido ursólico de la Solución
estándar A
Cs = concentración de ácido ursólico en la Solución
estándar A (mg/mL)
V =volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de Hojas de Albahaca Santa tomadas
para preparar la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 0,5%, con res-
pecto a la sustancia seca
5836 Albahaca Santa / Suplementos Dietéticos
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
fvlercurio: No más de) ,O µg/g,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumplen con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , temperatura ambiente.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia co/í.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Las hojas son pecioladas; simples;
oblongo elípticas a elípticas; ápice agudo u obtuso;
margen serrado u ocasionalmente entero; base aguda u
obtusa; pubescente, más tricomas en la superficie infe-
rior alrededor de su nervadura central; venas reticula-
das, venas más prominentes en la superficie inferior; pe-
cíolo cilíndrico, ligeramente acanalado en la superficie
superior, con tricomas. La superficie superior es de color
verde; la superficie inferior es de color verde pálido;
olor aromático característico. El artículo farmacopeico
consiste en hojas quebradizas, secas y de color verde
amarillento.
Microscópicas
Sección transversal de la hoja: La lámina es dorsiven-
tral; la epidermis superior y la epidermis inferior, cada
una con una sola capa de células rectangulares cubier-
tas con una cutícula delgada, presentan gran cantidad
de tricomas de recubrimiento y glandulares, más sobre
la epidermis inferior; los tricomas de recubrimiento son
uniseriados, unicelulares a multicelulares, a menudo
curvados, con células basales abultadas; los tricornas
glandulares son de varios tamaños y formas, en su ma-
yoría son sésiles con una cabeza de 4 células, unos
pocos con un pedicelo unicelular, algunos con un pe-
dicelo de 1 a 2 células y una cabeza de 1 a 2 células;
una capa de células en empalizada bajo la epidermis
superior en la región de la lámina; 2-4 hileras de célu-
las colenquimáticas ba¡·o cada epidermis en la región
de la nervadura centra ; un arco de haces vasculares
colaterales conjuntos en el centro, y 2-4 parches de
haces de floema o pequeños haces vasculares rudi-
mentarios por encima del arco; y células de parén-
quima esponjoso ricas en contenido de oleorresina.
Sección transversal del pecíolo: Similar a la sección
transversal a través de la nervadura central de la hoja;
la epidermis superior y la epidermis inferior, cada una
con una sola capa de células rectangulares cubiertas
con cutícula delgada, presentan gran cantidad de tri-
comas de recubrimiento y glandulares; 2-4 hileras de
células colenquimáticas bajo cada epidermis; un arco
de haces vasculares colaterales conjuntos en el centro,
una hilera de pequeños haces vasculares rudimentarios
por encima del arco que da hacia la cara superior y un
haz vascular aislado en cada extremo del arco; y célu-
l9s de parénquima espsrnjoso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 5% de tallos; no más de 2,0% de
otra materia extraña
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Hojas de Albahaca Santa reducidas a
polvo fino
USP 37
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 1 0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2 g de Hojas de Albahaca Santa reducidas a
polvo fino
Cri,terios de aceptación~ No más de 18% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 2-4 g de Hojas de Albahaca Santa reducidas a
polvo fino
Criterios de aceptación: No más de 3%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~xtracto en Polvo de Albahaca Santa USP
ER ~cido Rosmarínico USP
ER Acido Ursólico USP ... usp31
Agregar lo siguiente:
"'Hojas de Albahaca Santa En Polvo
DEFINICIÓN
Las Hojas de Albahaca Santa En Polvo consisten en las hojas
secas pulverizadas de Ocímum tenuíf/orum L. (Fam. Lamia-
ceae). Contienen no menos de 0,5% de triterpenos, cal-
culados como la suma de ácido oleanólico y acido ursó-
lico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Las Hojas de Albahaca Santa En Polvo cumplen con
los requisitos de Pruebas Específicas, Características
Botánicas.
• B. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Ácido Rosmarí-
nico USP en metano!
Solución estándar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solución muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 1 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo en
1O mL de metano! durante 1O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar una porción del
sobrenadante para la prueba de ldentificacion C.]
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 2 µL de Solución estándar A,
4 µL de Solución estándar B y 8 µL de Solución muestra,
en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, ácido fór-
mico y agua (15:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización A: Solución de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo de 5 mg/mL en acetato de etilo
Reactivo de derivatización B: Solución de polietilen-
glicol 400 de 50 mg/mL en diclorometano
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
USP 37
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada de alta resolución adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafía (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cámara, secar al aire, calentar a 100º du-
rante 3 minutos, derivatizar la placa mientras esté tibia
con Reactivo de derivatización A, secar al aire, luego
derivatizar con Reactivo de derivatización A, secar al aire
y observar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta, en el tercio superior, una banda de
color azul fluorescente que corresponde a la banda de-
bida a ácido rosmarínico en el cromatograma de la So-
lución estándar A, y una banda de color azul fluores-
cente menos intensa directamente sobre la banda
debida a ácido rosmarínico, correspondiente a ácido ca-
feico, y una banda de color rojo por encima de la
banda de ácido cafeico. Las bandas debidas a ácido ros-
marínico y ácido cafeico están claramente separadas. El
cromatograma de la Solución estándar B también pre-
senta la banda más intensa, una banda de color na-
ranja, en el tercio inferior del cromatograma; y dos ban-
das de color verdoso en el tercio medio del
cromatograma.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes a bandas similares en el cromatograma de la
Solución estándar B: una banda de color azul fluores-
cente a un valor RF correspondiente a la banda de ácido
rosmarínico; una banda de color azul fluorescente me-
nos intensa a un valor RF por encima del de la banda de
ácido rosmarínico, correspondiente a ácido cafeico; una
banda de color rojo por encima de la banda de ácido
cafeico; una banda de color rojo en el frente de la fase
móvil debida a clorofila; dos bandas de color verdoso
en el tercio medio del cromatograma; y la banda más
intensa, una banda de color anaranjado, con una banda
de color azul justo por encima en el tercio inferior del
cromatograma (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca y hojas de orégano, todas las
cuales presentan dos bandas de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma; y las hojas de bálsamo
de melisa que carecen de esta banda). La Solución
muestra no presenta bandas de color anaranjado amari-
llento en la sección media del cromatograma (a diferen-
cia de hojas d~ romero y hojas tomillo).
• C. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Ácido Ursólico
USP en metano!
Solución estándar B: 1,0 mg/mL de eugenol en
metano!
Solución estándar C: 1,0 mg/mL de metileugenol en
metanol
Solución estándar D: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metanol
Solución muestra: Usar la solución preparada en la
prueba de Identificación B.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 2 µL de Solución estándar A,
de Solución estándar B y de Solución estándar C, 4 µL
de Solución estándar D y 8 µL de Solución muestra en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85:15)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriar en un
Suplementos Dietéticos/ Albahaca Santa 5837
baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lenta y cuidadosamente 1O ml de ácido acé-
tico y 5 mL de ácido sulfúrico al metanol helado y
mezclar bien. De¡·ar que la mezcla se enfríe a tempera-
tura ambiente y uego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada de alta resolución adecuada y
secar al aire (ver Cromatowafía (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cámara, secar al aire, derivatizar la placa
con Reactivo de derivatización, calentar a 100º durante
3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda de color violeta. La Solución estándar B y
Solución estándar C presentan cada una una banda ver-
dosa. La Solución estándar D presenta una banda de
color púrpura por encima de la banda de color verde
correspondiente a eugenol o metileugenol en la Solu-
ción estándar o la Solución estándar C.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta la banda más intensa, una banda
de color violeta a un valor RF correspondiente a la
banda de ácido ursólico en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A y la Solución estándar D, y una banda de
color verdoso a un valor RF correspondiente a la banda
de eugenol o la banda de metileugenol en los cromato-
gramas de la Solución estándar B o la Solución estándar
C. [NOTA-Las Hojas de Albahaca Santa pueden presen-
tarse en dos quimiotipos, uno caracterizado por la pre-
sencia de eugenol y el otro por la presencia de
metileugenol.]
•D. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Triterpenos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta dos picos a los tiempos de reten-
ción correspondientes a los picos de ácido ursólico y
ácido oleanólico de las Soluciones estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE TRITERPENOS
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solución
de acetato de amonio de 2,5 mg/mL en sigua (67:33)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Ursólico
USP en metanol. Someter a ultrasonido, si fuera necesa-
rio, hasta disolver.
Solución estándar B: 4,0 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metanol. Someter a
ultrasonido, si fuera necesario, hasta disolver. Antes de
la inyección, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Hojas de Albahaca Santa En Polvo, pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 100 ml
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
50 mL de metanol, someter a reflujo en un baño de
agua durante 20 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el
último extracto sea incoloro. Combinar los extractos, fil-
trar, concentrar al vacío y ajustar el volumen hasta
100 mL con metanol. Antes de la inyección, pasar a
través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
5838 Albahaca Santa / Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1O cm; relleno L1 de 2,5 µm
Velocidad de flujo: 0,3 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP usado.
Resolución: No menos de 1,3 entre los picos de
ácido oleanólico y ácido ursólico, Solucion estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2%, deter-
minada a partir del pico de ácido ursólico en inyec-
ciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, la
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Alba-
haca Santa USP usado, identificar el tiempo de reten-
ción de los picos correspondientes a ácido -0leanólico y
ácido ursólko en el cromatograma de la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de triterpenos, áeido oleanólico y
ácido ursólko en la porción de Hojas c;le Albahaca
Santa En Polvo tomada:
Resultado= (ru/rS) x Cs x (V/M >< 100
ru =suma de las áreas de los picos d~ á<:idQ
olean61icQ y ácido t,1rsólu;;o en el
cromato9rama de la SoluciÓl'J ~strt;l
rs == área del pico de áddo ursól~~Q e~ }i~I . .
Cs
cromatograma de la Solucion estandqr A .
= concentra<::íón de ácido ursólico en la .Saktción
estándar A {mg/ml)
V :::: volumen d(;! la Solución .fr!L/estrq
W =pesó cte. !-lajas de Albahaca ·Sa.
tomadas para preparar la Sol
(mg)
Criterios de aceptación: No menos de 0,5%, con res-
pecto a la sustancia seca
CONTAMINANTES
• .fMpuREZAS ·ELEMENTA!.U-PROOlDIMIENros ·<233)
c;rtterios .de aceptación
Arsénico: No m~s de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g
• ARTÍcuLos DE ORIGEN BoTÁN1co, Método General {JQl'.O Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumplen cqn. los
requisitos.
• PRuEBAS DI RECUENTO MICRO..ANO (2021): El re<;uento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
103 ufc/g. , (placas para HPTLC)
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPEClfKOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia colí.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BoTÁNICAS
Macroscópicas: Polvo de color verde amarillento; olor
aromático característico
Microscópicas: Presenta fra~mentos de paredes anticli-
nales rectas de células epidermicas en la superficie supe-
rior y ligeramente ondufadas en la superficie inferior,
con estomas diacíticos, con tricomas de recubrimiento y
USP 37
glandulares; tricomas de recubrimiento, uniseriados,
unicelulares a multicelulares, a menudo curvados, con
células basales abultadas; tricomas glandulares con una
cabeza de 4 células y de 1 a 2 célufas; fibras; y tejido
vascular.
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
CrLterios de aceptación~ No más de 10%
• ARTICULOS DE ORIGEN BoTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
Crtterios de aceptación~ No más de 18% , .
• ARTICULOS DI ORIGEN BOTANKO, Cenizas Insolubles en Actdo
(561)
Muestra: 2-4 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
Criterios de aceptación: No más de 3%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
plaJlta de la que se obtuvo el artículo.
• ESTANDARIS DE REFERENCIA USP (11)
ER ~xtracto en Polvo de Albahaca Santa USP
ER ~cido Rosmarínico USP
ER Acido Ursólico USP•usP11
Agtegar lo siguiente:
~EX.tracto en Polvo de Hojas t:le ·
Albahaca Santa . . .
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Hojas de Albahaca Santa se P~P.ara
a .partir de Hojas de Albahaca Santa me.dia. nte extr1ccíón
con mezclas de alcohohagua o metaoohagua..• Contiene
no menos de.90,0% y no más de HO,(>% de la tar:itldad
dedarada de triterpenos, calculados como la suma de
ácido oleanólico y ácido ursólkoF con respecto a la .n'la-
teria seca. Puede contener sustancias.agregadasade<i.i.ta'-
das como vehícutos.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. CROMA.TOGRAFIA EN CAPA DELGADA ,
Solución estándar A: 0,5 mg/ml de ER AcidQ .Rost:l'íarí-
nico USP en metanol
Solución estándar B: 1O mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solución muestra: 1Omg/ml de Extracto en Polvo de
Hojas de Albahaca Santa en metanol. [NOTA-Reservar
una porción para su uso en la prueba de Identificación
B.]
Sistema cromatográfico
Adsor15ente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
Volumen de aP,licación: 2 µL de Solución estándar A,
4 µL de Solución estándar B y 8 µL de Solución muestra,
en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, ácido fór-
mico y agua (15:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización A: Solución de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo de 5 mg/ml en acetato de etilo
USP 37
Reactivo de derivatización B: Solución de polietilen-
glicol 400 de 50 mg/mL en diclorometano
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada de alta resolución adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafía (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cámara, secar al aire, calentar a 100º du-
rante 3 minutos, derivatizar la placa mientras esté tibia
con Reactivo de derivatización A, secar al aire, luego
derivatizar con Reactivo de derivatización A, secar al aire
y observar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta, en el tercio superior, una banda de
color azul fluorescente que corresponde a la banda de-
bida a ácido rosmarínico en el cromatograma de la So-
lución estándar A, y una banda de color azul fluores-
cente menos intensa directamente sobre la banda
debida a ácido rosmarínico, correspondiente a ácido ca-
feico, y una banda de color rojo por encima de la
banda de ácido cafeico. Las bandas debidas a ácido ros-
marínico y ácido cafeico están claramente separadas. El
cromatograma de la Solución estándar B también pre-
senta la banda más intensa, una banda de color na-
ranja, en el tercio inferior del cromatograma; y dos ban-
das color verdoso en el tercio medio del cromatograma.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes a bandas similares en el cromatograma de la
Solución estándar B: una banda de color azul fluores-
cente a un valor RF correspondiente a la banda de ácido
rosmarínico; una banda de color azul fluorescente me-
nos intensa a un valor RF por encima del de la banda de
ácido rosmarínico, correspondiente a ácido cafeico; una
banda de color rojo por encima de la banda de ácido
cafeico; una banda de color rojo en el frente de la fase
móvil debida a clorofila; dos bandas de color verdoso
en el tercio medio del cromatograma; y la banda más
intensa, una banda de color anaranj·ado, con una banda
de color azul justo por encima en e tercio inferior del
cromatograma (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca y hojas de orégano, todas las
cuales presentan dos bandas de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma; y las hojas de bálsamo
de melisa que carecen de esta banda). La Solución
muestra no presenta bandas de color anaranjado amari-
llento en la sección media del cromatograma (a diferen-
cia de hojas d~ romero y hojas tomillo).
• B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Ácido Ursólico
USP en metano!
Solución estándar B: 1,0 mg/mL de eugenol en
metano!
Solución estándar C: 1,0 mg/mL de metileugenol en
metano!
Solución estándar D: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metanol
Solución muestra: Usar la solución preparada en la
prueba de Identificación A.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de particula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 2 µL de Solución estándar A,
de Solución estándar B y de Solución estándar C, 4 µL
de Solución estándar D y 8 µL de Solución muestra en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Suplementos Dietéticos /Albahaca Santa 5839
Fase móvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85:15)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriar en un
baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lenta y cuidadosamente 1O mL de ácido acé-
tico y 5 mL de ácido sulfúrico al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfríe a tempera-
tura ambiente y luego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada de alta resolución adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafía (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cámara, secar al aire, derivatizar la placa
con Reactivo de derivatización, calentar a 100º durante
3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda de color violeta. La Solución estándar B y
Solución estándar C presentan cada una una banda ver-
dosa. La Solución estándar D presenta una banda de
color púrpura por encima de la banda de color verde
correspondiente a eugenol o metileugenol en la Solu-
ción estándar o la Solución estándar C.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta la banda más intensa, una banda
de color violeta a un valor RF correspondiente a la
banda de ácido ursólico en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A y la Solución estándar D, y una banda de
color verdoso a un valor Rr correspondiente a la banda
de eugenol o la banda de metileugenol en los cromato-
gramas de la Solución estándar B o la Solución estándar
C. [NOTA-Las Hojas de Albahaca Santa pueden presen-
tarse en dos quimiotipos, uno caracterizado por la pre-
sencia de eugenol y el otro por la presencia de
metileugenol.]
•C. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Triterpenos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta dos picos a los tiempos de reten-
ción correspondientes a los picos de ácido ursólico y
ácido oleanólico de las Soluciones estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE TRITERPENOS
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solución
de acetato de amonio de 2,5 mg/mL en sigua (67:33)
Solución estándar A: 0, 1 mg/mL de ER Acido Ursólico
USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera necesa-
rio, hasta disolver.
Solución estándar B: 4,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!. Someter a
ultrasonido, si fuera necesario, hasta disolver. Antes de
la inyección, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Una cantidad de Extracto en Polvo
de Hojas de Albahaca Santa, equivalente a 5 mg de tri-
terpenos, en 50 mL de metano!. Someter a ultrasonido,
si fuera necesario, hasta disolver. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
5840 Albahaca Santa / Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 µm
Velocidad de flujo: 0,3 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP usado.
Resolución: No menos de 1, 3 entre los picos de
ácido oleanólico y ácido ursólico, Solucion estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2%, deter-
minada a partir del pico de ácido ursólico en inyec-
ciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, la
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Alba-
haca Santa USP usado, identificar el tiempo de reten-
ción de los picos correspondientes a ácido oleanólico y
ácido ursólico en el cromatograma de la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de triterpenos, ácido oleanólico y
ácido ursólico en la porción de Extracto en Polvo de
Hojas de Albahaca Santa tomada:
P = (ru/rs) X (Cs/Cu) x 100
ru = suma de las áreas de los picos de ácido
oleanólico y ácido ursólico en el
cromatograma de la Solución muestra
rs = área del pico de ácido ursólico en el
cromatograma de la Solución estándar A
Cs = concentración de ácido ursólico en la Solución
estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de Hojas
de Albahaca Santa en la Solución muestra
(mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
triterpenos, ácido oleanólico y ácido ursólico en la
porción de Extracto en Polvo de Hojas de Albahaca
Santa tomada:
Resultado = (PI L) x 100
P = contenido de triterpenos, ácido oleanólico y
ácido ursólico, según se determinó
anteriormente (%)
L = cantidad declarada de triterpenos, ácido
oleanólico y ácido ursólico (%)
Criterios de aceptación: 90o/o-110% de la cantidad de-
clarada, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 ~tg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
USP 37
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 2,0 g de Extracto en Polvo de Hojas de Alba-
haca Santa
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta índica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~xtracto en Polvo de Albahaca Santa USP
ER ~cido Rosmarínico USP
ER Acido Ursólico USP .t.usP11
Andrografis
DEFINICIÓN
La Andrografis consiste en los tallos y hojas secos de Andro-
graphis paniculata (Burm. f.) Nees. Contiene no menos de
1,0% de lactonas diterpénicas, calculado con respecto a la
materia seca como la suma de andrografólido, neoandro-
grafólido, 14-desoxi-11, 12-dideshidroandrografólido y
andrograpanina.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar 1: Usar la Solución estándar A, pre-
parada según se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpénicas.
Solución estándar 2: Someter a ultrasonido una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Andrografis USP, equi-
valente aproximadamente a 15 mg de lactonas diterpé-
nicas, durante 10-15 minutos en 25 mL de metano!,
centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Usar la Solución madre de la muestra,
preparada según se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpénicas.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño de partícula promedio de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL, en bandas de 5-1 O mm
Fase móvil: Cloroformo, acetona y tolueno (2:2:1)
Solución reveladora: Mezcla de vainillina al 1 % en al-
cohol y ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar 1, Solución estándar 2 y
Solución muestra
Usar una cámara saturada. Desarrollar los cromatogra-
mas hasta que el frente de la fase móvil haya reco-
rrido aproximadamente 90% de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
1 00º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
tres zonas principales de color azul grisáceo con valores
Rr de aproximadamente 0,4; 0,6 y 0,8 que correspon-
den en posición y color a las zonas en la Solución están-
dar 2. La Solución estándar 1 presenta una zona de
color azul grisáceo correspondiente a andrografólido a
un Rr de aproximadamente 0,4. La Solución muestra
presenta una zona similar en color y valor Rr a la corres-
pondiente a andrografólido en la Solución estándar 1.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra obtenido en la prueba de Contenido de Lac-
tonas Diterpénicas corresponde al de andrografólido en la
USP 37
Solución estándar A. Identificar otros picos de lactonas di-
terpénicas en la Solución muestra por comparación con la
Solución estándar B y el cromatograma de referencia pro-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Andrografis
USP. La Solución muestra presenta picos adicionales co-
rrespondientes a neoandrografólido, l 4-desoxi-11, 12-di-
deshidroandrografólido y andrograpanina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LACTONAS DITERPÉNICAS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar, filtrar, y
desgasificar.
Solución B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solución estándar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Andrografólido USP en metano! para obtener una
solución con una concentración conocida de aproxima-
damente 1,0 mg/mL. Transferir 5,0 mL de esta solución
a un matraz volumétrico de 1 O mL, diluir con acetoni-
trilo a volumen, y mezclar.
Solución estándar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Andrografis USP, equivalente aproxi-
madamente a 25 mg de lactonas diterpénicas, a un ma-
traz volumétrico de 50 mL, agregar 25 mL de metanol,
calentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,0 g de Andrografis reducida a polvo fino a un
matraz de 250 mL provisto con un condensador de re-
flujo. Agregar 50 mL de metanol, someter a reflujo en
un baño de agua durante 15 minutos, enfriar a tempe-
ratura ambiente, y decantar el sobrenadante. Repetir
hasta que el último extracto se torne incoloro. Combi-
nar los extractos, filtrar, concentrar al vacío, y ajustar el
volumen hasta 50,0 mL usando metanol.
Solución muestra: Transferir 25,0 mL de Solución madre
de la muestra a un matraz volumétrico de 50 mL, diluir
con acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros 5 mL del filtrado.
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 95 5 andrograpanina
18 55 45
25 20 80
28 20 80
35 55 45
40 95 5 • METALES PESADOS,
45 95 5 Impurezas Orgánicas,
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 223 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solución estándar B es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP.
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
andrografólido, Solución estándar A
Suplementos Dietéticos / Andrografis 5841
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de andrografólido en in-
yecciones repetidas, Solución estándar A
Resolución: No menos de 5 entre los picos de
neoandrografólido y 14-desoxi- l l, 12-dideshidroan-
drografólido, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, So-
lución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de An-
drografis USP usado, identificar los tiempos de reten-
ción de los picos correspondientes a las diferentes lac-
tonas diterpénicas. Los tiempos de retención relativos
aproximados de las diferentes lactonas diterpénicas se
proveen en la tabla siguiente.
Tiempo de
Ana lito Retención Relativo
Androarafólido 1 00
Neoandroarafólido 1 16
l 4-Desoxi-11 12-dideshidroandroarafólido 1 31
Androaraoanina 1 50
Calcular por separado los porcentajes de andrografó-
lido, neoandrografólido, l 4-desoxi-11, 12-dideshi-
droandrografólido y andrograpanina en la porción de
Andrografis tomada:
Resultado = (Cs/W) x (ru/r 5 ) x 1 OF
Cs = concentración de ER Andrografólido USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
W = peso de Andrografis tomada para preparar la
Solución muestra (g)
ru = respuesta del pico de cada lactona diterpénica
de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de andrografólido de la
Solución estándar A
F factor de conversión de cada analito
=
(1,00 para andrografólido, 3,90 para
neoandrografólido, 1,45 para l 4-desoxi-
11, 12-dideshidroandrografólido y 2,65 para
andrograpanina)
Criterios de aceptación: No menos de 1,0%, con res-
pecto a la materia seca, calculado como la suma de los
porcentajes de andrografólido, neoandrografólido,
l 4-desoxi-11, 12-dideshidroandrografólido y
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 3,0%
Método JI (231): No más de 20 ppm
,
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgánica Extraña (56 J): No más de 2,0%, ,
• PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El tallo es de color verde oscuro, le-
ñoso, de 2-6 mm de diámetro, con numerosas ramas,
presenta nodos ligeramente hinchados, la parte superior
es nítidamente cuadrangular con cuatro protuberancias
en las cuatro esquinas y la parte inferior es algo redon-
deada; la textura es frágil y se rompe fácilmente; las
ramas son cuadrangulares y con frecuencia estrecha-
mente aladas en la parte superior. Las hojas son sim-
ples, opuestas, con pecíolo corto o casi sésil; la lámina
5842 Andrografis / Suplementos Dietéticos
es plegada y se rompe fácilmente, cuando está com-
pleta, lanceolada o lanceolada ovada, de 2-7 cm de
largo, 1 -3 cm de ancho, con un ápice acuminado, ve-
nación reticulada y base decurrente cuneada, borde
completo u ondulado; la superficie superior es de color
verde; la superficie inferior es de color verde grisáceo;
ambas superficies son glabras. El artículo farmacopéico
consiste en una mezcla seca de hojas quebradas verdes
oscuras y tallos cuadrangulares; hojas quebradizas; tallos
de fractura corta y fibrosa.
Histología
Sección transversal de los tallos: La capa epidérmica
presenta células que contienen depósitos de carbonato
de calcio redondos, elípticos largos o en forma de
palos de bowling (cistolitos), pelos no glandulares de
1-4 células y pelos glandulares multicelulares en forma
de disco; colénquima debajo de la epidermis y en las
protuberancias; endodermis distinguible; haces vascu-
lares que rodean el parénquima de la médula central;
cristales pequeños aciculares de oxalato de calcio pre-
sentes en la corteza y la médula.
Sección transversal de las hojas: Células epidérmicas
superiores e inferiores subcuadradas o rectangulares;
las células epidérmicas inferiores son relativamente más
pequeñas; ambas capas epidérmicas presentan células
que contienen cistolitos, pelos no glandulares y pelos
glandulares similares a los del tallo; mesófilo com-
puesto por 1-2 capas de parénquima en empalizada y
parénquima esponjoso; a través de la parte superior de
la nervadura central aparece parénquima esponjoso;
los haces vasculares de la nervadura central son colate-
rales y acanalados; las células que contienen cistolitos
, aparecen por encima del xilema. . zona de color azul grisáceo correspondiente a androgra-
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Andrograf1s
reducida a polvo fino a 105º durante 3 horas: pierde no
má~ de 12,0% de su pes9. . la correspondiente a andrografólido en la Solución es-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cemzas Totales (561):
No más de 15%, determinado en 1,0 g de Andrografis
red,ucida a polvo fino , ción muestra obtenido en la prueba de Contenido de Lac-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO,Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 8,0%
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 Q3 ufc/g. , deshidroandrografólido y andrograpanina.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la ¡;ilanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Andrografólido USP
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP
Andrografis en Polvo
DEFINICIÓN
La Andrografis en Polvo es Andrografis reducida a polvo fino
o a polvo muy fino.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
USP 37
Solución estándar 1: Usar la Solución estándar A, pre-
parada según se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpénicas.
Solución estándar 2: Someter a ultrasonido una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Andrografis USP, equi-
valente aproximadamente a 15 mg de lactonas diterpé-
nicas, durante 10-15 minutos en 25 mL de metanol,
centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Usar la Solución madre de la muestra,
preparada según se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpénicas.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño de partícula promedio de 1 0-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas de 5-1 O mm
Fase móvil: Cloroformo, acetona y tolueno (2:2: 1)
Solución reveladora: Mezcla de vainillina al 1 % en al-
cohol y ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar 1, Solución estándar 2 y
Solución muestra
Usar una cámara saturada. Desarrollar los cromatogra-
mas hasta que el frente de la fase móvil haya reco-
rrido aproximadamente 90% de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
100º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
tres zonas principales de color azul grisáceo con valores
RF de aproximadamente 0,4; 0,6 y 0,8 que correspon-
den en posición y color a las zonas principales de la
Solución estándar 2. La Solución estándar 1 presenta una
fólido a un RF de aproximadamente 0,4. La Solución
muestra presenta una zona similar en color y valor RF a
tándar 1.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
tonas Diterpénicas corresponde al de andrografólido en la
Solución estándar A. Identificar otros picos de lactonas di-
terpénicas en la Solución muestra por comparación con la
Solución estándar By el cromatograma de referencia pro-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Andrografis
USP. La Solución muestra presenta picos adicionales co-
rrespondientes a neoandrografólido, 14-desoxi- l 1, 12-di-
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LACTONAS DITERPÉNICAS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y
desgasificar .
Solución B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solución estándar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Andrografólido USP en metanol para obtener una
solución con una concentración conocida de aproxima-
damente 1,0 mg/mL. Transferir 5,0 mL de esta solución
a un matraz volumétrico de 1 O mL, diluir con acetoni-
trilo a volumen, y mezclar.
Solución estándar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Andrografis USP, equivalente aproxi-
madamente a 25 mg de lactonas diterpénicas, a un ma-
traz volumétrico de 50 mL, agregar 25 mL de metanol,
calentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,0 g de Andrografis en Polvo a un matraz de
250 mL provisto con un condensador de reflujo. Agre-
gar 50 mL de metanol, someter a reflujo en un baño de
agua durante 15 minutos, enfriar a temperatura am-
USP 37 Suplementos Dietéticos / Andrografis 5843

biente, y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el W = peso de Andrografis en Polvo tomada para
último extracto se torne incoloro. Combinar los extrac- preparar la Solución muestra (g)
tos, filtrar, concentrar al vacío, y ajustar el volumen ru = respuesta del pico de cada lactona diterpénica
hasta 50,0 mL usando metano!. de la Solución muestra
Solución muestra: Transferir 25,0 mL de Solución madre rs = respuesta del pico de andrografólido de la
de la muestra a un matraz volumétrico de 50 mL, diluir Solución estándar A
con acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la in- F = factor de conversión de cada analito
yección, pasar a través de un filtro de membrana con (1,00 para andrografólido, 3,90 para
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando neoandrografólido, 1,45 para l 4-desoxi-
los primeros 5 mL del filtrado. 11, 12-dideshidroandrografólido y 2,65 para
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. andrograpanina)
Criterios de aceptación: No menos de 1,0%, con res-
Tiempo Solución A Solución B pecto a la materia seca, calculado como la suma de los
lmin\ (O/o\ (O/o\ porcentajes de andrografólido, neoandrografólido,
l 4-desoxi-11, 12-dideshidroandrografólido y
o 95 5
andrograpanina
18 55 45
25 20 80 IMPUREZAS
28 20 80 Impurezas Inorgánicas ,
35 55 45 • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 3,0%
40 95 5
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 ppm
45 95 5 Impurezas Orgánic~s , ,
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
Sistema cromatográfico General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.) Cumple con los requisitos
Modo: HPLC
Detector: UV 223 nm PRUEBAS ESPECÍFICAS
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min Macroscópicas: Es un polvo de color marrón grisáceo.
Volumen de inyección: 20 µL Histología
Aptitud del sistema Examen microscópico: Presenta células de la epider-
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B mis superior e inferior de las hojas, algunas células
Requisitos de aptitud contienen cistolitos grandes, de hasta 36 µm de diá-
El cromatograma de la Solución estándar B es similar al metro y 180 µm de largo, con una cicatriz en forma
cromatograma de referencia provisto con el lote de de hilio en el extremo grande; pelos no glandulares de
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP. 1-4 células; pelos glandulares en forma de disco, ca-
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos beza de 8 celulas y pedúnculo muy corto; estomas
teóricos, Solución estándar A diacíticos en su mayoría en la epidermis inferior; célu-
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de las epidérmicas del tallo, alguna células contienen cis-
andrografólido, Solución estándar A tolitos, estomas, pelos no glandulares y pelos glandula-
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de- res similares a los de las hojas; células parenquimáticas
terminada a partir del pico de andrografólido en in- de paredes delgadas; células colenquimáticas; fibras de
yecciones repetidas, Solución estándar A floema aciculares; traqueidas; vasos con engrosamien-
Resolución: No menos de 5 entre los picos de tos espirales y escalariformes.
neoandrografólido y l 4-desoxi-11, 12-dideshidroan- • PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Andrografis en
drografólido, Solución estándar B Polvo a 105º durante 3 horas: pierde no más de 12,0%
Análisis de su peso .
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
Solución muestra No más de 15%, determinado en 1,0 g de Andrografis
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, So- en Polvo
lución estándar B y el cromatograma de referencia • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de An- cohol, Método 2 (561): No menos de 8,0%
drografis USP usado, identificar los tiempos de reten- • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
ción de los picos correspondientes a las diferentes lac- tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
tonas diterpénicas. Los tiempos de retención relativos el recuento total combinado de hongos filamentosos y
aproximados de las diferentes lactonas diterpénicas se levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
proveen en la tabla siguiente: terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
Tiempo de • PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
Ana lito Retención Relativo SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
Androarafólido 1 00 con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
Neoandroarafólido 1 16
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
14-Desoxi- l l 12-dideshidroandroarafólido 1 31 REQUISITOS ADICIONALES
Andronraoanina 1 50 • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
Calcular por separado los porcentajes de andrografó- temperatura ambiente.
lido, neoandrografólido, l 4-desoxi-11, 12-dideshi- • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
droandrografólido y andrograpanina en la porción de latín y después de la denominación oficial, las partes de
Andrografis en Polvo tomada: la r;ilanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Resultado = (Cs/W) x (ru/rs) x 1OF ER Andrografólido USP
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP
Cs = concentración de ER Andrografólido USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
5844 Andrografis /Suplementos Dietéticos
Extracto en Polvo de Andrografis
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Andrografis se prepara a partir de
Andrografis mediante extracción con metano/ o alcohol.
La relación entre el material vegetal y el extracto está en-
tre 15:1 a 10:1. Contiene no menos de 90,0% y no más
de 11 0,0% de la cantidad declarada de lactonas diterpé-
nicas, calculado con respecto al extracto seco, como la
suma de andrografólido, neoandrografólido, l 4-desoxi-
11, 12-dideshidroandrografólido y andrograpanina. El con-
tenido de l 4-desoxi-11, 12-dideshidroandrografólido es no
más de 15% del total de lactonas diterpénicas. Puede
contener sustancias agregadas adecuadas como
portadores.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar 1: Usar la Solución estándar A, pre-
parada según se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpénicas.
Solución estándar 2: Someter a ultrasonido durante
10-15 minutos una cantidad de ER Extracto en Polvo
de Andrografis USP, equivalente aproximadamente a
15 mg de lactonas diterpénicas, en 25 mL de metano/.
Centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Someter a ultrasonido durante
1 0-1 5 minutos una cantidad de Extracto en Polvo de
Andrografis, equivalente aproximadamente a 15 mg de
lactonas diterpénicas, en 25 mL de metano/. Centrifugar
y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño de partícula promedio de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas de 5-1 O mm
Fase móvil: Cloroformo, acetona y to/ueno (2:2:1)
Solución reveladora: Mezcla de vainillina al 1 % en al-
cohol y ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar 7, Solución estándar 2 y
Solución muestra
Usar una cámara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido aproximada-
mente 90% de la placa. Retirar la placa de la cámara.
Secar y rociar con Solución reveladora. Calentar du-
rante 5-1 O minutos a 1 00º y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
tres zonas principales de color azul grisáceo con valores
RF de aproximadamente 0,4, 0,6 y 0,8 que correspon-
den en posición y color a las zonas en la Solución están-
dar 2. La Solución estándar 7 presenta una zona de
color azul grisáceo correspondiente a andrografólido a
un RF de aproximadamente 0,4. La Solución muestra
presenta una zona similar en color y valor RF a la corres-
pondiente a andrografólido en la Solución estándar 7.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra obtenido en la prueba de Contenido de Lac-
tonas Diterpénicas corresponde al de andrografólido en la
Solución estándar A. Identificar otros picos de /actonas di-
terpénicas en la Solución muestra por comparación con la
Solución estándar By el cromatograma de referencia pro-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Andrografis
USP. La Solución muestra presenta picos adicionales co-
rrespondientes a neoandrografólido, l 4-desoxi-11, 12-di-
deshidroandrografólido y andrograpanina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LACTONAS DITERPÉNICAS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio en 900 ml de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 ml, mezclar, filtrar, y
desgasificar.
USP 37
Solución B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solución estándar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Andrografólido USP en metano/ para obtener una
solución con una concentración conocida de aproxima-
damente 1,0 mg/ml. Transferir 5,0 mL de esta solución
a un matraz volumétrico de 1 O mL, diluir con acetoni-
trilo a volumen, y mezclar.
Solución estándar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Andrografis USP, equivalente aproxi-
madament~ a 25 mg de /actonas diterpénicas, a un ma-
traz volumetrico de 50 mL, agregar 25 mL de metano/,
calentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir una cantidad pesada de
Extracto en Polvo de Andrografis, equivalente aproxima-
damente a 25 mg de lactonas diterpénicas, a un matraz
volumétrico de 50 mL, agregar 25 mL de metano/, ca-
lentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitri/o a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (O/o) (%)
o 95 5
18 55 45
25 20 80
28 20 80
35 55 45
40 95 5
45 95 5
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 223 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solución estándar B es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP.
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
andrografólido, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de andrografólido en in-
yecciones repetidas, Solución estándar A
Resolución: No menos de 5 entre los picos de
neoandrografólido y l 4-desoxi-11, 12-dideshidroan-
drografólido, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, So-
lución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de An-
drografis USP usado, identificar los tiempos de reten-
ción de los picos correspondientes a las diferentes lac-
tonas diterpénicas. Los tiempos de retención relativos
aproximados de las diferentes /actonas diterpénicas se
proveen en la tabla siguiente:
USP 37
Tiempo de
Analito Retención Relativo
Androarafólido - ___ __LOO
Neoandroarafólido 1 16
14-Desoxi-11 12-dideshidroandroarafólido 1 31
Androarapanina 1 50
Calcular por separado los porcentajes de andrografó-
lido, neoandrografólido, l 4-desoxi-11, 12-dideshi-
droandrografólido y andrograpanina en la porción de
Extracto en Polvo de Andrografis tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/W) x 5F
ru = respuesta del pico de cada lactona diterpénica
de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de andrografólido de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Andrografólido USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
W = peso de Extracto en Polvo de Andrografis
tomada para preparar la Solución muestra (g)
F = factor de conversión de cada analito
(1,00 para andrografólido, 3,90 para
neoandrografólido, 1,45 para l 4-desoxi-
11, 12-dideshidroandrografólido y 2,65 para
andrograpanina)
Criterios de aceptación: 90.0%-110,0%, con respecto
al extracto seco, de la cantidad declarada de lactonas
ditepénicas calculado como la suma de los porcentajes
de andrografólido, neoandrografólido, l 4-desoxi-11, 12-
dideshidroandrografólido y andrograpanina.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánic~s , usar. Usando una pipeta volumétrica, transferir 1,0 mL
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2,0 g a 105º durante 3
horas: pierde no más de 5,0% de su peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 Q3 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se preparó el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Andrografólido USP
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP
Arándano, Preparación Líquida
DEFINICIÓN
La Preparación Líquida de Arándano es un jugo de color
rojo brillante que se obtiene de los frutos de Vaccinium
macrocarpon Ait. o Vaccinium oxycoccos L. (Fam. Erica-
ceae). No contiene sustancias agregadas.
Suplementos Dietéticos /Arándano 5845
IDENTIFICACIÓN
• A. HPLC: Los tiempos de retención de los picos del
ácido quínico, del ácido málico y del ácido cítrico de la
Solución mues/ ra corresponden a los de la Solución estqn-
dar, según se obtienen en la prueba de Contenido de Aci-
dos Orgánicos.
• B. AUSENCIA DE ADULTERANTES
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ácido tartárico y
O, 1 m_g/mL de ácido fumárico
Solucion muestra: Usar la Preparación Líquida.
Fase móvil y Sistema cromatográfico: proceder según
se indica en la prueba de Contenido de Acidos Orgánicos.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Volumen de inyección: 20 pL
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
los picos del ácido tartárico y del ácido fumárico de la
Solución estándar no corresponden a ninguno de los
tiempos de retención de los picos observados de la So-
lución muestra.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE DEXTROSA Y FRUCTOSA
Fase móvil: Agua
Solución estándar: 6,0 mg/mL de ER Dextrosa USP y
2,0 m_g/mL de ER Fructosa USP en agua
Solucion muestra: Transferir 1,0 g de resina de inter-
cambio catiónico de carboxilato de sodio a un vaso de
precipitados de 50 mL, agregar 5 mL de agua para for-
mar una suspensión espesa y transferir la suspensión es-
pesa a una pipeta automática de polipropileno con un
pequeño tapon de lana de vidrio silanizada. Transferir
cuantitativamente la suspensión espesa a un tubo cro-
matográfico pequeño, enjuagar el vaso de precipitados
con agua y rellenar la columna de forma uniforme.
Mantener la columna húmeda hasta que esté lista para
de la Preparación Líquida a la columna, recolectar el
eluato y desecharlo. Pipetear 4,0 mL de agua y transfe-
rir a la parte superior de la columna, recolectar el eluato
en un vial limpio y filtrar, si fuera necesario.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HP~C
Detector: Indice de refracción
Columnas
Guarda columna: Relleno L19
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L19
Temperatura de la columna: 85º
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 20 pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
para dextrosa y fructosa son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,8 entre los picos de dex-
trosa y fructosa
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular los porcentajes de dextrosa y fructosa en el vo-
lumen de Preparación Líquida tomado:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/V) x 0,5
ru = respuesta del pico del analito correspondiente
de la Solución muestra
rs = respuesta del pico del analito correspondiente
de la Solución estándar
= concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
5846 Arándano / Suplementos Dietéticos USP 37

V = volumen de Preparación Líquida tomado para Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
la Solución muestra (mL) Análisis
Criterios de aceptación: No menos de 2,4% de dex- Muestras: Solucion estándar y Solución muestra
trosa y no mf'nos de 0,7,% de fructosa Volumen de inyección: 20 µL
• CONTENIDO DE ACIDOS 0RGANICOS Calcular los porcentajes de sacarosa y sorbitol en el vo-
Fase móvil: Transferir 27,2 ~ de fosfato monobásico de lumen de Preparación Líquida tomado:
potasio a un matraz volumetrico de 1 000 mL y disolver
en 950 mL de agua. Ajustar con ácido fosfórico a un pH Resultado= (ru/r1) x (C5/\/) x 0,5
de 2,4, y diluir con agua a volumen. ,
Solución est~ndar: 1,0 mg/ml de ER ¡)cido Cítrico ru = respuesta del pico de cada analito
USP, de ER Acido Málico USP y de ER Acido Quínico correspondiente de la Solución muestra
USP rs = respuesta del pico de cada analito
Solución muestra: Usar la Preparación Líquida filtrada. correspondiente de la Solución estándar
Sistema cromato9ráfico C = concentración del Estándar de Referencia USP
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) correspondiente en la Solución estándar
Modo: HPLC (mg/ml)
Detector: UV 214 n m V = volumen de Preparación Líquida tomado para
Columnas la Solución muestra (mL)
Guarda columna: Relleno L1 de 5 µm Criterios de aceptación: No más de 0,05% de sorbitol
[NOTA-Antes de usar, acondicionar la columna con y de sacarosa
metanol, luego con agua y finalmente con Fase móvil.]
Columna analítica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 PRUEBAS ESPECÍFICAS
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min • ÍNDICE DE REFRACCIÓN (831): 1,3435-1,3445
Volumen de inyección: 20 µL •PH(791): 2,5±0,1
Aptitud del sistema REQUISITOS ADICIONALES
Muestra: Solución estándar • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados cerrados y almacenar en un refrigerador.
para ácido quínico, ácido málico y ácido cítrico son • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
0,4; 0,5 y 1,0, respectivamente.] latín y, después de la denominación oficial, las partes de
Requisitos de aptitud la planta de donde se obtuvo el artículo. La etiqueta
Resolución: No menos de 2,5 entre ácido quínico y también indica que se utiliza sólo con fines de fabrica-
ácido málico ción. Este artículo está exento de los requisitos de las
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% Advertencias Generales con respecto a la declaración de
Análisis embarazo y lactancia (sección 1 0.40.50. Etiquetado de
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Productos Botánicos).
Medir el área de los picos. Calcular los porcentajes de • ESTÁJ)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ácido quínico, ácido málico y ácido cítrico en el volu- ER Acido Cítrico USP
men de Preparación Líquida tomado: ER Dextrosa USP
ER Fructosa USP
Resultado = (ru!r1) x Cs x O, 1 ER ~cido Málico USP
ru = área del pico de cada analito correspondiente ER Acido Quínico USP
de la Solución muestra ER Sorbitol USP
r1 = área del pico de cada analito correspondiente ER Sacarosa USP
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Criterios de aceptación: No menos de 0,9% de ácido Arginina-ver Arginina en Monografías
quínico y de ácido cítrico; no menos de 0,7% de ácido Generales
málico. El cociente entre ácido quínico y ácido málico
es no menos de 1,0.
ADULTERANTES
• LÍMITE DE SORBITOL Y SACAROSA
Arginina, Cápsulas
Fase móvil y Solución muestra: Preparar según se in-
dica en la prueba de Contenido de Dextrosa y Fructosa. DEFINICIÓN
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Sorbitol USP y de Las Cápsulas de Arginina contienen no menos de 90,0% y
ER Sacarosa USP no más de 11 0,0% de la cantidad declarada de arginina o
Sistema cromatográfico: Proceder según se indica en clorhidrato de arginina en una cantidad equivalente a ar-
la prueba de Contenido de Dextrosa y Fructosa. ginina (C6H14N4Ü2).
Aptitud del sistema IDENTIFICACIÓN
Muestra: Solución estándar • A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para sacarosa DELGADA (201)
y sorbitol son aproximadamente 0,4 y 1,0, Solución estándar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
respectivamente.] ER Clorhidrato de Arginina USP en agua
Requisitos de aptitud Solución muestra: Pesar el contenido de no menos de
Resolución: No menos de 1,8 entre los picos de sa- 20 Cápsulas, mezclar, y transferir una porción del con-
carosa y sorbitol tenido, equivalente a aproximadamente 150 mg de ar-
ginina, a un matraz volumétrico de 1 00 mL, agregar
80 ml de agua, someter a ultrasonido durante 15 mi-
nutos, diluir con agua a volumen, mezclar, y filtrar.
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Alcohol isopropílico e hidróxido de amonio
(7:3)
USP 37
Solución reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N (95:5)
Análisis: Proceder según se indica en Cromatografía
(621 ), Cromatografía en Capa Delgada. Secar la placa a
100º-l 05º hasta que el amoníaco desaparezca por
completo. Rociar con la Solución reveladora y calentar a
100º-l 05º durante aproximadamente 15 minutos. Ob-
servar la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: La mancha principal de la So-
lución muestra corresponde en apariencia y valor RF a la
de la Solución estándar.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en Contenido.
CONTENIDO
• PROCEDIMIENTO
Solución amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monobá-
sico de sodio en agua. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 3,5.
Solución A: 0,5 mg/mL de sal sódica del ácido 1-octa-
nosulfónico en Solución amortiguadora
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (95:5)
Solución estándar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en Solución
amortiguadora
Solución muestra: Pesar el contenido de no menos de
20 Cápsulas, mezclar, y transferir una porción del con-
tenido, equivalente a aproximadamente 150 mg de ar-
ginina, a un matraz volumétrico de 1 00 mL, agregar
80 mL de Solución amortiguadora, someter a uítrasonido
durante 15 minutos, diluir con Solución amortiguadora a
volumen, mezclar, y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
teóricos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% a
r.artir del pico de arginina, en inyecciones repetidas
Analisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de argi-
nina en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
C5 = concentración de la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de Arginina en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de arginina (C6H14N402)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): c;umplen con los requisitos de Disolución
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 900 mL
Aparato 2: 100 rpm
Tiempo: 60 min
Solución estándar: Proceder según se indica en el Pro-
cedimiento de Contenido.
Solución muestra: Muestrear según Desintegración y Di-
solución de Suplementos Dietéticos (2040). Diluir con Me-
dio hasta una concentración similar a la de la Solución
estándar.
Suplementos Dietéticos/ Arginina 5847
Análisis: Determinar la cantidad de arginina disuelta en
el Procedimiento de Contenido, haciendo las modificacio-
nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada qe arginina (C6H14N402). ,
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la forma de arginina que
se \JSa y la cantidad equivalente de arginina.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER L-Arginina USP
ER Clorhidrato de Arginina USP
Arginina, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Arginina contienen no menos de 90,0% y
no más de 110,0% de la cantidad declarada de arginina o
clorhidrato de arginina en una cantidad equivalente a ar-
ginina (C6H14N402).
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en agua
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas, mezclar, y transferir una porción del
polvo, equivalente a aproximadamente 150 mg de argi-
nina, a un matraz volumétrico de 100 mL, agregar
80 mL de agua, someter a ultrasonido durante 15 mi-
nutos, diluir con agua a volumen, mezclar, y filtrar.
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Alcohol isopropílico e hidróxido de amonio
(7:3)
Solución reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N (95:5)
Análisis: Proceder según se indica en Cromatografía
(621 ), Cromatografía en Capa Delgada. Secar la placa a
1 00º- l 05º hasta que el amoníaco desaparezca por
completo. Rociar con la Solución reveladora y calentar a
100º- l 05º durante aproximadamente 15 minutos. Ob-
servar la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: La mancha principal de la So-
lución muestra corresponde en apariencia y valor RF a la
de la Solución estándar.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en Contenido.
CONTENIDO
• PROCEDIMIENTO
Solución amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monobá-
sico de sodio en agua. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 3,5.
Solución A: 0,5 mg/mL de sal sódica del ácido 1-octa-
nosulfónico en Solución amortiguadora
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (95:5)
Solución estándar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en Solución
amortiguadora
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas, mezclar, y transferir una porción del
polvo, equivalente a aproximadamente 150 mg de argi-
nina, a un matraz volumétrico de 1 00 mL, agregar
80 mL de Solución amortiguadora, someter a ultrasonido
durante 15 minutos, diluir con Solución amortiguadora a
volumen, mezclar, y filtrar.
5848 Arginina / Suplementos Dietéticos
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 0,8 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
teóricos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% a
r.artir del pico de arginina, en inyecciones repetidas
Analisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de argi-
nina en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de Arginina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de arginina (C6H14N402)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): c;;umplen con los requisitos de Disolución
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 900 ml
Aparato 2: 1 00 rpm
Tiempo: 60 min
Solución estándar: Proceder según se indica en el Pro-
cedimiento de Contenido.
Solución muestra: Muestrear según Desintegración y Di-
solución de Suplementos Dietéticos (2040). Diluir con Me-
dio hasta una concentración similar a la de la Solución
estándar.
Análisis: Determinar la cantidad de arginina disuelta en
el Procedimiento de Contenido, haciendo las modificacio-
nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada ge arginina (C6H14N402). , acetona
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la forma de arginina que
se ysa y la cantidad equivalente de arginina.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER L-Arginina USP
ER Clorhidrato de Arginina USP
Clorhidrato de Arginina-ver Clorhidrato
de Argínína en Monografías Generales
Ácido Ascórbico-ver Ácido Ascórbíco en
Monografías Generales
USP 37
~cido Ascórbico, Solución Oral-ver
Acido Ascórbico, Solución Oral en Monografías
Generales
Ácido Ascórbico, Tabletas-ver Ácido
Ascórbico, Tabletas en Monografías Generales
Ácido Aspártico-ver Ácido Aspártico en
Monograf1as Generales
Agregar Jo siguiente:
•Esteres de Astaxantina
~staxanthin esters;
~steres de ácidos grasos de astaxantina;
Esteres de ácidos grasos de (3S, 3' S)-3, 3' -dihidroxi-J3,f3-caro-
teno-4,4' -diona.
DEF~NICIÓN
Los Esteres de Astaxantina se obtienen mediante extracción
con dióxido de carbono supercrítico o acetona prove-
niente de cultivos de Haematococcus¡luvialis. Consta prin-
cipalmente de estereoisómeros 3S,3' de astaxantina en
las formas monoéster, diéster y libre. La forma monoéster
es la más abundante, seguida por la forma diéster. La
forma libre es un componente menor. Se pueden agregar
antioxidantes adecuados. Contiene no menos de 5% de
astaxantina total, calculado como astaxantina libre con
respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar: 1O mg/mL de ER Ésteres de Asta-
xantina a partir de Haematococcus pluvialis USP en
Solución muestra: 1 O mg/ml de Ésteres de Astaxantina
en acetona
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm. Secar el adsorbente a 11 Oº
durante 1 hora antes de su uso.
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Hexano y acetona (70:30)
Aptitud del sistema
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solución
estándar presenta tres zonas claramente separadas,
donde el diéster de astaxantina tiene el vafor RF más
alto, seguido por el monoéster de astaxantina (el más
intenso) y astaxantina libre (el menos intenso).
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma en la Fase móvil hasta que
el frente de la fase móvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cámara y secar en una corriente de aire.
Observar las placas bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
tres zonas principales correspondientes en valor RF a las
obtenidas a partir de la Solución estándar. La zona en la
parte media (monoéster) es la más intensa y la zona
con el valor Rr más bajo es la menos intensa.
 USP 37
• B. HPLC: La Solución muestra presenta tres picos princi-
pales con tiempos de retención correspondientes a los de
los picos de 1 3-cis-astaxantina, la forma todo trans de
astaxantina y 9-cis-astaxantina de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Astaxan-
tina Total.
VALORACIÓN
• CONTENIDO DE ASTAXANTINA TOTAL
[NOTA-La astaxantina determinada por este método es
la astaxantina total, que incluye la astaxantina libre, el
monoéster y el diéster.]
Solución amortiguadora: Disolver 6,06 g de tris(hidro-
ximetil)aminometano en 750 mL de agua, ajustar con
ácido clorhídrico 1 N a un pH de 7,0 y diluir con agua
hasta 1 000 ml.
Solución de colesterol esterasa: 4 Unidades/mL de co-
lesterol esterasa 1 en Solución amortiguadora. Preparar en
el día de su uso.
Solución A: Metanol
Solución B: t;Butilmetiléter
Solución C: Acido fosfórico, 1% acuoso
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
·rabia 1
Tiempo Solución A Solución B Solución C
Cmln) (%) (%)
o 81 15
15 66 30
23 16 80
27 16 80
27 1 81 15
35 81 15
Solución de estándar interno: 37,5 µg/mL de ER Apo-
carotenal USP en acetona
S9lución madre del estándar: Transferir 30 mg de ER
Esteres de Astaxantina a partir de Haematococcus pluvia-
lis USP a un matraz volumétrico de 100 ml. Disolver en
30 mL de acetona, agitar mecánicamente y diluir con
acetona a volumen.
Solución estándar: Combinar 2,0 mL de Solución madre
del estándar y 1,0 mL de Solución de estándar interno en
un tubo de centrífuga de vidrio. Agregar 3,0 mL de So-
lución de colesterol esterasa al tubo y mezclar suave-
mente por inversión. Colocar el tubo en un bloque de
calentamiento ajustado a 37º y dejar que la reacción
continúe durante 45 minutos, invirtiendo el tubo de
manera suave y lenta cada 1 O minutos. Después de 45
minutos, agregar 1 g de sulfato de sodio y 2 mL de éter
de petróleo al tubo. Mezclar en un mezclador de vór-
tice durante 30 segundos, luego centrifugar a 3000
rpm durante 3 minutos. Transferir cuidadosamente la
capa de éter de petróleo a un tubo de centrífuga de
vidrio de 1O mL que contenga 1 g de sulfato de sodio
anhidro. Procurar no pipetear la capa emulsiva inter-
media. Evaporar la capa de éter de petróleo usando va-
cío o una corriente de gas inerte a temperatura am-
biente, agregar 3 mL de acetona, someter a ultrasonido
y filtrar la mezcla. La solución filtrada es la Solución
estándar.
Solución madre de la muestra: Entibiar una cantidad
de la muestra en un baño de agua a 50º-60º durante
30 minutos. Agitar bien la muestra en intervalos de 1 O
minutos. Después de 30 minutos, transferir 30 mg de la
muestra a un matraz volumétrico de 100 ml. Disolver
en 30 mL de acetona, agitar mecánicamente y diluir
con acetona a volumen.
Solución muestra: Combinar 2,0 mL de Solución madre
de la muestra y 1,0 mL de Solución de estándar interno
1 Usar Wako Pure Chemicals, Nº de catálogo 037-11221, disponible en www.
wakousa.com; Sigma, Nº de catálogo C9281, disponible en www.sigmaal-
drich.com; o equivalente.
Suplementos Dietéticos / Astaxantina 5849
en un tubo de centrífuga de vidrio. Agregar 3,0 mL de
Solución de colesterol esterasa al tubo y mezclar suave-
mente por inversión. Colocar el tubo en un bloque de
calentamiento ajustado a 37º y dejar que la reacción
continúe durante 45 minutos, invirtiendo el tubo de
manera suave y lenta cada 1O minutos. Después de 45
minutos, agregar 1 g de sulfato de sodio y 2 mL de éter
de petróleo al tubo. Mezclar en un mezclador de vór-
tice durante 30 segundos, luego centrifugar a 3000
rpm durante 3 minutos. Transferir cuidadosamente la
capa de éter de petróleo a un tubo de centrífuga de
vidrio de 1 O mL que contenga 1 g de sulfato de sodio
anhidro. Procurar no pipetear la capa emulsiva inter-
media. Evaporar la capa de éter de petróleo usando va-
cío o una corriente de gas inerte a temperatura am-
biente, agregar 3 mL de acetona, someter a ultrasonido
y filtrar la mezcla. La solución filtrada es la Solución
muestra.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 474 nm
Columna: YMC Carotenoide, de 4,6 mm x 25 cm, re-
lleno L62 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
(%)
Muestra: Solución estándar
4 [NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
4 para 1 3-cis-astaxantina, forma todo trans de astaxan-
4 tina, 9-cis-astaxantina y apocarotenal (trans-beta-apo-
4 8'-carotenal) se listan en la Tabla 2.]
4
4 Tabla 2
Tiempo de Factor de
Nombre del Retención Respuesta
Comouesto Relativo Relativa
1 3-cis-Astaxantina 09 13
Todo trans de Astaxan-
tina 1 o 1o
9-cis-Astaxantina 14 11
Apocarotenal (estándar
interno) 17 -
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar es similar 91 Cromatograma
de Referencia provisto con el ER Esteres de Astaxan-
tina a partir del Haematococcus pluvialis USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre 13-cis-astaxan-
tina y la forma todo trans de astaxantina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
para el pico de la forma todo trans de astaxantina
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de contenido de astaxantina total
en la porción de muestra tomada:
Resultado = (Ru! Rs) x ( Cs/ Cu) x P
Ru = [(1,3 x área del pico de 13-cis-astaxantína +
área del pico de la forma todo trans de
astaxantína + 1, 1 x el área del pico de 9-cis-
astaxantina)/área del pico del estándar
interno] de la Solución muestra
Rs = [(1,3 x área del pico de 13-cis-astaxantina +
área del pico de la forma todo trans de
astaxantina + 1, 1 x el área del pico de 9-cis-
astaxantina)/área del pico del estándar
interno] de la Soluci<jn estándar
C5 = concentración de ER Esteres de Astaxantina a
partir de Haematococcus pluvialis USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de la Solución muestra (mg/mL)
5850 Astaxantina / Suplementos Dietéticos
P = cantidad declarada de astaxantina total como
astaxantina libre en el ER Ésteres de
Astaxantina a J;,artir de Haematococcus
pluvialis USP (Yo)
Criterios de aceptación: No menos de 5% de astaxan-
tina total, calculado como astaxantina libre con res-
pecto a la sustancia anhidra
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 2,0 µg/g
Cadmio: No más de 1,0 µg/g
Plomo: No más de 1,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 103 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFKOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1.
• CONTENIDO DE FEOFORBIDA
Solución A: 50 m9/ml de sulfato de sodio
Solución B: Solución saturada de sulfato de sodio
Solución madre de la muestra: Transferir 100 mg de la
muestra a un tubo de ensayo de 1O ml, agregar 1O ml
de acetona y disolver con ultrasonido. Transferir cuanti-
tativamente esta solución a un embudo de separación,
enjuagando el tubo de ensayo tres veces con porciones
de 1O ml de acetona y agregando los enjuagues al em-
budo. Agregar 30 ml de éter etílico al embudo de se-
paración, seguido por 50 ml de Solución A. Mezclar el
contenido del embudo de separación agitando suave-
mente, luego retirar y desechar la capa inferior. Repetir
el lavado con Solucion A tres veces. Deshidratar el ex-
tracto remanente con sulfato de sodio anhidro, luego
transferir el extracto a un matraz volumétrico de 50 mL
y diluir con éter etílico a volumen.
Solución muestra: Transferir 20 ml de Solución madre
de la muestra a un vaso de precipitados pequeño. Agre-
gar 20 ml de ácido clorhídrico al 17% y mezclar la so-
íución vigorosamente. Transferir la capa de ácido clorhí-
drico a un embudo de separación y repetir la extracción
con una segunda porción de 10 ml de ácido clorhídrico
al 1 7%, agregando la capa de ácido clorhídrico al em-
budo de separación. Agregar 150 ml de Solución B y
20 ml de éter etílico, y mezclar el contenido del em-
budo de separación agitando. Transferir la capa de éter
etílico a un matraz vofumétrico de 20 mL y diluir con
éter etílico a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 667 nm
Longitud de paso de la celda: 1 cm
Blanco: Éter etílico
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de feoforbida en la porción de
muestra tomada:
Resultado= A/(C x F)
A = absorbancia de la Solución muestra
C = concentración de la Solución muestra (g/ml)
F = coeficiente de extinción (E1%) de feoforbida
pura en éter etílico (100 ml · g -1 · cm-1),
702
Criterios de aceptación: No más de 0,02%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921 ): No más de
0,5%
USP 37
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ESTÁ~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Esteres de Astaxantina a partir de Haematococcus plu-
vialis USP
ER Apocarotenal USP
trans-beta-Apo-8' -carotenal.
C30H40Ü AUSP37
Aceite de Hígado de Bacalao-ver Aceite
de Hígado de Bacalao en Monografías
Generales
Aceite de Hígado de Bacalao, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Aceite de Hígado de Bacalao contienen no
menos de 95,0% y no más de 105,0% de la cantidad
declarada de Aceite de Hígado de Bacalao, en donde el
Aceite de Hígado de Bacaíao es el aceite fijo, parcialmente
destearinizado, que se obtiene de hígados frescos de Ga-
dus morrhua L. y otras especies de la Fam. Gadidae. El
Aceite de Hígado de Bacalao contiene, en cada g, no me-
nos de 180 µg (600 Unidades USP) y no más de 750 µg
(2500 Unidades USP) de vitamina A y no menos de
1,5 µg (60 USP Unidades) y no más de 6,25 µg (250 Uni-
dades USP) de vitamina D.
El Aceite de Hígado de Bacalao se puede saborizar con la
adición de no más del 1% de un saborizante o mezcla de
saborizantes adecuados. Se puede agregar un antioxi-
dante adecuado.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRESENCIA DE VITAMINA A
Solución muestra: 25 mg/ml de aceite contenido en
las Cápsulas, en cloroformo
Análisis: Agregar 1 O ml de tricloruro de antimonio SR a
1 ml de la Sofución muestra.
Criterios de aceptación: Se produce un color azul
inmediatall)ente.
• B. PERFIL DE ACIDOS GRASOS
Solución antioxidante: 0,05 mg/ml de butil hidroxito-
lueno en hexanos
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
c¡ue contenga cantidades iguales de palmitato de me-
tilo, estearato de metilo, araquidato de metilo y behe-
nato de metilo en Solución antioxidante.
Solución madre del estándar: 45 m,$1/ml de ER Aceite
de Hí~ado de Bacalao USP en Solucion antioxidante
Solucion estándar: Transferir 2,0 ml de Solución madre
del estándar a un tubo de cuarzo y evaporar con una
corriente suave de nitrógeno. Agregar 1,5 ml de una
solución al 2% de hidróxido de sodio en metanol. Tapar
herméticamente con una tapa con recubrimiento
interno de politetrafluoroetileno, mezclar y calentar en
un baño de agua durante 7 minutos. Enfriar y agregar
2 ml de una solución de 120 mg/ml de tricloruro de
boro en metanol. Cubrir con nitrógeno, tapar herméti-
camente y mezclar. Calentar en un baño de agua du-
rante 30 minutos. Enfriar a 40º-50º. Agregar 1 ml de
isooctano, tapar y mezclar en un mezclador de vórtice
o agitar vigoro?amente durante al menc:i~ 30 segundos.
Agregar inmediatamente 5 ml de soluc1on saturada de
cloruro de sodio. Cubrir con nitrógeno, tapar y mezclar
en un mezclador de vórtice o agitar minuciosamente
durante al menos 15 segundos. Dejar que la capa supe-
rior se torne transparente y transferir a otro tubo. Agitar
la capa metanólica una vez más con 1 ml de isooctano
USP 37 Suplementos Dieteticos / Bacalao 5851

y combinar los extractos isooctánicos. Lavar los extrac- r11 = área del pico de cada ácido graso individual
tos combinados dos veces con 1 ml de agua y secar rH =área total de todos lm picos, excepto por el
sobre sulfato de sodio anhidro. pico del disolvente y el butil hidroxitolueno
Soludón muestra: Proceder según se indica en Solución Criterios de aceptación: La Solución muestra cumple
estandar, excepto que se debe usar una cantidad pe- con los límites descritos en la Tabla 2.
sada del aceite contenido en las Cápsulas.
Sistema cromato9ráfico Tabla 2
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases Límite Límite
Detector: Ionización a la Llama Anotación Inferior Superior
Columna: Capilar de sílice fundida, de 0,25 mm x 30 Ácido Graso Abreviada <Área%) <Área%)
m recubierta con una película de Gl 6 de 0,25 µm. Ácidos arasos saturados
Temperatura Ácido mirístico 14:0 ~_1,Q_ 60
Inyector: 250º Ácido oalmítico 16:0 70 14 o
Detector: 280º Ácido esteárico 18:0 1o 40
Columna: Ver la Tabla 1.
Ácidos arasos monoinsaturados
Ácido oalmitoleico 16:1 n- 7 45 11 5
Tabla 1
Ácido cis-vaccénico 18:1 n-7 20 70
Tiempo de Ácido oleico 18:1 n-9 12 o 21 o
Espera (Hold
Ácido aadoleico 20:1 n-11 1o 55
Time)
a la Tempe- Ácido oondoico 20:1 n-9 50 17 o
Temperatura Rampa de Temperatura ratura Ácido erúcico 22:1 n 9 o 15
Inicial Temperatura Final Final Ácido cetoleico 22:1 n-11 5o 12 o
(º) (º/min) n (min) Ácidos nrasos noliinsaturados
170 1 225 20 Ácido linoleico 18:2 n-6 05 3o
Gas transportador: Helio
Ácido o:-linolénico 18:3 n-3 o 20
Relación de partición de flujo: 1 :200 Ácido moróctico 18:4 n--3 05 45
Volumen de inyección: 1 µL Ácido eicosanentaenoico 20:5 n 3 7o 16 o
Aptitud del sistema Ácido docosahexaenoico 22:6 n- 3 60 18 o
Mue,stras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estandar
Requisitos de aptitud CONTENIDO
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma A
•VITAMINA
de la Solución estándar es similar al Cromatograma de Muestra: 500 mg a 1 g del aceite contenido en las
Referencia provisto con el ER Aceite de Hígado de Cápsulas
Bacalao USP. Identificar los tiempos de retención de Análisis: Proceder según se indica en Valoración de Vita-
los ésteres metílicos de los ácidos grasos pertinentes mina A (571).
comparando el cromatograma de la Solución estándar Criterios de acept_ación: 180 µg (600 Unidades USP) a
con el Cromatograma de Referencia provisto con el 750 µg (2500 Unidades USP) de vitamina A por g de
ER Aceite de Hígado de Bacalao USP. aceite contenido en las Cápsulas
Resolución: No menos de 1,3 entre oleato de metilo •VITAMINA D
y ci~-vaccinato de metilo, y aquél entre gadoleato de Solución A: Alcohol n-amílico y hexano deshidratado
m,etilo y g~ndo~t? d~, metilo e~ ~~ficient~ para pro- (3:997)
pos!tos de 1dent1f1cac1on y med1c1on del area, Solución Solución B: Acetonitrilo, agua y ácido fosfórico
estandar (96:3,8:0,2)
Porcentajes ~eóricos de área: 24,4 ± 1 para palmi- So_lució!1 de butil hidroxitolueno: 1 O mg/ml de butil
tato de metilo, 24,8 ± 1 para estearato de metilo h1drox1tolueno en hexano cromatográfico
25,2 ± 1 para araquidato de metilo y 25,6 ± 1 p;ra Soluc~ón, a_cuosa de hidróxido de potasio: 800 mg/ml
behenato de metilo, Solución de aptitud del sistema de h1drox1do de potasio en agua hervida recientemente.
Análisis Mezclar y enfriar. [NOTA-Preparar esta solución en el
Muestras: Solución estándar y Solución muestra día de su uso.]
Identificar los tiempos de retención de los ésteres metíli- Solución alc?hólica de hidróxido de potasio: Disolver
cos de los ácidos grasos pertinentes en la Solución 3 g_ de h1drox1do de potasio en 50 ml de agua hervida
muestra comparando el cromato9rama de la Solución recientemente. Agregar 1 O ml de alcohol y diluir con
muestra con el de la Solución estandar. agua hervida recientemente hasta 1 00 ml. [NOTA-Pre-
Determinar el número de picos de ésteres metílicos de parar esta solución en el día de su uso.]
ácidos grasos en la Solución muestra: El número de pi- So!uc~ón de ácido ascórbico: 1 00 mg/ml de ácido as-
cos de ésteres metílicos de ácidos grasos que exceden corb1co en agua. [NOTA-Preparar esta solución en el
de 0,05% del área total de los ésteres metílicos de día de su uso.]
ácidos grasos es, por lo menos, 24 y los 24 picos más Solución de estándar interno: 5 µg/ml de ER Ergocal-
grandes d,e los ésteres metílicos representan más del ciferol USP en alcohol
90% del area total. (Estos corresponden a los siguien- Solución madre del estándar: 5 µg/ml de ER Colecal-
tes, en orden común de elución: 14:0, 15:0, 16:0, ciferol USP en alcohol
16:1 n-7, 16:4 n-1, 18:0, 18:1 n-9, 18:1 n-7, 18:2 Solución estándar: Transferir 2,0 ml de Solución madre
n-6, 18:3 n-3, 18:4 n-3, 20:1 n-11, 20:1 n-9, 20:1 del estándar y 2,0 ml de Solución de estándar interno a
n-7, 20:2 n-6, 20:4 n-6, 20:3 n-3, 20:4 n-3, 20:5 n- un matraz de fondo redondo. Proceder según se indica
3, 22:1 n-11, 22:1 n-9, 21 :5 n-3, 22:5 n-3 y 22:6 n- en Solución muestra 1, comenzando donde dice "Agre-
3.) gar 5 ml de ... ".
Calcular el porcentaje de área de cada éster metílico de Solución muestra 1: Transferir una cantidad equiva-
ácidos grasos en la porción de Cápsulas tomada: lente a 4,00 g del aceite contenido en las Cápsulas a un
~atraz d~ fondo redondo. Agregar 5 ml de Solución de
Resultado = (rAI rB) x 100 aCJdo ascorb1co, 100 ml de alcohol y 1 O ml de Solucion
5852 Bacalao / Suplementos Dietéticos
acuosa de hidróxido de potasio, y mezclar. Someter la
mezcla a reflujo en un baño de vapor durante 30 minu-
tos. Agregar 100 mL de una solución de cloruro de so-
dio de 1O mg/mL. Enfriar rápidamente bajo agua co-
rriente y transferir la mezcla saponificada a un
separador de 500 mL, enjuagando el matraz de saponi-
ficación con 75 mL de una solución de cloruro de sodio
de 1O mg/mL y luego con 150 mL de una mezcla de
éter y hexano (1 : 1). Agitar la mezcla saponificada y los
enjuagues combinados vigorosamente durante 30 se-
gundos y dejar en reposo hasta que las capas se tornen
transparentes. Desechar la capa inferior. Lavar los ex-
tractos de éter-hexano a9itando vigorosamente con
50 mL de Solución a/coholica de hidróxido de potasio y,
posteriormente, lavando con tres porciones de 50 mL
de una solución de cloruro de sodio de 1O mg/ml. Pa-
sar la capa superior a través de 5 g de sulfato de sodio
anhidro, colocados en un papel de filtrado rápido, en
un matraz de 250 mL adecuado para un evaporador ro-
tatorio. Lavar el filtro con 1O mL de una mezcla de éter
y hexano (1 :1 ), y combinar con el extracto. Evaporar el
disolvente usando presión reducida a una temperatura
que no exceda de 30º y llenar con nitrógeno cuando se
haya completado la evaporación. Como alternativa,
evaporar el disolvente bajo una corriente suave de ni-
trógeno a una temperatura que no exceda de 30º. Di-
solver el residuo en 1,5 mL de Solución A. [NOTA-Puede
ser necesario calentar suavemente en un baño ultrasó-
nico. Una gran parte del residuo blanco es colesterol.]
Solución muestra 2: Agregar 2,0 mL de Solución de es-
tándar interno a 4,00 g del aceite contenido en las Cáp-
sulas y proceder según se indica en Solución muestra 7
comenzando donde dice "Agregar 5 mL de ... ".
Sistema cromato9ráfico de limpieza
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Fase móvil: Solución A
Columna: Acero inoxidable, de 25 mm x 4,6 cm; re-
lleno Ll O
Volumen de inyección: 350 µL
Análisis (limpieza)
Muestras: Solución estándar, Solución muestra 7 y Solu-
ción muestra 2
Recoger por separado los eluatos de 2 minutos antes
hasta 2 minutos después del tiempo de retención de
colecalciferol en un tubo de vidrio que contenga
1 mL de Solución de butíl hidroxitolueno y provisto de
un cierre hermético. Evaporar cada tubo bajo una co-
rriente de nitrógeno a una temperatura que no ex-
ceda de 30º. Disolver el residuo en 1,5 mL de
acetonitrilo.
Sistema cromato9ráfico analítico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Fase móvil: Solución B
Columna: Acero inoxidable, de 15 mm x 4,6 cm; re-
lleno Ll de 5 µm
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar (después de la limpieza)
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,4 entre colecalciferol y
ergocalciferol
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de colecalciferol en inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra 7 y Solu-
ción muestra 2 (después de la limpieza)
Calcular el contenido de vitamina D, en µg/g, en la
porción de aceite tomada:
Resultado= (Ru/R5) x (C5/Cu)
USP 37
Ru = respuesta de colecalciferol con respecto al
estándar interno corregido en la Solución
muestra 2, según se calcula a continuación
R5 = respuesta de colecalciferol con respecto al
estándar interno en la Solución estándar
= concentración de ER Colecalciferol USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración de aceite en la Solución muestra
2 (g/mL)
Ru = rU2/[r152 - (r151 x rU2! ru1)]
ru2 = respuesta del pico de colecalciferol de la
Solución muestra 2
r152 = respuesta del pico del estándar interno de la
Solución muestra 2
r151 = respuesta del pico del estándar interno de la
Solución muestra 7
ru1 = respuesta del pico de colecalciferol de la
Solución muestra 7
Criterios de aceptación: 1,5 µg (60 Unidades USP) a
6,25 µg (250 Unidades USP) de vitamina D por g de
aceite contenido en las <;::ápsulas
• CONTENIDO DE ACEITE DE HIGADO DE BACALAO
Análisis: Pesar no menos de 1O Cápsulas en un frasco
de pesada tarado. Mediante una cuchilla afilada u otros
medios apropiados, abrir cuidadosamente las Cápsulas,
sin perder material de la cubierta, y transferir el conte-
nido combinado de las Cápsulas a un vaso de precipita-
dos de 100 ml. Retirar cualquier sustancia adherida a
las cubiertas de las Cápsulas vacías lavando con varias
porciones pequeñas de isooctano. Desechar los lavados
y dejar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen en
una corriente de aire seco hasta que se haya evaporado
por completo el isooctano. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en el frasco de pesada tarado original y
calcular el peso neto promedio por Cápsula.
Criterios de aceptacion: 95,0%-105,0% de la cantidad
declarada de aceite de hígado de bacalao
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091 ):
Cumplen co~ los requisito~. ,
• DESINTEGRACION Y DISOLUCION DE SUPLEMENTOS DIETETICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Prueba de Rup-
tura para Cápsulas Blandas
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia /nsaponificable (401): No
más de 1,30% ,
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Acidez (401)
Solución muestra: Mezclar 15 mL de alcohol con
15 mL de éter, agre9ar 5 gotas de fenolftaleína SR y
neutralizar con hidroxido de sodio 0, 1 N. Disolver 2,0 g
del aceite contenido en las Cápsulas en la mezcla y ca-
lentar la solución de aceite a ebullición suave bajo un
condensador de reflujo durante 1O minutos.
Análisis: Enfriar y valorar la mezcla con hidróxido de
sodio O, 1 N SV hasta que se produzca un color rosado
que persista después de agitar durante 30 segundos.
Criterios de aceptación: Se requiere no más de 1,0 mL
de hidróxido de sodio,0, 1 N.
• GRASAS y ACEITES FIJOS, J,ndice de Yodo (401): 145-180
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Saponificación (401):
180-192
[NOTA-Si se ha usado dióxido de carbono como conser-
vante, exponer el aceite contenido en las Cápsulas en
una cápsula hueca en un desecador de vacío durante
24 horas antes de pesar la muestra para la determina-
ción del índice de saponificación.]
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables a temperatura ambiente. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La potencia de la vitamina A y de la vita-
mina D, cuando se indican en la etiqueta, se pueden
USP 37
expre_s,ar en Unidades USP por g de aceite. La potencia
tamb1en se puede expresar en unidades métricas, basán-
dose en que 1 Unidad USP de Vitamina A = 0,3 µg de la
forma todo trans ret1nol y 40 Unidades USP de Vitamina
D = 1_µg. Etiquetar las Cápsulas enfatizando la necesidad
de evitar la congelación o la exposición a la humedad
excesiva o a una temperatura superior a 40º. Cuando se
9edara. el contenido de á~ido docosahex.aenoico y de
ac1do e1cosapentaeno1co, indicar en la etiqueta la canti-
dac;J en mg por Cápsula.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Colecalciferol USP
ER Aceite de Hígado de Bacalao USP
ER Ergocalciferol USP
ER Vitamina A USP
Bacopa
DEFINICIÓN
La ~acopa consta de los tallos y hojas secos de Bacopa mon-
nten (L.) Pennell (Fam. Scrophulariaceae). Contiene no
menos de 2,5% de glicósidos triterpénicos, calculado con
respecto a la materia seca como la suma de bacopásido 1
bacósido A3, bacopásido 11, el isómero jujubogenínico de'
bacopasaponina c y bacopasaponina c.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Bacopa cumple con los requisitos de Pruebas Espe-
cíficas, Características Botánicas.
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: Transferir aproximadamente 1 O mg
de ER ~x~racto en Polvo de Bacopa USP a un matraz
volumetrico de 1 O mL y agregar aproximadamente
8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calentar sua-
vemente durante 15-20 minutos, diluir con metanol a
volumen, mezclar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solu~ión ~uE'.stra: Usar la Solución muestra, preparada
segun se 1nd1ca en la prueba de Contenido de Glicósidos
Triterpénicos.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 15 µL, en bandas de 5-1 O mm
Fase móvil: Acetato de etilo, metanol y agua (7:2:1)
Solución reveladora: Vainillina al 1 % en alcohol y
ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
l<?s cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa:, Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Soluoon reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
aproximadamente 70º, y observar bajo luz visible.
Criterios de ~cE'.ptación: La Solución muestra presenta
una zona principal de color azul oscuro debida a una
mezcla, de bacósido A3, bac~pásido 11, el isómero juju-
bogenin1co de bacopasaponina c y bacopasaponina e a
un valor Rr de ?Proxima.damente O,? y una mancha de
color rosado pal1do debida a bacopasido 1 a un valor Rr
de aproximadamente 0,4, las cuales corresponden en
posición y color a las zonas en el cromatograma de la
Solución estándar. Se observan otras zonas para la Solu-
ción muestra y la Soluciqn estándar.
• c. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: La Solución mues-
tra de la prueba de _Co0tenido de Glicósidos Triterpénicos
presenta un pico principal en el tiempo de retención co-
rrespond)ente ?I de bacósido .Ai en el cromatograma de
la Soluoon estandar A. ldent1f1car otros picos de glicósidos
Suplementos Dietéticos/ Bacopa 5853
triterpénicos en la Solución muestra por comparación con
el cromatograma de la Solución estandar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo_ de Bacopa USP. La Solución muestra presenta
p15=os ad1c1ona!es correspondientes a bacopásido 1, baco-
pas1do 11, el 1somero JUJUbogenínico de bacopasaponina
c y bacopasaponina c.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE c;,ucÓSIDOS TRITERPÉNICOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua agregar O 5 mL de
ácido fosfórico, diluir con agua 'hasta 1 OOÓ mL mezclar
filtrar, y desgasificar. ' '
SoluciÓIJ ~: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Fase mov1I: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
lmin) (%) (%)
o 70 30
25 60 40
26 70 30
30 70 30
Solución estándar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad pesada de ER. ~acósido A3 USP en metanol para
obtener una soluc1on con una concentración de aproxi-
madamente 0,5 mg/mL.
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
1 O mg de ER ~xt.racto en Polvo de Bacopa USP a un
matraz volumetrico de 1 O mL y agregar aproximada-
mente 8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calen-
tar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con me-
tano! ~ volume~, y mezclar. Antes de la inyección, pasar
a traves de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
5 mL del filtrado.
Solución muestra:_ Transferir aproximadamente 2,5 g
de Bacopa, reducida a polvo fino, a un matraz de fondo
redo_ndo de 100 mL equipado con un condensador de
refluJº.: Agregar 25 mL de metanol, someter a reflujo en
un bano de agua durante 1 O minutos, enfriar a tempe-
ratura amb1e~t~, y decantar el sobrenadante. Repetir
hasta que el ultimo extracto se torne incoloro. Combi-
nar los extractos, filtrar, concentrar al vacío, y ajustar el
volumen hasta 100 mL usando metanol. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tai:naño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros 5 ml del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Cc?lumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm desac-
tivado para bases con recubrimiento exhaustivo
(endcapped).
Temperatura de la columna: 27 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Bacopa USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de ba-
copásido 11 y bacósido Ai, Solución estándar B
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
bacósido Ai, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2% deter-
minada a partir del pico de bacósido A3 en inyeccio-
nes repetidas, Solución estándar A
5854 Bacopa / Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, la
Solución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Bacopa
USP, identificar los tiempos de retención de los picos
correspondientes a los diferentes glicósidos triterpéni-
cos. Los tiempos de retención relativos aproximados
para los diferentes glicósidos triterpénicos se propor-
cionan en la siguiente tabla.
Tiempo de
Retención
Analito Relativo
Bacopásido 1 o 73
Bacósido A3 1 00
Bacopásido 11 1 04
El isómero iuiuboqenínico de bacopasaponina C 1 15
Bacopasaponina C 1 22
Calcular por separado los porcentajes de bacopásido 1,
bacósido A3, bacopásido 11, el isómero jujubogenínico
de bacopasaponina c y bacopasaponina c en la por-
ción de Bacopa tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x F x 1 00
ru = respuesta del pico de cada glicósido
triterpénico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de bacósido A3 de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Bacósido A3 USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V =volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Bacopa usado para preparar la
Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito:
1,00 para bacósido A3; 1,03 para bacopásido
1; 0,81 para bacopásido 11; 0,99 para e
isómero jujubogenínico de bacopasaponina
c y 0,75 para bacopasaponina c
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de ba-
copásido 1, bacósido A3, bacopásido 11, el isómero juju-
bogenínico de bacopasaponina c y bacopasaponina C:
Se encuentra no menos de 2,5%, con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
lmpu!'ezas Inorgánicas , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 6,0%
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas, ,
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgánica Extraña (561): No más de 2,0%
• PROCEDIMIENTO 2: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El tallo es rastrero, suculento, glabro,
blando, obtuso-angular; con entrenudos largos, inser-
ciones de raíces en los nudos; sin hojas en dirección a
la base; con ramas ascendentes. Las hojas son simples,
sésiles o con pecíolo corto, opuestas, suculentas, de
1-2 mm de espesor; oblongo-obovadas o en forma de
espátula, borde completo o en raras ocasiones denta-
dos, ápice redondeado, nervadura central poco mar-
cada, de 0,6-2,5 cm de largo y 3-8 mm de ancho; la
superficie superior es de color verde, la superficie infe-
rior es de color verde y punteada. El artículo farmaco-
peico es de color amarillento; consta de mezclas secas
USP 37
de hojas y tallos partidos, en su mayoría con hojas des-
prendidas; olor suave similar al del heno y sabor muy
amargo.
Histología
Sección transversal de los tallos: Capa epidérmica;
corteza amplia compuesta de células parenquimáticas
de paredes delgadas y grandes espacios intercelulares;
vasos de xilema dispuestos en forma radial, radios me-
dulares uniseriados; médula compuesta de células re-
dondas o isodiamétricas de paredes delgadas con es-
pacios intercelulares definidos. Ausencia de canales de
resina y esclereidas pericíclicas.
Sección transversal de las hojas: Presentan una es-
tructura más o menos isobilateral; epidermis con pelos
glandulares y estomas; la superficie superior tiene más
pelos y menos estomas que la superficie inferior; me-
sófilo compuesto de tejido esponjoso, con unos pocos
prismas de oxalato de calcio y haces vasculares
, presentes .
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Bacopa redu-
cida a polvo fino a 105º durante 3 horas: pierde no más
de ,12,0% de su peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 18%, determinado en 1,0 g de Bacopa redu-
cid§! a polvo fino ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 6,0%
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la P,lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bacósido A3 USP
ER Extracto en Polvo de Bacopa USP
Bacopa en Polvo
DEFINICIÓN
La Bacopa en Polvo es Bacopa reducida a polvo o a polvo
muy fino. Contiene no menos de 2,5% de glicósidos tri-
terpénicos, calculado con respecto a la materia seca como
la suma de bacopásido 1, bacósido A3, bacopásido 11, el
isómero jujubogenínico de bacopasaponina e y bacopasa-
ponina C.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Bacopa en Polvo cumple con los requisitos de Prue-
bas Específicas, Caracterís~icas Botánicas. ,
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: Transferir aproximadamente 1 O mg
de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un matraz
volumétrico de 1 O mL y agregar aproximadamente
8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calentar sua-
vemente durante 15-20 minutos, diluir con metanol a
volumen, mezclar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
USP 37
Solución muestra: Usar la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Contenido de Glicósidos
Triterpénicos.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 15 µL, en bandas de 5-1 O mm
Fase móvil: Acetato de etilo, metano! y agua (7:2:1)
Solución reveladora: Vainillina al 1 % en alcohol y
ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
fos cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
aproximadamente 70º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
una zona principal de color azul oscuro debida a una
mezcla de bacósido A3, bacopásido 11, el isómero juju-
bogenínico de bacopasaponina c y bacopasaponina c a
un valor RF de aproximadamente 0,6 y una mancha de
color rosado pálido debida a bacopásido 1 a un valor RF
de aproximadamente 0,4, las cuales corresponden en
posición y color a las zonas en el cromatograma de la
Solución estándar. Se observan otras zonas para la Solu-
ción muestra y la Solución estándar.
• c. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC: La Solución mues-
tra de la prueba de Contenido de Glicósidos Triterpénicos
presenta un pico principal en el tiempo de retención co-
rrespondiente al de bacósido A3 en el cromatograma de
la Solución estándar A. Identificar otros picos de glicósidos
triterpénicos en la Solución muestra por comparación con
el cromatograma de la Solución estandar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Bacopa USP usado. La Solución muestra pre-
senta picos adicionales correspondientes a bacopásido 1,
bacopásido 11, el isómero jujubogenínico de bacopasapo-
nina c y bacopasaponina c.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GLICÓSIDOS TRITERPÉNICOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de
ácido fosfórico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar, y desgasificar.
Solución B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
Cmln) (%) (%)
o 70 30
25 60 40
26 70 30
30 70 30
Solución estándar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad pesada con exactitud de ER Bacósido A3 USP en
metano! para obtener una solución con una concentra-
ción conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml.
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
1O mg de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un
matraz volumétrico de 1 O mL y agregar aproximada-
mente 8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calen-
tar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con me-
tano! a volumen, y mezclar. Antes de la inyección, pasar
a través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
5 mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Bacopa en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
Suplementos Dietéticos / Bacopa 5855
traz de fondo redondo de 100 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 mL de metanol, so-
meter a reflujo en un baño de agua durante 1 O minu-
tos, enfriar a temperatura ambiente, y decantar el so-
brenadante. Repetir hasta que el último extracto se
torne incoloro. Combinar los extractos, filtrar, concen-
trar al vacío, y ajustar el volumen hasta 100 mL usando
metanol. Antes de la inyección, pasar a través de un
filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros 5 mL del
filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm desac-
tivado para bases con recubrimiento exhaustivo
(endcapped).
Temperatura de la columna: 27 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Bacopa USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de ba-
copásido 11 y bacósido A3, Solución estándar B
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
bacósido A3, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2% deter-
minada a partir del pico de bacósido A3 en inyeccio-
nes repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
la Solución estándar B y el cromatograma de referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Bacopa USP, identificar los tiempos de retención de
los picos correspondientes a los diferentes glicósidos
triterpénicos. Los tiempos de retención relativos apro-
ximados para los diferentes glicósidos triterpénicos se
proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de
Retención
Ana lito Relativo
Bacooásido 1 o 73
Bacósido A 1 00
Bacooásido 11 1 04
El isómero iuiuboaenínico de bacooasaoonina C 1 15
Bacooasaoonina C 1 22
Calcular por separado los porcentajes de bacopásido 1,
bacósido A3, bacopásido 11, el isómero jujubogenínico
de bacopasaponina c y bacopasaponina c en la por-
ción de Bacopa en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = respuesta del pico de cada glicósido
triterpénico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de bacósido A3 de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Bacósido A3 USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Bacopa en Polvo usado para preparar
la Solución muestra (mg)
5856 Bacopa / Suplementos Dietéticos
F = factor de conversión para cada analito:
1,00 para bacósido A3; 1,03 para bacopásido
1; 0,81 para bacopásido 11; 0,99 para el
isómero jujubogenínico de bacopasaponina
ey 0,75 para bacopasaponina e
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de ba-
copásido 1, bacósido A3, bacopásido 11, el isómero juju-
bogenínico de bacopasaponina e y bacopasaponina C:
Se encuentra no menos de 2,5% con respecto a la ma-
teria seca.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas , DELGADA
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 6,0%
• METALES PESADOS, Método fil (231 ): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánic~s , ,
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Color amarillento, olor suave
similar al del heno y sabor muy amargo. Bajo el micros-
copio puede observarse: fragmentos de células epidérmi-
cas dorsales y ventrales de las hojas en vista superficial,
con tricomas glandulares sésiles con 4-8 células y esto-
mas diacíticos o anomocíticos; la epidermis superior tiene
más tricomas y menos estomas que la epidermis inferior;
células de la epidermis inferior con paredes anticlinales
sinuosas J. en algunos lugares, cutícula estriada; fragmen-
tos de celulas epidérmicas del tallo en vista superficial;
células parenquimáticas que encierran cavidades, algunas
contienen cristales de oxalato de calcio con forma pris-
mática y de roseta; fragmentos de vasos anillados y espi-
ralados cortados longitudinalmente; fragmentos de célu-
las corticales del tallo; y cristales de oxalato de calcio.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Bacopa en
Polvo a 105º durante 3 horas: pierde no más de 12,0%
de su peso .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 18%, determinado en 1,0 g de Bacopa en
Polvo
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 6,0%
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , ción muestra y la Solución estándar.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la ¡;>lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bacósido A 3 USP
ER Extracto en Polvo de Bacopa USP
Extracto en Polvo de Bacopa
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Bacopa se prepara a partir de Ba-
copa mediante extracción con agua, alcohol, metanol o
USP 37
una mezcla de estos disolventes. La relación entre el ma-
terial vegetal y el extracto está entre 20:1 y 10:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no más de 11 0,0% de la
cantidad declarada de glicosidos triterpénicos, calculado
con respecto a la materia seca como la suma de bacopá-
sido 1, bacósido A3, bacopásido 11, el isómero jujubogení-
nico de bacopasaponina C y bacopasaponina C. Puede
contener sustancias agregadas adecuadas como
portadores.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
Solución estándar: Transferir aproximadamente 1O mg
de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un matraz
volumétrico de 1O mL y agregar aproximadamente
8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calentar sua-
vemente durante 15-20 minutos, diluir con metanol a
volumen, mezclar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Someter a ultrasonido durante apro-
ximadamente 1 O minutos una cantidad de Extracto en
Polvo de Bacopa equivalente a aproximadamente
40 mg de glicósidos triterpénicos en 1 O mL de metano!,
centrifugar, y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 15 µL, en bandas de 5-1 O mm
Fase móvil: Acetato de etilo, metanol y agua (7:2:1)
Solución reveladora: Vainillina al 1 % en alcohol y
ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1: 1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
aproximadamente 70º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
una zona principal de color azul oscuro debida a una
mezcla de bacósido A3, bacopásido 11, el isómero juju-
bogenínico de bacopasaponina c y bacopasaponina c a
un valor RF de aproximadamente 0,6 y una mancha de
color rosado pálido debida a bacopásido 1 a un valor RF
de aproximadamente 0,4, las cuales corresponden en
posición y color a las zonas en el cromatograma de la
Solución estándar. Se observan otras zonas para la Solu-
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC: La Solución mues-
tra de la prueba de Contenido de Glicósidos Triterpénicos
presenta un pico principal en el tiem¡o de retención co-
rrespondiente al de bacósido A3 en e cromatograma de
la Solución estándar A. Identificar otros picos de glicósidos
triterpénicos en la Solución muestra por comparación con
el cromatograma de la Solución estandar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Bacopa USP usado. La Solución muestra pre-
senta picos adicionales correspondientes a bacopásido 1,
bacopásido 11, el isómero jujubogenínico de bacopasapo-
nina c y bacopasaponina c.
COMPOSICIÓN , ,
• CONTENIDO DE GLICOSIDOS TRITERPENICOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de
ácido fosfórico, diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar,
filtrar, y desgasificar.
USP 37
Solución B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 70 30
25 60 40
26 70 30
30 70 30
Solución estándar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad pesada de ER Bacósido A3 USP en metanol para
obtener una solución con una concentración de aproxi-
madamente 0,5 mg/mL.
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
1 O mg de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un
matraz volumétrico de 1 O mL y agregar aproximada-
mente 8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calen-
tar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con me-
tano! a volumen, y mezclar. Antes de la inyección, pasar
a través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
5 mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo de Bacopa equivalente a aproximadamente
25 mg de glicósidos triterpénicos a un matraz volumé-
trico de 25 mL y agregar 15 mL de metanol. Someter a
ultrasonido y calentar suavemente durante 15-20 minu-
tos, diluir con metanol a volumen, y mezclar. Antes de
la inyección, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros 5 mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm desac-
tivado para bases con recubrimiento exhaustivo
(endcapped).
Temperatura de la columna: 27 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Bacopa USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de ba-
copásido 11 y bacósido A3, Solución estándar B
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
bacósido A3, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2% deter-
minada a partir del pico de bacósido A3 en inyeccio-
nes repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
la Solución estándar By el cromatograma de referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Bacopa USP usado, identificar los tiempos de reten-
ción de los picos correspondientes a los diferentes gli-
cósidos triterpénicos. Los tiempos de retención relati-
vos aproximados para los diferentes glicósidos
triterpénicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de
Retención
Analito Relativo
Bacooásido 1 o 73
Bacósido Ai 1 00
Suplementos Dietéticos / Bacopa 5857
·---- ------ ·--------
Tiempo de
Retención
Analito Relativo
Bacooásido 11 1 04
El isómero iuiuboaenínico de bac~onin_¿¡_<;:____ _____ _Ll2___
Bacooasaoonina C 1 22
Calcular por separado los porcentajes de bacopásido 1,
bacósido A3, bacopásido 11, el isómero jujubogenínico
de bacopasaponina c y bacopasaponina c en la por-
ción de Extracto en Polvo de Bacopa tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 1 00
ru = respuesta del pico de cada glicósido
triterpénico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de bacósido A3 en la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Bacósido Ai USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de Bacopa
en la Solución muestra (mg/mL)
F = factor de conversión para cada analito:
1,00 para bacósido A3; 1,03 para bacopásido
1; 0,81 para bacopásido 11; 0,99 para el
isómero jujubogenínico de bacopasaponina
c y 0,75 para bacopasaponina c
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de ba-
copásido 1, bacósido Ai, bacopásido 11, el isómero juju-
bogenínico de bacopasaponina c y bacopasaponina C:
Se encuentra no menos de 90,0%---no más de 110,0%
de la cantidad declarada de glicósidos triterpénicos con
respecto a la materia seca.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánic~s , ,
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo de Bacopa a 105º durante 3 horas: pierde no más
de 5% de su peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/ml.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLÓGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bacósido Ai USP
ER Extracto en Polvo de Bacopa USP
5858 Beta Caroteno / Suplementos Dietéticos
Beta Caroteno-ver Beta Caroteno en
Monografías Generales
Beta Caroteno, Cápsulas-ver Beta
Caroteno, Cápsulas en Monografías Generales
Beta Caroteno, Preparación
DEFINICIÓN
La Preparación de Beta Caroteno es una combinación de
beta caroteno con una o más sustancias inertes. Puede
presentarse en forma sólida o líquida. Contiene no menos
de 95,0% y no más de 130,0% de la cantidad declarada
de beta caroteno total (C40Hs6), con respecto a la sustan-
cia anhidra. Contiene no menos de 95,0% de la forma
todo trans de beta caroteno en el contenido de beta caro-
teno total.
(Pospuesto indefinidamente)
IDENTIFICACIÓN
• A.
Solución muestra: Transferir 5,0 mL de Solución madre
de la muestra A o Solución madre de la muestra B, a
partir de la prueba de Contenido de Beta Caroteno, a un
matraz volumétrico de 1 00 mL y diluir con ciclohexano
a volumen. Pasar la solución a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm.
Análisis: Registrar el espectro UV-Vis de 300 a 600 nm.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
un hombro a aproximadamente 427 nm, un máximo
de absorción a aproximadamente 455 nm y otro má-
ximo a aproximadamente 483 nm. El cociente de ab-
sorbancias A455 / A4s3 está entre 1, 14 y 1, 18.
• B. , El tiempo de retención del pico prin~]pal d~ la Solu-
cion muestra corresponde al de la Soluoon estandar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Beta
Caroteno.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Fase móvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumétrico de 1 L y disolver con 20 mL de
2-propanol. Agregar 0,2 mL de N-etildiisopropilamina,
25 mL de solución de acetato de amonio al 0,2%,
455 mL de acetonitrilo y aproximadamente 450 mL de
metano!. Dejar que la solución alcance la temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen.
Diluyente: 50 µg/mL de butil hidroxitolueno en alcohol
Solución de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Beta Caroteno para Aptitud del Sistema USP a un
matraz volumétrico de 50 mL. Agregar 1 mL de agua y
4 mL de tetrahidrofurano, y someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos. Diluir con Diluyente a volumen y so-
meter a ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente, pasar la suspensión a través de un
filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm y usar el filtrado transparente.
Solución madre del estándar: 60 µg/mL de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solución estándar A: Transferir 5,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL,
agregar 5,0 mL de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen. La concentración de la forma todo
trans de beta caroteno en esta solución se determinará
USP 37
mediante el procedimiento espectrofotométrico,_ ,usando
Solución estándar B, según se indica a continuac1.C?n.
Solución estándar B: Transferir 5,0 mL de Soluoon ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 457 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución estándar B
Calcular la concentración de beta caroteno total
(mg/mL), como la forma todo trans de beta caroteno
(CoHs6) en la Solución estándar B.
Resultado = Al F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de la Solución estándar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno pura en ciclohexano, 250,5
Solución madre de la muestra A (para Preparaciones
sólidas de Beta Caroteno): Transferir una cantidad de
Preparación, equivalente a 1 O mg de beta caroteno, a
un matraz volumétrico de 250 ml. Agregar 250 mg de
butil hidroxitolueno, 0,5 mL de proteasa R alcalina y
15 mL de agua. Inclinar ligeramente el matraz para hu-
medecer todo el contenido. Someter la solución a ultra-
sonido en un baño ultrasónico a aproximadamente 50º
durante 30 minutos y agitar por rotación suave en
intervalos de 1 O minutos. Agregar 100 mL de alcohol a
la suspensión tibia y agitar vigorosamente. Agregar
135 mL de cloruro de metileno y agitar nuevamente.
Dejar la mezcla en reposo en la oscuridad hasta que
alcance la temperatura ambiente. (aproximadamente _2
horas). Diluir con cloruro de met1leno a volumen, agitar
vigorosamente y dejar que los sólidos sedimenten en la
oscuridad.
Solución madre de la muestra B (para suspensiones lí-
quidas de Beta Caroteno en Preparaciones oleosas):
Transferir una cantidad de Preparación, equivalente a
20 mg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
250 ml. Agregar 250 mg de butil hidroxitolueno,
120 mL de cloruro de metileno y 100 mL de alcohol.
Agitar el matraz hasta que la muestra se haya disuelto o
suspendido completamente. Dejar la mezcla en reposo
en la oscuridad hasta que alcance la temperatura am-
biente (aproximadamente 2 horas). Agregar cloruro de
metileno a volumen y agitar de nuevo vigorosamente.
Solución muestra: Transferir 5,0 mL de Solución madre
de la muestra A o Solución madre de la muestra B a un
matraz volumétrico de 50 mL y diluir con una mezcla
de cloruro de metileno y Diluyente (1 :1) a volumen. Pa-
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
tándar A
Los tiempos de retención relativos aproximados de los
componentes en la Solución de aptitud del sistema se
proveen en la Tabla 7.
USP 37
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retención Respuesta
Nombre Relativo Relativa
Forma todo trans de alfa
caro ten o o 93 11
Forma todo trans de be-
ta caroteno 1 00 1 Muestra: Solución muestra
9-cis-Beta caroteno 1 07 1 Volumen de inyección: 20 ~tL
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el ER Beta Ca-
roteno para Aptitud del Sistema USP usado.
Resolución: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno, y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
[NOTA-Los factores de respuesta relativa para 13-cis-
beta caroteno y 15-cis-beta caroteno son 1,2 y 1,4,
respectivamente.]
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
los analitos pertinentes de la Solución muestra por
comparación con los de la Solución de aptitud del sis-
tema. Medir el área de los picos.
Calcular el porcentaje de beta caroteno total en la por-
ción de Preparación tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = [(área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno) + (área del pico de 9-cis-beta
caroteno) + (área del pico de 13-cis-beta
caroteno x 1,2) + (área del pico de 15-cis-
beta caroteno x 1,4) + (suma de las áreas de
los picos de otros isómeros-cis de beta
caroteno)] en la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A
Cs = concentración de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A, según se
determina usando el procedimiento
espectrométrico (mg/mL)
Cu = concentración nominal de Preparación en la
Solución muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porción de Preparación tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A
Cs = concentración de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A, según se
determina mediante el procedimiento
espectrométrico (mg/mL)
Cu = concentración nominal de Preparación en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: La Preparación contiene
95,0%-1 30,0% de la cantidad declarada de beta caro-
teno total, calculado como (C40Hs6) con respecto a la
sustancia anhidra, y no menos de 95,0% de la forma
Suplementos Dietéticos / Beta Glucano 5859
todo tram de beta caroteno en el contenido de beta
caroteno total.
(Pospuesto indefinidamente)
• ALFA CAROTENO Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Fase móvil, Solución de aptitud del sistema, Solución
muestra y Sistema cromatográfico: Proceder según
se indica en la prueba de Contenido de Beta Caroteno.
Análisis
Calcular el porcentaje de alfa caroteno y de otros com-
puestos relacionados individuales relativos al beta ca-
roteno total en la porción de Preparación tomada:
Resultado = (ru/r,) x 100
ru = área del pico de alfa caroteno u otros
compuestos relacionados individuales
r, = suma de las áreas de todos los picos
Criterios de aceptación
Alfa caroteno: No más de 1,0%
Cualquier otro compuesto relacionado individual:
No más de 1,0%
Compuestos relacionados totales (incluyendo alfa ca-
roteno): No más de 5,0%
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 2,0%
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 1o ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921 ): No más de
8,0% para Preparaciones sólidas; no más de 1,0% para
Preparaciones líquidas.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases se-
llados herméticamente y resistentes a la luz y al oxígeno.
Almacenar en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre y el contenido
de vehículos y antioxidantes agregados a la formulación,
y el contenido de carotenoides totales como beta
ca rote no.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Beta Caroteno USP
(todo-E)-1, 1'-(3,7,12, 16-Tetrametil-
1,3,5,7,9, 11, 13, 15, 17-octadecanonaeno-1, 18-diil)bis
[2,6 ,6-tri meti lciclohexeno].
ER Beta Caroteno para Aptitud del Sistema USP
Beta Glucano
DEFINICIÓN
El Beta Glucano se obtiene mediante extracción de la pared
celular de levadura de cerveza Baker (Saccharomyces cere-
visiae) fermentada y procesada térmicamente. Está com-
puesto principalmente de polímeros de glucano ramifica-
dos /3-(1,3)/(1,6). Asimismo, se puede esperar la presencia
de pequeñas cantidades de /3-(1,6)-glucano y quitina en el
producto final. Contiene no menos de 70% de beta glu-
cano, calculado como glucosa después de la hidrólisis en-
zimática, con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR (761)
Solución estándar: Disolver 1 O mg de ER Beta Glucano
USP en 0,6 mL de dimetil sulfóxido-d6 y calentar a 1 00º
durante 1 hora. Luego, agregar O, 1 mL de D20, mezclar
la solución y transferir a un tubo para resonancia mag-
nética nuclear (RMN).
Solución muestra: Disolver 1 O mg de Beta Glucano en
0,6 mL de dimetil sulfóxido-d,, y calentar a 100º du-
5860 Beta Glucano / Suplementos Dietéticos
rante 1 hora. Luego, agregar O, 1 mL de D20, mezclar la
solución y transferir a un tubo para RMN.
Análisis: Registrar los espectros 1 H NMR a 80º y compa-
rar las resonancias individuales de la Solución muestra
con las de la Solución estándar. Las señales principales
asociadas con Beta Glucano se presentan en la Tabla 7.
Tabla 1
Señales de RMN Principales
de 1 H ER Beta Glucano USP
H-1 (1 3)-qlucano 4 52 d 1 = 7 5 Hz 1H
H-2· 4 v 5 (1 3-) 3,27-3,33 m 3H
H-3 v 6b (1 3-\ 3 45-3 48 m 2H
H-6a (1 3-) 3 71 d 1 = 11 Hz 1 H
H-1 (] 6\-nlucano 4 27 d 1 = 7 7 Hz 1H
Integrar el área bajo los picos en cinco ocasiones para
cada muestra y promediar. Determinar el porcentaje re-
lativo de glucano con enlaces (1,6) en la porción de
Beta Glucano tomada:
Resultado = {A/(A + 8)} x 100
A = valores de integración para la señal a
4,27 ppm, correspondientes a H-1 del
glucano (1,6)
B = valores de integración para la señal a
4,52 ppm, correspondientes a H-1 del
glucano (1,3)
Criterios de aceptación: El espectro de 1 H de la Solu-
ción muestra presenta un patron de desplazamiento quí-
mico con ubicaciones de señal e intensidades relativas
que corresponden a las de la Solución estándar. Asi-
mismo, el porcentaje relativo de glucano con enlaces
(1,6) equivale a 10%-18% de los enlaces totales.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE BETA GLUCANO
Solución amortiguadora A: Disolver 11,6 mL de ácido
acético glacial en aproximadamente 900 mL de agua.
A/·ustar la solución con solución de hidróxido de sodio
a 20% a un pH de 5 y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solución amortiguadora B: Disolver 69,6 mL de ácido
acético glacial en aproximadamente 800 mL de agua.
Ajustar con solución de hidróxido de sodio al 20% a un
pH de 3,8 y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solución amortiguadora C: Disolver 12, 12 g de tris(hi-
droximetil)aminometano (TRIS), 11,69 g de cloruro de
sodio y 4, 16 g de la sal tetrasódica dihidrato del ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA) en aproximadamente
900 mL de agua. ~ustar con ácido clorhídrico concen-
trado o con solucion de hidróxido de sodio al 20% a
un pH de 7,5 y diluir con agua hasta 1000 ml. [NOTA-
La Solución amortiguadora C se puede almacenar du-
rante 1 año a 2º-8º.]
Solución amortiguadora D 1 : Transferir 45,287 g de
fosfato dibásico de potasio, 30,382 g de ácido p-hidro-
xibenzoico y 4 g de azida sódica a un matraz volumé-
trico de 1000 ml y agregar cuidadosamente 800 mL de
agua. Mezclar con una barra mezcladora y calentar mo-
deradamente hasta disolver por completo. Dejar que la
solución se enfríe, ajustar con solucion de hidróxido de
potasio al 16,7% a un pH de 7,4 y diluir con agua a
volumen. [NOTA-Almacenar la Solución amortiguadora
O en un frasco color ámbar con una fecha de caduci-
dad de 3 años a 4º.]
Solución de liticasa: Preparar el volumen requerido de
liticasa a partir de Arthrobacter luteus 2 a una concentra-
ción de 1O U/µL disolviendo la cantidad declarada por
el fabricante (U/mg) en una solución que contenga So-
1 Esta solución amortiguadora también está disponible como Frasco #3 (Bottle
#3) del kit K-YBGL (Megazyme), o Frasco #l (Bottle #1) del kit de GOPOD
(Megazyme).
2 Liticasa de Arthrobacter luteus, Sigma L4025 o equivalente.
USP 37
lución amortiguadora Cal 10% (v/v). [NOTA-La solución
no utilizada se puede almacenar a no más de -15º con
una fecha de caducidad de 1 año. Cada vez que se
utilice un lote diferente de liticasa, se debe calificar la
concentración de solución de liticasa requerida.]
Solución de (1,6)-glucanasa: Solución de 1 U/300 µL
de (1,6)-glucanasa liofilizadai en Solución amortigua-
dora A. [NOTA-Es posible que los sólidos no se disuel-
van por completo; por lo tanto, esta solución se debe
manejar como una suspensión homogénea. Esta solu-
ción es estable durante al menos 60 días a no más de
-15º.]
Mezcla de enzimas de pulido: Mezclar 2000 U de exo-
beta-glucanasa4 y 400 U de beta-glucosidasa 5 en
100,0 mL de Solución amortiguadora A. Se puede usar
como alternativa una premezcla de las enzimas 6 •
[NOTA-Almacenar sobre hielo durante el procedimiento
y para su uso en una valoración en el mismo día. La
mezcla de enzimas de pulido no utilizada se puede volver
a congelar una vez a no más de -15º con una fecha de
caducidad de 2 años.]
Reactivo de glucosa oxidasa/peroxidasa: Disolver el
contenido del Reactivo de Determinación de Glucosa 7
en 1 L de agua que contenga 50 mL de Solución amorti-
guadora D. [NOTA-Almacenar el reactivo en un frasco
de color ámbar y etiquetar con una fecha de caducidad
de 3 meses a una temperatura entre 2º y 8º o 1 año a
no más de -17º. Minimizar el tiempo en que el reactivo
esté a temperatura ambiente.]
Solución muestra: Transferir 15-20 mg de Beta Glu-
cano a un vial de vidrio de 16 x 100 mm. Colocar el
vial en un baño de hielo. Agregar una alícuota de
0,4 mL de hidróxido de potasio frío (1 en 6) mientras
se mezcla en un mezclador de vórtice hasta dispersar el
polvo. Devolver el vial al baño de hielo. Continuar con
los ciclos de mezcla en un mezclador de vórtice y colo-
cación de los viales en el baño de hielo durante 20
minutos. La mezcla debe convertirse en una dispersión
homo__génea y traslúcida.
Solucion estándar: Proceder según se indica en la Solu-
ción muestra excepto que se debe usar ER Beta Glucano
USP en lugar de Beta Glucano. [NOTA-Preparar la Solu-
ción muestra y la Solución estándar por triplicado. Re-
sulta crítico para el éxito de la valoración que la mues-
tra esté bien dispersada.]
Digestión de liticasa: Al retirar todos los viales que
contienen la Solución muestra o la Solución estándar del
baño de hielo, agregar 1,6 mL de Solución amortigua-
dora B y 600 µL de Solución de liticasa a cada vial. Incu-
bar la mezcla a 50º durante 12-18 horas y enfriar a
temperatura ambiente.
Digestión de (1,6)-glucanasa: Después de enfriar to-
dos los viales, retirar una alícuota de 130 µL de cada
vial y digerir más agregando 25 µL de solución de hi-
dróxido de potasio al 16,7% y 300 µL de Solución de
(1,6)-glucanasa. Incubar los viales a 80º durante 15 mi-
nutos y enfriar a temperatura ambiente.
Digestión de beta glucanasa/glucosidasa: Después de
enfriar todos los viales, agregar 390 µL de la Mezcla de
enzimas de pulido a cada vial e incubar los viales a 40º
durante 1 hora. Enfriar los viales a temperatura am-
biente, centrifugar y transferir alícuotas de 50 µL (por
duplicado) a nuevos viales.
Solución blanco de enzimas: Preparar blancos de en-
zima por triplicado combinando todos los reactivos usa-
dos durante las etapas de digestión, excepto por la So-
lución muestra o la Solución estándar.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
3 Disponible comercialmente como Pustulanasa, Cell 36, Prokazyme o equiva-
lente.
'E-EXBGL 200 U/ml, 200 U/frasco, Megazyme o equivalente.
'200 U/frasco, Megazyme o equivalente.
6 E-EXBGOS, Megazyme o equivalente.
7 Frasco #4 (Bottle #4) del kit K-YBGL o Frasco #2 (Bottle #2) del kit GOPOD,
Megazyme o equivalente.
USP 37
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 51 O nm
Análisis: Diluir las alícuotas de 50 µL obtenidas después
de la Digestión de beta glucanasa/glucosidasa con 50 µL
de agua y luego agregar 3 ml de Reactivo de glucosa
oxidasa/peroxidasa. Incubar los viales durante 20 minu-
tos a 40º. Determinar las absorbancias de cada vial de
la Solución muestra o de la Solución estándar contra la
Solución blanco de enzimas. Preparar una curva estándar
usando la absorbancia de una serie de estándares de
glucosa tratados de manera similar (O; O, 1; 0,25; 0,5 y
1,0 mg/ml). A partir de la pendiente de la curva están-
dar y de la absorbancia de la Solución muestra y de las
Soluciones estándar digeridas, determinar la concentra-
ción, C, en mg/ml, de glucosa liberada en la cubeta:
Resultado = (As - Aa)/pendiente
As = absorbancia promedio de la muestra o de
Beta Glucano USP
A8 = absorbancia promedio de la Solución blanco de
enzimas
Calcular el porcentaje de beta glucano como glucosa en
la porción de Beta Glucano tomada:
Resultado = 100 x C!{[(WTs/F1) x (F2/F3)]/2}
WTs = peso original de la muestra o de ER Beta
Glucano USP (mg)
F1 = volumen total en el vial durante la Digestión
de liticasa, 2,6 ml
F2 = volumen de la muestra o de ER Beta Glucano
USP transferido a un nuevo vial durante la
Digestión de (1,6)-glucanasa, O, 130 ml
F3 = volumen total durante la Digestión de beta
glucanasa/9lucosidasa, 0,845 ml
Criterios de aceptación: No menos de 70% de beta
glucano, calculado como glucosa después de la hidróli-
sis enzimática, co11 respecto a la sustancia seca
• CONTENIDO DE PROTEINA
Muestra: 1,0 g de Beta Glucano
Análisis: Proceder según se indica en Determinación de
nitrógeno (461) y multiplicar el contenido de nitrógeno
por 6,25.
Criterios de aceptación: No más de 10,0%
• CONTENIDO DE GRASA
Muestra: 2 g de Beta Glucano, previamente secado
Análisis: Transferir la Muestra a un dedal de extracción
y mezclar con una cantidad equivalente de arena seca y
limpia. Colocar un tapón de algodón o lana de vidrio
exento de grasa en la parte superior del dedal. Colocar
el dedal en un aparato de extracción continuo equi-
pado con un matraz de recolección tarado. Verter
75 ml de éter de petróleo a través de la mezcla en el
matraz de recolección. Extraer a una velocidad de con-
densación de 5-6 gotas/segundo durante 4 horas y
luego a una velocidad de 2-3 gotas/segundo durante
las si$Juientes 16 horas. Desconectar el matraz de reco-
leccion, evaporar cuidadosamente el disolvente y secar
el matraz de recolección y su contenido en un horno
de secado a 100º durante 30 minutos hasta peso cons-
tante. Calcular el porcentaje del extracto (grasa cruda)
en la porción de Beta Glucano tomada.
Criterios de aceptación: No más de 20,0%
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS DERIVADAS DE ELEMENTOS-PROCEDIMIENTOS
(233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 0,5 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 0,5 µg/g
Mercurio: No más de O, 1 µg/g
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 2 x 10 4
Suplementos Dietéticos/ Beta Glucano 5861
ufc/g; el recuento total combinado de hongos filamento-
sos y levaduras no excede de 2,5 x 101 ufc/g; y el re-
cuento de bacterias Gram negativas tolerantes a la bilis
no excede de 1 O ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GLICÓGENO
Solución amortiguadora B: Preparar según se indica
en Contenido de Beta Glucano.
Solución de amiloglucosidasa/invertasa 8 : Una mezcla
de 1630 U/ml de amiloglucosidasa y 500 U/ml de in-
vertasa en solución de glicerol (50% v/v)
Muestra: 1 00 mg
Análisis: Transferir la Muestra por triplicado a viales indi-
viduales de vidrio con tapa de rosca de 16 x 150 mm.
ER Colocar los viales en un baño de hielo y agregar a cada
vial una alícuota de 2 ml de hidróxido de potasio frío
(1 en 6) mientras se mezcla en un mezclador de vórtice
hasta dispersar el polvo. Devolver el vial al baño de
hielo. Continuar con los ciclos de mezcla en un mezcla-
dor de vórtice y colocación de los viales en el baño de
hielo durante 20 minutos. La mezcla debe convertirse
en una dispersión homogénea y traslúcida. Agregar
8 ml de Solución amortiguadora B. Mezclar minuciosa-
mente en un mezclador de vórtice y agregar inmediata-
mente 200 µL de Solución de amiloglucosidasa/invertasa
y mezclar de nuevo en un mezclador de vórtice. Incu-
bar la mezcla a 40º durante 30-35 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Mezclar nuevamente en un
mezclador de vórtice, transferir a un tubo de centrífuga
adecuado y centrifugar hasta obtener un sobrenadante
transparente. Transferir alícuotas duplicadas de 50 µL de
sobrenadante a nuevos viales y proceder según se in-
dica en el Análisis de Contenido de Beta Glucano.
Criterios de aceptación: No más de 1,0%
• MANOSA
Solución A: Agua purificada al 100%
Solución B: Hidróxido de sodio 956 mM
Fase móvil: Ver la Tabla 2.
Tabla 2
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 36 o 64 o
15 o 36 o 64 o
35,0 (inyección de
muestra) 59 4 40 6
80 o 59 4 40 6
[NOTA-El tiempo de corrida generalmente requerido es
80 minutos.]
Solución de estándar interno: 0,8 mg/ml de ER lnosi-
tol USP en agua
Solución muestra: Pesar 2,0-4,0 mg de Beta Glucano
por duplicado en viales con barras mezcladoras. Agre-
gar 500 µL de ácido trifluoroacético (TFA) puro y dejar
que la mezcla forme una dispersión uniforme mez-
clando durante 1 hora a temperatura ambiente. Incubar
en un baño de agua a 80º durante 2 horas mezclando
y luego enfriar a temperatura ambiente. Agregar 100 µL
de la Solución de estándar interno a cada vial e incubar
mezclando en un baño de agua hirviendo durante 15
minutos. Enfriar nuevamente a temperatura ambiente y
luego agregar 1,07 ml de agua a cada vial, e incubar
mezclando en un baño de agua hirviendo durante 1
hora. Enfriar las soluciones a temperatura ambiente y
secar durante toda la noche en un aparato SpeedVac o
equivalente, a baja temperatura con el sistema de crio-
' Como alternativa, se puede usar directamente el Frasco #2 (Bottle #2) del
kit K-YBGL (Megazyme o equivalente).
5862 Beta Glucano / Suplementos Dietéticos USP 37

bombeo apagado. Disolver la preparación seca en
2,5 mL de agua desionizada y pasar a través de un filtro
de PTFE para jeringa, con un tamaño de poro de 0,2
µm. Diluir con un volumen igual de agua antes de
inyectar.
Soluciones estándar: Preparar una solución de ER Dex-
trosa USP de 4 mg/mL y una solución de ER Manosa
USP de 80 µg/ml. Transferir por separado alícuotas de
estas soluciones a viales individuales (ver la Tabla 3).
Preparar cada estándar por duplicado y liofilizarlos. Tra-
tar los viales liofilizados según se indica en Solución
muestra, comenzando donde dice "Agregar 500 µL de
ácido trifluoroacético puro".
nes estándar. Generar dos líneas de respuesta estándar
graficando el cociente entre las áreas de los picos en
función de la cantidad (µg) de glucosa y manosa en
las Soluciones estándar. Calcular el cociente entre las
áreas de los picos de glucosa y manosa y el estándar
interno de la Solución muestra. A partir de los cocientes
de respuesta calculados entre los picos de glucosa y
manosa y sus respectivas líneas de respuesta estándar,
determinar el contenido de glucosa, Ce, y manosa, CM,
ambos en µg, en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de manosa en la porción de Beta
Glucano tomada:

Tabla 3
CM = contenido de manosa en la Solución muestra a
Número partir de la línea de regresión de manosa
de µL/Vial Conteni- µL/Vial Conteni- (µg)
ldenti- de do de do Ce = contenido de _glucosa en la Solución muestra a
flcación 4 mg/ml de 80 µg/ml de partir de la linea de regresión de glucosa
del deGlu- Glucosa de Mano- Manosa (µg)
Estándar cosa luo) sa (uo) Criterios de aceptación: No más de 1,0% de manosa,
o o o o o como una función de hexosa recuperada total (glucosa
1 100 400 25 2 y manosa) ,
• RESIDUO DE INCINERACION (281): No más de 2,5%
2 200 800 50 4
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
3 300 1200 100 8 Muestra: 1 g
4 500 2000 200 16 Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 3 horas.
5 1000 4000 400 32 Criterios de aceptación: No más de 8,0%
Sistema cromato9ráfico REQUISITOS ADICIONALES
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Modo: HPLC pe~meables y resistentes a la luz.
Detector: Electroquímico • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Modo del detector: Detección amperométrica por ER Beta Glucano USP
pulsos ER Dextrosa USP
Intervalo del detector: 3000 µC (se puede modificar ER lnositol USP
en caso necesario) ER Manosa USP
Electrodo de trabajo: Oro
Electrodo de referencia: pH, plata-cloruro de plata
Forma de onda electroqu1mica: Ver la Tabla 4.

Tabla 4 Biotina-ver Biotina en Monografías

Tiempo Poten el al Generales
ls) lV) lnteoración
o 00 010
o 20 010 Inicio
040 010 Fin
Boswelia Serrata
o 41 -2 00 DEFINICIÓN
o 42 -2 00 La Boswelia Serrata es la resina oleogomosa obtenida por
o 43 o 60 incisión o producida mediante exudado espontáneo del
o 44 -O 10 tallo y las ramas de Boswellia serrato Roxb. (Fam. Bursera-
o 50 -O 10 ceae). Contiene no menos de 1,0% de los derivados ceto
de ácido j3-boswélico, calculado con respecto a la materia
Columnas seca como la suma de ácido 11-ceto-¡3-boswélico y ácido
Guarda columna: 4 mm x 5 cm; relleno L47 3-acetil-11-ceto-¡3-boswélico.
Columna analítica: 4 mm x 25 cm; relleno L47
Temperatura de la columna: 30º IDENTIFICACIÓN
Velocidad de flujo: 0,4 mL/min • A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
Volumen de inyección: 1 O µL DELGADA (201)
Aptitud del sistema Solución estándar: Tratar una cantidad de ER Extracto
Muestra: Identificación de estándar #5 de Boswelia Serrata USP calentando suavemente en me-
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para inositol, tano! para obtener una solución con una concentración
manosa y glucosa son 0,68; 0,95 y 1,0 conocida de 30 mg/mL, enfriar, centrifugar, y usar el
respectivamente.] sobrenadante.
Requisito de aptitud: Solución muestra: Usar la Solución muestra, preparada
Resolución: No menos de 1,5 entre manosa y según se,indica en la prueba de Contenido de Derivados
Qlucosa Ceto de Acidos /3-Boswélicos siguiente y concentrar hasta
Analisis 10% del volumen.
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
Calcular los cocientes entre las áreas de los picos de de 0,25 mm
glucosa y manosa y el estándar interno de las Solucio-
USP 37
Fase móvil: Mezcla de hexano y acetato de etilo (6:4)
Reactivo para inmersión: Preparar una solución de
ácido sulfúrico al 10% en metanol. [NOTA-Preparar in-
mediatamente antes de su uso.]
Volumen de aplicación: 1 O µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente 90% de la placa. Retirar, secar, y
observar bajo luz UV a 254 nm. Sumergir en el Reac-
tivo para inmersión, calentar durante 5-1 O minutos a
1 00º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: Bajo luz UV a 254 nm, la Solu-
ción muestra presenta dos zonas principales debidas a
ácido 11-ceto-¡3-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-/3-
boswélico a valores RF de aproximadamente 0,30 y
0,36, respectivamente, correspondientes a zonas de la
Solución estándar. Bajo luz visible, la Solución muestra
presenta dos zonas adicionales debidas a ácido /3-bos-
wélico y ácido 3-acetil-/3-boswélico a valores RF de apro-
ximadamente 0,49 y 0,58, respectivamente, correspon-
diente a zonas de la Solución estándar. Se observan
otras zonas de menor intensidad en la Solución muestra
y la Solución estándar.
• B. El cromatograma a 21 O nm de la Solución muestra, en
la prueba de Contenido de Derivados Ceto de Acidos /3-
Boswélicos, presenta picos para ácido 11-ceto-¡3-boswé-
lico, ácido 3-acetil-11-ceto-¡3-boswélico, ácido /3-boswé-
lico y ácido 3-acetil-/3-boswélico a tiempos de retención
que corresponden a los del cromatograma a 21 O nm de
la Solución estándar 8 y al Cromatograma de Referencia a
21 O nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Serrata
USP.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE DERIVADOS Cno DE ÁCIDOS /3-BoswÉucos
S9lución estándar A: Disolver una cantidad de ER
Acido 3-Acetil-11-ceto-¡3-boswélico USP en metanol para
obtener una solución con una concentración conocida
de O, 1 mg/ml.
Solución estándar B: Tratar una cantidad de ER Ex-
tracto de Boswelia Serrata USP calentando suavemente
en metanol para obtener una solución con una concen-
tración conocida de 1 O mg/ml. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro con un tamaño de poro de
0,45 µm.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Boswelia Serrata triturada a un matraz Erlenmeyer, y
someter a reflujo en 50 ml de metanol en un baño de
agua durante 15 minutos, mezclando con un agitador
magnético. Repetir hasta que el último extracto se
torne incoloro. Evaporar los extractos combinados hasta
aproximadamente 50 ml, transferir a un matraz volu-
métrico de 100 ml, y diluir con metanol a volumen.
Antes de la inyección, pasar a través de un filtro con un
tamaño de poro de 0,45 µm y desechar los primeros
ml del filtrado.
Fase móvil: Preparar una mezcla filtrada y desgasificada
de acetonitrilo, agua y ácido acético glacial
(900:100:0, 1 ). Realizar los ajustes necesarios.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: Ver la tabla de gradientes si-
guiente.
Suplementos Dietético'> / Boswelia 5863
~--------- ------,---- -- ---- --
Tiempo Velocidad de flujo
(min) 1
- ---- (ml/min)
o -- 1
5 15
10 2
30 2
32 1
45 1
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar 8
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
11-ceto-¡J-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-¡3-boswé-
lico son aproximadamente 1,0 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solución
estándar 8 es similar al Cromatograma de Referencia a
254 nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Se-
rrata USP.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
la respuesta del pico de ácido 3-acetil- 11 -ceto-/3-bos-
wélico en inyecciones repetidas, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5, pico de ácido
11-ceto-¡3-boswélico, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8 y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar 8 y el
Cromatograma de Referencia a 254 nm provisto con
el lote de ER Extracto de Boswelia Serrata USP, identi-
ficar los tiempos de retención de los picos de ácido
11-ceto-j)-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-/3-boswé-
lico en la Solución muestra.
Calcular por separado los porcentajes de los dos anali-
tos en la porción de Boswelia Serrata tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/W) x 1 OF
ru = área del pico de cada analito de la Solución
muestra
rs = área del pico de ácido 3-acetil-11-ceto-j)-
boswélico de la Solución estándar A
Cs concentración de ER Ácido 3-Acetil-11-ceto-/3-
=
boswélico USP en la Solución estándar A
(mg/ml)
W = peso de Boswelia Serrata tomada para
preparar la Solución muestra (g)
F = factor de conversión para cada analito
(0,93 para ácido 11-ceto-/3-boswélico y
1,0 para ácido 3-acetil-11-ceto-¡J-boswélico)
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes calcula-
dos para ácido 11-ceto-¡3-boswélico y ácido 3-acetil-
11-ceto-¡3-boswélico: No menos de 1,0% con respecto
a la materia seca.
IMPUREZAS
lmpu!"ezas Inorgánicas , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 0,5%
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas, ,
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgánica Extraña (56) ): No más de 2,0%,
• PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Se presenta como lágrimas ovoides pe-
queñas, que en ocasiones forman masas aglomeradas
de hasta 5 cm de largo y 2 cm de espesor; de color
blancuzco a amarillo dorado; la fractura es quebradiza y
la superficie fracturada es cerosa y translúcida; presenta
5864 Boswelia /Suplementos Dietéticos
un olor aromático característico; sabor aromático y lige-
,ramente mucilaginoso.
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Boswelia Se-
rrata reducida a polvo fino a 105 durante 2 horas:
pie~de no más de 12,0% ,de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 2,0%, determinado en 2,0 g de Boswelia Se-
rra~a reducida a polvo fin,o.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 56%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar
en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín de la especie de Boswellia de la que se obtuvo la
resina oleogomosa.
• ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido 3-Acetil-11-ceto-f:i-boswélico USP
ER Extracto de Boswelia Serrata USP
Extracto de Boswelia Serrata
DEFINICIÓN
El Extracto de Boswelia Serrata se prepara a partir de Boswe-
lia Serrata reducida a polvo, usando disolventes adecua-
dos tales como isopropanol, alcohol, metano!, hexanos o
mezclas de estos disolventes. La relación entre el material
vegetal inicial y el Extracto es aproximadamente 6:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no más de 110,0% de la
cantidad declarada de Extracto, calculado con respecto al
extracto seco como la suma de ácido l l -ceto-f3-boswélico
y ácido 3-acetil-11-ceto-f:i-boswélico; puede contener sus-
tancias agregadas adecuadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: Tratar una cantidad de ER Extracto
de Boswelia Serrata USP calentando suavemente en me-
tano! para obtener una solución con una concentración
conocida de 30 mg/mL, enfriar, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Tratar una cantidad de Extracto ca-
lentando suavemente en metanol para obtener una so-
lución con una concentración conocida de 30 mg/mL,
enfriar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Fase móvil: Mezcla de hexano y acetato de etilo (6:4)
Reactivo para inmersión: Preparar una solución de
ácido sulfúrico al 10% en metano!. [NOTA-Preparar in-
mediatamente antes de su uso.]
Volumen de aplicación: 1 O µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente 90% de la placa. Retirar, secar, y
observar bajo luz UV a 254 nm. Sumergir en el Reac-
tivo para inmersión, calentar durante 5-1 O minutos a
1 00º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: Bajo luz UV a 254 nm, la Solu-
ción muestra presenta dos zonas principales debidas a
ácido 11-ceto-f:i-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-/3-
boswélico a valores Rr de aproximadamente 0,30 y
0, 36, respectivamente, correspondientes a zonas de la
Solución estándar. Bajo luz visible, la Solución muestra
presenta dos zonas adicionales debidas a ácido f:i-bos-
USP 37
wélico y ácido 3-acetil-f:i-boswélico a valores Rr de apro-
ximadamente 0,49 y 0,58, respectivamente, correspon-
dientes a zonas de la Solución estándar. Se observan
otras zonas de menor intensidad en la Solución muestra
y la Solución estándar.
• B. El cromatograma a 21 O nm de la Solución muestra, en
la prueba de Contenido de Derivados Ceto de Acidos f:i-
Boswélicos, presenta picos para ácido 11 -ceto-f3-boswé-
lico, ácido 3-acetil-11-ceto-f:i-boswélico, ácido f:i-boswé-
lico y ácido 3-acetil-f:i-boswélico a tiempos de retención
que corresponden a los del cromatograma a 21 O nm de
la Solución estándar B y al Cromatograma de Referencia a
21 O nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Serrata
USP.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE DERIVADOS CETO DE ÁCIDOS f:i-BoswÉucos
Solución estándar A: Disolver una cantidad de ER
Ácido 3-Acetil-11-ceto-f:i-boswélico USP en metano! para
obtener una solución con una concentración conocida
de O, 1 mg/mL.
Solución estándar B: Tratar una cantidad de ER Ex-
tracto de Boswelia Serrata USP calentando suavemente
en metano! para obtener una solución con una concen-
tración conocida de 1 O mg/mL. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro con un tamaño de poro de
0,45 µm.
Solución muestra: Tratar una cantidad de Extracto ca-
lentando suavemente en metano! para obtener una so-
lución con una concentración conocida de 1 O mg/ml.
Antes de la inyección, pasar a través de un filtro con un
tamaño de poro de 0,45 µm y desechar los primeros
mL del filtrado.
Fase móvil: Preparar una mezcla filtrada y desgasificada
de acetonitrilo, agua y ácido acético glacial
(900:100:0, l ). Realizar los ajustes necesarios.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: Ver la tabla de gradientes si-
guiente.
Tiempo Velocidad de flujo
(min) (mL/min)
o 1
5 15
10 2
30 2
32 1
45 1
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
l l -ceto-f3-boswélico y ácido 3-acetil- l l -ceto-f3-boswé-
lico son aproximadamente 1,0 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solución
estándar B es similar al Cromatograma de Referencia a
254 nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Se-
rrata USP.
Factor de asimetría: No más de 1,5, pico del ácido
11 -ceto-f:i-boswélico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
la respuesta del pico de ácido 3-acetil- l l -ceto-f3-bos-
wélico en inyecciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar By el
Cromatograma de Referencia a 254 nm provisto con
el lote de ER Extracto de Boswelia Serrata USP, identi-
USP 37
ficar los tiempos de retención de los picos de ácido
11-ceto-¡3-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-¡3-boswé-
lico en el cromatograma de la Solución muestra.
Calcular por separado los porcentajes de ácido
11-ceto-¡3-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-{3-boswé-
lico en la porción de Extracto tomada:
Resultado = (ru/rs) x (CsV /W) x 1OOF
ru = área del pico de cada analito de la Solución
muestra
rs = área del pico de ácido 3-acetil-11-ceto-/3-
boswélico de la Solu~ión estándar A
Cs = concentración de ER Acido 3-Acetil-11-ceto-/3-
boswélico USP en la Solución estándar A
(mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Extracto tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
F = factor de conversión
de cada analito
(0,93 para ácido 11-ceto-{3-boswélico y
1,0 para ácido 3-acetil-11-ceto-{3-boswélico)
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de los
dos analitos. Contiene no menos de 90,0% y no más
de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto, calcu-
lado con respecto al extracto seco, como la suma de
ácido 11-ceto-{3-boswélico y ácido 3-acetil-11-ceto-/3-
boswélico.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánic~s , ,
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto a
105º durante 2 horas: pierde no más de 5,0% de su
peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1Q3 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar
en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se preparó el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido 3-Acetil-11-ceto-{3-boswélico USP
ER Extracto de Boswelia Serrata USP
Ascorbato de Calcio-ver Ascorbato de
Calcio en Monografías Generales
Carbonato de Calcio-ver Carbonato de
Calcio en Monografías Generales
Suplementos Dietéticos / Calcio 5865
Carbonato de Calcio, Suspensión Oral-
ver Carbonato de Calcio, Suspensión Oral en
Monografías Generales
Carbonato de Calcio, Tabletas-ver
Carbonato de Calcio, Tabletas en Monografías
Generales
Citrato de Calcio-ver Citrato de Calcio en
Monografías Generales
Citrato de Calcio, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Citrato de Calcio contienen no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
calcio (Ca).
IDENTIFICACIÓN
• A. La Solución muestra de la prueba de Contenido pro-
duce líneas de emisión o absorción a las longitudes de
onda características del calcio.
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Calcio (191) y Ci-
tratos (191)
Análisis: Moler una Tableta hasta polvo fino en un mor-
tero. Transferir el polvo a un tubo de centrífuga, agre-
gar 2-5 mL de agua, someter a ultrasonido durante 1
minuto, agitar y centrifugar.
Criterios de aceptación: El sobrenadante cumple con
los requisitos de las pruebas.
CONTENIDO
[NOTA-Una solución madre del estándar está disponible co-
mercialmente con diferentes concentraciones de calcio.
Pueden realizarse ajustes volumétricos necesarios en la So-
lución estándar. Las concentraciones de la Solución están-
dar y la Solución muestra pueden modificarse para que se
adapten al intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
• CONTENIDO DE CALCIO, Procedimiento 7
Solución madre del estándar: Pesar aproximadamente
1,001 g de carbonato de calcio, previamente secado a
300º durante 3 horas y enfriado en un desecador du-
rante 2 horas, y disolver en 25 mL de ácido clorhídrico
1 N. Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de
carbono y diluir con agua hasta 100 mL para obtener
una solución con una concentración conocida de apro-
ximadamente 4000 µg/mL de calcio.
Solución estándar: Agregar a un matraz volumétrico
de 200 mL, 100 mL de agua y 4 mL de ácido nítrico, y
mezclar meticulosamente. Pipetear y transferir 25,0 mL
de Solución madre del estándar al matraz volumétrico y
diluir con agua a volumen para obtener una solución
con una concentración conocida de aproximadamente
500 µ~/mL de calcio.
Solucion muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción pesada de
Tabletas reducidas a polvo, equivalente a aproximada-
mente O, 1 g de calcio, a un matraz de 50 ml. Agregar
4 mL de ácido nítrico y calentar la solución a ebullición
suave, durante la cual se desprenda humo. Calentar a
ebullición la solución durante 30 minutos adicionales
con agitación constante por rotación suave, periodo du-
rante el cual no debe observarse desprendimiento de
humo. Enfriar la solución a temperatura ambiente,
transferir cuantitativamente toda la solución a un ma-
5866 Calcio / Suplementos Dietéticos
traz volumétrico de 200 mL, diluir con agua a volumen,
mezclar y filtrar.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqulmica de Plasma (730).)
Modo: Plasma inductivamente acoplado, ICP-AES
Longitud de onda analítica: 317,93 nm. [NOTA-Las
condiciones de operación pueden desarrollarse y opti-
mizarse basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. La configuración típica incluye una potencia de
radiofrecuencia (RF) de aproximadamente 1 300 vatios,
un flujo de antorcha de argón de aproximadamente
15 L/min, un flujo auxiliar de argón de aproximada-
mente 0,2 L/min y una velocidad de flujo del nebuliza-
dor de aproximadamente 0,8 L/min.]
Análisis: Determinar la emisión de la Solución estándar,
la Solución muestra y una solución de ácido nítrico al
2% como el blanco a la longitud de onda indicada
anteriormente.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de calcio
(Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de calcio de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de calcio de la Solución
estándar
Cs = concentración de calcio en la Solución estándar
(µg/mL)
Cu = concentración nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
• CONTENIDO DE CALCIO, Procedimiento 2
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N 15 minutos.
Solución estándar de calcio: Disolver 1,001 g de car-
bonato de calcio, previamente secado a 300º durante 3
horas, y enfriado en un desecador durante 2 horas, en
25 mL de ácido clorhídrico 1 N. Calentar a ebullición
hasta expulsar el dióxido de carbono y diluir con agua
hasta 1000 mL para obtener una concentración de
400 µ_g/mL de calcio.
Solucion madre del estándar: 100 µg/mL de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio en ácido clorhídrico
0, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 1 00 mL. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen hasta obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/mL de calcio.
Solución muestra: [NOTA-Reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas.] Transferir el equivalente a 5 Table-
tas, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar el crisol en una mufla mantenida
a 550º durante 6-12 horas y enfriar. Agregar 60 mL de
ácido clorhídrico y calentar a ebullición suave en una
placa caliente o en un baño de vapor durante 30 minu-
tos, enjuagando intermitentemente la superficie interna
del crisol con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y transferir
cuantitativamente el contenido del crisol a un matraz
volumétrico de 1 00 ml. Enjuagar el crisol con pequeñas
porciones de ácido clorhídrico 6 N y agregar los enjua-
gues al matraz. Diluir con agua a volumen y filtrar, des-
echando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir esta solu-
ción cuantitativamente con ácido clorhídrico 0, 125 N
hasta obtener una concentración de 2 µg/mL de calcio,
agregando 1 mL de Solución de cloruro de lantano por
100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,7 nm
USP 37
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones, usando
el Blanco. A partir de la ecuación de regresión lineal,
calculada usando las absorbancias de las Soluciones
estándar en función de las concentraciones, determi-
nar la concentración, C, en µg/mL de calcio en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración determinada de calcio en la
Solución muestra
Cu = concentración nominal de calcio en la Solución
muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1000
ufc/g. El recuento total combinado de hongos filamento-
sos y levaduras no excede de 100 uf,c/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos en Desintegración,
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de calcio en
términos de mg/Tableta.
Fosfato Dibásico de Calcio-ver Fosfato
Oibásico de Calcio en Monografías Generales
Fosfato Dibásico de Calcio, Tabletas-ver
Fosfato Dibásico de Calcio, Tabletas en
Monografías Generales
Fosfato Tri básico de Calcio-ver Fosfato
Tribásico de Calcio en Monografías Generales
Glubionato de Calcio, Jarabe-ver
Glubionato de Calcio, jarabe en Monografías
Generales
USP 37
Gluceptato de Calcio-ver Gluceptato de
Calcio en Monografías Generales
Gluconato de Calcio-ver Gluconato de
Calcio en Monografías Generales
Gluconato de Calcio, Tabletas-ver
Gluconato de Calcio, Tabletas en Monografías
Generales
Lactato de Calcio-ver Lactato de Calcio en
Monografías Generales
Lactato de Calcio, Tabletas-ver Lactato
de Calcio, Tabletas en Monografías Generales
Lactobionato de Calcio-ver Lactobionato
de Calcio en Monografías Generales
Levulinato de Calcio-ver Levulinato de
Calcio en Monografías Generales
L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio
ca 7+
C20HnCaN106 · xH20
C20HnCaN106 (anhidro) 497,52
N-[ 4-[[(2-Amino-1,4,5,6, 7,8-hexahydro-5-methyl-4-oxo-( 6S)-
pteridinyl)methyl]amino ]benzoyl]-L-glutamic acid, calcium
salt (1 :1 );
Sal cálcica (1 :1) del ácido N-{4-[[((6S)-2-amino- l ,4,5,6,7,8-
hexahidro-5-metil-4-oxo-6-pteridinil)metil]amino]-benzoil}-
L-glutámico [151533-22-1 ].
DEFINICIÓN
El L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio contiene no menos de
95,0% y no más de 102,0% de 5-metiltetrahidrofolato de
calcio (C20HnCaN106), la suma de los diastereoisómeros L
y D, calculada con respecto a la sustancia anhidra y
exenta de disolventes, de la cual no más de 1,0% corres-
ponde a D-5-metiltetrahidrofolato de calcio.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
[NOTA-Si los espectros obtenidos presentan diferencias,
disolver la sustancia a examinar y el ER DL-5-Metiltetra-
hidrofolato de Calcio USP por separado en una canti-
dad mínima de agua y agregar gota a gota suficiente
Suplementos Dietéticos /Calcio 5867
acetona para producir un precipitado. Dejar en reposo
durante 15 minutos, centrifugar para recoger el precipi-
tado, lavar el precipitado dos veces con una cantidad
mínima de acetona y secar. Registrar los nuevos espec-
tros usando \os residuos.]
• B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES, Calcio (191): Una
solución de 5 mg/mL cumple con los requisitos.
• C. HPLC: El tiempo de retención del pico principal de la
Solución muestra corresponde al de la Solución estándar,
según se obtienen en la Valoración. Cumple con los crite-
rios de aceptación de la prueba de Pureza Enantiomérica.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Solución amortiguadora: 7,8 g/L de fosfato diácido de
sodio dihidrato en agua
Solución A: Ajustar Solución amortiguadora con solución
de hidróxido de sodio al 32% (p/v) a un pH de 6,5.
Solución B: Metano! y Solución amortiguadora (35:65).
Ajustar con solución de hidróxido de sodio al 32% (p/v)
a un pH de 8,0.
Fase móvil: Elución por gradiente. Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 100 o
14 45 55
17 o 100
24 o 100
24 01 100 o
33 100 o
[NOTA-Después del análisis, se debe lavar la columna y
almacenarla en una mezcla de metanol y agua
(85:15).]
Solus:ión de aptitud del sistema: Tr9nsferir 25 mg de
ER Acido Fólico USP y 25 mg de ER Acido 4-aminoben-
zoilglutámico USP a un matraz volumétrico de 100 mL.
Agregar aproximadamente 15 mg de bicarbonato de
sodio y de carbonato de sodio al matraz, agregar sufi-
ciente agua, someter a ultrasonido hasta disolver y di-
luir con agua a volumen. Transferir 1,0 mL de esta solu-
ción a un segundo matraz volumétrico de 1 00 mL que
contenga 50 mg de ER DL-5-Metiltetrahidrofolato de
Calcio USP, disolver y diluir con agua a volumen.
[NOTA-Las siguientes Soluciones estándar y muestra
deben inyectarse inmediatamente después de su pre-
paración y sólo una vez.]
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER DL-5-Metiltetrahi-
drofolato de Calcio USP en agua
Solución muestra: 0,5 mg/mL de L-5-Metiltetrahidrofo-
lato de Calcio en agua
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 32º
Velocidad de flujo: 1, 1 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de los componentes de la Solución de aptitud del
sistema se listan en la Tabla 2. Los isómeros L y D de
5-metiltetrahidrofolato coeluyen como un solo pico. El
ácido 4a-hidroxi-5-metiltetrahidrofólico, el ácido 5-me-
tiltetrahidropteroico y el ácido dimetiltetrahidrofólico
se incluyen como componentes menores en el ER DL-
5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP.]
5868 Calcio / Suplementos Dietéticos USP 37

Requisitos de aptitud M = molaridad real de la Solución volumétrica

Resolución: Solución de aptitud del sistema (mmol/ml)
No menos de 6 entre ácido 4-aminobenzoilglutá- F = factor de equivalencia, 35,45 mg/mmol
mico y ácido 4a-hidroxi-5-metiltetrahidrofólico W = peso de la Muestra (mg)
No menos de 8 entre ácido fólico y ácido Criterios de aceptación: No más de 0,5%
5-metiltetrahidrofólico • IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
No menos de 1 5 entre ácido 5-metiltetrahidrofó- Criterios de aceptación
lico y ácido dimetiltetrahidrofólico Boro: No más de 50 µg/g
Desviación estándar relativa: Preparar tres Soluciones Platino: No más de 1 O µg/g
estándar distintas e inyectar cada una inmediata- Arsénico: No más de 1,5 µg/g
mente y sólo una vez. No más de 2,0%; factor de Cadmio: No más de 0,5 µg/g
respuesta del pico en tres inyecciones Plomo: No más de 1,0 µg/g
Análisis Mercurio: No más de 1,5 µg/g
Muestras: Solución estándar y Solución muestra • DISOLVENTES RESIDUALES (467)
Calcular el porcentaje de 5-metiltetrahidrofolato de cal- Criterios de aceptación
cio (C 20 H23 CaN 706), la suma de los diastereoisómeros L Etanol: No mas de 0,5%
y D, en la porción de L-5-Metiltetrahidrofolato de Cal- 2-Propanol: No más de 0,5%
cio tomada: [NOTA-Para los criterios de aceptación para cualquier
otro disolvente residual, ver Disolventes Residuales
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 (467).]
• COMPUESTOS RELACIONADOS
ru = respuesta del pico de la Solución muestra Solución A, Solución B, Fase móvil, Solución de apti-
rs = respuesta del pico de la Solución estándar tud del sistema, Solución estándar, Solución mues-
C5 = concentración de ER DL-5-Metiltetrahidrofolato tra, Sistema cromatográfico, Aptitud del sistema y
de Calcio USP en la Solución estándar Requisitos de aptitud: Proceder según se indica en la
(mg/ml) Valoración.
Cu = concentración de L-5-Metiltetra- Análisis
hidrofolato de Calcio en la Solución muestra Muestras: Solución estándar y Solución muestra
(mg/ml) [NOTA-Las impurezas se listan en la Tabla 2.]
Criterios de aceptación: 95,0%-102,0%, con respecto Calcular el porcentaje de cada impureza, como ácido
a la sustancia anhidra y exenta de disolventes libre, en la porción de L-5-Metiltetrahidrofolato de Cal-
cio tomada:
IMPUREZAS
• CLORURO Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x (M,1/M,2) x 100
Muestra: 300 mg
Blanco: Mezclar 1 ml de ácido nítrico con 75 ml de ru = respuesta del pico de la impureza
agua. correspondiente de la Solución muestra
Sistema volumétrico r1 = respuesta del pico principal de la Solución
(Ver Volumetría (541 ).) estándar
Modo: Valoración directa C5 = concentración de ER DL-5-Metiltetrahidrofolato
Solución volumétrica: Nitrato de plata 0,005 M SV de Calcio USP en la Solución estándar
Detección del punto final: Potenciométrica (mg/ml)
Análisis: Disolver la Muestra en 75 ml de agua (calentar Cu = concentración de L-5-Metiltetra-
hasta un máximo de 40º), agregar 1 ml de ácido ní- hidrofolato de Calcio en la Solución muestra
trico y valorar con Solución volumétrica. Realizar una de- (mg/ml)
terminación con un Blanco y hacer las correcciones F = factor de respuesta relativa para el pico de la
necesarias. impureza correspondiente (ver la Tabla 2)
Calcular el porcentaje de cloruro (CI) en la Muestra M, 1 = peso molecular de ácido L-
tomada: 5-metiltetrahidrofólico, 459,46
M,2 = peso molecular de L-5-metiltetra-
Resultado = [(Vs - Va) x M X F/W] x 100 hidrofolato de calcio, 497,52
Criterios de aceptación
Vs = volumen de Solución volumétrica consumida
[NOTA-No tomar en cuenta los picos de impurezas me-
por la Muestra (ml) nores de 0,05%.]
Va = volumen de Solución volumétrica consumida
por el Blanco (ml)
USP 37 Suplementos Dietéticos /Calcio 5869

Impurezas individuales: Ver la Tabla 2. Modo: HPLC

Detector: UV 280 nm
Tabla 2 Columna: 4,0 mm x 15 cm; relleno L79 1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 40º
Criterios de Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Tiempo de Factor de Aceptación, Volumen de inyección: 1O µL
Retención Respuesta No más de Aptitud del sistema
Nombre Relativo Relativa (%) Muestra: Solución de aptitud del sistema
Ácido 4-aminoben- [NOTA-Los tiempos de retención relativos para L-5-me-
zoilalutámico' o 29 o 91 05 tiltetrahidrofolato y D-5-metiltetrahidrofolato son apro-
Ácido 4a-hidroxi-5- ximadamente 1 y 1,5, respectivamente.]
metil-tetrahidrofó- Requisitos de aptitud
licob o 37 1 09 1 o Resolución: No menos de 1,5 entre L-5-metiltetrahi-
(6R)-Mefox<.d o 49 1 05 - drofolato y D-5-metiltetrahidrofolato
1,0 (suma de
Análisis
(65)-Mefoxc,d o 50 1 05 6R V 65)
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de D-5-metiltetrahidrofolato en la
Ácido tetrahidrofó-
porción de L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio tomada:
lico' o 65 1 ºº' 05
Ácido 7,8-dihidro- Resultado = [(ro/(ro + rt) x 100]
fálico' o 83 o 95 05
Ácido fólicog o 85 o 83 05 ro = respuesta del pico de D-5-metiltetrahidrofolato
Ácido 5, 10-metile- de la Solución muestra
notetrahidrofóli- rt = respuesta del pico de L-5-metiltetrahidrofolato
o 88 de la Solución muestra
coh
Ácido 5-metiltetra-
1 ºº' 05
Criterios de aceptación: No más de 1,0% de D-
5-metiltetrahidrofolato
hidrooteroico' 1 10 o 67 05
Ácido dimetiltetra- PRUEBAS ESPECÍFICAS
hidrofólicoi
lmourezas totales
1 25
-
1
-
ºº' 015
25
• CALCIO
Muestra: 250 mg
'Ácido N-(4-aminobenzoil)-L-glutámico. Blanco: 150 ml de agua, 15 ml de hidróxido de sodio
b Ácido N-[4-({[(65)-2-amino-4a-hidroxi-5-metil-4-oxo-1,4,4a,5,6,7,8,8a-oc- 1 N y 300 mg de azul de hidroxinaftol
tahidropteridin-6-il]metil}amino)benzoil]-L-glutámico. Sistema volumétrico
'2-Amino-8-metil-4,9-dioxo-7-metil-p-aminobenzoil-glutamato-6,7,8,9-te- (Ver Volumetría (541 ).)
trahidro-4H-pirazino-(1,2-o)-s-triazina. Modo: Valoración directa
d Informar la impureza Mefox como la suma de 65- y 6R-Mefox.
Solución volumétrica: Edetato disódico 0,05 M SV
'Ácido N-[4-({[(5)-2-amino-4-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahidropteridin-6-il]me- Detección del punto final: Visual
til}amino)benzoil]-L-glutámico.
Análisis: Disolver la Muestra en 150 ml de agua, agre-
'Ácido N-( 4-{[(2-amino-4-oxo-1,4, 7,8-tetrahidropteridin-6-il)metil]ami-
no}benzoil)-L-glutámico, gar 15 ml de hidróxido de sodio 1 N y 300 mg de azul
g Ácido N-( 4-{[(2-amino-4-oxo-1,4-dihidropteridin-6-il)metil]amino}ben- de hidroxinaftol, y valorar con Solución volumétrica hasta
zoil)-L-glutámico. que la solución tenga un color azul intenso. Realizar
h Ácido N-(4-(3-amino-1-oxo-5,6,6a,7-tetrahidroimidazo[1,5-l]pteridin- una determinación con un Blanco y hacer las correccio-
8(1 H,4H,9H)-il)bencil)-L-glutámico. nes necesarias.
'Ácido (5)-4-{[(2-amino-5-metil-4-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahidropteridin-6- Calcular el porcentaje de calcio (Ca) en la Muestra
il)metil]amino}benzoico. tomada:
i Ácido N-[4-({[(5)-5-metil-2-(metilamino)-4-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahidropteri-
din-6-il]metil}amino)benzoil]-L-glutámico.
Resultado = [(V1 - Va) x M x F/W] x 100
' Factor estimado.

• PUREZA ENANTIOMÉRICA Vs = volumende Solución volumétrica consumida

Solución amortiguadora: 4,54 g/L de fosfato diácido
de sodio dihidrato en agua
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora
(3:97). Ajustar con hidróxido de sodio al 32% (p/v) a
un pH de 6,8.
Solución estándar: 0,5 mg/ml de ER DL-5-Metiltetrahi-
drofolato de Calcio USP en agua
Solución muestra: 0,5 mg/ml de L-5-Metiltetrahidrofo-
lato de Calcio en agua
Solución de aptitud del sistema: Transferir 1,0 ml de
Solución estándar a un matraz volumétrico de 50 ml y
diluir con Solución muestra a volumen.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
por la Muestra (ml)
Va = volumen de Solución volumétrica consumida
por el Blanco (ml)
M = molaridad real de la Solución volumétrica
(mmol/ml)
F = factor de equivalencia, 40,08 mg/mmol
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 7,0%-8,5% con respecto a la
sustancia anhidra y exenta de disolventes
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método le (921)
Muestra: Transferir 40 mg de L-5-Metiltetrahidrofolato
de Calcio a un vial para muestreo de fase gaseosa de
20 ml y tapar herméticamente. Calentar el vial en un
horno adecuado a 250º para determinación por Karl
Fischer.
Análisis: El agua liberada y evaporada se transfiere a
una celda de valoración en una corriente de nitrógeno
seco a una velocidad de flujo de aproximadamente
40 ml/min según se indica en Determinación de Agua,
Método le (921 ).
1 Una proteína de reconocimiento quiral, albúmina sérica humana de (HSA,
por sus siglas en inglés), químicamente ligada a partículas de sílice, de aproxi-
madamente 5 µm de diámetro. Por ejemplo: Chromtech Chiral HSA, disponi-
ble en www.chromtech.com
5870 Calcio /Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 6,0%-1 7,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
impermeable en un lugar fresco y seco.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ácido 4-aminobenzoilglutámico USP
Ácido N-( 4-aminobenzoil)-L-glutámico.
C 12H 14N20s 266,25
ER DL-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP
Sal cálcica (1: 1) del ácido N[ 4-([(2-amino-1,4,5,6, 7,8-
hexa h id ro-5-meti 1-4-oxo-6-pterid in i l)metil]am i no] ben-
zoi l]-L-g 1utá mico.
C29H23CaN706 497,52
ER Acido Fálico USP
Pantotenato de Calcio-ver Pantotenato
de Calcio en Monografías Generales
Pantotenato de Calcio Racémico-ver
Pantotenato de Calcio Racémico en
Monografías Generales
Pantotenato de Calcio, Tabletas-ver
Pantotenato de Calcio, Tabletas en
Monografías Generales
Calcio con Vitamina D, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Calcio con Vitamina D contienen no menos
de 90,0% y no más de 125,0% de la cantidad declarada
de calcio (Ca), derivado de sustancias generalmente r~co­
nocidas como seguras, y no menos de 90,0% y no mas
de 165 0% de la cantidad declarada de Vitamina D, como
colecal~iferol (C 27 H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü). No
contienen otras vitaminas o minerales para los que se de-
clare un valor nutrimental. Pueden contener otras sustan-
cias agregadas declaradas o ingredientes adicionales en
cantidades inobjetables.
CONTENIDO
• CALCIO
(NOTA-Se puede usar una solución estándar de calcio
para absorción atómica disponi.~le comercialmen,te
cuando se describe la preparaoon de una Soluoon ma-
dre del estándar de calcio en la siguiente valoración. Se
pueden modificar las concentraciones de las Soluciones
estándar y de la Solución madre de la mlfestra para a1us-
tarse al intervalo lineal o de traba10 del instrumento.]
Solución de cloruro de lantano: Disolver 26,7 g de
cloruro de lantano en ácido clorhídrico O, 125 N para
obtener 1 00 ml.
Solución madre del estándar de calcio: Pesar 1,001 g
de carbonato de calcio, previamente secado a 300º du-
rante 3 horas y enfriado en un ,d_esecador, d~rante 2
horas, y disolve~ en 25 mL de ac1do ~!orh1dnco 1 N. Ca-
lentar a ebullicion para expulsar el d1ox1do de carbono
y diluir con agua hasta 1000 mL para obtener una .solu-
ción con una concentración de 400 µg/mL de calcio.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de calcio, a
partir de un volumen de Solución madre del estándar de
calcio en ácido clorhídrico O, 125 N
USP 37
Soluciones estándar: Pipetear por separado 1,0; 1,5;
2,0; 2,5 y 3,0 mL de Solución madr~ del estándar y
transferir a sendos matraces volumetr1cos de 100 mL.
Agregar a cada matraz 1,0 mL de Solución de cloruro de
lantano y diluir con agua a volumen para obtener Solu-
ciones estándar con concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 µg/mL de calcio. .
Solución madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transferir el equivalente
a 500 mg de calcio a 25 mL de ácido clorhídrico con-
centrado y calentar durante 30 minutos en un b~ño de
vapor. Enfriar, diluir con agua hasta 1 000 mL, y filtrar.
Solución muestra: Diluir cuantitativamente un volumen
de la Solución madre de la muestra con ácido clorhídrico
O, 125 N para obtener una concentració~ ,de 1 00 µg/mL
de calcio. Transferir 2,0 mL de esta soluc1on a un matraz
volumétrico de 100 mL, agregar 1,0 mL de Solución de
cloruro de lantano, y diluir con agua a volumen.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotómetro de absorción atómica
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio, 422,7 nm
Blanco: 1 mL de Solución de cloruro de lantano por
100 mL de ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentracione~, en µg/mL,
de calcio y trazar la recta que me1or se a1uste a los
9e
cinco puntos g.raficados. A partir_ la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentrac1on, C, en µg/mL de
calcio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ9/mL) . .,
Cu = concentracion nominal de calcio en la Soluoon
muestra (µg/mL) .
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• COLECALCIFEROL O ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
(NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/mL de ER Ergocalciferol USP o
ER Colecalciferol USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un v_olume~
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para 1somen-
zar parcialmente la vitamina D (e~gocalciferol o colecal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Pesar y moler no menos de 20 Ta-
bletas. Transferir el equivalente a 20 µg de colecaloferol
o ergocalciferol a un recipien~e con tapa de rosca c~m
recubrimiento interno de teflon. Agregar 8 mL de d1me-
til sulfóxido y 12 mL de n-hexan.o, y agit~r dura~te 45
minutos en un agitador de mov1m1ento tipo muneca
(wrist-action) con tubos en un baño ~e agua m~nte­
nido a 60º. Centrifugar durante 1O minutos, retirar la
capa de hexano con una pipeta, y transferir a un ma-
traz de evaporación. Agregar 12 mL de n-hexano a la
capa de dimetil sulfóxido, mezclar en un mezclador de
vórtice durante 5 minutos, y retirar nuevamente la capa
de hex,ano con una pipeta y ~9regar al matraz. de eva-.
poracion. Repetir esta extracc1on con tres porciones adi-
cionales de 12 mL de n-hexano, agregando los extrac-
tos de hexano al matraz de evaporación. Evaporar los
extractos de hexano combinados al vacío a temperatura
ambiente hasta sequedad. Disolver y diluir el residuo en
USP 37 Suplementos Dietéticos /Calcio 5871

un volumen de n-hexano para obtener una concentra-
ción de 2 µg/mL.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2aH44Ü) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/mL)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/mL)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solución
muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C 27 H44 0)
o ergocalciferol (C23H44Ü)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución con
respecto a, calcio
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 30 min
Análisis: Determinar la cantidad disuelta de calcio (Ca)
usando el procedimiento de Calcio, haciendo los ajustes
volumétricos necesarios.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de Ca.
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/
g, y el recuento total combinado de hongos filamentosos
y levaduras no excede de ;rno
ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Calcio con Vitamina D. La etiqueta indica además
las cantidades de calcio y Vitamina D en términos de
unidades métricas/Tableta, y la forma salina de calcio y la
forma química de Vitamina D presente en la Tableta.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
Calcio y Vitamina D con Minerales,
Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Calcio y Vitamina D con Minerales contienen
Vitamina D como Ergocalciferol (Vitamina D1) o Colecalci-
ferol (Vitamina D3), Calcio, y uno o más minerales deriva-
dos de sustancias generalmente reconocidas como segu-
ras, que presentan uno o más de los siguientes elementos
en forma ionizable: cobre, magnesio, manganeso y cinc.
Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y no más de
165,0% de la cantidad declarada de vitamina D, como
colecalciferol (C21H44Ü) o ergocalciferol (C2 8 H44Ü), y no
menos de 90,0% y no más de 125,0% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), magnesio (Mg),
manganeso (Mn) y cinc (Zn). Pueden contener otras sus-
tancias agregadas declaradas generalmente reconocidas
como seguras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
• COLECALCIFEROL O ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/mL de ER Ergocalciferol USP o
ER Colecalciferol USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (ergocalciferol o colecal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas y
moler las Tabletas a polvo fino. Transferir el equivalente
a 20 µg de colecalciferol o ergocalciferol a un recipiente
con tapa de rosca con recubrimiento interno de teflón.
Agregar 8 mL de dimetil sulfóxido y 12 mL de n-he-
xano, y agitar durante 45 minutos en un agitador de
movimiento tipo muñeca (wrist-action) con tubos en un
baño de agua mantenido a 60º. Centrifugar durante 1 O
minutos, retirar la capa de hexano con una pipeta, y
transferir a un matraz de evaporación. Agregar 12 mL
de n-hexano a la capa de dimetil sulfóxido, mezclar en
un mezclador de vórtice durante 5 minutos, y retirar
nuevamente la capa de hexano con una pipeta y agre-
gar al matraz de evaporación. Repetir esta extraccion
con tres porciones adicionales de 12 mL de n-hexano,
agregando los extractos de hexano al matraz de evapo-
ración. Evaporar los extractos de hexano combinados al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
y diluir el residuo en un volumen de n-hexano para
obtener una concentración de 2 µg/ml.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 1 5 cm; relleno L8 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
5872 Calcio/ Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de vitamina D. Calcu-
lar el porcentaje de la cantidad declarada de colecal-
ciferol (C21H44Ü) o ergocalciferol (C28H440) en la por-
ción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = altura del pico de colecalciferol o
ergocalciferol de la Solución muestra
rs = altura del pico de colecalciferol o
ergocalciferol de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Ergocalciferol USP o ER
Colecalciferol USP en la Solución estándar
(µg/mL)
Cu = concentración nominal de ergocalciferol o
colecalciferol en la Solución muestra (µg/mL)
F = factor de corrección para considerar la
cantidad promedio de previtamina D
presente en la Solución muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de colecalciferol (C21H44Ü) o ergocalciferol
(C2sH44Ü)
• CALCIO, Método 1
[NOTA-Se puede usar una solución estándar de calcio
para absorción atómica disponible comercialmente
cuando se describe la preparación de una Solución ma-
dre del estándar de calcio en la siguiente sección. Se
pueden modificar las concentraciones de las Soluciones
estándar y de la Solución madre de la muestra para ajus-
tarse al intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
Solución madre del estándar de calcio: 400 µg/mL de
calcio. Disolver 1,001 g de carbonato de calcio, secado
previamente a 300º durante 3 horas y enfriado en un
desecador durante 2 horas, y disolver en 25 mL de
ácido clorhídrico 1 N. Calentar a ebullición para expul-
sar el dióxido de carbono y diluir con agua hasta
1000 ml.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener Soluciones estándar
con concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/mL
de calcio.
Solución madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Mezclar una porción del
polvo equivalente a una cantidad nominal de 500 mg
de calcio con 25 mL de ácido clorhídrico concentrado y
calentar durante 30 minutos en un baño de vapor. En-
friar, diluir con agua hasta 1000 mL, y filtrar.
Solución muestra: Diluir cuantitativamente un volumen
de la Solución madre de la muestra con ácido clorhídrico
O, 125 N para obtener una concentración nominal de
100 µg/mL de calcio. Transferir 2,0 mL de esta solución
a un matraz volumétrico de 100 mL, agregar 1,0 mL de
Solución de cloruro de lantano, y diluir con agua a
volumen.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Calcio; de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio, 422,7 nm
USP 37
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano/100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica, deter-
minar la concentración, en µg/mL, de calcio en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 1 00
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ~/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de Calcio (Ca)
• COBRE, Método 1
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% (v/v) y diluir con una solución de
ácido nítrico al 1 % (v/v) hasta 1000 ml. Esta solución
contiene 1000 µg/mL de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de la Solución madre del estándar a sendos ma-
traces volumétricos de 200 ml. Diluir con agua a volu-
men para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0
y 4,0 µg/mL de cobre.
nos de 20 Tabletas. Transferir el equivalente a 5 mg de
cobre, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar durante 6-12 horas en una mu-
fla mantenida a 550º y enfriar. Agregar 15 mL de ácido
clorhídrico y calentar a ebullición suave sobre una placa
de calentamiento o en un baño de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumétrico de 100 mL, enjuagando el crisol
con porciones de ácido clorhídrico 6 N. Diluir el conte-
nido del matraz con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir el filtrado
cuantitativamente con ácido clorhídrico O, 125 N para
obtener una concentración de 2 µg/mL de cobre.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cobre; de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre, 324,J nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica, deter-
minar la concentración, C, en µg/mL, de cobre en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Co-
bre (Cu) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
USP 37
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (,L19/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra üig/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• MAGNESIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N traces volumétricos de 100 mL. Diluir el contenido de
Solución madre del estándar de magnesio: Transferir
1,00 g de magnesio a un matraz volumétrico de
1 000 ml, disolver en 50 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen, y mezclar para obtener una
solución con una concentración conocida de 1000 µg/
ml.
Solución madre del estándar: 20 µg/ml de magnesio,
a partir de Solución madre del estándar de magnesio di-
luida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de la Solución madre del estándar a sendos ma-
traces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/ml de
magnesio.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir el equivalente a 200 mg de mag-
nesio a un crisol de porcelana. Calentar durante 6-12
horas en una mufla mantenida a 550º y enfriar. Agregar
15 ml de ácido clorhídrico y calentar a ebullición suave
sobre una placa de calentamiento o en un baño de
vapor durante 30 minutos, enjuagando intermitente-
mente la superficie interior del crisol con ácido clorhí-
drico 6 N. Enfriar y transferir cuantitativamente el conte-
nido del crisol a un matraz volumétrico de 1 00 ml,
enjuagando el crisol con porciones de ácido clorhídrico
6 N. Diluir el contenido del matraz con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Di-
luir el filtrado cuantitativamente con ácido clorhídrico
O, 125 N para obtener una concentración de 0,4 µg/ml
de magnesio, agregando 1 ml de Solución de cloruro de
lantano/l 00 ml del volumen final.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ) .)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Magnesio; de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesiq, 285,2 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano/l 00 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica, de-
terminar la concentración, C, en µg/mL, de magnesio
en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO, Método 7
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,000 g de manganeso, a un matraz volumétrico de
Suplementos Dietéticos /Calcio 5873
1 000 mL. Disolver· en 20 mL de ácido nítrico, diluir con
ácido clorhídrico 6 N a volumen, y mezclar para obte-
ner una solución con una concentración de 1000 µg/
mL de manganeso.
Solución madre del estándar: 50 pg/ml de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 1 25 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de la Solución madre del estándar a sendos ma-
cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen
para obtener soluciones con concentraciones de 0,5;
0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 pg/mL de manganeso.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir el equivalente a 9 mg de manga-
neso, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar durante 6-12 horas en una mu-
fla mantenida a 550º y enfriar. Agregar 15 mL de ácido
clorhídrico y calentar a ebullición suave sobre una placa
de calentamiento o en un baño de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumétrico de 1 00 mL, enjuagando el crisol
con porciones de ácido clorhídrico 6 N. Diluir el conte-
nido del matraz con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 ml del filtrado. Diluir el filtrado
cuantitativamente con ácido clorhídrico O, 125 N para
obtener una concentración de 1 µg/mL de manganeso.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Manganeso; de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
mangane,so, 279,5 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en mg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 1 00
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso
• CINC, Método 7
Solución madre del estándar de cinc: 1 000 pg/mL de
cinc, a partir de óxido de cinc disuelto en ácido clorhí-
drico 5 M (3,89 mg/mL) y diluida con agua hasta el
volumen final. [NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M
entibiando, si fuera necesario, enfriar, y luego diluir a
volumen final.]
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución madre del estándar de cinc diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
mL de cinc.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Tr·ansferir el equivalente a 40 mg de
5874 Calcio /Suplementos Dietéticos
cinc, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar durante 6-12 horas en una mu-
fla mantenida a 550' y enfriar. Agregar 15 ml de ácido
clorhídrico y calentar a ebullición suave sobre una placa
de calentamiento o en un baño de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumétrico de 100 ml, enjuagando el crisol
con porciones de ácido clorhídrico 6 N. Diluir el conte-
nido del matraz con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 ml del filtrado. Diluir el filtrado
cuantitativamente con ácido clorhídrico O, 125 N para
obtener una concentración de 2 µg/ml de cinc.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cinc; de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc,
21 3,8 nfl)
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica, deter-
minar la concentración, C, en µg/ml, de cinc en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C =concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• CALCIO, COBRE, MAGNESIO, MANGANESO y CINC, Método 2
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1) agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 en 1 O) agregando un volumen de
Solución madre de agua regia a dos volúmenes de agua.
Diluir con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandio en solución de ácido
nítrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar (Ca, Cu, Mg, Mn y Zn):
[NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de interés
en la solución.] Usando soluciones estándar de ele-
mentos (individuales o combinados) disponibles comer-
cialmente en solución de ácido nítrico al 5% (v/v), pi-
petear la cantidad apropiada de solución estándar de
elementos, transferir a un matraz volumétrico, y diluir
con solución de ácido nítrico al 5% (v/v) para obtener
una solución con concentraciones finales de aproxima-
damente 1000 mg/L de calcio, 100 mg/L de cobre,
500 mg/L de magnesio, 100 mg/L de manganeso y
250 mg/L de cinc.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar en Diluyente para preparar una curva
de calibración de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción que sea igual
USP 37
al peso promedio por Tableta a un matraz volumétrico
de 250 mL. Agregar lentamente 25 mL de Solución ma-
dre de agua regia en incrementos de 5 mL seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producirá burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solución a ebullición sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la producción de humos (apro-
ximadamente 1 hora). Retirar del calor, enfriar, y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 ml
en un tubo de centrífuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando
Diluyente.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado para medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente.
[NOTA-Las condiciones operativas se pueden desarrollar
y optimizar basándose en la recomendación del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en el Análisis.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en
las Soluciones estándar y la Solución muestra con un
sistema de plasma inductivamente acoplado usando
Diluyente como blanco. Graficar la emisión de las So-
luciones estándar en función de las concentraciones,
en mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir
de la gráfica, determinar la concentración, C, en
mg/L, de cada mineral de interés en la Solución mues-
tra. Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cada mineral:
Resultado = C x (V /W) X F X (WT/L) X 100
C = concentración medida del elemento pertinente
en la Solución muestra (mg/L)
V = volumen de la Solución muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
WT = peso promedio por Tableta (mg)
L = cantidad declarada del elemento pertinente
(mg/Tableta)
Criterios de aceptación: No menos de 90,0%-125,0%
de la cantidad declarada de calcio (Ca), cobre (Cu),
magnesio (Mg), manganeso (Mn) y cinc (Zn).
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución con
respecto a, calcio
Medio: Acido clorhídrico 0, 1 N; 900 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 30 min
Análisis: Determinar la cantidad disuelta de calcio (Ca)
usando el procedimiento de la valoración de Calcio, rea-
lizando los ajustes volumétricos necesarios.
Tolerancias: No menos de 75% (Q) de la cantidad de-
clarad,a de Ca. ,
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
USP 37
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETÉTICOS (2021 ): El recuento total de mi-
croorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/g, y el
recuento total combinado de hongos filamentosos y leva-
duras no excede de 300 ufc/g. , triturado.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES y DIETÉTICOS (2022): Cumplen con los re-
quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de
Salmonel/a spp., Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Calcio y Vitamina O con Minerales. La etiqueta tam-
bién indica las cantidades de cada mineral y vitamina D/
unidad de dosificación, la forma salina del mineral usado
como la fuente de cada elemento presente y la forma
química de vitamina D presente en la unidad de
dosificación.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
Glicerofosfato de Calcio
C3H1Ca05P 210, 14
1,2,3-Propanetriol, mono(dihydrogen phosphate) calcium
salt (1 :1 );
Glicerofosfato de calcio [27214-00-2].
DEFINICIÓN
El Glicerofosfato de Calcio es una mezcla, en proporciones
variables, de (RS)-2,3-dihidroxipropil fosfato de calcio y
2-hidroxi-1-(hidroximetil)etil fosfato de calcio, que pueden
estar hidratados. El Glicerofosfato de Calcio contiene no
menos de 18,6% y no más de 19,4% de calcio (Ca), cal-
culado con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
•A.
Análisis: Incinerar O, 1 g en un crisol. Tomar el residuo
con 5 mL de ácido nítrico, calentar en un baño de agua
durante 1 minuto y filtrar. Mezclar 1 mL del filtrado con
2 mL de molibdato de amonio SR.
Criterios de aceptación: Se desarrolla un color
amarillo.
• B.
Análisis: Disolver 20 mg de la sustancia en análisis en
5 mL de ácido acético 5 M y agregar 0,5 mL de solu-
ción de ferrocianuro de potasio (53 mg/ml). La solu-
ción resultante permanece transparente. Agregar 50 mg
de cloruro de amonio a la solución transparente.
Criterios de aceptación: Se produce un precipitado
blanco cristalino.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Muestra: 200 mg
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Suplementos Dietéticos /Calcio 5875
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Edetato disódico O, 1 M SV
Detección del punto final: Colorimétrico
Blanco: 300 ml de agua. Agregar 6 ml de hidróxido
de sodio 1O M y 15 mg de ácido calconcarboxílico
Análisis: Disolver la Muestra en 300 ml de agua, a~re­
gar 6 ml de hidróxido de sodio 1O M y 15 mg de acido
calconcarboxílico triturado. Valorar con Solución volumé-
trica hasta que la solución adquiera un color azul nítido.
Calcular el porcentaje de calcio (Ca) en la porción de
Glicerofosfato de Calcio tomada:
Resultado = [(V - B) x M x F x 100]/W
V = volumen de solución volumétrica consumido
por la Muestra (mL)
B = volumen de solución volumétrica consumido
por el Blanco (ml)
M = molaridad de la solución volumétrica
(mM/mL)
F = factor de equivalencia, 40,08 mg/mM
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 18,6%-19,4% con respecto a
la sustancia seca
IMPUREZAS
• PLOMO (251 ): No más de 4 ppm
• HIERRO (241)
Solución estándar: Diluir 1 volumen de Solución de
Hierro Estándar, preparada según se indica en el capí-
tulo, con agua a 1 O volúmenes (1 µg/ml).
Análisis: Disolver 0,20 g en 1 O ml de agua. Agregar
2 ml de una solución de ácido cítrico al 20% (p/v) y
O, 1 ml de ácido tioglicólico y mezclar. Alcalinizar con
amoníaco 1 O M, diluir con agua hasta 20 ml y dejar en
reposo durante 5 minutos. Cualquier color rosado que
se produzca no es más intenso que el obtenido tra-
tando 4 ml de la Solución estándar de la misma ma-
nera.
Criterios de aceptación: No más de 20 ppm
• IVJETALES PESADOS, Método I (231): No más de 20 ppm
• LIMITE DE CLORUROS
Solución estándar: 8,24 µg/ml de cloruro de sodio en
agua
Solución muestra: Disolver 125 mg en 1 O ml de una
mezcla de ácido acético 5 M y agua (2:8) y diluir con
agua hasta 15 ml.
Análisis: Agregar a la Solución muestra 1 ml de ácido
nítrico 2 M, luego agregar 1 ml de una solución de ni-
trato de plata (1 7 mg/mL) y dejar en reposo durante 5
minutos protegida de la luz. Agregar 5 mL de agua,
1 ml de ácido nítrico 2 M y 1 mL de solución de nitrato
de plata (1 7 mg/mL) a 1 O ml de la Solución estándar y
dejar en reposo durante 5 minutos protegida de la luz.
Cuando se observa contra un fondo oscuro, la Solución
muestra no es más turbia que la Solución estándar.
S::riterios de aceptación: No más de 0,04%
• LIMITE DE SULFATOS
Solución estándar: 36,2 µg/ml de sulfato de potasio
en agua
Solución muestra: Usar la Solución muestra preparada
según se indica en la prueba de Apariencia de la
Solución.
Análisis: Agregar 0,5 mL de ácido acético 5 M y 1 mL
de solución de cloruro de bario (250 mg/ml) a 15 ml
de la Solución estándar. Repetir, usando 15 ml de la So-
lución muestra. Dejar las soluciones en reposo durante 5
minutos protegidas de la luz. Cuando se observa contra
un fondo oscuro, la Solución muestra no es más turbia
que la Solución estándar.
S::riterios de ,aceptación: No más de 0,2%
• LIMITE DE ARSENICO
Solución madre del estándar: En un matraz volumé-
trico de 250 mL, disolver 330 mg de trióxido de arsé-
5876 Calcio /Suplementos Dietéticos
nico en 5 mL de hidróxido de sodio 2 N y diluir con
agua a volumen. Transferir 1 mL de esta solución a un
matraz volumétrico de 100 mL y diluir con agua a
volumen.
Solución estándar: Transferir 1 mL de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 1 O mL, diluir
con a9ua a volumen.
Solucion de cloruro de estaño (11): Calentar 20 g de
estaño con 85 mL de ácido clorhídrico hasta que no se
desprenda más hidrógeno. Dejar que se enfríe. Diluir 1
volumen de esta solución con 1O volúmenes de ácido
clorhídrico diluido (200 mg/mL de ácido clorhídrico en
agua).
Solución muestra: Transferir 330 mg de Glicerofosfato
de Calcio a un matraz volumétrico de 25,0 mL y diluir
con agua a volumen.
Aparato: Preparar un matraz Erlenmeyer de 100 mL
con brazo lateral que contenga una barra mezcladora
magnética. Acoplar al matraz Erlenmeyer un tapón de
vidrio esmerilado a través del cual pasa un tubo de vi-
drio de 20 cm de largo con un diámetro interno de
5 mm. El extremo inferior del tubo está dentro del ma-
traz Erlenmeyer y se ha estrechado hasta formar una
punta con un diámetro interno de 1 mm. A 15 mm de
la punta y al menos 3 mm por debajo de la superficie
inferior del tapón, hay un orificio de 3 mm de diámetro.
El extremo superior del tubo tiene una superficie esme-
rilada plana en ángulo recto respecto al eje del tubo.
Un segundo tubo de vidrio con el mismo diámetro
interno y 30 mm de longitud, con una superficie esme-
rilada pfana similar, se coloca en contacto con la super-
ficie esmerilada del primer tubo y se mantiene en posi-
ción mediante una pinza y resortes. Insertar dentro del
tubo inferior, como un relleno poco compacto, 55 mg
de algodón con acetato de plomo. Entre las superficies
planas de los tubos, colocar un disco de papel de bro-
muro mercúrico.
Análisis: Antes de colocar el montaje de tubos dentro
del matraz, transferir la Solución muestra al matraz y
agregar 15,0 mL de ácido clorhídrico, O, 1 mL de Solu-
ción de cloruro de estaño (//)y 5 mL de yoduro de pota-
sio SR. Dejar en reposo durante 15 minutos y agregar
5 g de cinc activado. Ensamblar el aparato inmediata-
mente y sumergir el matraz en un baño de agua a una
temperatura tal que se mantenga un desprendimiento
uniforme de gas. Después de no menos de 2 horas,
observar la mancha producida en el papel de bromuro
mercúrico. Realizar el mismo procedimiento usando
1,0 mL de la Solución estándar. La mancha producida en
el papel de bromuro mercúrico por la Solución muestra
no es más intensa que la producida por la Solución
estándar.
~riterios de aceptación: No más de 3 ppm
• LIMITE DE FOSFATOS
Solución sulfomolíbdica: Disolver con calentamiento
2,5 g de molibdato de amonio en 20 mL de agua. Diluir
28 mL de ácido sulfúrico con 50 mL de agua y enfriar.
Mezclar las dos soluciones y diluir con agua hasta
100 ml.
Solución de cloruro de estaño (11): Preparar según se
indica en la prueba de Límite de Arsénico.
Solución madre del estándar: 14,3 µg/mL de fosfato
monobásico de potasio en agua
Solución estándar: Transferir 1,0 mL de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion muestra: Transferir 2,5 mL de la Solución
muestra de la prueba de Apariencia de la Solución a un
matraz volumetrico de 100 mL y diluir con agua a
volumen.
Análisis: Agregar 4 mL de Solución sulfomolíbdica a
100 mL de la Solución muestra, mezclar y agregar
O, 1 mL de Solución de cloruro de estaño (//). Agregar
4 mL de Solución sulfomolíbdica a 100 mL de Solución
USP 37
estándar, mezclar y agregar O, 1 mL de Solución de clo-
ruro de estaño (//). Dejar las preparaciones en reposo
durante 1 O minutos y luego observar 20 mL de cada
preparación. Cualquier color producido por la Solución
muestra no es más intenso que el producido por la So-
lución estándar.
,Criteri9s de aceptación: No más de 0,04%
• ACIDO CITRICO
Solución de sulfato de mercurio (11): 1 9 de óxido
mercúrico en 20 mL de agua y 4 mL de acido sulfúrico
Análisis: Mezclar 5 g de Glicerofosfato de Calcio con
20 mL de agua exenta de dióxido de carbono y filtrar.
Agregar al filtrado O, 15 mL de ácido sulfúrico y filtrar.
Agregar al filtrado 5 mL de Solución de sulfato de mer-
curio (//) y calentar a ebullición. Agregar 0,5 mL de per-
man!¡lanato de potasio 0,2 M y calentar a ebullición.
Criterios de aceptación: No se forma precipitado.
• GLICEROL Y SUSTANCIAS SOLUBLES EN ALCOHOL
Análisis: Mezclar 1 g con 25 mL de alcohol y agitar du-
rante 1 minuto. Filtrar, evaporar hasta sequedad el fil-
trado en un baño de agua y secar el residuo a 70º
durante 1 hora.
Criterios de aceptación: El residuo pesa no más de
5 mg (0,5%).
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• APARIENCIA DE LA SOLUCIÓN
Suspensión opalescente: Disolver 1 g de sulfato de hi-
drazina en 100 mL de agua y dejar en reposo durante
4-6 horas. Agregar 25 mL de esta solucion a 25 mL de
una solución que contenga 100 mg/mL de metenamina
en agua y dejar en reposo durante 24 horas.
Suspension de referencia primaria: Diluir 15,0 mL de
Suspensión opalescente con agua hasta 1000 ml.
[NOTA-Esta suspensión se prepara en el momento y se
puede almacenar durante no más de 24 horas.]
Suspensión de referencia: Suspensión de referencia pri-
maria y agua (30:70). [NOTA-Agitar antes de usar.]
Solución muestra: Disolver 1,5 g a temperatura am-
biente en 150 mL de agua exenta de dióxido de
carbono.
Análisis: Comparar la opalescencia de volúmenes igua-
les de la Solución muestra y de la Suspensión de referen-
cia.
Criterios de aceptación: La Solución muestra no es más
opalescente que la Suspensión de referencia.
• ACIDEZ O ALCALINIDAD
Análisis: Disolver 1 g de Glicerofosfato de Calcio en
100 mL de agua. Agregar O, 1 mL de solución de fenolf-
taleína al 1,0% (p/v).
Criterios de aceptación: Se requiere no más de 0,5 mL
de hidróxido de sodio O, 1 M o de ácido clorhídrico O, 1
,M para cambiar el color del indicador.
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 150º
durante 4 horas: pierde no más de 12,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Piedra Caliza Molida
DEFINICIÓN
La Piedra Caliza Molida es un polvo microcristalino fino, de
color blanco a blanquecino, que consiste principalmente
en carbonato de calcio. Se obtiene mediante trituración,
molienda y clasificación de piedra caliza natural, benefi-
ciada por flotación y/o clasificación aérea. Después de se-
car a 200º durante 4 horas, contiene no menos de 94,0%
y no más de 1 00,5% de carbonato de calcio (CaC0 3).
USP 37
IDENTIFICACIÓN
• A. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Calcio (191)
Análisis: Agregar ácido acético a la Piedra Caliza Molida
y calentar a ebullición la solución resultante.
Criterios de aceptación: La solución produce eferves-
cencia (presencia de carbonato) después de la adición
de ácido acético. Después de calentar a ebullición, cum-
ple con los requisitos del qpítulo.
• B. SUSTANCIAS INSOLUBLES EN ACIDO: Cumple con lo,s re-
quisitos de la prueba para Sustancias Insolubles en Acido.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Muestra: 200 mg de Piedra Caliza Molida, previamente
secada a 200º durante 4 horas
Blanco: Proceder según se indica en Análisis, excepto
que se debe omitir la muestra de prueba.
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Edetato disódico 0,05 M SV
Detección del punto final: Visual
Análisis: Transferir la Muestra a un vaso de precipitados
de 250 ml. Humedecer minuciosamente con unos po-
cos ml de agua y agregar, gota a gota, suficiente acido
clorhídrico 3 N para disolver. Agregar 1 00 mL de agua,
15 ml de hidróxido de sodio 1 N y 300 mg de azul de
hidroxinaftol, y valorar con Solucion volumetrica hasta
que la solución se torne de color un azul distintivo. Rea-
lizar una determinación con el Blanco.
Calcular el porcentaje de carbonato de calcio (CaCOi)
en la Muestra tomada:
Resultado = {[(V1 - Vs) x M x F]/W} x 100
Vs = volumen de Solución volumétrica consumido
por la Muestra (ml)
Ve = volumen de Solución volumétrica consumido
por el Blanco (ml)
M = molaridad real de la Solución volumétrica
(mM/mL)
F = factor de equivalencia, 100, 1 mg/mM
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 94,0%-100,5%
IMPUREZAS
• ARSÉNICO, Método I (211 >
Preparación de prueba: Disolver lentamente 1,0 g en
15 ml de ácido clorhídrico y diluir con agua hasta
55 ml.
Análisis: Proceder según se indica en el capítulo, ex-
cepto que se debe omitir la adición de 20 ml de ácido
sulfúrico 7 N.
Criterios de aceptación: Cumple con los requisitos del
capítulo (no mas de 3 ppm).
• PLOMO (251)
Preparación de prueba: Mezclar 1,0 g con 5 ml de
agua, agregar lentamente 8 ml de ácido clorhídrico
3 N, evaporar en un baño de vapor hasta sequedad y
disolver el residuo en 5 ml de a9ua.
Criterios de aceptación: No mas de 3 ppm
• METALES PESADOS (231)
Preparación de prueba: Mezclar 1,0 g con 5 ml de
agua, agregar lentamente 8 ml de ácido clorhídrico 3 N
y evaporar en un baño de vapor hasta sequedad. Disol-
ver el residuo en 20 ml de agua, filtrar y agregar agua
al filtrado hasta obtener 25 ml.
S::riterios de aceptación: No más de 20 ppm
• LIMITE DE MAGNESIO Y SALES ALCALINAS
Muestra: 1,0 g
Análisis: Mezclar la Muestra con 40 ml de agua. Agre-
gar cuidadosamente 5 ml de ácido clorhídrico, calentar
la solución y calentar a ebullición durante 1 minuto.
Suplementos Dieteticos /Caliza 5877
Agregar rápidamente 40 ml de ácido oxálico SR y mez-
clar vigorosamente hasta que se establezca bien la pre-
cipitación. AgregJr inmediatamente a la mezcla tibia
2 gotas de ro¡o de metilo SR y luego hidróxido de amo-
nio 6 N, gota a gota, hasta que la mezcla se torne ape-
nas alcalina. Enfriar a temperatura ambiente. Transferir a
una probeta graduada de 1 00 ml, diluir con agua hasta
100 ml, mezclar y dejar en reposo durante 4 horas o
durante toda la noche. Filtrar y agregar a 50 ml del
filtrado transparente en una cápsula de platino 0,5 mL
de ácido sulfúrico, y evaporar la mezcla en un baño de
vapor hasta un volumen pequeño. Calentar cuidadosa-
mente sobre una llama libre hasta sequedad y continuar
calentando hasta completar la descomposicion y volati-
lización de las sales de amonio. Incinerar el residuo
hasta peso constante.
Criterios de aceptación: No más de 3,5%. El peso del
, residuo es no más de 1 7,5 mg.
• LIMITE DE FlUORUROS
[NOTA-Preparar y almacenar todas las soluciones en en-
vases de plástico.]
Solución amortiguadora: 294 mg/ml de citrato de so-
dio dihidrato en agua
Solución madre del estándar: 1, 1052 mg/ml de ER
Fluoruro de Sodio USP en agua
Solución estándar: Transferir 20,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 ml
que contenga 50,0 ml de Solución amortiguadora, diluir
con agua a volumen y mezclar. Cada ml de Solución
estándar contiene 100 µg de ión fluoruro.
Solución muestra: Transferir 2,0 g de Piedra Caliza Mo-
lida a un vaso de precipitados que contenga una varilla
mezcladora recubierta de plástico. Agregar 20 ml de
agua y 4,0 ml de ácido clorhídrico, y mezclar hasta di-
solver. Agregar 50,0 ml de Solución amortiguadora y su-
ficiente agua hasta obtener 100 mi..
Sistema de electrodos: Usar un electrodo específico in-
dicador de ión fluoruro y un electrodo de referencia de
plata-cloruro de plata conectado a un medidor de pH
capaz de medir los potenciales con una reproducibili-
dad mínima de ±0,2 mV (ver pH (791 )).
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Línea de respuesta del estándar: Transferir 50,0 ml
de Solución amortiguadora y 4,0 mL de ácido clorhí-
drico a un vaso de precipitados, y agregar agua hasta
obtener 100 mi.. Agregar una barra mezcladora recu-
bierta de plástico, insertar los electrodos en la solu-
ción, mezclar durante 15 minutos y leer el potencial,
en mV. Continuar mezclando y agregar, en intervalos
de 5 minutos, 100; 100; 300 y 500 µL de la Solución
estándar, leyendo el potencial 5 minutos después de
cada adición. Graficar los logaritmos de las concentra-
ciones de ión fluoruro acumulado (O, 1; 0,2; 0,5 y
1,0 µg/ml) en función del potencial, en mV.
Enjuagar y secar los electrodos, insertarlos en la Solu-
ción muestra, mezclar durante 5 minutos y leer el po-
tencial, en mV. A partir del potencial medido y de la
Línea de respuesta del estándar, determinar la concen-
tración, C (en µg/mL), de ión fluoruro en la Solución
muestra.
Calcular el contenido de fluoruro en la porción de Pie-
dra Caliza Molida tomada:
Resultado = (C x V)/W
C = concentración de ión fluoruro, obtenida a
partir de la Línea de respuesta del estándar,
en la Solución muestra (ug/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Piedra Caliza Molida tomado para
preparar preparar la Solución muestra (g)
5878 Caliza / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: No más de 50 ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• SUSTANCIAS INSOLUBLES EN ÁCIDO
Muestra: 5,0 g
Análisis: Mezc~ar la Mues~m con 25 mL de agua. Agre-
gar 25 mL de ac1do clorh1drico, gota a gota, agitando
hasta que cese la efervescenc.ia. Agregar agua hasta q~e
la mezcla alcance 200 mL y filtrar. Lavar el residuo inso-
luble con agua hasta que el último lavado no presente
más cloruro e incinerar y pesar el residuo.
Criterios de aceptación: 0,2%-2,5%. El peso del resi-
,duo está entre 1 O y 125 mg .
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 200º
durante 4 horas: pierde no más de 2,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Fluoruro de Sodio USP
Cardo Mariano
DEFINICIÓN
El Cardo Mariano se compone del fruto maduro seco de
Silybum marianum (L.) Gaertn. (Fam. Asteraceae), una vez
eliminado el vilano. Contiene no menos de 2,0% de sili-
marina, calculado como silibina (C2sH22010), con respecto
a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
metano!
Solu~ión ~uE'.stra: Usar la Solución muestra, preparada
segun se indica en la prueba de Contenido de Silimarina.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a ( 621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de longitud
(placas de TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
formo, acetona y ácido fórmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solución reveladora A: Solución de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1 O mg/mL en metano!
Solución reveladora B: Solución de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire frío. Rociar la placa con Solución reve-
ladora A, dejar que se seque y fuec;¡o rociar con Solu-
ción reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor RF de aproximadamente 0,5
(presencia de silibina) y presenta una mancha azul gri-
sácea a un valor RF de aproximadamente 0,4 que co-
rresponde a una mancha observada en el cromato-
grama de la Solución estándar. El cromatograma de la
Solución muestra puede presentar otras zonas colorea-
USP 37
das: una zona azul verdosa intensa a un valor Rr de
aproximadamente 0.,25 (presencia de silicristina) y una
zona anaran1ada ropza a un valor Rr de aproximada-
mente 0,3 (presencia d~ taxifolina).
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de
Silimarina.
Criterios de aceptaci~n: Los tiempos de retención de
los picos para s1hd1arnna, silicristina, silibina A, silibina B,
isosilibina A e isosilibina B en el cromatograma de la
Solución mu~stra sorresponden a los del cromatograma
de la Soluoon estandar de cardo mariano.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE SILIMARINA
Solución A: Metano!, ácido fosfórico y agua
(20: 0,5: 80)
Solución B: Metano!, ácido fosfórico y agua
(80: 0,5: 20)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
fmin' (O/o) (%)
o o o
5 85 15
20 55 45
40 55 45
41 85 15
55 85 15
Solución estándar de cardo mariano: 0,7 mg/mL de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para di-
solver. Pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor. Diluir 1 en 5
con metano! para obtener una solución de O, 14 mg/ml
de ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP.
Soluciones estándar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/mL de ER Silibina USP en metano!. Pasar a
través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor.
Solución madre de la muestra: Transferir 1 O g de
Cardo Mariano reducido a polvo fino a un dedal de
extracci?n y cubrir con una bola pequeña de algodón.
Transferir el dedal a un aparato de extracción continua
equipado con un matraz de fondo redondo de 250 mL
que contenga 150 mL de éter de petróleo y calentar el
matraz sobre un manto de calentamiento durante 4 ho-
ras. Después de la extracción, separar el matraz de
fondo redondo que contiene el extracto de éter de pe-
tróleo del aparato de extracción y desechar la solución
de éter de petróleo. Eliminar el éter de petróleo rema-
nente e_n el dedal de extracción mediante ~ecado y
transferir el dedal a un aparato de extraccion adecuado
para extracción en caliente y equipado con un matraz
de fondo redondo de 250 mL que contenga 100 mL de
acetato de etilo. [NOTA-Ajustar el volumen de acetato
de etilo, si fuera necesario, para mantener una extrac-
ción continua.] Calentar el matraz sobre un manto de
calentamiento para permitir el reflujo suave del disol-
vente. Después de 8 horas, transferir el extracto cuanti-
tativamente a un matraz volumétrico de 100 mL y diluir
con metano! a volumen.
Solución muestra: Diluir la Solución madre de la mues-
tra (1 en 25) con metano!.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621), Aptitud del Sistema.)
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Cardo Mariano 5879

Modo: HPLC CONTAMINANTES

Detector: UV 288 nm o
• MET,ALES PESADOS (231 ): ,No más de 1 µg/g
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
Temperatura de la columna: 40'º (561 ): Cumple con los requisitos.
Velocidad de flujo: 1 mL/min • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Volumen de inyección: 1 O µL tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g, y el recuento total
Aptitud del sistema combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Muestra: Solución estándar de cardo mariano cede de 102 ufc/g. ,
[NOTA-Para los tiempos de retención relativos, ver la • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Tabla 2.] ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli, y la ausen-
Tabla 2 cia de Staphylococcus aureus.
Tiempo de PRUEBAS ESPECÍFICAS
Retención • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Relativo Macroscópicas: Los frutos (aquenios) son ovoides y
Silicristina o 68 alargados, ligeramente retorcidos, moderadamente
Silidianina o 73 aplanados, de 6-7 mm de longitud aproximadamente,
de hasta 3 mm de ancho y 1,5 mm de espesor; tienen
Silibina A 1 00
un borde saliente amarillo brillante y cartilaginoso en la
Silibina B 1 05 superficie superior y un hilo acanalado en la base. El
Deshidrosilibina 1 09 recubrimiento del fruto es negro amarronado brillante o
lsosilibina A 1 15 marrón grisáceo mate con líneas de color oscuro o gris
lsosilibina B 1 19 pálido; contiene el embrión recto con dos cotiledones
gruesos y aplanados que contienen aceite graso y grá-
Requisitos de aptitud nulos de aleurona.
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma Microscópicas: La epidermis de la pared del fruto con-
de la Solución estándar de cardo mariano es similar al tiene células en empalizada casi incoloras dispuestas en
cromatograma de referencia provisto con el lote de ángulos rectos con respecto a la superficie. Poseen pa-
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado. redes externas muy gruesas dentro de las cuales el
Resolución: No menos de 1,0 entre silibina A y sili- lumen continúa durante cierta distancia en forma de
bina B ranura. Observadas desde arriba con gran aumento, las
Factor de asimetría: 0,8-2,0 células muestran sólo un lumen en forma de ranura.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Poseen rebordes gruesos que aparecen como engrosa-
la suma de las respuestas de los picos debidos a sili- mientos nodulares de la pared celular cuando se obser-
bina A y silibina B van desde arriba. La capa subepidérmica de la pared
Análisis del fruto se compone de células parenquimáticas de
Muestras: Solución estándar de cardo mariano, cada pared delgada no lignificadas y constituye una capa de
una de las Soluciones estándar de silibina y Solución pigmento. Células incoloras, individuales y en grupos,
muestra se alternan con células pigmentadas de número varia-
Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, si- ble, lo que le da a la pared del fruto su apariencia mo-
libina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B por teada. A continuación se encuentra el tejido de la pared
comparación con el cromatograma de la Solución es- del fruto, con un grosor de aproximadamente 8 capas
tándar de cardo mariano, y medir las áreas de los pi- de células, con células parenquimáticas punteadas alar-
cos pertinentes. Graficar las áreas de la suma de los gadas situadas a lo largo del eje longitudinal del fruto.
picos de silibina A y silibina B en función de la con- Las células de la capa más interna de la pared del fruto
centración de ER Silibina USP en las Soluciones están- pueden estar colapsadas; contienen grandes prismas de
dar de silibina, y obtener una línea de regresión para oxalato de calcio monoclínicos o en forma de cigarro.
calibración. La epidermis de la cubierta de la semilla está formada
Calcular por separado el porcentaje de cada compo- por células grandes amarillas en empalizada. Las células
nente pertinente de silimarina, como silibina tienen un lumen estrecho, algo expandido en cada ex-
(C2sH22010), en la porción de Cardo Mariano tomada: tremo de la célula, y las paredes celulares muestran una
laminación conspicua. Las células subepidérmicas de la
Resultado =: e X (V/\t\I) X o X 100 cubierta de la semilla contienen células punteadas pecu-
liares; sus membranas celulares lignificadas tienen rebor-
e == concentración del componente pertinente en des o engrosamientos prominentes cerrados ("células
la Solución muestra según se interpola en la en red"). Junto a ellas hay una única capa de células
gráfica de calibración (mg/mL) con paredes duras, algo hinchadas y con contenido li-
V == volumen de la Solución madre de la muestra pofílico (residuo de endosperma). El embrión consiste
(mL) en células de paredes delgadas que, además de glándu-
w == peso de la porción de Cardo Mariano tomada las pequeñas, contienen grupos de cristales y gotículas
(mg) de grasa (en los cotiled9nes).
o == factor de dilución para preparar la Solución • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
muestra a partir de Solución madre de la (56,1): No más de 2,0%, .
muestra, 25 • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje, No más de 8,0%, determinado en 1,0 g de Cardo Ma-
en la porción de Cardo Mariano tomada sumando los r\ano reducido a polvo fino.
porcentajes individuales. • PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Cardo Ma-
Criterios de aceptación: No menos de 2,0% de silima- riano reducido a polvo fino a 105º durante 2 horas:
rina, calculado como silibina (C2sH22010), con respecto a pierde no más de 8,0% de su peso.
la materia seca
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad.
5880 Cardo Mariano / Suplementos Dietéticos USP 37

• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en CONTENIDO

latín y, después de la denominación oficial, la parte de la • CONTENIDO DE SILIMARINA
planta contenida en el artículo. Solución A: Metanol, ácido fosfórico y agua
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11) (20: 0,5: 80)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP Solución B: Metanol, ácido fosfórico y agua
ER Silibina USP (80: 0,5: 20)
ER Silidianina USP Fase móvil: Ver la Tabla 7.

Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
lmin) lº/o)
Cardo Mariano, Cápsulas 1%1
o o o
DEFINICIÓN 5 85 15
Las Cápsulas de Cardo Mariano se preparan a partir de Ex- 20 55 45
tracto en Polvo de Cardo Mariano. Contienen no menos 40 55 45
de 90,0% y no más de 11 0,0% de la cantidad declarada 41 85 15
de silimarina como silibina (C2sH22010), calculada como la 55 85 15
suma de silidianina, silicristina, silibina A, silibina B, isosili-
bina A e isosilibina B. Solución estándar de cardo mariano: 0,7 mg/mL de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
IDENTIFICACIÓN , ,
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
disolver.
DELGADA
Soluciones estándar de silibina: 0,20; 0,02 y
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
0,004 mg/mL de ER Silibina USP en metano!. ~asar a
metano!
través de un filtro de membrana con un tamano de
Solución muestra: Equivalente a 5 mg/ml de silima-
poro de 0,45 µm o menor.
rina, a partir del contenido de las Cápsulas reducido a
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
polvo (reducir a polvo fino el co!lterndo de no ~enos
nido de no menos de 20 Cápsulas. Transferir una canti-
de 20 Cápsulas) en metano!. Agitar ~urante 1 .minuto y
dad del polvo, pesada con exactitud, equ,iv~lente a
someter a ultrasonido durante 1O minutos. De1ar en re-
1 00 mg de silimarina a un matraz volumetnco de
poso durante 15 minutos antes de usar.
1 00 mL, agregar 90 mL de metano! y someter a ultraso-
Sistema cromato9ráfico
nido durante 20 minutos, agitando ocasionalmente. En-
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
friar a 20º y diluir con metanol a volumen. Filtrar a
gada.)
través de una membrana con un tamaño de poro de
Modo: TLC
0,45 µm o menor.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo ~eneral de 20 cm de longitud Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Volumen de aplicacion: 1 O µL
Modo: HPLC
Fase móvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
Detector: UV 288 nm
formo acetona y ácido fórmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Solución reveladora A: Solución de difenilborinato de
Temperatura de la columna: 40º
2-aminoetilo de 1O mg/mL en metano!
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Solución reveladora B: Solución de polietilenglicol
Volumen de inyección: 1 O µL
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Análisis Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar de cardo mariano
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Para los tiempos de retención relativos, ver la
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
Tabla 2.]
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y s~carla ~urante 30 minutos e~, una
corriente de aire fno. Rociar la placa con Soluoon reve- Tabla 2
ladora A, dejar que se seque y lue90 rociar con Solu- Tiempo de
ción reveladora B. Una hora despues, observar la placa Retención
bajo luz UV de longitud de onda larga. Nombre Relativo
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- Silicristina o 68
ción muestra presenta una zona fluorescen~e azul. '!e.r-
dosa intensa a un valor RF de 0,5 (presencia de sil1bina) Silidianina o 73
y presenta una mancha azul grisácea a un valor RF de Silibina A 1 00
0,4 que corresponde a una mancha observada en el Silibina B 1 05
cromatograma de la Solución estándar. El cromatograma Deshidrosilibina 1 09
de la Solución muestra puede presentar otras zonas colo- lsosilibina A 1 15
readas: una zona azul verdosa intensa a un valor RF de lsosilibina B 1 19
0,25 (presencia de silicristina) y un~ zona a~ar~njada
rojiza a un valor RF de 0,,3 (presencia de taxlfol1na). Requisitos de aptitud
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de de la Solución estándar de cardo mariano es similar al
Silimarina. cromatograma de referencia provisto con el lote de
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
ción muestra presenta picos para siHdia_ni~a, silicris.tina, Resolución: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
silibina A silibina B isosilibina A e 1sosil1b1na B a tiem- bina B
pos de r~tención q~e corresponden a los de la Solución Factor de asimetría: 0,8-2,0
estándar de cardo mariano. Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
bina A y silibina B
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar de cardo mariano, cada
una de las Soluciones estándar de silibina y Solución
muestra
Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, sili-
bina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B compa-
rando el cromatograma de la Solución estándar de
cardo mariano con el cromatograma de referencia y
medir las áreas de los picos pertinentes. Graficar las
áreas de la suma de los picos de silibina A y silibina B
en función de la concentración de ER Silibina USP en
las Soluciones estándar de silibina, y obtener una línea
de regresión para calibración.
Calcular por separado el contenido, en mg, de cada
componente pertinente de silimarina, como silibina
(C2sH22010), en la porción de contenido de Cápsulas
tomada:
Resultado = cX V DELGADA
C = concentración del componente pertinente en
la Solución muestra según se interpola en la
gráfica de calibración (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje,
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = Cs x (Awc!W) x (100/L)
Cs = suma del contenido de cada componente
pertinente de silimarina en la porción de
contenido de Cápsulas tomada (mg)
Awc = peso promedio del contenido de las Cápsulas
(mg/Cápsula)
W = peso de la porción del contenido de las
Cápsulas tomada (mg)
L = cantidad declarada de silimarina (mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de silimarina como silibina
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos para Disolución.
Solución amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monobá-
sico de sodio y 1,52 g/L de hidróxido de sodio en agua.
Ajustar a un pH de 7,5.
Medio: Solución amortiguadora que contenga lauril sul-
fato al 2%; 900 mL
Aparato 2: 100 rpm
Tiempo: 45 min
Determinar la cantidad de silimarina, como silibina
(C2sH20Ü10), disuelta usando el método en la prueba
de Contenido de Silimarina, realizando las modificacio-
nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada eje silimarina como silibina (C2sH22010)
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 103 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no
excede de 102 ufc/g. , isosilibina A e isosilibina B en el cromatograma de la
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, el artículo a
partir del que se prepararon las Cápsulas. La etiqueta
también indica el contenido de silimarina, en mg/
Cápsula.
Suplementos Dietéticos/ Cardo Mariano 5881
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Cardo Mariano en Polvo
DEFINICIÓN
El Cardo Mariano en Polvo es Cardo Mariano reducido a
polvo fino o muy fino. Contiene no menos de 2,0% de
silimarina, calculado como silibina (C 25 H22010), con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
metanol
Solución muestra: Usar la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Contenido de Silimarina.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de longitud
(placas de TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
formo, acetona y ácido fórmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solución reveladora A: Solución de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1O mg/mL en metanol
Solución reveladora B: Solución de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire frío. Rociar la placa con Solución reve-
ladora A, dejar que se seque y lue90 rociar con Solu-
ción reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor RF de aproximadamente 0,5
(presencia de silibina) y presenta una mancha azul gri-
sácea a un valor RF de aproximadamente 0,4 que co-
rresponde a una mancha observada en el cromato-
grama de la Solución estándar. El cromatograma de la
Solución muestra puede presentar otras zonas colorea-
das: una zona azul verdosa intensa a un valor RF de
aproximadamente 0,25 (presencia de silicristina) y una
zona anaranjada rojiza a un valor RF de aproximada-
mente 0,3 (presencia d~ taxifolina).
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de
Silimarina.
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
los picos para silidianina, silicristina, silibina A, silibina B,
Solución muestra corresponden a los del cromatograma
de la Solución estándar de cardo mariano.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE SILIMARINA
Solución A: Metanol, ácido fosfórico y agua
(20: 0,5: 80)
Solución B: Metanol, ácido fosfórico y agua
(80: 0,5: 20)
5882 Cardo Mariano / Suplementos Dietéticos USP 37

Fase móvil: Ver la Tabla 1. Requisitos de aptitud

Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Tabla 1 de la Solución estándar de cardo mariano es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
Tiempo Solución A Solución B ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
(min\ (%) (%\ Resolución: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
o o o bina B
5 85 15 Factor de asimetría: 0,8-2,0
20 55 45 Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
40 55 45 la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
bina A y silibina B
41 85 15 Análisis
55 85 15 Muestras: Solución estándar de cardo mariano, cada
una de las Soluciones estándar de silibina y Solución
Solución estándar de cardo mariano: 0,7 mg/ml de muestra
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta- Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, si-
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para di- libina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B por
solver. Pasar a través de un filtro de membrana con un comparación con el cromatograma de la Solución es-
tamaño de poro de 0,45 µm o menor. Diluir 1 en 5 tándar de cardo mariano, y medir las áreas de los pi-
con metanol hasta obtener una solución de O, 14 mg/ cos pertinentes. Graficar las áreas de la suma de los
ml de ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP. picos de silibina A y silibina B en función de la con-
Soluciones estándar de silibina: 0,20; 0,02 y centración de ER Silibina USP en las Soluciones están-
0,004 mg/ml de ER Silibina USP en metanol. Pasar a dar de silibina, y obtener una línea de regresión para
través de un filtro de membrana con un tamaño de calibración.
poro de 0,45 µm o menor. Calcular por separado el porcentaje de cada compo-
Solución madre de la muestra: Transferir 1O g de nente pertinente de silimarina, como silibina
Cardo Mariano en Polvo a un dedal de extracción y (C2sH22010), en la porción de Cardo Mariano en Polvo
cubrir con una bola pequeña de algodón. Transferir el tomada:
dedal a un aparato de extracción continua equipado
con un matraz de fondo redondo de 250 ml que con- Resultado = C X (V/W) X 0 X 100
tenga 150 ml de éter de petróleo y calentar el matraz
sobre un manto de calentamiento durante 4 horas. e = concentración del componente pertinente en
Después de la extracción, separar el matraz de fondo la Solución muestra según se interpola en la
redondo que contiene el extracto de éter de petróleo gráfica de calibración (mg/ml)
del aparato de extracción y desechar la solución de éter V = volumen de la Solución madre de la muestra
de petróleo. Eliminar el éter de petróleo remanente en (ml)
el dedal de extracción mediante secado y transferir el w = peso de la porción de Cardo Mariano en Polvo
dedal a un aparato de extracción adecuado para extrac- tomada (mg)
ción en caliente y equipado con un matraz de fondo o = factor de dilución para preparar la Solución
redondo de 250 ml que contenga 100 ml de acetato muestra a partir de Solución madre de la
de etilo. [NOTA-Ajustar el volumen de acetato de etilo, muestra, 25
si fuera necesario, para mantener una extracción con- Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje,
tinua.] Calentar el matraz sobre un manto de calenta- en la porción de Cardo Mariano en Polvo tomada
miento para permitir el reflujo suave del disolvente. sumando los porcentajes individuales.
Después de 8 horas, transferir el extracto cuantitativa- Criterios de aceptación: No menos de 2,0% de silima-
mente a un matraz volumétrico de 100 ml y diluir con rina, calculado como silibina (C2sH22010), con respecto a
metanol a volumen. la materia seca
Solución muestra: Diluir la Solución madre de la mues-
tra (1 en 25) con metanol. CONTAMINANTES
Sistema cromato9ráfico • METALES PESADOS (231): No más de 20 µg/g
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
Modo: HPLC (561): Cumple con los requisitos.
Detector: UV 288 nm • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, y el recuento total
Temperatura de la columna: 40º combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Velocidad de flujo: 1 ml/min cede de 102 ufc/g. ,
Volumen de inyección: 1O µL • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Aptitud del sistema ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Muestra: Solución estándar de cardo mariano ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli, y la ausen-
[NOTA-Para los tiempos de retención relativos, ver la cia de Staphylococcus aureus.
Tabla 2.]
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: El polvo se caracteriza por
Tabla 2 presentar fragmentos de células incoloras, hasta de apro-
Tiempo de ximadamente 75 µm de longitud y 8 µm de ancho, de la
Retención capa en empalizada de la epidermis de la pared del
Relativo fruto, que poseen una capa de pigmento adherente (ad-
Silicristina o 68 quieren un color rojo en preparaciones de hidrato de clo-
Silidianina o 73 ral), y por partículas grises, vistas desde arriba, con el
lumen en forma de hendija producido por el engrosa-
Silibina A 1 00 miento pronunciado de la pared o por los nudos presen-
Silibina B 1 05 tes en la pared celular formados por las crestas engrosa-
Deshidrosilibina 1 09 das; fragmentos de la capa de pigmento vistos desde
lsosilibina A 1 15 arriba, con la coloración rojiza que se dil,uye de. ellos en
lsosilibina B 1 19 las preparaciones de hidrato de cloral, celulas pigmenta-
USP 37
rías que alternan con células parenquimáticas incoloras;
células incoloras claramente punteadas a través de las
cuales pueden verse las células pigmentadas cuando se
las observa desde arriba; prismas de oxalato de calcio
monoclínicos o en forma de cigarro, que se depositan
sueltos o en grupos de células; numerosos fragmentos de
las células en empalizada color amarillo limón del recu-
brimiento de la semilla, hasta aproximadamente 150 µm
de longitud, con un lumen muy angosto y claramente
punteado notablemente flameados cuando se los observa
desde arriba; fragmentos amarillo pálido de la capa de
células en red junto con porciones de embrión formado
por células de paredes delgadas con pequeñas glándulas
y sustancias lipofílicas. ,
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 2,0%, . grama de la Solución estándar. El cromatograma de la
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%, determinado en 1,0 g de Cardo Ma-
riano en Polvo
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Cardo Ma-
riano en Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de
8,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Extracto en Polvo de Cardo Mariano
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Cardo Mariano se prepara a partir
de los frutos o las semillas de Cardo Mariano mediante la
remoción de la materia grasa y la posterior extracción con
disolventes adecuados. Contiene no menos de 90,0% y
no más de 110,0% de la cantidad declarada de silimarina,
calculada como silibina (C2sH22010), con respecto al ex-
tracto seco, que consiste en no menos de 20,0% y no
más de 45,0% de la suma de silidianina y silicristina, no
menos de 40,0% y no más de 65,0% de la suma de
silibina A y silibina B, y no menos de 10,0% y no más de
20,0% de la suma de isosilibina A e isosilibina B.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
metanol
Solución muestra: 1O mg/mL de Extracto en Polvo en
metanol y dejar en reposo durante 15 minutos antes de
usar.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo ~eneral de 20 cm de longitud
Volumen de aplicacion: 1O µL
Fase móvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
formo, acetona y ácido fórmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solución reveladora A: Solución de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1O mg/mL en metanol
Solución reveladora B: Solución de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Suplementos Dietéticos / Cardo Mariano 5883
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire frío. Rociar la placa con Solución reve-
ladora A, dejar que se seque y fuego rociar con Solu-
ción reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor RF de aproximadamente 0,5
(presencia de silibina) y presenta una mancha azul gri-
sácea a un valor RF de aproximadamente 0,4 que co-
rresponde a una mancha observada en el cromato-
Solución muestra puede presentar otras zonas colorea-
das: una zona azul verdosa intensa a un valor RF de
aproximadamente 0,25 (presencia de silicristina) y una
zona anaranjada rojiza a un valor RF de aproximada-
mente 0,3 (presencia d~ taxifolina).
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de
Silimarina .
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
los picos para silidianina, silicristina, silibina A, silibina B,
isosilibina A e isosilibina B en el cromatograma de la
Solución muestra corresponden a los del cromatograma
de la Solución estándar de cardo mariano.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE SILIMARINA
Solución A: Metanol, ácido fosfórico y agua
(20: 0,5: 80)
Solución B: Metanol, ácido fosfórico y agua
(80: 0,5: 20)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
lmln) (%) (º/o)
o o o
5 85 15
20 55 45
40 55 45
41 85 15
55 85 15
Solución estándar de cardo mariano: 0,7 mg/mL de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para
disolver.
Soluciones estándar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/mL de ER Silibina USP en metano!. Pasar a
través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Disolver una muestra de Extracto en
Polvo en metanol hasta obtener una solución equiva-
lente a 0,4 mg/mL de silimarina. Someter a ultrasonido
durante 20 minutos, enfriar a 20º y pasar a través de
un filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 288 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar de cardo mariano
[NOTA-Para los tiempos de retención relativos, ver la
Tabla 2.]
5884 Cardo Mariano / Suplementos Dietéticos
Tabla 2
Tiempo de
Retención
Nombre Relativo
Silicristina o 68
Silidianina o 73
Silibina A 1 00
Silibina B -- __ LQS
--
Deshidrosilibina 1 09
lsosilibina A 1 15
lsosilibina B 1 19
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar de cardo mariano es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
bina B
Factor de asimetría: 0,8-2,0
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
bina A y silibina B
Análisis
Muestras: Solución estándar de cardo mariano, cada
una de las Soluciones estándar de silibina y Solución
muestra
Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, sili-
bina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B por com-
paración con el cromatograma de la Solución estándar
de cardo mariano, y medir las áreas de los picos perti-
nentes. Graficar las áreas de la suma de los picos de
silibina A y silibina B en función de la concentración
de ER Silibina USP en las Soluciones estándar de silibina,
y obtener una línea de regresión para calibración.
Calcular por separado el porcentaje de cada compo-
nente pertinente de silimarina, como silibina
(C2sH22010), en la porción de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado = c X (V/W) X 100
C = concentración del componente pertinente en
la Solución muestra según se interpola en la
gráfica de calibración (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de la porción de Extracto en Polvo
tomada (mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
silimarina en la porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = 'LS/ L x 1 00
'LS suma de los porcentajes de cada componente
= Fase móvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
pertinente de silimarina
L = cantidad declarada de silimarina, como
porcentaje, en el Extracto en Polvo
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de silimarina, calculada como silibina
(C2sH22010), con respecto a la materia seca, que con-
siste en: 20,0%-45,0% para la suma de silidianina y
silicristina; 40,0%-65,0% para la suma de silibina A y
silibina B; y 1 0,0%-20,0% para la suma de isosilibina A
e isosilibina B
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 µg/g
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no
excede de 10 3 ufc/g.
USP 37
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botánicos (565) para las pruebas en las secciones Residuos
de Plaguicidas y Disolventes Residuales.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
durante 2 horas: pierde no más de 5,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, a continuación de la denominación oficial, la
parte de la planta a partir de la que se preparó el artí-
culo. Cumple con los requisitos de Extractos Botánicos
(5~5), Etiquetado.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Cardo Mariano, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Cardo Mariano se preparan a partir de Ex-
tracto en Polvo de Cardo Mariano. Contienen no menos
de 90,0% y no más de 11 0,0% de la cantidad declarada
de silimarina, como silibina (C2sH22010), calculada como la
suma de silidianina, silicristina, silibina A, silibina B, isosili-
bina A e isosilibina B.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
metanol
Solución muestra: Equivalente a 5 mg/mL de silima-
rina, a partir de Tabletas reducidas a polvo fino (no me-
nos de 20) en metanol. Agitar durante 1 minuto y so-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos. Dejar en
reposo durante 15 minutos antes de usar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo 9eneral de 20 cm de longitud
Volumen de aplicacion: 1O µL
formo, acetona y ácido fórmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solución reveladora A: Solución de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1 O mg/mL en metanol
Solución reveladora B: Solución de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire frío. Rociar la placa con Solución reve-
ladora A, dejar que se seque y luego rociar con Solu-
ción reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga .
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor Rf de 0,5 (presencia de silibina)
y presenta una mancha azul grisácea a un valor Rf de
0,4 que corresponde a una mancha observada en el
cromatograma de la Solución estándar. El cromatograma
USP 37 Suplementos Dietéticos / Cardo Mariano 5885

de la Solución muestra puede presentar otras zonas colo- Requisitos de aptitud

readas: una zona azul verdosa intensa a un valor RF de Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
0,25 (presencia de silicristina) y una zona anaranjada de la Solución estándar de cardo mariano es similar al
rojiza a un valor RF de 0,,3 (presencia de taxifolina). cromatograma de referencia provisto con el lote de
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de Resolución: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
Silimarina. bina B
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- Factor de asimetría: 0,8-2,0
ción muestra presenta picos para silidianina, silicristina, Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
silibina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B a tiem- la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
pos de retención que corresponden con los de la Solu- bina A y silibina B
ción estándar de cardo mariano. Análisis
Muestras: Solución estándar de cardo mariano, cada
CONTENIDO una de las Soluciones estándar de silibina y Solución
• CONTENIDO DE SILIMARINA muestra
Solución A: Metanol, ácido fosfórico y agua Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, sili-
(20: 0,5: 80) bina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B compa-
Solución B: Metanol, ácido fosfórico y agua rando el cromatograma de la Solución estándar de
(80: 0,5: 20) cardo mariano con el cromatograma de referencia y
Fase móvil: Ver la Tabla 7. medir las áreas de los picos pertinentes. Graficar las
áreas de la suma de los picos de silibina A y silibina B
Tabla 1 en función de la concentración de ER Silibina USP en
las Soluciones estándar de silibina, y obtener una línea
Tiempo Solución A Solución B
de regresión para calibración.
(mln) (%) (%)
Calcular por separado el contenido, en mg, de cada
o o o componente pertinente de silimarina, como silibina
5 85 15 (C2sH22010), en la porción de Tabletas tomada:
20 55 45
40 55 45 Resultado = cX V
41 85 15 C = concentración del componente pertinente en
55 85 15 la Solución muestra según se interpola en la
gráfica de calibración (mg/ml)
Solución estándar de cardo mariano: 0,7 mg/ml de V = volumen de la Solución muestra (ml)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta- Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje,
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para en la porción de Tabletas tomada:
disolver.
Soluciones estándar de silibina: 0,20; 0,02 y Resultado = Cs x (Awr!W) x (100/L)
0,004 mg/ml de ER Silibina USP en metanol. Pasar a
través de un filtro de membrana con un tamaño de Cs = suma del contenido de cada componente
poro de 0,45 µm o menor. pertinente de silimarina en la porción de
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me- Tabletas tomada (mg)
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad del polvo, Awr = peso promedio de las Tabletas (mg/Tableta)
pesada con exactitud, equivalente a 100 mg de silima- W = peso de la porción de Tabletas tomada (mg)
rina a un matraz volumétrico de 100 ml, agregar 90 ml L = cantidad declarada de silimarina (mg/Tableta)
de metanol y someter a ultrasonido durante 20 minu- Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
tos, agitando ocasionalmente. Enfriar a 20º y diluir con
metanol a volumen. Filtrar a través de una membrana PRUEBAS DE DESEMPEÑO
con un tamaño de P.oro de 0,45 µm o menor. • DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
Sistema cromato~rafico requisitos para Disolución.
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) Solución amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monobá-
Modo: HPLC sico de sodio y 1,52 g/L de hidróxido de sodio en agua.
Detector: UV 288 nm Ajustar a un pH de 7,5.
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm Medio: Solución amortiguadora que contenga lauril sul-
Temperatura de la columna: 40º fato al 2%; 900 ml
Velocidad de flujo: 1 ml/min Aparato 2: 100 rpm
Volumen de inyección: 1 O µL Tiempo: 45 min
Aptitud del sistema Determinar la cantidad de silimarina, como silibina
Muestra: Solución estándar de cardo mariano (C2sH20010), disuelta usando el método en la prueba
[NOTA-Para los tiempos de retención relativos, ver la de Contenido de Silimarina, realizando las modificacio-
Tabla 2.] nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
Tabla 2 rada de silimarina, como silibina (C2sH22010)
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
Tiempo de
Retención CONTAMINANTES
Nombre Relativo • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Silicristina o 68 tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, el recuento total
Silidianina o 73 combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no
Silibina A 1 00 excede de 102 ufc/g. ,
Silibina B 1 05 • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Deshidrosilibina 1 09 ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
lsosilibina A 1 15 ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
lsosilibina B 1 19
5886 Cardo Mariano / Suplementos Dietéticos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, a continuación de la denominación oficial, el artí-
culo a partir del que se prepararon las Tabletas. La eti-
queta también indica el contenido de silimarina, en mg/
Tableta.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Castaño de Indias
DEFINICIÓN
El Castaño de Indias consiste en las semillas secas de Aescu-
lus hippocastanum L. (Fam. Hippocastanaceae). Se cosecha
durante el otoño. Contiene no menos de 3,0% de glicósi-
dos triterpénicos, calculado con respecto a la materia seca
como escina (CssHs6Ü24).
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 5 mg/mL de ER Escina USP en
metanol
Solución muestra: Transferir 1 g del material vegetal re-
ducido a polvo a un tubo de centrífuga con tapa de
rosca, agregar 1O mL de una mezcla de alcohol y agua
(7:3), y calentar en un baño de vapor durante 1O minu-
tos. Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de
1-butanol, ácido acético glacial y agua (5:1 :4).
Solución reveladora: Metano!, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85: 1O: 5: 0,5)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
no menos de 15 cm y secar la placa en una corriente
de aire. Rociar la placa con Solución reveladora, calen-
tar a 100º durante 5 minutos y observar la placa bajo
luz diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de color violeta azulado
correspondiente a escina, comparable en posición y
color a la zona principal en el cromatograma de la Solu-
ción estándar. Por encima de esta zona, el cromato-
grama de la Solución muestra presenta diversas zonas
estrechas de color marrón a rojo amarronado menos
intensas que la zona correspondiente a escina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GucÓSIDOS TRITERPÉNICOS
Disolvente A: Metanol y agua (13:7)
Disolvente B: Usar la fase inferior de una mezcla de
cloroformo, ácido clorhídrico O, 1 N y 1-propanol
(5:3:2).
Reactivo: Disolver 75 mg de cloruro férrico en 50 mL
de ácido acético glacial. Agregar 50 mL de ácido sul-
fúrico, mientras se mezcla y enfría. Preparar inmediata-
mente antes de usar.
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
Solución estándar B: 0,4 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
USP 37
Solución estándar C: 0,6 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto .
Solución muestra: Pesar 1 g de semillas molidas y colo-
car en un matraz de fondo redondo de 250 ml. Agre-
gar exactamente 100 mL de Disolvente A y pesar eí ma-
traz lleno con una precisión de ±0, 1 g. Acoplar un
condensador al matraz, someter a reflujo durante 30
minutos y dejar que se enfríe. Ajustar al peso inicial
agregando Disolvente A, según sea necesario, y filtrar.
Transferir 30,0 mL del filtrado a un matraz de fondo
redondo y evaporar los disolventes al vacío. Disolver el
residuo con 20 mL de ácido clorhídrico O, 1 N y transfe-
rir cuantitativamente con ayuda de dos porciones adi-
cionales de 5 mL de ácido clorhídrico O, 1 N a un em-
budo de separación de 250 ml. Agregar 20 mL de
1-propanol y 50 mL de cloroformo, y agitar vigorosa-
mente durante 2 minutos. Separar la capa clorofórmica
y agregar Disolvente B a la fase superior remanente en
el embudo de separación. Agitar vigorosamente durante
2 minutos y separar la capa clorofórmica. Combinar las
capas clorofórmicas en un matraz de fondo redondo y
evaporar hasta sequedad al vacío. Evaporar los disolven-
tes remanentes con ayuda de una corriente de aire. La-
var el residuo con dos porciones de 1O mL de éter, fil-
trar, lavar el filtro con 1O mL de éter y desechar los
filtrados etéreos. Después de la evaporación del éter re-
sidual, awegar al residuo una porción de 1o mL de
ácido acetico glacial y pasar a través del filtro seco
usado previamente a un matraz volumétrico de 50 ml.
Repetir la adición de ácido acético glacial seguida de
dos pasos adicionales de filtración, combinando los fil-
trados en el matraz volumétrico. Lavar el matraz de
fondo redondo con pequeñas cantidades de ácido acé-
tico glacial y filtrar en el matraz volumétrico. Diluir con
ácido acético glacial a volumen.
Condiciones instrumentales
Modo: Visual
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud ,de onda: 540 nm
Blanco: Acido acético glacial
Análisis: Transferir 1 mL de la Solución estándar A, de la
Solución estándar B, de la Solución estándar C, de la So-
lución muestra y del Blanco a sendos tubos de ensayo
con tapón. Agregar 4,0 mL de Reactivo a cada tubo,
tapar los tubos y colocarlos en un baño de agua a 60º
durante 25 minutos, agitando ocasionalmente. Medir
las absorbancias de la Solución muestra reaccionada y de
las Soluciones estándar A, B y C reaccionadas, y corregir
por el Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones
estándar A, B y C reaccionadas en función de sus con-
centraciones, en mg/mL, de ER Escina USP en la Solu-
ción estándar correspondiente. A partir de las gráficas,
determinar la concentración, C, en mg/mL, de glicósi-
dos triterpénicos, como escina (CssHs6Ü24), en la Solu-
ción muestra.
Calcular el porcentaje de glicósidos triterpénicos como
escina en la porción de Castaño de Indias tomada:
Resultado = (C/W) x (50/3)
C = concentración de glicósidos triterpénicos en la
Solución muestra según se obtuvo
anteriormente (mg/mL)
W = peso de Castaño de Indias tomado para
preparar la Solución muestra (g)
Criterios de aceptación: No menos de 3,0% de glicósi-
dos triterpénicos, calculado como escina (CssHs6Ü24),
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
• METj\LES PESADOS, Método,!// (231): No más de 20 µg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
USP 37
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no más de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Las semillas de Castaño de Indias son
compactas y duras, subesféricas a ovaladas, levemente
aplanadas y de 2 a 4 cm de diámetro. El recubrimiento
de la semilla es de color marrón oscuro de 1 a 1,5 mm
de espesor, con una mancha grande y redonda de color
marron claro (hilo). El recubrimiento de la semilla es
brilloso, pero sólo cuando es fresca. El espacio bajo el
recubrimiento está totalmente ocupado por un enorme
embrión macizo brilloso y sus grandes cotiledones de
color amarillo pálido que carecen de endosperma.
Microscópicas: La epidermis de la testa vista desde la
superficie presenta células de color marrón amarillento
de tamaño bastante uniforme, en su mayoría con forma
redonda a poligonal y unas pocas con forma cuadrada
a levemente triangular. Las paredes de estas células tie-
nen un espesor considerable pero irregular y carecen de
puntuaciones. Al corte, las células son columnares,
aproximadamente 3-4 veces más altas que anchas, con
la pared periclinal externa significativamente engrosada,
irregular y que se afina hacia la base; debajo de la epi-
dermis se observan unas pocas capas de celulas colen-
quimáticas engrosadas con pequeños espacios intercelu-
lares; la parte más grande de la testa consiste en células
parenquimáticas de mayor tamaño no muy comprimi-
das que forman un tejido esponj'oso; las paredes pre-
sentan un engrosamiento variab e e irregular, con gran-
des espacios intercelulares circulares bien marcados; la
capa interna de la testa es una zona estrecha, con célu-
las mal definidas de paredes más delgadas. Todas las
células parenquimáticas de la testa presentan una pig-
mentación oscura. El embrión tiene una capa exterior
de células incoloras pequeñas, casi cuadradas al corte,
con paredes externas y laterales engrosadas. Desde la
superficie, únicamente pueden vislumbrarse los lúmenes
irregulares y más o menos poligonales, lo que propor-.
dona un aspecto reticulado con puntuaciones. Los coti-
ledones son moderadamente engrosados y con puntua-
ciones indistintas, con células parenquimáticas
redondeadas a ovoides densamente llenas de almidón.
Los gránulos de almidón, en su mayoría simples, se pre-
sentan en dos intervalos de tamaño: de 15 a 30 µm y
de 3 a 1O µm. Los gránulos más grandes presentan una
forma que varía de circular, ovoide, y claramente poli-
gonal a piriforme, la mayoría de los cuales tienen un
nilio radial o hendido bien marcado y carecen de es-
trías. Los gránulos de almidón más pequeños son me-
nos variables, de forma esférica a ovoide, con el hilio
frecuentemente como un punto. Es poco frecuente la
presencia de gr~nulos de almidón compuestos.
• SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Análisis: Proceder según se indica en Artículos de Origen
Botánico (561 ), Extractos Solubles en Alcohol, Método 2,
excepto c¡ue se debe usar una mezcla de metanol y
a~ua (8:2) en lugar de alcohol.
Criterios de aceptación: No menos de 18,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105º
durante 2 horas: pierde no más de 10,0% de su peso .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
bien cerrado y resistente a la luz. Proteger de la
humedad.
Suplementos Dietéticos /Castaño de Indias 5887
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín, y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Escina USP
Castaño de Indias en Polvo
DEFINICIÓN
El Castaño de Indias en Polvo es Castaño de Indias reducido
a polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 3,0%
de glicósidos triterpénicos, calculado con respecto a la
materia seca como escina (CssHs6Ü24).
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 5 mg/mL de ER Escina USP en
metanol
Solución muestra: Transferir 1 g de Castaño de Indias
en Polvo a un tubo de centrífuga con tapa de rosca,
agregar 1O mL de una mezcla de alcohol y agua (7:3),
y calentar en un baño de vapor durante 1O minutos.
Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de
1-butanol, ácido acético glacial y agua (5:1 :4).
Solución reveladora: Metanol, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85: 1O: 5: 0,5)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de no
menos de 15 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Rociar la placa con Solución reveladora, calentar a
100º durante 5 minutos y observar la placa bajo luz
diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de color violeta azulado
correspondiente a escina, comparable en posición y
color a la zona principal en el cromatograma de la Solu-
ción estándar. Por encima de esta zona, el cromato-
grama de la Solución muestra presenta diversas zonas
estrechas de color marrón a rojo amarronado menos
intensas que la zona correspondiente a escina.
COMPOSICIÓN , ,
• CONTENIDO DE GLICOSIDOS TRITERPENICOS
Disolvente A: Metanol y agua (13:7)
Disolvente B: Usar la fase inferior de una mezcla de
cloroformo, ácido clorhídrico O, 1 N y 1-propanol
(5:3:2).
Reactivo: Disolver 75 mg de cloruro férrico en 50 mL
de ácido acético glacial. Agregar 50 mL de ácido sul-
fúrico, mientras se mezcla y enfría. Preparar inmediata-
mente antes de usar.
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
Solución estándar B: 0,4 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
Solución estándar C: 0,6 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minutc:i.
Solución muestra: Pesar 1 g de Castaño de Indias en
Polvo y colocar en un matraz de fondo redondo de
250 ml. Agregar exactamente 100 mL de Disolvente A y
pesar el matraz lleno con una precisión de ±0, 1 g. Aco-
plar un condensador al matraz, someter a reflujo du-
rante 30 minutos y dejar que se enfríe. Ajustar al peso
5888 Castaño de Indias / Suplementos Dietéticos
inicial agregando Disolvente A según sea necesario y fil-
trar. Transferir 30,0 mL del filtrado a un matraz de
fondo redondo y evaporar los disolventes al vacío. Di-
solver el residuo con 20 mL de ácido clorhídrico O, 1 N y
transferir cuantitativamente con ayuda de dos porciones
adicionales de 5 mL de ácido clorhídrico O, 1 N a un
embudo de separación de 250 mL. Agregar 20 mL de
1-propanol y 50 mL de cloroformo, y agitar vigorosa-
mente durante 2 minutos. Separar la capa clorofórmica
y agregar Disolvente B a la fase superior remanente en
el embudo de separación. Agitar vigorosamente durante
2 minutos y separar la capa clorofórmica. Combinar las
capas clorofórmicas en un matraz de fondo redondo y
evaporar hasta sequedad al vacío. Evaporar los disolven-
tes remanentes con ayuda de una corriente de aire. La-
var el residuo con dos porciones de 1 O mL de éter, fil-
trar, lavar el filtro con 1 O mL de éter y desechar los
filtrados etéreos. Después de la evaporación del éter re-
sidual, agregar al residuo una porción de 1 O mL de
ácido acético glacial y pasar a través del filtro seco
usado previamente a un matraz volumétrico de 50 ml.
Repetir la adición de ácido acético glacial seguida de
dos pasos adicionales de filtración, combinando los fil-
trados en el matraz volumétrico. Lavar el matraz de
fondo redondo con pequeñas cantidades de ácido acé-
tico glacial y filtrar en el matraz volumétrico. Diluir con
ácido acético glacial a volumen.
Condiciones instrumentales
Longitud de onda: 540 nm
Modo: Visible
Blanco: Ácido acético glacial
Análisis: Transferir 1 mL de la Solución estándar A, de la
Solución estándar B, de la Solución estándar C, de la So-
lución muestra y del Blanco a sendos tubos de ensayo
con tapón. Agregar 4,0 mL de Reactivo a cada tubo,
tapar los tubos y colocarlos en un baño de agua a 60º
durante 25 minutos, agitando ocasionalmente. Medir
las absorbancias de la Solución muestra reaccionada y de
las Soluciones estándar A, By C reaccionadas, y corregir
por el Blanco. Graficar las absorbancias obtenidas de las
Soluciones estándar A, B y C reaccionadas en función de
sus concentraciones, en mg/mL, de ER Escina USP en la
Solución estándar correspondiente. A partir de las gráfi-
cas así obtenidas, determinar la concentración, C, en
mg/mL, de glicósidos triterpénicos, como escina
(CssHs6Ü24), en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de glicósidos triterpénicos como
escina en la porción de Castaño de Indias en Polvo
tomada:
Resultado = (C/W) x (50/3)
C = concentración de glicósidos triterpénicos en la
Solución muestra, según se obtuvo
anteriormente (mg/ml)
W = peso de Castaño de Indias en Polvo tomado
para preparar la Solución muestra (g)
Criterios de aceptación: No menos de 3,0% de glicósi-
dos triterpénicos, calculado como escina (CssHs6Ü24),
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método, 111 (231 ): No más de 20 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no más de 1 0 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
USP 37
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón ama-
rillento, inodoro, con un sabor algo harinoso, desagrada-
blemente amargo y persistente. Presenta numerosas goti-
tas de aceite graso de diferentes tamaños que están
libres o dentro del tejido incoloro de pared delgada de
los cotiledones. Los fragmentos de la testa consisten en
células esclerenquimáticas de pared gruesa con puntua-
ciones. También se presenta lo siguiente: gránulos de al-
midón individuales piriformes, redondeados o reniformes
de mayor tamaño de 15 a 30 µm de diámetro, gránulos
individuales más pequeños de 3 a 1 O µm y sólo unos
pocos gránulos compuestos que consisten en 2-4 granos
individuales que forman filas de hasta 45 µm de largo.
Muchos de los gránulos de almidón tienen un hilio bies-
trellado o poliest~ellado, pero rara vez simple.
• SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Análisis: Proceder según se indica en Artículos de Origen
Botánico (561 ), Extractos Solubles en Alcohol, Método 2,
excepto que se debe usar una mezcla de metanol y
agua (8:2) en lugar de alcohol.
<;riterios de aceptación: No menos de 18,0%
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105º
du~ante 2 horas: pierde í}O más de 1 0,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases
bien cerrados y resistentes a la luz. Proteger de la
humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín, y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Escina USP
Extracto en Polvo de Castaño de Indias
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Castaño de Indias se prepara a partir
de Castaño de Indias mediante extracción con mezclas de
alcohol-agua o mezclas de metanol-agua. La relación en-
tre el material vegetal inicial y el extracto está entre 5:1 y
8:1. Contiene no menos de 90,0% y no más de 110,0%
de la cantidad declarada de glicósidos triterpénicos, calcu-
lado con respecto a la materia seca como escina
(CssHs6Ü24). Puede contener sustancias agregadas
adecuadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 5 mg/mL de ER Escina USP en
metanol
Solución muestra: Agregar a 1 O mL de metanol una
cantidad de Extracto en Polvo equivalente a 25 mg de
la cantidad declarada de glicósidos triterpénicos y agi-
tar. Dejar en reposo durante 15 minutos antes de usar .
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1 O ~tL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de
1-butanol, ácido acético glacial y agua (5:1 :4) .
Solución reveladora: Metano!, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85: 1 O: 5: 0,5)
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de no
menos de 15 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Rociar la placa con Solución reveladora, calentar a
100º durante 5 minutos y observar la placa bajo luz
diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de color violeta azulado
correspondiente a escina, comparable en posición y
color a la zona principal en el cromatograma de la Solu-
ción estándar. Por encima de esta zona, el cromato-
grama de la Solución muestra presenta diversas zonas
estrechas de color marrón a rojo amarronado menos
intensas que la zona correspondiente a escina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GucÓSIDOS TRITERPÉNICOS
Disolvente A: Metanol y agua (13:7)
Disolvente B: Usar la fase inferior de una mezcla de
cloroformo, ácido clorhídrico O, 1 N y 1-propanol
(5:3:2).
Reactivo: Disolver 75 mg de cloruro férrico en 50 mL
de ácido acético glacial. Agregar 50 mL de ácido sul-
fúrico, mientras se agita y enfría. Preparar inmediata-
mente antes de usar.
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
Solución estándar B: 0,4 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
Solución estándar C: 0,6 mg/mL de ER Escina USP en
ácido acético glacial, agitando durante 1 minuto.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo, equivalente a 50 mg de la cantidad declarada
de glicósidos triterpénicos, a un matraz de 50 ml. Agre-
gar 20 mL de ácido clorhídrico O, 1 N y agitar durante 5
minutos. Filtrar en un embudo de separación de
250 mL con ayuda de dos porciones adicionales de
5 mL de ácido clorhídrico O, 1 N. Agregar 20 mL de
1-propanol y 50 mL de cloroformo, y agitar vigorosa-
mente durante 2 minutos. Separar la capa clorofórmica
y agregar Disolvente B a la fase superior remanente en
el embudo de separación. Agitar vigorosamente durante
2 minutos y separar la capa clorofórmica. Combinar las
capas clorofórmicas en un matraz de fondo redondo y
evaporar hasta sequedad al vacío. Evaporar los disolven-
tes remanentes con ayuda de una corriente de aire. La-
var el residuo con dos porciones de 1O mL de éter, fil-
trar, lavar el filtro con 1O mL de éter y desechar los
filtrados etéreos. Después de la evaporación del éter re-
sidual, awegar al residuo una porción de 1o mL de
ácido acetico glacial y pasar a través del filtro seco
usado previamente a un matraz volumétrico de 100 ml.
Repetir la adición de ácido acético glacial seguida de
dos pasos adicionales de filtración, combinando los fil-
trados en el matraz volumétrico. Lavar el matraz de
fondo redondo con pequeñas cantidades de ácido acé-
tico glacial y filtrar en el matraz volumétrico. Diluir con
ácido acético glacial a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Visible
Longitud ,de onda: 540 nm
Blanco: Acido acético glacial
Análisis: Transferir 1 mL de la Solución estándar A, de la
Solución estándar B, de la Solución estándar C, de la So-
lución muestra y del Blanco a sendos tubos de ensayo
con tapón. Agregar 4,0 mL de Reactivo a cada tubo,
tapar los tubos y colocarlos en un baño de agua a 60º
durante 25 minutos, agitando ocasionalmente. Medir
las absorbancias de la Solución muestra reaccionada y de
las Soluciones estándar A, B y C reaccionadas, y corregir
por el Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones
estándar A, By C reaccionadas en función de sus con-
centraciones, en mg/mL, de ER Escina USP en la So/u-
Suplementos Dietéticos / Centella 5889
ción estándar correspondiente. A partir de las gráficas,
determinar la concentración, e, en mg/mL, de glicósi-
dos triterpénicos como escina (CsH86Ü24) en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glicó-
sidos triterpénicos en la porción de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de glicósidos triterpénicos en la
Solución muestra, según se obtuvo
anteriormente (mg/mL)
Cu = concentración nominal de glicósidos
triterpénicos en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de glicósidos triterpénicos, como escina
(CssHs6Ü24), con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 µg/g
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g; y el recuento de ente-
robacterias no excede de 103 ufc/g.,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 105º durante 2
horas: pierde no más de 5,0% de su peso.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botánicos (565), Requisitos Farmacopeicos Generales, para
Envasado y Almacenamiento, Disolventes Residuales y Resi-
duos de Plaguicidas para extractos en polvo.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar
fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín, y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se preparó el artículo. La etiqueta tam-
bién indica el contenido de glicósidos triterpénicos, el di-
solvente o la mezcla de disolventes de extracción usados
para la preparación, la relación entre el material vegetal
crudo inicial y el Extracto en Polvo, y el nombre y conte-
nido de cualquier sustancia agregada. Cumple con los
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Escina USP
Centella asiatica
DEFINICIÓN
La Centella asiatica consiste en las partes aéreas secas de
Centella asiatica (L.) Urb. [Sin: Hydrocotyle asiatica L.]
(Fam. Apiaceae). También se la conoce comercialmente
como gotu kola. Contiene no menos de 2,0% de deriva-
dos triterpénicos, calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Centella asiatica cumple con los requisitos de Prue-
bas Específicas, Caracterís~icas Botánicas. ,
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR (ROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticósido
USP en metanol
5890 Centella / Suplementos Dietéticos
Solución estándar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP en metano!. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1O minutos, cen-
trifugar, y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Aproximadamente 0,5 g de Centella
asiatica, reducida a polvo fino, en 5 mL de metano!.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar,
y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC) o con un tamaño promedio de partícula de 5
µm (placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL (placas para TLC) o 4 µL
(placas para HPTLC)
Fase móvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua (14:6: 1)
Solución reveladora: Una solución de ácido sulfúrico al
1 0% en metano!. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
fas cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 3 minutos a
120º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda de color violeta en el
tercio inferior de la placa debida a asiaticósido, que co-
rresponde en color y valor RF a la de la Solución están-
dar A; una banda de color violeta debida a madecasó-
sido a un valor RF menor que el de asiaticósido; y dos
bandas de color violeta adicionales en el tercio superior
de la placa debidas a ácido asiático y ácido madecásico.
Las bandas detectadas en la Solución muestra correspon-
den en posición y color a las bandas de la Solución es-
tándar B. Se pueden observar otras bandas menores en
la Solución muestra y la ,Solución estándar B.
• c. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromato-
grama de la Solución muestra de la prueba de Contenido
de Derivados Triterpénicos presenta un pico al tiempo de
retención correspondiente al de asiaticósido en la Solu-
ción estándar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pénicos en la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solución
muestra presenta picos adicionales correspondientes a
madecasósido y asiaticósido B (estos dos picos pueden
coeluir), ácido madecásico, ácido terminólico y ácido
asiático.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPÉNICOS
Solución A: Diluir 3 mL de ácido fosfórico con agua
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 78 22
65 45 55
5 95
66
75 5 95
76 78 22
85 78 22
Solución estándar A: 0,05 mg/mL de ER Asiaticósido
USP en metanol
USP 37
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en
metanol hasta obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Centella asiatica, reducida a polvo fino y
pesada con exactitud, a un aparato de Soxhlet. Agregar
100 mL de metanol, extraer durante 8 horas, enfriar, y
diluir con metanol hasta 100 ml. Pasar a través de un
filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
[NOTA-Usar un dedal con un tamaño adecuado para
que el volumen de metanol usado en la extracción en
el aparato de Soxhlet sea al menos el doble del volu-
men del dedal.]
Solución muestra: Diluir 5,0 mL de Solución madre de
la muestra con metanol hasta 1 O ml.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asiaticósido, Solución estándar A
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de
ácido madecásico y ácido terminólico, Solución están-
dar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del r,ico de asiaticósido en inyec-
ciones repetidas, Soluetón estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, Solu-
ción estándar B y Solución muestra se mantienen esta-
bles durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cente-
lla asiatica USP usado, identificar los tiempos de reten-
ción de los picos correspondientes a los diferentes de-
rivados triterpénicos. Los tiempos de retención
relativos aproximados para los diferentes derivados tri-
terpénicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de Retención
Ana lito Relativo Anroximado
Madecasósido o 71
Asiaticósido B o 72
Asiaticósido 1 00
Ácido madecásico 2 40
Ácido terminólico 2 44
Ácido asiático 312
Calcular por separado los porcentajes de la suma de
madecasósido y asiaticósido B (estos dos picos pueden
coeluir), asiaticósido, la suma de ácido madecásico y
ácido terminólico, y ácido asiático en la porción de
Centella asiatica tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x D x F x 100
USP 37
ru = respuestas de los picos de derivados
triterpénicos de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de asiaticósido de la
Solución estándar A
C5 = concentración de ER Asiaticósido USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución madre de la
muestra (mL)
W = peso de Centella asiatica usada para preparar
la Solución madre de Ja muestra (mg)
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra
F = factores de conversión para los analitos:
1,00 para asiaticósido; 1,01 7 para la suma de
madecasósido y asiaticósido B; 0,526 para la
suma de ácido madecásico y ácido
terminólico y 0,509 para ácido asiático
Criterios de aceptacion: Sumar los porcentajes de los
diferentes derivados triterpénicos: No menos de 2,0%
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método /JI (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal combinado de microorganismos aerobios no excede
de 10 5 ufc/g, el recuento total combinado de hongos
filamentosos y levaduras no excede de 10 3 ufc/g y el
recuento de bacterias Gram negativas tolerantes a la bilis
no excede de 10 3 ufc/g. ,
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El tallo es delgado, de color marrón
amarillento, con entrenudos largos e inserciones de raí-
ces en los nudos; las hojas son de color verde grisáceo,
simples, alternadas o agrupadas en los nudos, renifor-
mes o elíptico oblongas, con venación palmada, por lo
general con 7 venas, ápice obtuso, margen crenado,
base cordada, de tamaños variables, 1-4 cm de largo,
2-4 cm y en ocasiones de hasta 7 cm de ancho, las
hojas jóvenes presentan unos pocos tricomas en la su-
perficie inferior y las hojas adultas son glabras; los pe-
cíolos son largos, estriados, con base más ancha y en-
vainada; la inflorescencia, si estuviera presente, es una
sola umbela y consiste en 3 flores, en raras ocasiones en
2 ó 4; las flores son muy pequeñas (aproximadamente
2 mm), pentámeras y tienen un ovario inferior; el fruto
es de color gris amarronado, con cremocarpio orbicular,
de hasta 5 mm de largo, lateralmente mur aplanado y
tiene 7-9 crestas curvadas prominentes. E artículo far-
macopeico consta de masas de color verde a verde
amarillento compuestas en su mayoría fragmentos de
hojas y tallos; el olor es suave; el sabor es ligeramente
amargo a dulce.
Histología
Sección transversal de los tallos: Capa epidérmica,
células subredondeadas o subcuadradas; de 2-4 capas
de células colenquimáticas; 6-8 capas de células pa-
renquimáticas de paredes delgadas con espacios inter-
celulares; 6-7 haces vasculares colaterales, vasos de xi-
lema dispuestos en forma radial, grupos de fibras
ligeramente lignificadas que ocurren en la parte exte-
rior del floema; médula grande, compuesta de células
parenquimáticas de paredes delgadas; canales secreto-
res, compuestos de 5-7 células secretoras, observadas
en los radios de la corteza y medulares.
Suplementos Dietéticos /Centella 5891
Sección transversal de las hojas: Epidermis superior e
inferior; mesófilo compuesto de células parenquimáti-
cas, algunas contienen cristales de oxalato de calcio;
2-3 capas de colénquima presentes en la re~ión de la
nervadura central junto a ambas capas epidermicas;
haces vasculares en el centro con xilema en la parte
ventral y floema en la parte dorsal. La sección trans-
versal de los pecíolos en forma de U presenta una epi-
dermis inferior y una superior, seguidas por 2-3 capas
de colénquima junto a ambas capas epidérmicas; una
zona parenquimática amplia, algunas células contienen
cristales de oxalato de calcio; 7 haces vasculares que
forman una U en la zona parenquimática, donde los
dos presentes en los brazos que se proyectan están
menos desarrollados.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 7,0%, del cual no más de 5,0% con-
siste en órganos subterráneos y no más de 2% consiste
en otra materia extraña.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Centella asia-
tica reducida a polvo fino a 105º durante 2 horas: pierde
no más de 12,0% de su peso .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 12%, determinado en 1,0 g de Centella asia-
tica, reducida a polvo fin~. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 3,5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo. La etiqueta indica que
el artículo está exento de los requisitos de las Adverten-
cias Generales con respecto a la declaración sobre emba-
razo y lactancia (sección 10.40.50 Etiquetado de Jos Pro-
ductos Botánicos).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Asiaticósido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Centella asiatica en Polvo
DEFINICIÓN
La Centella asiatica en Polvo es Centella asiatica reducida a
polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 2,0%
de derivados triterpénicos, calculado con respecto a la
materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Centella asiatica en Polvo cumple con los requisi-
tos de Pruebas Específicas~ Características Botánjcas.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticósido
USP en metanol
Solución estándar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP en metanol. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1 O minutos, cen-
trifu~ar, y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Aproximadamente 0,5 g de Centella
asiatica en Polvo en 5 mL de metanol. Someter a ultra-
sonido durante 1 O minutos, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC) o con un tamaño promedio de part1cula de 5
µm (placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL (placas para TLC) o 4 µL
(placas para HPTLC)
5892 Centella /Suplementos Dietéticos
Fase móvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua (14:6:1)
Solución reveladora: Una solución de ácido sulfúrico al
10% en metano!. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
fos cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 3 minutos a
120º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda viofeta en el tercio
inferior de la placa debida a asiaticósido, que corres-
ponde en color y valor RF a la de la Solucion estándar A;
una banda violeta debida a madecasósido a un valor Rr
menor que el de asiaticósido; y dos bandas violetas adi-
cionales en el tercio superior de la placa debidas a
ácido asiático y ácido madecásico. Las bandas detecta-
das en la Solución muestra corresponden en posición y
color a las bandas de la Solución estándar B. Se pueden
observar otras bandas menores en la Solución muestra y
la Solución estándar B.
• c. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC: El cromato-
grama de la Solución muestra de la prueba de Contenido
de Derivados Triterpénicos presenta un pico al tiempo de
retención correspondiente al de asiaticósido en la Solu-
ción estándar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pénicos en la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solución
muestra presenta picos adicionales correspondientes a
madecasósido y asiaticósido B (estos dos picos pueden
coeluir), ácido madecásico, ácido terminólico y ácido
asiático.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPÉNICOS
Solución A: Diluir 3 mL de ácido fosfórico con agua
hasta 1 000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
lmin) {%) {%)
o 78 22
65 45 55
66 5 95
75 5 95
76 78 22
85 78 22
Solución estándar A: 0,05 mg/mL de ER Asiaticósido
USP en metano!
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en
metano! hasta obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 5,0 mg/mL. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Centella asiatica en Polvo, pesados con
exactitud, a un aparato de Soxhlet. Agregar 100 mL de
metano!, extraer durante 8 horas, enfriar, y diluir con
metano! hasta 100 ml. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o me-
USP 37
nor, desechando los primeros mL del filtrado. [NOTA-
Usar un dedal con un tamaño adecuado para que el
volumen de metano! usado en la extracción en el apa-
rato de Soxhlet sea al menos el doble del volumen del
dedal.]
Solución muestra: Diluir 5,0 mL de Solución madre de
Ja muestra con metano! hasta 1 O mL.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asiaticósido, Solución estándar A
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de
ácido madecásico y ácido terminólico, Solución están-
dar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de asiaticósido en inyec-
ciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, la
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cente-
lla asiatica USP usado, identificar los tiempos de reten-
ción de los picos correspondientes a los diferentes de-
rivados triterpénicos. Los tiempos de retención
relativos aproximados para los diferentes derivados tri-
terpénicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de Retención
Analito Relativo Aoroximado
Madecasósido o 71
Asiaticósido B o 72
Asiaticósido 1 00
Ácido madecásico 2 40
Ácido terminólico 2 44
Ácido asiático 312
Calcular por separado los porcentajes de la suma de
madecasósido y asiaticósido B (estos dos picos pueden
coeluir), asiaticósido, la suma de ácido madecásico y
ácido terminólico y ácido asiático en la porción de
Centella asiatica en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x D x F x 100
ru = respuestas de los picos de derivados
triterpénicos de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de asiaticósido de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Asiaticósido USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución madre de Ja
muestra (mL)
w = peso de Centella asiatica en Polvo usado para
preparar la Solución madre de Ja muestra
(mg)
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de Ja
muestra
USP 37
F = factores de conversión para analitos: 1,00 para
asiaticósido; 1,01 7 para la suma de
madecasósido y asiaticósido B; 0,526 para la
suma de ácido madecásico y ácido
terminólico, y 0,509 para ácido asiático
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de los
diferentes derivados triterpénicos: No menos de 2,0%
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1Q3 ufc/g. , Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: De color gris verdoso a ma-
rrón verdoso; olor leve; sabor ligeramente amar~o a
dulce. Al microscopio, facciones de células epidermicas
de las hojas con cutícula estriada irregular, presentan es-
tomas anisocíticos, algunos paracíticos y en raras ocasio-
nes anomocíticos; las células epidérmicas de las hojas jó-
venes presentan tricomas no glandulares unicelulares y
en ocasiones multicelulares; canales secretores compues-
tos de 5-7 células secretoras; células parenquimáticas, al-
gunas presentan prismas o rosetas de oxalato de calcio;
haces de fibras septadas estrechas en el tallo; vasos espi-
ralados; fragmentos de los frutos, capas de células anchas
dispuestas en forma de parqué, vasos anillados, células
parenquimáticas que contienen gránulos de almidón sim-
P,les o compuestos.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Centella asia-
tica en Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de
12,0% de su peso .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 12%, determinado en 1,0 g de Centella asia-
tica en Polvo , 120º, y examinar bajo luz visible .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 3,5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo. La etiqueta indica que
el artículo está exento de los requisitos de las Adverten-
cias Generales con respecto a la declaración de embarazo
y lactancia (sección 10.40.50, Etiquetado de Productos Bo-
tánicos).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Asiaticósido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Extracto en Polvo de Centella asiatica
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Centella asiatica se prepara a partir
de Centella asiatica mediante extracción con alcohol, me-
tano!, acetona o una mezcla de estos disolventes. La rela-
Suplementos Dietéticos /Centella 5893
ción entre el material vegetal y el extracto está entre 65:1
y 30:1. Contiene no menos de 90,0% y no más de
110,0% de la cantidad declarada de derivados triterpéni-
cos; la cantidad declarada de derivados triterpénicos es no
más de 40%, calculado con respecto a la materia seca
como la suma de madecasósido, asiaticósido B, asiaticó-
sido, ácido madecásico, ácido terminólico y ácido asiático.
Puede contener sustancias agregadas adecuadas como
portadores.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/ml de ER Asiaticósido
USP en metanol
Solución estándar B: 1O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP en metanol. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1 O minutos, cen-
trifugar, y usar el sobrenadante.
en Polvo de Centella asiatica equivalente a aproximada-
mente 5 mg de derivados triterpénicos a un tubo de
centrífuga. Agregar 5 mL de metanol, someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC) o con un tamaño promedio de part1cula de 5
µm (placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL (placas para TLC) o 4 µL
(placas para HPTLC)
Fase móvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua (14:6: 1)
Solución reveladora: Una solución de ácido sulfúrico al
10% en metanol. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
fos cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 3 minutos a
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda vioíeta en el tercio
inferior de la placa debida a asiaticósido, que corres-
ponde en color y valor RF a la de la Solucion estándar A;
una banda violeta debida a madecasósido a un valor RF
menor que el de asiaticósido; y dos bandas violetas adi-
cionales en el tercio superior de la placa debidas a
ácido asiático y ácido madecásico. Las bandas detecta-
das en la Solución muestra corresponden en posición y
color a las bandas de la Solución estándar B. Se pueden
observar otras bandas menores en la Solución muestra y
la Solución estándar B.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC: El cromato-
grama de la Solución muestra de la prueba de Contenido
de Derivados Triterpénicos presenta un pico al tiempo de
retención correspondiente al de asiaticósido en la Solu-
ción estándar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pénicos en la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solución
muestra presenta picos adicionales correspondientes a
madecasósido y asiaticósido B (estos dos picos pueden
coeluir), ácido madecásico, ácido terminólico y ácido
asiático.
5894 Centella / Suplementos Dietéticos USP 37

COMPOSICIÓN Tiempo de Retención

• CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPÉNICOS Anallto Relativo Anroximado
Solución A: Diluir 3 mL de ácido fosfórico con agua Asiaticósido 1 00
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar. Ácido madecásico 2 40
Solución B: Acetonitrilo
Ácido terminólico 2 44
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Ácido asiático 3 12
Tiempo Solución A Solución B Calcular por separado los porcentajes de la suma de
lmin) (%) (%) madecasósido y asiaticósido B (estos dos picos pueden
o 78 22 coeluir), asiaticósido, la suma de ácido madecásico y
6S 4S SS ácido terminólico, y ácido asiático en la porción de
66 s 9S Extracto en Polvo de Centella asiatica tomada:
7S s 9S Resultado = (ru/rs) x (C 5/Cu) x F x 100
76 78 22
8S 78 22 ru = respuestas de los picos de los derivados
triterpénicos de la Solución muestra
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Asiaticósido rs = respuesta del pico de asiaticósido de la
USP en metanol Solución estándar A
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por- Cs = concentración de ER Asiaticósido USP en la
ción de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en Solución estándar A (mg/mL)
metanol para obtener una solución con una concentra- Cu = concentración de Extracto en Polvo de
ción de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in- Centella asiatica en la Solución muestra
yección, pasar a través de un filtro de membrana con (mg/mL)
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando F = factores de conversión para analitos: 1,00 para
los primeros mL del filtrado. asiaticósido; 1,01 7 para la suma de
Solución muestra: Someter a ultrasonido una porción madecasósido y asiaticósido B; 0,526 para la
de Extracto en Polvo de Centella asiatica en metanol suma de ácido madecásico y ácido
para obtener una solución con una concentración de terminólico, y 0,509 para ácido asiático
aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la inyección, Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de los
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño diferentes derivados triterpénicos: No menos de 90,0%
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros y no más de 110,0% de la cantidad declarada de deri-
mL del filtrado. vados triterpénicos; la cantidad declarada de derivados
Sistema cromatográfico triterpénicos es no más de 40%, calculado con respecto
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.) a la materia seca.
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm CONTAMINANTES
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm • METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
Volumen de inyección: 1O µL lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
Aptitud del sistema requisitos.
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Requisitos de aptitud tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma El recuento total combinado de hongos filamentosos y
de la Solución estándar B es similar al cromatograma levaduras no excede de 1 cp ufc/g.
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en • PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
Polvo de Centella asiatica USP usado. SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
asiaticósido, Solución estándar A sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de
ácido madecásico y ácido terminólico, Solución están- PRUEBAS ESPECÍFICAS
dar B • PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de- Polvo de Centella asiatica a 105º durante 2 horas: pierde
terminada a partir del pico de asiaticósido en inyec- no más de 5% de su peso.
ciones repetidas, Solución estándar A • OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
Análisis prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y (565).
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
REQUISITOS ADICIONALES
lución estándar By la Solución muestra se mantienen • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, la
temperatura ambiente controlada.
Solución estándar By el cromatograma de referencia
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cente-
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
lla asiatica USP usado, identificar los tiempos de reten-
planta de donde se obtuvo el artículo. Cumple con otros
ción de los picos correspondientes a los diferentes de- requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
rivados triterpénicos. Los tiempos de retención
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
relativos aproximados para los diferentes derivados tri- ER Asiaticósido USP
terpénicos se proporcionan en la siguiente tabla.
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Tiempo de Retención
Ana lito Relativo Aproximado
Madecasósido o 71
Asiaticósido B o 72
USP 37
Triterpenos de Centella asiatica
DEFINICIÓN
Los Triterpenos de Centella asiatica son una fracción enrique-
cida en derivados triterpénicos de Centella asiatica. Se pre-
para a partir de Extracto de Centella asiatica usando disol-
ventes adecuados u otros medios. Contiene no menos de
90,0% de derivados triterpénicos, calculado con respecto
a la materia anhidra, como la suma de dos o más de los
siguientes: madecasósido, asiaticósido B, asiaticósido,
ácido madecásico, ácido terminólico y ácido asiático.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticósido
USP en metano!
Solución estándar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP en metanol. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1 O minutos cen-
trifugar, y usar el sobrenadante. ' 85
Solución muestra: Transferir una cantidad de Triterpe-
nos de Centella asiatica equivalente a aproximadamente
5 mg de derivados triterpénicos a un tubo de centrí-
fuga. Agregar 5 mL de metanol, someter a ultrasonido
durante 1O minutos, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC) o con un tamaño promedio de part1cula de 5
µm (placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL (placas para TLC) o 4 µL
(placas para HPTLC)
Fase móvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua (14:6:1)
Solución reveladora: Una solución de ácido sulfúrico al
10% en metanol. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 3 minutos a
120º, y observar bajo luz visible.
Cr!!erios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta una banda de color violeta en el
tercio inferior de la placa debida a asiaticósido, que co-
rresponde en color y valor RF a la de la Solución están-
dar A. La Solución muestra presenta bandas adicionales
que corresponden a algunos o a todos los derivados
triterpénicos siguientes: una banda violeta debida a ma-
decasósido a un valor RF menor que el de asiaticósido,
u~a ba~~a viol~!ª. en el tercio supe~ior de la placa c:Je-
b1da a ac1do as1at1co y una banda violeta debida a acido
madecásico a un valor RF menor que el de ácido asiá-
tico. Las bandas detectadas en la Solución muestra co-
rresponden en posición y color a bandas de la Solución
estandar B. Se pueden observar otras bandas menores
en la Solución muestra Y, la Solución estándar B.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromato-
grama de la Solución muestra de la prueba de Contenido
de Derivados Triterpénicos presenta un pico al tiempo de
retención correspondiente al de asiaticósido de la Solu-
ción estándar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pénicos en la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
Suplementos Dietéticos /Centella 5895
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solución
muestra presenta picos correspondientes a algunos o a
todos los siguientes: madecasósido y asiaticósido B (estos
dos picos puede coeluir), ácido madecásico ácido termi-
nólico y ácido asiático. '
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPÉNICOS
Solución A: Diluir 3 mL de ácido fosfórico con agua
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (O/o\ (%)
o 78 22
65 45 55
66 5 95
75 5 95
76 78 22
78 22
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Asiaticósido
USP en metanol
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en
metano! para obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Aproximadamente 1,0 mg/mL de
Triterpenos de Centella asiatica en metano!; someter a
ultrasonid,o si fuera _necesario. Antes de la inyección, pa-
sar a traves de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asiaticósido, Solución estándar A
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de
ácido madecásico y ácido terminólico, Solución están-
dar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de asiaticósido en inyec-
ciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A
la Solución estándar By el cromatograma de refere~­
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Centella asiatica USP usado, identificar los tiempos de
retención de los picos correspondientes a los diferen-
tes derivados triterpénicos. Los tiempos de retención
relativos aproximados para los diferentes derivados
triterpénicos se proporcionan en la siguiente tabla.
5896 Centella / Suplementos Dietéticos
Tiempo de Retención
Ana lito Relativo Aoroximado
Madecasósido o 71
Asiaticósido B o 72
Asiaticósido 1 00
Ácido madecásico 2 40
Ácido terminólico 2 44
Ácido asiático 312
Calcular por separado los porcentajes de los derivados
triterpénicos en la porción de Triterpenos de Centella
asiatica tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = respuestas de los picos de los derivados
triterpénicos de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de asiaticósido de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Asiaticósido USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Triterpenos de Centella
asiatica en la Solución muestra (mg/mL)
F = factores de conversión para analitos: 1,00 para
asiaticósido; 1,01 7 para madecasósido;
1,01 7 para asiaticósido B; 0,526 ácido
madecásico; 0,526 para ácido terminólico y
0,509 para ácido asiático
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de los
diferentes derivados triterpénicos: No menos de 90,0%
con respecto a la materia anhidra.
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método,111 (231):, No más de 20 ppm,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 3 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 Q2 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): No más de 5%
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Asiaticósido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Chancapiedra
DCI: Phyllanthus amarus
DEFINICIÓN
La Chancapiedra consiste en las partes aéreas secas de
Chancapiedra Schumach. (Fam. Euphorbiaceae). Contiene
no menos de 0,25% de lignanos, calculado como la suma
de filantina e hipofilantina con respecto a la materia seca.
USP 37
IDENTIFICACIÓN
• A. La Chancapiedra cumple con los requisitos de Pruebas
Específicas en Característicps Botánicas. ,
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Filantina USP
en metanol
Solución estándar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP en metanol. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 1 O minutos, centri-
fugar y usar el sobrenadante.
Solucion muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 0,5 g de Chancapiedra reducida a polvo fino, en
5 mL de metanol durante 1O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 1 0-15 µm (placas
para TLC) o con un tamaño promedio de partícula de 5
µm (placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 1O µL (placas para TLC) o 4 µL
(placas para HPTLC)
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Solución reveladora: Una solución de ácido sulfúrico al
10% en metanol. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 3 minutos a
120º y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda de color azul en el
tercio inferior de la placa debida a filantina, que corres-
ponde en color y RF a la del cromatograma de la Solu-
ción estándar A; una banda de color violeta debida a
hipofilantina a un RF superior que el de filantina; una
banda azul a un RF superior que el de hipofilantina; y
una banda violeta adicional en el tercio superior de la
placa. Las bandas detectadas en el cromatograma de la
Solución muestra corresponden en posición y color a las
bandas en el cromatograma de la Solución estándar B.
Se pueden observar otras bandas menores en los cro-
matogramas de la Solución muestra y la Solución están-
dar B.
• C. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra obte-
nido en la prueba de Contenido de Lignanos presenta un
pico al tiempo de retención correspondiente al de filan-
tina en el cromatograma de la Solución estándar A. Identi-
ficar otros picos de lignano en el cromatograma de la
Solución muestra por comparación con el cromatograma
de la Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Chanca-
piedra USP usado. El cromatograma de la Solución mues-
tra presenta un pico adicional correspondiente a
hipofilantina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LIGNANOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar, filtrar y
desgasificar.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución A (4:6)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Filantina USP
en metanol
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP en
metanol para obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 5,0 mg/mL. Antes de la in-
USP 37
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 ,um o menor, desechando
los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Chancapiedra, reducida a polvo fino y pesada con
exactitud, a un matraz de 250 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 50 ml de metano!, so-
meter a reflujo en un baño de agua durante aproxima-
damente 20 minutos, dejar que sedimente y decantar el
sobrenadante. Repetir hasta que el último extracto se
torne incoloro. Combinar los extractos, concentrar al
vacío y ajustar el volumen hasta 100 ml con metano!.
Antes de la inyección, pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o me-
nor, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatograffa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 230 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP usado.
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de fi-
lantina e hipofilantina, Solución estándar B
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
filantina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de filantina en inyecciones
repetidas, Solución estandar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A, de
la Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Chan-
capiedra USP usado, identificar los tiempos de reten-
cion correspondientes a filantina e hipofilantina.
Calcular por separado los porcentajes de filantina e hi-
pofilantina en la porción de Chancapiedra tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/VV) x Fx 100
ru = respuesta del pico del analito de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de filantina de la Solución
estándar A
C1 = concentración de ER Filantina USP en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen de la Solución muestra (ml)
W = peso de Chancapiedra tomado para preparar
la Solución muestra (mg)
F = factores de conversión para los analitos:
1,00 para filantina; 0,75 para hipofilantina
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de fi-
lantina e hipofilantina: Se encuentra no menos de
0,25% con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para el
Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
• METALES PESADOS, Método fil (231 ): No más de 20 ppm
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
Suplementos Dietéticos / Chancapiedra 5897
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Hierba anual erguida, de 10-60 cm de
altura; tallo delgado; las hojas en el tallo principal se
reducen a escamas; ramitas secundarias, cortas, que se
extienden en ángulos rectos, cada una con 15-30 ho-
jas; las hojas presentan una superficie superior de color
verde con nervadura central elevada y una superficie
inferior de color verde pálido con nervadura central
prominente y nervaduras secundarias, simples, alternas,
de 3-11 mm de largo, de 1,5-6 mm de ancho, pecíolo
corto, elíptico-oblongo a obovado, ápice obtuso y a
menudo con extremo puntiagudo pequeño, de margen
entero, base a menudo ligeramente asimétrica; flores di-
minutas, amarillentas, verdosas o blancuzcas, unisexua-
les, axilares en ramitas secundarias, 1-2 y en ocasiones
3 por axila, los primeros 1-2 entrenudos de cada ramita
poseen 1-2 flores masculinas, el resto tienen flores mas-
culinas y femeninas; los frutos son cápsulas esféricas
aplanadas, de color pajizo, triloculares, de aproximada-
mente 2 mm de diámetro; a menudo con 2 semillas
por lóculo, de color marrón claro, de aproximadamente
O, 9 mm de largo, triangulares con 6-7 nervaduras lon-
gitudinales y muchas estrías transversales en la parte
posterior. El artículo farmacopeico consta de masas de
color verde a verde amarillento compuestas en su ma-
yoría por hojas, ramitas y fragmentos de tallos; tiene
sabor amargo.
Histología
Sección transversal de los tallos: Capa epidérmica;
de aproximadamente 15 capas de células de la cor-
teza, pared gruesa, contienen cloroplastos, algunos
contienen cristales de oxalato de calcio, las 7-1 O capas
internas constan de células de paredes gruesas in-
terrumpidas en intervalos irregulares por células paren-
quimáticas; una capa de células parenquimáticas con
gránulos de almidon; floema de 7-1 O capas de células
de paredes delgadas; grupos de vasos de xilema; mé-
dula, multicapa de células de paredes delgadas, unas
pocas contienen cristales de oxalato de calcio.
Sección transversal de ramitas: La sección transversal
es redonda; de 6-8 capas de células de corteza de
paredes gruesas, en su mayoría contienen cloroplastos
y unos pocos cristales de oxalato de calcio, después de
3-4 capas se presenta una capa de células que contie-
nen granos de almidón, seguidas por 2-3 capas de
células fibrosas interrumpidas por parénquima cortical;
floema de 5-7 capas de células de paredes delgadas;
grupos de vasos de xilema; médula, multicapa de célu-
las de paredes delgadas con cloroplastos.
Sección transversal de las hojas: Epidermis superior e
inferior; una sola capa de células en empalizada que
ocupa casi la mitad del espacio entre cada epidermis;
de 3-5 capas de células parenquimáticas, unas pocas
contienen cristales de oxalato de calcio; también se
, presentan haces vasculares.
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Chancapiedra
reducida a polvo fino a 1 05º durante 2 horas: pierde no
má~ de 12,0% de su pes9 .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%, determinado en 1,0 g de Chancapiedra
red,ucida a polvo fino. , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 5,0%, determinado en 1,0 g de
Chªncapiedra reducida a ,polvo fino .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(561 ): No más de 2, 0%
5898 Chancapiedra / Suplementos Dietéticos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la ¡;¡!anta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Filantina USP
ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP
Chancapiedra en Polvo
DEFINICIÓN
La Chancapiedra en Polvo es Chancapiedra reducida a polvo
o a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,25% de
lignanos, calculado como la suma de filantina e hipofilan-
tina, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Chancapiedra en Polvo cumple con los requisitos
de Pruebas Específicas, Características Botánicas.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Filantina USP
en metano!
Solución estándar B: 1O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP en metano!. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 1 O minutos, centri-
fugar y usar el sobrenadante.
Solucion muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 0,5 g de Chancapiedra en Polvo en 5 mL de me-
tano! durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC) o con un tamaño promedio de part1cula de 5
µm (placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 1O µL (placas para TLC) o 4 µL
(placas para HPTLC)
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Solución reveladora: Una solución de ácido sulfúrico al
10% en metano!. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
fos cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con
Solución reveladora, calentar durante 3 minutos a
120º y observar bajo luz visible.
Cr!!erios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta una banda de color azul en el
t~rcio inferior de la placa debida a filantina, correspon-
diente en color y valor RF a la del cromatograma de la
Solu_ción estándar A; una banda violeta debida a hipofi-
lantina a un valor RF mayor que el de filantina; una
b~nd~ de. color azul a un val~r .RF mayor que el de
h1pofdantina; y una banda ad1c1onal de color violeta en
el tercio superior de la placa. Las bandas detectadas en
el cromatograma de la Solución muestra corresponden
en posición y color a las bandas en el cromatograma de
la Solución estándar B. Se pueden observar otras bandas
menores en los cromatogramas de la Solución muestra y
la Solución estándar B.
• C. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra obte-
nido en la prueba de Contenido de Lignanos presenta un
pico a un tiempo de retención correspondiente al de fi-
USP 37
lantina en el cromatograma de la Solución estándar A.
Identificar otros picos de lignano en el cromatograma de
la Solución muestra por comparación con el cromato-
grama de la Solución estándar B y el cromatograma de
referencia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Chancapiedra USP usado. El cromatograma de la Solución
muestra presenta un pico adicional correspondiente a
hipofilantina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LIGNANOS
S~lución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
s!º en .9qo mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL mezclar filtrar y
desgasificar. ' '
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución A (4:6)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Filantina USP
en metano!
S~l~ción estándar B: Someter a ultrasonido una por-
cion de ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP en
metano! para obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tar:naño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solución mu~stra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Chancap1edra en Polvo, pesados con exactitud a un
matraz de 250 mL equipado con un condensador' de
reflujo. Agregar 50 mL de metano!, someter a reflujo en
un baño de agua durante aproximadamente 20 minu-
tos, dejar que sedimente y decantar el sobrenadante.
Repetir hasta que el último extracto se torne incoloro.
Combinar los extractos, concentrar al vacío y a¡·ustar el
volumen con metano! hasta 100 ml. Antes de a inyec-
ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 230 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1OµL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP usado.
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de fi-
lantina e hipofilantina, Solución estándar B
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
filantina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminado a partir del pico de filantina en inyecciones
repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A de
la Solución estándar B y el cromatograma de refere~cia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Chan-
capiedra USP usado, identificar los tiempos de reten-
cion de los picos correspondientes a filantina e
hipofilantina.
Calcular por separado los porcentajes de filantina e hi-
pofilantina en la porción de Chancapiedra en Polvo
tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
USP 37
ru = respuesta del pico del analito de la Solución
muestra
r5 = respuesta del pico de filantina de la Solución
estándar A
Cs = concentración de ER Filantina USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V =volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de Chancapiedra en Polvo tomada para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factores de conversión para los analitos:
1,00 para filantina; 0,75 para hipofilantina
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de fi-
lantina e hipofilantina: Se encuentra no menos de
0,25% con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1Q3 ufc/g. , Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro;
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS Polvo de color verdoso a ma-
rrón verdoso; sabor amargo. Al microscopio, se presentan
fragmentos de células epidérmicas de las hojas con pare-
des onduladas, que presentan estomas anisocíticos y pa-
racíticos; células parenquimáticas, algunas presentan gru-
pos de cristales de oxalato de calcio; fibras estrechas del
tallo; vasos punteados del tallo; fragmentos del epicarpio
de los frutos que presentan estomas anomocíticos.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Chanca piedra
en Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de
12,.Po/o de su peso. , .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%, determinado en 1,0 g de Chancapiedra
en Polvo , tándar A. La Solución estándar B presenta zonas de color
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561 ): No más de 5,0%, determinado en 1,0 g de
Chancapiedra en Polvo
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la r;ilanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Filantina USP
ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP
Cianocobalamina-ver Cianocoba/amina en
Monografías Generales
Cimicífuga Racemosa
DEFINICIÓN
La Cimicífuga Racemosa consiste en el rizoma y las raíces
secos de Actaea racemosa L. [Cimicifuga racemosa (L.)
Nutt.] (Ranunculaceae). Se cosecha durante el verano.
Suplementos Dietéticos / Cimicífuga 5899
Contiene no menos de 0,4% de glicósidos triterpénicos,
calculado como 23-epi-26-desoxiacteína 1 (C1 7 H56 010) con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Acteína USP, de
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP y de ácido isoferúlico
en metanol
Solución muestra: Transferir 5 g de Cimicífuga Race-
mosa en polvo a un tubo de centrífuga con tapa de
rosca, agregar 1O mL de una mezcla de alcohol y agua
(7:3), y calentar en un baño de vapor durante 1O minu-
tos. Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butílico, ácido acético glacial y agua (5:1 :4).
Solución reveladora: Metanol, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85:10:5:0,5) LNOTA-
desechar si aparece color.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV
a 365 nm. El cromatograma de la Solución muestra pre-
senta zonas principales similares en posición y color a
las zonas principales de la Solución estándar A. En el
tercio superior de la placa, la Solución muestra presenta
una zona de color azul fluorescente al nivel de la zona
debida a ácido isoferúlico de la Solución estándar B. Ro-
ciar la placa con la Solución reveladora, calentar a 100º
durante 5 minutos y observar bajo luz diurna. La Solu-
ción muestra presenta zonas principales similares en po-
sición y color a las zonas principales de la Solución es-
violeta rojizo debidas a acteína y 23-epi-26-desoxiac-
teína. La Solución muestra presenta diversas manchas de
color marrón verdoso en el tercio inferior de la placa y
diversas zonas de color violeta por encima; dos de estas
zonas de color violeta se presentan en valores RF simila-
res a aquellos debidos a acteína y a 23-epi-26-desoxiac-
teína en la Solución estándar B.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas
para HPTLC)
Solución estándar A: 0,5 mL de la Solución estándar A
preparada en la prueba de Identificación A, diluidos con
metanol hasta 2 ml.
Solución estándar B: 1,0 mL de la Solución estándar B
preparada en la prueba de Identificación A, diluido con
metanol hasta 5 ml.
Solución muestra: Transferir 0,5 g de Cimicífuga Race-
mosa en polvo a un tubo con tapa de rosca, agregar
5 mL de metanol, someter a ultrasonido durante 1O mi-
nutos y filtrar en un matraz volumétrico de 1O mL. La-
var el residuo en el papel de filtro cuatro veces, usando
1 mL de metanol para cada lavado, agregar los lavados
al matraz volumétrico y diluir con metanol a volumen.
Volumen de aplicación: 2 µLen una banda de 8 mm
Fase móvil: Tolueno, formato de etilo y ácido fórmico
(5:3:2)
1 En ocasiones se hace referencia a la 23-epi-26-desoxiacteína como 27-deso-
xiacteína.
5900 Cimicífuga /Suplementos Dietéticos USP 37

Solución reveladora: Proceder según se indica en la Tabla 1 (Continuación)

prueba de Identificación A. Tiempo Agua Solución A Solución B
Análisis tmin) (O/o) íº/o) (%)
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra 65 5 o 95
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la 70 5 o 95
fase móvil haya recorrido aproximadamente dos ter- 85 o 80 20
cios de la longitud de la placa y secar la placa con
ayuda de una corriente de aire. Rociar la placa con Sistema cromato9ráfico
Solución reveladora, calentar a 100º durante 5 minu- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
tos y observar bajo luz diurna. Modo: HPLC
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta Detector: Evaporativo de dispersión de luz
zonas principales similares en posición y color a las zo- [NOTA-Ajustar el detector según las instrucciones del
nas principales de la Solución estándar A. La Solución fabricante para alcanzar una relación señal-ruido de no
estándar B presenta zonas de color violeta rojizo debidas menos de 1 Opara la Solución estándar de 23-epi-
a acteína y 23-epi-26-desoxiacteína a valores RF de apro- 26-desoxiactema de 12,5 µg/ml.]
ximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente. La Solución Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
muestra presenta zonas similares en color y valores RF a Temperatura de la columna: 35º
aquéllas debidas a acteína y 23-epi-26-desoxiacteína de Velocidad de flujo: 1,6 mL/min
la Solución estándar B. Volumen de inyección: 20 µL
• C. La Solución muestra presenta picos para cimirracemó- Aptitud del sistema
sido A, 26-desoxicimicifugósido, (26S)-acteína, 23-epi- Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
26-desoxiacteína, cimigenol-arabinósido y cimigenol-xi- tándar y Solución estándar de 23-epi-26-desoxiacteína
lósido a tiempos de retención correspondientes a estos de 100 µg/mL
compuestos en la Solución estándar, según se obtienen Requisitos de aptitud
en la prueba de Contenido de Glicósidos Triterpénicos. El Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
cociente entre las áreas de los picos de cimigenol-arabi- de la Solución estándar es similar al Cromatograma de
nósido y cimigenol-xilósido es no menos de 0,4 (diferen- Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
cia con Cimicifuga foetida). Polvo de C1micífuga Racemosa USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de
COMPOSICIÓN (265)-acteína y 23-epi-26-desoxiacteína, Solución de
• CONTENIDO DE GLICÓSIDOS TRITERPÉNICOS aptitud del sistema
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Ex- Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
tracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en meta- 23-epi-26-desoxiacteína, Solución estándar de 23-epi-
no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metano! 26-desoxiacteína de 100 µg/mL
hasta obtener una solución con una concentración co- Desviación estándar relativa: No más de 2,0% del
nocida de 30 mg/ml. Pasar a través de un filtro de logaritmo de la respuesta del área del pico de 23-epi-
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o 26-desoxiacteína en inyecciones repetidas, Solución
menor. estándar de 23-epi-26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Soluciones estándar de 23-epi-26-desoxiacteína: Di- Análisis
solver ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en metano! agi- Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en tándar, Soluciones estándar de 2 3-epi-26-desoxiacteína y
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so- Solución muestra
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100, Usando el cromatograma de la Solución estándar y el
50, 25 y 12,5 µg/ml. Pasar a través de un filtro de Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o ER Extracto en Polvo de Cimicífu9a Racemosa USP,
menor. identificar los tiempos de retencion de los picos co-
Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac- rrespondientes a los glicósidos triterpénicos. Los tiem-
teína USP y de ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en pos de retención relativos aproximados para los glicó-
metanol sidos triterpénicos se proveen en la Tabla 2.
Solución muestra: Pesar con exactitud aproximada-
mente 750 mg de material vegetal molido y colocar en Tabla 2
un tubo de centrífuga de 20 mL con tapa de teflón.
Pipetear y transferir 15 mL de metanol, someter a ultra- Tiempo de
sonido durante 30 minutos, centrifugar y transferir el Retención
sobrenadante a un matraz de evaporación. Repetir la Comouesto Relativo
extracción dos veces. Evaporar los extractos combina- Cimicifuaósido H-1 o 61
dos al vacío a 45º-50º. Disolver el residuo en metano! y Cimirracemósido A o 78
transferir cuantitativamente a un matraz volumétrico de f26Rl-Acteína o 94
1 O ml. Diluir con metanol a volumen y pasar a través 26-Desoxicimicifuaósido o 96
de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
0,45 µm o m,enor. f26Sl-Acteína o 98
Solución A: Acido trifluoroacético al 0,05% en agua 23-eoi-26-Desoxiacteína 1 00
Solución B: Acetonitrilo Acetil-shenamanol-xilósido 1 03
Fase móvil: Ver la Tabla 7. Cimiaenol-arabinósido 1 08
Cimiaenol-xilósido fcimicifuaósido\ 1 13
Tabla 1 26-Desoxiacteína 1 22
Tiempo Agua Solución A Solución B 25-Acetil-cimiaenol-arabinósido 1 60
tmin) (%) (O/o)
'ºlo' (245l-25-Acetil-ciminenol-xilósido 1 64
o o 80 20 25-0-Metil-ciminenol-arabinósido 1 90
8 o 80 20 25-0-Metil-ciminenol-xilósido 1 93
15 68 o 32
o Graficar los logaritmos de las áreas de los picos en
55 36 64
función de los logaritmos de las concentraciones, en
USP 37
~tg/mL, de las Soluciones estándar de 2 3-epi-26-deso-
xiacteína y determinar la línea de regresión usando un
análisis de cuadrados mínimos. El coeficiente de co-
rrelación para la línea de regresión es no menos de
0,995. A partir de las gráficas así obtenidas, determi-
nar la concentración, C, en µg/mL, del analito perti-
nente en la Solución muestra. Calcular por separado
los porcentajes de cimicifugósido
H-1, cimirracemósido A, (26R)-acteína, 26-desoxicimi-
cifugósido, (26S)-acteína, 23-epi-26-desoxiacteína,
acetil-shengmanol-xilósido, cimigenol-arabinósido, ci-
migenol-xilósido (cimicifugósido), 26-desoxiacteína,
25-acetil-cimigenol-arabinósido, (24S)-25-acetil-cimi-
genol-xilósido, 25-0-metil-cimigenol-arabinósido y
25-0-metil-cimigenol-xilósido como 23-epi-26-deso-
xiacteína (Ci1Hs6Ü10) en la porción de Cimicífuga Ra-
cemosa tomada:
Resultado == (V X C)!(F X V\!) X 100
V == volumen final de la Solución muestra (mL)
C == concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (µg/mL)
F ==factor de conversión (de mg a µg)
1000 µg/mg
W == peso de Cimicífuga Racemosa tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje de glicósidos triterpénicos en la
porción de Cimicífuga Racemosa tomada sumando
todos los porcentajes calculados para los analitos
individuales.
Criterios de aceptación: No menos de 0,4% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS (231 ): No más de 1 ppm o nal de la salud si tuviera un trastorno hepático o desarro-
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 oi ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El rizoma de la Cimicífuga Racemosa es
de color marrón oscuro, longitudinalmente acanalado,
áspero, muy nudoso y algo rizado e irregular. Tiene
15 cm de largo y hasta 2,5 cm de espesor. La superficie
superior está cubierta con numerosas cicatrices redon-
das de los tallos anteriores; lateralmente, está clara-
mente rizada y la superficie inferior está cubierta por
raíces delgadas, longitudinalmente acanaladas de color
marrón oscuro que se quiebran con facilidad. La frac-
tura es córnea y fibrosa. El corte transversal presenta
una corteza externa delgada que rodea un anillo de nu-
merosas cuñas pálidas y estrechas de tejido vascular al-
ternando con radios medulares oscuros y una gran mé-
dula central. Las raíces de Cimicífuga Racemosa son de
color marrón oscuro, con un diámetro de entre 1 y
3 mm, quebradizas, casi cilíndricas u obtusamente cua-
drangulares y con arrugas longitudinales. La fractura es
corta. El corte transversal presenta una línea cambia!
que separa una corteza exterior amplia de una región
central compuesta por tres a seis cuñas de tejido de
xilema lignificado unido por sus ápices y separados por
amplios radios medulares no lignificados.
Microscópicas: Vistas desde la superficie, las células epi-
dérmicas suberosas son tabulares con paredes modera-
SuplPmentos Dietéticos / Cimicífuga 5901
damente engrosadas. La corteza parenquimática está re-
llena de almidón. Las cuñas de xilema son lignificadas y
se componen de numerosos vasos pequeños con pun-
tuaciones areoladas o paredes engrosadas de manera
reticular, fibras de paredes delgadas y parénquima xile-
mático. El parénquima de la médula no está lignificado.
Los radios medulares están rellenos de gránulos de al-
midón, que son esféricos o poligonales y en su mayoría
simples o con dos o tres compuestos, pero que pueden
ser de hasta seis compuestos. Los gránulos individuales
de almidón tienen un diámetro de entre 3 y 15 µm,
cada uno con un hilo casi céntrico en forma de
hendidura .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0% de materia orgánica extraña y
no más de 5,0% de bases de tallos
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO,Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 8,0%, usando una
n;iezcla de alcohol y agua (1 :1) en lugar de alcohol.
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 1 05° durante 2 ho-
ras~ pierde no más de 12,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No,más de 10,0% , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en un envase
bien cerrado y resistente a la luz. Proteger de la hume-
dad. Almacenar a temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo. Las formas farmacéuti-
cas preparadas con este artículo deben llevar la siguiente
leyenda: Descontinuar el uso y consultar con un profesio-
llara síntomas de un problema hepático, tales como do-
lor abdominal, orina oscura o ictericia.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acteína USP
ER Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP
Cimicífuga Racemosa en Polvo
DEFINICIÓN
La Cimicífuga Racemosa en Polvo es Cimicífuga Racemosa
reducida a polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos
de 0,4% de glicósidos triterpénicos, calculado como
23-epi-26-desoxiacteína (C37Hs6Ü10) con respecto a la ma-
teria seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 1 00 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en metano!
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Acteína USP, de
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP y de ácido isoferúlico
en metano!
Solución muestra: Transferir 5 g de Cimicífuga Race-
mosa en Polvo a un tubo de centrífuga con tapa de
rosca, agregar 1O mL de una mezcla de alcohol y agua
(7:3), y calentar en un baño de vapor durante 1 O minu-
tos. Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 1 0-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butílico, ácido acético glacial y agua (5:1 :4).
5902 Cimicífuga / Suplementos Dietéticos USP 37

Solución reveladora: Metano!, ácido acético glacial nen en la prueba de Contenido de Glicósidos Triterpénicos.
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85:10:5:0,5). [NoTÁ- El. c<?~iente E'.nt~e las ár~a,s de los picos de cimigenol-ara-
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro· binos1do y c1m1genol-xdosido es no menos de 0,4 (dife-
desechar si aparece color.] ' rencia con Cimicifuga foetida).
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By COMPOSICIÓN
Solución muestra • CONTENIDO DE GucÓSIDOS TRITERPÉNICOS
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Ex-
fase móvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y tracto ~n Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en meta-
secar la placa con ayuda de una corriente de aire. no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metano!
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV hasta obtener una solución con una concentración co-
a 365 nm. El cromatograma de la Solución muestra pre- nocida de 30 mg/ml. Pasar a través de un filtro de
senta zonas principales similares en posición y color a membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
las zonas principales de la Solución estándar A. En el menor.
tercio superior de la placa, la Solución muestra presenta Soluciones estándar de 23-epi-26-desoxiacteína: Di-
una zona de color azul fluorescente al nivel de la zona solver ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en metano! agi-
debida a ácido isoferúlico de la Solución estándar B. Ro- t~ndc;i durante l. min~to. Diluir cuantitativamente, y en
ciar la placa con la Solución reveladora, calentar a 100º ddl!c1ones sucesivas s1 fuera necesario, para obtener so-
durante 5 minutos y observar bajo luz diurna. La Solu- luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
c!ó.n, muestra presenta zonas. pr.incipales similares ,en po- 50, 25 y 12,5 µg/ml. Pasar a través de un filtro de
s1c1on y color a las zonas principales de la Solucion es- membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
tándar A. La Solución estándar B presenta zonas de color menor.
violeta rojizo debidas a acteína y 23-epi-26-desoxiac- Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac-
teína. La Solución muestra presenta diversas manchas de teína USP y de ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en
color marrón verdoso en el tercio inferior de la placa y metanol
diversas zonas de color violeta por encima; dos de estas Solución muestra: Pesar con exactitud aproximada-
zonas de color violeta se presentan a valores RF similares mente 750 mg de Cimicífuga Racemosa en Polvo y co-
a aquellos debidos a acte1na y a 23-epi-26-desoxiacteína locar en un tubo de centrífuga de 20 mL con tapa de
en la Solución estándar B. teflón. Pipetear y transferir 15 mL de metanol, someter
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA ª. ultrasonido durante 30 minutos, centrifugar y transfe-
DELGADA rir el sobr~,nadante a un matraz de evaporación. Repetir
Solución estándar A: 0,5 mL de la Solución estándar A la extracc1on dos veces. Evaporar los extractos combina-
preparada en la prueba de Identificación A, diluidos con dos al "'.acío a ~5º-:-50º. Disolver el residuo en ~etanol y
metano! hasta 2 ml. transferir cuant1tat1vamente a un matraz volumetrico de
Solución estándar B: 1,O mL de la Solución estándar B 1O ml. Diluir con metanol a volumen y pasar a través
preparada en la prueba de Identificación A, diluido con de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
metano! hasta 5 ml. 0,45 µm o m,enor.
Solución muestra: Transferir 0,5 g de Cimicífuga Race- Solución A: Acido trifluoroacético al 0,05% en agua
mosa en Polvo a un tubo con tapa de rosca, agregar Solución B: Acetonitrilo
5 mL de metano!, someter a ultrasonido durante 1O mi- Fase móvil: Ver la Tabla 7 a continuación.
nutos y filtrar en un matraz volumétrico de 1O ml. La-
var el residuo en el papel de filtro cuatro veces, usando Tabla 1
1 mL de metano! para cada lavado, agregar los lavados
Tiempo Agua Solución A Solución B
al matraz volumétrico y diluir con metanol a volumen.
tmin) (%) (O/o) (%)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas o o 80 20
para HPTLC) 8 o 80 20
Volumen de aplicación: 2 µL en una banda de 8 mm 15 68 o 32
Fase móvil: Tolueno, formato de etilo y ácido fórmico 55 36 o 64
(5:3:2) 65 5 o 95
Solución reveladora: Proceder según se indica en la
prueba de Identificación A. 70 5 o 95
Análisis 85 o 80 20
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8 y
Solución muestra Sistema cromato9ráfico
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la (Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
fase móvil haya recorrido aproximadamente dos ter- Modo: HPLC
cios de la longitud de la placa y secar la placa con Detector: Evaporativo de dispersión de luz
ayud~, de una corriente de aire. Rociar la placa con
[NOTA-Ajustar el detector según las instrucciones del
Solucion reveladora, calentar a 100º durante 5 minu- fabricante para alcanzar una relación señal-ruido de no
tos y observar bajo luz diurna. menos de 10 para la Solución estándar de 23-epi-
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta 26-desoxiactema de 12,5 µg/mL.]
zonas principales similares en posición y color a las zo- Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
nas principales de la Solución estándar A. La Solución
estándar B presenta zonas de color violeta rojizo debidas Velocidad de flujo: 1,6 mL/min
a. acteína y 23-epi-26-desoxiacteína a valores RF de apro- Volumen de inyección: 20 µL
ximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente. La Solución Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
muestra presenta zonas similares en color y valores RF a
aquéllas debidas a acteína y 23-epi-26-desoxiacteína de tándar y Solución estándar de 23-epi-26-desoxiacteína
la Solución estándar B. de 100 µg/mL
Requisitos de aptitud
• c.. La Solución m~~stra.pre~e~ta picos para ,cimirracemó- Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
s1do A, 26-desox1c1m1c1fugos1do, (265)-acteina, 23-epi-
de la Solución estándar es similar al Cromatograma de
2,6~desoxi.acteína, cimigen~l;-arabinósido y cimigenol-xi-
los1do a tiempos de retenc1on correspondientes a aque- Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
llos compuestos en la Solución estándar, según se obtie- Polvo de Cimicífuga Racemosa USP usado.
USP 37
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de
(26S)-acteína y 23-epi-26-desoxiacteína, Solución de
aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiacteína, Solución estándar de 23-epi-
26-desoxiacteína de 100 µg/ml
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% del
logaritmo de la respuesta del área en inyecciones re-
petidas, Solución estándar de 23-epi-26-desoxiacteína
de 100 µg/mL
Análisis
Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
tándar, Soluciones estándar de 23-epi-26-desoxiacteína y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicífw~a Racemosa USP,
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicósidos triterpénicos. Los tiem-
pos de retención relativos aproximados para los glicó-
sidos triterpénicos se proveen en la Tabla 2.
Tabla 2
Tiempo de
Retención
Nombre
Cimicifuqósido H-1
Cimirracemósido A
(26R)-Acteína
26-Desoxicimicifuqósido
!265)-Acteína
23-eoi-26-Desoxiacteína
Acetil-shenamanol-xilósido
Cimiaenol-arabinósido
Cimiaenol-xilósido !cimicifuaósido)
26-Desoxiacteína
25-Acetil-cimiaenol-arabinósido
1245)-25-Acetil-cimiaenol-xilósido
25-0-Metil-cimiaenol-arabinósido
25-0-Metil-cimiaenol-xilósido
Graficar los logaritmos de las áreas de los picos en
función de los logaritmos de las concentraciones, en
µg/ml, de la Solución estándar de 23-epi-26-desoxiac-
teína y determinar la línea de regresión usando un
análisis de cuadrados mínimos. El coeficiente de co-
rrelación para la línea de regresión es no menos de
0,995. A partir de las gráficas así obtenidas, determi-
nar la concentración, C, en µg/ml, del analito perti-
nente en la Solución muestra. Calcular por separado
los porcentajes de cimicifugósido H-1, cimirracemó-
sido A, (26R)-acteína, 26-desoxicimicifugósido, (265)-
acteína, 23-epí-26-desoxiacteína, acetil-shengma-
nol-xilósido, cimigenol-arabinósido, cimigenol-xiló-
sido (cimicifu~ósido), 26-desoxiacteína, 25-acetil-cimi-
genol-arabinosido, (24S)-25-acetil-cimigenol-xilósido,
25-0-metil-cimigenol-arabinósido y 25-0-metil-cimi-
genol-xilósido como 23-epi-26-desoxiacteína
(C31Hs6010) en la porción de Cimicífuga Racemosa
tomada:
Resultado = (V X C)!(F X lN) X 100
V = volumen de Solución muestra (ml)
c = concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (µg/mL)
F =factor de conversión (de mg a µg)
1000 µg/mg
w = peso de Cimicífuga Racemosa en Polvo
tomado para preparar la Solución muestra
(mg)
Suplementos Dietéticos / Cimicífuga 5903
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
glicósidos triterpénicos en la porción de Cimicífuga
Racemosa en Polvo tomada sumando todos los
porcentajes calculados para los analitos individuales.
Criterios de aceptación: No menos de 0,4% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS (231 ): ,No más ele 1 ppm o -
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: El material es un polvo de
color marrón claro a oscuro, inodoro o con un olor leve
y un sabor acre o amargo. Presenta numerosos gránulos
Relativo de almidón simples o compuestos con estrías concéntri-
o 61 cas. Los gránulos individuales son esféricos o más o me-
nos poligonales y tienen un diámetro de entre 3 y 15
o 78 µm, cada uno con un hilo casi céntrico en forma de hen-
o 94 didura. Presenta vasos con puntuaciones areoladas y fi-
o 96 bras lignificadas. Presenta además fragmentos de color
o 98 rojizo a marrón de epidermis suberizada con células más
1 00 o menos tabulares.
1 03 • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO,Extractos Solubles en Al-
1 08
cohol, Método 2 (561): No menos de 8,0%, usando una
rriezcla de alcohol y agua (1 :1) en lugar de alcohol.
1 13 • PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05º
1 22 du~ante 2 horas: pierde 110 más de 12,0% de su peso.
1 60 • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
1 64 No más de 1 0,0%
1 90 • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 4,0%
1 93
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz. Proteger de la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la planta de donde se obtuvo el artículo. Las formas far-
macéuticas preparadas con este artículo deben llevar la
siguiente leyenda: Descontinuar el uso y consultar con un
profesional de la salud si tuviera un trastorno hepático o
desarrollara síntomas de un problema hepático, tales
como dolor abdominal, orina oscura o ictericia.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acteína USP
ER Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP
Extracto en Polvo de Cimicífuga
Racemosa
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa se prepara a
partir de Cimicífuga Racemosa mediante extraccion con
mezclas hidroalcohólicas u otros disolventes adecuados.
Contiene no menos de 90,0% y no más de 11 0,0% de la
cantidad declarada de glicósidos triterpénicos, calculado
como 23-epi-26-desoxiacteína (Cl7Hs6010) con respecto a
la materia seca.
5904 Cimicífuga / Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 1 00 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/ml de ER Acteína USP, de
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP y de ácido isoferúlico
en metanol
Solución muestra: Agitar una cantidad de Extracto en
Polvo, equivalente a 25 mg de glicósidos triterpénicos,
en 1 O ml de metano!. Dejar en reposo durante 15 mi-
nutos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butílico, ácido acético glacial y agua (5:1 :4).
Solución reveladora: Metanol, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85:10:5:0,5) lNOTA-
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro;
desechar si aparece color.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV
a 365 nm. El cromatograma de la Solución muestra pre-
senta zonas principales similares en posición y color a
las zonas principales en el cromatograma de la Solución
estándar A. En el tercio superior de la placa, el cromato-
grama de la Solución muestra presenta una zona de
color azul fluorescente al nivel de la zona debida a
ácido isoferúlico en el cromatograma de la Solución es-
tándar B. Rociar la placa con la Solución reveladora, ca-
lentar a 1 00º durante 5 minutos y observar bajo luz
diurna. El cromatograma de la Solución muestra pre-
senta zonas principales similares en posición y color a
las zonas principales en el cromatograma de la Solución
estándar A. El cromatograma de la Solución estándar B
presenta zonas de color violeta rojizo debidas a acteína
y 23-epi-26-desoxiacteína. El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta diversas manchas de color marrón
verdoso en el tercio inferior de la placa y diversas zonas
de color violeta por encima; dos de estas zonas de color
violeta se presentan en valores R; similares a aquellos
debidos a acteína y a 23-epi-26-desoxiacteína en el cro-
matograma de la Soluci9n estándar B. , tos. Diluir con metanol a volumen. Centrifugar o pasar
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 ml de la Solución estándar A
preparada en la prueba de Identificación A, diluidos con
metanol hasta 2 ml.
Solución estándar B: 1,0 ml de la Solución estándar B
preparada en la prueba de Identificación A, diluido con
metano! hasta 5 ml.
Solución muestra: Diluir 1 ml de la Solución muestra
preparada en la prueba de Identificación A con metanol
hasta 1 O ml.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas
para HPTLC)
Volumen de aplicación: 2 µLen una banda de 8 mm
Fase móvil: Tolueno, formato de etilo y ácido fórmico
(5:3:2)
Solución reveladora: Proceder según se indica en la
prueba de Identificación A.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente dos ter-
cios de la longitud de la placa y secar la placa con
USP 37
ayuda de una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora, calentar a 1 00 durante 5 minu-
tos y observar a la luz diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta zonas principales similares en po-
sición y color a las zonas principales en el cromato-
grama de la Solución estándar A. El cromatograma de la
Solución estándar B presenta zonas de color violeta ro-
jizo debidas a acteína y 23-epi-26-desoxiacteína a valo-
res Rr de aproximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente.
El cromatograma de la Solución muestra presenta zonas
similares en color y valores R; a aquéllas debidas a ac-
teína y 23-epi-26-desoxiacteína en el cromatograma de
la Solución estándar B.
• C. El cromatograma de la Solución muestra presenta picos
para cimirracemósido A, 26-desoxicimicifugósido, (26S)-
acteína, 23-epi-26-desoxiacteína, cimigenoí-arabinósido y
cimigenol-xilósido a tiempos de retención correspondien-
tes a aquellos compuestos en el cromatograma de la So-
lución estándar, según se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Glicósidos Triterpénicos. El cociente entre las áreas
de los picos de cimigenol-arabinósido y cimigenol-xiló-
sido es no menos de 0,4 (diferencia con Cimicífuga
foetida).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GUCÓSIDOS TRITERPÉNICOS
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en meta-
no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metanol
hasta obtener una solución con una concentración co-
nocida de 30 mg/ml. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
Soluciones estándar de 23-epi-26-desoxiacteína: Di-
solver ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en metano! agi-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so-
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
50, 25 y 12,5 µg/ml. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/ml de ER Ac-
teína USP y de ER 23-epi-26-Deosxiacteína USP en
metano!
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo, equivalente a 7,5 mg de glicósidos triterpéni-
cos, a un matraz volumétrico de 1 O ml, agregar 7 ml
de metanol y someter a ultrasonido durante 30 minu-
a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.,
Solución A: Acido trifluoroacético al 0,05% en agua
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Agua Solución A Solución B
(min' 'ºlo' fºlo' (%)
o o 80 20
8 o 80 20
15 68 o 32
55 36 o 64
65 5 o 95
70 5 o 95
85 o 80 20
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersión de luz
[NOTA-Ajustar el detector según las instrucciones del
fabricante para alcanzar una relación señal-ruido de no
USP 37
menos de 1 O para la Solución estándar de 23-epi-
26-desoxiactelna de 12,5 µg/mL.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 um
Temperatura de la columna: 35 ' Resultado
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
tándar y Solución estándar de 23-epi-26-desoxiacteína
de 100 µg/mL
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar es similar al Cromatograma de
Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de
(26S)-acteína y 23-epi-26-desoxiacteína, Solución de
aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiacteína, Solución estándar de 2 3-epi-
26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% del
logaritmo de la respuesta del área del pico de 23-epi-
26-desoxiacteína en inyecciones repetidas, Solución
estándar de 23-epi-26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Análisis
Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
tándar, Soluciones estándar de 2 3-epi-26-desoxiacteína y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP,
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicósidos triterpénicos. Los tiem-
pos de retención relativos aproximados para los glicó-
sidos triterpénicos se proveen en la Tabla 2.
Tabla 2
Tiempo de
Retención
Nombre Relativo
Cimicifunósido H-1 o 61
Cimirracemósido A o 78
(26R)-Acteína o 94
26-Desoxicimicifunósido o 96
(265)-Acteína o 98
23-eoi-26-Desoxiacteína 1 00
Acetil-shennmanol-xilósido 1 03
Cimiaenol-arabinósido 1 08
Cimiaenol-xilósido fcimicifunósido) 1 13
26-Desoxiacteína 1 22
25-Acetil-cimioenol-arabinósido 1 60
(245)-25-Acetil-ciminenol-xilósido 1 64
25-0-Metil-cimiaenol-arabinósido 1 90
25-0-Metil-cimiaenol-xilósido 1 93
Graficar los logaritmos de las respuestas de los picos
en función de los logaritmos de las concentraciones,
en µg/mL, de las Soluciones estándar de 23-epi-26-des-
oxiacteína y determinar la línea de regresión usando
un análisis de cuadrados mínimos. El coeficiente de
correlación para la línea de regresión es no menos de
O, 995. A partir de las gráficas así obtenidas, determi-
nar la concentración, C, en µg/mL, del analito perti-
nente en la Solución muestra. Calcular por separado
los porcentajes de cimicifugósido H-1, cimirracemó-
sido A, (26R)-acteína, 26-desoxicimicifugósido, (26S)-
acteína, 23-epi-26-desoxiacteína, acetil-shengma-
nol-xilósido, cimigenol-arabinósido, cimigenol-xiló-
sido (cimicifu9ósido), 26-desoxiacteína, 25-acetil-cimi-
genol-arabinosido, (24S)-25-acetil-cimigenol-xilósido,
25-0-metil-cimigenol-arabinósido y 25-0-metil-cimi-
Suplementos Dietéticos / Cimicífuga 5905
genol-xilósido como 23-epi-26-desoxiacteína
(Ci1Hs6010) en la porción de Extracto tomada:
= (V x C)!(F x W) x 100
V = volumen de Solución muestra (mL)
C = concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (µg/mL)
F = factor para convertir mg en µg, 1 000 µg/mg
W = peso de Extracto en Polvo tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
glicósidos triterpénicos en la porción de Extracto
tomada sumando todos los porcentajes calculados
para los analitos individuales.
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% con respecto
a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS (231): No más de 1 ppm o
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): Cumple con
los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia
de Salmonella spp. y Escherichia coli. El recuento total
bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 101 ufc/g.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botánicos (565), Residuos de Plaguicidas.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731): No más de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar
fresco.
• ETIQUETADO: Cumple con los requisitos en Extractos Botá-
nicos (565). Etiquetar indicando el contenido de glicósi-
dos triterpénicos, como porcentaje, calculado como
23-epi-26-desoxiacteína. Las formas farmacéuticas prepa-
radas con este artículo deben llevar la siguiente leyenda:
"Descontinuar el uso y consultar con un profesional de la
salud si tuviera un trastorno hepático o desarrollara sínto-
mas de un problema hepático, tales como dolor abdomi-
nal, orina oscura o ictericia".
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acteína USP
ER Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP
Extracto Fluido de Cimicífuga
Racemosa
DEFINICIÓN
El Extracto Fluido de Cimicífuga Racemosa se prepara a par-
tir de Cimicífuga Racemosa mediante extracción con mez-
clas hidroalcohólicas o mezclas de isopropanol-agua.
Cada mL contiene los reconstituyentes extraídos de 1 g
del material vegetal. Contiene no menos de 90,0% y no
más de 110,0% de la cantidad declarada de glicósidos
triterpénicos, calculado como 23-epi-26-desoxiacteína
(C31Hs6010).
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 1 00 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Acteína USP, de
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP y de ácido isoferúlico
en metano!
5906 Cimicífuga /Suplementos Dietéticos USP 37

Solución muestra: Extracto Fluido 26-desoxiacteína, cimigenol-arabinósido y cimigenol-xi-

Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía lósido a tiempos de retención correspondientes a aque-
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm llos compuestos en la Solución estándar, según se obtie-
(placas para TLC) nen en la prueba de Contenido de Glicósidos Triterpénicos.
Volumen de aplicación: 1 O µL El_ c?ciente entre las área,s _de los picos de cimigenol-ara-
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de al- binos1do y c1m1genol-xilos1do es no menos de 0,4 (dife-
cohol butílico, ácido acético glacial y agua (5:1 :4). rencia con Cimicifuga foetida).
Solución reveladora: Metano!, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85:10:5:0,5). [NOTA- COMPOSICIÓN
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro; • CONTENIDO DE Gucósmos TRITERPÉNICOS
desechar si aparece color.] Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Ex-
Análisis tracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en meta-
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metanol
Solución muestra hasta obtener una solución con una concentración co-
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la nocida de 30 mg/ml. Pasar a través de un filtro de
fase móvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
secar la placa con ayuda de una corriente de aire. menor.
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV Soluciones estándar de 23-epi-26-desoxiacteína: Di-
a 365 nm. La Solución muestra presenta zonas principa- solver ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en metano! agi-
les similares en posición y color a las zonas principales tand? durante 1_ min~to. Diluir cuantitativamente, y en
de la Solución estándar A. En el tercio superior de la diluciones sucesivas s1 fuera necesario, para obtener so-
placa, la Solución muestra presenta una zona de color luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
azul fluorescente al nivel de la zona debida a ácido iso- 50, 25 y 12,5 µg/ml. Pasar a través de un filtro de
ferúlico de la Solución estándar B. Rociar la placa con la membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
Solución reveladora, calentar a 100º durante 5 minutos y menor.
observar bajo luz diurna. La Solución muestra presenta Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac-
zonas principales similares en posición y color a las zo- teína USP y de ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en
nas principales de la Solución estándar A. La Solución metano!
estándar B presenta zonas de color violeta rojizo debidas Solución muestra: Usar Extracto Fluido, diluyendo si
a acteína y 23-epi-26-desoxiacteína. La Solución muestra fuera necesario con metanol hasta obtener una concen-
presenta diversas manchas de color marrón verdoso en tración de aproximadamente 0,75 mg/mL de glicósidos
el tercio inferior de la placa y diversas zonas de color triterpénicos. Centrifugar o pasar a través de un filtro
violeta por encima; dos de estas zonas de color violeta con un tamaBo de poro de 0,45 µm o menor.
se presentan a valores RF similares a aquellos debidos a Solución A: Acido trifluoroacético al 0,05% en agua
acteína y a 23-epi-26-desoxiacteína en la Solución están- Solución B: Acetonitrilo
dar B. Fase móvil: Ver la Tabla 7.
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA Tabla 1
Solución estándar A: 0,5 mL de la Solución estándar A
preparada en la prueba de Identificación A, diluidos con Tiempo Agua Solución A Solución B
fmin) (%) (O/o) (O/o)
metanol hasta 2,0 ml.
Solución estándar B: 1,0 mL de la Solución estándar B o o 80 20
preparada en la prueba de Identificación A, diluido con 8 o 80 20
metanol hasta 5,0 ml. 15 68 o 32
Solución muestra: Usar Extracto Fluido, diluyendo si 55 36 o 64
fuera necesario con un disolvente adecuado hasta obte- 65 5 o 95
ner una concentración de 0,25 mg/mL de glicósidos
triterpénicos. 70 5 o 95
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía 85 o 80 20
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas
para HPTLC) Sistema cromato9ráfico
Volumen de aplicación: 2 µL en una banda de 8 mm (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Fase móvil: Tolueno, formato de etilo y ácido fórmico Modo: HPLC
(5:3:2) Detector: Evaporativo de dispersión de luz
Solución reveladora: Proceder según se indica en la [NOTA-Ajustar el detector según las instrucciones del
prueba de Identificación A. fabricante para alcanzar una relación señal-ruido de no
Análisis menos de 10 para la Solución estándar de 23-epi-
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By 26-desoxiactema de 12,5 µg/ml.]
Solución muestra Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Desarrollar hasta que el frente de la fase móvil haya Temperatura de la columna: 35º
recorrido dos tercios de la longitud de la placa y se- Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
car la placa con ayuda de una corriente de aire. Ro- Volumen de inyección: 20 µL
ciar la placa con Solución reveladora, calentar a 1 00º Aptitud del sistema
durante 5 minutos y observar bajo luz diurna. Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
Criterios de aceptacion: La Solucion muestra presenta tándar y Solución estándar de 23-epi-26-desoxiacteína
zonas principales similares en posición y color a las zo- de 100 µg/ml
nas principales de la Solución estándar A. La Solución Requisitos de aptitud
estándar B presenta zonas de color violeta rojizo debidas Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
ª· acteína y 23-epi-26-desoxiacteína a valores RF de apro- de la Solución estándar es similar al Cromatograma de
ximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente. La Solución Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
muestra presenta zonas similares en color y valores RF a Polvo de Cimicífuga Racemosa USP usado.
aquéllas debidas a acteína y 23-epi-26-desoxiacteína de Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de
la Solución estándar B. (26S)-acteína y 23-epi-26-desoxiacteína, Solución de
• C. La Solución muestra presenta picos para cimirracemó- aptitud del sistema
sido A, 26-desoxicimicifugósido, (26S)-acteína, 23-epi-
USP 37
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiacteína, Solución estándar de 23-epi-
26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Desvi~ción estándar relativa: No más de 2,0% del
logaritmo de ~a respuesta ~el área del. pico de 23-;epi-
26-desox1acte1na en 1nyecc1ones repetidas, Solucion
estándar de 23-epi-26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Análisis
MlJestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
tandar, Soluciones estándar de 2 3-epi-26-desoxiacteína y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
~R Ex.t~acto en .Polvo de Cimicífu<.;ia Racemosa USP,
1dent1f1car los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicósidos triterpénicos. Los tiem-
pos de .reter;ci?n relativos aproximados para los glicó-
s1dos tnterpen1cos se proveen en la Tabla 2.
Tabla 2
Tiempo de
Retención
Comouesto Relativo
Cimicifunósido H-1 o 61
Cimirracemósido A o 78
f26Rl-Acteína o 94
26-Desoxicimicifunósido o 96
f26 <;'\-Acteína o 98
23-eni-26-Desoxiacteína 1 00
Acetil-shennmanol-xilósido 1 03
Ciminenol-arabinósido 1 08
Ciminenol-xilósido (cimicifuaósido) 1 13
26-Desoxiacteína 1 22
25-Acetil-ciminenol-arabinósido 1 60
(245)-25-Acetil-cimiaenol-xilósido 1 64
25-0-Metil-ciminenol-arabinósido 1 90
25-0-Metil-ciminenol-xilósido 1 93
Graficar 1.~s logaritmos d.e las respuestas de los picos
en funcion de los logaritmos de las concentraciones
en µg/mL, de las Soluciones estándar de 23-epi-26-d~s­
oxiacteína y determinar la línea de regresión usando
un análisis de cuadrados mínimos. El coeficiente de
correlación para la línea de regresión es no menos de
0,995. A partir de las gráficas así obtenidas determi-
nar la concentración, C, en µg/mL, del anaÍito perti-
nente en la Sojución muestra. Calcul~r l?<?r separado
las co~c~ntrac1o~e.s, en µg/mL, de ~1m1c1fugosido
H-1, c1m1rracemos1do A, (26R)-acte1na, 26-desoxicimi-
cifugósido, (26S)-acteína, 23-epi-26-desoxiacteína,
acetil-shengmanol-xilósido, cimigenol-arabinósido ci-
migenol-xilósido (cimicifugósido), 26-desoxiacteín~
25-acetil-cimigenol-arabinósido, (245)-25-acetil-cim'i-
genol-xil~sid.o, .25-0-m~~il~cimigenol-arabinósido y
2:5-0-~etil-c1m1genol-xilos1do c.o_mo 23-epi-26-deso-
x1acte1na (C31Hs6Ü10) en la porc1on de Extracto Fluido
tomada:
Resultado = (O x C/V)
o = factor de ~ilución para la Solución muestra, si
fuera aplicable: volumen final de la Solución
muestra/volumen de la alícuota de Extracto
Fluido tomado (mL/mL)
e = concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (µg/mL)
V = volumen de Extracto Fluido tomado para
preparar la Solución muestra (mL)
Suplementos Dietéticos / Cimicífuga 5907
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
glicósidos triterpénicos en la porción de Extracto
Fluido tomada:
Resultado = 'LC/ L x 1 00
L-C = suma de las concentraciones de glicósidos
triterpénicos individuales (mg/mL)
L = concentración declarada de glicósidos
triterpénicos del Extracto Fluido (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS (231 ): No más de 1 o ppm
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 103 ufc/g.
• OTR<?S .REQUISITOS: . Cumple con los requisitos de Extractos
Botanicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Plaguicidas.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar
fresco.
• ETIQUETADO: C':1mple con los requisitos de Etiquetado en
Extractos Botánicos (565). Etiquetar indicando el conte-
nido, como porcentaje, de glicósidos triterpénicos, calcu-
lado como 23-epi-26-desoxiacteína. Las formas farmacéu-
ticas preparadas con este artículo deben llevar la
siguie~te leyenda: Descontinuar el uso y consultar con un
profesional d~ la salud si tuviera un trastor~o hepático o
desarrollara s1ntom~s de un problema hepatico, tales
COl)lO dolor abdominal, orina oscura o ictericia.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acteína USP
ER Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP
Cimicífuga Racemosa, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Cimicífuga Racemosa contienen Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa o Extracto Fluido de Cimi-
cífuga Racemosa. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
Extracto en Polvo o Extracto Fluido, representada por el
contenido de glicósidos triterpénicos, calculado como
23-epi-26-desoxiacteína (C31Hs6Ü1 o).
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Solución muestra: 1 O mL de la Solución muestra prepa-
rada para la prueba de Identificación B. Evaporar hasta
sequedad y disolver nuevamente en 1 mL de metanol.
Solución estándar A: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Acteína USP, de
ER 23-ept-26-Desoxiacteína USP y de ácido isoferúlico
en metanol
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butílico, ácido acético glacial y agua (5:1 :4)
Solución reveladora: Metanol, ácido acético glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85:10:5:0,5)
[NOTA-Almacenar en un refrigerador. El reactivo es in-
coloro; desechar si aparece color.]
5908 Cimicífuga / Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar hasta que el frente de la fase móvil haya
recorrido 15 cm y secar la placa con ayuda de una
corriente de aire. Observar la placa bajo luz UV a una
longitud de onda de 365 nm. Rociar la placa co~
Solución reveladora, calentar a 100º durante 5 minu-
tos, y observar a la luz diurna.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
zonas principales similares en posición y color a las zo-
nas principales de la Solución estándar A. Observada
bajo luz UV, la Solución muestra presenta una. zona fluo-
rescente de color azul al nivel de la zona debida al
ácido isoferúlico de la Solución estándar B, en el tercio
superior de la placa. Observada _9espués del tratamien~o
con Solución reveladora, la Soluc1on muestra presenta di-
versas manchas de color marrón verdoso en el tercio
inferior de la placa y diversas zonas d~ color violeta por
encima· dos de estas zonas de color violeta se presen-
tan en ~alores RF similares a aquellos debidos a acteína
y a 23-epi-26-desoxiact~ína en la Solución es~ándar B.
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas
para HPTLC) . .
Solución muestra: Transferir el equivalente de la canti-
dad declarada de Extracto en Polvo o Extracto Fluido,
que contenga 25 mg de glicósidos triterpénicos, a partir
de una porción de Tabl_etas reducidas a polvo, a 25 _mL
de agua, agitar hasta dispersar y someter a ultrasonido
durante 1 O minutos. Agregar 75 mL de metano! y so-
meter a ultrasonido durante 1O minutos. Dejar en re-
poso durante 15 minutos y usar el sobrenadante
transP,arent~_. ., , Solución muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas y
Solucion estandar A: Metano! y Soluoon estandar A
prepa;ada e~ la prueba de ldentificació_n, A (3:})
Solucion estandar B: Metano! y Soluoon estandar B
preparada en la prueba de Identificación A (4:1)
Volumen de aplicación: 2_µL, en u~a ba~~a de ,8 ~m
Fase móvil: Tolueno, form1ato de etilo y ac1do form1co
(5:3:2) , . , . . tos. Centrifugar y transferir el sobrenadante transpa-
Solucion reveladora: Metano!, ac1do acet1co glacial,
ácido sulfúrico y p-anisaldehído (85:10:5:0,5)
[NOTA-Almacenar en un refrigerador. El reactivo es in-
coloro; desechar si aparece color.]
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar hasta que el frente de la fase móvil haya
recorrido dos tercios de la longitud de la placa, y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Rociar la placa con Solución reveladora, _calentar a
100º durante 5 minutos, y observar baJO luz diurna.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
zonas principales similares en posición y color a las zo-
nas principales de la Solución estándar A, dos de las cua-
les son zonas de color violeta rojizo a valores RF de 0,5
y O 4 similares en color y valor Rr a aquellas debidas a
act~í~a y a 23-epi-26-desoxiacteína en la Solución están-
dar B.
• C. La Solución muestra presenta picos de cimirracemósido
A, 26-desoxicimicifugósido, (265)-acteína, 23-epi-26-deso-
xiacteína, cimigenol-arabinósido y cimigenol-xilósido a
los tiempos de retención correspondientes a tales com-
puestos en la Solución estándar, según se obtienen en la
prueba de Conte_.nido de Glicós_idos Triter:p~nicos. El co~ ,
ciente entre las areas de los picos de c1m1genol-~rabtn~­
sido y cimigenol-xilósido es no menos de 0,4 (d1ferenc1a
con Cimicífuga foetida).
USP 37
CONTENIDO , ,
• CONTENIDO DE GLICOSIDOS TRITERPENICOS
Solución A: Ácido trifluoroacético al 0,05%, filtrado y
desgasificado, en agua
Solución B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Agua Solución A Solución B
fmin) (%) (%) (%)
o o 80 20
8 o 80 20
15 68 o 32
55 36 o 64
65 5 o 95
70 5 o 95
85 o 80 20
Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac-
teína USP y de ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en
metano!
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP en meta-
no! agitando durante 1 minuto y diluir con metanol
para obtener una solución con ~na conc~ntración cono-
cida de 30 mg/ml. Pasar a traves de un filtro de mem-
. brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Soluciones estándar de 23-epí-26-desoxiacteína: Di-
solver ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP en metano! agi-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so-
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
50, 25 y 12,5 µg/ml. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
reducir a polvo fino. Tran_sf~r!r una _canti~~d del polvo,
equivalente a 8 mg de gltcos1dos tnterperncos, a un
tubo de centrífuga adecuado con tapón de teflón.
Agregar 3 mL de agua, agitar hasta dispersar, y someter
a ultrasonido durante 1O minutos a 60º. Agregar 3 mL
de metano! y someter a ultrasonido durante 1O minu-
rente a un matraz volumétrico de 1O mL. Lavar e resi-
duo dos veces con 1,5 mL de una mezcla de metano! y
agua (1 :1 ), y transferir los lavados al matraz volumé-
trico. Diluir con una mezcla de metano! y agua (1: 1) a
volumen, y pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de .r.oro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato~rafico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersión de luz
[NOTA-Ajustar el detector según I~~ inst~uccio!1es del
fabricante para alcanzar una relac1on senal-ru1do de no
menos de 1Opara la Solución estándar de 23-epi-
26-desoxiacteina de 12,5 µg/ml.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistem3' . . .,
Muestras: Solucion de aptitud del sistema y Soluc1on es-
tándar de 23-epi-26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Requisitos de aptitud
Perfil cromatográfico: El cromatograma de la Solu-
ción estándar es similar al Cromatograma de Referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Cimicífu_ga Racemosa USP. .
Resolucion: No menos de 1,0 entre los picos de
(265)-acteína y 23-epi-26-desoxiacteína, Solución de
aptitud del sistema
USP 37
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
2 3-epi-26-desoxiacteína, Solución estándar de 2 3-epi-
26-desoxiacteína de 100 µg/mL
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% del
lo9aritmo de las áreas en inyecciones repetidas, Solu-
cion estándar de 2 3-epi-26-desoxiacteína de 1 00 µg/
mL
Análisis
Muestras: Solución de aptitud del sistema, Solución es-
tándar, Soluciones estándar de 23-epi-26-desoxiacteína y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicífw~a Racemosa USP,
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicósidos triterpénicos. Los tiem-
pos de retención relativos aproximados para los glicó-
sidos triterpénicos se proveen en la siguiente tabfa.
Tiempo de
Retención
Nombre Relativo
Cimicifuaósido H-1 o 61
Cimirracemósido A o 78
(26R)-Acteína o 94
26-Desoxicimicifuaósido o 96
(265)-Acteína o 98
23-eoi-26-Desoxiacteína 1 00
Acetil-shenamanol-xilósido 1 03
Cimiaenol-arabinósido 1 08
Cimiaenol-xilósido (cimicifuaósido) 1 13
26-Desoxiacteína 1 22
25-Acetil-cimiaenol-arabinósido 1 60
<245\-25-Acetil-cimiaenol-xilósido 1 64
25-0-Metil-cimiaenol-arabinósido 1 90
25-0-Metil-cimiaenol-xilósido 1 93
Graficar los logaritmos de las áreas de los picos en
función de los logaritmos de las concentraciones, en
µg/mL, de las Soluciones estándar de 23-epi-26-deso-
xiacteína y determinar la línea de regresión usando un
análisis de cuadrados mínimos. El coeficiente de co-
rrelación para la línea de regresión es no menos de
0,995. A partir de las gráficas así obtenidas, determi-
nar la concentración, C, en µg/mL, del analito perti-
nente en la Solución muestra.
Calcular la cantidad, en mg, de glicósidos triterpénicos
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado == CT/l 00
CT ==suma de las concentraciones C, en µg/mL, de
todos los glicósidos triterpénicos pertinentes,
calculados como 23-epi-26-desoxiacteína
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
Extracto en la porción de Tabletas tomada:
Resultado == (Awr/W) X (100/LE) X (100/L)
Awr == peso promedio de las Tabletas (mg/Tableta)
W == peso de la muestra
LE == contenido declarado, como porcentaje, de
triterpenos en el Extracto usado para
preparar las Tabletas
L == cantidad declarada de Extracto por Tableta
Cn == contenido, en mg, de triterpenos en la
muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto en Polvo o Extracto Fluido, repre-
sentado por el contenido de glicósidos triterpénicos
Suplementos Dietéticos / Cinc 5909
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETÉTICOS (2021 ): El recuento total bacte-
riano no excede de 104 ufc/g, y el recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
103 ufc/g. ,
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES y DIETÉTICOS (2022): Las Tabletas cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del cual se prepararon las Tabletas. La etiqueta
también indica la cantidad, en mg/Tableta, de Extracto
en Polvo o Extracto Fluido; los disolventes usados para
preparar el Extracto en Polvo o el Extracto Fluido; y la
relación entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo o el Extracto Fluido. Etiquetar indicando
el contenido de glicósidos triterpénicos, como porcen-
taje, calculado como 23-epi-26-desoxiacteína en el Ex-
tracto en Polvo o Extracto Fluido usado para preparar las
Tabletas.
La etiqueta lleva la siguiente leyenda: Descontinuar el
uso y consultar con un profesional de la salud si tuviera
un trastorno hepático o desarrollara síntomas de un
problema hepático, tales como dolor abdominal, orina
oscura o ictericia.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acteína USP
ER Extracto en Polvo de Cimicífuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiacteína USP
Citrato de Cinc
3Zn 2+
C12H10Ü14Zn3 · 2H20 610,36
2-Hydroxy-1,2,3-propanetricarboxylic acid zinc salt,
dihydrate
X cTT Sal de cinc del ácido 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxílico,
dihidrato [5990-32-9].
Anhidro [546-46-3].
DEFINICIÓN
El Citrato de Cinc contiene no menos de 31, 3% de cinc
(Zn), calculado con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Cinc (191): Una
solución (1 en 1O) cumple con los requisitos.
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Citratos (191):
Una solución (1 en 1O) cumple con los requisitos.
591 O Cinc / Suplementos Dietéticos
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Muestra: 350 mg de Citrato de Cinc, previamente seca-
dos a 105º durante 2 horas
Blanco: 60 mL de agua
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Edetato disódico 0,05 M SV
Detección del punto final: Visual
Análisis: Disolver la Muestra en 60 mL de agua. Agregar
1O mL de solución amortiguadora de amoniaco-cloruro
de amonio SR y O, 1 mL de negro de eriocromo SR. Va-
lorar con Solución volumétrica hasta un punto final azul.
Realizar una determinación con un blanco.
Calcular el porcentaje de cinc (Zn) en la porción de
Citrato de Cinc tomada:
Resultado = [(V - B) X M X F X 100]/W
V = volumen de solución volumétrica consumida
por la muestra (mL)
B = volumen de solución volumétrica consumida
por el blanco (mL)
M = molaridad de la solución volumétrica
(mM/mL)
F = factor de equivalencia, 65,4 mg/mM
W = peso de la muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 31, 3% con res-
pecto a la sustancia seca
IMPUREZAS
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221): Una porción de
1,0 g no presenta más cloruro que el correspondiente a
0,7 ml de ácido clorhídrico 0,020 N (no mas de 0,05%) .
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221 ): Una porción de
1,8 g no presenta más sulfato que el correspondiente a
Q,5 mL de ácjdo sulfúrico 0,020 N (no más de 0,05%).
• LIMITE DE ARSENICO, CADMIO Y PLOMO
Solución estándar de arsénico: 1,0 µg/mL en ácido ní-
trico al 1 %, preparada a partir de una solución estándar
de arsénico (1 O mg/L)
Solución estándar de cadmio: 1,0 µg/mL en ácido ní-
trico al 1 %, preparada a partir de una solución estándar
de cadmio (1 O mg/L)
Solución estándar de plomo: 1,0 µg/mL en ácido ní-
trico al 1 %, preparada a partir de una solución estándar
de plomo (1 O mg/L)
Solución estándar de múltiples elementos: 1 O µg/L de
plomo, 5 µg/L de cadmio y 3 µg/L de arsénico en ácido
nítrico al 1 %, preparada a partir de Solución estándar de
plomo, Solución estándar de cadmio y Solución estándar
de arsénico, respectivamente
Solución muestra: 2 mg/mL de Citrato de Cinc en
ácido nítrico al 1%
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Plasma inductivamente acoplado, ICP-MS
Radiofrecuencia: 1 350 Vatios
Velocidad de flujo del nebulizador: 0,9 L/min
[NOTA-Las condiciones operativas de radiofrecuencia y
velocidad de flujo del nebulizador pueden desarrollarse
y optimizarse basándose en las recomendaciones del
fabricante.]
Masas atómicas de detección: As, Cd y Pb
Blanco: Solución de ácido nítrico al 1%
Análisis
Muestras: Solución estándar de múltiples elementos, So-
lución muestra y Blanco
Determinar las respuestas de la Solución estándar de
múltiples elementos, la Solución muestra y el Blanco a
las masas indicadas anteriormente.
USP 37
Calcular el contenido de cada elemento, en µg/g, en
la porción de Citrato de Cinc tomada:
Resultado= (ru/r5) x (C 5/Cu)
ru = respuesta del pico del elemento
correspondiente de la Solución muestra
rs = respuesta del pico del elemento
correspondiente de la Solución estándar de
múltiples elementos
Cs = concentración del elemento correspondiente
en la Solución estándar de múltiples elementos
(µg/L)
Cu = concentración de Citrato de Cinc en la
Solución muestra (g/L)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 3 µg/g
Cadmio: No más de 5 µg/g
Plomo: No más de 1 O µg/g
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105º
durante 2 horas: pierde no más de 1,0% de su peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 3 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
Citrato de Cinc, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Citrato de Cinc contienen no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
cinc (Zn).
IDENTIFICACIÓN
• A. La Solución muestra en Contenido produce líneas de
emisión o absorción a las longitudes de onda característi-
cas del cinc.
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Citratos (191)
Solución muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente aproximadamente a
15 mg de cinc, a un tubo de centrífuga. Agregar
2-5 mL de agua, someter a ultrasonido durante 1 mi-
nuto, agitar y centrifugar.
Criterios de aceptación: Cumplen con los requisitos.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE CINC
Método 1
[NOTA-Se encuentra disponible comercialmente una
solución madre del estándar con diferentes concentra-
ciones de cinc, que puede usarse en la preparación de
la Solución madre del estándar. Puede realizarse el
ajuste volumétrico necesario en la Solución estándar.
Las concentraciones de la Solución estándar y la Solu-
ción muestra pueden modificarse para que se adapten
al intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
Solución madre del estándar: Disolver 625 mg de
óxido de cinc, pesados y previamente incinerados
hasta peso constante, en 1 O ml de ácido nítrico, y
agregar agua hasta obtener 500,0 mL. Esta solución
contiene 1 000 mg/L de cinc.
Solución estándar: Agregar 200 mL de agua y 1 O mL
de ácido nítrico a un matraz volumétrico de 500 mL y
USP 37
mezclar minuciosamente. Pipetear y transferir 10,0 mL
de Solución madre del estándar al matraz volumétrico y
diluir con agua a volumen hasta obtener una solución
con una concentración conocida de aproximadamente
20 m9/L de cinc.
Solucion muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción pesada de
las Tabletas reducidas a polvo, equivalente aproxima-
damente a O, 1 g de cinc, a un matraz de 50 ml. Agre-
gar 1 O mL de ácido nítrico y calentar la solución en
una placa de calentamiento hasta ebullición suave, du-
rante la cual se desprenda humo. Calentar a ebullición
la solución durante 30 minutos adicionales, agitando
constantemente por rotación suave, período durante el
cual no debe observarse desprendimiento de humo.
Enfriar la solución a temperatura ambiente, transferir
cuantitativamente toda la solución a un matraz volu-
métrico de 500 mL, diluir con agua a volumen y mez-
clar. Pipetear y transferir 25,0 mL de esta solución a un
matraz volumétrico de 250 mL, agregar 5 mL de ácido
nítrico, diluir con a9ua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema de plasma inductivamente acoplado
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectroscopía de emisión atómica
Longitud de onda analítica: 206,20 nm. [NOTA-Las
condiciones operativas pueden desarrollarse y optimi-
zarse basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. La configuración típica incluye una potencia de
radiofrecuencia (RF) de aproximadamente 1 300 va-
tios, un flujo de antorcha de argón de aproximada-
mente 15 L/min, un flujo auxiliar de argón de aproxi-
madamente 0,2 L/min y una velocidad de flujo del
nebulizador de aproximadamente 0,8 L/min.J
Blanco: Solución de ácido nítrico al 2%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar, Solución muestra y
Blanco
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta de la Solución muestra
rs = respuesta de la Solución estándar
Cs = concentración de la Solución estándar (mg/L)
Cu = concentración nominal de cinc en la Solución
muestra (m!¡J/L)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
Método 2
Solución madre del estándar A: 1000 µg/mL de cinc,
a partir de óxido de cinc en ácido clorhídrico 5 M
(3,89 mg/mL) diluida con agua a volumen final.
[NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M, entibiando,
si fuera necesario. Enfriar y luego diluir a volumen
final.]
Solución madre del estándar B: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución madre del estándar A diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solución madre del estándar B a sendos ma-
traces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de
cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ9/mL de cinc.
Solucion muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 tabletas. Transferir el equivalente a 5 tabletas a un
crisol de porcelana. Calentar el crisol en una mufla
mantenida a 550º durante 6-12 horas y enfriar. Agre-
gar 60 mL de ácido clorhídrico y calentar a ebullición
suave en una placa de calentamiento o un baño de
vapor durante 30 minutos, en¡·uagando intermitente-
mente la superficie interna de crisol con ácido clorhí-
drico 6 N. Enfriar y transferir cuantitativamente el con-
tenido del crisol a un matraz volumétrico de 100 ml.
Enjuagar el crisol con pequeñas porciones de ácido
Suplementos Dietéticos / Cinc 5911
clorhídrico 6 N y agregar los enjuagues al matraz. Di-
luir con agua a volumen y filtrar, desechando los pri-
meros 5 mL del filtrado. Diluir esta solución cuantitati-
vamente, con ácido clorhídrico O, 125 N hasta obtener
una concentración nominal de 2 µg/mL de cinc.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 213,8 nm
Lámpara: Cinc; de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones frente al
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de la concentración, en µg/mL, de
cinc y trazar la línea recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración determinada de cinc en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-11 0,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN (2040)
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Análisis: Proceder según se indica en Método 7 o Mé-
todo 2 en Contenido, realizando los ajustes volumétricos
necesarios.
Solución muestra: Cuando se usa el Método 7, pipetear
y transferir 10,0 mL de la solución en análisis, filtrada y
combinada a un matraz volumétrico de 50 mL, y diluir
con solución de ácido nítrico al 2% hasta 50 ml.
Cuando se usa el Método 2, diluir la solución en análisis,
filtrada y combinada con ácido clorhídrico O, 125 N
hasta alcanzar una concentración que se encuentre den-
tro del intervalo de las Soluciones estándar.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) disuelta:
Resultado= Cx (VM!a) x (O/L) x 100
C = concentración de cinc en la Solución muestra
(mg/L)
VM = volumen de Medio, 900 mL
a = alícuota de la solución en análisis (mL)
O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de la alícuota tomada
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de cinc
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 103 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
5912 Cinc /Suplementos Dietéticos
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de cinc en
términos de mg/Tableta.
Cinc y Vitamina C, Tabletas de
Disolución Bucal
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Disolución Bucal de Ci,nc y Vitamina C con-
tienen no menos de 90,0% y no mas de 110,0% de la
cantidad declarada de cinc (Zn) obtenido de sustancias
generalmente reconocidas como inocuas y que proporcio-
nan una forma ionizable de cinc;J no menos de 90,0% y
no más de 120 0% de la cantida declarada de vitamina
C como ácido 'ascórbico (C 6Hs06), ascorbato de sodio
(é 6H7 Na06) o ascorbato de calcio di_hidr~to <S:12~14Ca012 ·
2H20). No contiene ninguna otra vitamina ni mineral con
valor nutricional declarado. Puede contener otras sustan-
cias agregadas o ingredientes adicionales declarados en
cantidades que no son objetables.
IDENTIFICACIÓN
•A.
Análisis: Proceder según se indica en Contenido en Con-
tenido de Cinc.
Criterios de aceptación: La Solución muestra produce
líneas de emision o absorción a las longitudes de onda
características del cinc.
8 Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
• .4.nálisis: Triturar una cantidad de Tabletas de Disolución
Bucal reducidas a polvo fino con una c~~tidad de al-
cohol suficiente para obtener una sol~c~on que, c~n­
tenga el equivalente a 20 mg/mL de ac_1do .a~corb1co,
ascorbato de sodio o ascorbato de calcio d1h1drato y
filtrar. Agregar 1 mL de ácido clorhíd:ico O!~ N a 4 mL
del filtrado a partir de Tabletas de D1soluc1on Bucal,
que conte~gan ascorbato de sodio o ascorbato de
calcio.
Criterios de aceptación: Una porción del filtrado re-
duce el tartrato cúprico alcalino SR lentamente a tem-
peratura ambiente pero más rápidamente al calentar.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE CINC
Procedimiento 1
[NOTA-Se encuentra disponible COf'.lercialmente una
solución madre del estándar con diferentes concentra-
ciones de cinc, que puede usarse en la pr_eparación de
la Solución madre del estándar. Puede realizarse el
ajuste volumétrico necesari~ ,a la S5Jlución estándar:~ Las
concentraciones de la Soluoon estandar y la Soluoon
muestra pueden modificarse para que se adaften al
intervalo lineal o de trabajo del instrumento.
Solución madre del estándar: Disolver 625 mg de
óxido de cinc, pesados y previamen!e. incin~r~dos
hasta peso constante, en 1O mL de ac1do rntnco, y
agregar agua hasta obtener 500,0 ml. Esta solución
contiene 1000 µg/mL de cinc.
Solución estándar: Agregar 200 mL de agua y 1O mL
de ácido nítrico a un matraz volumétrico de 500 mL y
mezclar minuciosamente. Pipetear y transferir 10,0 mL
de Solución madre del estándar al matraz volumétrico,
y diluir con agua a volumen para obtener una solución
con una concentración conocida de aproximadamente
20 µ$}/mL de cinc. . .
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas de Disolución Bucal. Transferir una
porción de Tabletas de Disolución Bucal, pesada con
exactitud, equivalente aproximadamente a O, 1 g, ~e
cinc, a un matraz de 50 ml. Agregar 1O mL de ac1do
nítrico y calentar la solución en una placa de calenta-
miento hasta ebullición suave, durante la cual se des-
USP 37
prenda humo. Calentar a ebullición la solución durante
30 minutos adicionales, agitando constantemente por
rotación suave, periodo durante el cual no debe obser-
varse desprendimiento de humo. Enfriar la solución a
temperatura ambiente, transferir cuantitativamente
toda la solución a un matraz volumétrico de 500 mL,
diluir con agua a volumen y mezclar. Pipetear y t~a~s­
ferir 25,0 mL de esta solución a un matraz volumetnco
de 250 mL, agregar 5 mL de ácido nítrico, diluir con
agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema de plasma inductivamente acoplado
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectroscopía de emisión atómica
Longitud de onda analítica: 206,20 nm
[NOTA-Las condiciones operativas pueden desarro~
liarse y optimizarse basándose en las recomendacio-
nes del fabricante. La configuración típica incl~ye
una potencia de radiofrecuencia (RF) de aproxima-,
damente 1300 vatios, un flujo de antorcha de argon
de aproximadamente 15 L/min, un flujo auxiliar dE'.
argón de aproximadamente 0,2 L/min y una veloci-
dad de flu¡o del nebulizador de aproximadamente
0,8 L/min.J
Blanco: Solución de ácido nítrico al 2%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar, Solución muestra y
Blanco
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas de Disolución Bucal
tomada:
ru = respuesta de la Solución muestra
rs = respuesta de la Solución estándar
Cs = concentración de cinc en la Solución estándar
(µg/mL) .,
Cu = concentración nominal de cinc en la Soluc1on
muestra (µg/mL) .
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la canti-
dad declarada de cinc
Procedimiento 2
Solución madre del estándar A: Disolver óxido de
cinc en ácido clorhídrico 5 M, entibiando si fuera nece-
sario, hasta obtener una solución con una concentra-
ción de 3,89 mg/ml. Diluir con agua hasta obtener
una solución con una concentración de 1000 µg/mL
de cinc.
Solución madre del estándar B: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución madre del estándar A en ácido clorhí-
drico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5 O mL de Solución madre del estándar B a sendos ma-
t~aces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de
cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen
para obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5;
2,0 y 2,5 µg/mL de cinc. . .
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas de Disolución Bucal. Transferir el equiva-
lente a 5 Tabletas de Disolución Bucal a un crisol de
porcelana. Calentar el crisol en una mufla mantenida a
550º durante 6-12 horas y enfriar.. ~c;¡regar 60 mL de
ácido clorhídrico y calentar a ebull1cion suave en una
placa de calentamiento o en un baño de vapor du-
rante 30 minutos, enjuagando i~t~rmitente,m~nte la
superficie intern~ del cri~ol _con ac1do clorh1dn~o 6 N.
Enfriar y transferir cuant1t?t1:'amente el conte~1do del
crisol a un matraz volumetnco de 100 ml. EnJuagar el
crisol con pequeñas porciones de áci_d~ clorh1drico 6 N
y agregar los enjuagues al matraz. ~1lu1r con agua a
volumen y filtrar, desec~~ndo los _pn~eros 5 mL del
filtrado. Diluir esta soluc1on cuant1tat1vamente con
ácido clorhídrico O, 125 N para obtener una concentra-
ción nominal de 2 µg/mL de cinc.
USP 37
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 21 3,8 nm
Lámpara: Cinc; de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones frente al
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de la concentración, en µg/mL, de
cinc y trazar la línea recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas de Disolución Bucal
tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración determinada de cinc en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la canti-
dad declarada
• CONTENIDO DE VITAMINA C
Solución muestra: Transferir no menos de 20 Tabletas
de Disolución Bucal a un matraz volumétrico de
1000 mL que contenga 250 mL de ácido metafosfóri-
co-ácido acético SR. Tapar el matraz y agitar mecánica-
mente durante 30 minutos o hasta que las tabletas de
disolución bucal se hayan desintegrado completamente.
Diluir con agua a volumen. Transferir una porción de la
solución a un tubo de centrífuga y centrifugar hasta
obtener un sobrenadante transparente. Diluir cuantitati-
vamente el sobrenadante transparente con agua, si
fuera necesario hasta obtener una solución que con-
tenga 0,5 mg/mL de ácido ascórbico.
Blanco: Una mezcla de 5,5 mL de ácido metafosfórico-
ácido acético SR y 15 mL de agua
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV
Detección del punto final: Visual, un color rosado
que persista durante al menos 5 segundos.
Análisis: Transferir un volumen de la Solución muestra,
equivalente a 2 mg de ácido ascórbico, a un matraz
Erlenmeyer de 50 ml. Agregar 5 mL de ácido metafos-
fórico-ácido acético SR y valorar con Solución volumé-
trica. Corregir por el volumen de la Solución volumétrica
consumido por el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ácido
ascórbico (C6Hs06) en la porción de Tabletas de Disolu-
ción Bucal tomada:
Resultado = {[(Vs - Va) x F]!W} x 100
Vs = volumen de Solución volumétrica consumido
por la Solución muestra (mL)
Va = volumen de Solución volumétrica consumido
por el Blanco (mL)
F = equivalente de ácido ascórbico de la Solución
volumétrica (mg/mL)
W = peso nominal de ácido ascórbico tomado para
el Análisis (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
Suplementos Dietéticos /Ciruelo Africano 591 3
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1oi ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRA,CIÓN Y DISOLUCIÓN (2040)
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Análisis: Determinar la cantidad de cinc (Zn) y vitamina
C disuelta, usando los procedimientos en Contenido en
Contenido de Cinc y en Contenido de Vitamina C, reali-
zando los ajustes volumétricos necesarios. [NOTA-Pro-
ceder sin demora con la determinación de vitamina C.)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) disuelta:
Resultado = C x (VM/a) x (0/l) X 100
C = concentración medida de Cinc en la Solución
muestra (mg/mL)
VM = volumen de Medio, 900 mL
a = alícuota de la solución en análisis tomada (mL)
O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de la alícuota tomada
L = cantidad declarada de cinc (mg/Tableta)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
vitamina C, como ácido ascórbico (C6H 8 0 6), disuelta:
Resultado = (Vs - Va) X F X [(VMla)/L] X 100
Vs = volumen de Solución volumétrica consumido
por la Solución muestra (mL)
Va = volumen de Solución volumétrica consumido
por el Blanco (mL)
F = concentración de la Solución volumétrica en
términos del equivalente de ácido ascórbico
(mg/mL)
VM = volumen de Medio, 900 mL
a = volumen de la alícuota tomada para el Análisis
L = cantidad declarada de ácido ascórbico
(mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada ,de cinc (Zn) y vitamina C
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ETIQUETADO: La etigueta indica la cantidad de cinc y de
vitamina C, como acido ascórbico, en mg por Tableta de
Disolución Bucal, y la forma salina del cinc y la forma
química de la vitamina C presentes en las Tabletas de
Disolución Bucal.
Gluconato de Cinc-ver Gluconato de Cinc
en Monografías Generales
Ciruelo Africano
DEFINICIÓN
El Ciruelo Africano consiste en la corteza de Prunus africana
(Hook f.) Kalkman (Pygeum africanum Hook f.) (Fam. Rosa-
ceae). Contiene no menos de 9,0% de materia extraíble.
5914 Ciruelo Africano / Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 1 O mg/mL de ER Extracto de Ci-
ruelo Africano USP en cloroformo
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER ,B-Sitosterol USP
en cloroformo
Solución muestra: Transferir a un aparato soxhlet 1O g
de material vegetal en polvo. Extraer con 150 mL de
cloruro de metileno durante 4 horas. Evaporar el ex-
tracto al vacío hasta sequedad. Disolver el residuo en
1 O mL de cloruro de metileno.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Cloruro de metileno en una cámara
saturada , en la superficie externa y más delgados en su lado
Solución reveladora: Acido sulfúrico y agua (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
no menos de 15 cm y secar la placa en una corriente
de aire. Rociar la placa con Solución reveladora y ca-
lentar la placa a 100º durante 1 O minutos. Observar
la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: El cromatograma obtenido
con la Solución muestra presenta una zona violeta rojiza
que se torna marrón grisácea cerca del origen y que
corresponde en color y valor Rr a la del cromatograma
de la Solución estándar A; una zona violeta rojiza que se
torna marrón grisácea a un valor Rr de aproximada-
mente 0,08, que corresponde en color y valor Rr a la
del cromatograma de la Solución estándar B; sobre estas
manchas puede haber una zona marrón grisácea que
corresponde en color y valor Rr a la del cromatograma
de la Solución estándar A. Otras zonas coloreadas de
diferentes intensidades pueden observarse en el croma-
tograma de la Solución muestra.
COMPOSICIÓN
• MATERIA EXTRAÍBLE
Análisis: Extraer 2,00 g del material en polvo en un
aparato Soxhlet con 150 mL de alcohol durante 6 ho-
ras. Evaporar la solución hasta sequedad al vacío y secar
el residuo a 105º durante 24 horas.
Criterios de aceptación: No menos de 9,0% de ma-
teria extraíble
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Las piezas de corteza consisten en frag-
mentos largos de dimensiones variables, desde apenas
unos pocos centímetros hasta 1 m de largo con un gro-
sor que varía de unos pocos mm a 1-2 cm. Es de color
marrón, más o menos oscuro en la superficie externa y
marrón claro a marrón rojizo en la superficie interna. La
parte externa de la corteza presenta un ritidoma muy
oscuro y fisurado que en muestras de árboles viejos está
fragmentado en placas más o menos cuadradas de
1-5 cm. El grosor varía de 1 mm en plantas jóvenes o
ramas hasta 5-8 mm en plantas viejas. La superficie ex-
terna también puede estar cubierta con líquenes blan-
quecinos o con musgo delgado filamentoso. La corteza
interna, bajo el ritidoma, es más clara y presenta una
coloración más rojiza, con una hendidura larga y fibrosa
de color marrón rojizo a marrón claro y marrón oscuro,
USP 37
generalmente con grietas de estratificación concéntri-
cas. La superficie interna es más clara y presenta arru-
gas pequeñas.
Microscópicas: El corte transversal de la corteza pre-
senta una capa suberizada con un grosor que depende
de la edad de la planta y que está compuesta de múlti-
ples capas de células pequeñas y cuadradas con paredes
de grosor moderado. Presenta un parénquima cortical
de células más o menos redondas, con pocas formacio-
nes aparentes de esclereidas de paredes muy delgadas,
bien definidas. A menudo, en el parénquima, existen
grupos de células que contienen drusas de oxalato;
también pueden observarse algunas células más gran-
des con paredes gruesas. Muestra un líber con zonas de
floema y radios medulares. Las porciones de floema
contienen grupos de células fibrosas con paredes muy
engrosadas as1 como elementos de floema y parén-
quima, que algunas veces contienen drusas de oxalato.
Los radios medulares son de forma cónica, más grandes
interno; también pueden contener drusas de oxalato.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(~61): No más de 5,0%
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 60º durante 15 ho-
ras: pierde no más de 10,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la IJlanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto de Ciruelo Africano USP
ER ,B-Sitosterol USP
Ciruelo Africano, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Ciruelo Africano contienen Extracto de Ci-
ruelo Africano. Las Cápsulas contienen no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
Extracto, calculado como esteroles y ferulato de docosilo.
IDENTIFICACIÓN
• A. Los tiempos de retención de los picos de campesterol,
estigmasterol y ¡3-sitosterol de la Solución muestra corres-
ponden a los de la Solución estándar, según se obtienen
en la prueba de Contenido de Esteroles .
• B. El tiempo de retención del pico de ferulato de doco-
silo de la Solución muestra corresponde al de la Solución
estándar, según se obtienen en la prueba de Contenido de
Ferulato de Docosilo.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ESTEROLES
Solución de derivatización: Bis(trimetilsilil)acetamida y
trimetilclorosilano (9: 1)
Solución de estándar interno: 2 mg/mL de 5a-coles-
tano en cloroformo
Solución madre de aptitud del sistema: 2 mg/mL de
campesterol, de estigmasterol y de ER ,B-Sitosterol USP
Solución de aptitud del sistema: Mezclar 2,0 mL de la
Solución madre de aptitud del sistema y 2,0 mL de la
Solución de estándar interno, y diluir con cloroformo
hasta 1 O ml. Evaporar 500 µL de esta solución hasta se-
quedad usando una corriente de nitrógeno. Disolver el
residuo en 80 µL de Solución de derivatización y 20 µL
de piridina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O
minutos a temperatura ambiente.
USP 37
Solución madre del estándar: 2,0 mg/ml de ER f3-Si-
tosterol USP en cloroformo
Solución estándar: Mezclar 2,0 ml de la Solución ma-
dre del estándar y 2,0 ml de la Solución de estándar
interno, y diluir con cloroformo hasta 1 O ml. Evaporar
500 µL de esta solución hasta sequedad usando una co-
rriente de nitrógeno. Disolver el residuo en 80 µL de
Solución de derivatización y 20 µL de piridina. Dejar en
reposo durante no menos de 1O minutos a temperatura
ambiente.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Cápsulas
equivalente a 100 mg de la cantidad declarada de Ex-
tracto a un matraz de fondo redondo de 100 ml. Agre-
gar 2,0 ml de la Solución de estándar interno y 20 ml
de ácido clorhídrico diluido. Acoplar un condensador y
someter a reflujo en un baño a 100º durante 30 minu-
tos. Enfriar la solución a temperatura ambiente y ajustar
agregando aproximadamente 5 ml de hidróxido de so-
dio 1O N hasta un pH de 8. Extraer dos veces usando
50 ml de éter cada vez, lavar las fases orgánicas recogi-
das con 50 ml de agua, y evaporar la fase orgánica
hasta sequedad al vacío. Disolver el residuo con 4 ml
de cloroformo y transferir a un cartucho que contenga
500 mg de relleno L8 acondicionado con un volumen
de n-hexano equivalente a 2 veces el volumen de la
columna. [NOTA-Un cartucho adecuado es Chroma-
bond NH2, fabricado por Macheray Nagel, o equiva-
lente.] Recoger el eluato. Eluir dos veces con un volu-
men de una mezcla de cloroformo e isopropanol (2: 1)
equivalente a 1 columna. Combinar los eluatos y evapo-
rar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1 O ml de clo-
roformo. Evaporar 500 µL de esta solución hasta seque-
dad bajo una corriente de nitrógeno. Disolver el residuo
con 80 µL de Solución de derivatización y 20 µL de piri-
dina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O minutos
a temperatura ambiente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar, de 0,32 mm x 30 m, recubierta con
fase G27 de 0,25 µm de espesor
Temperatura
Detector: 285º
Inyector: 285º
Columna: Ver la tabla de programa de temperatura
siguiente.
Tiempo de
Espera (Hold
Time)
Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera-
Inicial Temperatura Final tura Final
(º) (º/mln) (º) Cmln)
250 o 250 5 tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
250 5 320 según sea ne-
cesario
Gas transportador: Helio. [NOTA-Ajustar la velocidad
de flujo del gas transportador para obtener un tiempo
de retención de 19 minutos para f3-sitosterol.]
Gas de compensación: Helio
Volumen de inyección: 2 µL
Tipo de inyección: Sistema de inyección dividida
Relación de partición: 1 :50
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 5a-co-
lestano, campesterol, estigmasterol y /3-sitosterol son
aproximadamente 0,66; 0,94; 0,96 y 1,00,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2 entre campesterol y
estigmasterol
Suplementos Dietéticos /Ciruelo Africano 5915
Eficiencia de la columna: No menos de 150 000 pla-
tos teóricos para el pico de 5u-colestano
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico
.r.ertinente
Analisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Identificar las señales correspondientes a los analitos
pertinentes por comparación con los cromatogramas
obtenidos con la Solución de aptitud del sistema.
Calcular los porcentajes de la cantidad declarada de
Extracto como esteroles en la porción de las Cápsulas
tomada:
Resultado = (LRu/Rs) x (Cs x V/W) x (Aw x 100/LE) x
100/L
LRu =suma de los cocientes de respuesta de
campesterol, estigmasterol y /3-sitosterol
relativos al estándar interno de la Solución
muestra
Rs = cociente entre los picos de /3-sitosterol y
estándar interno de la Solución estándar
Cs = concentración de /3-sitosterol en la Solución
madre del estándar (mg/ml)
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar
(2,0 ml)
w = peso de la muestra de Cápsulas tomada para
preparar la Solución muestra (mg)
Aw = peso promedio del contenido de Cápsulas
(mg/Cápsula)
= contenido de esteroles en 100 mg del Extracto
usado para preparar las Cápsulas (m9)
L = cantidad declarada de Extracto por Capsula
(mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90%-110% de la cantidad de-
clarada de Extracto, calculado como esteroles
• CONTENIDO DE FERULATO DE DOCOSILO
Solución A: Metanol y agua (95:5)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Solución A y Solución B (17:3)
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Feru-
lato de Docosilo USP en cloroformo y diluir, en dilucio-
nes sucesivas si fuera necesario, con acetonitrilo para
obtener una concentración de 0,01 mg/ml. Pasar a
través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Pesar el contenido de no menos de
20 Cápsulas y transferir una cantidad del material equi-
valente a 0,2 mg de ferulato de docosilo a un vaso de
precipitados de 50 ml. Agregar 5 ml de cloroformo y
disolver en un baño ultrasónico. Transferir a un matraz
volumétrico de 20 ml con ayuda de no más de 2 ml
de cloroformo. Diluir con acetonitrilo a volumen y mez-
clar. Pasar a través de un filtro de membrana con un
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 323 nm
Columna: 4 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 25º
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 320 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 700 platos
teóricos para el pico de ferulato de docosilo
Factor de asimetría: No más de 2,0 para ferulato de
docosilo
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de los analitos.
5916 Ciruelo Africano / Suplementos Dietéticos
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Ex-
tracto de ferulato de docosilo en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs x V/W) x (Aw x 100/L¡) x
100/L
ru = respuesta del pico de ferulato de docosilo de
la Solución muestra
rs = respuesta del pico de ferulato de docosilo de
la Solución estándar
Cs = concentración de ER Ferulato de Docosilo USP
en la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de Solución, muestra (20,0 mL)
W = peso de la muestra de Capsulas tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
Aw = peso promedio del contenido de Cápsulas
(mg/Cápsula)
LE = contenido de ferulato de docosilo en 100 mg
del Extracto usado para preparar las Cápsulas
(mg)
L = cantidad declarada de Extracto por Cápsula
(mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90%-110% de la cantidad de-
clarada de Extracto, calculado como ferulato de doco-
silo y esteroles (de Contenido de Esteroles)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Prueba de Rup-
tura para Cápsulas Blandas , y una zona violeta rojiza que se torna marrón grisácea ~
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUJ.NTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETETICOS (2021 ): El recuento total bacte-
riano no excede de 1000 ufc/g. El recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
1000 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLÓGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SE!'!CIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Las
Capsul~s cumplen c~n los requisitos de las pruebas para
de~erminar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia
col1.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial el artículo a
partir. ?el. cu~I se prep~raron las Cápsulas.' La etiqueta
ta!11b1en indica, la cant~da9 de Extracto en mg/Cápsula.
Etiquetar las Capsulas 1nd1cando la cantidad de esteroles
y ferulato de docosilo como porcentaje del Extracto con-
ten)do en las Cápsulas.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ferulato de Docosilo USP
ER Extracto de Ciruelo Africano USP
ER ,B-Sitosterol USP
Extracto de Ciruelo Africano
DEFINICIÓN
El Ex~racto de Ci~uelo Africano se prepara a partir de Ciruelo
Africano reducido a polvo, usando disolventes adecuados
Con~iene no menos de 90% y no más de 11 0% de la ·
cantidad declarada de ferulato de docosilo y no menos de
90% y no más de 110% de la cantidad declarada de este-
roles totales, como ,B-sitosterol, calculado con respecto a
la materia seca.
USP 37
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 15 mg/mL de ER Extracto de Ci-
ruelo Africano USP en cloroformo
Solución estándar B: 2 mg/mL de ER ,B-Sitosterol USP
en cloroformo
Solución muestra: Disolver 150 mg de Extracto en
1O mL de cloroformo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Cloruro de metileno en una cámara
saturada
S~l';l~ión reveladora: Ácido sulfúrico y agua (1 :1)
Anahs1s
Muestras: Solución estándar A Solución estándar B y
Solución muestra '
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
no menos de 15 cm y secar la placa en una corriente
de aire. Rociar la placa con Solución reveladora y ca-
lentar la placa a 100º durante 1O minutos. Observar
la placa bajo luz blanca.
Cr!!erios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta una zona violeta rojiza que se
torna marrón grisácea cerca del origen y que corres-
ponde en color y valor RF a la de la Solucion estándar k
un valor RF de 0,08, que corresponde en color y valor RF
a la del cromatograma de la Solución estándar B; sobre
estas manchas puede haber una zona marrón grisácea
qu~ corresponde en color y valor RF a la de la Solución
estandar A; y otras zonas coloreadas de diferentes inten-
sidades pueden observqrse en la Solución muestra.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Ferulato de Docosilo.
Cr!!erios de aceptación: E~ cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta un pico de ferulato de docosilo
que corresponde en tiempo de retención al pico princi-
pal en el cromatograma de la Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ESTEROLES
Solución de derivatización: Bis(trimetilsilil)acetamida y
trimetilclorosilano (9:1)
Solución de estándar interno: 2 mg/mL de 5a-coles-
tano en cloroformo
Solución madre de aptitud del sistema: 2 mg/mL de
campesterol, de estigmasterol y de ER ,B-Sitosterol USP
Solución de aptitud del sistema: Mezclar 2,0 mL de la
Solución madre de aptitud del sistema y 2,0 mL de la
Solución de estándar interno, y diluir con cloroformo
hasta 1O mL. Evaporar 500 µL de esta solución hasta se-
quedad usando una corriente de nitrógeno. Disolver el
residuo en 80 µL de Solución de derivatización y 20 µL
de piridina. Dejar en reposo durante no menos de 1O
minutos a temperatura ambiente.
Solución madre del estándar: 2,0 mg/mL de ER [3-Si-
tosterol USP en cloroformo
Solución estándar: Mezclar 2,0 mL de la Solución ma-
dre del estándar y 2,0 mL de la Solución de estándar
interno, y diluir con cloroformo hasta 1O ml. Evaporar
500 µL de esta solución hasta sequedad usando una co-
rriente de nitrógeno. Disolver el residuo en 80 µL de
Solución de derivatización y 20 µL de piridina. Dejar en
reposo durante no menos de 1O minutos a temperatura
ambiente.
Solución muestra: Transferir 100 mg de Extracto a un
matraz ~~ fondo r~dondo de 100 ml. Agrec;¡ar 2,0 mL
de Soluoon de estandar interno y 20 mL de acido clorhí-
drico diluido. Acoplar un condensador y someter a re-
USP 37
flujo en un baño a 100º durante 30 minutos. Enfriar la
solución hasta temperatura ambiente y ajustar a un pH
de 8 agregando aproximadamente 5 mL de hidróxido
de sodio 1 O N. Extraer dos veces usando 50 mL de éter
cada vez, lavar las fases orgánicas recolectadas con
50 mL de agua y evaporar la fase orgánica al vacío
hasta sequedad. Disolver el residuo con 4 mL de cloro-
formo y transferir a un cartucho relleno con 500 mg de
material L8 1 previamente acondicionado con un voíu-
men de n-hexano equivalente a 2 veces el volumen de
la columna. Recoger el eluato. Eluir dos veces, con un
volumen equivalente a 1 columna, de una mezcla de
cloroformo e isopropanol (2:1 ). Combinar los eluatos y
evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1O mL
de cloroformo. Evaporar 500 µL de esta solución hasta
sequedad bajo una corriente de nitrógeno. Disolver el
residuo con 80 µL de Solución de derivatización y 20 µL
de piridina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O
minutos a temperatura ambiente.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar, de 0,32 mm x 30 m; recubierta con
fase G27 de 0,25 µm de espesor
Temperaturas
Inyector: 285º
Detector: 285º
Columna: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Espera (Hold
Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera-
Inicial Temperatura Final
(º) fº-/min' 'º'
250 o 250
250 5 320
Gas transportador: Helio. [NOTA-La velocidad de
flujo del gas transportador debe ajustarse para obtener
un tiempo de retención de aproximadamente 19 mi-
nutos para /3-sitosterol.]
Gas de compensación: Helio
Volumen de inyección: 2 µL
Tipo de inyección: Sistema de inyección dividida
Relación de partición: 1 :50
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 5a-co-
lestano, campesterol, estigmasterol y /3-sitosterol son
aproximadamente 0,66; 0,94; 0,96 y 1,00,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2 entre campesterol y
estigmasterol
Eficiencia de la columna: No menos de 150 000 pla-
tos teóricos para el pico de 5a-colestano
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico
r.ertinente
Analisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Identificar las señales correspondientes a los analitos
pertinentes por comparación con los cromatogramas
obtenidos con la Solución de aptitud del sistema.
Calcular por separado los porcentajes de campesterol,
estigmasterol y /3-sitosterol, como /3-sitosterol, respecti-
vamente, en la porción de Extracto de Ciruelo Africano
tomada:
e= (Ru!Rs) X Cs X (V/W) X 100
1 Un cartucho adecuado es Chromabond NH2, fabricado por Macheray Na-
gel, o un cartucho equivalente.
Suplementos Dietéticos / Ciruelo Africano 591 7
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
esterol correspondiente y el estándar interno
de la Solución muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de /3-
sitosterol y el estándar interno de la Solución
estándar
Cs = concentración de /3-sitosterol en la Solución
madre del estándar (mg/mL)
V = volumen de Solución madre del estándar
tomado para preparar la Solución estándar
(mL)
W = peso de Extracto de Ciruelo Africano tomado
para preparar la Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
esteroles totales como /3-sitosterol:
Resultado = ('LC/ L) x 100
e = porcentaje individual de cada esterol, según se
calculó anteriormente
L = cantidaddeclarada de esteroles totales en el
Extracto de Ciruelo Africano tomado
Criterios de aceptación: 90%-11 0% de la cantidad de-
clarada de esteroles totales como /3-sitosterol con res-
pecto a la materia seca
• CONTENIDO DE FERULATO DE DOCOSILO
Solución A: Metanol y agua (95:5)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Solución A y Solución B (17:3)
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Feru-
lato de Docosilo USP en cloroformo y diluir con aceto-
nitrilo hasta obtener una concentración de 0,02 mg/ml.
Tiempo de Pasar a través de un filtro con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor.
Time) Solución muestra: Agregar a 250 mg de Extracto 5 mL
de cloroformo y diluir con acetonitrilo hasta 25 ml. Pa-
tura Final sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
lmin) µm o menor, desechando los primeros 4 mL de filtrado.
5 Sistema cromatowáfico
o (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 323 nm
Columna: 4 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 25º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 700 platos
teóricos para el pico de ferulato de docosilo
Factor de asimetría: No más de 2,0 para ferulato de
docosilo
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de ferulato de docosilo (P) en la
porción de Extracto tomada:
P = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de ferulato de docosilo de la
Solución muestra
rs = área del pico de ferulato de docosilo de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Ferulato de Docosilo USP
en la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de Extracto tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
ferulato de docosilo:
Resultado = (PI L) x 100
5918 Ciruelo Africano / Suplementos Dietéticos
P = porcentaje de ferulato de docosilo en la
porción de Extracto tomada
L = cantidad declarada de ferulato de docosilo en
el Extracto de Ciruelo Africano (%)
Criterios de aceptación: 90%-110% de la cantidad de-
clarada de ferulato de docosilo con respecto a la ma-
teria seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método,!! (231): 20 µg/g . VALORACIÓN
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561 ): No más de 4 µg/kg de aflatoxinas totales B1, B2,
Gl y G2; no más de 2 µg/kg de aflatoxina Bl
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos .
• EXTRACTOS BOTÁNICOS, Preparaciones (565): Cumple con
los requisitos en Requisitos Farmacopeicos Generales, Disol-
ventes Residuales
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar 1,0g de Extracto du-
rante 3 horas a 11 Oº: pierde no más de 10% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 0,5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se preparó el artículo. Etiquetar indi-
cando el contenido en porcentaje de esteroles totales
como /3-sitosterol y de ferulato de docosilo. También
cumple con los requisitos en Extractos Botánicos (565),
Etiquetado.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ferulato de Docosilo USP
ER Extracto de Ciruelo Africano USP
ER /3-Sitosterol USP
Clorhidrato de Cisteína-ver Clorhidrato
de Cisteína en Monografías Generales
Cistina
1( "//S" s---~' (
1' 1 una solución con una concentración conocida de apro-
HO,
'oH
O NH 2
C6H12N204S2
L-Cystine;
3,3'-Disulfanodiilbis [ácido (2R)-2-aminopropanoico]
[56-89-3].
DEFINICIÓN
La Cistina contiene no menos de 98,5% y no más de
101,5% de C6H12N204S2, como L-Cistina, calculado con
respecto a la sustancia seca.
USP 37
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCJÓN,EN EL INFRARROJO (197K)
• B. ROTACION OPTICA, Rotación Específica (781 S): -215 a
-225, determinada a 20º
Solución muestra: 20 mg/mL, en ácido clorhídrico 1 N
• C. El valor Rr de la mancha principal de la Solución mues-
tra en la prueba de Impurezas Orgánicas corresponde al
de la Solución estándar.
• PROCEDIMIENTO
Solución muestra: Transferir aproximadamente O, 1 g
de Cistina a un matraz con tapón de vidrio y disolver
en una mezcla de 2 mL de hidróxido de sodio diluido
(1 en 20) y 1O mL de agua. Agregar 1O mL de solución
de bromuro de potasio (200 g/L en agua ), 50,0 mL de
bromato de potasio O, 1 N SV y 15 mL de ácido clorhí-
drico diluido (17 en 100). Tapar el matraz de inmediato
y enfriar en un baño de agua-hielo. Dejar en reposo
protegida de la luz durante 1O minutos .
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración residual
Solución volumétrica: Bromato de potasio O, 1 N SV
Solución de retrovaloración: Tiosulfato de sodio O, 1
N SV
Detección del punto final: Calorimétrica
Equivalencia: Cada mL de bromato de potasio O, 1 N
SV equivale a 2,403 mg de C6H12N204S2 con respecto
a la sustancia seca .
Análisis: Agregar 1,5 g de yoduro de potasio y después
de 1 minuto valorar con tiosulfato de sodio O, 1 N SV,
usando almidón SR como indicador. Realizar una deter-
minación con un blanco y hacer las correcciones
necesarias.
Criterios de aceptación: 98,5%-101,5% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de O, 1%
• CLORUROS V SULFATOS, Cloruros (221 ): No más de
200 pfm. Una porción de 0,7 g no presenta más cloruro
que e correspondiente a 0,40 mL de ácido clorhídrico
0,01 N.
• CLORUROS V SULFATOS, Sulfatos (221 ): No más de
200 pfm. Una porción de 1,2 g no presenta más sulfato
que e correspondiente a 0,25 mL de ácido sulfúrico
0,020 N .
• HIERRO (241): No más de 1o ppm
• METALES PESADOS, Método I (231): No más de 10 ppm
Impurezas Orgánicas
• PROCEDIMIENTO
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Cistina
USP en ácido clorhídrico 1 N y diluir con a9ua para
obtener una solución con una concentracion conocida
de aproximadamente 0,02 mg/ml.
Solución muestra: Disolver una cantidad de Cistina en
ácido clorhídrico 1 N y diluir con agua para obtener
ximadamente 1O mg/mL.
Solución de aptitud del sistema: Disolver cantidades
de ER Cistina USP y ER Clorhidrato de Arginina USP en
ácido clorhídrico 1 N, y diluir con agua para obtener
240,30 una solución con una concentración conocida de apro-
ximadamente 0,4 mg/mL de cada uno.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para
cromatografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Una mezcla de amoníaco y 2-propanol
(3:7)
USP 37
Solución reveladora: Disolver 0,2 g de ninhidrina en
1 00 ml de una mezcla de butano! y ácido acético
2 N (95:5).
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu-
ción de aptitud del sistema
Proceder según se indica en Cromato9rafía (621 ), Cro-
matografía en Capa Delgada. Despues de secar la
placa al aire, rociar con Solución reveladora y calentar
a una temperatura entre 100º y 105º durante apro-
ximadamente 1 5 minutos. Observar la placa. El cro-
matograma de la Solución de aptitud del sistema pre-
senta dos manchas claramente separadas.
Criterios de aceptación: Ninguna mancha secundaria
de la Solución muestra es de mayor tamaño o intensi-
dad que la mancha principal de la Solución estándar.
Impurezas individuales: No más de 0,2%
Impurezas totales: No más de 2,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
durante 3 horas: pierde no más de 0,2% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Arginina USP
ER Cistina USP
Gluconato de Cobre-ver Gluconato de
Cobre en Monografías Generales
Colecalciferol-ver Colecalciferol en
Monografías Generales
Colecalciferol, Solución-ver Colecalciferol,
Solución en Monografías Generales
Coleus Forskohlii
DEFINICIÓN
El Coleus Forskohlii consiste en las raíces secas de Plectran-
thus barbatus Andrews, también conocida como Coleus
barbatus (Andrews) Benth. y Coleus forskohlii Briq. (Fam.
Lamiaceae). Contiene no menos de 0,4% de forscolina,
calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: 50 µg/ml de ER Forscolina USP
en acetonitrilo. Someter a ultrasonido durante aproxi-
madamente 1 O minutos.
Solución estándar B: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri-
fugar, y usar el sobrenadante.
Solución madre de la muestra: Usar Solución muestra,
preparada según se indica en la prueba de Contenido de
Forscolina.
Solución muestra: Diluir 1 O ml de Solución madre de la
muestra con acetonitrilo hasta 25 ml.
Suplementos Dietéticos / Coleus 5919
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño de partícula promedio de 1 0-15 µm (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL en bandas de 4 mm
Fase móvil: Tolueno y acetato de etilo (85: 15)
Solución reveladora: Vainillina al 5% en ácido acético
glacial y ácido sulfúrico al 10% en agua (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa.
Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con Solu-
ción reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
105º, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta lo siguiente: una zona de color
violeta debida a forscolina a un valor RF de aproximada-
mente 0,3, que corresponde en color y valor RF a la del
cromatograma de la Solución estándar A; y una zona
menor de color violeta, una zona de color rosado y una
zona de color rojo ladrillo a valores RF de aproximada-
mente O, 1; 0,62 y 0,69, debidas a isoforscolina, 1, 9-
didesoxiforscolina y crocetindialdehído, respectiva-
mente. Las zonas detectadas en el cromatograma de la
Solución muestra corresponden en posición y color a las
zonas en el cromatograma de la Solución estándar B. Se
pueden observar otras zonas menores en los cromato-
gramas de la Solución muestra y la Solución estándar B.
• B. El cromatograma de la Solución muestra obtenido en
la prueba de Contenido de Forscolina presenta un pico
principal al tiempo de retención correspondiente a fors-
colina en el cromatograma de la Solución estándar A.
Identificar otros picos de diterpenos en el cromatograma
de la Solución muestra por comparación con el cromato-
grama de la Solución estándar B y el cromatograma de
referencia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Coleus Forskohlii USP. El cromatograma de la Solución
muestra presenta un pico adicional correspondiente a
isoforscolina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE FORSCOLINA
Solución A: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solución B: Usar agua filtrada y desgasificada.
Solución estándar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad de ER Forscolina USP en acetonitrilo para obtener
una solución con una concentración conocida de apro-
ximadamente 1,0 mg/ml.
Solución estándar B: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo, someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri-
fugar, y usar el sobrenadante. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Coleus Forskohlii, reducido a polvo fino, a un matraz
de fondo redondo de 100 ml provisto con un conden-
sador de reflujo. Agregar 50 ml de acetonitrilo, someter
a reflujo en un baño de agua durante 20 minutos, en-
friar a temperatura ambiente, y decantar el sobrena-
dante. Repetir hasta que el último extracto sea incoloro.
Combinar los extractos, filtrar, concentrar al vacío, y
ajustar el volumen con acetonitrilo hasta 1 00 ml. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor,
desechando los primeros 5 ml del filtrado.
Solución de aptitud del sistema: Solución estándar A y
tolueno al 0,01 % en acetonitrilo (1 :1)
5920 Coleus / Suplementos Dietéticos USP 37

Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. PRUEBAS ESPECÍFICAS

• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Tiempo Solución A Solución B Macroscópicas: Raíz fresca de color amarillo rosado pá-
Cmin) (O/o) (%) lido, cilíndrica a subcilíndrica, con extremos ahusados,
con una longitud de 5-1 2 cm y un diámetro de
o 45 55
1-2 cm; .su s~perficie ~s. áspera, y presenta raicillas late-
25 45 55 rales o cicatrices de raicillas y lenticelas que se presen-
28 95 5 tan transversalmente. El artículo farmacopeico es de
35 95 5 color marrón oscuro, con superficie áspera, irregular-
36 45 55 mente cilíndrico, longitudinalmente arrugado, con es-
45 45 55 trías irregulares y crestas prominentes; la fractura es
corta; la superficie cortada es de color blanco amari-
Sistema cromatográfico llento; presenta un olor característico y aromático agra-
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.) dable, y un sabor ligeramente amargo a acre.
Modo: HPLC Histología
Detector: UV 220 nm Sección transversal de las raíces: Presenta una forma
Columna: 4,6 mm x 25 cm; 5 µm, 100 Á circular irregular; súber estrecho de 10-15 hileras de
Temperatura de la columna: 30 ± 2º células suberosas tangencialmente elongadas y dis-
Velocidad de flujo: 1,8 mL/min puestas radialmente; la corteza está compuesta de
Volumen de inyección: 20 µL 10-15 hileras de células parenquimáticas de pared del-
Aptitud del sistema gada que presentan esclereidas y cristales de oxalato
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y de calcio; cámbium vascular en forma de un anillo
Solución de aptitud del sistema continuo; el xilema se presenta en radios estrechos de
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados vasos, unas pocas fibras lignificadas están presentes en
para isoforscolina y forscolina son 0,51 y 1,00, las raíces mas antiguas, radios medulares de 3-8 célu-
respectivamente.] las de ancho, y el parénquima presenta unas pocas
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solución esclereidas, canales de oleorresina y granos de almidón
estándar B es similar al cromatograma de referencia simples; la médula está compuesta de células paren-
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Coleus quimáticas en las raíces jóvenes y es reemplazada por
Forskohlii USP usado. vasos, fibras y traqueidas dispuestos de manera com-
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de fors- , pacta en las raíces maduras.
colina y tolueno, Solución de aptitud del sistema • PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Coleus Fors-
Desviación estándar relativa: No más de 2% deter- kohlii reducida a polvo fino a 105° durante 3 horas:
minada a partir del pico de forscolina en inyecciones pierde no más de 12,0%,de su peso.
repetidas, Solución estándar A • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
Análisis No más de 6%, determinado en 1,0 g de Coleus Fors-
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y ko~lii reducida a polvo fir;io
Solución muestra • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, So- cohol, Método 2 (561): No menos de 25,0%
lución estándar By el cromatograma de referencia • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Co- tal de microorganismos aerobios no excede de 1os ufc/g;
leus Forskohlii USP, identificar los tiempos de reten- el recuento total combinado de hongos filamentosos y
ción de los picos correspondientes a isoforscolina y levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
forscolina. terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
Calcular el porcentaje de forscolina en la porción de 103 ufc/g. ,
Coleus Forskohlii tomada: • PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sen,cia de Salmonella spp., y Escherichia coli.
ru = respuesta del pico de forscolina de la Solución • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
muestra (561): Cumple con los requisitos.
rs = respuesta del pico de forscolina de la Solución
estándar A REQUISITOS ADICIONALES
Cs = concentración de ER Forscolina USP en la • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
Solución estándar A (mg/mL) cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
Cu = concentración de Coleus Forskohlii en la temperatura ambiente.
Solución muestra (mg/mL) • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Criterios de aceptación: No menos de 0,4% con res- latín y después de la denominación oficial, las partes de
pecto a la materia seca la ¡_>lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
IMPUREZAS ER Forscolina USP
Impurezas Inorgánicas , , ER Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 2%
• METALES PESADOS, Método fil (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas, ,
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Coleus Forskohlii en Polvo
Orgánica Extraña (56J): No más de 2,0%,
• PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método DEFINICIÓN
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): El Coleus Forskohlii en Polvo es Coleus Forskohlii reducido a
Cumple con los requisitos. polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,4%
de forscolina, calculado con respecto a la materia seca.
USP 37 _\uplementos Dietéticos / Coleus 5921

IDENTIFICACIÓN en un baño de agua durante 20 minutos, enfriar a tem-

• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA peratura ambiente, y decantar el sobrenadante. Repetir
DELGADA (201) hasta que el último extracto sea incoloro. Combinar los
Solución estándar A: 50 µg/mL de ER Forscolina USP extractos, filtrar, concentrar al vacío, y ajustar el volu-
en acetonitrilo. Someter a ultrasonido durante aproxi- men con acetonilrilo hasta 100 ml. Antes de la inyec-
madamente 1O minutos. ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo tamaño de poro de 0,45 ~lm o menor, desechando los
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul- primeros 5 mL del filtrado.
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri- Solución de aptitud del sistema: Una mezcla de Solu-
fugar, y usar el sobrenadante. ción estándar A y tolueno al 0,01% en acetonitrilo (1 :1)
Solución madre de la muestra: Usar Solución muestra, Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
preparada según se indica en la prueba de Contenido de
Forscolina. Tiempo Solución A Solución B
Solución muestra: Diluir 1O mL de Solución madre de la lmin) 1%) lº/o)
muestra con acetonitrilo hasta 25 mL.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
o 45 55
tamaño de partícula promedio de 10-15 µm (placas 25 45 55
para TLC) 28 95 5
Volumen de aplicación: 1O µL en bandas de 4 mm 35 95 5
Fase móvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo 36 45 55
(85:15) 45 45 55
Solución reveladora: Vainillina al 5% en ácido acético
glacial y ácido sulfúrico al 10% en agua (1 :1) Sistema cromatográfico
Análisis (Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y Modo: HPLC
Solución muestra Detector: UV 220 nm ,
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro- Columna: 4,6 mm x 25 cm; 5 µm, 100 A
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato- Temperatura de la columna: 30 ± 2º
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó- Volumen de inyección: 20 µL
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa. Aptitud del sistema
Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con Solu- Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
ción reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a Solución de aptitud del sistema
105º, y observar bajo luz visible. [NOTA-Los tiempos de retención relativos para isofors-
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta colina y forscolina son 0,51 y 1,00, respectivamente.]
una zona violeta debida a forscolina a un valor RF de Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solución
aproximadamente 0,3, que corresponde en color y estándar B es similar al cromatograma de referencia
valor RF a la de la Solucion estándar A; y una zona me- provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Coleus
nor de color violeta, una zona de color rosado y una Forskohlii USP usado.
zona de color rojo ladrillo a valores RF de aproximada- Desviación estándar relativa: No más de 2% deter-
mente O, 1; 0,62 y 0,69 debidas a isoforscolina, 1, 9-di- minada a partir del pico de forscolina en inyecciones
desoxiforscolina y crocetindialdehído, respectivamente. repetidas, Solución estándar A
Las zonas detectadas de la Solución muestra correspon- Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de fors-
den en posición y color a las zonas de la Solución están- colina y tolueno, Solución de aptitud del sistema
dar B. Se pueden observar otras zonas menores de la Análisis
Solución muestra y la Solución estándar B. Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
• B. La Solución muestra de la prueba de Contenido de Fors- Solución muestra
colina presenta un pico principal al tiempo de retención Usando el cromatograma de la Solución estándar A, So-
correspondiente al de forscolina de la Solución estándar A. lución estándar By el cromatograma de referencia
Identificar otros picos de diterpenos en la Solución mues- provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Co-
tra por comparación con la Solución estándar B y el cro- leus Forskohlii USP usado, identificar los tiempos de
matograma de referencia provisto con el lote de ER Ex- retención de los picos correspondientes a isoforsco-
tracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP usado. El lina y forscolina.
cromatograma de la Solución muestra presenta un pico Calcular el porcentaje de forscolina en la porción de
adicional correspondiente a isoforscolina. Coleus Forskohlii en Polvo tomada:
COMPOSICIÓN Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
• CONTENIDO DE FORSCOLINA
Solución A: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado. ru = respuesta del pico de forscolina de la Solución
Solución B: Usar agua filtrada y desgasificada. muestra
Solución estándar A: Someter a ultrasonido una canti- rs = respuesta
del pico de forscolina de la Solución
dad de ER Forscolina USP en acetonitrilo para obtener estándar A
una solución con una concentración conocida de apro- Cs = concentración de ER Forscolina USP en la
ximadamente 1,0 mg/ml. Solución estándar A (mg/mL)
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo Cu = concentración de Coleus Forskohlii en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul- en la Solución muestra (mg/mL)
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri- Criterios de aceptación: No menos de 0,4% con res-
fugar, y usar el sobrenadante. Antes de la inyección, pecto a la materia seca
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor. IMPUREZAS
Solución muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g Impurezas Inorgánicas ,
de Coleus Forskohlii en Polvo a un matraz de fondo • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
redondo de 100 mL provisto con un condensador de (561): No más de 2%
reflujo. Agregar 50 mL de acetonitrilo, someter a reflujo
5922 Coleus /Suplementos Dietéticos
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánica_s , _
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón ama-
rillento, con un olor característico y aromático agradable,
y con un sabor ligeramente amargo a acre. Bajo el mi-
croscopio, presenta células parenquimáticas con canales
de oleorresina, granos de almidón y prismas de oxalato
de calcio, glóbulos de aceite, granos de almidón simples,
células suberosas, esclereidas, células pétreas, vasos pun-
teados y fibras de paredes delgadas.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Coleus Fors-
kohlii en Polvo a 105º durante 3 horas: pierde no más de
12,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 6%, determinado en 1,0 g de Coleus Fors-
ko~lii en Polvo , Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con Solu-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 25,0%
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , zona de color rojo ladrillo a valores RF de aproximada-
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sen,cia de Salmonella spp., y Escherichia coli. .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561): Cumple con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la r,lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Forscolina USP
ER Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP
Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii se prepara a partir
de Coleus Forskohlii, usando disolventes adecuados tales
como metanol, acetato de etilo, hexano o una mezcla de
estos disolventes. La relación entre el material vegetal y el
extracto está entre 65:1 y 35:1. Contiene no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
forscolina, calculado con respecto a la sustancia seca.
Contiene sustancias agregadas adecuadas como
portadores.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: 50 µg/mL de ER Forscolina USP
en acetonitrilo. Someter a ultrasonido durante aproxi-
madamente 1 O minutos.
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri-
fugar, y usar el sobrenadante.
USP 37
Solución muestra: 5 mg/mL de Extracto en Polvo de
Coleus Forskohlii en acetonitrilo. Someter a ultrasonido
durante aproximadamente 15 minutos, centrifugar, y
usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño de partícula promedio de 1 0-15 µm (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL en bandas de 4 mm
Fase móvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85:15)
Solución reveladora: Vainillina al 5% en ácido acético
glacial y ácido sulfúrico al 10% en agua (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa.
ción reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
105º, y observar bajo luz visible .
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
una zona violeta debida a forscolina a un valor RF de
aproximadamente 0,3, que corresponde en color y
valor RF a la de la Solución estándar A; y una zona me-
nor de color violeta, una zona de color rosado y una
mente O, 1; 0,62 y 0,69 debidas a isoforscolina, 1, 9-di-
desoxiforscolina y crocetindialdehído, respectivamente.
Las zonas detectadas de la Solución muestra correspon-
den en posición y color a las zonas de la Solución están-
dar B. Se pueden observar otras zonas menores de la
Solución muestra y la Solución estándar B.
• B. La Solución muestra de la prueba de Contenido de Fors-
colina presenta un pico principal al tiempo de retención
correspondiente al de forscolina de la Solución estándar A.
Identificar otros picos de diterpenos en la Solución mues-
tra por comparación con la Solución estándar B y el cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP usado. El
cromatograma de la Solución muestra presenta un pico
adicional correspondiente a isoforscolina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE FORSCOLINA
Solución A: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solución B: Usar agua filtrada y desgasificada.
Solución estándar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad de ER Forscolina USP en acetonitrilo para obtener
una solución con una concentración conocida de apro-
ximadamente 1,0 mg/ml.
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri-
fugar, y usar el sobrenadante. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo de Coleus Forskohlii equivalente a aproxima-
damente 25 mg de forscolina a un matraz volumétrico
de 25 mL y agregar 15 mL de acetonitrilo. Someter a
ultrasonido y calentar en un baño de agua durante
aproximadamente 1 O minutos, enfriar, diluir con aceto-
nitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyección, pa-
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
5 mL del filtrado.
Solución de aptitud del sistema: Una mezcla de Solu-
ción estándar A y tolueno al 0,01 % en acetonitrilo (1 :1)
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Colina 5923

Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1oi ufc/g.
Tiempo Solución A Solución B • PROCEDIMIENTOS MICROBIOLÓGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
(min\ (%) (%) SENCIA DE MKROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
o 45 55 con los requ1s1tos de las pruebas para determinar la au-
sen,c1a de Salmonel!a spp., y Escherichia coli.
25 45 55 • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Af!atoxinas
28 95 5 (561): Cumple con los requisitos.
35 95 5
36 45 55 REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
45 45 55 cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
Sistema cromatográfico temperatura ambiente controlada.
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.) • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Modo: HPLC latín y después de la denominación oficial la parte de la
Detector: UV 220 nm plan~a. de dond.e se obtuvo el artículo. Cu~ple con otros
Columna: 4,6 mm x 25 cm; 5 µm, 100 Á requ1s1tos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
Temperatura de la columna: 30 ± 2º • OTROS REQUISITOS: Cumpl.e con los requisitos de la
Velocidad de flujo: 1,8 ml/min prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
Volumen de inyección: 20 µL (5~5).
Aptitud del sistema • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y ER Forscolina USP
Solución de aptitud del sistema ER Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP
[NO!A-Los tiempos de retención relativos para isofors-
col1~a.y forscolin~ son 0,51 y 1,00, respectivamente.]
Req1m1tos de a_pt~tud: El cromatograma de la Solución
estandar B es similar al cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Coleus Bitartrato de Colina
Forskohlii USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2% deter-
minada a partir del pico de forscolina en inyecciones
repetidas, Solución estándar A
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de fors-
colina y tolueno, Solución de aptitud del sistema
Análisis C9H19N01 253 25
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y 2-Hydroxyethanaminium, -N,N,N-trimethyl-, [R-(R*,R*)]-2,3-
Solución muestra dihydroxybutanedioate (1 :1 );
Usando el cromatograma de la Solución estándar A So- L-(+)-Tartrato de (2-hidroxietil)trimetilamonio, sal (1 :1)
lución estándar By el cromatograma de referenci~ [87-67-2].
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Co-
DEFINICIÓN
leus Forskohlii USP usado, identificar los tiempos de
retención de los picos correspondientes a isoforsco- El Bi~artrato de Colina <=;ontiene no menos de 99,0% y no
lina y forscolina. mas de 100,5% de b1tartrato de colina (C9H 19N0 7), calcu-
lado con respecto a la sustancia anhidra.
Calcular el porcentaje de forscolina en la porción de
Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii tomada: IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 •B.
Muestra: 1 g
ru = respuesta del pico de forscolina de la Solución
muestra
Análisis: Disolver 1.~ Muestra en 20 ml de agua y agre-
rs = respuesta del pico de forscolina de la Solución g'.lr 2. ml de soluc10~, de cloruro de potasio (1 en 4).
estándar A
Criterios de aceptac1on: Se forma un precipitado
blanco de bitartrato de potasio.
Cs = concentración de ER Forscolina USP en la
Solución estándar A (mg/ml) VALORACIÓN
Cu = concentración de Extracto en Polvo de Coleus • PROCEDIMIENTO
Forskohlii en la Solución muestra (mg/ml) Muestra: 200 mg
Cri~erios de aceptación: ~o menos de 90,0% y no Sistema volumétrico
mas de 110,0% de la cantidad declarada de forscolina (Ver Vo!umetría (541 ).)
con respecto al extracto seco. Modo: Valoración directa
IMPUREZAS
Solución volumétrica: Ácido perclórico O, 1 N SV
Detección del punto final: Potenciométrica
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método fil (231): No más de 20 ppm Bl~i:i~o: 5~ ml de ácido acético glacial
Anahs1s: Disolver la Muestra en 50 ml de ácido acético
Impurezas Orgánicas glacial y valorar con Solución volumétrica .
• PROCEDIMIENTO: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método
Calcular el porcentaje de bitartrato de colina
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Cumple con los requisitos. (C9H19NÜ1) en la Muestra tomada:

PRUEBAS ESPECÍFICAS Resultado = [(V - B) X N X F X 100]/W

• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
V = volumen de solución volumétrica consumido
Polvo de Coleus Forskohlii a 105º durante 3 horas: pierde
por la Muestra (mL)
no más de 5,0% de su peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
B = volumen de solución volumétrica consumido
por el Blanco (ml)
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 04 ufc/g.
N = normalidad de la solución volumétrica
(mEq/mL)
5924 Colina /Suplementos Dietéticos
F =factor de equivalencia, 253,2 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 99,0%-100,5% con respecto
a la sustancia anhidra
IMPUREZAS
• DISOLVENTES RESIDUALES (467): Cumplen con los requisi-
tos, excepto que el límite de 1,4-dioxano es 1O µg/g.
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de o, 1%
• ARSÉNICO, Método I (211)
Análisis: Agregar 30 ml de agua y 5 ml de ácido clor-
hídrico para disolver la muestra.
Criterios de aceptación: No más de 2 ppm
• PLOMO (251)
[NOTA-Usar cloruro de metileno en lugar de cloroformo
para preparar la Solución de Extracción de Ditizona y So-
lución de Ditizona Estándar.]
Solución A: Transferir 8,4 g de solución de hidróxido de
sodio (1 en 2) a un frasco de plástico, agregar 100 ml
de hidróxido de amonio y mezclar.
Solución estándar: Transferir 1,0 ml de la Solución de
Plomo Estándar Diluida a un embudo de separación que
contenga 25,0 ml de agua.
Solución muestra: Disolver 3,00 g de Bitartrato de Co-
lina en un embudo de separación que contenga
25,0 ml de agua.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Por separado, agregar 6,0 ml de Solución de Citrato de
Amonio y 3,0 ml de Solución de Cianuro de Potasio a
la Solución estándar y la Solución muestra. Extraer cada
una de las soluciones resultantes tres veces con por-
ciones de 5,0 ml de Solución de Extracción de Diti-
zona, agitando durante 60 segundos y drenando
cada extracto en otro separador. Agitar las soluciones
de ditizona combinadas durante 30 segundos con
20,0 ml de ácido nítrico (1 en 100) y desechar la
capa de cloruro de metileno. Agregar 6,0 ml de Solu-
cion de Cianuro y Amoníaco, 2 ml de Solución A y
1O ml de Solución de Ditizona Estándar, y agitar du-
rante 45 segundos. Dejar que las fases se separen y
medir la absorbancia de la capa inferior a 51 O nm
con un espectrofotómetro adecuado.
Criterios de aceptación: La absorbancia de la Solución
muestra es no mayor que la absorbancia de la Solución
estándar (no más de 0,3 ppm).
• l\'JETALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 1o ppm
• LIMITE DE AMINAS TOTALES
Solución estándar: 500 µg/ml de clorhidrato de
trimetilamina
Solución muestra: Transferir 10,0 g de Bitartrato de Co-
lina a un vaso de precipitados que contenga una barra
mezcladora recubierta de plástico, agregar 70 ml de hi-
dróxido de sodio SR y 1 30 ml de agua, y mezclar hasta
disolver.
Solución madre de aptitud del sistema: 1O µg/ml de
clorhidrato de trimetilamina
Solución de aptitud del sistema: Transferir 10,0 ml de
Solución madre de aptitud del sistema a un vaso de pre-
cipitados que contenga una barra mezcladora recu-
bierta de plástico, agregar 160 ml agua y 30,0 ml hi-
dróxido de sodio SR, y mezclar hasta disolver.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador,
detector de gases, específico para amoníaco con refe-
rencia interna conectado a un medidor de pH capaz de
medir los potenciales con una reproducibilidad mínima
de ±0, 1 mV (ver pH (791 )).
Línea de respuesta del estándar: Mezclar 30,0 ml de
hidróxido de sodio SR y 1 70 ml de agua. Agregar una
barra mezcladora recubierta de plástico, insertar el elec-
trodo en la solución y registrar el potencial, en mV.
Continuar mezclando y, en intervalos de 5 minutos,
agregar 0,200; 0,600; 1,00 y 2,00 ml de Solución están-
dar, y registrar el potencial después de cada adición.
Graficar los logaritmos de las concentraciones acumula-
USP 37
das de clorhidrato de trimetilamina (0,50; 1,50; 2,50 y
5,00 ~tg/ml) en función del potential, en mV, y deter-
minar la pendiente (S) de la Línea de respuesta del es-
tándar para el electrodo.
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Proceder según se indica en Análisis, excepto que debe
remplazarse la Solución muestra con la Solución de apti-
tud del sistema y en la fórmula siguiente remplazar W
con V, que es igual a 1O ml.
Requisitos de aptitud: El cambio total es no menos
de 1O mV para una adición acumulada de 0,4 ml de
la Solución estándar; la cantidad de clorhidrato de tri-
metilamina encontrada es 8,5-11,5 µg/L.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Enjuagar el electrodo, insertarlo en la Solución muestra,
mezclar y registrar el potencial, en mV. Agregar
O, 100 ml de la Solución estándar y registrar el poten-
cial. Agregar O, 100 ml adicionales de la Solución es-
tándar y registrar el potencial. [NOTA-Si el cambio
total después de la segunda adición de la Solución
estándar es menos de 1 O mV, agregar una tercera
alícuota de 0,200 mL.]
Calcular el contenido, en µg/g, de aminas totales, como
clorhidrato de trimetilamina, en la porción de muestra
tomada:
Resultado= (Cs x VA)![(F - 1) x W]
C = concentración de la Solución estándar (µg/ml)
VA = volumen total de Solución estándar agregado a
la Solución muestra (ml)
W = peso de Bitartrato de Colina tomado para
preparar la Solución muestra (g)
F = factor de corrección, calculado por la fórmula:
F = antilog [(mVF - mVo)/S]
mVF = lectura final después de las adiciones de la
Solución estándar (mV)
mVo = lectura inicial de la Solución muestra (mV)
S = pendiente de la Línea de respuesta del estándar
para el electrodo
Criterios de acept!¡lción: No más de 1O µg/g
• PUREZA (ROMATOGRAFICA
Solución amortiguadora: 7, 1 9/L de fosfato dibásico
de sodio anhidro. Ajustar con acido fosfórico a un pH
de 2,5.
Fase móvil: Solución amortiguadora y acetonitrilo (7:3)
Solución estándar: Transferir una cantidad, no más de
100 mg, de ER Cloruro de Colina USP a un vial de
24 ml con tapa de rosca y agregar 400 mg de cloruro
de 3,5-dinitrobenzoílo y 1 O ml de acetonitrilo. Tapar el
vial, calentar a 55º y continuar calentando durante 2
horas. Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 ml
de agua. Dejar en reposo durante 5 minutos. Transferir
cuantitativamente la solución a un matraz volumétrico
de 25 ml y diluir con acetonitrilo a volumen. Diluir un
volumen de esta solución con Fase móvil hasta obtener
una concentración de 2,0 µg/ml de ER Cloruro de Co-
lina USP.
Solución muestra: Transferir 500 mg de Bitartrato de
Colina a un tubo de centrífuga, agregar 2,0 ml de agua
y mezclar por rotación suave hasta disolver. Agregar
0,5 ml de solución de cloruro de potasio (7,5 en 25),
centrifugar, y transferir 1,0 ml del sobrenadante a un
vial de 24 ml con tapa de rosca. Secar a 120º durante
2 horas. Agregar 400 mg de cloruro de 3,5-dinitroben-
zoílo y 1O ml de acetonitrilo. Tapar el vial, calentar a
55º durante 2 horas. Enfriar a temperatura ambiente,
agregar 5 ml de agua y dejar en reposo durante 5 mi-
nutos. Transferir cuantitativamente esta solución a un
matraz volumétrico de 50 ml y diluir con Fase móvil a
volumen. Pipetear y transferir 2,0 ml de la solución a
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Colina 5925

un matraz volumétrico de 25 ml y diluir con Fase móvil VALORACIÓN

a volumen. • PROCEDIMIENTO
Sistema cromato9ráfico Muestra: 120 mg
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) Sistema volumétrico
Modo: HPLC (Ver Volumetna (541 ).)
Detector: UV 208 nm Modo: Valoración directa
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7 Solución volumétrica: Nitrato de plata O, 1 N SV
Temperatura de la columna: 30º Detección del punto final: Potenciométrica
Velocidad de flujo: 1 ml/min Blanco: 35 ml de agua. Agregar 3 gotas de ácido
Volumen de inyección: 20 µL acético.
Aptitud del sistema Análisis: Disolver la Muestra en 35 ml de agua y agre-
Muestra: Solución estándar gar 3 <;JOtas de ácido acético. Valorar con Solución
Requisitos de aptitud volumetrica.
Factor de capacidad (k'): No menos de 2 Calcular el porcentaje de cloruro de colina (CsH14CINO)
Desviación estándar relativa: No más de 5%, deter- en la Muestra tomada:
minada a partir del pico del derivado de colina
Análisis Resultado = [(V - B) X N X F X 1 00]/W
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porción V = volumen de solución volumétrica consumido
de Bitartrato de Colina tomada: por la Muestra (ml)
B = volumen de solución volumétrica consumido
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,1/M,2) x 100 por el Blanco (ml)
N = normalidad de la solución volumétrica
ru = respuesta del pico de cada impureza, (mEq/mL)
excluyendo las de derivado de colina y ácido F =factor de equivalencia, 139,6 mg/mEq
3,5-dinitrobenzoico de la Solución muestra W = peso de la Muestra (mg)
r5 = respuesta del pico del derivado de colina de la Criterios de aceptación: 99,0%-100,5% con respecto
Solución estándar a la sustancia anhidra
C5 = concentración de ER Cloruro de Colina USP en
la Solución estándar (mg/ml) IMPUREZAS
Cu = concentración de Bitartrato de Colina en la • DISOLVENTES RESIDUALES (467): Cumple con los requisitos,
Solución muestra (mg/ml) excepto que el límite para 1,4-dioxano es 1 O µg/g.
M,1 = peso molecular de bitartrato de colina, 253,25 • RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 0,05%
M,2 = peso molecular de cloruro de colina, 139,62 • ARSÉNICO, Método I (211 >
Criterios de aceptación Análisis: Agregar 30 ml de agua y 5 ml de ácido clor-
Impurezas individuales: No más de 0,3% hídrico para disolver la muestra.
Impurezas totales: No más de 2,0% Criterios de aceptación: No más de 2 ppm
• PLOMO (251)
PRUEBAS ESPECÍFICAS [NOTA-Usar cloruro de metileno en lugar de cloroformo
• ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica (781 S) para preparar la Solución de Extracción de Ditizona y la
Solución muestra: 400 mg/ml en agua Solución de Ditizona Estándar.]
Criterios de aceptación: +17,5º a +18,5º Solución A: Transferir 8,4 g de solución de hidróxido de
• PH (791): 3,0-4,0, en una solución (1 en 1 O) sodio (1 en 2) a un frasco de plástico, agregar 100 ml
• DETERMINACION DE AGUA, Método I (921 ): No más de de hidróxido de amonio y mezclar .
0,5% Solución estándar: Transferir 1,0 ml de Solución de
Plomo Estándar Diluida a un embudo de separación que
REQUISITOS ADICIONALES contenga 25,0 ml de agua .
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Solución muestra: Disolver 3,00 g de Cloruro de Colina
cerrados. en un embudo de separación que contenga 25,0 ml de
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11) agua.
ER Bitartrato de Colina USP Análisis
ER Cloruro de Colina USP Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar por separado 6,0 ml de Solución de Citrato de
Amonio y 3,0 ml. de Solución de Cianuro de Potasio a
la Solución estándar y a la Solución muestra. Extraer
cada una de las soluciones resultantes tres veces con
Cloruro de Colina porciones de 5,0 ml de Solución de Extracción de Diti-
zona, agitando durante 60 segundos y escurriendo
H3\lH3 cada extracto en otro separador. Agitar las soluciones
HO~~'CH3
CI de ditizona combinadas durante 30 segundos con
20,0 ml de ácido nítrico (1 en 100) y desechar la
capa de cloruro de metileno. Agregar 6,0 ml de Solu-
CsH14CINO 139,62 cion de Cianuro y Amoníaco, 2 ml de Solución A y
(2-Hydroxyethyl)trimethylammonium chloride; 1 O ml de Solución de Ditizona Estándar, y agitar du-
Cloruro de 2-hidroxi-N,N,N-trimetiletanaminio [67-48-1]. rante 45 segundos. Dejar que las fases se separen y
medir la absorbancia de la capa inferior a 51 O nm
DEFINICIÓN
con un espectrofótometro adecuado.
El Cloruro de Colina contiene no menos de 99,0% y no más Criterios de aceptación: La absorbancia de la Solución
de 100,5% de cloruro de colina (CsH14CINO), calculado muestra es no mayor que la absorbancia de la Solución
con respecto a la sustancia anhidra. estándar (no más de 0,3 ppm) .
IDENTIFICACIÓN • ~ETALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 10 ppm
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K) • LIMITE DE AMINAS TOTALES
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191): Solución estándar: 500 µg/ml de clorhidrato de trime-
Una solución (1 en 20) cumple con los requisitos. tilamina en agua
5926 Colina /Suplementos Dietéticos
Solución muestra: Transferir 1 0,0 g de Cloruro de Co-
lina a un vaso de precipitados que contenga una barra
agitadora recubierta de plástico, agregar 1 70 ml de
agua y 30,0 ml de hidroxido de sodio SR, y mezclar
hasta disolver.
Solución madre de aptitud del sistema: 1 O µg/ml de
clorhidrato de trimetilamina en agua
Solución de aptitud del sistema: Transferir 1 0,0 ml de
Solución madre de aptitud del sistema a un vaso de pre-
cipitados que contenga una barra mezcladora recu-
bierta de plástico, agregar 160 ml de agua y 30,0 ml
de hidróxido de sodio SR, y mezclar hasta disolver.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador,
detector de gases específico para amoníaco, con refe-
rencia interna conectado a un medidor de pH capaz de
medir los potenciales con una reproducibilidad mínima
de ±0, 1 mV (ver pH (791 >).
Línea de respuesta del estándar: Mezclar 30,0 ml de
hidróxido de sodio SR y 1 70 ml de agua. Agregar una
barra mezcladora recubierta de plástico, insertar el elec-
trodo en la solución y registrar el potencial, en mV.
Continuar mezclando y, en intervalos de 5 minutos,
agregar 0,200; 0,600; 1,00 y 2,00 ml de Solución están-
dar, y registrar el potencial después de cada adición.
Graficar los logaritmos de las concentraciones de clorhi-
drato de trimetilamina acumuladas (0,50; 1,50; 2,50 y
5,00 µg/ml) en función del potencial, en mV, y deter-
minar la pendiente (S) de la Línea de respuesta del es-
tándar para el electrodo.
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Proceder según se indica en Análisis, excepto que se
debe reemplazar la Solución muestra con la Solución
de aptitud del sistema y en la fórmula siguiente reem-
plazar W con V, que es igual a 1 O ml.
Requisitos de aptitud: El cambio total es no menos
de 1 O mV para una adición acumulada de 0,4 ml de
la Solución estándar; la cantidad de clorhidrato de tri-
metilamina encontrada es 8,5-11,5 µg/L.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Enjuagar el electrodo, insertarlo en la Solución muestra,
mezclar y registrar el potencial, en mV. Agregar
O, 100 ml de la Solución estándar y registrar el poten-
cial. Agregar O, 100 ml adicionales de la Solución están-
dar y registrar el potencial. [NOTA-Si el cambio total
después de la segunda adición de la Solución estándar
es menos de 1 O mV, agregar una tercera alícuota de
0,200 mL.]
Calcular el contenido, en µg/g, de aminas totales, como
clorhidrato de trimetilamina, en la porción de muestra
tomada:
Resultado= (Cs x VA)l[(F - 1) x W]
= concentración de la Solución estándar (µg/ml)
= volumen total de la Solución estándar
agregado a la Solución muestra (ml)
w = peso de Cloruro de Colina tomado para
preparar la Solución muestra (g)
F = factor de corrección, calculado por la fórmula:
F = antilog [(mVF - mVo)/S]
mVF = lectura final después de las adiciones de la
Solución estándar (mV)
mVo = lectura inicial de la Solución muestra (mV)
S = pendiente de la Línea de respuesta del estándar
para el electrodo
Criterios de acept9ción: No más de 1 O µg/g
• PUREZA CROMATOGRAFICA
Solución amortiguadora: 7, 1 9/L de fosfato dibásico
de sodio anhidro. Ajustar con acido fosfórico a un pH
de 2,5.
USP 37
Fase móvil: Solución amortiguadora y acetonitrilo (7:3)
Solución estándar: Transferir una cantidad, no más de
100 mg, de ER Cloruro de Colina USP a un vial de
24 ml con tapa de rosca y agregar 400 mg de cloruro
de 3,5-dinitrobenzoílo y 1 O ml de acetonitrilo. Tapar el
vial, calentar a 55º y continuar calentando durante 2
horas. Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 ml
de agua. Dejar en reposo durante 5 minutos. Transferir
cuantitativamente la solución a un matraz volumétrico
de 25 ml y diluir con acetonitrilo a volumen. Diluir un
volumen de esta solución con Fase móvil hasta obtener
una concentración de 2,0 µg/ml de ER Cloruro de Co-
lina USP.
Solución muestra: Transferir 11 O mg de Cloruro de Co-
lina a un vial de 24 ml con tapa de rosca. Secar a 120º
durante 2 horas. Agregar 400 mg de cloruro de 3,5-
dinitrobenzoílo y 1 O ml de acetonitrilo. Tapar el vial,
calentar a 55º y continuar calentando durante 2 horas.
Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 ml de
agua. Dejar en reposo durante 5 minutos. Transferir
cuantitativamente la solución a un matraz volumétrico
de 50 ml y diluir con Fase móvil a volumen. Pipetear y
transferir 2,0 ml de la solución a un matraz volumétrico
de 25 ml y diluir con Fase móvil a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 208 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): No menos de 2
Desviación estándar relativa: No más de 5%, deter-
minada a partir del pico de derivado de colina.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porción
de Clorhidrato de Colina tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cada impureza,
excluyendo las de derivado de colina y ácido
3,5-dinitrobenzoico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico del derivado de colina de la
Solución estándar
C5 = concentración de ER Cloruro de Colina USP en
la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración de Cloruro de Colina en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación
Impurezas individuales: No más de 0,3%
Impurezas totales: No más de 2,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PH (791 >: 4,0-7,0, en una solución (1 en 1O)
• DETERMINACION DE AGUA, Método I (921 >: No más de
0,5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11>
ER Cloruro de Colina USP
USP 37
Co-Ql O-ver Ubidecarenona en Suplementos
Dietéticos
Condroitina Sulfato de Sodio
Chondroitin, hydrogen sulfate, sodium salt;
Sulfato sódico de condroitina [9082-07-9].
DEFINICIÓN
La Condroitina Sulfato de Sodio es la sal sódica del glicosa-
minoglicano lineal sulfatado que se obtiene de cartílagos
bovinos, porcinos o avícolas de animales saludables y do-
mésticos usados en alimentos para humanos. La Condroi-
tina Sulfato de Sodio está compuesta principalmente por
sal sódica del copolímero del éster sulfúrico de N-acetil-
condrosamina (2-acetamido-2-desoxi-/3-D-galactopiranosa)
con el ácido D-glucurónico. Estas hexosas están unidas en
el polímero en forma alternada mediante uniones /3-1,4 y
/3-1,3. Las unidades de condrosamina en el glicosaminogli-
cano prevaleciente están monosulfatadas principalmente
en la posición 4 y, con menor frecuencia, en la posición
6. Contiene no menos de 90,0% y no más de 105,0% de
condroitina sulfato de sodio, calculado con respecto a la
sustancia seca.
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremadamente
higroscópica una vez que se seca. Evitar la exposición a la
atmósfera y pesar inmediatamente.]
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN ~N EL INFRARROJO (197K)
Sodio (191):
• B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES,
Cumple con los requisitos.
Solución muestra: 0,5 g en 1 O mL de agua
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Soluciones estándar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/mL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solución muestra: Transferir 1 00 mg de Condroitina
Sulfato de Sodio seca a un matraz volumétrico de
100 mL, disolver en 30 mL de agua y diluir con agua a
volumen.
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobásico de potasio, 492 mg de fosfato dibásico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en 900 mL de
agua y ajustar con hidróxido de potasio o ácido fosfó-
rico a un pH de 7,0 ± 0,2. Diluir con agua hasta 1 L y
mezclar minuciosamente.
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración volumétrica con detección
fotométrica
Solución volumétrica: 1 mg/mL de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua. Desgasificar antes de usar.
Detección del punto final: Turbidimétrica con una
sonda fototoeléctrica
Análisis: Transferir 5,0 mL de la Solución estándar y de
la Solución muestra a sendos vasos de valoración y agre-
gar 25 mL de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con un fototrodo ya sea a 420;
550 ó 660 nm. Ajustar el instrumento a cero en modo
de absorbancia. Valorar con Solución volumétrica usando
el fototrodo para determinar el punto final turbidimétri-
camente. A partir de una ecuación de regresión lineal,
que se calcula usando los volúmenes de Solución volu-
métrica consumidos en función de las concentraciones
de las Soluciones estándar, determinar la concentración
de condroitina sulfato de sodio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de condroitina sulfato de sodio
en la porción de Condroitina Sulfato de Sodio tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
Suplementos Dietéticos / Condroitina 5927
C = concentración de condroitina sulfato sodio en
la alícuota de la Solución muestra, obtenida a
partir de la ecuación de regresión (mg/mL)
Cu = concentración de Condroitina Sulfato de Sodio
en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-1 05,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): 20,0%-30,0% con res-
pecto a la sustancia seca
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221 ): No más de 0,50%;
una porción de O, 1 O g no presenta más cloruro que el
correspondiente a 0,7 mL de ácido clorhídrico 0,020 N.
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221 >
Solución muestra: Disolver 200 mg en 40 mL de agua.
Agregar 1 O mL de una solución de cloruro de cetilpiridi-
nio con una concentración de 30 mg/mL y pasar a
través de un filtro. Usar una porción de 25 mL del
filtrado.
Criterios de aceptación: No más de 0,24%; la Solución
muestra no presenta más sulfato que el correspondiente
a 0,25 mL de ácic;Jo sulfúrico 0,020 N.
• PUREZA ELECTROFORETICA
(Ver Electroforesis (726).)
Solución amortiguadora de acetato de bario: Disolver
25,24 g de acetato de bario en 900 mL de agua. Ajustar
con ácido acético a un pH de 5,0 y diluir con agua
hasta 1 000 ml.
Reactivo de tinción: Disolver 1 g de toluidina en
1000 mL de ácido acético O, 1 M.
Solución estándar A: 30 mg/mL de ER Condroitina Sul-
fato de Sodio USP en agua
Solución estándar B: Diluir 1 mL de Solución estándar A
con a9ua hasta 50 mL.
Solucion muestra: 30 mg/mL de Condroitina Sulfato
de Sodio en agua
Análisis: Llenar las cámaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequeña cámara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solución amortiguadora de acetato de bario. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
12-14 cm, en Solución amortiguadora de acetato de ba-
rio durante 1O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
absorbente. Usando un aplicador2 adecuado para elec-
troforesis, aplicar volúmenes iguales (0,5 µL) de Solución
muestra, Solución estándar A y Solución estándar B al
lado más brillante de la membrana colocada en posi-
ción en un soporte de aplicador adecuado o en un pu-
ente de separación en la cámara. Asegurar que ambos
extremos de la membrana estén sumergidos a una pro-
fundidad de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cámaras
con solución amortiguadora. Aplicar una constante de
60 voltios (6 mA al principio) durante 2 horas. [NOTA-
Llevar a cabo la aplicación de soluciones y voltaje den-
tro de los 5 minutos, porque un mayor secado del pa-
pel absorbente reduce la sensibilidad.]
Colocar la membrana en una bandeja de tinción de
plástico y, con el lado de la aplicación hacia abajo,
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo de tin-
ción durante 5 minutos. Luego, mezclar la solución
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y
decolorar en ácido acético al 5% hasta que el fondo se
aclare. Comparar las bandas.
[NOTA-Documentar los resultados tomando una foto-
grafía dentro de los 15 minutos de completada la
decoloración.]
1 Las membranas de acetato de celulosa adecuadas para electroforesis están
disponibles en Malta Chemetron SRL, Milán, Italia (www.maltachemetron.
com); Fluka Chemical Corp., Milwaukee, WI; y DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com).
2 Los aplicadores adecuados están disponibles en DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com) y Helena Laboratories, Beaumont, TX (www.helena.com).
 5928 Condroitina / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: El electroferograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda principal idéntica en
posición a la banda de la Solución estándar A. La banda
de la Solución estándar B es claramente visible a una
movilidad similar a la de la banda de la Solución están-
dar A. Ninguna banda secundaria en el electrofero-
grama de la Solución muestra es más intensa que la
banda de la Solución estándar B. Se encuentra no más
de 2% de cualquier impureza individual. [NOTA-Docu-
mentar los resultados tomando una fotografía dentro de
, los 15 minutq,s de completada la decoloración.]
• LIMITE DE PROTEINA
Solución A: 20 mg/mL de tartrato de sodio dihidrato
Solución B: 1 O mg/mL de sulfato cúprico
Solución C: 20 mg/mL de carbonato de sodio anhidro
en hidróxido de sodio O, 1 M
Reactivo de Folin-Ciocalteu diluido: Diluir Folin-Ciocal-
teu para fenoles SR con agua (1 :5). Preparar inmediata-
mente antes de usar.
Reactivo tartrato cúprico alcalino: Mezclar 1 mL de
Solución A y de Solución B, y agregar lentamente a la
mezcla 100 mL de Solución C, mezclando. Usar dentro
de las 24 horas y desechar después de dicho plazo.
Solución estándar: 36 µg/mL de estándar certificado
de albúmina sérica bovina en agua
Solución muestra: Transferir una porción de Condroi-
tina Sulfato de Sodio, equivalente a 60 mg de la ma-
teria seca, a un matraz volumétrico de 100 mL y disol-
ver y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 750 nm
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Blanco
Agregar 2,0 mL de Reactivo tartrato cúprico alcalino re-
cientemente preparado a tubos de ensayo que con-
tengan 2,0 mL de la Solución estándar, 2,0 mL de la
Solución muestra o 2,0 mL del Blanco. Después de 1O
minutos, agregar 1,0 mL de Reactivo de Folin-Ciocalteu
diluido a cada tubo de ensayo y mezclar inmediata-
mente y de manera vigorosa. Después de 30 minu-
tos, medir la absorbancia de la Solución estándar y la
Solución muestra en función del Blanco.
Criterios de aceptación: No más de 6,0% con respecto
a la materia seca; la absorbancia de la Solución muestra
es no mayor que la absorbancia de la Solución estándar.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1000 ufc/g y el recuento
total combinado de hongos filamentosos y levaduras no
excede de 100 ufc/g. , absorbente. Usando un aplicador2 adecuado para elec-
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 20 ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• TRANSPARENCIA Y COLOR DE LA SOLUCIÓN
Solución muestra: Transferir 2,5 g de Condroitina Sul-
fato de Sodio a un a matraz volumétrico de 50 ml. Di-
solver y diluir con agua exenta de dióxido de carbono a
volumen y observar inmediatamente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 420 nm
Celda: 1 cm
Blanco: Agua exenta de dióxido de carbono
Análisis: Medir la absorbancia de la Solución muestra.
Criterios de aceptación: Su absorbancia es no más de
0,35., ,
• ROTACION OPTICA, Rotación Específica (781 S): -20,0º a
-30,0º
USP 37
Solución muestra: 30 mg/mL
• Pl:I (791 ): 5,5-7,5, en una solución (1 en 100)
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05º
durante 4 horas: pierde no más de 10,0% de su peso.
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremada-
mente higroscópica una vez que se seca. Evitar la exposi-
ción a la atmósfera y pesar inmediatamente.]
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
impermeables.
• ETIQUETADO: Etiquetar indicando la fuente de la que se
derivó el artículo, ya sea bovina, porcina, avícola o una
me,zcla de cualquiera de éstas.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
Condroitina Sulfato de Sodio, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Condroitina Sulfato de Sodio contienen no
menos de 90,0% y no más de 120,0% de la cantidad
declarada de condroitina sulfato de sodio.
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremadamente
higroscópica una vez que se seca. Evitar la exposición a la
atmósfera y pesar inmediatamente.]
IDENTIFICACIÓN
• A. ELECTROFORESIS (726)
Solución amortiguadora de acetato de bario: Disolver
25,24 g de acetato de bario en 900 mL de agua. Ajustar
con ácido acético a un pH de 5,0 y diluir con agua
hasta 1000 ml.
Reactivo de tinción: Azul de toluidina al O, 1% (p/v) en
ácido acético O, 1 M
Solución estándar: Usar la Solución estándar de media
concentración de Contenido de Condroitina Sulfato de
Sodio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Conte-
nido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Análisis: Llenar las cámaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequeña cámara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solución amortiguadora de acetato de bario. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
12-14 cm, en Solución amortiguadora de acetato de ba-
rio durante 1O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
troforesis, aplicar volúmenes iguales (0,5 µL) de la Solu-
ción muestra y de la Solución estándar al lado más bri-
llante de la membrana colocada en posición en un
soporte de aplicador adecuado o en un puente de se-
paración en la cámara. Asegurar que ambos extremos
de la membrana estén sumergidos a una profundidad
de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cámaras con solu-
ción amortiguadora. Aplicar una constante de 60 voltios
(6 mA al principio) durante 2 horas. [NOTA-Llevar a
cabo la aplicación de soluciones y voltaje dentro de los
5 minutos, porque un mayor secado del papel absor-
bente reduce la sensibilidad.]
Colocar la membrana en una bandeja de tinción de
plástico y, con el lado de la aplicación hacia abajo,
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo de tin-
ción durante 5 minutos. Luego, mezclar la solución
1 Las membranas de acetato de celulosa adecuadas para electroforesis están
disponibles en Malta Chemetron SRL, Milán, Italia (www.maltachemetron.
com); Fluka Chemical Corp., Milwaukee, WI; y DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com).
2 Los aplicadores adecuados están disponibles en DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com) y Helena Laboratories, Beaumont, TX (www.helena.com).
USP 37
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y
decolorar en ácido acético al 5% hasta que el fondo se
aclare.
Criterios de aceptación: La mancha principal de la So-
lución muestra presenta la misma migración que la man-
cha principal de la Solución estándar. [NOTA-Documen-
tar los resultados tomando una fotografía dentro de los
15 minutos de completada la decoloración.]
CONTENIDO
• CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Soluciones estándar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/mL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solución muestra: Transferir el equivalente a 100 mg
de condroitina sulfato de sodio, a partir de no menos
de 20 Tabletas, reducidas a polvo fino, a 60 mL de agua
y agitar hasta suspender el polvo en la solución. Some-
ter a ultrasonido en un baño de agua a 65º durante 20
minutos. Retirar del baño, mezclar o agitar durante 5
minutos, diluir con agua hasta 100 mL y centrifugar o
pasar a través de un filtro adecuado.
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobásico de potasio, 492 mg de fosfato dibásico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en aproximada-
mente 900 mL de agua y ajustar con hidróxido de po-
tasio o ácido fosfórico a un pH de 7,0 ± 0,2. Diluir con
agua hasta 1 L y mezclar minuciosamente.
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración volumétrica con detección
fotométrica
Solución volumétrica: 1 mg/mL de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua
Detección del punto final: Turbidimétrica con una
sonda fototoeléctrica
Análisis: Transferir 5,0 mL de la Solución estándar y de
la Solución muestra a sendos vasos de valoración y agre-
gar 25 mL de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con una sonda fotoeléctrica ya
sea a 420, 550 ó 660 nm. Ajustar el instrumento a cero
en modo de absorbancia. Valorar con Solución volumé-
trica usando la sonda fotoeléctrica para determinar el
punto final turbidimétricamente. A partir de una ecua-
ción de regresión lineal, gue se calcula usando los volú-
menes de Solución volumetrica consumidos en función
de las concentraciones de las Soluciones estándar, deter-
minar la concentración de sulfato de condroitina sulfato
de sodio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solución muestra
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de condroitina sulfato
de sodio en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución.
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solución volumétrica y Diluyente: Preparar según se
indica en Contenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Soluciones estándar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/mL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solución muestra: Combinar porciones iguales de las
soluciones extraídas de 6 vasos de disolución y pasar a
Suplementos Dietéticos / Cromo 5929
través de un filtro adecuado; usar la muestra combi-
nada como la muestra de prueba.
Análisis: Transferir 5,0 mL de cada Solución estándar y
una alícuota de la Solución muestra equivalente a apro-
ximadamente 5 mg de condroitina sulfato de sodio a
sendos vasos de valoración. Agregar 25 mL de Diluyente
a cada vaso de valoración. Mezclar hasta obtener una
lectura estable con una sonda fotoeléctrica. Ajustar el
instrumento a cero en modo de absorbancia. Valorar
con Solución volumétrica usando la sonda fotoeléctrica
para determinar el punto final turbidimétricamente, ya
sea a 420, 550 ó 660 nm. A partir de una ecuación de
regresión lineal, que se calcula usando los volúmenes de
Solución volumétrica consumidos en función de la canti-
dad, en mg, de condroitina sulfato de sodio de cada
Solución estándar, determinar la cantidad, en mg, de
condroitina sulfato de sodio en la alícuota de Solución
muestra tomada.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio disuelta:
Resultado = (Ws/a) x (VIL) x 100
Ws = cantidad de condroitina sulfato de sodio en la
alícuota de Solución muestra tomada (mg)
a = volumen de la alícuota de Solución muestra
tomada
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de condroitina sulfato de
sodio (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de condroitina sulfato de sodio.
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: Etiquetar indicando las especies de origen
de las que se obtuvo la condroitina usada para preparar
las Tabletas. Etiquetar indicando las fuentes de la con-
droitina sulfato de sodio, ya sea bovina, porcina, avícola
o una mezcla de cualquiera de éstas. La etiqueta indica
en el panel frontal el contenido de condroitina sulfato de
soqio con respecto a la materia seca.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
Picolinato de Cromo
r("'"'(lo
V
C1sH12N306Cr 418,30
Chromium Tripicolinate
Tripicolinato de Cromo [14639-25-9].
DEFINICIÓN
El Picolinato de Cromo contiene no menos de 98,0% y no
más de 102,0% de picolinato de cromo (C1sH12N306Cr),
calculado con respecto a la sustancia seca.
5930 Cromo /Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197M)
• B.
Solución muestra: 4 mg/mL
Análisis: Agregar 1 mL de hidróxido de sodio 5 N y
1O gotas de peróxido de hidrógeno al 30% a 5 mL de
la Solución muestra, y calentar suavemente durante 2
minutos.
Criterios de aceptación: Se desarrolla un color
amarillo.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de cromo.
Transferir 0,283 g de dicromato de potasio, previamente
secados a 120º durante 4 horas, a un matraz volumé-
trico de 1000 mL, y diluir con agua a volumen. Almace-
nar en un frasco de polietileno.
Soluciones estándar: 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL de
cromo. Transferir por separado 1,0 y 2,0 mL de Solución
madre del estándar a sendos matraces volumétricos de
100 mL y transferir 1,5 y 2,0 mL de Solución madre del
estándar a sendos matraces volumétricos de 50 ml.
Agregar 1,0 mL de ácido nítrico a cada matraz y diluir
el contenido de cada matraz con agua a volumen.
Solución muestra: Transferir 200 mg de Picolinato de
Cromo a un vaso de precipitados de 100 mL y agregar
25 mL de agua. Agregar lentamente 1O mL de ácido ní-
trico y calentar a ebullición durante 1O minutos agi-
tando constantemente por rotación suave. Enfriar la so-
lución, transferir cuantitativamente a un matraz
volumétrico de 500 mL y diluir con agua a volumen.
Filtrar una porción de la solución y transferir 5,0 mL del
filtrado a un matraz volumétrico de 100 mL. Agregar
1 mL de ácido nítrico y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 357,9 nm
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido nítrico diluido
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las Soluciones estándar
y la Solución muestra. Graficar las absorbancias de las
Soluciones estándar en función de la concentración de
cromo, en µg/mL, y trazar la línea recta que mejor se
ajuste a los cuatro puntos graficados. A partir de la
gráfica así obtenida, determinar la concentración de
cromo, en µg/mL, en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de picolinato de cromo
(C18H12N306Cr) en la porción de Picolinato de Cromo
tomada:
Resultado= (Ce,/ Cu) x (M,/A,) x 100
Ce, = concentración de cromo en la Solución
muestra, obtenida a partir de la gráfica
(µg/mL)
Cu = concentración de Picolinato de Cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
M, = peso molecular de picolinato de cromo,
418,31
A, =peso atómico de cromo, 51,996
Criterios de aceptación: 98,0%-102,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Solución muestra: Disolver 30 mg de Picolinato de
Cromo en 30-40 mL de agua y calentar a 70º. Enfriar
durante la noche y filtrar para eliminar el precipitado.
Análisis: Agregar 1 mL de ácido nítrico y de nitrato de
plata SR, y agregar suficiente agua para obtener 50 ml.
USP 37
Mezclar y dejar en reposo durante 5 minutos, protegido
de la luz solar directa.
Criterios de aceptación: Cualquier turbidez formada
no es mayor que la producida en una solución control
tratada de forma similar que contenga 0,25 mL de
ácido clorhídrico 0,002 N (no más de 0,06%).
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Solución muestra: Disolver 100 mg de Picolinato de
Cromo en 30-40 mL de agua y calentar a 90º. Enfriar
durante la noche y filtrar para eliminar el precipitado.
Análisis: Agregar 1 mL de ácido clorhídrico 3 N, 3 mL
de cloruro de bario SR y suficiente agua para obtener
50 ml. Mezclar y dejar en reposo durante 1O minutos.
Criterios de aceptación: Cualquier turbidez formada
no es mayor que la producida en una solución control
tratada de forma similar que contenga 0,2 mL de ácido
sulfúrico 0,02 N (no más de 0,2%).
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
durante 4 horas: pierde no más de 4,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
im¡;iermeables.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Picolinato de Cromo USP
Picolinato de Cromo, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Picolinato de Cromo contienen no menos de
95,0% y no más de 125,0% de la cantidad declarada de
cromo (Cr).
IDENTIFICACIÓN
• A. La Solución muestra preparada según se indica en la
prueba de Contenido proporciona un resultado positivo a
la prueba de cromo, determinado a 357,9 nm, usando
las Condiciones instrumentales de la prueba de Contenido
de Cromo.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE CROMO
Solución madre del estándar A: 1000 µg/mL de
cromo a partir de dicromato de potasio, previamente
secados a 120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en
un frasco de polietileno.
Solución madre del estándar B: Transferir 1,0 mL de
Solución madre del estándar A a un matraz volumétrico
de 100 mL, agregar 5,0 mL de ácido clorhídrico 6 N y
diluir con agua a volumen hasta obtener una solución
con una concentración de 1O µg/mL de cromo.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
B con ácido clorhídrico O, 125 N hasta obtener concen-
traciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL de cromo.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana, ca-
lentar el crisol en una mufla mantenida a aproximada-
mente 550º durante 6-12 horas y enfriar. Agre9ar
60 mL de ácido clorhídrico y calentar a ebullicion suave
sobre una placa de calentamiento o en un baño de
vapor durante 30 minutos, en¡·uagando intermitente-
mente la superficie interna de crisol con ácido clorhí-
drico 6 N. Enfriar y transferir el contenido del crisol a un
matraz volumétrico de 100 ml. Enjuagar el crisol con
pequeñas porciones de ácido clorhídrico 6 N y agregar
los enjuagues al matraz. Diluir con agua a volumen,
mezclar y filtrar, desechando los primeros 5 mL del fil-
trado. Diluir esta solución con ácido clorhídrico O, 125 N
USP 37
hasta obtener una solución con una concentración de
2,5 µg/mL de cromo.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: 357,9 nm (línea de emi-
sión de qomo)
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las Muestras, usando el
Blanco. A partir de una ecuación de regresión lineal,
calculada usando las absorbancias de las Soluciones
estándar en función de la concentración, en µg/mL,
de cromo, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Tabletas tomada:
COMPOSICIÓN
Resultado= (C/Cu) x 100 • CONTENIDO DE DHA
C = concentración determinada de cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 95,0%-125,0%
IMPUREZAS
PRUEBAS DE DESEMPEÑO Impurezas Inorgánicas
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS • LIMITE DE ARSENICO
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegración.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Aceite de Crypthecodinium cohnii
DEFINICIÓN
El Aceite de Crypthecodinium cohnii se obtiene de la fermen-
tación y extracción de algas de la especie Crypthecodinium
cohnii y contiene no menos de 35,0% (p/p) de ácido do-
cosahexaenoico (DHA, por sus siglas en inglés, C22H32Ü2)
(C22: 6 n-3), como el único ácido graso poliinsaturado
significativo presente. Se pueden agregar antioxidantes
adecuados en concentraciones apropiadas.
IDENTIFICACIÓN
• PERFIL DE ÁCIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
Proceder según se indica en Contenido de DHA.
Análisis
Muestras: Solución Estándar 2 y Solución de Prueba 7
Calcular el porcentaje de área de cada ácido graso
como éster metílico en la Solución de Prueba 7:
Resultado = (ru/rT) x 100
ru = respuesta del pico de cada ácido graso
individual como éster metílico
rT = suma de las respuestas de todos los picos,
excepto los picos del disolvente y butil
hidroxitolueno
Criterios de aceptación: El tiempo de retención de los
picos de éster metílico del ácido docosahexaenoico y de
éster metílico del ácido eicosapentaenoico de la Solución
de Prueba 7 corresponde al de la Solución Estándar 2,
según se obtienen en la prueba de Contenido de EPA y
DHA. El porcentaje de área para los ésteres metílicos de
Suplementos Dietéticos / Crypthecodinium 5931
los ácidos grasos de la Solución de Prueba 1 en la
prueba de Contenido de EPA y DHA cumplen con los
requisitos para cada ácido graso presentado en la tabla
siguiente.
Tiempo Límite Límite
de Anota- lnferi- Supe-
Reten- ción or rior
Ácido ción Abrevia- (%de (%de
Graso Relativo da Área) Área)
Ácido linoleico o 52 18:2 n-6 o 1o
Ácido eicosapen-
taenoico o 79 20:5 n-3 o o1
Ácido docosapen-
taenoico o 94 22:5 n-6 o o1
Ácido docosahe-
xaenoico 1 00 22:6 n-3 35 o 47 o
Análisis: Proceder según se indica en, Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinación y Perfil de Acidos Grasos
Omer,¡a-3, Contenido de EPA y DHA.
Criterios de aceptación: No menos de 35,0% (p/p) de
ácido docosahexaenoico (DHA)
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de arsénico tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflon. Agregar
20 mL de agua y 1O mL de ácido nítrico, y entibiar
sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumetrico de 100 mL, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 mL, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
(3:2:5). Un volumen de 5 µL proporciona 0,015 mg de
paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 mL de
Solución Estándar de Arsénico, preparada se~ún se in-
dica en Arsénico (211 ), a un matraz volumetrico de
100 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de ácido ní-
trico, y diluir con agua a volumen. Esta solución con-
tiene O, 1O µg/mL de arsénico.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de arsénico.
Solución muestra: Para preparar la Solución muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrón de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1%,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de teflón de 100 ml. Usar
5932 Crypthecodinium / Suplementos Dietéticos
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de escape para permitir el escape de los
humos. [PRECAUCIÓN-Usar protección adecuada para
los ojos además de ropa y guantes protectores.]
Transferir aproximadamente 500 mg de Aceite de
Crypthecodinium cohnii, pesados con una aproxima-
ción de O, 1 mg, a un vaso de digestión con recubri-
miento interno de teflón. Preparar las muestras por
duplicado. Agregar 15 ml de ácido nítrico y agitar
por rotación suave. Cubrir los vasos con tapas de-
jando fuera el accesorio de ventilación. Digerir previa-
mente durante toda la noche bajo una campana. Co-
locar la membrana de ruptura en el accesorio de
ventilación y ajustar la tapa. Colocar todos los vasos
en el plato giratorio del horno de microondas. Co-
nectar los tubos de escape a la trampa de ventilación
y conectar la línea del sensor de presión al vaso apro-
piado. Iniciar un procedimiento de digestión de dos
etapas calentando el microondas con una potencia
del 15% durante 15 minutos, seguida de una poten-
cia del 25% durante 45 minutos. Retirar el plato gira-
torio con los vasos del horno y dejar que los vasos se
enfríen a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede
usar un baño de agua fresca para acelerar el proceso
de enfriamiento.] Ventilar los vasos cuando alcancen
la temperatura ambiente. Retirar las tapas y agregar
lentamente 2 ml de peróxido de hidrogeno al 30% a
cada uno. Dejar que las reacciones cesen y sellar los
vasos. Volver a colocar los vasos en el plato giratorio
del horno de microondas y calentar durante 15 minu-
tos adicionales a una potencia del 30%. Retirar los
vasos del horno y dejar que se enfríen a temperatura
ambiente. Transferir los digeridos enfriados a un ma-
traz volumétrico de 25 ml y diluir con agua a
volumen.
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura ajustada a
20º y un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a
2400º usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argón dete-
nido, y limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estan-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para arsénico. Determinar el área del pico en la línea
de emisión de arsénico a 193,7 nm, corregida por la
absorción de fondo. Graficar las áreas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estándar en función de sus
contenidos de arsénico, en µg/ml, y calcular la línea
de regresión que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentración, C, en µg/ml, de arsénico en cada
ml de la Solución muestra interpolando a partir de la
línea de regresión.
Calcular el contenido de arsénico en la porción de
Aceite de Crypthecodinium cohnii tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
USP 37
W = peso de Aceite de Crypthecodinium cohnii
tomado para preparar la Solución muestra
(g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1 O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 1 ml de ácido nítrico y 40 ml de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir
con ª$lua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de
fosfato y ,0,01 m9 de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido n1trico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volumé-
trico de 100 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml de esta solución a un segundo matraz volumé-
trico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
ción contiene O, 1 O µg/ml de plomo.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a 2100º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para plomo. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de plon:o, en f.lg/ml, y calcular la línea d_e regresión
que me1or se a1uste a los puntos. Determinar la con-
centración, C, en µg/ml, de plomo en cada ml de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de
regresión.
USP 37
Calcular el contenido de plomo en la porción de
Aceite de Crypthecodinium cohnii tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Crypthecodinium cohnii
tomado para preparar la Solución muestra
(g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 mL, y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar A: 0, 1372 mg/mL de ni-
trato de cadmio
Solución madre del estándar B: Solución madre del es-
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución
contiene O, 1O µg/mL de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porción de agua y
ácido nítrico.]
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de cadmio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar
ra muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2400º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para cadmio. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de cadmio, en µg/mL, y calcular la línea de regresión
que mejor se ajuste a los puntos.
Suplementos Dietéticos / Crypthecodinium 5933
Determinar la concentración, C, en µg/mL, de cadmio
en cada mL de la Solución muestra interpolando a
partir de la línea de regresión.
Calcular el contenido de cadmio en el Aceite de Crypt-
hecodinium cohnii tomado:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Crypthecodinium cohnii
tomado para preparar la Solución muestra
(g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE MERCURIO: Proceder según se indica en Mer-
curio (261 ), Método /la, excepto que se debe usar una
Solución Estándar de Mercurio con el equivalente a O, 1
µg/mL de mercurio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico combinando
los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL de
Solución de Permanganato de Potasio.
Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Índice de Anisidina (401): No más
de 20,0 , ,
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Indice de Acidez (Acidos Grasos Li-
bres) (401 ): Los ácidos grasos libres en 1O g requieren
para su neutralización no más de 1,42 mL de hidróxido
de sodio O, 1 N. ,
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más
de 5,0 ,
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX)
(401): No más de 26, calculado como:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = índice de peróxido
AV = índice de anisidina
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
más de 3,5%
• PESO ESPECÍFICO (841): 0,91-0,93
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposición al
calor excesivo.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de ácido do-
cosahexaenoico en mg/g. También indica el nombre y la
COl)centración de cualquier antioxidante agregado.
• ESTA~DARES DE REFER~NCIA USP (11)
ER ~ster Etílico del ~cido Docosahexaenoico USP
ER Ester Etílico del Acido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Aceite de Crypthecodinium cohnii,
Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Aceite de Crypthecodinium cohnii se prepa-
ran a partir de Aceite de Crypthecodinium cohnii y contie-
nen no menos de 95,0% y no más de 105,0% de la can-
tidad declarada de ácido docosahexaenoico (DHA, por sus
siglas en inglés; C22H32Ü2) (C22:6 n-3).
IDENTIFICA$=1ÓN
• PERFIL DE ACIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
Proceder según se indica en Contenido de DHA.
5934 Crypthecodinium /Suplementos Dietéticos USP 37

Análisis PRUEBAS DE DESEMPEÑO

Muestras: Solución Estándar 2 y Solución de prueba 7 • DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
Calcular el porcentaje de área de cada ácido graso requisit9s de Prueba de Ruptura para Cápsulas Blandas.
como éster metílico en la Solución de prueba 7: • VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
Resultado = (ru/rT) x 100 IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
ru = respuesta del pico de cada ácido graso • LIMITE DE ARSENICO
individual como éster metílico [NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
rT = suma de las respuestas de todos los picos, sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
excepto los picos del disolvente y butil antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
hidroxitolueno de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
los picos de éster metílico del ácido docosahexaenoico activos para que tengan un contenido de arsénico tan
y del éster metílico del ácido eicosapentaenoico de la bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
Solución de prueba 7 corresponden a los de la Solución reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
Estándar 2, según se obtienen en la prueba de Conte- los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
nido de EPA y DHA. El porcentaje de área para los éste- remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
res metílicos de los ácidos grasos de la Solución de tos y enjuagando con agua desionizada.]
prueba 7 en la prueba de Contenido de EPA y DHA cum- Solución A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
plen con los requisitos para cada ácido graso presen- puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
tado en la Tabla 7. 20 mL de agua y 1O mL de ácido nítrico, y entibiar
sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
Tabla 1 que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumetrico de 100 mL, y diluir
Tiempo Límite Límite con a9ua desionizada a volumen.
de Anota- lnferi- Supe- Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
Reten- ción or rior puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
Ácido clón Abrevia- (%de (%de 40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico, y entibiar sobre
Graso Relativo da Área) Área) una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Ácido linoleico o 52 18:2 n-6 o 1o Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
Ácido eicosapen- transferirla a un matraz volumétrico de 100 mL, y diluir
taenoico o 79 20:5 n-3 o o1 con a9ua desionizada a volumen.
Ácido docosapen- Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
taenoico o 94 22:5 n-6 o o1 (3:2:5). Un volumen de 5 µL proporciona 0,015 mg de
Ácido docosahe- paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
xaenoico 1 00 22:6 n-3 35 o 47 o Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 mL de
Solución Estándar de Arsénico, preparada según se in-
CONTENIDO dica en la prueba de Arsénico (211 ), a un matraz volu-
• CONTENIDO DE DHA métrico de 100 ml. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de
Solución de prueba 1 y Solución de prueba 2: Pesar ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
no menos de 1O Cápsulas en un frasco de pesada ta- ción contiene O, 1O µg/mL de arsénico.
rado. Con una cuchilla afilada u otros medios apropia- Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
dos, abrir cuidadosamente las cá¡sulas, sin perder ma- con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
terial de la cubierta, y transferir e contenido 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de arsénico.
combinado de las Capsulas a un vaso de precipitados Solución muestra: Para preparar la Solución muestra,
de 100 ml. Retirar cualquier sustancia adherida a las cu- usar un horno de microondas con una frecuencia del
biertas de las Cápsulas vacías lavando con varias porcio- magnetrón de 2455 MHz y una potencia de salida se-
nes pequeñas de isooctano. Desechar los lavados y de- leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
jar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen en una equipado con vasos de material compuesto avanzado
corriente de aire seco hasta que se haya evaporado por con recubrimientos internos de teflón de 100 ml. Usar
completo el isooctano. Pesar las cubiertas de las Cápsu- membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
las vacías en el frasco de pesada tarado original y calcu- sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
lar el peso de llenado promedio (AFW, por sus siglas en giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
inglés) de aceite de Crypthecodinium cohnni/Cápsula. de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
Proceder con el contenido de las Cápsulas segun se in- con un tubo de es,cape para permiti~ el escape de los
dica en el Análisis. humos. [PRECAUCION-Usar proteccion adecuada para
Análisis: Proceder según se indica en, Grasas y Aceites los ojos además de ropa y guantes protectores.]
Fijos (401 ), Determinación y Perfil de Acidos Grasos Transferir aproximadamente 500 mg de aceite de
Omega-3, Contenido de EPA y DHA. Crypthecondinium cohnii, a partir de Cápsulas, pesados
Calcuíar el porcentaje de la cantidad declarada de ácido con una aproximación de O, 1 mg, a un vaso de di-
docosahexaenoico (DHA) en las Cápsulas tomadas: gestión con recubrimiento interno de teflón. Preparar
fas muestras por duplicado. Agregar 15 mL de ácido
Resultado= R x AFW/L nítrico y agitar por rotación suave. Cubrir los vasos
con tapas dejando fuera el accesorio de ventilación.
R = porcentaje determinado de DHA en la porción Digerir previamente durante toda la noche bajo una
de aceite tomada de las Cápsulas (%) campana. Colocar la membrana de ruptura en el ac-
AFW = peso de llenado promedio de las Cápsulas cesorio de ventilación y ajustar la tapa. Colocar todos
tomadas (mg) los vasos en el plato giratorio del horno de microon-
L = cantidad declarada de DHA (mg/Cápsula) das. Conectar los tubos de escape a la trampa de
Criterios de aceptación: No menos de 95,0% y no ventilación y conectar la línea del sensor de presión al
más de 105,0% de la cantidad declarada de DHA vaso apropiado. Iniciar un procedimiento de digestión
de dos etapas calentando el microondas con una po-
tencia del 15% durante 15 minutos, seguida de una
USP 37
potencia del 25% durante 45 minutos. Retirar el
plato giratorio con los vasos del horno y dejar que los
vasos se enfríen a temperatura ambiente. [NOTA-Se
puede usar un baño de agua fresca para acelerar el
proceso de enfriamiento.] Ventilar los vasos cuando
alcancen la temperatura ambiente. Retirar las tapas y
agregar lentamente 2 ml de peróxido de hidrógeno
al 30% a cada uno. Dejar que las reacciones cesen y
sellar los vasos. Volver a colocar los vasos en el plato
giratorio del horno de microondas y calentar durante
15 minutos adicionales a una potencia del 30%. Reti-
rar los vasos del horno y dejar que se enfríen a tem-
peratura ambiente. Transferir los digeridos enfriados a
un matraz volumétrico de 25 ml y diluir con agua a
volumen.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura ajustada a
20º y un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a
2400º usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argón dete-
nido, y limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estan-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para arsénico. Determinar el área del pico en la línea
de emisión de arsénico a 193,7 nm, corregida por la
absorción de fondo. Graficar las áreas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estándar en función de sus
contenidos de arsénico, en µg/ml, y calcular la línea
de regresión que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentración, C, en µg/ml, de arsénico en cada
ml de la Solución muestra interpolando a partir de la
línea de regresión.
Calcular el contenido de arsénico en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cápsulas tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1 O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 1 ml de ácido nítrico y 40 ml de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 1 00 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
Suplementos Dietéticos / Crypthecodinium 5935
transferirla a un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de
fosfato y ,0,01 m51 de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido n1trico y agua (1: 19)
Solución madre del estándar: Transferir 1 0,0 ml de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volumé-
trico de 1 00 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml de esta solución a un segundo matraz volumé-
trico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
ción contiene O, 1 O µg/ml de plomo.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a 2100º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para plomo. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de plomo, en µg/ml, y calcular la línea de regresión
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centración, C, en µg/ml, de plomo en cada ml de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de
regresión.
Calcular el contenido de plomo en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cápsulas tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1 O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
5936 Crypthecodinium /Suplementos Dietéticos
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 mL, y diluir
con a$lua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar A: O, 1372 mg/mL de ni-
trato de cadmio
Solución madre del estándar B: Solución madre del es-
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución
contiene O, 1 O µg/mL de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porción de agua y
ácido nítrico.]
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de cadmio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2400º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para cadmio. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de cadmio, en µg/mL, y calcular la línea de regresión
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centración, C, en µg/mL, de cadmio en cada mL de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de
regresión.
Calcular el contenido de cadmio en las Cápsulas
tomadas:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cápsulas tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE MERCURIO: Proceder según se indica en Mer-
curio (261 ), Método /la, excepto que se debe usar una
Solución Estándar de Mercurio con el equivalente a O, 1
µg/mL de mercurio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico, combi-
nando los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL
de Solución de Permanganato de Potasio.
Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Índice de Anisidina (401): No más
de 20,0, determinado en el contenido de las Cápsulas
USP 37
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Ácidos Grasos Libres (401 ): Los
ácidos grasos libres en 1 O g requieren para su neutraliza-
ción no más de 1,42 m~ de hidróxido de sodio O, 1 N.
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más
de 5,0, determinado en, el contenido de las Cápsulas
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX)
(401): No más de 26 (determinado en el contenido de
las Cápsulas), calculado como:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = índice de peróxido
AV = índice de anisidina
• GRASAS V ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
más de 3,5%, determinado en el contenido de las
Cápsulas ,
• PESO ESPECIFICO (841): 0,91-0,93, determinado en el
contenido de las Cápsulas
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposición al
calor excesivo.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de ácido do-
cosahexaenoico en mg/Cápsula. También indica el nom-
bre y la concentración de cualquier antioxidante
ag~egado.
• ESTAl)IDARES DE REFERJNCIA USP (11)
ER ~ster Etílico del ~cido Docosahexaenoico USP
ER Ester Etílico del Acido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Cúrcuma
DEFINICIÓN
La Cúrcuma es el rizoma seco de Curcuma longa L., también
conocida como C. domestica Val., (Fam. Zingiberaceae).
Se conoce comúnmente como Cúrcuma, Curcum, Haridra
y Azafrán de la India. Contiene no menos de 3,0% de
curcuminoides, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solución muestra: Reducir a polvo aproximadamente
5 g de Cúrcuma. Transferir aproximadamente 0,2 g de
la muestra reducida a polvo a un tubo de ensayo, agre-
gar 3 mL de acetona, someter a ultrasonido durante 30
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metanol y ácido fórmico
(96:4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas sobre una placa para
cromatografía en capa delgada adecuada (ver Croma-
tografía (621 ), Cromatografía en Capa Delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar y observar
bajo luz diurna y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas marrón amarillentas debi-
das a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina a valores Rr de aproximadamente 0,4; 0,6 y
USP 37
0,7, respectivamente, que corresponden en posición y
color a las obtenidas de la Solución estándar.
• B. Los tiempos de retención de los picos para curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina del cro-
matograma de la Solución muestra corresponden a los de
la Solución estándar para el Estándar de Referencia USP
correspondiente, según se obtienen en la prueba de Con-
tenido de Curcuminoides.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase móvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de ácido cí-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el Estándar de Referencia en cada Solución es-
tándar; todas las soluciones deben pasar a través de un
filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de
inyectar. El ER Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina
USP y ER Bisdesmetoxicurcumina USP pueden prepa-
rarse también en una solución estándar que contenga la
concentración final especificada para cada una a
continuación.]
Solución estándar A: 40 µg/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase móvil
Solución estándar B: 40 µg/mL de ER Curcumina USP
en Fase móvil
Solución estándar C: 1O µg/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase móvil
Solución estándar D: 2 µg/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase móvil
Solución madre de la muestra: Reducir a polvo aproxi-
madamente 5,0 g de Cúrcuma. Transferir aproximada-
mente 0,5 9 de la muestra reducida a polvo a un ma-
traz volumetrico de 50 mL, agregar 30 mL de acetona y
someter a ultrasonido durante 30 minutos. Diluir con
acetona a volumen, mezclar y centrifugar.
Solución muestra: Transferir 5 mL de Solución madre de
la muestra a un matraz volumétrico de 50 mL, diluir con
Fase móvil a volumen y mezclar.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el ER Curcuminoides USP
usado.
Resolución: No menos de 2,0, entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetría: No más de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porción de Cúr-
cuma tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x D x 100
Suplementos Dietéticos /Cúrcuma 5937
ru = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
estándar correspondiente
Cs = concentración de la Solución estándar
correspondiente (m9/mL)
V = volumen de la Solucion madre de la muestra
(mL)
W = peso de Cúrcuma usado para preparar la
Solución madre de la muestra (mg)
D = factor de dilución para obtener la Solución
muestra, a partir de la Solución madre de la
muestra
Criterios de aceptación: No menos de 3% como la
suma de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET)lLES PESADOS, Método, fil (231 >:, No más de 20 ppm,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
req,uisitos. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
os
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g; y las bacterias Gram-
negativas tolerantes a la bilis no exc~den de 10 3 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: La cúrcuma se presenta como rizomas
primarios ovados, oblongos o en forma de pera, tam-
bién conocidos como bulbo o cúrcuma redonda, de
aproximadamente 3 cm de diámetro y 4-5 cm de longi-
tud, con cicatrices foliares anulares transversas, y tam-
bién se presenta en forma de rizomas secundarios cilín-
dricos, a veces con ramificaciones cortas, también
conocido como cúrcuma larga o en forma de dedos, de
aproximadamente 1 cm de diámetro y 2-7 cm de longi-
tud con cicatrices de ramas laterales. La cúrcuma cu-
rada y seca comercializada es de color entre amarillo
brillante y amarillo pálido, con una superficie áspera o
pulida y un olor aromático característico. La textura es
dura y no se rompe con facilidad, y la fractura es suave
y finamente granular. Internamente es de color amarillo
anaranjado a anaranjado y presenta una corteza sepa-
rada de un cilindro central por una endodermis definida
Histología
Sección transversal del rizoma: Presenta una hilera
de células epidérmicas aplanadas de paredes finas;
unas pocas capas de células parenquimáticas del súber
de paredes delgadas, en forma de ladrillo, una corteza
amplia que consiste en capas múltiples de células pa-
renquimáticas de paredes delgadas que presentan ha-
ces vasculares dispersos; una capa delgada de células
oblongas de la endodermis; un periciclo que consiste
en una a dos hileras de células parenquimáticas; y una
médula que consiste en células parenquimáticas que
presentan haces vasculares dispersos, la mayoría de los
cuales forman anillos discontinuos próximos a la endo-
dermis y en menor grado hacia adentro. Los haces
vasculares son del tipo colateral; los vasos tienen prin-
cipalmente engrosamiento espiralado y unos pocos tie-
nen engrosamiento reticulado y anillado. Dispersas por
todo el parénquima de la médula y la corteza hay cé-
lulas con oleorresina que contienen aceite y part1culas
5938 Cúrcuma /Suplementos Dietéticos
dispersas de un pigmento amarillo anaranjado y pris-
mas de oxalato de calcio, que usualmente se ven oscu-
recidos debido al color amarillo brillante del contenido
de pigmento. Las células parenquimáticas están llenas
de gránulos de almidón, de 15-30 µm de tamaño y
f9rma plana o de discq. Ausencia de fibras de líber.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Contenido de Aceites Volá-
tile~ (561): No menos d~ 3,0 mL/l 00 g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
cohpl, Método 2 (561): f)Jo menos de 100 mg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Método 2 (561): No menos de 9,0%
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método 7a (921 ): No menos de
10%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): Nomásdel,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
a temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Cúrcuma en Polvo
DEFINICIÓN
La Cúrcuma en Polvo es Cúrcuma reducida a polvo fino o
muy fino.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solución muestra: Transferir aproximadamente 0,2 g
de Cúrcuma en Polvo a un tubo de ensayo, agregar
3 mL de acetona, someter a ultrasonido durante 30 mi-
nutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metano! y ácido fórmico
(96:4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas en una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 ), Cromatografía en Capa Delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de Ja longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar y observar
bajo luz diurna y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas marrón amarillentas debi-
das a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina a valores RF de aproximadamente 0,4; 0,6 y
0,7, respectivamente, que corresponden en posición y
color a las obtenidas de la Solución estándar.
USP 37
• B. Los tiempos de retención de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina del cro-
matograma de la Solución muestra corresponden a Jos de
la Solución estándar del Estándar de Referencia USP co-
rrespondiente, según se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Curcuminoides .
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase móvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de ácido cí-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el Estándar de Referencia en cada Solución es-
tándar, todas las soluciones se deben pasar a través de
un filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de
inyectar. El ER Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina
USP y ER Bisdesmetoxicurcumina USP pueden preparase
también en una solución estándar que contenga la con-
centración final specificada para cada uno a
continuación.]
Solución estándar A: 40 µg/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase móvil
Solución estándar B: 40 µg/mL de ER Curcumina USP
en Fase móvil
Solución estándar C: 1O µg/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase móvil
Solución estándar D: 2 µg/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase móvil
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 0,5 g de Cúrcuma en Polvo, pesados con exacti-
tud, a un matraz volumétrico de 50 mL, agregar 30 mL
de acetona y someter a ultrasonido durante 30 minu-
tos. Diluir con acetona a volumen, mezclar y
centrifugar.
Solución muestra: Transferir 5 mL de Solución madre de
Ja muestra a un matraz volumétrico de 50 ml. Diluir
con Fase móvil a volumen y mezclar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ER Curcuminoides USP.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina, y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetría: No más de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porción de Cúr-
cuma en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x D x 100
USP 37
ru = respuesta d.el pico 9e curcumina,
desmetox1curcum1na o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
muestra
r5 = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
estándar correspondiente
Cs = concentración de la Solución estándar
correspondiente (mg/ml)
V =volumen de Solución madre de la muestra (ml)
W = peso de Cúrcuma en Polvo usado para
preparar la Solución madre de la muestra
(mg) ' 1 S I .,
D = factor de dilucion para preparar a o uc1on
muestra, a partir de la Solución madre de la
muestra
Criterios de aceptación: No n:ienos d~ 3% como la
suma de curcumina, desmetox1curcumina y
bisdesmetoxicurcumina
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
req,uisitos. , Cúrcuma en acetona
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y las bacterias Gram-
negativas tolerantes a la bilis no exc~den de 10 3 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas pa_ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a co/1.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Es de color amarillo intenso,
con un olor aromático característico. Al microscopio, la
Cúrcuma en Polvo revela células parenquimáticas de pa-
redes delgadas que contienen gránulos de aln:iidón,
15-30 µm de tamaño, de forma plana o de disco, ge_lat1-
nizados o sin gelatinizar; células oleosa~ llenas de _aceite y
partículas dispersas de pigi:nentos amarillo anarania<;Jos;
prismas de oxalato de caíc~o, generalmente _oscurec1~os
debido al color amarillo brillante del contenido del pig-
mento, detectados al microscopio de luz polarizada
como prismas anaranjados brillant~s; fragment~s de va-
sos espiralados y algunos vasos ret1culados y anillados;
fragmentos de células suberosas y epidé_rm1cas; grá_nulos
de almidón; tricomas no glandulares unicelulares disper-
sos¿ y ausencia de fibras de líber.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Determinación de Aceite
Volátil (561): No menos de 3,0 ml/l 00 g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol Método 2 (561): No menos de 100 mg/g
• ARTÍCÚLOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
Método 2 (561): No menos de 9,0%
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921): No menos de
10% , un filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0% , ,
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
a temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la den9minación oficial, la parte de la
planta contenida en el articulo.
Suplementos Dietéticos /Cúrcuma 5939
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Extracto en Polvo de Cúrcuma
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Cúrcuma se prepara a partir de lo~
rizomas reducidos a polvo de Curcuma longa L. ~Fam. Zm-
giberaceae), usando acetona, metanol u otros d1sol".'en~es
adecuados. Contiene no menos de 20% de curcum1no1des
totales, calculado con respecto a la materia seca. Puede
contener otras sustancias agregadas.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,2 mg/ml de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solución muestra: 1 O mg/ml de Extracto en Polvo de
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL, en b,ai:idas , .
Fase móvil: Cloroformo, metanol y ac1do form1co
(96:4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas sobre una placa para
cromatografía en capa delgada adecuada (ver Croma-
tografía (621 ), Cromatografía en Capa Delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
. placa. Retirar la placa de la cámara, secar y observar
bajo luz diurna y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromat?grama _de la So/u-.
ción muestra presenta bandas marron an:iarillent~s debi-
das a bisdesmetoxicurcumina, desmetox1curcumina y
curcumina a valores RF de aproximadamente O,~; .9,6 y
O 7 respectivamente, que corresponden en pos1cion y
cblbr a las obtenidas de la Solución estándar.
• B. Los tiempos de retención de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina del cro-
matograma de la Solución muestra corresponden a los de
la Solución estándar para el Estándar de Referencia USP
correspondiente, según se obtienen en la prueba de Con-
tenido de Curcuminoides.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase móvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/ml de ácido cí-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ~er necesario som~ter a ultrasonid~, para
disolver el Estandar de Referencia en cada Soluc1on es-
tándar; todas las soluciones se deben pasar a través de
inyectar. El ER Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina
USP y ER Bi~desmetoxicurc~~ina ljSP pueden prepa-
rarse tambien en una solucion estandar que contenga la
concentración final especificada para cada una a
continuación.]
Solución estándar A: 40 µg/ml de ER Curcuminoides
USP en Fase móvil
Solución estándar B: 40 µg/ml de ER Curcumina USP
en Fase móvil
Solución estándar C: 1O µg/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase móvil
5940 Cúrcuma /Suplementos Dietéticos
Solución estándar D: 2 µg/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase móvil
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 00 mg
de Extracto en Polvo de Cúrcuma, pesados con exacti-
tud, a un matraz volumétrico de 50 mL, agregar 30 mL
de acetona y someter a ultrasonido durante 30 minu-
tos. Diluir con acetona a volumen y centrifugar. Transfe-
rir 5 mL a un matraz volumétrico de 50 mL, diluir con
Fase móvil a volumen y mezclar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ER Curcuminoides USP.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina, y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetría: No más de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porción de Ex-
tracto en Polvo de Cúrcuma tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
estándar correspondiente
Cs = concentración de la Solución estándar
correspondiente (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Cúrcuma en la Solución muestra (mg/mL)
Sumar los porcentajes debidos a curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina.
Criterios de aceptación: No menos de 20% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método,f 11 (231 ):, No más de 20 ppm,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
!isis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
req,uisitos. , cumina y curcumina a valores Rf de aproximadamente
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Af!atoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g;
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
USP 37
• EXTRACTOS BOTÁNICOS, Disolventes Residuales (565):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g a 105 durante 2
horas: pierde no más de 7,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
a temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. Cumple
con los otros requisitos de etiquetado indicados en Ex-
tra~tos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Curcuminoides
DEFINICIÓN
Los Curcuminoides son un complejo natural parcialmente
purificado de derivados diaril heptanoides aislados de la
Cúrcuma, Curcuma longa L. Contienen no menos de
95,0% de curcuminoides, calculado con respecto a la ma-
teria seca como la suma de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina. Contienen no menos de
70,0% y no más de 80,0% de curcumina, no menos de
15,0% y no más de 25,0% de desmetoxicurcumina, y no
menos de 2,5% y no más de 6,5% de
bisdesmetoxicurcumina.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solución muestra: 2 mg/mL de Curcuminoides en
acetona
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metano/ y ácido fórmico
(96:4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621) Cromatografía en Capa Delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar y observar
bajo luz UV a 365 nm .
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas de color marrón amari-
llento debidas a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicur-
0,4; 0,6 y 0,7, respectivamente, que corresponden en
posición y color a las obtenidas de la Solución estándar.
• B. Los tiempos de retención de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina del cro-
matograma de la Solución muestra corresponden a los de
la Solución estándar para el Estándar de Referencia USP
correspondiente, según se obtienen en la prueba de Con-
tenido de Curcuminoides.
USP 37
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase móvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de ácido cí-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el ER en cada Solución estándar; todas las solu-
ciones deben pasarse a través de un filtro con un ta-
maño de poro de 0,45 µm antes de la inyección. El ER
Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina USP y ER Bis-
desmetoxicurcumina USP también se pueden preparar
en una solución estándar que contenga la concentra-
ción final especificada a continuación para cada uno.]
Solución estándar A: 40 µg/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase móvil
Solución estándar B: 40 µg/mL de ER Curcumina USP
en Fase móvil
Solución estándar C: 1O µg/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase móvil
Solución estándar D: 2 µg/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase móvil
Solución muestra: Transferir aproximadamente 20 mg
de Curcumino_ides a un matraz volumétrico de 50 mL,
agregar aproximadamente 30 mL de acetona y someter
a ultrasonido durante 30 minutos. Diluir con acetona a
volumen y centrifugar. Transferir 5 mL a un matraz vo-
lumétrico de 50 mL, diluir con Fase móvil a volumen y
mezclar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el ER Curcuminoides USP.
Resolución: No menos de 2,0, entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetría: No más de 1,5 para los picos de
bisdes~etoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcum1na
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D y Solución
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porción de Cur-
cuminoides tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
estándar correspondiente
Cs = concentración de la Solución estándar
correspondiente (mg/mL)
Cu = concentración de Curcuminoides en la
Solución muestra (mg/mL)
Suplementos Dietéticos / Curcuminoides 5941
Criterios de aceptación: Los Curcuminoides contienen
no menos de 95,0% de curcuminoides calculado con
respecto a la materia seca como la su~a de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina. Contie-
n~n no menos de 70,0% y no más de 80,0% de curcu-
mina, !1º men?s de 15,0% y no más de 25,0% de des-
metox1curcum1na, y no menos de 2,5% y no más de
6,5% de bisdesmetoxicurcumina.
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método, JI/ (231 ): No más de 20 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(56,1 ): Cumplen con los ,requisitos.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumplen con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• INTERVALO o TEMPERATURA DE FUSIÓN, Clase I (741):
172º-178º
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar 1,0g a 105º durante 2
hor,as: pierde no más de f,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de curcumi-
noides y el contenido de curcuminoides individuales, con
respecto a la materia seca, y el nombre científico en latín
y l<.J parte de la planta usada para preparar el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Curcuminoides, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Curcuminoides se preparan a partir de Cur-
cuminoides y contienen no menos de 90,0% y no más de
110,0% de la cantidad declarada de curcuminoides, cal-
culado como la suma de curcumina, desmetoxicurcumina
y bisdesmetoxicurcumina.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cápsulas. Transferir una por-
ción del polvo, equivalente a aproximadamente 1O mg
de curcuminoides, a un recipiente adecuado, agregar
5 mL de acetona, agitar durante 1 minuto y someter a
ultrasonido durante 1O minutos. Dejar en reposo du-
rante 15 minutos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metanol y ácido fórmico
(96:4:1)
5942 Curcuminoides /Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
secar y observar bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas de color marrón amari-
llento debidas a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicur-
cumina y curcumina a valores RF de aproximadamente
0,4; 0,6 y 0,7, respectivamente, que corresponden en
posición y color a las obtenidas de la Soluoón estándar.
• B. Los tiempos de retención de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina de la Solu-
ción muestra corresponden a los de la Solución estándar
para el Estándar de Referencia USP correspondiente, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de
Curcuminoides.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase móvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de ácido cí-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el ER en cada Solución estándar; todas las solu-
ciones deben pasarse a través de un filtro con un ta-
maño de poro de 0,45 µm antes de la inyección. El ER
Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina USP y ER Bis-
desmetoxicurcumina USP también se pueden preparar
en una solución estándar que contenga la concentra-
ción final especificada a continuación para cada uno.]
Solución estándar A: 40 µg/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase móvil
Solución estándar B: 40 µg/mL de ER Curcumina USP
en Fase móvil
Solución estándar C: 1 O µg/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase móvil
Solución estándar D: 2 µg/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase móvil
Solución madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino el contenido de no menos de 20 Cápsulas. Transfe-
rir una cantidad del polvo, pesada con exactitud, equi-
valente a aproximadamente 20 mg de curcuminoides, a
un matraz volumétrico de 50 ml. Agregar aproximada-
mente 30 mL de acetona, someter a ultrasonido du-
rante 30 minutos, diluir con acetona a volumen, mez-
clar y centrifugar.
Solución muestra: Diluir una porción de la Solución ma-
dre de la muestra 1 en 1 O con Fase móvil y mezclar.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-vis 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son aproximadamente 1,0; 1,2 y 1,4,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el lote de ER Curcuminoi-
des USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina, y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
USP 37
Factor de asimetría: No más de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar O y Solución
muestra
Calcular la cantidad, en mg, de curcumina, desmetoxi-
curcumina y bisdesmetoxicurcumina en cada Cápsula:
Resultado = (ru/rs) x Cs x O x V x (WFIWu)
ru = área del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
muestra
rs = área del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
estándar correspondiente
Cs = concentración de la Solución estándar
correspondiente (mg/mL)
o = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra
V = volumen de Solución madre de la muestra (mL)
WF = peso promedio de llenado de las Cápsulas
(mg)
Wu = peso del contenido de las Cápsulas tomado
para preparar la Solución madre de la muestra
(mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
curcuminoides en la Cápsula:
Resultado = ('LQ/ L) x 100
'LQ = suma de las cantidades de curcumina,
desmetoxicurcumina y
bisdesmetoxicurcumina en la Cápsula (mg)
L = cantidad declarada de curcuminoides
(mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN (2040)
Modo: Disolución
Medio: Agua que contenga lauril sulfato de sodio al
lo/o; 900 mL
Aparato 2: 1 00 rpm
Tiempo: 60 min
Solución muestra: Combinar porciones de 25 mL de la
solución en análisis de cada uno de los seis vasos de
disolución y mezclar. Transferir 5 mL a un matraz volu-
métrico de 25 mL y diluir con Fase móvil a volumen.
Análisis: Determinar la cantidad disuelta de curcumina
(C21 H2006), usando el método empleado en Contenido,
haciendo las modificaciones necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de cur-
cumií}a (C21H2006)
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
USP 37
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de curcumi-
noi,des en mg/Cápsula.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Curcuminoides, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Curcuminoides se preparan a partir de Cur-
cuminoides y contienen no menos de 90,0% y no más de
11 0,0% de la cantidad declarada de curcuminoides, cal-
culado como la suma de curcumina, desmetoxicurcumina
y bisdesmetoxicurcumina.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a aproximadamente 1 O mg de curcuminoi-
des, a un recipiente adecuado, agregar 5 mL de ace-
tona, agitar durante 1 minuto y someter a ultrasonido
durante 1 O minutos. Dejar en reposo durante 15 minu-
tos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metanol y ácido fórmico
(96:4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
secar y observar bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas de color marrón amari-
llento debidas a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicur-
cumina y curcumina a valores RF de aproximadamente
0,4; 0,6 y 0,7, respectivamente, que corresponden en
posición y color a las obtenidas de la Solución estándar.
• B. Los tiempos de retención de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina de la Solu-
ción muestra corresponden a los de la Solución estándar
para el Estándar de Referencia USP correspondiente, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de
Curcuminoides.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase móvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de ácido cí-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el ER en cada Solución estándar; todas las solu-
ciones deben pasarse a través de un filtro con un ta-
maño de poro de 0,45 µm antes de la inyección. El ER
Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina USP y ER Bis-
desmetoxicurcumina USP también se pueden preparar
en una solución estándar que contenga la concentra-
ción final especificada a continuación para cada uno.]
Suplementos Dietéticos / Curcuminoides 5943
Solución estándar A: 40 µg/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase móvil
Solución estándar B: 40 µg/mL de ER Curcumina USP
en Fase móvil
Solución estándar C: 1 O µg/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase móvil
Solución estándar D: 2 µg/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase móvil
Solución madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad
del polvo pesada con exactitud, equivalente a aproxi-
madamente 20 mg de curcuminoides, a un matraz vo-
lumétrico de 50 mL. Agregar aproximadamente 30 ml
de acetona, someter a ultrasonido durante 30 minutos,
diluir con acetona a volumen, mezclar y centrifugar.
Solución muestra: Diluir una porción de Solución madre
de la muestra (1 en 1 O) con Fase móvil y mezclar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son aproximadamente 1,0; 1,2 y 1,4,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el lote de ER Curcuminoi-
des USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetría: No más de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar O y Solución
muestra
Calcular la cantidad, en mg, de curcumina, desmetoxi-
curcumina y bisdesmetoxicurcumina en cada Tableta:
Resultado= (ru!rs) x Cs x O x V x (WFIWu)
ru = área del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
muestra
rs = área del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solución
estándar correspondiente
Cs = concentración de la Solución estándar
correspondiente (mg/ml)
O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra
V = volumen de Solución muestra (ml)
WF = peso promedio de las Tabletas (mg)
Wu = peso del polvo de las Tabletas tomadas para
preparar la Solución madre de la muestra
(mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
curcuminoides en la Tableta:
Resultado = (I.Q/ L) x 1 00
5944 Curcuminoides / Suplementos Dietéticos USP 37

lQ = suma de las cantidades de curcumina, 5-Hyd roxy-2-( 3-hyd roxy-4-methoxyphenyl)-7-

desmetoxicurcumina y [ (2 S, 3 R,4 S,5 S, 6 R)-3,4 ,5-trihyd roxy-6-[( (2 R, 3 R,4 R, 5 R,65)-
bisdesmetoxicurcumina en la Tableta (mg) 3,4 ,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxymethyl]oxan-
L = cantidad declarada de curcuminoides 2-yl]oxychromen-4-one;
(mg/Tableta) 7-[( 6-0-( 6-Desoxi-a-L-manopi ra nosil)-f:J-D-gl ucopiranosil]oxi]-
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad 5-h idroxi-2-( 3-hid roxi-4-metoxifenil)-4 H-1-benzopi ran-
declarada 4-ona [520-27-4].
PRUEBAS DE DESEMPEÑO DEFINICIÓN
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN (2040) La Diosmina contiene no menos de 90,0% y no más de
Modo: Disolución 102,0% de diosmina (C2aH12Ü1s), calculada con respecto a
Medio: Agua que contenga lauril sulfato de sodio al la sustancia anhidra.
1%; 900 mL
Aparato 2: 100 rpm IDENTIFICACIÓN
Tiempo: 60 min • A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (l 97K)
Solución muestra: Combinar porciones de 25 mL de la • B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
solución en análisis de cada uno de los seis vasos de ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
disolución y mezclar. Transferir 5 mL a un matraz volu- gún se obtienen en la Valoración.
métrico de 25 mL y diluir con Fase móvil a volumen.
Análisis: Determinar la cantidad disuelta de curcumina VALORACIÓN
(C21H200 6 ) usando el método empleado en Contenido de • PROCEDIMIENTO
Curcuminoides, haciendo las modificaciones necesarias. Fase móvil: Metanol, acetonitrilo, ácido acético y agua
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de cur- (27:2:6:65)
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Diosmina USP en
cumi11a (C21 H2006)·
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos. dimetil sulfóxido
Solución de aptitud del sistema: 1 mg/mL de ER Dios-
CONTAMINANTES mina para Aptitud del Sistema USP en dimetil sulfóxido
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- Solucion muestra: 1,0 mg/mL de Diosmina en dimetil
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g, sulfóxido
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y Sistema cromatográfico
levaduras no excede de 103 ufc/g. , (Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- Modo: HPLC
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la Detector: UV 275 nm
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli. Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 µm
Temperatura de la columna: 40º
REQUISITOS ADICIONALES Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Volumen de inyección: 1O µL
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a Aptitud del sistema
temperatura ambiente. Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de curcumi- tándar.
noLdes en mg/Tableta. [NOTA-Permitir un tiempo de corrida de aproximada-
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) mente 6 veces el tiempo de retención de diosmina.
ER Bisdesmetoxicurcumina USP Los tiempos de retención relativos para diosmina, ace-
ER Curcumina USP toisovainillona, hesperidina, isorroifolina, linarina y
ER Curcuminoides USP diosmetina son 1; 0,5; 0,6; 0,8; 2,6 y 4,5,
ER Desmetoxicurcumina USP respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución de aptitud del sistema es similar al Cro-
matograma de Referencia provisto con el lote de ER
Dexpantenol-ver Dexpantenol en Diosmina para Aptitud del Sistema USP usado.
Resolución: No menos de 2,5 entre hesperidina e
Monografías Generales isorroifolina, Solución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Dexpantenol, Preparación-ver Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Dexpantenol, Preparación en Monografías Calcular el porcentaje de diosmina (C2aH32Ü1s), en la
porción de Diosmina tomada:
Generales
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
Diosmina r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Diosmina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Diosmina en la Solución
muestra (m9/mL)
OH Criterios de aceptacion: 90,0%-102,0%, con respecto
a la sustancia anhidra
OH O

608,54
USP 37 Suplementos Dietéticos / Eleuterococo 5945

IMPUREZAS ru = respuesta del pico de cada impureza de la

• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281) Solución muestra
Muestra: 1,0 g r1 = respuesta del pico de diosmina de la Solución
Criterios de aceptación: No más de 0,2% estándar
• METALES PESADOS, Método 11 (231) Cs = concentración de ER Diosmina USP en la
Muestra: 2,0 g Solución estándar (mg/ml)
~riterios de aceptación: No más de 20 ppm Cu = concentración de Diosmina en la Solución
• LIMITE DE YODO muestra (mg/ml)
Determinar potenciométricamente el contenido total de F = factor de corrección para cada impureza
yodo, usando un electrodo selectivo de yoduro, des- individual (ver la Tabla 7)
pués de una combustión en un matraz con oxígeno Criterios de aceptación
(ver Combustión en Matraz c9n Oxígeno (471 )). Impurezas totales: No más de 1 0%
Solución muestra: [PRECAUCION-Se deben cumplir rigu- Impurezas individuales: Ver la Tabla 7.
rosamente las precauciones especificadas en el Procedi- Suma de acetoisovainillona y otras impurezas: No
miento de Combustión en Matraz con Oxígeno (471 ).] más de 1 %
Envolver O, 100 g de Diosmina en una hoja de papel de
filtro exento de haluros y colocar en el portamuestras Tabla 1
de malla de platino. Introducir en el matraz 50,0 ml de
una solución de 0,2 g/L de hidrazina. Purgar el matraz Criterios de
con oxígeno durante 1 O minutos. Incinerar el papel de Tiempo de Factor de Aceptación,
filtro. Mezclar el contenido del matraz inmediatamente Retención Corrección No más de
después de terminada la combustión para disolver com- Nombre Relativo (f) (%)
pletamente los productos de la misma. Continuar mez- Acetoisovainillona' 05 03 1
clando durante 1 hora. Hesperidinab 06 1 5
Solución estándar: 33,2 µg/ml de yoduro de potasio lsorroifolina' 08 1 3
en agua, equivalente a 25,4 µg/ml de yodo Linarina 0 26 1 3
Solución de nitrato de potasio: 200 mg/ml de nitrato
de potasio en ácido nítrico O, 1 M Diosmetina'· 45 05 3
Análisis Cualquier otra im- -
Muestras: Solución muestra y Solución estándar pureza 1 1
Transferir 30 ml de la Solucion de nitrato de potasio a Impurezas totales - - 10
un vaso de precipitados, sumergir los electrodos y ' 1-(3-Hidroxi-4-metoxifenil)etanona.
mezclar durante 1 O minutos. El potencial (nU1) debe b (25)-7 -[[ 6-0-( 6-Desoxi-a.-L-manopi ranosil)-¡l-D-g lucopiranosi l]oxi]-5-hid ro-
permanecer estable. Medir el potencial (nU1). Agregar xi-2-( 3-h idroxi-4-metoxifenil)-2, 3-dihidro-4H-1-benzopiran-4-ona.
1 ml de la Solución muestra y medir el potencia[ ' 7-[[ 6-0-( 6-Desoxi-a.-L-manopiranosil)-¡l-D-g lucopiranosil]oxi]-5-hidroxi-2-
(nU2). (4-hid roxifenil)-4H-1 -benzopi ran-4-ona.
d 7-[[ 6-0-( 6-Desoxi-a.-L-manopiranosi 1)-¡l-o-gl ucopi ranosil]oxi]-5-hidroxi-2-
Transferir 30 ml de la Solución de nitrato de potasio a (4-metoxifenil)-4H-1 -benzopiran-4-ona.
un vaso de precipitados, sumergir los electrodos y '5,7-Dihidroxi-2-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-4H-1-benzopiran-4-ona.
mezclar durante 1 O minutos. El potencial (nS1) debe
permanecer estable. Medir el potencial (nS1). Agregar PRUEBAS ESPECÍFICAS
80 µL de la Solución estándar y medir el potencial • DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la < 921 >
(nS2). Muestra: 0,3 g
Criterios de aceptación: No más de O, 1%: El valor ab- Criterios de aceptación: No más de 6,0%
soluto de la Solución muestra l(nU2) - (nU1)I no es ma-
yor c¡ue el valor absoluto de la Solución estándar l(nS2) - REQUISITOS ADICIONALES
(nS1)I. • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
• COMPUESTOS RELACIONADOS pe~meables bien cerrados.
Fase móvil, Solución de aptitud del sistema, Solución • ESTANDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
muestra y Sistema cromatográfico: Proceder según ER Diosmina USP
se indica en la Valoración. ER Diosmina para Aptitud del Sistema USP
Solución estándar: 0,05 mg/ml de ER Diosmina USP
en dimetil sulfóxido
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema. [NOTA-Per-
mitir un tiempo de corrida de aproximadamente 6 ve- Eleuterococo
ces el tiempo de retención de diosmina. Los tiempos
de retencion relativos para diosmina, acetoisovaini- DEFINICIÓN
llona, hesperidina, isorroifolina, linarina y diosmetina El Eleuterococo es el rizoma seco con raíces de Eleutherococ-
son 1; 0,5; 0,6; 0,8; 2,6 y 4,5, respectivamente.] cus senticosus (Rupr. & Maxim.) Maxim. (Fam. Araliaceae)
Requisitos de aptitud del sistema [Acanthopanax senticosus (Rupr. & Maxim.) Harms]. Con-
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma tiene no menos de 0,08% de la suma de eleuterósido B y
de la Solución de aptitud del sistema es similar al Cro- eleuterósido E, calculado con respecto a la materia seca.
matograma de Referencia provisto con el lote de ER
Diosmina para Aptitud del Sistema USP usado. IDENTIFICACIÓN
Resolución: No menos de 2,5 entre hesperidina e • A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
isorroifolina, Solución de aptitud del sistema DELGADA (201)
Análisis Solución estándar A: 1 mg/ml de ER Eleuterósido E
Muestras: Solución estándar y Solución muestra USP en metanol
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porción Solución estándar B: 1 mg/ml de ER Eleuterósido B
de Diosmina tomada: [NOTA-No tomar en cuenta las USP en metanol
impurezas menores de O, 1%.] Solución estándar C: O, 1 g de ER Extracto en Polvo de
Eleuterococo USP en 5 ml de etanol en agua al 50%.
Resultado= (r,,/r1) x (C/C11) x F x 100
5946 Eleuterococo / Suplementos Dietéticos
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Eleuterococo, reducido a polvo fino, a un tubo de cen-
trífuga, agregar 5 ml de etanol en agua al 50% y mez-
clar bien. Someter a ultrasonido durante 1 O minutos.
Centrifugar o filtrar la solución y usar el sobrenadante o
el filtrado.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metanol y agua (35:15:2)
Solución reveladora: Colocar 18 ml de metanol en un
matraz de vidrio y enfriar en un baño de agua, hielo y
sal o en un congelador. Agregar 2 ml de ácido sul-
fúrico, lenta y cuidadosamente, al metanol helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se ajuste a la tempe-
ratura ambiente.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8, So-
lución estándar C y Solución muestra
Antes de desarrollar el cromatograma, saturar la cá-
mara durante 20 minutos con Fase móvil. Registrar la
temperatura y la humedad en el laboratorio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acondicionar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 30%,
usando un dispositivo adecuado. Desarrollar la placa
en un recorrido de 6 cm, secar y rociar con Solución
reveladora. Calentar la placa a 100º durante 5 minu-
tos y observar bajo luz visible y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: Bajo luz visible, la Solución
muestra presenta dos bandas marrones debidas al eleu-
terósido E y eleuterósido B a valores RF de aproximada-
mente 0,34 y 0,45, que corresponden en color y valor
RF a las bandas presentes en la Solución estándar A y la
Solución estándar 8, respectivamente. La Solución mues-
tra también presenta dos bandas marrones adicionales
cerca de la zona de aplicación, que corresponden en
color y valor RF a las bandas presentes en la Solución
estándar C. Se pueden observar otras bandas en los cro-
matogramas de la Solución muestra y Solución estándar
C. Bajo luz UV, la Solución muestra presenta una banda
marrón debida a eleuterósido E que corresponde en
color y valor RF a la banda presente en la Solución están-
dar A.
• B. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra obte-
nida en la prueba de Contenido de Eleuterósidos 8 y E
presenta un pico a un tiempo de retención que corres-
ponde al de eleuterósido B en el cromatograma de Solu-
ción estándar 8 y un pico a un tiempo de retención que
corresponde al de eleuterósido E en el cromatograma de
Solución estándar A.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ELEUTERÓSIDOS 8 YE
Disolvente: Metanol y agua (1 :1)
Solución A: Acetonitrilo y agua (5:95)
Solución B: Acetonitrilo y agua (60:40)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 97 3 V
5 97 3 W
30 60 40
31 5 95
45 5 95
45 1 97 3
60 97 3
USP 37
Solución estándar A: O, 1 mg/ml de ER Eleuterósido E
USP en metano!. Transferir 2,0 ml a un matraz volumé-
trico de 5 ml y diluir con Disolvente a volumen.
Solución estándar B: O, 1 mg/ml de ER Eleuterósido B
USP en metano!. Transferir 2,0 ml a un matraz volumé-
trico de 5 ml y diluir con Disolvente a volumen.
Solución estándar C: 5,0 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP en Disolvente. Someter a ul-
trasonido durante 30 minutos, enfriar a temperatura
ambiente, decantar y pasar a través de un filtro de nai-
lon con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de Eleuterococo, reducido a polvo fino y pesado con
exactitud, a un matraz con fondo redondo equipado
con un condensador. Agregar 50 ml de Disolvente y ca-
lentar bajo reflujo durante 30 minutos. Filtrar el sobre-
nadante a través de algodón en un matraz volumétrico
de 100 ml. Transferir el algodón al matraz de fondo
redondo y repetir la extracción dos veces, usando
22 ml de Disolvente para cada extracción. Filtrar a
través del algodón al matraz volumétrico, lavar el resi-
duo y el algodón con Disolvente, enfriar a temperatura
ambiente, diluir con Disolvente a volumen y mezclar.
Antes de inyectar, pasar a través de un filtro de nailon
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar 8 y Solución estándar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Ces similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminado a partir del pico de eleuterósido B en in-
yecciones repetidas, Solución estándar 8.
Analisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8, So-
lución estándar C y Solución muestra
Identificar los picos de eleuterósido B y eleuterósido E
en la Solución muestra por comparación con los croma-
togramas de la Solución estándar 8 y la Solución están-
dar A, respectivamente, y medir las respuestas de los
picos.
Calcular por separado los porcentajes de eleuterósido B
y eleuterósido E en la porción de Eleuterococo
tomada:
Resultado = (ru!rs) x Cs x (V/\111) x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de eleuterósido E o
eleuterósido B de la Solución estándar A o de
la Solución estándar 8, respectivamente
Cs = concentración de eleuterósido E o eleuterósido
B en la Solución estándar A o de la Solución
estándar 8, respectivamente (mg/ml)
= volumen de la Solución muestra (mL)
= peso de Eleuterococo tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: Agregar los porcentajes de
eleuterósido B y eleuterósido E: no menos de 0,08%
con respecto a la sustancia seca.
 USP 37
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. , ER Extracto en Polvo de Eleuterococo USP
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de_terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchta col1.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El rizoma es nudoso y tiene forma cilín-
drica irregular y un diámetro de 15-40 mm. El duramen
es de color marrón claro y la albura conectora es de
color amarillo pálido. La corteza tiene aproximada-
mente 2 mm de espesor y está firmen;ente. a,dherida al
xilema. La superficie es de color marron_ grisaceo o _ma~
rrón negruzco, gruesa y con surcos y pl1_egues long1tud_1-
nales. El rizoma fracturado es grueso y fibroso, en parti-
cular dentro del xilema. La superficie fracturada de la
corteza presenta fibras C(_)rtas. y delga_das. Numerosa,s
raíces nacen de la parte inferior del rizoma. Estas ra1ces
tienen de 35-150 mm de longitud, son cilíndricas y nu-
dosas y tienen un diámetro de 3-15 mm. La superficie
de las raíces varía de color marrón grisáceo a marrón
negruzco, es más lisa que el rizoma y tiene rayas longi-
tudinales. Una corteza delgada de 0,5 mm de espesor
se adhiere firmemente al xilema de color amarillo pá-
lido. Una raíz fracturada es escasamente fibrosa y pre-
senta un color gris amarillento al descamar la fina
epidermis.
Histología: Las raíces tienen de cinco a siete hileras de
células suberosas marrones. Aparecen grupos de cuatro
o cinco c~nales secretores ~?n contenido marrón y no
tienen mas de 20 µm de d1ametro. Se presentan fibras
del floema con paredes gruesas lignificadas indi~idual­
mente o en pequeños grupos; se concentran cnstales
de oxalato de calcio en el parénquima floemático. Las
células parenquimáticas rodean a las células secretoras y
las células de los radios medulares contienen pequeños
gránulos de almidón. El xilema pre~enta vas~s con en-
grosamientos reticulares y puntuaciones. El rizoma es
similar a las raíces excepto en sus canales secretores
mayores, de hasta 25 µm de diámetro, y la presencia
de una médula con células parenquimáticas que contie-
nen gránulos de almidón.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
hasta peso constante: pierde no más de 14,0% de su
peso. , mara durante 20 minutos con Fase móvil. Registrar la
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
Método 2 (561): No menos de 4,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a I~ luz. . ,.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latín y, después de la denomi,nación oficial, las partes de
la planta contenidas en el articulo.
Suplementos Dietéticos/ Eleuterococo 5947
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Eleuterósido B USP
f:l-o-Glucopiranósido, 4-(3-hidroxi- l -propenil)-2,6-
dimetoxifenilo.
C11H24Ü9 372,37
ER Eleuterósido E USP
f:l-o-Glucopiranósido, (tetrahidro-1H,3H-furo(3,4-c)furan-
1,4-diil)bis(2,6-dimetoxi-4, l -fenilen)b1s-.
Ci4H4601s 742,70
Eleuterococo en Polvo
DEFINICIÓN
El Eleuterococo en Polvo es Eleuterococo reducido a polvo o
a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,08% de la
suma de eleuterósido B y eleuterósido E, calculado con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: 1 mg/mL de ER Eleuterósido E
USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Eleuterósido B
USP en metanol
Solución estándar C: O, 1 g de ER Extracto en Polvo de
Eleuterococo USP en 5 mL de etanol en agua al 50%.
Someter a ultrasonido durante 1O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Eleuterococo en Polvo a un tubo de centrífuga, agregar
5 mL de etanol en agua al 50% y mezclar b!en. Some-
ter a ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar o fil-
trar la solución y usar el sobrenadante o el filtrado.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metanol y agua (35:15:2)
Solución reveladora: Colocar 18 mL de metanol en un
matraz de vidrio y enfriar en un baño de agua, hielo y
sal o en un congelador. Agregar 2 mL de ácido sul-
fúrico, lenta y cuidadosamente, al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se ajuste a la tempe-
ratura ambiente.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Antes de desarrollar el cromatograma, saturar la cá-
temperatura y la humedad en el labor~t?rio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acond1c1onar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 30%,
usando un dispositivo adecuado. De~arrollar la pla~a
en un recorrido de 6 cm, secar y rociar con SoluCton
reveladora. Calentar la placa a 100º durante 5 minu-
tos y observar baj?, luz vis~ble y l~z. UV a 365 nn;.
Criterios de aceptac1on: Ba10 luz v1s1ble, la SoluCton
muestra presenta dos bandas marrones debidas ~ eleu-
terósido E y eleuterósido B a valores Rr de aproximada-
mente 0,34 y 0,45, que corresponde~ en c?lor y valor
Rr a las bandas presentes en la Solucion estanda_r A y la
Solución estándar B, respectivamente. La SoluCton mues-
tra también presenta dos band~s ad!cionales de color
marrón cerca de la zona de apl1cac1on, que correspon-
den en color y valor Rf a las bandas presentes en la
Solución estándar C. Se pueden observar otras bandas
en los cromatogramas de la Solución muestra y Solución
estándar C. Bajo luz UV, la Solución muestra presenta
una banda marrón debida a eleuterósido E que corres-
5948 Eleuterococo / Suplementos Dietéticos
pande en color y valor R1 a la banda presente en la
Solución estándar A.
• B. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra obte-
nido en la prueba de Contenido de Eleuterósidos B y E
presenta un pico a un tiempo de retención que corres-
ponde al de eleuterósido B en el cromatograma de la
Solución estándar By un pico a un tiempo de retención
que corresponde al de eleuterósido E en el cromato-
grama de la Solución estándar A.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ELEUTERÓSIDOS BYE
Disolvente: Metano! y agua (1 :1)
Solución A: Acetonitrilo y agua (5:95)
Solución B: Acetonitrilo y agua (60:40)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (º/o) (%)
o 97 3 preparar la Solución muestra (mg)
5 97 3 Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de eleu-
30 60 40
31 5 95
45 5 95
45 1 97 3 • MH,ALES PESADOS, Método)// (231): No
60 97 3 • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Eleuterósido E
USP en metano!. Transferir 2,0 mL a un matraz volumé-
trico de 5 mL y diluir con Disolvente a volumen.
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER Eleuterósido B
USP en metano!. Transferir 2,0 mL a un matraz volumé-
trico de 5 mL y diluir con Disolvente a volumen.
Solución estándar C: 5,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP en Disolvente. Someter a ul-
trasonido durante 30 minutos, enfriar a temperatura
ambiente, decantar y pasar a través de un filtro de nai-
lon con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir 5,0 g de Eleuterococo en
Polvo, pesados con exactitud, a un matraz de fondo
redondo equipado con un condensador. Agregar 50 mL
de Disolvente y calentar bajo reflujo durante 30 minu-
tos. Filtrar el sobrenadante a través de algodón en un
matraz volumétrico de 1 00 ml. Transferir el algodón al
matraz de fondo redondo y repetir la extraccion dos
veces, usando 22 mL de Disolvente para cada extrac-
ción. Filtrar a través de algodón al matraz volumétrico,
lavar el residuo y el algodón con Disolvente, enfriar a
temperatura ambiente, diluir con Disolvente a volumen
y mezclar. Antes de inyectar, pasar a través de un filtro
de nailon con un tamaño de poro de 0,45 µm o me-
nor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9ráf1co
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar B y Solución estándar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Ces similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de eleuterósido B en in-
yecciones repetidas, Solución estándar B.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
USP 37
Identificar los picos de eleuterósido B y eleuterósido E
en la Solución muestra por comparación con los croma-
togramas de la Solución estándar By la Solución están-
dar A, respectivamente, y medir las respuestas de los
picos.
Calcular por separado los porcentajes de eleuterósido B
y eleuterósido E en la porción de Eleuterococo en
Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) X e X (V/VV) X 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de eleuterósido E o
eleuterósido B de la Solución estándar A o de
la Solución estándar B, respectivamente
Cs = concentración de eleuterósido E o eleuterósido
B en la Solución estándar A o en la Solución
estándar B, respectivamente (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de Eleuterococo en Polvo tomado para
terósido B y eleuterósido E: no menos de 0,08% con
respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
más de 20 ppm
de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 Q3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: El polvo es de color marrón
con un leve olor aromático y un ligero sabor acre persis-
tente. Presenta grupos de canales secretores con conte-
nido de color marrón rodeados de células parenquimáti-
cas que contienen cristales agrupados de oxalato de
calcio. Las células parenquimáticas presentan pequeños
gránulos de almidón, fibras lignificadas de paredes grue-
sas y fragmentos de vasos reticulados y punteados. Se
torna de color amarillo brillante cuando se monta en una
solución de hidróxido de sodio.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
hasta peso constante: pierde no más de 14,0% de su
pes,o. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Eleuterósido B USP
¡3-D-Glucopiranósido, 4-(3-hidroxi-1-propenil)-2,6-
dimetoxifenilo.
C11H24Ü9 372,37
ER Eleuterósido E USP
¡3-D-Glucopiranósido, (tetrahidro-1 H,3H-furo(3,4-c)furan-
l ,4-diil)bis(2,6-dimetoxi-4, 1-fenilen)bis-.
C14H4601s 742,70
ER Extracto en Polvo de Eleuterococo USP
USP 37
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ELEUTEROSIDOS B Y E
Extracto en Polvo de Eleuterococo
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Eleuterococo se prepara a partir de
Eleuterococo usando mezclas hidroalcoholicas. La relación
entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
Polvo está entre 13:1 y 25:1. Contiene no menos de
0,8% de eleuterósidos B y E, calculado con respecto a la
materia anhidra. Puede contener sustancias agregadas.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: 1 mg/mL de ER Eleuterósido E
USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Eleuterósido B
USP en metanol
Solución estándar C: O, 1 g de ER Extracto en Polvo de
Eleuterococo USP en 5 mL de etanol en agua al 50%.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solución muestra: O, 1 g de Extracto en Polvo en 5 mL
de etanol en agua al 50%. Someter a ultrasonido du-
rante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas
Fase móvil: Cloroformo, metanol y agua (35:15:2)
Solución reveladora: Colocar 18 mL de metanol en un
matraz de vidrio y enfriar en un baño de agua, hielo y
sal o en un congelador. Agregar 2 mL de ácido sul-
fúrico, lenta y cuidadosamente, al met?nol helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se aiuste a la tempe-
ratura ambiente.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Antes de desarrollar el cromatograma, saturar la cá-
mara durante 20 minutos con Fase móvil. Registrar la
temperatura y la humedad en el labor~t?rio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acond1c1onar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 30%,
usando un dispositivo adecuado. De~arrollar la pl~~a
en un recorrido de 6 cm, secar y rociar con Soluc1on
reveladora. Calentar la placa a 100º durante 5 minu-
tos y observar baj?, luz visi_ble y l~z. UV a 365 n~.
Criterios de aceptac1on: Bajo luz v1s1ble, la Soluoon
muestra presenta dos bandas de color marrón debidas a
eleuterósido E y eleuterósido B a valores RF de aproxi-
madamente 0,34 y 0,45, que corresponden en color y
valor RF a las bandas presentes en la Solución estándar A
y la Solución estándar B, respectivamente. La Solución
muestra también presenta dos bandas adicionales de
color marrón cerca de la zona de aplicación, que corres-
ponden en color y valor RF a las bandas presentes en la
Solución estándar C. Se pueden observar otras bandas
en los cromatogramas de la Solución muestra y Solución
estándar C. Bajo luz UV, la Solución muestra presenta
una banda de color marrón debida a eleuterósido E que
corresponde en color y valor RF a la banda presente en
la Solución estándar A.
• B. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra obte-
nido en la prueba de C?ntenido de Eleut~cósidos B y E
presenta un pico a un tiempo de retenc1on que corres-
ponde al de eleuterósido B en el cromatograma de la
Solución estándar By un pico a un tiempo de retención
que corresponde al de eleuterósido E en el cromato-
grama de la Solución estándar A.
Suplementos Dietéticos / Eleuterococo 5949
,
Disolvente: Metanol y agua (1 :1)
Solución A: Acetonitrilo y agua (5:95)
Solución B: Acetonitrilo y agua (60:40)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 97 3
5 97 3
30 60 40
31 5 95
45 5 95
45 1 97 3
60 97 3
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Eleuterósido E,
USP en metanol. Transferir 2,0 mL a un matraz volume-
trico de 5 mL y diluir con Disolvente a volumen., .
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER Eleuteros1do B
USP en metanol. Transferir 2,0 mL a un matraz volumé-
trico de 5 mL y diluir con Disolvente a volumen.
Solución estándar C: 5,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP en Disolvente. Someter a ul-
trasonido durante 30 minutos, enfriar a temperatura
ambiente y decantar. Antes de inyectar, pasar a través
de un filtro de nailon con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir 500 mg de Extracto en
Polvo a un matraz volumétrico de 100 mL, agregar
80 mL de Disolvente y someter a ultrasonido durante 30
minutos. Enfriar a temperatura ambiente, diluir con Di-
solvente a volumen y mezclar. Antes de inyectar, pasar a
través de un filtro de nailon con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor, desechando los primeros mL del
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar By Solución estándar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Ces similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de eleuterósido B en in-
yecciones repetidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Identificar los picos de eleuterósido B y eleuterósido E
en la Solución muestra por comparación con los cro-
matogramas de la ?olución estándar_ B y la Solución
estándar A, respectivamente, y medir las respuestas
de los picos.
Calcular por separado los porcentajes de eleuterósido
B y eleuterósido E en la porción de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
5950 Eleuterococo /Suplementos Dietéticos
r1 = respuesta del pico de eleuterósido E o
eleuterósido B de la Solución estándar A o de
la Solución estándar B, respectivamente
C = concentración de eleuterósido E o eleuterósido
B en la Solución estándar A o en la Solución
estándar B, respectivamente (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: No menos de 0,8% con res-
pecto a la materia anhidra
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método JI (231 ): No más de 20 ppm
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel!a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921 ): No más de
5,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 10,0%
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método 11 (611): No más de
0,5%
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Disolven-
tes Residuales y Residuos de Plaguicidas en Extractos Botá-
nicos (565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, a continuación de la denominación oficial, la
parte de la planta de la que se preparó el artículo. La
etiqueta también indica el contenido de eleuterósidos, el
disolvente de extracción utilizado para la preparación y la
relación entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo. Cumple con los requisitos de Etiquetado
en Extractos Botánicos (565).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Eleuterósido B USP
/3-D-Glucopiranósido, 4-(3-hidroxi-1-propenil)-2,6-
dimetoxifenilo.
C17H24Ü9 372,37
ER Eleuterósido E USP
/3-D-Glucopiranósido, (tetrahidro-1 H,3H-furo(3,4-c)furan-
1,4-diil)bis(2,6-dimetoxi-4, 1-fenilen)bis-.
C34H46018 742,70
ER Extracto en Polvo de Eleuterococo USP
Equinácea Angustifolia
DEFINICIÓN
Cambio en la redacción:
•La Equinácea Angustifolia está formada por las raíces y el
rizoma secos de Echinacea angustifolía DC. (Fam. Astera-
ceae). Se cosecha en el otoño después de 1 año o más de
crecimiento. Contiene no menos de 0,5% de fenoles tota-
les, calculado con respecto a la materia seca como la
suma de equinacósido (C3sH45Ü20), ácido dicafeoilquínico
(C2sH24Ü12) y ácido clorogénico (C16H1sÜ9). Contiene no
menos de 0,075% de isobutilamidas del ácido dodecate-
traenoico (C16H2sNO) con respecto a la materia seca .... usm
USP 37
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRESENCIA DE EQUINACÓSIDO V ÁCIDOS DtCAFEOILQUÍNl-
COS (CINARIN(A))
Solución estándar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ácido 1,3-dicafeoil-
quínico en metano!
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino 1O g de
Equinácea Angustifolia, y transferir aproximadamente
1 g del polvo a un dedal de extracción adecuado .
Transferir el dedal a un aparato de extracción continua
y extraer con 50 mL de cloroformo durante 1 hora. Re-
servar el extracto clorofórmico para la prueba de Identi-
ficación B. Continuar la extracción con 50 mL de meta-
no! y concentrar a un volumen reducido a 40º al vacío.
Con ayuda de metano!, transferir el extracto a un ma-
traz volumétrico de 1O mL y diluir con metano! a
volumen .
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, normalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1O mg/ml de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A, seguida de Solución reveladora B
y luego observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona amarillenta a un valor Rr
de O, 14, característico de equinacósido (ausente o pre-
sente solamente en trazas en el caso de Equinácea Pur-
púrea) que corresponde en color y valor Rr a la del
cromato_grama de la Solución estándar A; y otra zona
caractenstica del ácido 1,3-dicafeoilquínico (ausente en
Equinácea Pálida y en Equínácea Purpúrea) que corres-
ponde en color y valor Rr a la del cromatograma de la
Solución estándar B. Se pueden observar otras zonas co-
loreadas de diferentes intensidades en el cromatograma
de la Solución muestra .... usm
Eliminar lo siguiente:
•• 8. PRESENCIA DE ISOBUTILALQUENILAMIDAS
Solución estándar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP a un
tubo de centrífuga y agregar cloroformo hasta obtener
una solución con una concentración conocida de apro-
ximadamente 100 mg/ml. Agitar manualmente para
dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minutos y
centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución estándar B: 1 mg/ml de f3-sitosterol en
metano!
Solución muestra: Evaporar hasta sequedad el extracto
clorofórmico reservado de la preparación de la Solución
muestra en la prueba de Identificación A, a 40º al vacío.
Agregar 1 ml de alcohol al residuo y pasarlo a través de
un fiftro de membrana de nailon con un tamaño de
poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, normalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
USP 37
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2: 1)
Solución reveladora: Preparar una mezcla de ácido
acético glacial, ácido sulfurico y p-anisaldehído
(10:5:0,5) en un baño de hielo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Observar la placa
baJO luz UV a 254 nm, luego rociar la placa con Solu-
cion reveladora y calentar la placa a 1 00º durante 5
minutos.
Criterios de aceptación
Bajo luz UV a 254 nm: El cromatograma de la Solución
muestra presenta una zona principal a un valor Rr de
aproximadamente 0,25, debida a isobutilamida del
ácido dodeca-2E,4f,8Z, 1 Of-tetraenoico y a isobutila-
mida del ácido dodeca-2E,4E,8Z, 1 OZ-tetraenoico (au-
sente en Equinácea Pálida) que corresponde en valor
Rr a la del cromatograma de la Solucion estándar A.
Después de rociar con Solución reveladora y calentar: El
cromatograma de la Solución muestra presenta una
zona debida a f3-sitosterol que corresponde en valor Rr
a la mancha principal en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B. Por debajo de esa mancha hay una
zona debida a isobutilamida del ácido dodeca-
2E,4E,8Z, 1 OE-tetraenoico y a isobutilamida del ácido
dodeca-2f,4f,8Z, 1 OZ-tetraenoico que corresponde en
valor RF a la del cromatograma de la Solución estándar
A; y por debajo de esa mancha hay varias zonas amari-
llentas debidas a las isobutilamidas a,[3 insaturadas (au-
sentes en Equinácea Pálida y en su mayoría de color
violeta en Equinácea Purpúrea debidas a la presencia
de isobutilamidas a,[3,y,8 insaturadas) que no son visi-
bles o son escasamente visibles cuando se observan
bajo luz UV a 254 nm .... usm
Agregar lo siguiente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacósido y ácido dicafeoilquínico
(cinarin(a})
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacósido
USP y 0,2 mg/mL de ácido dicafeoilquínico (cinarina)
en metano! ,
Solución estándar B: 0,05 rl)g/ml de ER Acido Caftá-
rico USP, O, 1 mg/m~ de ER Acido Clorogénico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicórico USP en metano[
Solución estándar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en metanol. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Angus-
tifolia reducida a polvo fino a un tubo de centrífuga,
agregar 1 O mL de metanol, mezclar bien y someter a
ultrasonido durante 1O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C
y de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y
de Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Suplemenlm Dietéticos / Equinácea 5951
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 1 00º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatízación, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacósido y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a ácido dicafeoilquínico (cinarina). La Solución es-
tándar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
9rama debidas a ácido caftárico (valor Rr inferior) y
acido clorogénico (valor Rr superior) que están clara-
mente separadas, y una banda azul de ácido chicórico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
Rr correspondiente al de la banda de equinacósido en
el cromatograma de la Solución estándar A y de la So-
lución estándar C (ausente en Equinácea purpúrea). El
cromatograma de la Solución muestra presenta una
banda prominente de color azul verdoso en la parte
media del cromatograma a un valor Rr correspon-
diente al de la banda de ácido dicafeoilquínico (cina-
rina) en el cromatograma de la Solución estándar A y
de la Solución estándar C (ausente en Equinácea pálida
y Equinácea purpúrea). El cromatograma de la Solución
muestra no presenta, o presenta bandas de color azul
muy tenues, a un valor Rr correspondiente a las ban-
das de ácido caftárico y ácido chicórico en la Solución
estándar B (a diferencia de Equinácea pálida y Equiná-
cea purpúrea). El cromatograma de la Solución muestra
presenta bandas menores entre las posiciones de equi-
nacósido y cinarina. Una de estas se debe a ácido clo-
rogénico a un valor Rr correspondiente al de ácido clo-
rogénico en la Solución estándar B.... usm
Agregar lo siguiente:
•• 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER [3-Sitosterol
USP en metano!
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en diclorome-
tano. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Angus-
tifolia reducida a polvo fino a un tubo de centrífuga,
agregar 1O mL de diclorometano, mezclar bien y so-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar By
de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
5952 Equinácea /Suplementos Dietéticos USP 37

Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo, COMPOSICIÓN

ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 ml de meta- Cambio en la redacción:
no! en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo en
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador. • CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Agregar lentamente y con cuidado 1 O ml de ácido Solución A: Ácido fosfórico (O, 1 en 100) en agua
acético y 5 ml de ácido sulfúrico al meta~ol helado y Solución B: Acetonitrilo
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfne a tempe- Fase móvil: Ver la Tabla 7.
ratura ambiente, luego agregar 0,5 ml de p-
anisaldehído. Tabla 1
Análisis , , ., , Tiempo Solución A Solución B
Muestras: Solucion estandar A, Soluoon estandar B y <min' (º/o) 1°/o)
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cr~­ o 90 10
matografía en capa delgada adecuada Y, secar al aire. "3 90 10
Desarrollar los cromatogram?s en una camar? satu-. 16 78 22 "'"
rada. Retirar la pl.aca de la .car:iar~,, secar al aire, der~ 17 60 40
vatizar con Reactivo de denvat1zaoon, calentar a 1 00 -"20 60 40
durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar 20 5 90 10
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: La banda de ,B-sitosterol del cro- 25 ... usPJJ 90 10
matograma de la Solución estándar B y las dos ,bandas Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
por debajo están claramente separadas entre s1. Estas Solución estándar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
dos bandas, en valor RF decreciente, incluyen una Equinácea Angustifolia USP en Di:o~vente, agitando y ca-
banda principal de color violeta azulado y una banda lentando en un baño de agua. Diluir con Disolvente
amarilla. hasta obtener una solución con una concentración co-
Criterios de aceptación: La banda más prominente en nocida de 1 mg/ml. Pasar a través de un filtro de mem-
el cromatograma de la Solución m~e~tra ~s una banda brana con un tamaño de poro de 0,45 µ,m. o menor. ,
de color violeta azulado en el tercio mfenor del croma- Solución estándar B: •40 µg/mL de ER Ac1do Cloroge-
tograma (mucho menos proí!1inent~ .en Equinácea nico USP en Disolvente
purpúrea y ausente en Equmacea palida). Esta banda Solución estándar C: 80 µg/ml de ER Equinacósido
de color violeta azulado está entre dos bandas: una USP en Disolvente... usm
banda menos prominente de color violeta azulado a Solución muestra: Transferir aproximadamen~e 125 mg
un valor RF superior correspondiente al de la ?,anda ?e de Equinácea Angustifolia reducidos a polvo fino (capaz
,B-sitosterol en los cromatogramas de la Soluc1on estan- de pasar a través de un tamiz de malla 40), pesadc;is
dar A y de la Solución estándar B, y ur:ia b~nda caracte- con exactitud a un matraz de fondo redondo equipado
rística de color amarillo a un valor Rr mferror (ausente con un cond~nsador. Agregar 25,0 mL de Disolvente y
en Equinácea purpúrea y Equinácea pálida). ~a banda calentar bajo reflujo, agitando mecánic31mente, ~urante
de color amarillo se torna de color rosado ro11zo al 15 minutos. Centrifugar o pasar a traves de un filtro de
calentar la placa a 100° durante más de 1O minutos. El membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
cromatograma de la Solución muestra presenta una menor.
banda menor de color violeta rosado aproximada- Sistema cromato9ráfico
mente en la parte media del cromat?grama (mucho (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
más prominente en Equinácea purpurea ), una banda Modo: HPLC
menor de color violeta rosado a aproximadamente dos Detector: UV 330 nm
tercios del cromatograma (mucho más prominente en Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Equinácea pálida) y una banda ancha violeta rosada Temperatura de _la columna: .35º
cercana al frente de la fase móvil. ... usm Velocidad de flu10: 1,5 mL/m1n
Volumen de inyección: 5 µL
Cambio en la redacción: Aptitud del sistema , ., ,
Muestras: Solución estandar A y •Soluoon estandar
• C. El tiempo de retención del pie? principal .de I~ ?olu- C... uSP37
ción muestra corresponde al del pie~ ,de eq,u1nacos1do de Requisitos de aptitud
la Solución estándar~ •y de 1.a Soluc1<;n_ estando~ B;... us~31 y Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
el tiempo de retencion del pico del ac1do 1,3-dicafeoil- de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
quínico de la Solución muestra corresponde al de la Solu- de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
ción estándar A, todos los picos según se obtienen en la Extracto en Polvo de Equinácea Angusti.f~lia USP.
prueba de Contenido de Fenoles Totales. Resolución: No menos de 1,0 entre el 1somero ~el
ácido 1,3-dicafeoilquínico y equin.acós]d.o, Solucion es-
tándar A. •(NOTA-El pico de equmacos1do puede re-
solverse en dos componentes.] ... usp31 .
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0 a partir
de •Solución estándar c... usm
Factor de asimetría: No más de 2,0 para •el pico de
equinacósido, Solución estándar c... usm
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
los •picos de equinacósido en inyecciones repetidas,
Solución estándar C... usm
Análisis , , ., ,
Muestras: Solucion estandar A, Soluoon estandar B,
•Solución estándar C... usm y Solución muestra
Identificar los analitos pertinentes en .~1 cromatograma
de la Solución muestra por comparac1on con el ero-
USP 37
matograma de la Solución estándar A. Medir las áreas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de "'•usm ácido
clorogénico (C16Hl809), ácidos dicafeoilquínicos
(C2sH24Ü12) y equinacósido (C3sH46020) en la porción
de Equinácea Angustifolia tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = respuestadel pico de ácido clorogénico •o de
ambos componentes de equinacósido de la
Solución estándar correspondiente .... usm
Cs = concentración de •ácido clorogénico o
equinacósido en la Solución estándar
correspondiente .... usm (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
w = peso de Equinácea Angustifolia tomada para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta y es igual a •0,729 para
ácidos dicafeoilqumicos, con respecto a ácido
clorogénico, 1,00 para ácido clorogénico y
1,00 para componentes de
equinacósido.t..usm
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción
de Equinácea Angustifolia tomada sumando los
porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia,seca
• CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO
DODECATETRAENOICO
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Solución estándar A: Disolver, sometiendo a ultraso-
nido, ER Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia
USP en metanol, agitando durante 1O minutos, y diluir
con metanol hasta obtener una solución con una con-
centración de 5 mg/ml. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
S9lución estándar B: 1O µg/mL de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Equinácea Angustifolia, pesados con exactitud, redu-
cidos a polvo fino (capaz de pasar a través de un tamiz
de malla 40) a un matraz de fondo redondo. Agregar
80 mL de metanol y someter a reflujo durante 30 minu-
tos. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar en un ma-
traz volumétrico de 100 mL, usando pequeñas porcio-
nes de metanol para enjuagar el matraz y el filtro. Diluir
con metanol a volumen. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico, Solución es-
tándar A
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución
estándar B
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5953
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
el pico de isobutilamida del ácido 2f,4E-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del ácido
dodeca-2f,4f,8Z, 1Of-tetraenoico e isobutilamida del
ácido dodeca-2f,4f,8Z, 1OZ-tetraenoico en el croma-
tograma de la Solución muestra en comparación con
el cromatograma de la Solución estándar A. Medir las
áreas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del ácido do-
decatetraenoico en la porción de Equinácea Angusti-
folia tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
analitos pertinentes de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de isobutilamida del ácido
2f,4f-hexadienoico de la Solución estárdar B
Cs = concentración de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solución
estándar B (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
w = peso de Equinácea Angustifolia tomada para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta de isobutilamida del ácido
2f,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptación: No menos de 0,075% de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico (C16H2sNO)
con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
lllmlnar lo siguiente:
..... METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de
10 ppm .... usm
Agregar lo siguiente:
"'• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g.t..usm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: La superficie externa del rizoma es de
color marrón pálido a amarillento, está coronada con
restos del tallo aéreo y a veces presenta anillos en la
superficie de hasta 15 mm de diámetro. Las raíces tam-
bién son de color marrón pálido a amarillento, cilíndri-
cas o ligeramente ahusadas, a veces torcidas en espiral,
longitudinalmente rugosas y profundamente surcadas,
con un diámetro de hasta 4-1 O mm y pasando imper-
ceptiblemente al rizoma. La fractura es corta, cuando se
seca, se hace resistente y flexible al quedar expuesta al
aire.
Microscópicas: Los rizomas y raíces en la sección trans-
versal presentan una corteza externa delgada separada
de un amplio xilema por una línea cambial visible. El
súber está compuesto por varias hileras de células de
paredes delgadas que contienen un pigmento de color
marrón amarillento. El rizoma tiene una pequeña mé-
dula circular, pequeños grupos ocasionales de fibras lig-
nificadas de paredes gruesas en el periciclo y una cor-
5954 Equinácea / Suplementos Dietéticos
teza parenquimática. El floema y el xilema están
compuestos por bandas estrechas de tejido vascular se-
paradas por amplios radios medulares no lignificados.
Los vasos del xilema están lignificados, tienen un diá-
metro de 25-75 µm, por lo general con engrosamien-
tos reticulados pero ocasionalmente con engrosamien-
tos espiralados o anillados. Las esclereidas aparecen
solas o en pequeños grupos y su tamaño y forma varían
considerablemente, pueden ser redondeadas, rectangu-
lares o alargadas y de tipo fibroso, con una longitud de
hasta 300 µm y 20-40 µm de ancho, con espacios
intercelulares que forman canales esquizógenos de oleo-
rresina de 80-150 µm de diámetro y que contienen un
depósito negro denso. Los canales solamente están pre-
sentes fuera del cilindro central (a diferencia de Equiná-
cea Pálida, donde están presentes dentro y fuera del
cilindro central). Masas esferocristalinas de inulina se
encuentran presentes en los tejidos parenquimáticos.
Las fibras lignificadas, con una longitud de 300-800
µm, se encuentran presentes en grupos dispersos y, por
lo general, están rodeadas de fitomelanina (a diferencia
de lo que ocurre en las fibras de Equinácea Pálida, que
suelen aparecer en forma individual en la periferia de la
corteza y tienen una longitud de 100-300 µm y en las
q~e a menudo está aus~nte la fitomelanina).
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(?61): No más de 3,0%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 10,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo.
Cambio en la redaccl6n:
• ESTÁN!:.>ARES DE REFERENCIA USP (11)
.t.ER,Acido Caftárico USP
ER ~cido Chicórico USP.1i.usn1
ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP
•ER Equinacósido USP,•usp31
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
"'ER ,B-Sitosterol USP.a.usp31
Equinácea Angustifolia en Polvo
DEFINICIÓN
Cambio en la redacdón:
•La Equinácea Angustifolia en Polvo está formada por las
raíces y el rizoma secos de Echinacea angustifolia DC.
(Fam. Asteraceae). Se cosecha en el otoño después de un
año o más de crecimiento y se reduce a polvo. Contiene
no menos de 0,5% de fenoles totales, calculado con res-
pecto a la materia seca como la suma de equinacósido
(C3sH46020), ácido dicafeoilquínico (C2sH24Ü12) y ácido clo-
rogénico (C16H1sÜ9). Contiene no menos de 0,075% de
isobutilamidas del ácido dodecatetraenoico (C16H25 NO)
con respecto a la materia seca •.a.usPJ1
USP 37
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
"'• A. PRESENCIA DE EQUINACÓSIDO Y ÁCIDOS DICAFEOILQUÍNl-
COS (CINARIN(A))
Solución estándar A: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en metano!
Solución estándar B: 1 mg/mL de ácido 1 3-dicafeoil-
quínico en metanol '
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Equinácea Angustifolia en Polvo a un dedal de extrac-
ción adecuado. Transferir el dedal a un aparato de ex-
tracción continua y extraer con 50 mL de cloroformo
durante 1 hora. Reservar el extracto clorofórmico para
la prueba de Identificación B. Continuar la extracción
con 50 ml de metanol y concentrar hasta un volumen
pequeño a 40º al vacío. Con ayuda de metano!, transfe-
rir el extracto a un matraz volumétrico de 1O ml y di-
luir con metanol a volumen.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, normalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1OµL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1O mg/ml de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar lo~ cr9mato¡:¡ramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y se<:ar
la placa en uria .corriente de aire. gpciar. la placa con
Solución reveladora A seguida de So/uf'iÓn reveladora 8 y
observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatoi:¡rama de. la Solu-
ción muestra presenta 1Jna zona .amanllenta éUJn .valor RF
de 0, 14, caract.erístico de. eq.uinac~.id
. o .(ausen
o •
sente solamente .en trazas en el caso i:le Eguínacea .Pur-
º.
... '·ii:· :.pre-
p~rea) que corrE;?sponde E;?n col9r · · RF a lii. CÍE¡!l
cromatop~ama de, 1! Solución_ est , · y ofra z~a
caractenst1ca dt:il ac:1do l,3-d1cafeQilqmn1co Gausente en
Equinácea Pálida y .en Equinácea P\Jrpórea) qtie torres"
ponde, en color y valor RF a.la del crornatograma de la
Solucionestándar B. Se pueden observar otras . zonas co-
loreadas de diferentes intensidades en el cromatograma
de la Solución muestra..a.usm
Eliminar lo siguiente:
•• B. PRESENCIA DE ISOBUTILALQUENILAMIDAS
Solución estándar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP a un
tubo de centrífuga y agregar clorofQrmo hasta obtener
una solución con una concentración de aproximada-
mente 100 mg/ml. Agitar manualmente para dispersar,
someter a ultrasonido durante 5 minutos y centrifugar.
Usar el sobrenadante.
Solución estándar B: 1 mg/ml de [3-sitosterol en
metano!
Solución muestra: Evaporar hasta sequedad el extracto
clorofórmico reservado de la preparación de la Solución
muestra en la prueba de Identificación A, a 40º al vacío.
Agregar 1 ml de alcohol al residuo y pasarlo a través de
un fiítro de membrana de nailon con un tamaño de
poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, normalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
USP 37
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Solución reveladora: Preparar una mezcla de ácido
acético glacial, ácido sulfurico y p-anisaldehído
(10:5:0,5) en un baño de hielo.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Observar la placa
bajo luz UV a 254 nm. Rociar la placa con Solución
reveladora y luego calentar la placa a 100º durante 5
minutos.
Criterios de aceptación
Bajo luz UV: El cromatograma de la Solución muestra
presenta una zona principal a un valor Rr de aproxima-
damente 0,25, debida a 1sobutilamida del ácido do-
deca-2E,4E,BZ, 1Of-tetraenoico e isobutilamida del
ácido dodeca-2f,4f,8Z, 1OZ-tetraenoico (ausente en E.
Pálida) que corresponde en valor Rr a la del cromato-
grama de la Solución estándar A.
Después de rociar con Solución reveladora y calentar: El
cromatograma de la Solución muestra presenta una
zona debida a ft-sitosterol que corresponde en valor Rr
a la mancha principal en el cromatograma de .la Solu-
ción estándar B. Por debajo de esa mancha hay una
zona debida a isobutilam1da del ácido dodeca-
2f,4~,8z, l Of-tetraenoico e isobutilamida del ácido do-
deca-2f,4f,8Z, 1OZ-tetraenoico que corresponde .en
valor Rr a la del cromatograma de la Solución estándar
A; y p~r debajo de esa mancha hay varías i;onas amari-
llentas debidas a las isobutilamidas a.,f3 insaturadas (au-
sentes. en Equinácea Pálida y en su mayoría de color
violeta en Equi.ná.cea Purpúrea, debidas a I'! p. resencia
de isóbutilamidas a,f3, y,o insaturadas) que no son visi-
bles o son escasamente visibles cuando se observan
bajo luz UV a 254 nm ....usm
Apegar ló siguiente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA l:>EUJADA
Presencia de equinacósido y ácido dicafeoilquínico
(cinarin(a))
Solución estándar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacósido USP y 0,2 mg/ml de ácido ditafeoil-
quínico (cinarina) eri metano! . ,
Solución estándar B: 0,05 n;ig/ínL de ER Acido C:aftá-
rico USP, O, 1 mg. /mi,. de ER Acido Clorogénico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicórico USP en ínetanol
Solución estándar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en metanol. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Angus-
tifolia en Polvo a un tubo de centrífuga, agregar
1O mL de metano!, mezclar bien y someter a ultraso-
nido durante 1O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C
y de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y
de Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5955
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacósido, y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a ácido dicafeoilquínico (cinarina). La Solución es-
tándar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
9rama debidas a ácido caftárico (valor Rr inferior) y
acido clorogénico (valor RF superior) claramente sepa-
radas, y una banda de color azul para ácido chicórico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
de color azul en el tercio inferior del cromatograma a
un valor RF correspondiente al de la banda de equina-
cósido en el cromatograma de la Solución estándar A y
de la Solución estándar C (ausente en Equinácea pur-
púrea). El cromatograma de la Solución muestra pre-
senta una banda prominente de color azul verdoso en
la parte media del cromatograma a un valor Rr corres-
pondiente al de la banda de ácido dicafeoilquínico (ci-
narina) en el cromatograma de la Solución estándar A y
de la Solución estándar C (ausente en Equinácea pálida
y Equinácea purpúrea). El cromatograma de la SOiución
muestra no presenta, o presenta bandas de color azul
muy tenues, a un valor Rr correspondiente a las ban-
das de ácido caftárico y ácido chicórico en la Solución
estándar B (a diferencia de Equinácea pálida y Equiná-
cea purpúrea). El cromatograma de la Solución muestra
presenta bandas menores entre las posiciones de equi-
nacósido y cinarina. Una de estas se debe a ácido clo-
rogénico a un valor Rr correspondiente al de ácido clo-
rogénico en la Solución estándar B..t.usPJ1
Agregar lo siguiente:
•• B. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER {J-Sitosterol
USP en metanol
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en diclorome-
tano. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Angus-
tifolia en Polvo a un tubo de centrífuga, agregar
1O mL de diclorometano, mezclar bien y someter a ul-
trasonido durante 1O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato!)ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar B y
de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
5956 Equinácea / Suplementos Dietéticos USP 37

Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo COMPOSICIÓN

ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3) '
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 mL de meta- Cambio en la redacci6n:
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriarlo en
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador. • CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Agregar lentamente y con cuidado 1O mL de ácido Solución A: Ácido fosfórico (O, 1 en 100) en agua
acético y ? mL d~ ácido sulfúrico al metanol helado y Solución B: Acetonitrilo
mezclar bien. De1ar que la mezcla se enfríe a tempe- Fase móvil: Ver la Tabla 1.
ratura ambiente, luego agregar O 5 mL de p-
anisaldehído. ' Tabla 1
Análisis Tiempo Solución A Solución B
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y Cmin) (%) (%)
Solución muestra
Aplicar las, Muestras en bandas a una placa para cro- o 90 10
matograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire. "'3 90 10
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu- 16 78 22 .......
rada. Retirar la placa de la cámara, secar al aire deri- 17 60 40
vatizar con Reactivo de derivatización, calentar a' 100º "'20 60 40
durante 3-5 minutos, secar al aire y observar bajo luz 20 5 90 10
visible.
Aptitud del sistema: La banda de ~sitosterol del cro- 25 'USP31 90 10
matograma de la Solución estándar B y las dos bandas Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
por debajo están claramente separadas entre sí. Estas Solución estándar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
dos bandas, en valor R, decreciente, incluyen una Equinácea Angustif_?lia USP en Disolvente, agitando y ca-
banda principal de color violeta azulado y una banda lentando en un bano de agua. Diluir con Disolvente
amarilla. hasta obtener una solución con una concentración co-
Criterios de aceptación: La banda más prominente en nocida de 1 mg/ml. Pasar a través de un filtro de mem-
el cromatograma de la Solución muestra es una banda bran?, con U_!l tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
de color violeta azulado en el tercio inferior del croma- Soluc1on estandar B: 40 µg/mL de ER Acido Clorogé-
tograma (mucho menos prominente en Equinácea nico USP en Disolvente
purpúrea y ausente en Equinácea pálida). Esta banda ASolución estándar C: 80 µg/ml de ER Equinacósido
de color violeta azulado está entre dos bandas: una USP en Disolvente... usm
banda menos prominente de color violeta azulado a Solución muestra: Transferir aproximadamente 125 mg
un valor RF superior correspondiente al de la banda de de E,quinácea An9ustifolia en Polvo (capaz de pasar a
~sitosterol en los cromatogramas de ta Solución están-
traves de un tamiz de malla 40), pesados con exactitud,
~ª~ A y de la solució'} estándar B, y una banda caracte- a un matraz de fondo redondo equipado con un con-
nst1ca de color amarillo a un valor RF inferior (ausente dens.ador..Agregar 25~0.mL de Disolvente y calentar bajo
en Equinácea purpúrea y Equinácea pálida). La banda refluJ<?, agitando mecarnc~mente, durante 15 minutos.
de color amarillo se torna de color rosado rojizo al Centrifugar o pasar a traves de un filtro de membrana
calentar la placa a 100º durante más de 1O minutos. El ~on un tamaño de r.oro de 0,45 µm o menor.
cromatograma de la Solución muestra presenta una Sistema cromato9rafico
banda menor de color violeta rosado aproximada- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
mente en la parte media del cromatograma (mucho Modo: HPLC
más prominente en Equinácea purpúrea ), una banda Detector: UV 330 nm
me~or de color violeta rosado a aproximadamente dos
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
tercios del cromatograma (mucho más prominente en Temperatura de la columna: 35º
Equinácea pálida) y una banda ancha violeta. rosada Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
cercana al frente de la fase móvil.... usm Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Cambio en la redaccl6n: Muestras: Solución estándar A y ASolución estándar
CAUSP37
• C.. AEI tiempo de retención del pico principal de la Solu- Requisitos de aptitud
c1ón muestra corresponde al del pico de equinacósido de Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
1~ Solución estánd~! A y la .solucióry ~stándar B, y el de la Soluci~n estándar A es similar al Cromatograma
tiempo de retenc1on del pico de ac1do 1,3-dicafeoilquí- de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
nic9 de la Solución mu~stra cor~esponde al de la Solución Extract?, en Polvo de Equinácea Angustifolia USP.
estandar A, todos los picos segun se obtienen en la Resoluc1on: No menos de 1,0 entre los picos de isó-
prueba de Contenido de Fenoles Totales .... usm r:iero del á.Sido 1~3-dicafeoilquínico y de equinacó-
s19c:i, Soluoon estandar A. A(NOTA-EI pico de equina-
cos1do puede resolverse en dos componentes.]... usm
Factor de capacidad (k'): No menos de 3 O .A.Solu-
ción estándar CAuSP37 ' '
Factor de asimetría: No más de 2 O para el pico de
Aequinacósido, Solución estándar C~usm
Desvia~ión estánd.ar r~l~tiva: .No m~s de 2,5% para
los Ap1cos de equmacos1do en inyecciones repetidas
Solución estándar c... usm '
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B
ASolución estándar c... usm y Solución muestra '
Identificar l?,s analitos pertinentes en ,el cromatograma
de la Soluoon muestra en comparacion con el croma-
USP 37
tograma de la Solución estándar A. Medir las áreas de
los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de "-11.usp31 ácido
clorogénico (C16H1sÜ9), ácidos dicafeoilquínicos
(C2sH24Ü12) y equinacósido (C1sH46020) en la porción
de Equinácea Angustifolia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de ácido clorogénico "-o de
ambos componentes de equinacósido de la
Solución estándar correspondiente11.usm
Cs = concentración de "-ácido clorogénico o
equinacósido en la Solución estándar
correspondiente11.usm (mg/ml)
V = volumen de la Solución muestra (ml)
W = peso de Equinácea Angustifolia en Polvo usado
para preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta: "-0,729 para ácidos
dicafeoilquinicos, con respecto a ácido
clorogénico, 1,00 para ácido clorogénico y
1,00 para componentes de
equinacósido.usm
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción
de Equinácea Angustifolia en Polvo tomada sumando
los porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia, seca
• CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO
DODECATETRAENOICO
Solución estándar A: Disolver, sometiendo a ultraso-
nido, ER Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia
USP en metanol, agitando durante 1O minutos, y diluir
con metano! hasta obtener una solución con una con-
centración de 5 mg/ml. Pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
S9lución estándar B: 1O µg/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metano!
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Equinácea Angustifolia en Polvo (capaz de pasar a
través de un tamiz de malla 40), pesados con exactitud,
a un matraz de fondo redondo. Agregar 80 ml de me-
tano! y someter a reflujo durante 30 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y filtrar en un matraz volumé-
trico de 100 ml, usando pequeñas porciones de meta-
no! para enjuagar el matraz y el filtro. Diluir con meta-
no! a volumen. Pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Fase móvil: Acetorntrilo y agua (55:45)
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico, Solución es-
tándar A
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución
estándar B
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5957
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
el pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del ácido
dodeca-2E,4E,BZ, 1Of-tetraenoico e isobutilamida del
ácido dodeca-2E,4f,8Z, 1OZ-tetraenoico en el croma-
tograma de la Solución muestra en comparación con
el cromatograma de la Solución estándar A. Medir las
áreas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del ácido do-
decatetraenoico en la porción de Equinácea Angusti-
folia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/ r1) x Cs x (V/ W) x F x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
analitos pertinentes de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de isobutilamida del ácido
2f,4f-hexadienoico de la Solución estárdar B
Cs = concentración de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solución
estándar B (mg/ml)
V = volumen de la Solución muestra (ml)
W = peso de Equinácea Angustifolia en Polvo usada
para preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta de isobutilamida del ácido
2f,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptación: No menos de 0,075% de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico (C16H2sNO)
con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
... METALES PESADOS, Método /11 (231): No más de
1Oppm11.usp31
Agregar lo siguiente:
•• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g11.usp31
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: La Equinácea Angustifolia en
Polvo es un polvo de color marrón con un ligero olor
aromático y un sabor dulce gue rápidamente se convierte
en acre dejando una sensacion de hormigueo en la len-
gua. Al microscopio, se observan las siguientes caracterís-
ticas: células suberosas poligonales de paredes delgadas
con contenido de color marrón rojizo; vasos reticulados
lignificados; abundantes células petreas de formas varia-
das; fragmentos de canales de oleorresina con contenido
de color marrón rojizo y un abundante parénquima de
P,ared delgada con masas esferocristalinas de inulina.
• PERDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 10,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,más de 7,0% , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 4,0%
5958 Equinácea /Suplementos Dietéticos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación, oficial, las partes de
la planta de las que se obtuvo el articulo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER Ácido Caftárico USP
ER Ácido Chicórico USP ausp31
ER Ácido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP
•ER Equinacósido US~.t.usP11
ER lsobutilamida del Acido 2E,4E-Hexadienoico USP
•ER /3-Sitosterol USP.t..usP11
Extracto en Polvo de Equinácea
Angustifolia
DEFINICIÓN
Cambio en la redacción:
El Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia se prepara a
partir de raíces de Equinácea Anc;¡ustifolia medi~nte la ex-
tracción con mezclas hidroalcoholicas u otros disolventes
adecuados. La relación entre el material vegetal crudo ini-
cial y el Extracto en Polvo es de 2:1-8:1. Contiene no
menos de 4,0% y no más de 5,0% de fenoles totales,
calculado con respecto a la materia seca como la suma de
ª.t.usm ácido clorogénico (C16H1sÜ9), ácidos dicafeoilquíni-
cos (C25H240 12) y equinacósido (C3sH46Ü20). Contiene no
menos de O, 1% de isobutilamidas del ácido dodecatetrae-
noico (C1 6H25 NO) con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
6• A. PREsENCIA Of. ISOBUTll.ÁLQ~~A$
Solución estándar A: Tran~eñr~nacá11tl
tracto en Polvo de Eq1,.1lnácea Afigustifplia
tubo de. c.~ntrífuga y agregar.t;lorpformo . .
una solucion con una ct:mcentr~c1ón c<mpc .·· . o-
ximadamente 100 mg/mL Agitar manualmente.para
dispersar, someter a ultrasoniifo durante 5 minutos y
centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución estándar B: 1 mg/mL de /3-sitosterol en
metano!
Solución muestra: 100 mg/mL de Extracto en Polvp en
metanol. Dejar en reposo ourante 15 minutos .antes. de
usar.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para.cro-
matografía de Oí25 mm, normalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Solución reveladora: Preparar una mezcla de ácido
acético glacial, ácido sulfurico y p-anisaldehído
(10:5:0,5) en un baño de hielo.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Observar la placa
ba¡o luz UV a 254 nm, luego rociar la placa con So/u-
USP 37
ción reveladora y calentar la placa a 100º durante 5
minutos .
Criterios de aceptación
Bajo luz UV a 254 nm: El cromatograma de la Solución
muestra presenta una zona principal a un valor RF de
aproximadamente 0,25, debida a isobutilamida del
ácido dodeca-2E,4f,8Z, 1OE-tetraenoico e isobutilamida
del ácido dodeca-2E,4E,8Z, 1OZ-tetraenoico (ausente en
E. Pálida), que corresponde en valor RF a la del croma-
tograma de la Solucion estándar A.
Después de rociar con Solución reveladora: El cromato-
grama de la Solución muestra presenta una zona de-
bida a f3-sitosterol que corresponde en valor RF a la
mancha principal en el cromatograma de la Solución
estándar B. Por debajo de esa mancha hay una zona
debida a isobutilamida del ácido dodeca-2E,4E,8Z, 1OE-
tetraenoico e isobutilamida del ácido dodeca-
2E,4E,8Z, 1OZ-tetraenoico que corresponde en valor RF
a la del cromatograma de la Solución estándar A; y por
debajo de esa mancha hay varías zonas amarillentas
debidas a las isobutilamidas <X,/3 insaturadas (ausentes
en Equinácea Pálida y en su mayoría de color violeta
en Equinácea Purpúrea debidas a la presencia de iso-
butilamidas <X,/3,y,8 insaturadas) que no son visibles o
son escasamente visibles cuando se observan bajo luz
UV a 254 nm .... usp31
Agregar lo siguiente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DllG.l\DA
Presencia de equinacósido y ácido d.icafeoilqufnico
(cinarin(a))
S()lución estándar A: Una mezcla de 0,2 mg/ml de
ER Eqµinacósido USP y 0,2 mg/ml de kidQdiciffeoil-
quínico (cioo:rina) {!n metano! ~
Solución estándar B: 0,05mg/mL de.ERAcidQ..Qlftá-
rico USP, O, l mg/m~ de ER Ácido Clorogénlco USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicórico USP en me~of
Solución estáridar C: 20 mg/ml de El
Polvo de Equinácea Angustifolia USP eri meUl · . .. . ·¡.
tar hasta díspersarí.som~er a ultrasonido . .rante::S
minutos y centrifugar. IJsar el .sobrenadante..
Solución muestra: . 20 mg/mL de J;ixtracto en.·lilol~ de
Equinácea Angustifolia en m~anol, .Agítac.,hast'!. . r-
sar, someter a ultrasonido durante 5 minutps y cen 1~
tugar. Usar el spbrenadante,
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621), Cromatografía en Capa.Del-
gada,)
Adsorbente: . Mezcla de gel de sílice para crom'!to-
grafía con untam&ño promedio de partícula ·d..i:i···,5· µm
(¡:>lacas para HPTLC)
Volumen de apllcación: 5 µL de Solución estándar C
y de Solución muestra, y 2 µL de Solución estám;IQr A y
de Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar mientras esté tibia con
Reactivo de derivatización, secar al aire y observar bajo
luz UV a 366 nm.
USP 37
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacósido y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a ácido dicafeoilquínico (cinarina). La Solución es-
tándar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
9rama debidas a ácido caftárico (valor RF inferior) y
acido clorogénico (valor RF superior) que están clara-
mente separadas, y una banda de color azul para
ácido chicórico en el tercio superior del
cromatograma.
Criterios ae aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
de color azul en el tercio inferior del cromatograma a
un valor RF correspondiente al de la banda de equina-
cósido en los cromatogramas de la Solución estándar A
y de la Solución estándar C (ausente en Equinácea pur-
púrea). El cromatograma de la Solución muestra pre-
senta una banda prominente de color azul verdoso en
la parte media del cromatograma a un valor RF corres-
pondiente al de la banda de ácido dicafeoilquíníco (ci-
narina) en los cromatogramas de la Solución estándar A
y de la Solución estándar C (ausente en Equinácea pá-
lida y Equinácea purpúrea). El cromatograma de la So-
lucion muestra no presenta, o presenta bandas de color
azul muy tenues, a un valor RF correspondiente a las
bandas de ácido caftárico y ácido chicórico en la Solu-
ción estándar B (a diferencia de Equinácea pálida y
Equinácea purpúrea). El cromatograma de la Solución
muestra presenta bandas menores entre las posiciones
de equinacósido y cinarina. Una de estas se debe a
ácido clorogénico a un valor RF correspondiente al de
ácido clorogénico en la Solución estándar B.11.usm
~ar lo siguiente:
4e 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
S,olución estánélar A: 0,2 mg/ml de ER P.Sítosterol
USP en metano!
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Angustifolia USP en diclorome-
tano. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenadaf)te.
Sol1.1clón muestra: 100 mg/mL de Extracto eq Polvo
de Equinácea Angustifolia en diclorometano. Aqitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 3 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 }, Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Aasorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar B y
de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo,
ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriar en un
baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1O mL de ácido
acético y 5 mL de ácido sulfúrico al metano! helado, y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfríe a tempe-
ratura ambiente y luego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehído.
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5959
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derivatización, calentar a 100º
durante 3-5 minutos, secar al aire y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La banda de /3-sitosterol del cro-
matograma de la Solución estándar B y las dos bandas
por debajo están claramente separadas entre sí. Estas
dos bandas, en valor RF decreciente, incluyen una
banda principal de color violeta azulado y una banda
amarilla.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
de color violeta azulado en el tercio inferior del croma-
tograma (mucho menos prominente en Equinácea
purpúrea y ausente en Equinácea pálida). Esta banda
de color violeta azulado está entre dos bandas: una
banda menos prominente de color violeta azulado a
un valor RF superior correspondiente al de la banda de
/3-sitosterol en los cromatogramas de la Solución están-
dar A y de la Solución estándar B, y una banda caracte-
rística de color amarillo a un valor RF inferior (ausente
en Equinácea purpúrea y Equinácea pálida). La banda
de color amarillo se torna de color rosado rojizo al
calentar la placa a 100º durante más de 1O minutos. El
cromatograma de la Solución muestra presenta una
banda menor de color violeta rosado aproximada-
mente en la parte media del cromatograma (mucho
más prominente en Equinácea purpúrea), una banda
menor de color violeta rosado a aproximadamente dos
tercios del cromatograma (mucho más prominente en
Equinácea pálida) y una banda ancha violeta rosada
cercana al frente de la fase móvil.11.usm
Cambio en la redacción:
• •C.11.usm El tiempo de retención del pico principal de la
Solución muestra corresponde al del pico de equinacósido
de la Solución estándar A "'Y la Solución estándar B;.11.usPJ1 y
el tiempo de retención del pico del ácido 1,3-dicafeoilguí-
nico de la Solución muestra corresponde al de la Solucion
estándar A, todos los picos según se obtienen en la
prueba de Contenido de Fenoles Totales.
COMPOSICIÓN
Cambio en la redacción:
• CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Solución A: Ácido fosfórico (O, 1 en 100) en agua
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 90 10
"'3 90 10
16 78 22 .. "'Pll
17 60 40
•20 60 40
20 5 90 10
25 ,mp J 90 10
Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solución estándar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equinácea Angustifolia USP en Disolvente, agitando y ca-
5960 Equinácea / Suplementos Dietéticos
!entando en un baño de agua. Diluir con Disolvente
hasta obtener una solución con una concentración co-
nocida de 1 mg/ml. Pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución estándar B: 40 µg/ml de ER Acido Clorogé-
nico USP en Disolvente
•Solución estándar C: 80 µg/ml de ER Equinacósido
USP en Disolvente.usm
Solución muestra: Transferir aproximadamente 60 mg
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz de fondo redondo apropiado equipado con un
condensador. Agregar 25,0 ml de Disolvente y calentar
bajo reflujo, agitando mecánicamente, durante 15 mi-
nutos. Centrifugar o pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y •Solución estándar
(4u5p37
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de isó-
mero del ácido 1,3-dicafeoilquínico y de equinacó-
sido, Solución estándar A. •[NOTA-El pico de equina-
cósido puede resolverse en dos componentes.].usm
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0, •Solu-
ción estándar c.usm
Factor de asimetría: •No más de 2,0 para el pico de
equinacósido, Solución estándar C•usm
Desviación estándar relativa: •No más de 2,5%
para los picos de equinacósido, Solución estándar
(4u5p37
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
•Solución estándar C•usm y Solución muestra
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solución muestra en comparación con el croma-
tograma de la Solución estándar A. Medir las áreas de
los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de "'•usm ácido
clorogénico (C16H1sÜ9), ácidos dicafeoilquínicos
(C2sH24Ü12) y equinacósido (C3sH45Ü20) en la porción
de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de ácido clorogénico •o de
ambos componentes de equinacósido de la
Solución estándar correspondiente 4 usm
Cs = concentración de •ácido clorogénico o
equinacósido en la Solución estándar
correspondiente (mg!mL).usP31
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Equinácea Angustifolia en la Solución muestra
(mg/ml)
F = •0,729 para ácidos dicafeoilquínicos, 1,00 para
ácido cloro9énico y 1,00 para componentes
de equinacosido.usp31
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción
de Extracto en Polvo tomada sumando los
porcentajes individuales.
USP 37
Criterios de aceptación: No menos de 4,0% y no más
de 5,0% de fenoles totales con respecto a la materia
seca
• CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ÁCIDO
DODECATETRAENOICO
Solución estándar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equinácea Angustifolia USP en metanol, agitando du-
rante 1 minuto y diluir con metanol a volumen hasta
obtener una solución con una concentración conocida
de 1 mg/ml. Pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
S9lución estándar B: 1O µg/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 500 mg
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 80 ml de metanol
y someter a ultrasonido durante 30 minutos. Diluir con
metanol a volumen y pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico, Solución es-
tándar A
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución
estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
el pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del ácido
dodeca-2f,4f,8Z, 1 Of-tetraenoico e isobutilamida del
ácido dodeca-2f,4f,8Z, 1 OZ-tetraenoico en el croma-
tograma de la Solución muestra en comparación con
el cromatograma de la Solución estándar A. Medir las
áreas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del ácido do-
decatetraenoico en la porción de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
analitos pertinentes de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de isobutilamida del ácido
2f,4f-hexadienoico de la Solución estárdar B
C5 = concentración de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solución
estándar B (mg/ml)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Equinácea Angustifolia en la Solución muestra
(mg/ml)
F = factor de respuesta de isobutilamida del ácido
2f,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptación: No menos de O, 1% de isobu-
tilamidas del ácido dodecatetraenoico (C16H2sNO) con
respecto a la materia seca
USP 37
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
•• METALES PESADOS, Método 11 (231): 20 ppm.usr31
Agregar lo siguiente:
•• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g•usrJ1
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g. , 40º al vacío. Con ayuda de metanol, transferir el ex-
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botánicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Plaguicidas.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g
Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la planta a partir de las que se preparó el artículo. Si está
estandarizado por el contenido de alcamidas, etiquetar
indicando el contenido esperado de isobutilamidas del
ácido dodecatetraenoico. La etiqueta contiene una decla-
ración que indica que la Equinácea An~ustifolia puede
causar en raras ocasiones reacciones alergicas y erupcio-
nes o agravar el asma. Cumple con los requisitos en Ex-
tractos Botánicos (565), Etiquetado.
Cambio en la redaccl6n:
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER,Ácido Caftárico USP
ER ~cido Chicórico USPausp31
ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Angustifolia USP
•ER Equinacósido US~ausp31
ER lsobutilamida del Acido 2E,4E-Hexadienoico USP
•ER /3-Sitosterol USPausp31
Equinácea Pálida
DEFINICIÓN
La Equinácea Pálida está constituida por las raíces y el ri-
zoma secos de Echinacea pal/ida (Nutt.) Nutt. (Fam. Aster-
aceae). Se cosecha en el otoño después de tres años o
más de crecimiento. Contiene no menos de 0,5% de fe-
noles totales, calculados con respecto a la materia seca,
como la suma de ácido caftárico (C13H12Ü9), ácido chicó-
rico (C22H1sÜ12), ácido clorogénico (C16H1sÜ9) y equinacó-
sido (C3sH46020).
Suplementos Dietéticos/ Equinácea 5961
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRESENCIA DE EQUINACÓSIDO V AUSENCIA DE ÁCIDOS Dl-
CAFEOILQUÍNICOS (CINARIN[A])
Solución estándar A: 1O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ácido 1,3-dicafeoil-
quínico en metanol
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino aproxi-
madamente 1O g de Equinácea Pálida, y transferir apro-
ximadamente 1 g de polvo a un dedal de extracción
adecuado. Transferir el dedal a un aparato de extracción
continua y extraer con 50 mL de cloroformo durante 1
hora. Reservar el extracto clorofórmico para la prueba
de Identificación B. Continuar la extracción con 50 mL
de metano! y concentrar hasta un volumen pequeño a
tracto a un matraz volumétrico de 1O mL y diluir con
metanol a volumen.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
largo (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1O mg/mL de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/mL de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Sofución reveladora B y
observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatowama de la Solu-
ción muestra presenta una zona amarillenta a un valor RF
de O, 14, característica de equinacósido (ausente o pre-
sente solamente en trazas en Equinácea Purpúrea) que
corresponde en color y valor RF a la del cromatograma
de la Solución estándar A, y no presenta la zona caracte-
rística del ácido 1,3-dicafeoilqumico (presente en Equl-
nácea Angustifolia) que corresponde en color y valor RF
a la del cromatograma de la Solución estándar B. Se
pueden observar otras zonas de color de diferentes in-
tensidades en el cromatograma de la Solución muestra.
&USP37
Eliminar lo siguiente:
"• B. PRESENCIA DE CETOALQUENINOS
Solución estándar A: 1O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en cloroformo. Agitar
durante 1 minuto y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución estándar B: 1 mg/mL de .B-sitosterol en
metano!
Solución muestra: Evaporar hasta sequedad el extracto
clorofórmico reservado de la preparación de la Solución
muestra en la prueba de Identificación A a 40º al vacío.
Agregar 1 mL de alcohol al residuo y pasarlo a través de
un fiítro de membrana de nailon con un tamaño de
poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
largo (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Tolueno y acetato de etilo (7:3)
Solución reveladora A: Solución de vainillina al 1% en
alcohol
5962 Equinácea / Suplementos Dietéticos
Solución reveladora B: Solución de ácido sulfúrico al
10% en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B
y calentar la placa a 120º durante 3 minutos.
Criterios de aceptación: El cromatograma obtenido de
la Solución muestra presenta zonas de color verde, ma-
rrón y violeta por encima de la mancha de P.sitosterol
(intervalo RF de 0,6-0,8). Estas zonas (a diferencia de las
de Equinácea Angustifolia y Equinácea Purpúrea) son
características de los cetoalqueninos y el valor RF corres-
ponde a las zonas del cromatograma obtenido de la
Solución estándar A..a.usp11
Agregar lo siguiente:
.a.e A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacósido y ausencia de ácido dica-
feoilq_uínico (cmarin(a))
Solución estándar A: Una mezcla de 0,2 mg/ml de
ER Equinacósido USP y 0,2 mg/ml de ácido dicafeoíl-
quínico (cinarina) en metano! , Agregar lo siguiente:
Solución estándar B: 0,05 n;ig/mL de ER Acido Caftá-
rico USP, O, 1 mg/mL de ER Acido Clorogénico USP y
0,05 mg/mL de ER Ácido Chicórico USP en metano!
Solución estándar C: 20 mg/mL de ER.Extracto eh
Polvo de Equinácea Pálida USP en metano!. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Pálida
reducida a polvo fino a un tubo de centrífuga, agregar
1O ml de metano!, mezclar bien y someter a ultraso-
nido durante 10 minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 }, Cromatogrofía e11 Ct:1pa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para <:romato-
graffa con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de SoJucióll estándar C
y de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándafi A y
de Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :l)
Distancia ae desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilb 0 ri·
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8,
Solución estándar C y Solución muestro
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacósido y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a ácido dicafeoilquínico (cinarina). La Solución es-
tándar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
grama debidas a ácido caftárico (valor RF inferior) y
USP 37
ácido clorogénico (valor RF superior) que están clara-
mente separadas, y una banda azul de ácido chicórico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
RF correspondiente al de la banda de equinacósido en
los cromato~ramas de la Solución estándar A y de la
Solución estandar C (ausente en Equinácea purpúrea).
El cromatograma de la Solución muestra no presenta
una banda de color azul a un valor RF correspondiente
al de la banda de ácido dicafeoilquínico (cinarina) en
el cromatograma de la Solución estándar A (presente
en Equinácea angustifolia). El cromatograma de la So-
lución muestra puede presentar bandas de menor in-
tensidad a los valores RF corres¡:>ondientes a las bandas
de ácido caftárico y ácido chicórico en los cromatogra-
mas de la Solución estándar B y la Solución estándar C
(ausentes en Equinácea angustifolia y mucho más pro-
minentes en Equinácea purprea). El cromatograma de
la Solución muestra presenta bandas menores entre.las
posiciones de equinacósido y ácido caftárico.. Una de
estas se debe a ácido clorogénico a un valor BF .co~re5-
pondiente al de ácido clorogénico en la Solución eston-
dar B..t.usP11
.t.e B. CROMATOGRAfÍ.l\.lN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas . .· .·
Solución estándar A: 0,2 mg/rril de ER ~Sitdstet-01
USP en metano!
Solución e.stándar B: 100 m.1g/m~ c¡je ER E ..xt. .·r.actq.
Polvo de Equinácea Pálida USP en didorome
tar hasta dispersar, someter a ult~sonido ~.·
minutos ycentrifugar. Usar elsobrénai;J~~'
Soluci~n muestra: . Transferir 1 g de ~.qui~Céa·
reducida a polvo fino a un tubo de ~entríf!-!9!11'
1O mL de didorometano, mezclar l;Jien y some. •
trasonido durante lO minutos. CehtrifuQat•y.us~;
sobrenadan te.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía eJ1Capa ~~
A~~~~~ente: Gel de sílice para cromat(>grafía col'f~n
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas ·paílill
HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución
de Solución muestra, y 2 µL de Solüdórt estát'ldt.rr
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondidohar Ja placa. awitfi!j,.
medad relativa de aproximadamente 33%,. usand-:uri
dispositivo adecuado. . . ..
Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de ello,
ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 ml de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo én
un baño de agua con hielo y sal o en un conQ€1ador.
Agregar lentamente y con cuidado 1O ml de adé
acético y 5 mL de ácido sulfúrico al metano! helad!$"
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfríe a tempe.
ratura ambiente, luego agregar 0,5 mL de p--anis!llld~~
hído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para ero,.
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derivatización, calentar a 100º
durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar
bajo luz visible.
USP 37
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar A presenta una banda de color violeta corres-
pondiente a f3-sitosterol. El cromatograma de la Solu-
ción estándar B presenta la banda más prominente
como una banda de color violeta en el tercio superior
del cromatograma. El cromatograma de la Solución es-
tándar B presenta una banda de color violeta menos
prominente en el tercio inferior del cromatograma y
una banda ancha de color violeta rosado cercana al
frente de la fase móvil.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestro es una banda
de color violeta en el tercio superior del cromato-
grama, correspondiente en valor RF a una banda simi-
lar observada en la Solución estándar B (mucho menos
prominente en Equinácea angustifolia y ausente en
Equinácea purpúrea). El cromatograma de la Solución
muestro presenta una banda menos prominente de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma co-
rrespondiente en valor RF a una banda similar obser-
vada en la Solución estándar B (mucho menos promi-
nente en Equinácea purpúrea y ausente en Equinácea
angustifolia). El cromatograma de la Solución muestro
presenta una banda menor de color violeta a un valor
RF correspondiente a la banda de f3-sitosterol en los
cromatogramas de la Solución estándar A y Solución es-
tándar B y una banda ancha de color violeta rosado
cercana al frente de la fase móvil.Áusm
Cambio en la redacción:
• C. ÁEI tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al del pico de equinacósido de
la Solución estándar A y la Solución estándar B, según se
obtienen en la prueba de Contenido de Fenoles Totales. El
área del pico de cualquiera de los picos detectados en el
cromatograma de la Solución muestro en el sitio del ácido
1,3-dicafeoilquínico (Solución estándar() es no más de
1% del área del pico de equinacósido.ÁusP31
COMPOSICIÓN
Cambio en la redacción:
• CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Solución A: Ácido fosfórico (O, 1 en 100) en agua
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tablo 1.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
ímin) (%) (O/o)
o 90 10
•3 90 10
16 78 22 "'""
17 60 40
•20 60 40
20 5 90 10
25.usm 90 10
Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solución estándar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equinácea Pálida USP en Disolvente, agitando y calen-
tando en un baño de agua. Diluir con Disolvente hasta
obtener una solución con una concentración conocida
de 1 mg/ml. Pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o r:nenor.
Solución estándar B: 40 µg/ml de ER Acido Clorogé-
nico USP en Disolvente
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5963
"'Solución estándar C: 80 µg/ml de ER Equinacósido
USP en Disolvente
Solución estándar D: 40 µg/ml de ácido dicafeoilquí-
nico (cinarina) en DisolventeÁusr31
Solución muestra: Transferir 125 mg de Equinácea Pá-
lida reducida a polvo fino (capaz de pasar a través de
un tamiz de malla 40) a un matraz de fondo redondo
equipado con un condensador. Agregar 25,0 ml de Di-
solvente y calentar bajo reflujo, agitando mecánica-
mente durante 15 minutos. Centrifugar o pasar a través
de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor.
Sistema cromato9ráfíco
(Ver Cromotogrof1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y ÁSolución estándar
CÁusP37
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extracto en Polvo de Equinácea Palida USP.
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0 para el
pico de "'equinacósido, Solución estándar C. [NOTA-El
pico de equinacósido puede resolverse en dos
componentes. ]Áusp31
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
"'equinacósido, Solución estándar c... usm
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
"'los picos de equinacósido en inyecciones repetidas,
Solución estándar CÁusp31
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
ÁSo/ución estándar e, Solución estándar DÁUSP37 y Solu-
ción muestro
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solución muestro por comparación con el cro-
matograma de la Solución estándar A. Medir las áreas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de ácido caftárico
(CnH12Ü9), ácido chicórico (C22H1B012), ácido clorogé-
nico (C,6Hl809) y equinacósido (C3sH46020) en la por-
ción de Equinácea Pálida tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x Fx 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestro
rs = respuesta del pico de ácido clorogénico Áo de
ambos componentes de equinacósido de la
Solución estándar correspondienteÁusp31
Cs = concentración de Áácido clorogénico o
equinacósido en la Solución estándar
correspondienteÁusPJ1 ( mg/ m L)
V = volumen de la Solución muestro (ml)
w = peso de Equinácea Pálida en polvo usado para
preparar la Solución muestra (mg)
F = Áfactor de respuesta: ácido chicórico, 0,695;
ácido caftárico, 0,881; ácido clorogénico,
1,000; con respecto a ácido clorogénico; y
componentes de equinacósido, l ,OOOÁusr31
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción
de Equinácea Pálida tomada, sumando los
porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de fenoles
totales, con respecto a la materia seca
5964 Equinácea / Suplementos Dietéticos
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
"'• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): 10 ppm.a.usm
Agregar lo siguiente:
"'• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
"'!ercurio: No más de) ,O µg/g.a.usm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: La superficie externa del rizoma es de
color marrón pálido a marrón amarillento, está coro-
nada con restos del tallo aéreo y a veces, presenta ani-
llos en la superficie de hasta 15 mm de diámetro. Las
raíces, de hasta 4-1 O mm de diámetro, son de color
marrón pálido a marrón amarillento, cilíndricas o ligera-
mente ahusadas, algunas veces espiraladas, con arrugas
longitudinales y surcos profundos, y la transición al ri-
zoma es imperceptible. La fractura es corta cuando
seca, se torna dura y flexible por exposición al aire.
Microscópicas: Los rizomas y las ra1ces en Ja sección
transversal presentan una corteza externa delgada sepa-
rada de un amplio xilema por una línea cambia! visible.
El súber está compuesto por varias hileras de células de
paredes finas que contienen un pigmento de color ma-
rrón amarillento. El rizoma tiene una pequeña médula
circular, pequeños grupos ocasionales de fibras lignifica-
das de paredes gruesas en el periciclo y una corteza
parenquimática. El floema y el xilema están compuestos
por bandas estrechas de tejido vascular separadas por
amplios radios medulares no lignificados. Los vasos del
xilema están lignificados, tienen un diámetro de 25-75
µm, por lo general con engrosamientos reticulados pero
ocasionalmente con engrosamientos espiralados o ani-
llados. Las esclereidas aparecen solas o en pequeños
grupos, varían considerablemente de tamaño y forma,
de redondeadas a rectangulares o alargadas y de tipo
fibroso, con una longitud de hasta 300 µm y de 20-40
µm de ancho, con espacios intercelulares que forman
canales esquizógenos de oleorresina de 80-150 µm de
diámetro y contienen un depósito negro denso dentro
y fuera del cilindro central (a diferencia de Equinácea
Angustifolia, en la que los canales están presentes sólo
fuera del cilindro central). En todos los tejidos parenqui-
máticos aparecen masas esferocristalinas de inulina. Las
fibras lignificadas, presentes en la periferia de la corteza,
tienen de 100-300 µm de largo y se presentan en
forma individual, a menudo sin fitomelanina (a diferen-
cia de la Equinácea Angustifolia, en la que las fibras se
presentan en grupos dispersos, tienen de 300-800 µm
de largo y frecuentemente están rodeadas de
fitomelanina). , Volumen de aplicación: 1O µL
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Determinación de Aceites
Vol9tiles (561 ): 1,0-2,0 IJlL/100 g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 3,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 4,0%
USP 37
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de Ja denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁNl}ARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER,Acido Caftárico USP
ER ~cido Chicórico USP.a.usp31
ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Pálida USP
•ER Eguinacósido USP
ER ,B-S1tosterol USP.a.usp31
Equinácea Pálida en Polvo
DEFINICIÓN
Cambio en la reda«ión:
•La Equinácea Pálida en Polvo está constituida por las raíces
y el rizoma secos de Echínacea pallida (Nutt.) Nutt. (fam.
Asteraceae). Se cosecha en el otoño des~s de tres .aQüs
no
o más de crecimiento y se reduce a polvo. Coritlei:te.
nienos de 0,5% de fenoles totales,. cakulado c()n respecto
a la materia seca, como la suma de ácido caf~rico
(CuH1209), ácido chicórico (C22H1s01z), ácipo e:lorogénico
(C16H1s09) y equinacósido (C3sH46020)•.a.usm ·
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRESENCIA DE EQUINACÓ$1DO Y AuHNCIA DE ÁCIDO$. f>I.
CAFEOllQUÍNICO$ (CINARIN(A)) . .. .
Solución estándar A: 1O mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en metanol
Solución estándar 8: 1 mg/mL de ácido 1,3-dicafeoil-
quínico en metano!
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Pálida en
Polvo a un dedal de extracción adecuado. Transferir el
dedal a un aparato de extracción continua y extraer
con 50 mL de cloroformo durante 1 hora. Reservar el
extracto clorofórmico para la prueba de Identificación B.
Continuar la extracción con 50 mL de metano! y con-
centrar hasta un volumen pequeño a 40º al vacío. Con
ayuda de metano!, transferir el extracto a un matraz
volumétrjco de 1O mL y diluir con metano! a volumen.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm (placas para TLC)
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1O mg/mL de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metano!
Solución reveladora B: 50 mg/mL de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
 USP 37
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B y
luego observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona amarillenta a un valor RF
de O 14 característico de equinacósido (ausente o pre-
sent~ s~lamente en trazas en el caso de Equinácea Pur-
púrea) que corresponde en color y valor R1 a la del
cromatograma de la Solución estándar A, y no presenta
una zona característica del ácido 1, 3-dicafeoilquínico
(presente en Equinácea Angustifolia) que corresponde
en color y valor RF a la del cromatogran:a de la ~olució'}
estándar B. Otras zonas coloreadas de diferentes 1ntens1-
dades pueden observarse en el cromatograma de la So-
lución muestra.11.usr31
Eliminar lo siguiente:
•• 8. PRESENCIA DE CETOALQUENINOS
Solución estándar A: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en cloroformo. Agitar
duran,te 1 11'.inuto y centrifugar. Usar ~I sobrenadante.
Solucion estandar B: 1 mg/mL de j3-s1tosterol en
metano!
Solución muestra: Evaporar hasta sequedad el extracto
clorofórmico reservado de la preparación de la Solución
muestra en la prueba de Identificación A a 40º al vacío.
Agregar 1 mL de alcohol al r~siduo y pasar a t~avés de
un filtro de membrana de nailon con un tamano de
poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Tolueno y acetato de etilo (7:3)
Solución reveladora A: Solución de vainillina al 1% en
alcohol
Solución reveladora B: Solución de ácido sulfúrico al
10% en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora By
calentar la placa a 120º durante 3 minutos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta zonas de color verde, marrón y
violeta por encima de la mancha de ,6-sitosterof (inter-
valo RF de 0,6-0,8). Estas zonas (a diferencia de las de
Equinácea Angustifolia y Equinácea Purpúrea) son carac-
terísticas de los cetoalqueninos y el valor RF corresponde
a las zonas del cromatograma obtenido de la Solución
estándar A.ausr31
Agregar lo siguiente:
4 • A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacósido y ausencia de ácido dica-
feoilquínico (cinarin(a))
Solución estándar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacósido USP y 0,2 mg/mL de ácido dicafeoil-
quíniso (cin~rina) en metanol , . ,
Solucion estandar B: 0,05 n::ig/mL de ER Ac1do Cafta-
rico USP, O, l mg/m~ de ER Acido Clorogénico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicórico USP en metano!
Solución estándar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en ~etanol. Agitar .
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Pálida
en Polvo a un tubo de centrífuga, agregar 1 O mL de
metano!,· mezclar bien y someter a ultrasonido durante
1O minutos. Centrifugar y usar el sobrenadante.
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5965
Sistema cromato9ráfico
(Ver CromatograflO (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C
y de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y
de Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
disposi!ivo adecuado. . . .
Fase movil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del siste~a: La Solución estándar A presen~a
dos bandas principales de colo: azul, un.a en, e.1 tercio
inferior del cromatograma debida a equinacos1do y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a ácido dicafeoilquínico (cinarina). La Solución es-
tándar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
~rama debid?s. a ácido caftárico ~valor RF inf~rior) y
acido clorogen1co (valor RF superior) que estan clara-
mente separadas, y una banda azul de ácido chicórico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
RF correspondiente al de la banda de equinacósido en
los cr~mato<;iramas de la Solución es~árydar A y d,e la
Solucion estandar C (ausente en Equinacea purpurea).
El cromatograma de la Solución muestra no presenta
una banda de color azul a un valor RF correspondiente
al de la banda de ácido dicafeoilquínico (cinarina) en
el cromatograma de la Solución estándar A (presente
en Equinácea angustifolia). El cromatograma de la. So-
lución muestra puede presentar bandas de menor in-
tensidad a los valores RF correspondientes a las bandas
de ácido caftárico y ácido chicórico en los cromatogra-
mas de la Solución estándar B y de la Solución estándar
C (ausentes en Equinácea angustifolia y mucho más
prominentes en Equinácea purpúrea). El cromato-
grama de la Solución muestra presenta bandas menores
entre las posiciones de equinacósido y ácido caftárico.
Una de éstas se debe a ácido cloro9énico a un valor RF
correspondiente al de ácido clorogenico en la Solución
estándar B.11.usPJ1
Agregar lo siguiente:
"-• 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas .
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER ,6-S1tosterol
USP en metanol
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en dicl?rometano. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar.el sobrenada.nt~. ,.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinacea Pal1da
en Polvo a un tubo de centrífuga, agregar 1O mL de
diclorometano, mezclar bien y someter a ultrasonido
5966 Equinácea / Suplementos Dietéticos USP 37

durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el COMPOSICIÓN

sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (62·1 ), Cromatografía en Capa Del- Cambio en la redacción:
gada.)
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un • CONTENIDO DE FJ:NOLES TOTALES
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para Solución A: Acido fosfórico (O 1 en 100) en agua
HPTLC) Solución B: Acetonitrilo '
Volumen .?e aplicación: 5 µL de Solución estándar B y Fase móvil: Ver la Tabla 7.
de Solueton muestra, y 2 µL de Solución estándar A en
bandas de 8 mm Tabla 1
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- Tiempo Solución A Solución B
medad relativa de aproximadamente 33% usando un <minl _("/o} (%)
dispositivo adecuado. ' -----· -- - -~--

Fase móvil: Una mezcla de tolueno acetato de etilo o 90 10

ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: { 0,3) ' -"3 90 10
Distancia de desarrollo: 6 cm 16 78 22.urnn
Reactivo de derivatización: Colocar 85 ml de meta- 17 60 40
no! en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo en -"20 60 40
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador. 20 5 90 10
Agregar lentamente y con cuidado 1O ml de ácido
acético y 5 ml de ácido sulfúrico al metano! helado y 25 ... usPJl 90 10
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfríe a tempe- Disol':'~nte: ,Alcohol y agua (7:3)
ratura ambiente, luego agregar O 5 ml de p- Soluc1on estandar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
anisaldehído. ' Equinácea Pálid~ USP en Disolvente, agitando y calen-
Análisis tando en un bano de agua. Diluir con Disolvente hasta
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By obtener una solución con una concentración conocida
Solución muestra
~e aproximadamente 1 mg/ml. Pasar a través de un
Aplicar las, Muestras en bandas .a una placa para cro- filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
matografia en capa delgada adecuada y secar al aire. µm o menor.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu- Solución estándar B: 40 µg/ml de ER Ácido Clorogé-
rada. Retirar la placa de la cámara secar al aire deri- nico USP en Disolvente
vatizar con Reactivo de derivatizaciÓn, calentar ¡{ 100º •Solución estándar C: 80 µg/ml de ER Equinacósido
durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar USP en Disolvente
bajo luz visible. Solución estándar D: 40 µg/ml de ácido dicafeoilquí-
Apti!ud del sistema: El cromatograma de la Solución nico (cinarina) en Disolvente... usm
estandar A presenta una banda de color violeta corres- S<;>lución muestra: Transferir 125 mc;i de Equinácea Pá-
p~ndien_.te a /3-sitosterol. El cromatograma de la Solu-
lida en Polvo (capaz de pasar a traves de un tamiz de
eton estandar B presenta la banda más prominente malla 40) a un matraz de fondo redondo equipado con
como una banda de color violeta en el tercio superior un coi:idensa~or. ~gregar 25,~ ml de Disolvente y calen-
d~I cromatograma. El cromatograma de la Solución es-
tar ba¡o reflu¡o, agitando mecanicamente durante 15
tandar B presenta una banda menos prominente de minutos. Centrifugar o pasar a través de un filtro de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma y membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
una banda ancha de color violeta rosado cercana al menor.
frente de la fase móvil. Sistema cromato9ráfico
Criterios de aceptación: La banda más prominente en (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
el cromatograma de la Solución muestra es una banda Modo: HPLC
de color violeta en el tercio superior del cromato- Detector: UV 330 nm
grama, correspondiente en valor RF a una banda simi- Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
lar observada en la Solución estándar B (mucho menos Temperatura de la columna: 35º
pror:ni~ente en ~quinácea angustifolia y ausente en
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Equmacea purpurea). El cromatograma de la Solución Volumen de inyección: 5 µL
muestra presenta una banda menos prominente de Aptitud del sistema
color vial.eta en el tercio inferior del cromatograma co- Muestras: Solución estándar A y •Solución estándar
rrespondiente en valor RF a una banda similar obser-
C.AuSP37
vada en la So!usión están~ar B (mucho menos promi- Requisitos de aptitud
nente ~n ~qumacea purpurea y ausente en Equinácea Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
angust1fol1a). El cromatograma de la Solución muestra de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
presenta una banda menor de color violeta a un valor de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
RF correspondiente a la banda de /3-sitosterol en los Extracto en Polvo de Eguinácea Palida USP.
c~9mato,gramas de la Solución estándar A y de la Solu-
Fa~tor de cap~cid~~ (k'): No menos de 3,0 para el
oon estandar By una banda ancha de color violeta
pico de •eqwnacos1do, Solución estándar C. [NOTA-El
rosado cercana al frente de la fase móvil._..u5p37 pico de equinacósido puede resolverse en dos
componentes.]_..usp31
Cambio en la redacción: Factor de asimetría: No más de 2 O para el pico de
•equinacósido, Solución estándar C~usp37
• c.. , •El tiempo de retención del pico principal de la Solu- Desvia~ión estánd_ar r~l~tiva: No más de 2,5% para
eton muestra corresponde al del pico de equinacósido de •los picos de equmacos1do en inyecciones repetidas
la s.olución estándar A y la Solución estándar 8, según se Solución estándar c.AUSP37 '
obtienen en la prueba de Contenido de Fenoles Totales El Análisis
área del pico de cualquiera de los picos detectados e~ el Muestr~s: Solución estándar A, Solución estándar B
cromatograma de la Solución muestra en el sitio del ácido •s,oluetón estándar C, Solución estándar D_..usm y S~lu­
1,3-dicafeoilquínico (Solución estándar C) es no más de oon muestra
1% del área del pico de equinacósido .... usm
USP 37
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solución muestra por comparación con el cro-
matograma de la Solución estándar A. Medir las áreas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de ácido caftárico
(C13H12Ü9), ácido chicórico (C22H1s012), ácido clorogé-
nico (C16Hl809) y equinacósido (CisH4602o) en la por-
ción de Equinácea Pálida en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs =respuesta del pico de ácido clorogénico .a.o de
ambos componentes de equinacósido de la
Solución estándar correspondiente.a.usm
Cs = concentración de .a.ácido clorogénico o
equinacósido en la Solución estándar
correspondiente.a.usm (m~/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra (mL)
W = peso de Equinácea Pálida en Polvo tomado
para preparar la Solución muestra (mg)
F = .a.factor de respuesta: ácido chicórico, 0,695;
ácido caftárico, 0,881; ácido clorogénico,
1,000; con respecto a ácido dorogenico~ y
componentes de equinacósido, 1,000_.u;m
Calcular. el, porce!'l~aje de fenoles totales en la porción
de Equmacea Pal1da tomada sumando los porcentajes
individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo slguifmté:
.a.. MlTALES PESADOS, M~todo 111 {231): 10 ppm.t.usm
~r lo slgulcmté:
..., . IMPURµAS .ELEMENTALEs-PROCEDIMIENTOS (233}
CriteJif,>S de. a(:eptadón
Arsenito: No más de 1,O µg/g
c;::a~mio: . No más de Q,5 µg/g
Plomo: ·No más ~e 5,o µg/g
l\¡\ercurio: No mas de) ,O µg/g.wsm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis cf~ Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: La Equinácea Pálida en Polvo
es un polvo de color marrón con un leve olor aromático
y un sabor ligeramente acre y persistente. Se vuelve de
color amarillo cuando se monta en solución de hidróxido
de socji~. Al microscopio, se observan las siguientes ca-
ractenst1cas: grupos de canales secretores con contenido
marrór:i, rodeados de células parenquimáticas que contie-
nen cnst.ale_;; .agrupados de oxalato de calcio; y células
parenqu1mat1cas con pequeños gránulos de almidón fi-
bras lignificadas de paredes gruesas y fragmentos d~ va-
sos,reticulados y con pun,tuaciones.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Determinación de Aceite
Vol<jtil (561): 1,0-2,0 mVl 00 g
• ARTICU~OS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No mas de 7,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 4,0%
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5967
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 1 05° durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la planta de las que se obtuvo el artículo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁN!;>ARES DE REFERENCIA USP (11)
.a.ER,Acido Caftárico USP
ER ~cido Chicórico USP .a.usP11
ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Pálida USP
.a.rn Eguinacósido USP
ER j3-S1tosterol USP .a.usm
Extracto en Polvo de Equinácea Pálida
DEFINICIÓN
El Extracto ,en Polvo d_e Equinácea Pálida se prepara a partir
de las ra1ces de Echmacea pal/ida mediante la extracción
con mezclas hidroalcohólicas u otros disolventes adecua-
dos. La relación entre el material vegetal crudo inicial y el
Extracto en Polvo está entre 2:1 y 8:1. Contiene no me-
nos de 4,0% y no más de 5,0% de fenoles totales, calcu-
lados como la suma de ácido caftárico (C 13 H12 0 9) ácido
chic?~ico (C22H1s012), ácido clorogénico (C16H180;) y equi-
nacos1do (C3sH46020) con respecto a la materia seca .
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
.a.. A. PRESE!!KfA Dt EQUINACÓSIDO Y AUSENOA DE ÁCIDOS Dt-
CAFEOllQUINICOS (CINARIN(A))
Solución estándar A: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/ml de ácido .1,3.dicafeoil-
quínico en metano!
Solución muestra: Disolver 1,0 g de Extracto en Polvo
en 1O mL de metano l. Dejar que sedimente antes de
usar.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
largo (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1O mg/ml de difenilborinato
de 2-aminoetílo en metano!
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B y
observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Cr~!erios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
CJOn muestra presenta una zona amarillenta a un valor RF
de O, 14 característica de equinacósido (ausente o pre-
sente solamente en trazas en Equinácea Purpúrea) que
corresponde en color y valor RF a la del cromatograma
5968 Equinácea / Suplementos Dietéticos
de la Solución estándar A, y no presenta una zona carac-
terística del ácido 1,3-dicafeoilquínico (presente en
Equinácea Angustifolia) que corresponde en color y
valor RF a la del cromatograma de la Solución estándar
B. Se pueden observar otras zonas coloreadas de di~~­
rentes intensidades en el cromatograma de la Solucion
muestra .... usPJ1
Eliminar lo siguiente:
"'• B. El tiempo de retención del P!co princip?I de;_ 1? Solu-
ción muestra corresponde al del pico de equinacos1do de
la Solución estándar A, según se obtienen en la prueba de
Contenido de Fenoles Totales .... usm
Agregar lo siguiente:
"'• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacósido y ausencia de ácido dica-
feoilquínico ~cmarin(a))
Solución estandar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacósido USP y 0,2 mg/mL de ácido dicafeoil-
quínico (cinarina) en metanol , "'• B. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar B: 0,05 ll)g/mL de ER ,A~ido Caftá-
rico USP, 0, 1 mg/m~ de ER Acido Clorogernco USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicórico USP en metanol
Solución estándar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálída USP en !l'etanol. Agitar .
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: 20 mg/mL de Extracto en Polvo en
metano!. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido
durante 5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenad¡ilnte.
Sistema cromatografico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Def-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para crornato~
grafía con un tamaño promedio de partíc. ula d. e 5 µ. m
(placas para HP!LCL . ., / .
Volumen de apl1cac1on: 5 µL de Soluaon estandí1J'.C
y de Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y
de Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado. . .. . . .
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metif etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplícar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada Y, secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una camara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
dos bandas principales de color azul, un~ en, e_I tercio
inferior del cromatograma debida a equinacos1do y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a ácido dicafeoilquínico (cinarina). La Solución es-
tándar B presenta dos bandas prin~ipales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
9rama debid?s. a ácido caftárico ~valor RF inf~rior) y
acido clorogernco (valor RF superior) que estan clara-
mente separadas, y una banda azul de ácido chicórico
en el tercio superior. 9e1 cromatogram?. . ción estándar B presenta la banda mas prominente
Criterios de aceptac1on: La banda mas prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
USP 37
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
RF correspondiente al de la banda de equinacósido en
los cromato~ramas de la Solución estándar A y d,e la
Solución estandar C (ausente en Equinácea purpurea).
El cromatograma de la Solución muestra no presenta
una banda de color azul a un valor RF correspondiente
al de la banda de ácido dicafeoilquínico (cinarina) en
el cromatograma de la Solución estándar A (presente
en Equinácea angustifolia). El cromatograma de la_ So-
lución muestra puede presentar bandas de menor in-
tensidad a los valores Rr correspondientes a las bandas
de ácido caftárico y ácido chicórico en los cromatogra-
mas de la Solución estándar B y de la Solución estándar
C (ausentes en Equinácea angustifolia y mucho más
prominentes en Equinácea purpúrea). El cromato-
grama de la Solución muestra presenta bandas menores
entre las posiciones de equinacósido y ácido caftárico.
Una de éstas se debe a, ácido cloro9eriico a un valo~,RF
correspondiente al de acido clorogernco en la Soluc1on
estándar B.... usm
Agregar lo siguiente:
Presencia de alquilamidas
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER P.Sitosterol
USP en metanol
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Pálida USP en diclorometano.. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: 100 mg/mL de Extracto en Polvo
en diclorometano. Agitar hasta dispersar, someter a ul-
trasonido durante .5 minutos y centrifugar. Usar el
sobrenadante.
Sistema cromato!Jráfico
(Ver Cromatografla (621 ), Cromatografía en Capa Del~
goda.) ...
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía .con •l,l.:J:l
tamaño promedio de particula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen .~e aplicación: 5 µL de So(L!cíón estQ.11(/a:r)ly
de Soluc1on muestra, y 2 µL de Soluaon estám:JOr A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa; Acondicionar la placa a l,lna f'\u-
medad relativa de aproximadamente 33%, Ufiafflio t1n
dispositivo adecuado. . . ,.
Fase móvil: Una mezcla de tolueno, aci;tato de etdo,
ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 ml de meta~
nol en un frasco de vidrio de 100 mL y enfrjaflo.en
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1O ml de ácido
acético y 5 ml de ácido sulfúrico al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfríe a te:mpe-
ratura ambiente, luego agregar 0,5 mL de p-anrsalde-
hído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y,secar al aire.
Desarrollar los cromatogram?s en una camar? satu-.
rada. Retirar la placa de la camara, secar al aire, den-
vatizar con Reactivo de derivatización, calentar a 100º
durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma di:: la Solución
estándar A presenta una banda de color violeta corres-
pondiente a p.sitosterol. El cromatowama d~ la Solu-
como una banda de color violeta en el tercio superior
del cromatograma. El cromatograma de la Solución es-
USP 37
tándar B presenta una banda de color violeta menos
prominente en el tercio inferior del cromatograma y
una banda ancha de color violeta rosado cercana al
frente de la fase móvil.
Criterios de aceptación: La banda más prominente en
el cromatograma de la Solución muestra es una banda
de color violeta en el tercio superior del cromato-
grama, correspondiente en valor RF a una banda simi-
lar observada en la Solución estándar B (mucho menos
prominente en Equinácea angustifolia y ausente en
Equinácea purpúrea). El cromatograma de la Solución
muestra presenta una banda menos prominente de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma co-
rrespondiente en valor RF a una banda similar obser-
vada en la Solución estándar B (mucho menos promi-
nente en Equinácea purpúrea y ausente en Equinácea
angustifolia). El cromatograma de la Solución muestra
presenta una banda menor de color violeta a un valor
RF correspondiente a la banda de ,8-sitosterol en los
cromato_gramas de la Solución estándar A y de la Solu-
ción estandar By una banda ancha de color violeta
rosado cercana al frente de la fase móvil. ... usm
Agr"gar lo siguiente:
•• C. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
eión muestra corresponde al del pico de equinacósido de
la Solución estándar A. y la Solución estándar 8, según se
<)btienen en la prueba de Contenido de fenoles Totafes. El
área del pico de cualquiera de los picos detectados en el
cromatogiama de lá Solución muestra en el sitio del ácido
1,3-dicafeoilquínico (Solución estándar C) es ria más de
1% del área del pico de equinacósido ....usm
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE fJ.NOLES TOTALES
Solución A: Acido fosfórico (O, 1 en 100)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmln) (O/o) (O/o)
o 90 10
•3 90 10
16 78 22 "'"'7
17 60 40
"'20 60 40
205 90 10
25 ""º' 90 10
Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solución estándar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equinácea Pálida USP en Disolvente, agitando y calen-
tando en un baño de agua. Diluir con Disolvente hasta
obtener una solución con una concentración conocida
de 1 mg/ml. Pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o ryienor.
Solución estándar B: 40 µg/ml de ER Acido Clorogé-
nico USP en Disolvente
•Solución estándar C: 80 µg/ml de ER Equinacósido
USP en Disolvente
Solución estándar D: 40 µg/ml de ácido dicafeoilquí-
nico (cinarina) en Disolvente... usm
Solución muestra: Transferir aproximadamente 60 mg
de Extracto en Polvo, pesado con exactitud, a un ma-
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5969
traz de fondo redondo apropiado equipado con un
condensador. Agregar 25,0 ml de Disolvente y calentar
bajo reflujo, agitando mecánicamente, durante 15 mi-
nutos. Centrifugar o pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y •Solución estándar C.
[NOTA-El pico de equinacósido puede resolverse en
dos componentes.] ... usm
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales J?.rovisto con el ER
Extracto en Polvo de Equinácea Palida USP.
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0 para el
pico de •equinacósido, Solución estándar C... usm
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
•equinacósido, Solución estándar c... usm
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
•los picos de equinacósido en inyecciones repetidas,
Solución estándar C•usm
Análisis
Muestras: Solución muestra, Solución estándar A, Solu-
ción estándar B, •Solución estándar C y Solución están-
dar D... u5P31
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solución muestra por comparación con el cro-
matograma de la Solución estándar A. Medir las áreas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de ácido caftárico
(C13H12Ü9), ácido chicórico (C22H1s012), ácido clorogé-
nico (C16H1sÜ9) y equinacósido (C3sH46020) en la por-
ción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x f x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de •ácido cloro9énico o de
ambos componentes de equinacosido de la
Solución estándar correspondiente... usm
Cs = concentración de •ácido clorogénico o de
equinacósido en la Solución estándar
correspondiente...usm (mg/ml)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Solución muestra (mg/ml)
F = factor de respuesta: ácido chicórico, 0,695;
ácido caftárico, 0,881; ácido clorogénico,
1,000; •con respecto a ácido clorogénico; y
componentes de equinacósido, 1,000... usm
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción
de Extracto en Polvo tomada, sumando los
porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 4,0% y no más
de 5,0% de fenoles totales, con respecto a la materia
seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
.... METALES PESADOS Método JI (231): No más de
20 ppm ... usp31
 5970 Equinácea / Suplementos Dietéticos
Agregar lo siguiente:
4 • IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg!g.usm
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 04 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g. , 40º al vacío. Transferir el extracto a un matraz volumé-
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos para Extrac-
tos Botánicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Plaguicidas.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g
Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Amacenar en un lugar
fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la planta de las que se preparó el artículo. La etiqueta
incluye una advertencia que indica que la Equinácea Pá-
lida puede provocar reacciones alérgicas esporádica-
mente, sarpullido o agravar el asma. Cumple con los re-
quisitos para Extractos Botánicos (565), Etiquetado.
Cambio en la redacción:
• ESTÁN9ARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER,Acido Caftárico USP
ER ~cido Chicórico USP •usp31
ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Pálida USP
•ER Eguinacósido USP
ER fl-S1tosterol USP•vsPJ1
Equinácea Purpúrea en Polvo
DEFINICIÓN
Cambio en la redacción:
•La Equinácea Purpúrea en Polvo está formada por las raíces
y el rizoma secos de Echinacea purpurea (L.) Moench
(Fam. Asteraceae). Se cosecha en el otoño después de tres
años o más de crecimiento y se reduce a polvo. Contiene
no menos de 0,5% de fenoles totales, calculado con res-
pecto a la materia seca como la suma de ácido caftárico
(C13H12Ü9), ácido chicórico (C22H1s012) y ácido clorogé-
nico (C16Hl809). Contiene no menos de 0,025% de alca-
midas, calculado como isobutilamidas del ácido dodecate-
traenoico (C16H2sNO) .• usm
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
4 • A. PRESENCIA DE ÁCIDO CHICÓRICO Y AUSENCIA DE
EQUINACÓSIDO
USP 37
Solución estándar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ácido l, 3-dicafeoil-
quínico en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Equinácea Purpúrea en Polvo a un dedal de extracción
adecuado. Transferir el dedal a un aparato de extracción
continua y extraer con 50 mL de cloroformo durante 1
hora. Reservar el extracto clorofórmico para la prueba
de Identificación B. Continuar la extracción con 50 mL
de metano! y concentrar hasta un volumen pequeño, a
trico de 1 O ml con ayuda de metano! y diluir con me-
tano! a volumen.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1 O mg/mL de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 18 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B y
observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de color verde amari-
llenta debida a ácido chicórico a un valor Rr de 0,75 y
otra zona de color verde amarillenta debida a ácido caf-
tárico a un valor Rr de 0,45; ambas zonas corresponden
en color y valor Rr a las zonas en el cromatograma de la
Solución estándar A. El cromatograma de la Solución
muestra no presenta, o presenta sólo trazas de una zona
debida al equinacósido (presente en Equinácea Angusti-
folia y Equinácea Pálida) a un valor Rr de O, l, y no
presenta ninguna zona que corresponda en color y
valor Rr a la mancha del ácido 1,3-dicafeoilquínico (ci-
narina) (presente en Equinácea Angustifolia) en el cro-
matograma de la Solución estándar B. Se pueden obser-
var otras zonas de color de diferentes intensidades en el
cromatograma de la Solución muestra.• usm
Eliminar lo siguiente:
•• 8. PRESENCIA DE ISOBUTILALQUENILAMIDAS
Solución estándar A: 100 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de fl-sitosterol en
metanol
Solución muestra: Evaporar el extracto clorofórmico re-
servado de la prepación de la Solución muestra en la
prueba de Identificación A, hasta sequedad a 40º al va-
cío. Agregar 1 ml de alcohol al residuo y pasarlo a
través de un filtro de membrana de nailon con un ta-
maño de poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm (placas para TLC )
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Solución reveladora: Preparar una mezcla de ácido
acético glacial, ácido sulfurico y p-anisaldehído
(10:5:0,5) en un baño de hielo.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Observar la placa
USP 37
bajo luz UV a 254 nm, luego rociar la placa con Solu-
cion reveladora y calentar la placa a 100° durante 5
minutos. Observar la placa bajo luz UV de longitud de
onda larga.
Criterios de aceptación
Bajo luz UV a 254 nm: El cromatograma de la Solución
muestra presenta una zona principal que corresponde
en valor RF a la zona debida a la isobutilamida del
ácido dodeca-2E,4E,8Z, 1 OE-tetraenoico e isobutilamida
del ácido dodeca-2E,4E,8Z, 1OZ-tetraenoico en el cro-
matograma de la Solución estándar A, y por debajo de
esta zona se observan varias zonas debidas a las isobu-
tilamidas a,{3,y,o insaturadas.
Después de rociar con Solución reveladora y calentar: la
zona debida a la isobutilamida del ácido dodeca-
2E,4E,8Z, 1OE-tetraenoico e isobutilamida del ácido do-
deca-2E,4E,8Z, 1 OZ-tetraenoico se torna de color negro
azulado, y por debajo de esta zona se observan varias
zonas debidas a las 1sobutilamidas a,{3,y,o insaturadas
(no detectables en Equinácea Pálida), que se tornan
violeta (a diferencia de las zonas correspondientes en
el cromatograma de Equinácea Angustifolia, que en su
mayoría son amarillentas debido a las isobutilamidas a,
f3 insaturadas). También se observa una zona de fJ-si-
tosterol que corresponde en valor RF a la mancha prin-
cipal en el cromatograma de la Solución estándar B.
Ji.USl'37
Agregar lo slgulente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de ácido chicórico y ausencia de
equinacósido . .
Soludón estándar A: 0,2 mg/mt de ER Eqt.iinékosido
USP en .metano!. . ,
Solución estándar B: 0,2 mg/ml de ER. Aeitto Caftá-
rico lJSP/ O, 1 mg/Jtll de ER Addo ClorQgéni~o VSP y
0,2 m9/mt de ER Acido Chicórico USP. en metano!
Solucion estándar C: 20 mg/mt de ER Extrado en
PQlV(). de .Eqi.drácea Purpúrea USP .en rneta[)OI. Agitar
hasta dispersar, someter á ultrasonido durante 5 minu-
tos y.~entrif1,1gar. Usar e.1.so.l;>renadante: , . ,
Solucion muestra: Transferir 1 g de. Equ1nacea Pur-
PIÍ·rea en Polvo a un. t1..1bo de centrífuga, agregar
1O ml ~e metanof, mezclar !;líen y sofl'leter a ultraso-
nido dútante 1 O minutos. Centrifugar y .usar el
sobrenadante,
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa D~1-
gada.) . (Ver Cromatografía (621), Cromatografía en Capa Del-
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un. tam.año promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Vótumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C
y Solución muestra, y 2 µt de Solución estándar A y
Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etit
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5971
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del cro-
matograma debida a equinacósido. la Solución están-
dar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
9rama debidas a ácido caftárico (valor RF inferior) y
acido clorogénico (valor RF superior) que están clara-
mente separadas, y una banda azul de ácido chicórico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: la más prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solución muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromatowama
a un valor RF correspondiente al de la banda de acido
chicórico en los cromatogramas de la Solución estándar
By la Solución estándar C (menos prominente en Equi-
nacea Pálida y ausente o casi ausente en Equinácea
Angustifolia). la segunda más prominente de las ban-
das en el cromatograma de la Solución muestra es una
banda de color azul aproximadamente en la parte me-
dia del cromatograma debida a ácido caftárico, corres-
pondiente a una banda en el cromatograma de la So-
lución estándar C (ausente en Equinácea Angustifolia y
una banda menor en Equinácea Pálida). El cromato-
grama de la Solución muestra no presenta ninguna
banda al valor RF de equinacósido en la Solución están-
dar A (a diferencia de Equinácea Pálida y Equinácea
Angustifolia). El cromatograma de la Solucion muestra
puede presentar bandas menores de color azul corres-
pondientes a bandas similares en el cromatograma de
la Solución estándar C. Una de éstas se debe a ácido
clorogénico a un valor RF correspondiente a ácido clo-
rogénico en la Solución estándar B....usm
Agregar lo siguiente:
•• 8, CROMATOGRAFÍA EN CAPA Dll.GADA
Présencia de alquilamidas
Solución estándar A: 0,2 mg/ml de ER /Viitosterol
USP en metanol
Sotución estándar B: 100 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en diclorometano.
Agitar hasta dispe;rsar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Equinácea Pur-
púrea en Polvo a un tubo de centrífuga, agregar
1.0 ml de diclorometano, mezclar bien y someter a ul-
trasonido durante 1O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadan.te.
Sf$tema cromatográfico
gada.)
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de particula de 5 µm (placas para
HPTlC)
Volumen de aplicación: 5 µl de Solución estándar B y
Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo,
ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 ml de meta-
no( en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo en
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1 O ml de ácido
acético y 5 ml de ácido sulfúrico al metano( enfriado
con hielo y mezclar bien. Dejar que la mezcla se en-
fríe a temperatura ambiente, luego agregar 0,5 ml de
p-anisaldehído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
5972 Equinácea / Suplementos Dietéticos
Aplicar las Muestras en bandas a una capa para croma-
tografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Acondicionar la placa a una humedad relativa de
aproximadamente 33% usando un dispositivo ade-
cuado. Desarrollar los cromatogramas en una cámara
saturada. Retirar la placa de la cámara, secar al aire,
derivatizar con Reactivo de derivatización, calentar a
100º durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y ob-
servar bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta la más prominente de las bandas
como una banda violeta rosada aproximadamente en
la parte media del cromatograma, y justo debajo de
esta banda rosada, una banda violeta a un valor RF
inferior, similar en posición y color a la banda de /3-
sitosterol en los cromatogramas de la Solución estándar
A. Estas dos bandas están claramente separadas entre
sí. El cromatograma de la Solución estándar B también
presenta una banda ancha violeta rosada cercana al
frente de la fase móvil.
Criterios de aceptación: La más prominente de las
bandas del cromatograma de la Solución muestra es
una banda violeta rosada aproximadamente en la
parte media del cromatograma, similar en posición y
color a una banda en el cromatograma de la Solucion
estándar B (mucho menos J?rominente en Equinácea
Angustifolia y Equinácea Palida), una banda de color
violeta correspondiente a la banda de f3-sitosterol en
los cromatogramas de la Solución estándar A y la Solu-
ción estándar 8, y una banda ancha violeta rosada cer-
cana al frente de la fase móvil, similar en posición y
color a la banda en el cromatograrna de la Solución
estándar B. El cromatograma de la Solución muestra no
presenta ninguna banda de color amarillo por debajo
de la banda de ¡3-sitosterol (a diferencia de Equinácea
Angustifolia) ni una banda prominente violeta aproxi-
madamente en dos tercios del crornatograma (a dife-
rencia de Equinácea Pálida) .• usm
Cambio en la redacción:
• C. •El tiempo de retención del pico principal en la Solu-
ción muestra corresponde al del pico de ácido chicórico
en la Solución estándar A, y el segundo de los picos más
prominentes corresponde al del pico de ácido caftárico
de la Solución estándar B. El cromatograma de la Solución
muestra no presenta ningún pico o presenta un pico mu-
cho menor al tiempo de retención correspondiente al
pico de equinacósido en el cromatograrna de la Solución
estándar D. Todos los picos según se obtienen en la
prueba de Contenido de Fenoles Tota/es .•usm
COMPOSICIÓN
Cambio en la redacción:
• CONTENIDO DE fJ:NOLES TOTALES
Solución A: Acido fosfórico (O, 1 en 100) en agua
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(minl (%) (%)
o 90 10
13 78 22
14 60 40
17 5 60 40
18 90 10
30 90 10
USP 37
Disolvente: Alcohol y agua (7:3) ,
Solución estándar A: 4 30 µg/ml de ER Acido Chicórico
USP en Disolvente.usm
Solución estándar B: 4 20 µg/ml de ER Ácido Caftárico
USP en Disolvente
Solución estándar C: 20 µg/ml de ER Ácido Clorogé-
nico USP en Disolvente
Solución estándar D: 20 µg/ml de ER Equinacósido
USP en Disolvente.usm
Solución muestra: Transferir aproximadamente 125 mg
de Equinácea Purpúrea en Polvo (capaz de pasar a
través de un tamiz de malla 40), pesados con exactitud,
a un matraz de fondo redondo equipado con un con-
densador. Agregar 25,0 ml de Disolvente y calentar bajo
reflujo, agitando mecánicamente, durante 15 minutos.
Centrifugar o pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de P.oro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato~rafico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2% para
•el pico de ácido chicórico en inyecciones repetidas,
Solución estándar A•usp31
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
•Solución estándar C, Solución estándar D•usm y Solu-
ción muestra
Calcular por separado el porcentaje de ácido caftárico
(C13H12Ü9), ácido chicórico (C22H1sÜ12) y ácido cloro-
génico (C16H1sÜ9) en la porción de Equinácea Pur-
púrea en Polvo tomada:
•Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 10011.usm
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs =área del pico del •analito pertinente de la
Solución estándar correspondiente.usm
Cs = concentración del •analíto pertinente en la
Solución estándar correspondiente
(mg/mL)11.usP31
V = volumen de la Solución muestra (ml)
W = peso de la Equinácea Purpúrea en Polvo usada
para preparar la Solución muestra (mg)
4 &USP37
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción
de Equinácea Purpúrea en Polvo tomada, sumando
los porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia seca
• CONTENIDO DE ALCAMIDAS
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Solución estándar A: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Equinácea Purpúrea USP en metano!. Disolver,
usando ultrasonido y agitando durante 1 O minutos.
Después de diluir, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
S9lución estándar B: 1 O µg/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2E,4E-Hexadienoico USP en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Equinácea Purpúrea en Polvo (capaz de pasar a
través de un tamiz de malla 40) a un matraz de fondo
redondo. Agregar 80 ml de metanol y someter a reflujo
durante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y
filtrar en un matraz volumétrico de 100 ml, usando pe-
queñas porciones de metanol para enjuagar el matraz y
el filtro. Diluir con metanol a volumen. Pasar a través de
USP 37
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico, Solución es-
tándar A
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución
estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
el pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los picos de las 1O alcamidas principales en
el cromatograma de la Solución muestra en compara-
ción con el cromatograma de la Solución estándar A.
Calcular el porcentaje de alcamidas en la porción de
Equinácea Purpúrea en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = suma de las áreas de los picos de los analitos
pertinentes de la Solucion muestra
rs = área del pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-
hexadienoico de la Solución estándar B
Cs = concentración de ER lsobutilamida del Ácido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solución
estándar B (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de Equinácea Purpúrea en Polvo usado
para preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta para isobutilamida del
ácido 2f,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptación: No menos de 0,025% con
respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
..... METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de
1O ppm .... usP37
Agregar lo siguiente:
""• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS {233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g .... usP37
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Al microscopio, se observan
las siguientes caraterísticas: vasos (80 x 30 µm) con pare-
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5973
des sesgadas en los extremos y paredes secundarias espi-
raladas o punteadas; células suberosas rectan~ulares
(150 x 60 µm) con inclusiones de color marran; células
parenquimáticas rectangulares (120 x 30 µm), algunas
punteadas; células fibrosas alargadas con un lúmen estre-
cho y extremo en forma de embudo (20-40 µm de an-
cho); esclereidas poligonales; una capa melanogénica de
espesor variable, intercalada entre las paredes celulares
del parénquima; y esclereidas, vasos y fibras lignificadas.
El almidón está presente; los cristales de oxalato de calcio
e inulina están ausentes.
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar una muestra a 105º durante 2 horas.
Cri):erios de aceptación~ No más de 10,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín, y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁN!}ARES DE REFERENCIA USP (11)
""ER,Acido Caftárico USP
ER ~cid o Chicórico USPÁUSP37
ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP
..
""ER Equinacósido us~ USP37
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
""ER f>-Sitosterol USP ....usm
Extracto en Polvo de Equinácea
Purpúrea
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Eguinácea Purpúrea se prepara a
partir de Raíz de Equinacea Purpúrea seca, Partes Aéreas
de Equinácea Purpurea o una mezcla de ellas, mediante
extracción con mezclas hidroalcohólicas u otros disolven-
tes adecuados. La relación entre el material vegetal crudo
inicial y el Extracto en Polvo está entre 2:1 y 8:1. Con-
tiene no menos de 4,0% de fenoles totales, calculado
como la suma de ácido caftárico (C13H12Ü9), ácido chicó-
rico (C22H1s012) y ácido clorogénico (C16H1sÜ9), con res-
pecto a la materia seca. Contiene no menos de 0,025%
de isobutilamidas del ácido dodecatetraenoico
(C, 6H25 NO), calculado con respecto a la materia seca .
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
""• A. PRESENCIA DE ISOBUTILALQUENILAMIDAS
Solución estándar A: 100 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metano!
Solución estándar B: 1 mg/ml de f>-sitosterol en
metano!
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea a un dedal de
extracción adecuado. Transferir el dedal a un aparato de
extracción continua y extraer con 50 ml de cloroformo
durante 1 hora. Evaporar el extracto clorofórmico hasta
sequedad a 40º al vacío. Agregar 1 mL de alcohol al
5974 Equinácea /Suplementos Dietéticos
residuo y pasar a través de un filtro de membrana de
nailon con un tamaño de poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 1 0-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2: 1)
Solución reveladora: Preparar una mezcla de ácido
acético glacial, ácido sulfurico y p-anisaldehído
(10:5: 0,5) en un baño de hielo.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Observar la placa
bajo luz UV a 254 nm y luego, rociar la placa con
Solución reveladora y calentar la placa a 100º durante 5
minutos.
Criterios de aceptación
Bajo luz UV a 254 nm: El cromatograma de la Solución
muestra presenta una zona principal que corresponde
en valor RF a la zona debida a la 1sobutilamida del
ácido dodeca-2f,4f,8Z, 1Of-tetraenoíco e isobutilamida
del ácido dodeca-2f,4f,8Z, 1 OZ-tetraenoico en el cro-
matograma de la Solución estándar A, y por debajo de
esta zona se observan varias zonas debidas a las isobu-
tilamidas a,fJ,y,i5 insaturadas.
Después de rociar con la Solución reveladora y calentar:
La zona debida a la isobutilamida del ácido dodeca-
2f,4f,8Z, 1 Of-tetraenoico e isobutilamida del ácido do-
deca-2E,4E,8Z, 1OZ-tetraenoico se torna negra azulada
y por debajo de esta zona se observan varias zonas
debidas a las isobutilamidas a,fJ, y,i5 insaturadas (no de-
tectables en Equinácea Pálida), que se tornan violeta (a
diferencia de las zonas correspondientes en el croma-
tog rama de Equinácea An9ustifolia, que en su mayoría
son amarillentas debido a 1sobutilamidas a,fJ insatura-
das). También se observa una zona debida a fJ-sitos-
terol que corresponde en valor RF a la mancha princi-
pal en el cromatograma de fa Solución estándar B... usP11
Eliminar lo siguiente:
•• B. Los tiempos de retención de los picos de los ácidos
chicóríco y caftárico de la Solución muestra corresponden
a los de la Solución estándar A, según se obtienen en la
prueba de Contenido de Fenoles Totales. No se detecta o se
detecta un pico muy débil de equinacósido ..,usm
Agregar lo siguiente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de ácido chicórico y ausencia de
equinacósido
Solución estándar A: 0,2 mg/ml de ER Equinacósido
USP en metano! ,
Solución estándar B: 0,2 mg/ml de ER Acido Caftá-
rico USP, O, 1 mg/rpL de ER Acido Clorogénico USP y
0,2 m_9/mL de ER Acido Chicórico USP en metanol
Solucion estándar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metano!. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: 20 mg/mL de Extracto en Polvo de
Equinácea Purpúrea en metano!. Agitar hasta dispersar,
someter a ultrasonido durante 5 minutos y centrifugar.
Usar el sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
USP 37
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C
y Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y
Solución estándar 8 en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactivo de derivatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del cro-
matograma debida a equinacósido. La Solución están-
dar B presenta dos bandas de color azul aproximada-
mente en la parte media del cromatograma debidas a
ácido caftáríco (valor RF inferior) y ácido clorogénico
(valor Rr superior) que están claramente separadas, y
una banda azul de ácido chicórico en el tercio superior
del cromatograma.
Criterios de aceptación: La más prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solución muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato_grama
a un valor RF correspondiente al de ta banda de acido
chicórico en los cromatogramas de la Solución estándar
By la Solución estándar C (menos prominente en Equi-
nacea Pálida y ausente o casi ausente en Equinácea
Angustifolia). La segunda más prominente de las ban-
das en el cromatograma de la Solución muestra es una
banda de color azul aproximadamente en la parte me-
dia del cromatograma debida a ácido caftárico, corres-
pondiente a una banda en los cromatogramas de la
Solución estándar By la Solución estándar C (ausente en
Equinácea Angustifolia y una banda menor en Equiná-
cea Pálida). El cromatograma de la Solución muestra no
presenta ninguna banda al valor RF de equinacósido en
la Solución estándar A (a diferencia de Equinácea Pálida
y Equinácea Angustifolia). El cromatograma de la Solu-
ción muestra puede presentar bandas menores de color
azul correspondientes a bandas similares en el croma-
tograma de la Solución estándar C. Una de éstas se
debe a ácido clorogénico a un valor RF correspon-
diente a ácido clorogénico en la Solución estándar B.
A.USP31
Agregar lo siguiente:
•• 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER fJ-Sitosterol
USP en metano!
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en diclorometano.
Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: 100 mg/mL de Extracto en Polvo
de Equinácea Purpúrea en diclorometano. Agitar hasta
dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minutos y
centrifugar. Usar el sobrenadante.
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Equinácea 5975

Sistema cromatográfico cho menor al tiempo de retención correspondiente al pico

(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del- de equinacósido en el cromatograma de la Solución están-
gada.) dar D, todos los picos según se obtienen en la prueba de
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un Contenido de Fenoles Totales .... usP31
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC) COMPOSICIÓN
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar B y
Solución muestro, y 2 µL de Solución estándar A en Cambio en la redacción:
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- • CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un Disolvente: Alcohol y agua (7:3) ,
dispositivo adecuado. Solución estándar A: •30 µg/ml de ER Acido Chicórico
Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo, USP en Disolvente•usP37 ,
ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3) Solución estándar B: 4 20 µg/ml de ER Acido Caftárico
Distancia de desarrollo: 6 cm USP en Disolvente ,
Reactivo de derivatización: Colocar 85 ml de meta- Solución estándar C: 20 µg/ml de ER Acido Clorogé-
no! en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo en nico USP en Disolvente
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador. Solución estándar D: 20 µg/ml de ER Equinacósido
Agregar lentamente y con cuidado 1O ml de ácido USP en Disolvente... usP37
acético y 5 ml de ácido sulfúrico al metano! enfriado Solución muestra: Transferir 60 mg de Extracto en
con hiefo y mezclar bien. Dejar que la mezcla se en- Polvo de Equinácea Purpúrea a un matraz de fondo re-
fríe a temperatura ambiente, luego agregar 0,5 ml de dondo equipado con un condensador. Agregar 25 ml
p-anisaldehído. de Disolvente y calentar bajo reflujo, agitando mecánica-
Análisis mente, durante 15 minutos. Centrifugar o pasar a
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y través de un filtro de membrana con un tamaño de
Solución muestra poro de 0,45,µm o menor.
Aplicar las Muestras en bandas a una capa para croma- Solución A: Acido fosfórico (0, 1 en 100) en agua
tografía en capa delgada adecuada y secar al aire. Solución B: Acetonitrilo
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu- Fase móvil: Ver la Tabla 7.
rada. Retirar la placa de la cámara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derivatización, calentar a 100°
durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar Tabla 1
bajo luz visible. Tiempo Solución A Solución B
Aptitud del sistema: El cromato9rama de la Solución (min) (%) (O/o)
estándar B presenta la más prominente de las bandas o 90 10
como una banda violeta rosada aproximadamente en
la parte media del cromatograma, y justo debajo· de 13 78 22
esta banda rosada, una banda violeta a un valor RF 14 60 40
inferior, similar en posición y color a la banda de /3- 17 60 40
sitosterol en el cromatowama de la Solución estándar 17 5 90 10
A. Estas dos bandas están claramente separadas entre 22 90 10
sí. El cromatograma de la Solución estándar B también
presenta una banda ancha violeta rosada certana al Sistema cromato9ráfico
frente de la fase móvil. La banda de ,8-sitosterol del (Ver Cromatogrof1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
cromatograma de la Solución estándar B y la banda Modo: HPLC
violeta rosada que aparece debajo están claramente se- Detector: UV 330 nm
paradas entre s1. Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Criterios de aceptación: La más prominente de las Temperatura de la columna: 35º
bandas del cromatograma de la Solución muestra es Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
una banda violeta rosada aproximadamente en la Volumen de inyección: 5 µL
parte media del cromatograma, similar en posición y Aptitud del sistema
color a la banda en el cromatograma de la Solución Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
estándar B (mucho menos J?,rominente en Equinácea Requisitos de aptitud
Angustifolia y Equinácea Palida), una banda de color Desviación estándar relativa: No más de 2% para
violeta correspondiente a la banda de ,8-sitosterol en •el pico de ácido chicórico en inyecciones repetidas,
los cromatogramas de la Solución estándar A y la Solu- Solución estándar A.t.usp31
ción estándar B, y una banda ancha violeta rosada cer- Análisis
cana al frente de la fase móvil, similar en posición y Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
color a la banda en el cromatograma de la Solución •Solución estándar C, Solución estándar D.t.usP37 y Solu-
estándar B. El cromatograma de la Solución muestra no ción muestro
presenta ninguna banda de color amarillo por debajo Calcular, por separado, el porcentaje de ácido caftárico
de la banda ae ,8-sitosterol (a diferencia de Equinácea (C 13 H1209), ácido chicórico (C22H13Ü12) y ácido cloro-
Angustifolia) ni una banda prominente violeta aproxi- génico (Ci6Hl809) en la porción de Extracto en Polvo
madamente en dos tercios del cromatograma (a dife- de Equinácea Purpúrea tomada:
rencia de Equinácea Pálida) .... usm
•Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 1OO.t.usP31
Agregar lo siguiente: ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solución muestro
•• C. El tiempo de retención del pico principal de la Solu- rs = respuesta del pico del •analito pertinente de
ción muestra corresponde al del pico de ácido chicórico la Solución estándar correspondiente... usP37
de la Solución estándar A, y el segundo de los picos más Cs = concentración del •analito pertinente en la
prominentes corresponde al del pico de ácido caftárico de Solución estándar correspondiente
la Solución estándar B. El cromatograma de la Solución (mg/ml).t.usP37
muestro no presenta ningún pico o presenta un pico mu-
5976 Equinácea /Suplementos Dietéticos USP 37

e,, = concentración de Extracto en Polvo de F =factor de respuesta para convertir la

Equinácea Purpúrea en la Solución muestra isobutilamida del acido 2f,4f-hexadienoico
(mg/mL) en isobutilamidas del ácido
.& 4.USfJ37 dodecatetraenoico, 1, 35 3
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porción Criterios de aceptación: No menos de 0,025% con
de Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea tomada, respecto a la materia seca
sumando los percentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: No menos de 4,0% con res- CONTAMINANTES
pecto a la materia seca ,
• CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO Eliminar lo siguiente:
DODECATETRAENOICO
Solución estándar A: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Equinácea Purpúrea USP en metano!. Disolver
•• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de
usando ultrasonido y agitando durante 1 O minutos. 20 ppm.usr31
Después de diluir, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor. Agregar lo siguiente:
S9lución estándar B: 1 O µg/mL de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol •• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Solución muestra: Transferir aproximadamente 500 mg Criterios de aceptación
de Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea, pesados Arsénico: No más de 1,0 µg/g
con exactitud, a un matraz volumétrico de 1 00 ml. Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Agregar 80 mL de metano! y someter a ultrasonido du- Plomo: No más de 5,0 µg/g
rante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y di- IV!ercurio: No más de) ,O µg!g.usm ,
luir con metanol a volumen. Pasar a través de un filtro • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Ana-
de membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
menor. requisitos.
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (55:45) • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Sistema cromato9ráfico tal bacteriano no excede de 104 ufc/g. El recuento total
(Ver CromatografJO (621 ), Aptitud del Sistema.) combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Modo: HPLC cede de 1 0 3 ufc/g. ,
Detector: UV 254 nm • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Temperatura de la columna: 30º ausencia de SaJmonella spp. y Escherichia coli.
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min • EXTRACTOS BOTANICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
Volumen de inyección: 25 µL ple con los requisitos.
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B PRUEBAS ESPECÍFICAS
Requisitos de aptitud • PÉRDIDA POR SECADO (731)
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma Muestra: 1 g
de la Solución estándar A es similar al Cromatograma Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 2 horas.
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex- Criterios de aceptación: No más de 5,0%
tracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de iso- REQUISITOS ADICIONALES
butilamidas del ácido dodecatetraenoico, Solución es- • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
tándar A permeables y resistentes a la luz, en un lugar fresco.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución latín, y después de la denominación oficial, las partes de
estándar B la planta a partir de las que se preparó el artículo. Si se
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para deriva de raíz y de partes aéreas, indicar los porcentajes
el pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico correspondientes de cada uno. Etiquetar indicando el
en inyecciones repetidas, Solución estándar B contenido de fenoles totales e isobutilamidas del ácido
Análisis dodecatetraenoico. La etiqueta incluye una advertencia
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y que indica que la Equinácea Purpúrea puede causar reac-
Solución muestra ciones alérgicas esporádicamente, erupciones cutáneas o
Identificar los picos debidos a isobutilamida del ácido agravar el asma. Cumple con los requisitos de Extractos
2E,4E,8Z, 1 Of-dodecatetraenoico e isobutilamida del Botánicos (565), Etiquetado.
ácido 2E,4E,8Z, 1 OZ-dodecatetraenoico en el cromato-
grama de la Solución muestra en comparación con el Cambio en la redacción:
cromatograma de la Solución estándar A. Medir las
áreas de los picos pertinentes. • ESTÁN9ARES DE REFERENCIA USP (11)
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del ácido do- •ER,Acido Caftárico USP
decatetraenoico en la porción de Extracto en Polvo ER ~cido Chicórico USP•usr31
de Equinácea Purpúrea tomada: ER Acido Clorogénico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x Fx 100 •ER Equínacósido us~.USP37
ru = suma de las respuestas de los picos de los ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
analitos pertinentes de la Solución muestra •ER ,B-Sitosterol USP•usr31
= respuesta del pico de la Solución estándw B
= concentración de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solución
estándar B (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Equinácea Purpúrea en la Solución muestra
(mg/mL)
 USP 37
Equinácea Purpúrea, Partes Aéreas
DEFINICIÓN
Las Partes Aéreas de Equinácea Purpúrea están compuestas
por las partes aéreas de Echinacea purpurea (L.) Moench
(Fam. Asteraceae). Se cosecha durante la etapa de flora-
ción. Contiene no menos de 1,0% de la suma de ácido
caftárico (C13H12Ü9) y ácido chicórico (C22H1sÜ12), y no
menos de 0,01 % de isobutilamidas del ácido dodecate-
traenoico (C16H2sNO), calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
.t.e A. PRESENCIA DE ÁCIDO CHICÓRICO V AUSENCIA DE
EQUINACÓSIDO
Solución estándar: 1 O mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Equinácea Purpúrea USP en metano!
Solución muestra: Agregar 5 mL de alcohol diluido
(7:3) a 0,5 g del material vegetal en polvo y agitar du-
rante 1 minuto. Centrifugar y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1 O mg/mL de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/mL de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 1 8 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora By
observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona verde amarillenta a un
valor RF de 0,75, debida a ácido chicórico y otra zona
verde amarillenta a un valor RF de 0,45, debida a ácido
caftárico, ambas zonas corresponden en color y valor RF
a zonas del cromatograma de la Solución estándar. El
cromatograma de la Solución muestra no presenta o
presenta solamente trazas de una zona a un valor RF de
O, 1 debido al equinacósido {presente en Equinácea An-
gustifolia y en Equinácea Pálida). Se pueden observar
otras zonas coloreadas de diferentes intensidades en el
cromatograma de la Solución muestra .... usP37
Agregar lo siguiente:
.t.e A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de ácido chicórico y ausencia de
equinacósido
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacósido
USP en metano! , de la Solución estándar A y el segundo de los picos más
Solución estándar B; 0,2 mg/mL de ER Acido Caftárico
USP, 0,,1 mg de ER Acido Clorogénico USP y 0,2 mg/mL
de ER Acido Chicórico USP en metano!
Solución estándar C: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metano!. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Partes Aéreas de
Equinácea Purpúrea reducidas a polvo fino a un tubo de
centrífuga, agregar 1O mL de metano!, mezclar bien y
someter a ultrasonido durante 1O minutos. Centrifugar
y usar el sobrenadante.
Suplementos Dietéticos / Equinácea 5977
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografra (621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C y
Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y Solu-
ción estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
positivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografía en capa delgada adecuada y secar al aire. De-
sarrollar los cromatogramas en una cámara saturada.
Retirar la placa de la cámara, calentar a 100º durante
5 minutos, derivatizar la placa mientras esté tibia con
Reactivo de derivatización, secar al aire y observar bajo
luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del croma-
tograma debida a equinósido. La Solución estándar B
presenta dos bandas principales de color azul aproxima-
damente en la parte media del cromatograma debidas
a ácido caftárico (valor RF inferior) que están claramente
separadas y una banda azul de ácido chicórico en el
tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: La más prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solución muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato9rama
a un valor RF correspondiente al de la banda de acido
chicórico en el cromatograma de la Solución estándar B
y la Solución estándar C. La segunda más prominente de
las bandas en el cromatograma de la Solución muestra
es una banda de color azul aproximadamente en la
parte media del cromatograma debida a ácido caftá-
rico, correspondiente a una banda en el cromatograma
de la Soluoón estándar C. El cromatograma de la Solu-
ción muestra no presenta ninguna banda al valor RF de
equinacósido en la Solución estándar A (a diferencia de
Equinácea Pálida y de Equinácea Angustifolia). El croma-
tograma de la Solución muestra presenta bandas meno-
res de color azul correspondientes a bandas similares en
el cromatograma de la Solución estándar C. Una de es-
tas bandas se debe a ácido clorogénico a un valor RF
correspondiente a ácido clorogénico en la Solución es-
tándar B. El cromatograma de la Solución muestra pre-
senta una banda de color rojo debida a clorofila cer-
cana al frente de la fase móvil. ... usr11
Cambio en la redacción:
• El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
.t.8.
ción muestra corresponde al del pico de ácido chicórico
prominentes corresponde al del pico de ácido caftárico en
la Solución estándar B. El cromatograma de la Solución
muestra no presenta o presenta un pico mucho menor al
tiempo de retención correspondiente al pico de equinacó-
sido en el cromatograma de la Solución estándar C, todos
l9s picos según se, obtienen en la prueba de Contenido de
Acido Chicórico y Acido Caftárico .... usm
• C. Los tiempos de retención de los picos pertinentes de
la Solución muestra, principalmente debidos a los picos de
las isobutilamidas del ácido dodecatetraenoico, corres-
ponden a los de la Solución estándar A, según se obtie-
5978 Equinácea /Suplementos Dietéticos USP 37

nen en la prueba de Contenido de lsobutilamidas del Ácido W = peso de las Partes Aéreas de Equinácea
Dodecatetraenoico. Purpúrea tomadas para preparar la Solución
muestra (mg)
COMPOSICIÓN J. J.USP37
Calcular el porcenta¡·e de la suma de ácido chicórico y
Cambio en la redacción: ácido caftárico en a porción de Partes Aéreas de
Equinácea Purpúrea tomada, sumando los porcentajes
• CONTENIDO DE ÁCIDO CHICÓRICO Y ÁCIDO CAFTÁRICO individuales calculados.
Solución A: Ácido fosfórico (O, 1 en 100) en agua Criterios de aceptación: No menos de 1,0% con res-
Solución B: Acetonitrilo pecto a la materia seca ,
Fase móvil: Ver la Tabla 7. • CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO
DODECATETRAENOICO
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Tabla 1 Solución estándar A: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
Tiempo Solución A Solución B de Equinácea Purpúrea USP en metano!. Disolver, some-
(min) (%) (%) tiendo a ultrasonido y agitando durante 1O minutos.
o 90 10 Después de diluir, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
13 78 22 Sglución estándar B: 1O µg/ml de ER lsobutilamida del
14 60 40 Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol
17 5 60 40 Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
18 90 10 de Partes Aéreas de Equinácea Purpúrea reducidas a
30 90 10 polvo fino (capaz de pasar a través de un tamiz de
malla 40), pesados con exactitud, a un matraz de fondo
Disolvente: Alcohol y agua (7:3) , redondo. Agregar 80 ml de metanol y someter a reflujo
Solución estándar A: •30 µg/ml de ER Acido Chicórico durante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y
USP en Disolvente•usm , filtrar en un matraz volumétrico de 100 ml, usando pe-
Solución estándar B: •20 µg/ml de ER Acido Caftárico queñas porciones de metano! para enjuagar el matraz y
USP en Disolvente el filtro. Diluir con metano! a volumen. Pasar a través de
Solución estándar C: 20 µg/ml de ER Equinacósido un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
USP en Diso/vente.usm µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente Sistema cromato9ráfico
1 25 mg, pesados con exactitud, de Partes Aéreas de (Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Equinácea Purpúrea reducidas a polvo fino (capaz de Modo: HPLC
pasar a través de un tamiz de malla 40) a un matraz de Detector: UV 254 nm
fondo redondo equipado con un condensador. Agregar Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
25,0 ml de Disolvente y calentar bajo reflujo, agitando Temperatura de la columna: 30º
mecánicamente, durante 15 minutos. Centrifugar o pa- Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño Volumen de inyección: 25 µL
de poro de 0,45 µm o menor. Aptitud del sistema
Sistema cromato9ráfico Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.) Requisitos de aptitud
Modo: HPLC Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Detector: UV 330 nm de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
Temperatura de la columna: 35º tracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP.
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
Volumen de inyección: 5 µL butilamida del ácido dodecatetraenoico; Solución es-
Aptitud del sistema tándar A
Muestras: Solución estándar A .1.•usPJ1 Factor de asimetría: No más de 2,0 para la isobutila-
Requisitos de aptitud mida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución estándar
"J.USP37 B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
el •pico de ácido chicórico en la Solución estándar el pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico
A•usP37 en inyecciones repetidas, Solución estándar B
Análisis Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
•Solución estándar C.1.usm y Solución muestra Solución muestra
J. J.USP37 Identificar los picos de los dos isómeros de las isobuti-
Calcular, por separado, los porcentajes de ácido caftá- lamidas del ácido dodecatetraenoico en el cromato-
rico (C13H12Ü9) y ácido chicórico (C22H1sÜ12) en la grama de la Solución muestra por comparación con el
porción de Partes Aéreas de Equinácea Purpúrea cromatograma de la Solución estándar A. Medir las
tomada: áreas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del ácido do-
•Resultado= (ru/rs) x Cs x (V!VV) x 1 OO.usm decatetraenoico en la porción de Partes Aéreas de
Equinácea Purpúrea tomada:
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/VV) x Fx 100
rs = área del pico •del analito pertinente de la
Solución estándar correspondiente.1.usm ru = suma de las áreas de los picos de los analitos
Cs = concentración •del analito pertinente en la pertinentes de la Solucion muestra
Solución estándar correspondiente rs = área del pico de la isobutilamida del ácido
(mg/mL).usm 2f,4f-hexadienoico de la Solución estándar B
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
USP 37
C1 = concentración de ER lsobutilamida del Ácido
2E,4E-Hexadienoico USP en la Solución
estándar B (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de las Partes Aéreas de Equinácea
Purpúrea tomadas para preparar la Solución
muestra (mg)
F =factor de respuesta para convertir la
isobutilamida del acido 2E,4E-hexadienoico
en isobutilamidas del ácido
dodecatetraenoico, 1, 35 3
Criterios de aceptación: No menos de 0,01 % de iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico con respecto a
la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
•• METALES PESADOS, Método /JI (231 ): No más de
1O ppm.a.usP11
Agregar lo siguiente:
•• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg/g.-.usPJ?
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumplen con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias no excede de 10 3 ufc/g.,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Es una hierba perenne, erecta, gruesa,
pubescente y áspera, normalmente de hasta 90 cm de
altura, raras veces de hasta 180 cm. Sus hojas son alter-
nas y simples; las hojas más bajas son más delgadas,
largas y pecioladas, ovadas a ampliamente lanceoladas;
en su mayor parte pentanervadas, agudas o acuminadas
en el ápice; en la base se estrechan bruscamente y raras
veces tienen forma cordada, normalmente muy dentadas
y de 7-20 cm de longitud y de 2,5-7,5 cm de ancho; los
pecíolos son en su mayor parte alados en la cúspide. Las
hojas superiores son más estrechas, a menudo completa-
mente sésiles, lanceoladas u ovado lanceoladas y normal-
mente con 3 nervaduras.
Los capítulos florales son radiados, de hasta 15 cm de
diámetro, solitarios o en grupos pequeños y con un
pedúnculo largo, con 12-20 florecillas radiadas, de
color púrpura, carmesí o raras veces pálidas; las floreci-
llas tubulares del disco son a menudo anaranjadas, de
3,5-7,5 cm de longitud; el involucro es hemisférico y
hundido; las brácteas son lanceoladas, extendidas o
adpresas, imbricadas en series de 2-4 y pilosas en la
superficie más externa con márgenes ciliados; el recep-
táculo es cónico, las escamas del receptáculo son rígi-
das, espinescentes y notablemente mayores que las
florecillas del disco; la bráctea es carenada y en forma
de cúspide; los aquenios tienen de 3-4 mm de longi-
Suplementos Dietéticos/ Equinácea 5979
tud, con cuatro caras, bipiramidales y gruesos; el vi-
lano tiene una corona corta y dentada.
Microscópicas
Hoja: La hoja tiene un grosor de 200-350 µm, con
una epidermis de 9-1 3 ,um de grosor, en gran parte
sin cloroplastos; los estomas tienen de 28-35 µm, son
abundantes en la superficie ventral y más escasos en la
superficie dorsal; el mesófilo está claramente dividido
en parénquima en empalizada y parénquima espon-
joso. El grosor del parénquima en empalizada es de
una capa, con células alargadas de 50-65 µm de lon-
gitud, orientadas en ángulo recto a la superficie de la
hoja, con numerosos cloroplastos. El parénquima es-
ponjoso es de 150-250 µm de grosor, con células de
forma irregular y tiene múltiples capas celulares, pocos
cloroplastos y grandes espacios intercelulares. Los ha-
ces del floema de las nervaduras laterales dentro del
parénquima esponjoso están unidos por una vaina de
una capa de pequeñas células parenquimáticas, con
los elementos vasculares de la nervadura central rodea-
dos por grandes células de parénquima. Los tricomas
uniseriados son pocos en la superficie ventral, numero-
sos es la superficie dorsal, típicamente tricelulares, oca-
sionalmente tetra o pentacelulares, de 250-500 µm de
longitud, cada uno surgiendo de una célula epidér-
mica; las paredes de las células epidérmicas aparecen
con un engrosamiento moderado; los vasos son varia-
dos, escalariformes, con un ancho del reticulado
variable.
Pecíolo: El parénquima aparece sin cloroplastos, en va-
rias capas adyacentes a una capa de colénquima; de
5-7 haces de floema con un tamaño de vasos de pe-
queño a mediano que están débilmente lignificados y
embebidos en el parénquima en forma de arco; las
nervaduras aladas de la superficie superior del pecíolo,
ligeramente hueco, son marginales.
Inflorescencias: Las células epidérmicas de las floreci-
llas radiadas son cuadradas, de 50 µm, con una pared
celular, en forma de rosario, transparente; diversos ele-
mentos de las Asteráceas muestran inflorescencias; los
numerosos tricomas articulados multicelulares de las
brácteas del involucro tienen de 500-800 µm de lon-
gitud; las secciones tangenciales de las páleas con nu-
merosos haces de fibras tienen de 10-15 µm de diá-
metro y de 100-150 µm de longitud; las paredes
celulares son delgadas. La epidermis de las florecillas
radiadas es de color rojizo a violeta; las células epidér-
micas del final de la corola forman papilas redondea-
das; está presente un estigma de celulas papilares; los
granos de polen de las Asteráceas son de 20-30 µm y
esféricos con una exina rugosa.
El oxalato de calcio está ausente; los cristales de inu-
,lina y gránulos de aln)idón son raros.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(?61): No más de 3,0%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g de material vegetal en polvo
Análisis: Secar la Muestra.
Cri,terios de aceptación; No más de 12%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,más de 10,0%, determinadas en 3 g ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 2,5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, a temperatura ambiente
controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín, y después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo.
5980 Equinácea / Suplementos Dietéticos
Cambio en la redacción:
• EsTÁ~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ac;:ido Clorogénico USP
•ER Acido Caftarico USP
ER Ácido Chicórico USP
ER Equinacósido USP 4 usP11
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP
Raíz de Equinácea Purpúrea
DEFINICIÓN
La Raíz de Equinácea Purpúrea está formada por las raíces y
el rizoma secos de Echinacea purpurea (L.) Moench (Fam.
Asteraceae). Se cosecha en el otoño después de tres años
o más de crecimiento. Contiene no menos de 0,5% de
fenoles totales, calculado con respecto a la materia seca
como la suma de ácido caftárico (C13H1209), ácido chicó-
rico (C22Hl8012) y ácido clorogénico (C16Hl809). Contiene
no menos de 0,025% de alcamidas, calculado como iso-
butilamidas del ácido dodecatetraenoico (C16H2sNO).
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRESENCIA DE ÁCIDO CHICÓRICO V AUSENCIA DE
EQUINACÓSIDO
Solución estándar A: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metano!
Solución estándar B: 1 mg/ml de ácido 1,3-dicafeoil-
quínico en metano/
Solución muestra: Transferir 1 g de Raíz de Equinácea
Purpúrea reducida a polvo fino a un dedal de extrac-
ción adecuado. Transferir el dedal a un aparato de ex-
tracción continua y extraer con 50 ml de cloroformo
durante 1 hora. Reservar el extracto clorofórmico para
la prueba de Identificación B. Continuar la extracción
con 50 ml de metanol y concentrar a un volumen pe-
queño a 40º al vacío. Con ayuda de metanol, transferir
el extracto a un matraz volumétrico de 1 O ml y diluir
con metano/ a volumen.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(17:2:1)
Solución reveladora A: 1 O mg/ml de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metano/
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 18 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B y
observar la placa bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de fa Solu-
ción muestra presenta una zona de color verde amari-
llenta a un valor RF de 0,75 debida al ácido chicórico y
otra zona verde amarillenta a un valor RF de 0,45 de-
bida al ácido caftárico, ambas zonas corresponden en
color y valor RF a zonas en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A. El cromatograma de la Solución muestra
no presenta o presenta sólo trazas de una zona a un
valor RF de O, 1, debido a equinacósido (presente en
Equinácea Angustifolia y en Equinácea Pálida), y no pre-
senta ninguna zona que corresponda en color y valor RF
USP 37
a la mancha de ácido 1,3-dicafeoilquínico (cinarina)
(presente en Equinácea Angustifolia) en el cromato-
grama de la Solución estándar B. Se pueden observar
otras zonas coloreadas de diferentes intensidades en el
cromatograma de la Solución muestra .• usP11
Eliminar lo siguiente:
•• B. PRESENCIA DE ISOBUTILALQUENILAMIDAS
Solución estándar A: 100 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metano/
Solución estándar B: 1 mg/ml de /3-sitosterol en
metano/
Solución muestra: Evaporar hasta sequedad el extracto
clorofórmico reservado de la preparación de la Solución
muestra en la prueba de Identificación A a 40º al vacío.
Agregar 1 ml de alcohol al residuo y pasarlo a través de
un filtro de membrana de nailon con un tamaño de
poro de 0,45 µm.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (2: 1)
Solución reveladora: Preparar una mezcla de ácido
acético glacial, ácido sulfurico y p-anisaldehído
(10:5:0,5) en un baño de hielo.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 12 cm y secar
la placa en una corriente de aire. Observar la placa
bajo luz UV a 254 nm, luego rociar la placa con Solu-
cion reveladora y calentarla a 100º durante 5 minutos.
Observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
larga.
Criterios de aceptación
Bajo luz UV a 254 nm: El cromatograma de la Solución
muestra presenta una zona principal que corresponde
en valor RF a la zona debida a isobutilamida del ácido
dodeca-2f,4f,8Z, 1Of-tetraenoico e isobutilamida del
ácido dodeca-2f,4f,8Z, 1 OZ-tetraenoico en el cromato-
grama de la Solución estándar A, y por debajo de esta
zona se observan varias zonas debidas a las isobutila-
midas a,{3,y,8 insaturadas.
Después de rociar con Solución reveladora y calentar: La
zona debida a isobutilamida del ácido dodeca-
2f,4f,8Z, 1 Of-tetraenoico e isobutilamida del ácido do-
deca-2E,4E,8Z, 1 OZ-tetraenoico se torna de color negro
azulado y debajo de esta zona se observan varias zo-
nas debidas a las isobutilamidas r.x,{3, y,8 insaturadas (no
detectables en Equinácea Pálida) que se tornan de
color violeta (a diferencia de las zonas correspondien-
tes en el cromatograma de Equinácea Angustifolia, que
en su mayoría son amarillentas debido a las isobutila-
midas r.x,/j insaturadas). También se observa una zona
debida a /3-sitosterol que corresponde en valor RF a la
mancha principal en el cromatograma de la Solución
estándar B.• usP11
Agregar lo siguiente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de ácido chicórico y ausencia de
equinacósido
Solución estándar A: 0,2 mg/ml de ER Equinacósido
USP en metano/ ,
Solución estándar B: 0,2 mg/ml de ER Acido Caftá-
rico USP, O, 1 mg/n;il de ER Acido Clorogénico USP y
0,2 m.9/ml de ER Acido Chicórico USP en metano/
Solucion estándar C: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en metano/. Agitar
USP 37
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Raíz de Equinácea
Purpúrea reducida a polvo fino a un tubo de centrí-
fuga, agregar 1O mL de metano!, mezclar bien y some-
ter a ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar C
y Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A y
Solución estándar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando
un dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y ácido fórmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, calentar a 100°
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras esté
tibia con Reactívo de derívatización, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del cro-
matograma debida a equinacósído. La Solución están-
dar 8 presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
<¡Jrama debidas a ácido caftárico (valor RF inferior) y
acido clorogénico (valor RF superior) que están clara-
mente separadas, y una banda azul de ácido chicórico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptación: La más prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solución muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato_grama
a un valor RF correspondiente al de la banda de acido
chicórico en los cromatogramas de la Solución estándar
By la Solución estándar C (menos prominente en Equi-
nacea Pálida y ausente o casi ausente en Equinácea
Angustifolia). La segunda más prominente de las ban-
das en el cromatograma de la Solución muestra es una
banda de color azul aproximadamente en la parte me-
dia del cromatograma debida a ácido caftárico, corres-
pondiente a una banda en el cromatograma de la So-
lución estándar C (ausente en Equinácea Angustifolia y
una banda menor en Equinácea Pálida). El cromato-
grama de la Solución muestra no presenta ninguna
banda al valor RF del equinacósido en la Solución están-
dar A (a diferencia de Equinácea Pálida y Eguinácea
Angustifolia). El cromatograma de la Solucion muestra
puede presentar bandas menores de color azul corres-
pondientes a bandas similares en et cromatograma de
la Solución estándar C. Una de éstas se debe a ácido
clorogénico a un valor RF correspondiente a ácido clo-
rogénico en la Solución estándar B..11.usr11
Agregar lo siguiente:
"'• 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER ,B-Sitosterol
USP en metanol
Suplementos Dietéticos/ Equinácea 5981
Solución estándar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equinácea Purpúrea USP en diclorometano.
Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 1 g de Raíz de Equinácea
Purpúrea reducida a polvo fino a un tubo de centrí-
fuga, agregar 1O mL de diclorometano, mezclar bien y
someter a ultrasonido durante 1O minutos. Centrifugar
y usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 5 µm (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL de Solución estándar By
Solución muestra, y 2 µL de Solución estándar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo,
ciclohexano y ácido fórmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriarlo en
un baño de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1 O mL de ácido
acético y 5 mL de ácido sulfúrico al metano! enfriado
con hielo y mezclar bien. Dejar que la mezcla se en-
fríe a temperatura ambiente, luego agregar 0,5 mL de
p-anisaldehído.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8 y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una capa para croma-
tografía en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cámara satu-
rada. Retirar la placa de la cámara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derívatizacíón, calentar a 100º
durante 3-5 minutos, dejar que se enfríe y observar
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta la más prominente de las bandas
como una banda violeta rosada aproximadamente en
la parte media del cromatograma, y justo debajo de
esta banda rosada, una banda violeta a un valor RF
inferior, similar en posición y color a la banda de /3-
sitosterol en los cromatogramas de la Solución estándar
A. Estas dos bandas están claramente separadas entre
sí. El cromatograma de la Solución estándar B también
presenta una banda ancha violeta rosada cercana al
frente de la fase móvil.
Criterios de aceptación: La más prominente de las
bandas del cromatograma de la Solución muestra es
una banda violeta rosada aproximadamente en la
parte media del cromatograma, similar en posición y
color a una banda en el cromatograma de la Solución
estándar B (mucho menos prominente en Equinácea
Angustifolia y Equinácea Palida), una banda de color
viofeta correspondiente a la banda de /3-sitosterol en
los cromatogramas de la Solución estándar A y la Solu-
ción estándar B, y una banda ancha violeta rosada cer-
cana al frente de la fase móvil, similar en posición y
color a la banda en el cromatograma de la Solución
estándar B. El cromatograma de la Solución muestra no
presenta ninguna banda de color amarillo por debajo
de la banda de ,B-sitosterol (a diferencia de Equinácea
Angustifolia) ni una banda prominente violeta aproxi-
madamente en los dos tercios del cromatograma (a
diferencia de Equinácea Pálida) ..11.u1r31
5982 Equinácea /Suplementos Dietéticos USP 37

Cambio en la redacción: génico (C16H1sÜ9) en la porción de Raíz de Equinácea

Purpúrea tomada:
• c. •El tiempo de retención del pi~o prinsipal de !a ,s~/u­
•Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100.usm
ción muestra, corrt;sponde al del pico de ac1do ~h1conc;.o
de la Solucion estandar A y el seg~ndo de, l?s picos, l'!'ªs ru = área del pico del analito pertinente de la
prominentes corresponde al del pico de ac1do caftanc~, Solución muestra
de la Solución estándar B. El cromatograma de la Soluc1on rs = área del pico del •analito pertinente de la
muestra no presenta ningún pis~ o presenta u~ pico mu-
cho menor al tiempo de retenc1on correspondiente al., Solución estándar correspondiente.usm
Cs = concentración del •analito pertinente en la
pico de equinacósido en el cromatograma de la Solucton
estándar D, todos los picos según se obtienen en la Solución estándar correspondiente
prueba de Contenido de Fenoles Totales .•usm (mg/ml)1t.usm
V = volumen de la Solución muestra (ml)
COMPOSICIÓN W = peso de la Raíz de Equinácea Purpúrea tomada
para preparar la Solución muestra (mg)
"'1t.USP31 .,
Cambio en la redacción: Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porc1on
de Raíz de Equinácea Purpúrea tomada, sumando los
• CONTENIDO DE FENOLES TOTALES porcentajes individuales calculados.
Solución A: Ácido fosfórico (O, 1 en 100) en agua Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de fenoles
Solución B: Acetonitrilo totales con respecto a la materia seca
Fase móvil: Ver la Tabla 7. • CONTENIDO DE ALCAMIDAS
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Tabla 1 Solución estándar A: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Equinácea Purpúrea USP en metanol. Disol~er, some-
Tiempo Solución A Solución B tiendo a ultrasonido y agitando durante 1O minutos.
lmin\ (O/o) (%) Después de diluir, pasar a través de un filtro de mem-
o 90 10 brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
13 78 22 Solución estándar B: 1 O µg/ml de ER lsobutilamida del
14 60 40 Ácido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol
17 5 60 40 Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Raíz de Equinácea Purpúrea reducida a polvo fino
18 90 10 (capaz de pasar a través de un tamiz de malla 40) a un
30 90 10 matraz de fondo redondo. Agregar 80 ml de metanol y
someter a reflujo durante 30 minutos. Enfriar a tempe-
Disolvente: Alcohol y agua (7:3) . . . ·., ... . . . . . ratura ambiente y filtrar en un matraz volumétrico de
Solución estándar A: • 30 µg/ml. é,te .ER ActdQ .Ch1cónco 100 ml, usando pequeñas porc.io~es de metanol para
USP en Disolvente.usm , enjuagar el matraz y el filtro. Diluir con metanol a volu-
Solución estándar B: •20 µg/mL de ER Aeidó Caftárico men. Pasar a través de un filtro de membrana con un
USP en Disolvente , . tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución estándar C: 20 µg/rnl de ER Acido ~rogé­ Sistema cromato9ráfico
nico USP en Disolvente (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Solución estándar D: 20 µg/rnl de .ER EqíJlnacc,S~i(,;lo Modo: HPLC
USP en Disolvente.usm Detector: UV 254 nm
Solución muestra: Transferir 125 mg de Raíz de Equiná- Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
cea Purpúrea reducida a polvo fino (capaz de pasar a Temperatura de la columna: 30º
través de un tamiz de malla 40) a un matraz de fondo Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
redondo equipado con un condens?dor. A_grega_r Volumen de inyección: 25 µL
25,0 ml de Disolvente y calent~r bajo reflUJ?, agitando Aptitud del sistema
mecánicamente durante 15 minutos. Centrifugar o pa- Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño Requisitos de aptitud
de poro de 0,45 µm o menor. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Sistema cromato9ráfico de la Solución estándar A es similar al Cromatograma
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
Modo: HPLC tracto en Polvo de Equinácea Purpúrea U~P. .
Detector: UV 330 nm Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de 1so-
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm butilamida del ácido dodecatetraenoico, Solución es-
Temperatura de la columna: 35º tándar A
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Volumen de inyección: 5 µL isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico, Solución
Aptitud del sistema estándar B
Muestra: Solución estándar A "'•usm Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
Requisitos de aptitud el pico de isobutilamida del ácido 2f,4f-hexadienoico
Desviación estándar relativa: No más de 2% para el en inyecciones repetidas, Solución estándar B
pico de ácido •chicórico•usm en inyecciones repeti- Análisis
das, •Solución estándar A1t.usP11 Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Análisis Solución muestra
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8, Identificar los picos de las 1 O alcamidas principales en
•Solución estándar e, Solución estándar D1t.uSP37 y Solu- el cromatograma de la Solución muest~q en c9mpara-
ción muestra ción con el cromatograma de la Solucton estandar A.
& &USP31 , . , . Medir las áreas de los picos pertinentes.
Calcular, por separado, el porcentaje de ac1d_o caftanco Calcular el porcentaje de alcamidas en la porción de
(C 13 H12Ü9), ácido chicórico (C22H1sÜ12) y ácido cloro- Raíz de Equinácea Purpúrea tomada:
Resultado = (ru!rs) x Cs x (V/W) x F x 100
USP 37 Suplementos Dieteticos / l::spino Blanco 5983

ru = suma de las áreas de los picos de los analitos • PÉRDIDA POR SECADO (731)
pertinentes de la Solucion muestra Análisis: Secar una muestra a 1 05 durante 2 horas.
r1 = área del pico de isobutilamida del ácido 2E,4E- Cri,terios de aceptación:, No más de 10,0%
hexadienoico de la Solucion estándar B • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
Cs = concentración de ER lsobutilamida del Ácido No,más de 7,0% , ,
2E,4E-Hexadienoico USP en la Solución • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
estándar B (mg/mL) (561): No más de 4,0%
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de la Raíz de Equinácea Purpúrea tomada REQUISITOS ADICIONALES
para preparar la Solución muestra (mg) • ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
F = factor de respuesta para convertir la cerrados y resistentes a la luz.
isobutilamida del acido 2E,4E-hexadienoico • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
en isobutilamida del ácido latín, y después de la denominación oficial, la parte de la
dodecatetraenoico, 1, 35 3 planta contenida en el artículo.
Criterios de aceptación: No menos de 0,025% con
respecto a la materia seca Cambio en la redacción:
CONTAMINANTES
• ESTÁN~ARES DE REFERENCIA USP (11)
"'ER,Acido Caftárico USP
Eliminar lo siguiente: ER ~cido Chicórico USP •usPJ1
ER Acido Clorogénico USP
.... METALES PESADOS, Método /JI (231): No más de ER Extracto en Polvo de Equinácea Purpúrea USP
10 ppm.á.USP37 "'ER Equinósido USP •LJsr31
ER lsobutilamida del Acido 2E,4E-Hexadienoico USP
Agregar lo siguiente: "'ER /3-Sitosterol USP •usr31

"'• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)

Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g Ergocalciferol-ver Ergocalciferol en
Plomo: No más de 5,0 µg/g Monografías Generales
M~rcurio: No más de l,0 µg!g ... usm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
Ergocalciferol, Cápsulas-ver Ergocalciferol,
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS Cápsulas en Monografías Generales
Macroscópicas: Las raíces son cilíndricas y con ramifica-
ciones irregulares. La superficie externa está estriada
longitudinalmente y es de color marrón oscuro; las frac-
turas son cortas y duras. Las secciones transversales pre- Ergocalciferol, Solución Oral-ver
sentan una peridermis delgada y un xilema amarillento Ergocalciferol, Solución Oral en Monografías
con radios visibles. En raíces mas viejas, la médula es
esponjosa, con un centro amarronado de contorno Generales
amarillo.
Microscópicas: Los rizomas y las raíces en la sección
transversal presentan una corteza externa delgada sepa-
rada de un amplio xilema por un cámbium vascular de Ergocalciferol, Tabletas-ver Ergocalciferol,
color marrón. El súber está compuesto por varias hileras Tabletas en Monografías Generales
de células de paredes finas que contienen un pigmento
de color marrón. La corteza presenta canales esquizóge-
nos de resina. El rizoma contiene fibras de líber y célu-
las pétreas. El xilema, con radios visibles, contiene ele- Hierro, Carbonilo-ver Hierro, Carbonilo en
mentos traqueales compuestos por vasos reticulados y
traqueidas (de aproximadamente 80 x 30 µm) con pun- Monografías Generales
tuaciones areoladas y paredes terminales sesgadas. Los
vasos y traqueidas estan rodeados por un parénquima
de paredes gruesas y fibras; las fibras son alargadas con
lúmenes estrechos y extremos con forma de embudo Hojas con Flores de Espino Blanco
(de 20-40 µm de ancho). También se encuentran escle-
reidas poligonales (de aproximadamente 50 µm de diá- DEFINICIÓN
metro). Las fibras del xilema tienen un mínimo o nin- Las Hojas con Flores de Espino Blanco consisten en los extre-
gún depósito de fitomelanina (a diferencia de mos secos de las ramas con flores de hasta 7 cm de largo
Equinácea Angustifolia y Equinácea Pálida). Entre las pa- de Crataegus monogyna jacq. emend Lindman. o Cratae-
redes adyacentes de las células parenguimáticas del xi- gus laevigata (Poir.) DC., también conocido como Cratae-
lema se encuentra una capa melanogenica. El rizoma, gus oxycantha L. (Fam. Rosaceae). Contiene no menos de
con médula, está compuesto por células parenquimáti- 0,6% de flavonas C-glicosiladas, expresadas como vitexina
cas con puntuaciones que contienen cristales de inulina. (C21 H20010), y no menos de 0,45% de flavonas 0-glicosila-
El almidón es escaso o está ausente y no se encuentran das, expresadas como hiperósido (C 21 H20012), calculados
cristales de oxalato de calcio. con respecto a la materia seca .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 3,0%
5984 Espino Blanco / Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ácido clorogénico,
de rutina, de ER Hiperósido USP y de ER Vitexina USP
en metanol. [NOTA-Reservar una porción de esta solu-
ción para su uso en la prueba de Identificación B.]
Solución muestra: O, 1 g/mL preparados según se in-
dica a continuación. Reducir a polvo fino 1O g de Hojas
con Flores de Espino Blanco. Transferir 1 g del polvo a
un matraz y agregar 1O mL de metanol. Calentar el ma-
traz en un baño de agua mantenido a 65º durante 5
minutos, enfriar, filtrar, y usar el filtrado.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido acético glacial, ácido
fórmico y agua (10:1, 1:l,1 :2,6)
Solución reveladora A: Difenilborinato de 2-aminoetilo
en metanol (1 en 100)
Solución reveladora B: Polietilenglicol 4000 en meta-
no! (5 en 100)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo, excepto que
se debe secar la placa a 105º, y rociar la placa míen-
. tras esté caliente con 1O mL de Solución reveladora A
y luego con 1O mL de Solución reveladora B. Dejar
que la placa se seque al aire durante 30 minutos y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
larga.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción estándar presenta una zona de color anaranjado
intenso (a un valor RF de 0,3) debida a rutina; una zona
fluorescente de color azul claro (a un valor RF de 0,4)
debida a ácido clorogénico; una zona de color anaran-
jado amarillento (a un valor RF de 0,55) debida a hipe-
rósido; y una zona de color verde amarillento (a un
valor RF de 0,65) debida a vitexina. El cromatograma de
la Solución muestra, además de las zonas debidas a ru-
tina, ácido clorogénico, hiperósido y vitexina, presenta
una zona de color verde amarillento (a un valor RF de
0,35) debida a vitexina-2-ramnósido; una zona fluores-
cente de color azul claro (a un valor RF de 0,6) debida a
espirósido; y una zona fluorescente de color azul claro
cerca del frente de la fase móvil (a un valor RF de 0,9)
debida a ácido cafeico. El cromatograma de la Solución
muestra presenta también otras zonas con fluorescencia
más débil.
• B. PROCEDIMIENTO
Solución A: Tetrahidrofurano, acetonitrilo y metanol
(92,4:3,4:4,2)
Solución B: Acido fosfórico al 0,5% en agua
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
lmin) (%) (O/o)
o 12 88
12 12 88
25 18 82
30 18 82
Solución estándar: Usar la Solución estándar reservada
de la prueba de Identificación A.
Solucion muestra: Transferir 3 g de Hojas con Flores de
Espino Blanco reducidas a polvo fino a un matraz de
fondo redondo de 100 mL, agregar 60 mL de una mez-
cla de metanol y agua (4: 1), y calentar en un baño de
agua caliente bajo reflujo durante 1 hora. Enfriar, filtrar,
y recoger el filtrado en otro matraz. Transferir el residuo
del filtrado de vuelta al matraz, agregar 40 mL de una
mezcla de metanol y agua (4:1 ), y calentar en un baño
de agua caliente bajo reflujo durante 1O minutos. En-
friar, filtrar, y combinar el filtrado con el filtrado obte-
USP 37
nido de la primera extracción. Evaporar el disolvente de
los filtrados combinados al vacío hasta un volumen de
20 ml. Diluir la solución resultante con una mezcla de
metanol y agua (4:1) hasta 25,0 mL. Filtrar 5,0 mL de
esta solución a través de una columna de extracción de
fase sólida recientemente acondicionada que contenga
360 mg de relleno L1, recoger el filtrado en un matraz
volumetrico de 1O mL, y diluir con una mezcla de me-
tano! y agua (4:1) a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 336 nm
Columna: 4,0 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura: 25º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
clorogénico, vitexina, rutina e hiperósido son 0,26;
1,0; 1, 16 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetil
vitexina-2"-0-ramnósido, vitexina, isovitexina y vite-
xina-2"-0-ramnósido son 1,53; 1,0; 0,73 y 0,67,
respectivamente.]
Medir los tiempos de retención para los picos
principales.
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
los picos de ácido clorogénico, vitexina, rutina e hiperó-
sido de la Solución muestra corresponden a los de la
Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE FLAVONAS C-GLICOSILADAS
Solución A: Solución al 0,5% de ácido fosfórico en
agua
Solución B: Tetrahidrofurano, alcohol isopropílico y ace-
tonitrilo (10:8:3)
Fase móvil: Solución A y Solución B (22:3)
Solución estándar: 0,3 mg/mL de ER Vitexina USP en
Solución B, calentando si fuera necesario
Solución muestra: Reducir a polvo fino 100 g de Hojas
con Flores de Espino Blanco. Transferir aproximada-
mente 4 g del polvo, pesados con exactitud, a un apa-
rato de extracción continua equipado con un matraz
que contenga 80 mL de metano[ y extraer la muestra
de prueba durante 5 horas. Enfriar, retirar el matraz, y
evaporar el disolvente del extracto al vacío hasta 40 ml.
Transferir esta solución a un matraz volumétrico de
50 mL y diluir con metanol a volumen. Transferir
10,0 mL de la solución a un matraz adecuado equipado
con un condensador de reflujo, agregar 4 mL de ácido
clorhídrico al 25%, y calentar el matraz bajo reflujo en
un baño de agua a 65º durante 90 minutos. Enfriar,
transferir el contenido del matraz a un matraz volumé-
trico de 50 mL y diluir con metanol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 336 nm
Columna: 4 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
teóricos
USP 37
Factor de asimetría: 0,8-2
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de flavonas C-glicosiladas, expresadas
como vitexina (C21 H2001 o), en la porción de Hojas con
Flores de Espino Blanco tomada:
Resultado = (Cs/Cu) x (Lru/rs) x 100
Cs = concentración de ER Vitexina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Hojas con Flores de Espino
Blanco en la Solucion muestra (mg/mL)
Lru = suma de las áreas de los picos de vitexina e
isovitexina, con un tiempo de retención
relativo de aproximadamente 1,0 y 0,85,
respectivamente, en el cromatograma de la
Solución muestra
rs = área del pico de vitexina de la Solución
estándar
Criterios de aceptación: No menos de 0,6% de flavo-
nas C-glicosiladas, expresadas como vitexina (C21H20010)
con respecto a la materia seca
• CONTENIDO DE fLAVONAS 0-GLICOSILADAS
Fase móvil: Metanol, ácido fosfórico y agua
(100:1:100)
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Quercetina USP
en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en la Solu-
ción muestra en Contenido de Flavonas C-Glicosiladas, ex-
cepto que se debe usar 1 mL de ácido clorhídrico al
25% durante 60 minutos en lugar de 4 mL de ácido
clorhídrico al 25% durante 90 minutos.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Re9uisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
teóricos
Factor de asimetría: 0,8-2
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de flavonas C-glicosiladas, expresadas
como hiperósido (C21H20012), en la porción de Hojas
con Flores de Espino Blanco tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de quercetina de la Solución
muestra
rs = área del pico de quercetina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Quercetina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Hojas con Flores de Espino
Blanco en la Solucion muestra (mg/mL)
M,, = peso molecular de hiperósido, 464,38
M,2 = peso molecular de quercetina, 302,24
Criterios de aceptación: No menos de 0,45% de flavo-
nas 0-glicosiladas, expresadas como hiperósido
(C21 H20012) con respecto a la materia seca
Suplementos Dietéticos /Espino Blanco 5985
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método fil (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas, ,
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgánica Extraña (561): No más de 8,0% de materia
lignificada , ,
• PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos
de Plaguicidas (561): Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Presenta fragmentos de ramas lignifica-
das de color marrón oscuro, por lo general de 1 mm a
no más de 2,5 mm de diámetro, con hojas pecioladas
alternas pequeñas y a menudo con formas deciduas, y
con numerosas flores de color blanco dispuestas en co-
rimbo. Las hojas son relativamente muy lobadas y sus
márgenes son ligera o muy ligeramente aserrados. La C.
laevigata tiene hojas pinatilobadas a pinatífidas, dividi-
das en tres, cinco o siete lóbulos obtusos; las hojas de
C. monogyna son casi pinatisectas con tres a cinco lóbu-
los agudos. La superficie adaxial de la hoja es de color
verde oscuro a verde amarronado; la superficie abaxial
es más de color verde grisáceo más claro y presenta
una densa red de venículas claramente visibles y de ve-
nas principales ligeramente prominentes. Las hojas de
C. /aevigata y de C. monogyna son glabras o presentan
tricomas aislados. Las flores consisten en un cáliz tubu-
lar de color verde amarronado que termina en su parte
superior en cinco segmentos triangulares y cinco péta-
los libres de color blanco amarillento a amarronado, re-
dondeados a ampliamente ovalados, apenas unguicula-
dos y con numerosos estambres. El ovario, unido al
cáliz tubular, presenta de uno a tres estilos largos y
consiste en el mismo número de carpelos, cada uno
con un óvulo fértil. La C. monogyna presenta un estilo y
un carpelo, y la C. /aevigata presenta dos o tres estilos y
carpelos.
Microscópicas: Cuando se reduce a polvo fino y se exa-
mina al microscopio, el polvo verde amarillento pre-
senta las siguientes características: tricomas de recubri-
miento unicelulares, por lo general con paredes gruesas
y lúmenes amplios, casi rectos a algo curvados, con
puntuaciones en la base; fragmentos de la epidermis de
la hoja con células de paredes sinuosas a poligonales y
largos estomas anamocíticos rodeados por cuatro a
siete células subsidiarias; grupos de células parenquimá-
ticas que contienen cristales de oxalato de calcio, por lo
general de 10-20 µm de largo; fragmentos de pétalos
que presentan células epidérmicas poligonales redon-
deadas, muy papilosas, con paredes engrosadas, cuya
cutícula presenta claramente estriaciones onduladas;
fragmentos de anteras cuyo endotecio presenta un mar-
gen arqueado y regularmente engrosado; fragmentos
de tallos que contienen células colenquimáticas, vasos y
fibras de esclerénquima lignificado, con lúmenes estre-
chos; numerosos granos de polen redondeados a elíp-
tico triangulares de hasta 45 µm de diámetro, con exi-
nas libres y tres poros germinales.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETÉTICOS (2021): El recuento total bacte-
riano no excede de 104 ufc/g, el recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
100 ufc/g, y cumple con los requisitos de la prueba para
determinar la ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli
y Staphylococcus aureus.
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar aproximadamente
1,0 g de Hojas con Flores de Espino Blanco reducidas a
polvo fino a 105º durante 2 horas: pierde no más de
1 o,p% de su peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 9,0%
5986 Espino Blanco / Suplementos Dietéticos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
bien cerrado. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la r;>lanta contenidas en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hiperósido USP
ER Quercetina USP
ER Vitexina USP
Ho,·as con Flores de Espino Blanco en
Povo
DEFINICIÓN
Las Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo son Hojas
con Flores de Espino Blanco reducidas a polvo fino o a
polvo muy fino.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ácido clorogénico,
de rutina, de ER Hiperósido USP y de E~ Vitexina USP
en metano!. [NOTA-Reservar una porcion de esta solu-
ción para su uso en la prueba de Identificación B.]
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo a un matraz
y agregar 1O mL de m~tanol. Calentar el ma~raz en un
baño de agua mantenido a 65º durante 5 minutos, en-
friar, filtrar, y usar el filtrado.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm . , . , . . , .
Fase móvil: Acetato de etilo, ac1do acet1co glacial, ac1do
fórmico y agua (1O:1, 1: 1, 1 :2,6)
Solución reveladora A: Difenilborinato de 2-aminoetilo
en metanol (1 en 100)
Solución reveladora B: Polietilenglicol 4000 en meta-
no! (5 en 100)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo, excepto que
se debe secar la placa a 105º y rociar la placa mien-
tras esté caliente con 1O mL de Solución reveladora A
y luego con 1O mL de Solución reveladora B. Dejar
que la placa se seque al aire durante 30 minutos y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la_ Solu-
ción estándar presenta una zona d~ color a_naran¡ado
intenso (a un valor RF de 0,3) debida a rutina; una zona
de color azul claro fluorescente (a un valor RF de 0,4)
debida a ácido clorogénico; una zona de color anaran-
jado amarillento (a un valor RF de 0,55). debida a hipe-
rósido; y una zona de color verde amarillento (a un
valor RF de 0,65) debida a vitexina. El croma~ograma de
la Solución muestra, además de las zonas debidas a ru-
tina, ácido clorogénico, hiperósido y vitexina, presenta
una zona de color verde amarillento (a un valor RF de
O 35) debida a vitexina-2-ramnósido; una zona de color
a~ul claro fluorescente (a un valor RF de 0,6) debida a
espirósido; y una zona de color azul claro fluorescente
cerca del frente de la fase móvil (a un valor RF de 0,9)
debida a ácido cafeico. El cromatograma de la Solución
muestra presenta además otras zonas con fluorescencia
más tenue.
• B. PROCEDIMIENTO
Solución A: Tetrahidrofurano, acetonitrilo y metano!
(92,4:3,4:4,2)
USP 37
Solución B: Ácido fosfórico al 0,5% en agua
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente .
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 12 88
12 12 88
25 18 82
30 18 82
Solución estándar: Usar la Solución estándar reservada
de la prueba de Identificación A.
Solucion muestra: Transferir aproximadamente 3 g de
Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo a un matraz
de fondo redondo de 100 mL, agregar 60 mL de una_
mezcla de metanol y agua (4:1 ), y calentar en un. bano
de agua caliente bajo reflujo durante 1 hora. Enfria_r,
filtrar, y recoger el filtrado en otro matraz. Transferir el
residuo del fiftro nuevamente al matraz, agregar 40 mL
de una mezcla de metano! y agua (4: 1), y calentar en
un baño de agua caliente bajo reflujo durante 1 ~ minu-
tos. Enfriar, filtrar, y combinar el filtrado con el filtrado
obtenido de la primera extracción. Evaporar el disol-
vente de los filtrados combinados al vacío hasta un vo-
lumen de 20 ml. Diluir la solución resultante con una
mezcla de metanol y agua (4:1) hasta 25,0 ml. Filtrar
5,0 mL de esta solución a través de una columna de
extracción de fase sólida recientemente acondicionada
que contenga 360 m5l de relleno L1, recoger el filtrado
en un matraz volumetrico de 1O mL, y diluir con una
mezcla de metanol Y. agua (4:1) a volumen.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 336 nm
Columna: 4,0 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura: 25º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
clorogénico, vitexina, rutina e hiperósido son 0,26;
1,0; l, 16 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetil
vitexina-2"-0-ramnósido, vitexina, isovitexina y vite-
xina-2"-0-ramnósido son 1,53; 1,0; 0,73 y 0,67,
respectivamente.]
Medir los tiempos de retención de los picos
principales. ., . .,
Criterios de aceptac1on: Los tiempos de retenc1on de
los picos de ácido clorogénico, vitexina, rutina e hiperó-
sido de la Solución muestra corresponden a los de la
Solución estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE FLAVONAS C-GLICOSILADAS
Solución A: Solución al 0,5% de ácido fosfórico en
agua
Solución B: Tetrahidrofurano, alcohol isopropílico y ace-
tonitrilo (10:8:3)
Fase móvil: Solución A y Solución B (22:3)
Solución estándar: 0,3 mg/mL de ER Vitexina USP en
Solución B, calentando si fuera necesario
Solución muestra: Transferir aproximadamente 4 g de
Hojas con Flores de Espino Blanco en ~~lvo, pe~ados
con exactitud, a un aparato de extracc1on continua
equipado con un matraz que contenga 80 mL de meta-
no! y extraer la muestra de prueba durarite 5 horas.
Enfriar, retirar el matraz, y evaporar el disolvente del
USP 37
extracto al vacío hasta 40 ml. Transferir esta solución a
un matraz volumétrico de 50 ml y diluir con metanol a
volumen. Transferir 10,0 ml de la solución a un matraz
adecuado equipado con un condensador de reflujo
agregar 4 ml de ácido clorhídrico al 25%, y calent~r el
matraz bajo reflujo en un baño de agua a 65º durante
90 minutos. Enfriar, transferir el contenido del matraz a
un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir con metanol a
volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 336 nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
teóricos
Factor de asimetría: 0,8-2
Desviación estándar relativa: No más de 2 0%
Análisis ' Impurezas Orgánicas
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de flavonas C-glicosiladas, expresadas
como vitexina (C21H20Ü10), en la porción de Hojas con
Flores de Espino Blanco en Polvo tomada:
Resultado == ('Lru/rs) x (Cs/Cu) x 100
'Lru == suma de las áreas de los picos de vitexina e
isovitexina, con un tiempo de retención
relativo. de aproximadamente 1,0 y 0,85,
respectivamente, de la Solución muestra
rs == área del pico de vitexina de la Solución
estándar
Cs == concentración de ER Vitexina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu == concentración de Hojas con Flores de Espino
Blanco en Polvo en la Solución muestra
(mg/ml)
Criterios de aceptación: No menos de O 6% de flavo-
nas 0-glicosiladas, expresadas como vitex'ina (C21 H200 10)
• CONTENIDO DE FLAVONAS 0-GLICOSILADAS
Fase móvil: Metanol, ácido fosfórico y agua
(100:1:100)
Solución estándar: 0,05 mg/ml de ER Quercetina USP
en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Contenido de Flavonas C-Glicosiladas, excepto
que se debe usar 1 ml de ácido clorhídrico al 25% du-
rante 60 minutos en lugar de 4 ml de ácido clorhídrico
al 25% durante 90 minutos.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Re9uisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
teóricos
Factor de asimetría: 0,8-2
Desviación estándar relativa: No más de 2 0%
Análisis ' • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de flavonas 0-glicosiladas, expresadas
Suplementos Dietéticos / Espino Blanco 5987
como hiperósido (C21H2 00 12 ) en la porción de Hojas
con Flores de Espino Blanco ~n Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C 5/C 11 ) x (Mr1/Mr2) x 100
ru == área del pico de quercetina de la Solución
muestra
rs = área del pico de quercetina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Quercetina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu == concentración de Hojas con Flores de Espino
Blanco en Polvo en la Solución muestra
(mg/ml)
Mr1 == peso molecular de hiperósido, 464,38
Mr2 == peso molecular de quercetina, 302,24
Criterios de aceptación: No menos de O 45% de flavo-
nas 0-glicosiladas, expresadas como hipe~ósido
(C21H20Ü12)
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método fil (231): No más de 20 ppm
• PROCEDIMIENTO 1: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia
Orgánica Extraña (561): No más de 8 0% de materia
lignificada '
• PROCEDIMIENTO 2: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO Residuos
de Plaguicidas (561): Cumple con los requisitos'
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Microscópicas: C~ando se examina al microscopio, el
P,Ol_vo ver~e amarillento presenta las siguientes caracte-
nst1cas: tncomas no glandulares uniseriados, por lo ge-
neral con paredes gruesas y lúmenes amplios, casi rec-
tos a algo curvados, con puntuaciones en la base;
fragmentos de la epidermis de la hoja con células de
paredes sinuosas a poligonales y estomas anomocíticos
grandes rodeados por cuatro a siete células subsidiarias·
grupos de células parenquimáticas que contienen crista'-
les de oxalato de calcio, por lo general de 10-20 µm de
la~go;. fragm~ntos de pétalos que presentan células epi-
derm1cas poligonales redondeadas, muy papilosas, con
paredes engrosadas, cuya cutícula presenta claramente
estriaciones onduladas; fragmentos de anteras cuyo en-
dotecio presenta un margen arqueado y regularmente
engrosado; fragmentos de tallos que contienen células
colenquimáticas, vasos y fibras de esclerénquima lignifi-
cado, con lúmenes estrechos; y numerosos granos de
polen redondeados a elíptico triangulares de hasta 45
µm d~ diámetro, con exinas libres y tres poros
germinales.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETÉTICOS (2021 ): El recuento total bacte-
riano no excede de 104 ufc/g, el recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
100 ufc/g, Y. cumple con 1.os requisitos de las pruebas
para determinar la ausencia de Salmonella spp. Escheri-
cflia co/i y Staphylococcus aureus. '
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar aproximadamente
1,0 g de Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo a
105º durante 2 horas: pierde no más de 10,0% de su
pe~o. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 9,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
bien cerrado. Proteger de la luz.
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la planta de donde se obtuvo el artículo.
5988 Espino Blanco / Suplementos Dietéticos
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hiperósido USP
ER Quercetina USP
ER Vitexina USP
Fenilalanina-ver Fenilalanina en
Monografías Generales
Fumarato Ferroso-ver Fumarato Ferroso en
Monografías Generales
Fumarato Ferroso, Tabletas-ver
Fumarato Ferroso, Tabletas en Monografías
Generales
Gluconato Ferroso-ver Gluconato Ferroso
en Monografías Generales
Gluconato Ferroso, Cápsulas-ver
Gluconato Ferroso, Cápsulas en Monografías
Generales
Gluconato Ferroso, Solución Oral-ver
Gluconato Ferroso, Solución Oral en
Monografías Generales
Gluconato Ferroso, Tabletas-ver
Gluconato Ferroso, Tabletas en Monografías
Generales
Sulfato Ferroso-ver Sulfato Ferroso en
Monografías Generales
Sulfato Ferroso, Jarabe-ver Sulfato
Ferroso, jarabe en Monografías Generales
Sulfato Ferroso Seco-ver Sulfato Ferroso
Seco en Monografías Generales
Sulfato Ferroso, Solución Oral-ver
Sulfato Ferroso, Solución Oral en Monografías
Generales
USP 37
Sulfato Ferroso, Tabletas-ver Sulfato
Ferroso, Tabletas en Monografías Generales
Fitonadiona-ver Fitonadiona en
Monografías Generales
Fitonadiona, Tabletas-ver Fitonadiona,
Tabletas en Monografías Generales
Ácido Fólico-ver Ácido Fálico en
Monografías Generales
Ácido Fólico, Tabletas-ver Ácido Fálico,
Tabletas en Monografías Generales
Garcinia cambogia
DEFINICIÓN
La Garcinia cambogía consiste en el pericarpio seco de los
frutos de Garcinia gummi-gutta (L.) N. Robson, también
conocida como Garcinia cambogia (Gaertn.) Desr. (Fam.
Clusiaceae). Contiene no menos de 12% de la suma de
ácido (-)-hidroxicítrico y lactona de ácido (-)-hidroxicí-
trico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Garcinia cambogia cumple con los requisitos de
Pruebas Específicas, Características Botánicas .
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromatograma
de la Solución muestra presenta un pico de ácido hidroxi-
cítrico a un tiempo de retención correspondiente al de la
Solución estánqar A, según se obtienen en la pruepa de
Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxicítrico. La Solución muestra también presenta un
pico para lactona de ácido hidroxicítrico. Los picos de
ácido hidroxicítrico y lactona de ácido hidroxicítrico son
los picos principales en el cromatograma de la Solución
muestra.
COMPOSICIÓN , ,
• CONTENIDO DE ACIDO (-)-HIDROXICITRICO Y LACTONA DE
ÁCIDO (-)-HIDR,OXICÍTRICO
Solución A: Acido fosfórico al 30% en agua
Fase móvil: Disolver 1,36 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solución A a
un pH de 2,5, completar hasta 1 000 mL con agua,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solución A y agua (1 :9)
Solución estándar A: Una solución de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
2,5 mg/mL de ácido (-)-hidroxicítrico en Disolvente. An-
tes de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
Garcinia cambogia, reducida a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 250 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
USP 37
50 mL de Disolvente, someter a reflujo mientras se mez-
cla en un baño de agua durante 30 minutos, dejar que
sedimente, y decantar el sobrenadante. Repetir la ex-
tracción usando cuatro porciones de 50 mL de agua,
combinar todos los extractos, enfriar, filtrar en un ma-
traz volumétrico de 250 mL, y completar con agua a
volumen. Antes de la inyección, pasar a través de un
filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de lactona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxi-
cítrico son aproximadamente 0,9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre lactona de ácido
hidroxicítrico y ácido hidroxicítrico, Solución muestra
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido hidroxicítrico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de ácido hidroxicítrico en
inyecciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
lución estándar By la Solución muestra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular los porcentajes de ácido (-)-hidroxicítrico y
lactona de ácido (-)-hidroxicítrico en la porción de
Garcinia cambogia tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = área del pico de ácido hidroxicítrico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido (-)-hidroxicítrico en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Garcinia cambogia usado para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito:
2, 17 para lactona de ácido (-)-hidroxicítrico
y 1,00 para ácido H-hidroxicítrico
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de
ácido H-hidroxicítrico y lactona de ácido H-hidroxicí-
trico: Se encuentra no menos de 1 2% con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
lmpu!"ezas Inorgánicas ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 2,0%
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas, , colección de los frutos .
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgánica Extraña \56) ): No más de 2,0%,
• PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
Suplementos Dietéticos / Garcinia 5989
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Los frutos frescos tienen forma esférica
a ovalada, de 4-8 cm de altura, 3-6 cm de ancho, de
color amarillento a rosado pálido cuando están madu-
ros, parecidos a una calabaza en miniatura, con 7-13
estrías profundas longitudinales, que se extienden hasta
una base elevada Circular de estigma con punta ne-
gruzca, situada en el extremo hundido del fruto, que
contiene 6-8 semillas rodeadas por un arilo suculento.
El artículo farmacopeico consiste en piezas secas de pe-
ricarpio, longitudinales, de tamaño y forma variable,
fuertemente curvadas hacia dentro; coriáceas; ásperas
en la partP exterior, con arrugas irregulares, longitudi-
nalmente acanaladas; lisas en la parte interior, con lige-
ras estrías y crestas longitudinales. De color marrón os-
curo a marrón negruzco; olor característico; sabor agrio,
astringente, y ligeramente amargo.
Histología
Sección transversal del pericarpio: Presenta una
capa de epicarpio, compuesta de células rectangulares
a tangencialmente alargadas cubiertas con una cutí-
cula delgada; mesocarpio amplio, compuesto de
100-150 hileras de células parenquimáticas de tamaño
y forma variable, la'> hileras exteriores están compues-
tas de células relativamente más grandes con espacios
intracelulares amplios; haces vasculares que aparecen
por todo el mesocarpio, más hacia la zona interna; se
encuentran presentes exudados gomosos de color ma-
rrón oscuro, gránulos de almidón simples y compues-
tos y prismas de oxalato de calcio en las células paren-
, quimaticas en todo el mesocarpio.
• LIMITE DE ACIDO CITRICO
Disolvente y Sistema cromatográfico: preparar según
se indica en la prueqa de Contenido de Acido (-)-Hidroxi-
cítrico y Lactona de Acido (-)-Hidroxicítri\:O.
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Acido Cítrico USP
en Disolvente. Antes de la inyección, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Análisis
Muestra: Solución estándar
Calcular el porcentaje de ácido cítrico en la porción de
Garcinia cambogia tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de ácido cítrico de la Solución
muestra en la prueba de Conte,nido de Acido
(-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxicitrico (m~/mL)
rs = área del pico de acido cítrico de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Cítrico USP en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Garcinia cambogia usado para
preparar la So~ución muestra en la prueba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Lactona
de Acido (-)-Hidroxicítrico (mg)
Criterios de aceptación: No más de 2% de ácido cí-
trico con respecto a la materia seca
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2,0 g de Garcinia cam-
bogia reducida a polvo fino a l 05' durante 3 horas:
pierde no más de 12,0%,de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales \561):
Determinado en 1,0 g de Garcinia cambogia reducida a
polvo fino: no más de 3,0% y no más de 8,0% si se
agregó cloruro de sodio como conservante durante la re-
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
, tal de microorganismos aerobios no excede de l 0 5 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 1 utc/g, y el recuento de bac-
5990 Garcinia / Suplementos Dietéticos
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1oi ufc/g. , los primeros mL del filtrado.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Cítrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Garcinia cambogia en Polvo
DEFINICIÓN
La Garcinia cambogia en Polvo es Garcinia cambogia redu-
cida a polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de
12% de la suma de ácido (-)-hidroxicítrico y lactona de
ácido (-)-hidroxicítrico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Garcinia cambogia en Polvo cumple con los requisi-
tos de Pruebas Específicas~ Características Botánicas.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromatograma
de la Solución muestra presenta un pico para ácido hidro-
xicítrico a un tiempo de retención correspondiente al de
la Solución estqndar A, según se obtienen en la pq..1eba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxicítrico. La Solución muestra también presenta un
pico para lactona de ácido hidroxicítrico. Los picos de
ácido hidroxicítrico y lactona de ácido hidroxicítrico son
los picos principales en el cromatograma de la Solución
muestra.
COMPOSICIÓN , , rs
• C9NTENIDO DE ACIDO, (-)-HIDROXICITRICO Y LACTONA DE
ACIDO (-)-HID~OXICITRICO
Solución A: Acido fosfórico al 30% en agua
Fase móvil: Disolver l, 36 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solución A a
un pH de 2,5, completar con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Solución A y agua (1 :9)
Solución estándar A: Una solución de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
2,5 mg/mL de ácido (-)-hidroxicítrico en Disolvente. An-
tes de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
Garcinia cambogia en Polvo, pesados con exactitud, a
un matraz de fondo redondo de 250 mL equipado con
un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de Disol-
vente, someter a reflujo mientras se mezcla en un baño
de agua durante 30 minutos, dejar que sedimente, y
decantar el sobrenadante. Repetir la extracción usando
cuatro porciones de 50 mL de agua, combinar todos los
extractos, enfriar, filtrar en un matraz volumétrico de
250 mL, y completar con agua a volumen. Antes de la
inyección, pasar a través de un filtro de membrana con
USP 37
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de lactona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxi-
cítrico son aproximadamente O, 9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Bes similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de lac-
tona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxicítrico, So-
lución muestra
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido hidroxicítrico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de ácido hidroxicítrico en
inyecciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
[NOTA-La Solución estándar A, la Solución estándar B y
la Solución muestra se mantienen estables durante 6
horas.]
Calcular los porcentajes de ácido (-)-hidroxicítrico y lac-
tona de ácido (-)-hidroxicítrico en la porción de Garci-
nia cambogia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
= área del pico de ácido hidroxicítrico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido (-)-hidroxicítrico en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Garcinia cambogia en Polvo usado
para preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito:
2, 17 para lactona de ácido (-)-hidroxicítrico
y 1,00 para ácido (-)-hidroxicítrico
Criterios de aceptación: No menos de 12% con res-
pecto a la materia seca
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 2,0%
• METALES PESADOS, Método /JI (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánic~s , ,
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón os-
curo; olor característico; sabor agrio, astringente y ligera-
mente amargo. Al microscopio presenta células parenqui-
máticas que contienen exudados gomosos de color
marrón rojizo oscuro; las células parenquimáticas contie-
nen gránulos de almidón simples y compuestos; prismas
USP 37
de oxalato de calcio; y fragmentos de vasos anillados y
~spiralado,s. , • A.
• LIMITE DE ACIDO CITRICO
Disolvente: Pr,eparar según se indica en la pruebéj de
Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxicítrico. , Solución estándar: 0,5 mg/mL de garcinol en alcohol
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Acido Cítrico USP
en Disolvente. Antes de la inyección, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Análisis
Muestra: Solución estándar
Calcular el porcentaje de ácido cítrico en la porción de
Garcinia cambogia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 1 00
ru = área del pico de ácido cítrico de la Solución
muestra en la prueba de Contepido de Acido
(-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxicítrico
rs = área del pico de ácido cítrico de la Solución
estándar , Análisis
Cs = concentración de ER Acido Cítrico USP en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Garcinia cambogia en Polvo usado
para preparar la Solución ,muestra en la
prueba de Contenido de Acido (-)-
Hidroxicítrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxicítrico (mg)
Criterios de aceptación: No más de 2% de ácido cí-
trico, calculado con respecto a la materia seca
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g de Garcinia cam-
bogia en Polvo a 105º durante 3 horas: pierde no más de
12,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
Determinado en 1,0 g de Garcinia cambogia en Polvo: no
más de 3,0% y no más de 8,0% si se agregó cloruro de
sodio como conservante durante la recolección de los
frutos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , xicítrico a un tiempo de retención correspondiente al de
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Cítrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Garcinia indica
DEFINICIÓN
La Garcinia indica consiste en el pericarpio seco de los frutos
de Garcinia indica (Thouars) Choisy (Fam. Clusiaceae).
Contiene no menos de 12% de la suma de ácido(-)-
hidroxicítrico y lactona de ácido (-)-hidroxicítrico, con res-
pecto a la materia seca.
Suplementos Dietéticos / Garcinia 5991
IDENTIFICACIÓN
La Garcinia indica cumple con los requisitos de Prue-
bas Específicas, Características Botánicas. ,
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Garcinia indica, reducida a polvo fino, a un aparato
de Soxhlet, agregar 100 mL de alcohol, y extraer du-
rante 6 horas. Filtrar y concentrar al vac10 hasta aproxi-
madamente 1O ml. [NOTA-Usar un dedal con un ta-
maño adecuado para que el volumen de alcohol usado
en la extracción en el aparato de Soxhlet sea al menos
el doble del volumen del dedal.]
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas
para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Tolueno, acetato de etilo y ácido fórmico
(4:1 :0,5)
Solución reveladora: Una mezcla de vainillina al 1 % en
alcohol y ácido sulfúrico al 1 0% en alcohol (1: 1)
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
secar, rociar con Solución reveladora, calentar durante
5-1 O minutos a aproximadamente 105º, y observar
bajo luz visible .
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda de color gris verdoso
debida a garcinol a un valor RF de aproximadamente
0,6, que corresponde en posición y color a la banda
principal en el cromatograma de la Solución estándar. La
Solución muestra presenta las siguientes bandas adicio-
nales: dos bandas de color púrpura, dos bandas de
color gris verdoso, dos bandas de color azul y una
banda púrpura a valores Rf de aproximadamente 0,31;
0,34; 0,37; 0,47; 0,54; 0,83 y 0,93, respectivamente.
Se pueden observar otrsis bandas en la Solución muestra.
• c. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromatograma
de la Solución muestra presenta un pico para ácido hidro-
la Solución estqndar A, según se obtienen en la prJJeba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxicítrico. La Solución muestra también presenta un
pico para lactona de ácido hidroxicítrico. Los picos de
ácido hidroxicítrico y lactona de ácido hidroxicítrico son
los picos principales en el cromatograma de la Solución
muestra.
COMPOSICIÓN , ,
• C9NTENIDO DE ACIDO, (-)-HIDROXICITRICO Y LACTONA DE
ACIDO (-)-HIDR,OXICITRICO
Solución A: Acido fosfórico al 30% en agua
Fase móvil: Disolver 1,36 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solución A a
un pH de 2,5, completar con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solución A y agua (1 :9)
Solución estándar A: Una solución de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
4 mg/mL de ácido (-)-hidroxicítrico en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 ~lm o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Solución estándar B: 8 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
 5992 Garcinia /Suplementos Dietéticos
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
Garcinia indica, reducida a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 250 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
50 mL de Disolvente, someter a reflujo mientras se mez-
cla .en un bailo de agua durante 30 minutos, dejar que
sedimente, y decantar el sobrenadante. Repetir la ex-
tracción usando cuatro porciones de 50 mL de agua,
combinar todos los extractos, enfriar, filtrar en un ma-
traz volumétrico de 250 mL, y completar con agua a
volumen. Antes de la inyección, pasar a través de un
filtro de membrana con un tamafío de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de lactona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxi-
cítrico son aproximadamente O, 9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de lac-
tona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxicítrico, So-
lución muestra
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido hidroxicítrico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de ácido hidroxicítrico en
inyecciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. [NOTA--La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular los porcentajes de ácido (-)-hidroxicítrico y
lactona de ácido (-)-hidroxicítrico en la porción de
Garcinia indica tomada:
Resultado = (ru/rs) X e X (V /W) X F X 1 00
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = área del pico de ácido hidroxicítrico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido (-)-hidroxicítrico en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Garcinia indica usado para preparar la
Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito:
2, 1 7 para lactona de ácido (-)-hidroxicítrico
y 1,00 para ácido (-)-hidroxicítrico
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de
ácido (-)-hidroxicítrico y lactona de ácido (-)-hidroxicí-
trico: ?e encuentra no menos de 1 2% con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
lmpur~zas Inorgánicas , má~ de 12,0% de su pes9.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en
Acido (561 ): No más de 0,5%
USP 37
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas:
• PROCEDIMIENTO 1: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia
Orgánica Extrai?a (561 ): No más de 2 0%
• PROCEDIMIENTO 2: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Los frutos frescos tienen forma globu-
lar, 3-4 cm de diámetro, de color purpúreo a naranja
rosa?o cuando están maduros, con lóbulos del cáliz
persistentes en la base y estigma sésil radiado y apla-
nado en el ápice; contienen 5-8 semillas rodeadas por
un arilo suculento. El artículo farmacopeico consiste en
piezas secas de pericarpio, de color negro azulado, de
varias formas y tamafíos, aplanados, flexibles; pueden
presentar restos de pedicelos, cáliz y estigma· olor ca-
racterístico; sabor agrio. '
Histología
Sección transversal del pericarpio: Una capa de epi-
carpio, compuesta de células isodiamétricas, con cutí-
cula delgada y estomas; la hipodermis consiste en va-
rias hileras de células de paredes gruesas tangencial-
mente alargadas y dispuestas de manera compacta
con contenido de color marrón oscuro, que presentan
cavidades alargadas irregulares estrechas; el mesocar-
pio exterior consiste en células parenquimáticas tan-
gencialmente alargadas y dispuestas de manera laxa,
unas pocas llenas de granos de almidón, atravesadas
por bandas estrechas de células colapsadas y duetos
de oleoresina; mesocarpio interno que consiste en cé-
lulas colapsadas y dispuestas de manera compacta que
presentan hileras de haces fibrovasculares; el endocar-
pio no es característico y consiste en células colapsadas
de paredes delgadas con contenido de color marrón
oscuro.
• LÍMITE DE ÁCIDO CÍTRICO
Dis~lvt;nte y Sistema cromatográfico: preparar según
se 1nd1ca en la pruega de Contenido de Acido (-)-Hidroxi-
cítrico y Lactona de Acido (-)-Hidroxicítri~o.
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Acido Cítrico USP
en Disolvente. Antes de la inyección, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamafío de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Análisis
Muestra: Solución estándar
Calcular el porcentaje de ácido cítrico en la porción de
Garcinia indica tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de ácido cítrico de la Solución
muestra en la prueba de Conte,nido de Acido
(-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxicítrico
rs = área del pico de ácido cítrico de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Cítrico USP en la
Solución estándar (mg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
W = peso de Garcinia indica usado para preparar la
Solu,ción muestra en la prueba de Contenido
de ljcido (-)-Hidroxicítrico y Límite de Lactona
de Acido (-)-Hidroxicítrico (mg)
Criterios de aceptación: No más de 2% de ácido cí-
,trico con respecto a la materia seca
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g de Garcinia indica
reducida a polvo fino a 105º durante 3 horas: pierde no
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
Determinado en 1,0 g de Garcinia indica reducida a polvo
fino: no más de 3,0% y no más de 8,0% si se agregó
USP 37
cloruro de sodio como conservante durante la recolec-
ción de los frutos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , de la Solución muestra presenta un pico para ácido hidro-
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Cítrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Garcinia indica en Polvo
DEFINICIÓN
La Garcinia indica en Polvo es Garcinia indica reducida a
polvo fino o a polvo muy fino. Contiene no menos de
12% de la suma de ácido (-)-hidroxicítrico y lactona de
ácido (-)-hidroxicítrico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Garcinia indica en Polvo cumple con los requisitos
de Pruebas Específicas, Ca¡acterísticas Botánicas;
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,5 mg/mL de garcinol en alcohol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Garcinia indica en Polvo a un aparato de Soxhlet,
agregar 100 mL de alcohol, y extraer durante 6 horas.
Filtrar y concentrar al vacío hasta aproximadamente
1 O mL. [NOTA-Usar un dedal con un tamaño adecuado
para que el volumen de alcohol usado en la extracción
en el aparato de Soxhlet sea al menos el doble del volu-
men del dedal.]
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño promedio de partícula de 5 µm (placas
para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Tolueno, acetato de etilo y ácido fórmico
(4:1 :0,5)
Solución reveladora: Una mezcla de vainillina al 1o/o en
alcohol y ácido sulfúrico al 10% en alcohol (1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara,
secar, rociar con Solución reveladora, calentar durante
5-1 O minutos aproximadamente a 105º, y observar
bajo luz visible.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una banda principal de color gris
verdoso debida a garcinol a un valor RF de aproximada-
mente 0,6, que corresponde en posición y color a la
banda principal en el cromatograma de la Solución es-
Suplementos Dietéticos / Garcinia 5993
tándar. La Solución muestra presenta las siguientes ban-
das adicionales: dos bandas púrpuras, dos bandas de
color gris verdoso, dos bandas azules y una banda púr-
pura a valores R, de aproximadamente 0,31; 0,34; 0,37;
0,47; 0,54; 0,83 y 0,93, respectivamente. Se pueden
observar otras bandas en la Solución muestra .
• c. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC: El cromatograma
xicítrico a un tiempo de retención correspondiente al del
cromatograma de la Solución estánqar A, según se obtie-
nen en la pr:ueba de Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y
Lactona de Acido (-)-Hidroxicítrico. La Solución muestra
también presenta un pico para lactona de ácido hidroxi-
cítrico. Los picos de ácido hidroxicítrico y lactona de
ácido hidroxicítrico son los picos principales en el croma-
tograma de la Solución muestra.
COMPOSICIÓN
• C9NTENIDO DE ÁCIDO, (-)-HIDROXICÍTRICO Y LACTONA DE
ACIDO (-)-HIDR,OXICITRICO
Solución A: Acido fosfórico al 30% en agua
Fase móvil: Disolver 1, 36 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solución A a
un pH de 2,5, completar con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solución A y agua (1 :9).
Solución estándar A: Una solución de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
4 mg/mL de ácido (-)-hidroxicítrico en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Solución estándar B: 8 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
Garcinia indica en Polvo, pesados con exactitud, a un
matraz de fondo redondo de 250 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 50 mL de Disolvente,
someter a reflujo mientras se mezcla en un baño de
agua durante 30 minutos, dejar que sedimente, y de-
cantar el sobrenadante. Repetir la extracción usando
cuatro porciones de 50 mL de agua, combinar todos los
extractos, enfriar, filtrar en un matraz volumétrico de
250 mL, y completar con agua a volumen. Antes de la
inyección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de lactona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxi-
cítrico son aproximadamente O, 9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de lac-
tona de ácido hidroxicítrico y ácido hidroxicítrico, So-
lución muestra
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido hidroxicítrico, Solución estándar A
5994 Garcinia /Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de ácido hidroxicítrico en
inyecciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra. [NOTA~La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular los porcentajes de ácido (-)-hidroxicítrico y
lactona de ácido (-)-hidroxicítrico en la porción de
Garcinia indica en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
r, = área del pico de ácido hidroxicítrico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido (-)-hidroxicítrico en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Garcinia indica en Polvo usado para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito:
2, 17 para lactona de ácido (-)-hidroxicítrico
y 1,00 para ácido (-)-hidroxicítrico
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de
ácido (-)-hidroxicítrico y lactona de ácido (-)-hidroxicí-
trico: Se encuentra no menos de 12% con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
lmpu!'ezas Inorgánicas , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 0,5%
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas
• PROCEDIMIENTO: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón oscu-
ros; olor característico; sabor agrio. Al microscopio pre-
senta células con contenido de color marrón oscuro; cé-
lulas con contenido de color amarillo, células paren-
quimáticas que contienen gránulos de almidón simples y
compuestos; fragmentos de células de epicarpio que con-
tienen estomas; y fragmentos de vasos anillados y
~spiraladq,s. , (-)-hidroxicítrico en forma de sal cálcica, potásica, magné-
• LIMITE DE ACIDO CITRICO
Disolvente y Sistema cromatográfico: preparar según
se indica en la pruega de Contenido de Acido (-)-Hidroxi-
cítrico y Lactona de Acido (-)-Hidroxicítri~o.
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Acido Cítrico USP
en Disolvente. Antes de la inyección, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Análisis
Muestra: Solución estándar
Calcular el porcentaje de ácido cítrico en la porción de
Garcinia indica en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 1 00
ru = área del pico de ácido cítrico de la Solución
muestra en la prueba de Contepido de Acido
(-)-Hidroxicítrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxicítrico
rs = área del pico de ácido cítrico de la Solución
estándar , un pH de 2,5, completar hasta 1 000 mL con agua,
Cs = concentración de ER Acido Cítrico USP en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
USP 37
W = peso de Garcinia indica en Polvo usado para
preparar la So(ución muestra en la prueba de
Confenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Lactona
de Acido (-)-Hidroxicítrico (mg)
Criterios de aceptación: No más de 2% de ácido cí-
,trico con respecto a la materia seca
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g de Garcinia indica
en Polvo a 1OSC durante 3 horas: pierde no más de
l 2,p% de su peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
Determinado en 1,0 g de Garcinia indica en Polvo: No
más de 3,0%; y no más de 8,0% si se agregó cloruro de
sodio como conservante durante la recolección de los
frutos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. ,
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Cítrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de
Garcinia
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia se prepara
a partir de Garcinia cambogia o Garcinia indica mediante
extracción con agua, alcohol o mezclas de estos disolven-
tes, seguida de estabilización del contenido de ácido
sica y/o sódica. La relación entre el material vegetal y el
extracto está aproximadamente entre 5:1 y 10:1. Con-
tiene no menos de 40% de ácido (-)-hidroxicítrico, calcu-
lado con respecto a la materia seca. Puede contener sus-
tancias agregadas adecuadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC: El cromatograma
de la Solución muestra presenta un pico para ácido hidro-
xicítrico a un tiempo de retención correspondiente al de
la Solución estqndar A, según se obtienen en la prueba de
<:;ontenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Límite de Lactona de
Acido (-)-Hidroxicítrico.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO, DE ÁCIDO (-)-HIDR_OXICÍTRICO Y LÍMITE DE LAC-
TONA DE ACIDO, (-)-HIDROXICITRICO
Solución A: Acido fosfórico al 30% en agua
Fase móvil: Disolver 1, 36 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solución A a
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solución A y agua (1 :9)
Solución estándar A: Una solución de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
2,5 mg/mL de ácido (-)-hidroxicítrico en Disolvente. An-
USP 37
tes de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución estándar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyección, pasar a través de un filtro de mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: 5 mg/mL de Extracto en Polvo de
Hidroxicitrato de Garcinia en Disolvente. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 ± 1 °
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Bes similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido hidroxicítrico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de ácido hidroxicítrico,
Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra. [NOTA-La Solución estándar A, la So-
lución estándar B y la Solución muestra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular el porcentaje de ácido (-)-hidroxicítrico y el lí-
mite de lactona de ácido (-)-hidroxicítrico, si estuviera
presente, en la porción de Extracto en Polvo de Hidro-
xicitrato de Garcinia tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = área del pico de ácido hidroxicítrico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido (-)-hidroxicítrico en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Hidroxicitrato de Garcinia en la Solución
muestra (mg/mL)
F = factor de conversiónpara cada analito:
2, 17 para lactona de ácido (-)-hidroxicítrico
y 1,00 para ácido (-)-hidroxicítrico
Criterios de aceptación: No menos de 40% de ácido
(-)-hidroxicítrico y no más de 8% de lactona de ácido
(-)-hidroxicítrico con respecto a la materia seca
IMPUREZAS
lmpu~ezas Inorgánicas ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 3,0%
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánic~s , Ginkgo
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos
de Plaguicidas (561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• LÍMITE DE ÁCIDO CÍTRICO
Disolvente: Pr,eparar según se indica en la prueba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxicítrico y Límite de Lactona
de Acido (-)-Hidroxicítrico.
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Ácido Cítrico USP
en Disolvente. Antes de la inyección, pasar a través de
Suplementos DiPtPlicos / Ginkgo 5995
un filtro de membrana con un lamaiio de poro de 0,45
µm o menor.
Análisis
Muestra: Solución e1lóndar
Calcular el porcentaje de ácido cítrico en la porción de
Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = área del pico de ácido cítrico, usando el área
del pico de ácido cítrico de la Solución ,
muestra en la prueba de Contenido de A,cido
(-)-Hidroxicítrico y Límite de Lortono de Arido
(-)-Hidroxicítrico
rs = área del pico de ácido cítrico de la Solución
estándar
C = concentración de ER Ácido Cítrico USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Hidroxicitrato de Garcinia en la Solución
muestra en la prueba de Contenido de Ácido
(-)-Hidroxicítrico y Límite de Lactona de Ácido
(-)-Hidroxicítrico (mg/mL)
Criterios de aceptación: No más de 5% de ácido cí-
trico con respecto a la materia seca
• IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES (191 ): Pruebas para
determinar la presencia de calcio, magnesio, potasio y/o
sodio.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2,0 g de Extracto en
Polvo a 105º durante 3 horas: El Extracto en Polvo que
contiene hidroxicitrato de calcio pierde no más de 5,0%
de su peso; el Extracto en Polvo que contiene otras sales
pierde no más de 9,0% de su peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1Q3 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. Cumple
con otros requisitos de Etiquetado en Extractos Botánicos
(565).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (:--)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Cítrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
DEFINICIÓN
El Ginkgo consiste en la hoja seca de Ginkgo biloba L. (Fam.
Ginkgoaceae). Contiene no menos de 0,5% de flavonoi-
des, calculado como glicósidos de flavonol, con una masa
molecular media de 756,7; y no menos de O, 1 % de lacto-
nas terpénicas, calculado como la suma de bilobálido
(C1sH130s), ginkgólido A (C20H24Ü"), ginkgólido B
(C20H24Ü10) y ginkgólido C (C10H2.1Ü11), ambos con res-
pecto a la materia seca.
5996 Ginkgo / Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Prueba de flavonoides
Solución estándar: Una soluciqn de 0,6 mg/mL de ER
Rutina USP, 0,2 mg/mL de ER Acido Clorogénico USP
y 0,2 mg/mL de ER Quercetina USP en metano!
Solución muestra: Transferir 1,0 g de Ginkgo reducido
a polvo fino a un matraz de fondo redondo de 50 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
1 O mL de metano! y someter a reflujo en un baño de
agua durante 1 O minutos, dejar que se enfríe a tempe-
ratura ambiente y filtrar. [NOTA-Reservar una porción
de la Solución muestra para usar en la Prueba de faeto-
nas terpénicas.]
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Acetato de etilo, agua, ácido fórmico anhi-
dro y ácido acético glacial (100:26:11 :11)
Solución reveladora 1: 5 mg/mL de difenilborinato de
2-aminoetilo en metano!
Solución reveladora 2: 50 mg/mL de polietilenglicol
400 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Antes de desarrollar los cromatogramas, saturar la cá-
mara durante 20 minutos con Fase móvil. Registrar la
temperatura y humedad en el laboratorio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acondicionar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 35%,
usando un dispositivo adecuado. Aplicar las muestras,
por separado y en bandas, a una placa para cromato-
grafía en capa delgada adecuada (ver Cromatografía
(621 )) y dejar que las bandas se sequen. Desarrollar la
placa en un recorrido de 6 cm, retirar la placa de la
cámara cromatográfica y secar en un horno de aire
circulante a 1 ose durante 5 minutos. Rociar inmedia-
tamente la placa caliente con Solución reveladora 7,
luego con Solución reveladora 2, secar y observar bajo
luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptación: La Solución estándar presenta
en su parte inferior, con valores RF crecientes, una zona
fluorescente de color marrón amarillento debida a ru-
tina (RF de 0,28), una zona fluorescente de color azul
claro debida a ácido clorogénico (RF de 0,36) y una
zona fluorescente de color amarillo debida a querce-
tina (RF de 0,92). La Solución muestra presenta una
zona fluorescente de color marrón amarillento, una
zona fluorescente de color azul claro y una zona fluo-
rescente de color marrón amarillento a valores RF simi-
lares a los de rutina, ácido clorogénico y quercetina,
respectivamente, en la Solución estándar. Se detectan
zonas adicionales de color amarillento a verde amari-
llento debidas a f19vonoides en el cromatograma de la
Solución muestra. Estas incluyen una zona por debajo
de la zona de rutina, dos zonas entre las zonas de
rutina y ácido clorogénico, y dos zonas por encima de
la zona de ácido clorogénico. Se pueden detectar otras
zonas en el cromatograma de la Solución muestra.
Prueba de lactonas terpénicas
Solución estándar: Disolver una cantidad de ER Lacto-
nas Terpénicas de Ginkgo USP en metanol para obte-
ner una solución que contenga en cada mL aproxima-
damente 1,0; 0,9; 0,6; 0,7 y 0,2 mg de bilobálido,
ginkgólido A, ginkgólido B, ginkgólido C y ginkgóli-
do J, respectivamente.
Solución muestra: Usar la Solución muestra preparada
en la Prueba de flavonoides.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
USP 37
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Tolueno, acetato de etilo, acetona y meta-
no! (20 : 1 O : 1 O : 1,2)
Solución reveladora: Anhídrido acético
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Sumergir una placa para cromatografía en capa del-
gada adecuada, recubierta con Adsorbente, durante 2
segundos en una solución de 8 g/200 mL de acetato
de sodio en metano!. Dejar que el exceso de líquido
de recubrimiento escurra de la placa, secar en una
estufa de convección forzada a 70º durante 30 minu-
tos y enfriar en un desecador. Aplicar las muestras,
por separado y en bandas, a la placa impregnada (ver
Cromatografía (621 )) y dejar que las manchas se se-
quen al aire. Antes de desarrollar los cromatogramas,
saturar la cámara durante 20 minutos con Fase móvil.
Registrar la temperatura y humedad en el laboratorio.
Si la humedad relativa excede de 50%, acondicionar
la placa a una humedad relativa de aproximadamente
35%, usando un dispositivo adecuado. Desarrollar la
placa en un recorrido de 6 cm, retirar la placa de la
cámara cromatográfica y secar en una corriente de
aire frío. Rociar la placa con Solución reveladora, ca-
lentar a 180º durante 1 O minutos, enfriar y observar
bajo luz UV de longitud de onda corta.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción estándar presenta cinco zonas de extinción bien
definidas, que corresponden a las diferentes lactonas
terpénicas de ginkgo: ginkgólido e, ginkgólido J, gink-
gólido B, ginkgólido A y bilobálido a valores RF de
aproximadamente O, 13; O, 18; 0,32; 0,38 y 0,45, res-
pectivamente. El cromatograma de la Solución muestra
presenta una zona de extinción bien pronunciada en
el lugar de la aplicación, una zona ancha de extinción
cerca del frente de la fase móvil y cinco zonas de ex-
tinción bien definidas que corresponden a las diferen-
tes lactonas terpénicas de ginkgo a valores RF similares
a los de las detectadas en el cromatograma de la Solu-
ción estándar.
[NOTA-Los valores RF pueden variar de una placa a la
otra debido a la etapa de impregnación.]
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GucÓSIDOS DE FLAVONOL
Disolvente de extracción: Alcohol, ácido clorhídrico y
agua (25:4:1 O)
Fase móvil: Metanol, agua y ácido fosfórico
(100:100:1)
Solución estándar A: 0,02 mg/mL de ER Quercetina
USP en metanol
Solución estándar B: 0,02 mg/mL de ER Kaempferol
USP en metanol
Solución estándar C: 0,005 mg/mL de ER lsorhamne-
tina USP en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginkgo, reducido a polvo fino, a un matraz de
250 mL equipado con un condensador de reflujo. Agre-
gar 78 mL de Disolvente de extracción y someter a re-
flujo en un baño de agua caliente durante 1 35 minutos.
[NOTA-La solución se tornará de color rojo intenso. El
color de la solución no es una indicación definitiva de la
totalidad de la reacción.] Dejar que se enfríe a tempera-
tura ambiente. Decantar en un matraz volumétrico de
100 mL. Agregar 20 ml de metano! al matraz de
250 ml y someter a ultrasonido durante 30 minutos.
Filtrar, recoger el filtrado en el matraz volumétrico de
100 ml, lavar el residuo en el filtro con metanol, reco-
ger el lavado en el mismo matraz volumétrico de
100 ml, diluir con metano! a volumen y mezclar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37 Suplementos Dietéticos / Ginkgo 5997

Modo: HPLC sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45

Detector: UV 370 nm µm o menor.
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min de Ginkgo, pesados con exactitud, a un tubo de centrí-
Volumen de inyección: 20 µL fuga de vidrio de 30 mL con tapa de rosca y junta de
Aptitud del sistema PTFE. Agregar 10,0 mL de Disolvente, sellar el tubo y
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y mezclar bien en un mezclador de vórtice. Calentar en
Solución estándar C un baño de agua a 90º durante 30 minutos. Mezclar la
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para querce- suspensión caliente en un mezclador de vórtice y repetir
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada- el calentamiento a 90º durante 30 minutos. Enfriar,
mente 1,0; 1,8 y 2,0 respectivamente; Solución están- centrifugar, transferir el sobrenadante a un matraz y de-
dar A, Solución estándar B y Solución estándar C] volver el residuo al tubo de vidrio. Repetir la extracción
Requisitos de aptitud dos veces más, usando cada vez 10,0 mL de Disolvente.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de- Combinar los extractos, dejar que se enfríen a tempera-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio- tura ambiente y evaporar hasta sequedad al vacío en un
nes repetidas, Solución estándar A baño de agua mantenido a 50º. Agregar 1 O mL de Solu-
Análisis ción amortiguadora al residuo y someter a ultrasonido
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So- durante 5 minutos. Transferir cuantitativamente la solu-
lución estándar C y Solución muestra ción a un tubo cromatográfico de vidrio relleno de tie-
Calcular el porcentaje de cada glicósido de flavonol en rra silícea para cromatografía capaz de contener 20 mL
la porción de Ginkgo tomada: de fase acuosa. 1 Enjuagar el vaso de precipitados con
dos porciones de 5 mL de Solución amortiguadora y
Resultado = (ru/rs) x (Cs/W) x F x 1 O transferir los lavados a la columna. [NOTA-No exceder
de 20 mL de fase acuosa total ni la capacidad de con-
ru = área del pico del analito pertinente de la tención del tubo cromatográfico.]
Solución muestra Dejar que la Solución amortiguadora sea absorbida por
rs = área del pico del analito pertinente de la la columna. Después de 15 minutos, eluir la columna
Solución estándar A, Solución estándar B o con 100 mL de acetato de etilo, recoger la solución de
Solución estándar C acetato de etilo y evaporar hasta sequedad al vacío en
Cs = concentración del analito pertinente en un baño de agua mantenido a 50º. Disolver el residuo
Solución estándar A, Solución estándar B o en 10,0 mL de Diluyente.
Solución estándar C (mg/mL) Sistema cromatográfico
W = peso de Ginkgo tomado para preparar la (Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Solución muestra (g) Modo: HPLC
F = factor de la masa molecular media para Detector: Evaporativo de dispersión de luz. [NOTA-
convertir cada analito en glicósido de Los parámetros del detector se ajustan para lograr la
flavonol con una masa molecular media de mejor relación señal-ruido, de acuerdo con las reco-
756,7: 2,504 para quercetina; 2,437 para mendaciones del fabricante.]
isorhamnetina; y 2,588 para kaempferol Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Calcular el porcentaje total de glicósidos de flavonol, Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
sumando [os porcentajes individuales calculados. Velocidad de flujo: 1 mL/min
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% de flavo- Volumen de inyección: 15 µL
noides, como glicósidos de flavonol, con una masa Aptitud del sistema
molecular media de 756,7, con respecto a la materia Muestras: Soluciones estándar
seca Requisitos de aptitud
• CONTENIDO DE LACTONAS TERPÉNICAS Similitud de los cromato~ramas: Los cromatogra-
Disolvente: Metanol y agua (9:1) mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
Solución amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di- tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
básico de sodio y 8,25 g de fosfato monobásico de po- tonas Terpénicas de Ginkgo USP usado.
tasio en 1000 mL de agua y ajustar a un pH de 5,8. Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
Diluyente: Metanol y agua (1 :1) terminada a partir del pico de bilobálido en inyeccio-
Solución A: Agua nes repetidas.
Solución B: Metanol Coeficiente de correlación: No menos de
Fase móvil: Ver la Tabla 7. 0,995 para la línea de regresión, según se determina
en el Análisis.
Tabla 1 Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Tiempo Solución A Solución B
(min)
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
(%) (%)
los analitos pertinentes en los cromatogramas de las
o 75 25 Soluciones estándar por comparación con el cromato-
23 52 48 grama de referencia provisto con el lote de ER Lacto-
28 52 48 nas Terpénicas de Ginkgo USP usado. Medir las áreas
30 25 75 de los picos de los analitos. Graficar los logaritmos de
35 10 90
las respuestas de los picos pertinentes en función de
los logaritmos de las concentraciones, en mg/mL, de
40 75 25
cada analito de las Soluciones estándar y determinar la
50 75 25 línea de regresión usando un análisis de cuadrados
mínimos.
Soluciones estándar: Usando el contenido declarado A partir de las gráficas, determinar la concentración, C,
de lactonas terpénicas individuales, preparar cinco solu- en mg/mL, del analito pertinente en la Solución
ciones del ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP en
muestra.
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 µg/mL para
cada una de las lactonas terpénicas pertinentes. Si fuera 1 El material adecuado disponible comercialmente es ExtrelutCRJ NT 20 de E

necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa- Merck Science.
5998 Ginkgo / Suplementos Dietéticos
Calcular por separado los porcentajes d.e bil()bálido
(C 11 H1K0 8 ), ginkgólido A (C20H24Ü9), g1nkgol1do B.,
(C 20 H7 4010) y ginkgólido C (C20H24Ü11) en la porc1on
de Ginkgo tomada:
Resultado = (C/V\I) x 1000
C = concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (mg/mL)
W = peso de Ginkgo tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje total de lactonas terpénicas e~ la
porción de Ginkgo tomada, sumando los porcenta¡es
calculados para cada analito.
Criterios de aceptación: No menos de O, 1 % de ,l~cto­
nas terpénicas calculado como la suma de bilobal1do,
ginkgólido A, ginkgólido B y ginkgólido C, con respecto
a la materia seca.
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos .
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 µg/g
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no exce~e de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 1 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1QJ ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Eschenchta colt.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Hojas entera_s desecad_as, plegadas, o
fragmentadas, con o sin pec!olo adherido, que varian
de color verde caqui a marran verdoso, por lo general,
de color más marrón en el borde apical y más oscuras
en la superficie adaxial. La lámina es ampliamente ob-
cuneada (en forma de abanico), de 2-12 cm de ancho
y de 2-9,5 cm de largo desde el pecíolo hasta el, mar-
gen apical; en su mayoría son de 1,5-2 veces mas an-
chas que largas. Los márgenes de la base son enteros,
cóncavos; el margen apical es sinuoso, por lo gen~ral,
truncado o con hendidura central, )'. ~n raras ocasiones
con múltiples hendiduras. La superficie es_ glabra, de
apariencia arrugada debido a las pronunciadas ner~adu­
ras dicotómicas que parecen paralelas y que se extien-
den desde la base de la lámina hasta el margen apical.
Los pecíolos son de un color similar a la hoja, acanala-
dos en la superficie adaxial y de 2-8 cm de largo.
Histología
Sección transversal de la lámina: Se presenta una
cutícula delgada pero marcada sobr~ ~na sola capa de
células epidérmicas en ambas SUf?e.rf1~1es. _Se preseritan
estomas únicamente en la superficie inferior con celu-
las guardianas hundidas con respecto_ a las células, epi-
dérmicas adyacentes. Se presentan celulas_ de cloren-
quima en empalizada, alargad~s, p_erpend1cula~es a la
superficie y a menudo de apariencia irregular, ¡usto de-
ba/·º de la epidermis superior. Se presentan hac_es _vas-
cu ares a intervalos a lo largo del ancho de la lamina
con cristales de oxalato de calcio en grupos adyacen-
tes. Las células del mesófilo son más pequeñas que las
células en empalizada, alargadas paralelas a I? superfi-
cie de la hoja y separadas por grandes espacios
intercelulares.
Lámina y pecíolo en polvo: Al microscopio, los frag-
mentos transversales de la hoja muestran una cutícula
lisa, presente en ambas superfjcies de la hoja y que se
tiñen de color anaran¡ado rosaceo con sudan 111 SR.
Vistas desde la superficie, las células de la epidermis
superior son alargadas y de paredes onduladas, con
USP 37
abundantes gotitas de color amarillo de 2-12 µm de
diámetro visibles en las hojas maduras y más antigua.s,
no así en las hojas jóvenes. Las células de la ep1derm1s
inferior presentan una forma similar pero con parede,s.
más rectas y están interrumpidas por estomas an1soc1t1-
cos. Se presentan numerosos elementos lignificados
derivados de la lámina y el pecíolo, incluyendo vasos
de xi/ema con engrosamientos anillados, traque1.das y
vasos con puntuaciones areoladas. El grado de lign1f1-
cación, particularmente en el pecíolo, se incrementa
con la edad de la hoja. Los cristales de oxalato de.
calcio son numerosos y se presentan de manera dis-
persa o asociados con los vasos, con tamaños que va-
rían de 5-50 µm en las hojas jóvenes, y de 15-100 µ~
en las hojas maduras. Utilizando filtros cruzados polari-
zados, pueden observarse numerosos el~m~ntos bri-_
//antes de menor tamaño en forma de lagrimas o pris-
mas de origen indeterminado. En ocasiones, se
pueden observar tricomas de recubrimiento muy alar-
gados y uniseriados sin parede~ transversales y de su-
perficies lisas o rugosas. Las ho¡as maduras pueden
presentar muy escasos gránulos de almidón polig_<?na-
les a circulares de aproximadamente 20 µm de d1ame-
tro con un hilio central y exhibiendo una cruz de
M;lta marcada bajo luz polarizada .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 3,0% de tallos y no mas de 2,0% de
otra materia orgánica extraña
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Ginkgo reducido a polvo fino
Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 11,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Ginkgo reducido a polvo fino
Criterios de aceptación: No más de 11,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ácido C/orogénico USP
ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaempferol USP
ER Quercetina USP
ER Rutina USP
Ginkgo, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Gin_kgo se preparan .con Extracto en Polvo
de Ginkgo y contienen, en la cantidad declarada de Ex-
tracto en Polvo, no menos de 22,0% y no más de 27,0~/o
de glicósidos de flavonol, y no menos de 5,4% y no mas
de 12 0% de lactonas terpénicas, calculados como la
1
suma de bilobálido (C1sH1sOs), ginkgólido A (C20H24Ü9),
ginkgólido B (C20H24Ü10) y ginkgólido C (C20H24Ü11).
IDENTIFICACIÓN
• A. HPLC: En la prueba de Contenido de Glicósidos de Fla-
vonol, los tiempos de retención de los picos ~e querce-
tina isorhamnetina y kaempferol de la Soluoon muestra
cor(esponden a los d,e la Solución estándqr. En el cror:ia-
tograma de Ja Solucion muestra, la relac1on entre el pico
de kaempferol y el de quercetina es no menos de 0,7; y
el pico de iso~hamnetina es .no menos de O, 1 veces el
tamaño del pico de quercetina.
USP 37
• B. HPLC: Los tiempos de retención de los picos de bilo-
bálido, ginkgólido A, ginkgólido B y ginkgolido C de la
Solución muestra corresponden a los de las Soluciones
estándar, según se obtienen en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpénicas.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GucÓSIDOS DE FLAVONOL
Fase móvil: Metanol, agua y ácido fosfórico
(100:100:1)
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Quercetina USP
en metanol
Solución estándar B: 0,2 mg/mL de ER Kaempferol USP
en metanol
Solución estándar C: 0,05 mg/mL de ER lsorhamnetina
USP en metanol
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cápsulas. Transferir una canti-
dad del polvo pesada con exactitud, equivalente a
aproximadamente 50 mg de glicósidos de flavonol, a
un matraz volumétrico de 50 ml. Agregar 20 mL de
metanol y someter a ultrasonido durante 3 minutos.
Agregar 20 mL de ácido clorhídrico 1,5 N y someter a
ultrasonido nuevamente durante 1 O minutos. Dejar que
se enfríe a temperatura ambiente y diluir con metanol a
volumen. Centrifugar y transferir una porción del sobre-
nadante transparente a un vial de vidrio con protección
actínica y tapa de goma. Calentar en un baño de vapor
durante 25 minutos y enfriar a temperatura ambiente
en un baño de hielo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución estándar C
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada-
mente 1,0; 1,8 y 2,0, respectivamente; Solución están-
dar A, Solución estándar B y Solución estándar C.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio-
nes repetidas, Solución estándar A.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Calcular la cantidad, en mg, de cada glicósido de flavo-
nol en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x F x 50
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
r5 = área del pico del analito pertinente de la
Solución estándar A, Solución estándar B o
Solución estándar C
Cs = concentración del analito pertinente en la
Solución estándar A, Solución estándar B o
Solución estándar C (mg/mL)
F = factor de la masa molecular media para
convertir cada analito en glicósido de
flavonol con una masa molecular media de
756,7: 2,504 para quercetina, 2,437 para
isorhamnetina y 2,588 para kaempferol
Calcular la cantidad total, en mg, de glicósidos de
flavonol en la porción de Cápsulas tomada, sumando
las cantidades individuales calculadas. Calcular la
cantidad total, en mg, de glicósidos de flavonol por
Cápsula y el porcentaje de glicósidos de flavonol en la
cantidad declarada de Extracto en Polvo de Ginkgo.
Suplementos Dietéticos/ Ginkgo 5999
Criterios de aceptación: 22,0%-27,0% de glicósidos
de flavonol
• CONTENIDO DE LACTONAS TERPÉNICAS
Disolvente: Metanol y agua (9:1)
Solución amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di-
básico de sodio y 8,25 g de fosfato monobásico de po-
tasio en 1000 mL de agua, y ajustar a un pH de 5,8 .
Diluyente: Metanol y agua (1 :1)
Solución A: Agua
Solución B: Metanol
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 75 25
23 52 48
28 52 48
30 25 75
35 10 90
40 75 25
50 75 25
Soluciones estándar: Usando el contenido declarado
de lactonas terpénicas individuales, preparar cinco solu-
ciones del ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP en
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 µg/mL para
cada una de las lactonas terpénicas pertinentes. Si fuera
necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa-
sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cápsulas. Transferir una canti-
dad del polvo, pesada con exactitud, equivalente a
aproximadamente 120 mg de Extracto en Polvo de
Ginkgo, a un tubo de centrífuga de vidrio de 30 mL
con tapa de rosca y junta de PTFE. Agregar 10,0 mL de
Disolvente, sellar el tubo y mezclar bien en un mezcla-
dor de vórtice. Calentar en un baño de agua a 90º
durante 30 minutos. Mezclar la suspensión caliente en
un mezclador de vórtice y repetir el calentamiento a
90º durante 30 minutos. Enfriar, centrifugar, transferir el
sobrenadante a un matraz y devolver el residuo al tubo
de vidrio. Repetir la extracción dos veces más, usando
cada vez 10,0 mL de Disolvente. Combinar los extractos,
dejar que se enfríen a temperatura ambiente y evaporar
hasta sequedad al vacío en un baño de agua mante-
nido a 50º. Agregar 1 O mL de Solución amortiguadora al
residuo y someter a ultrasonido durante 5 minutos.
Transferir cuantitativamente la solución a un tubo cro-
matográfico de vidrio relleno de tierra silícea para cro-
matografía capaz de contener 20 mL de fase acuosa. 1
Enjuagar el vaso de precipitados con dos porciones de
5 mL de Solución amortiguadora y transferir los lavados a
la columna. [NOTA-No exceder de 20 mL de fase
acuosa total ni la capacidad de contención del tubo
cromatográfico.] Dejar que la Solución amortiguadora se
absorba en la columna. Después de 15 minutos, eluir la
columna con 100 mL de acetato de etilo, recoger la
solución de acetato de etilo y evaporar hasta sequedad
al vacío en un baño de agua mantenido a 50º. Disolver
el residuo en 20,0 mL de Diluyente.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersión de luz. [NOTA-
Los parámetros del detector se ajustan para lograr la
mejor relación señal-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.]
' El material adecuado disponible comercialmente es ExtreluU\ NT 20 de E
Merck Science.
6000 Ginkgo / Suplementos Dietéticos
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 ± 1º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Soluciones estándar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromato9ramas: Los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
tonas Terpénicas de Ginkgo USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de bilobálido en inyeccio-
nes repetidas
Coeficiente de correlación: No menos de 0,995 para
la línea de regresión, según se determina en el
Análisis.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
los analitos pertinentes en el cromatograma de las So-
luciones estandar por comparación con el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Lacto-
nas Terpénicas de Ginkgo USP usado. Medir las áreas
de los picos de los analitos. Graficar los logaritmos de
las respuestas de los picos pertinentes en función de
los logaritmos de las concentraciones, en mg/mL, de
cada analito obtenido de las Soluciones estándar y de-
terminar la línea de regresión, usando un análisis de
cuadrados mínimos.
A partir de las gráficas, determinar la concentración, C,
en mg/mL, del analito pertinente en la Solución
muestra.
Calcular por separado las cantidades, en mg, de bilobá-
lido (C1sH1sOs), ginkgólido A (C20H24Ü9), ginkgólido B
(C20H24Ü10) y ginkgófido C (C20H24Ü11) en la porción
de Cápsulas tomada:
Resultado =c X 20
C = concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (mg/mL)
Calcular la cantidad total de lactonas terpénicas en la
porción de Cápsulas tomada, sumando las cantidades
calculadas de cada analito. Calcular la cantidad total,
en mg, de lactonas terpénicas por Cápsula y el
porcentaje de lactonas terpénicas en la cantidad
declarada de Extracto en Polvo de Ginkgo.
Criterios de aceptación: 5,4%-12,0% de lactonas ter-
pénicas, calculadas como la suma de bilobálido, ginkgó-
lido A, ginkgólido B y ginkgólido C.
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos pe Disolución.
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 45 min
Soluciones estándar: Proceder según se indica en la
prueba de Contenido de Lactonas Terpénicas.
Solución muestra: Combinar porciones de 25 mL de la
solución en análisis, de cada uno de los seis vasos de
disolución, en un embudo de separación. Extraer con
cuatro porciones de 50 mL de acetato de etilo. Combi-
nar los extractos y evaporar al vacío hasta sequedad.
Disolver el residuo sometiendo a ultrasonido en 5,0 mL
de una mezcla de agua y metanol (1 :1).
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Lactonas Terpénicas para determinar la concen-
tración, C, en mg/mL, de ginkgólido B en la Solución
muestra.
Calcular la cantidad disuelta de ginkgólido B como
porcentaje:
Resultado = 5000C/3G
USP 37
C = concentración de ginkgólido B en la Solución
muestra (mg/mL)
G = contenido de ginkgólido B, según se
determinó en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpénicas (mg/Cápsula)
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de gink-
gólidq B
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 101 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, el artículo
usado para preparar las Cápsulas. Etiquetar las Cápsulas
indicando la cantidad, en mg, de Extracto en Polvo de
Gi11kgo por Cápsula.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaempferol USP
ER Quercetina USP
Ginkgo, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Ginkgo se preparan a partir de Extracto en
Polvo de Ginkgo y contienen, en la cantidad declarada de
Extracto en Polvo, no menos de 22,0% y no más de
27,0% de glicósidos de flavonol, y no menos de 5,4% y
no más de 12,0% de lactonas terpénicas, que consisten
en bilobálido (C1sH1sÜs), ginkgólido A (C20H24Ü9), ginkgó-
lido B (C20H24Ü10) y ginkgólido C (C20H24Ü11).
IDENTIFICACIÓN
• A. HPLC: En la prueba de Contenido de Glicósidos de F/a-
vonol, los tiempos de retención de los picos de querce-
tina, isorhamnetina y kaempferol de la Solución muestra
corresponden a los de la Solución estándar. En el croma-
tograma de la Solución muestra, la relación entre el pico
de kaempferol y el de quercetina es no menos de 0,7; y
el pico de isorhamnetina es no menos de O, 1 veces el
tamaño del pico de quercetina.
• B. HPLC: Los tiempos de retención de los picos de bilo-
bálido, ginkgólido A, ginkgólido B y ginkgolido C de la
Solución muestra corresponden a los de las Soluciones es-
tándar, según se obtienen en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpénicas.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GLICÓSIDOS DE FLAVONOL
Fase móvil: Metanol, agua y ácido fosfórico
(100:100:1)
Solución estándar A: 0,2 mg/mL de ER Quercetina USP
en metanol
Solución estándar B: 0,2 mg/mL de ER Kaempferol USP
en metanol
Solución estándar C: 0,05 mg/mL de ER lsorhamnetina
USP en metanol
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad del polvo
pesada con exactitud, equivalente a aproximadamente
USP 37
50 mg de glicósidos de flavonol, a un matraz volumé-
trico de 50 ml. Agregar 20 ml de metano! y someter a
ultrasonido durante 3 minutos. Agregar 20 ml de ácido
clorhídrico 1,5 N y someter a ultrasonido nuevamente
durante 1 O minutos. Dejar que se enfríe a temperatura
ambiente y diluir con metanol a volumen. Centrifugar y
transferir una porción del sobrenadante transparente a
un vial de vidrio con protección actínica y tapa de
goma. Calentar en un baño de vapor durante 25 minu-
tos y enfriar a temperatura ambiente en un baño de
hielo.
Sistema cromato$1ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución estándar C
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada-
mente 1,0; 1,8 y 2,0, respectivamente; Solución están-
dar A, Solución estándar B y Solución estándar C]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio-
nes repetidas, Solución estándar A.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Calcular la cantidad, en mg, de cada glicósido de flavo-
nol en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x F x 50
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
r5 = área del pico del analito pertinente de la
Solución estándar A, Solución estándar B o
Solución estándar C
Cs = concentración del analito pertinente en la
Solución estándar A, Solución estándar B o
Solución estándar C (mg/ml)
F = factor de la masa molecular media para
convertir cada analito en glicósido de
flavonol con una masa molecular media de
756,7: 2,504 para quercetina, 2,437 para
isorhamnetina y 2,588 para kaempferol
Calcular la cantidad total, en mg, de glicósidos de
flavonol en la porción de Tabletas tomada, sumando
las cantidades individuales calculadas. Calcular la
cantidad total, en mg, de glicósidos de flavonol por
Tableta y el porcentaje de glicósidos de flavonol en la
cantidad declarada de Extracto en Polvo de Ginkgo.
Criterios de aceptación: 22,0%-27,0% de glicósidos
de flavonol , Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
• CONTENIDO DE LACTONAS TERPENICAS
Disolvente: Metanol y agua (9:1)
Solución amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di-
básico de sodio y 8,25 g de fosfato monobásico de po-
tasio en 1000 ml de agua, y ajustar a un pH de 5,8.
Diluyente: Metanol y agua (1 :1)
Solución A: Agua
Solución B: Metano!
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
lmin) (%) 1°/o)
o 75 25
23 52 48
Suplementos Dietéticos / Ginkgo 6001
Tabla 1 (Continuauon)
~---------¡·
~-~~~~º ----~---
Solución A Solución B
__ _(°I<>}_ __ - (%)
28 52 48
30 25 75
35 10 90
40 75 25
50 75 25
Soluciones estándar: Usando el contenido declarado
de lactonas terpénicas individuales, preparar cinco solu-
ciones del ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP en
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 µg/ml para
cada una de las lactonas terpénicas pertinentes. Si fuera
necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa-
sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Tabletas. Transferir una canti-
dad del polvo pesada con exactitud, equivalente a
aproximadamente 1 20 mg de Extracto en Polvo de
Ginkgo, a un tubo de centrífuga de vidrio de 30 ml
con tapa y junta de PTFE. Agregar 1 0,0 ml de Disol-
vente, sellar el tubo y mezclar bien en un mezclador de
vórtice. Calentar en un baño de agua a 90º durante 30
minutos. Mezclar la suspensión caliente en un mezcla-
dor de vórtice y repetir el calentamiento a 90º durante
30 minutos. Enfriar, centrifugar, transferir el sobrena-
dante a un matraz y devolver el residuo al tubo de
vidrio. Repetir la extracción dos veces más, usando cada
vez 10,0 ml de Disolvente. Combinar los extractos, de-
jar que se enfríen a temperatura ambiente y evaporar
hasta sequedad al vacío en un baño de agua mante-
nido a 50º. Agregar 1 O ml de Solución amortiguadora al
residuo y someter a ultrasonido durante 5 minutos.
Transferir cuantitativamente la solución a un tubo cro-
matográfico de vidrio relleno de tierra silícea para cro-
matografía capaz de contener 20 ml de fase acuosa. 1
Enjuagar el vaso de precipitados con dos porciones de
5 ml de Solución amortiguadora y transferir los lavados a
la columna. [NOTA-No exceder de 20 ml de fase
acuosa total ni la capacidad de contención del tubo
cromatográfico.] Dejar que la Solución amortiguadora se
absorba en la columna. Después de 15 minutos, eluir la
columna con 100 ml de acetato de etilo, recoger la
solución de acetato de etilo y evaporar hasta sequedad
al vacío en un baño de agua mantenido a 50º. Disolver
el residuo en 20,0 ml de Diluyente.
Sistema cromato$1ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersión de luz. [NOTA-
Los parámetros del detector se ajustan para lograr la
mejor relación señal-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Soluciones estándar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromato$1ramas: Los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
tonas Terpénicas de Ginkgo USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de bilobálido en inyeccio-
nes repetidas.
-El_m_a-te-ri-al ade¿uado disponible comercialmente es Extrelut "; NT 20 de E
-1
Merck Science.
6002 Ginkgo / Suplementos Dietéticos
Coeficiente de correlación: No menos de 0,995 para
la línea de regresión, según se determina en el
Análisis.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
los analitos pertinentes en el cr?,matograma de las So-
luciones estandar por comparac1on con el cromato-
grama d~ referencia _provisto con el lote d~ ER L~cto­
nas Terpenicas de Ginkgo USP u~ado. Medir 1.as areas
de los picos de los anal1tos. Graf1car los logaritmos de
las respuestas de los picos pertinentes en función de
los logaritmos de las con.centraci<?nes, en mg/m.L, de
cada analito de las Soluoones estandar y determinar la
línea de regresión usando un análisis de cuadrados
mínimos.
A partir de las gráficas, determinar la concentración, C,
en mg/mL, del analito pertinente en la Solución mues-
tra.
Calcular por separado I~~ cantidades, en mg, de, ~ilobá­
lido (C15H18 0s), ginkgohdo A (C20H24Ü9), g1nkgoh~o B
(C20H24Ü10) y ginkgólido C (C20H24Ü11) en la porción
de Tabletas tomada:
Resultado =c X 20
C = concentración del analito pertinente en la
Solución muestra (mg/mL)
Calcular la cantidad total de lactonas terpénicas. en la
porción de Tabletas tomada, sumando las cantidades
calculadas de cada analito. Calcular la cantidad total,
en mg, de lactonas terpénic;_a~ por Tableta Y. el
porcentaje de lactonas terperncas en la cantidad
declarada de Extracto en Polvo de Ginkgo.
Criterios de aceptación: 5,4%-12,0% de lactonas ter-
pénicas, que consisten en bilobálido, ginkgólido A,
ginkgólido B y ginkgólido C.
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos pe Disolución.
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 45 m_in , . .
Soluciones estandar: Proceder segun se indica en la
prueba de Contenido de Lactonas Terpénicas.
Solución muestra: Combinar porciones de 25 mL de la
solución en análisis de cada uno de los seis vasos de
disolución en un embudo de separación. Extraer con
cuatro porciones de 50 mL de acetato de etilo. Combi-
nar los extractos y evaporar al vacío hasta sequedad.
Disolver el residuo sometiendo a ultrasonido en 5,0 mL
de una mezcla de agua y metano! (1: 1).
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Lactonas Terpénicas para determinar la concen-
tración, C, en mg/mL, de ginkgólido B en la Solución
muestra.
Calcular la cantidad disuelta de ginkgólido B como
porcentaje:
Resultado = 5000C/3G
C = concentración de ginkgólido B en la Solución
muestra (mg/mL)
G = contenido de ginkgólido B, según se
determinó en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpénicas (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de gink-
gólidq B
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g.
USP 37
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES .
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominació~ oficial, el artículo
usado para ¡reparar las Tabletas. Etiquetar las Tabletas
indicando e contenido, en mg, de Extracto en Polvo de
Gil]kgo por Tableta.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaempferol USP
ER Quercetina USP
Extracto en Polvo de Ginkgo
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Ginkgo se prepara a partir de las
hojas desecadas y trituradas de Ginkgo por extracción con
una mezcla de acetona-agua u otros disolventes adecua-
dos. La relación entre el material vegetal crudo y el Ex-
tracto en Polvo está entre 35:1 y 67:1. Contiene no me-
nos de 22,0% y no más de 27,0% de flavonoídes,
calculados como glicósídos de flavonol, con una m~sa
molecular medía de 756,7, con respecto a la materia seca.
Contiene no menos de 5,4% y no más de 12,0% de lac-
tonas terpénicas, constituidas por 2,6%-5,8% ~e b~IC?bá­
lido (C1sH1sOs); y 2,8%-6,2% de la suma de gmkgohdo A
(C20H24Q9), ginkgólido B (C20H24Ü10) y ginkgólido C
(C20H24Ü11), con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Prueba de flavonoides
Solución estándar: Una solucÍÓIJ de 0,6 mg/mL de ER
Rutina USP y 0,2 mg/mL de ER Acido Clorogénico USP
y de ER Quercetina USP en metanol
Solución muestra: 5 mg/mL de Extracto en Polvo en
una mezcla de metanol y agua ( 4: 1)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volume!1 de aplicación: ~ µL , . , . .
Fase movil: Acetato de etilo, agua, ac1do form1co anhi-
dro y ,ácido acético glacial (100:26:11:~1). .
Solucion reveladora 1: 5 mg/mL de d1fernlborinato de
2-amínoetílo en metanol
Solución reveladora 2: 50 mg/mL de políetilenglícol
400 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Antes de desarrollar los cromatogramas, saturar la cá-
mara durante 20 minutos con Fase móvil. Registrar la
temperatura y humedad en el laborato.ri?. Sí la hu-
medad relativa excede de 50%, acond1c1onar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
35%, usando un dispositivo adecuado. Aplicar las
muestras, por separado y en bandas, a una placa
para cromatografía en capa delgada adecuada (ver
Cromatografía (621 )) y dejar que se sequen las ban-
das. Desarrollar la placa en un recorrido de 6 cm,
retirar la placa de fa cámara cromatográfica y secar
en un horno de aire circulante a 105º durante 5
minutos. Rociar inmediatamente la placa caliente
con Solución reveladora 7, luego con Solución revela-
USP 37
dora 2, secar y observar bajo luz UV de longitud de
onda larga.
Criterios de aceptación: La Solución estándar presenta
en su parte inferior, con valores Rr crecientes, una zona
fluorescente de color marrón amarillento debida a ru-
tina (Rr de 0,28), una zona fluorescente de color azul
claro debida a ácido clorogénico (Rr de O, 36) y una
zona fluorescente de color amarillo debida a querce-
tina (Rr de O, 92). La Solución muestra presenta una
zona fluorescente de color marrón amarillento, una
zona fluorescente de color azul claro y una zona fluo-
rescente de color marrón amarillento a valores Rr simi-
lares a los de rutina, ácido clorogénico y quercetina,
respectivamente, en la Solución estándar. Se detectan
zonas adicionales de color amarillento a verde amari-
llento debidas a flavonoides detectados en el cromato-
grama de la Solución muestra. Éstas incluyen una zona
por debajo de la zona de rutina, dos zonas entre las
zonas de rutina y ácido clorogénico, y dos zonas por
encima de la zona de ácido clorogénico. Se pueden
detectar otras zonas en el cromatograma de la Solución
muestra.
• B. HPLC: En la prueba de Contenido de Glicósidos de Fla-
vonol, los tiempos de retención de los picos de querce-
tina, isorhamnetina y kaempferol de la Solución muestra
corresponden a los de la Solución estándar. En el croma-
tograma de la Solución muestra, la relación entre el pico
de kaempferol y el de quercetina es no menos de 0,7; y
el pico de isorhamnetina es no menos de O, 1 veces el
tamaño del pico de quercetina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GLICÓSIDOS DE FLAVONOL
Disolvente de extracción: Alcohol, ácido clorhídrico y
agua (25:4:1 O)
Fase móvil: Metano!, agua y ácido fosfórico
(100:100:1)
Solución estándar A: O, 125 mg/mL de ER Quercetina
USP en metanol
Solución estándar B: O, 125 mg/mL de ER Kaempferol
USP en metanol
Solución estándar C: 0,03 mg/mL de ER lsorhamnetina
USP en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 0,3 g
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz de 250 mL equipado con un condensador de re-
flujo. Agregar 78 mL de Disolvente de extracción y some-
ter a reflujo en un baño de agua caliente durante 135
minutos. [NOTA-La solución se tornará de color rojo
intenso. El color de la solución no es una indicación
definitiva de la totalidad de la reacción.] Dejar que se
enfríe a temperatura ambiente. Transferir a un matraz
volumétrico de 1 00 mL, diluir con agua a volumen y
mezclar.
Sistema cromato!:)ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución estándar C
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada-
mente 1,0; 1,8 y 2,0 respectivamente; Solución están-
dar A, Solución estándar B y Solución estándar C]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio-
nes repetidas, Solución estándar A.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Suplementos Dietéticos / Ginkgo 6003
Calcular el porcentaje de cada glicósido de flavonol en
la porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C/VV) x F x 1O
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = área del pico del analito pertinente de la
Solución estándar A, Solución estándar B o
Solución estándar C
Cs = concentración del analito pertinente en la
Solución estándar A, Solución estándar B o
Solución estándar C (mg/mL)
W = peso de Extracto en Polvo tomado para
preparar la Solución muestra (g)
F = factor de la masa molecular media para
convertir cada analito en glicósido de
flavonol con una masa molecular media de
756,7: 2,504 para quercetina; 2,437 para
isorhamnetina y 2,588 para kaempferol
Calcular el porcentaje total de glicósidos de flavonol,
sumando los porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptación: 22,0%-27,0% de flavonoides,
calculados como glicósidos de flavonol con una masa
molecular media de 756,7, con respecto a la materia
seca
• CONTENIDO DE LACTONAS TERPÉNICAS
Disolvente: Metanol y agua (9:1)
Solución amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di-
básico de sodio y 8,25 g de fosfato monobásico de po-
tasio en 1 000 mL de agua y ajustar a un pH de 5,8.
Diluyente: Metano! y agua (1 :1)
Solución A: Agua
Solución B: Metanol
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
ímin) (O/o\ (O/o)
o 75 25
23 52 48
28 52 48
30 25 75
35 10 90
40 75 25
50 75 25
Soluciones estándar: Usando el contenido declarado
de lactonas terpénicas individuales, preparar cinco solu-
ciones del ER Lactonas Terpénicas de Ginkgo USP en
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 µg/mL para
cada una de las lactonas terpénicas pertinentes. Si fuera
necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa-
sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 120 mg
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un vaso
de precipitados de 25 mL. Agregar 1 O mL de Solución
amortiguadora al residuo y someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos. Transferir cuantitativamente la solución
a un tubo cromatográfico de vidrio relleno de tierra silí-
cea para cromatografía capaz de contener 20 mL de
fase acuosa. 1 Enjuagar el vaso de precipitados con dos
porciones de 5 mL de Solución amortiguadora y transfe-
rir los lavados a la columna. [NOTA-No exceder de
20 mL de fase acuosa total ni la capacidad de conten-
ción del tubo cromatográfico.] Dejar que la Solución
amortiguadora se absorba en la columna. Después de
15 minutos, eluir la columna con 100 mL de acetato de
etilo, recoger la solución de acetato de etilo y evaporar
1 El material adecuado disponible comercialmente es Extrelut:ri NT 20 de E
Merck Science.
 6004 Ginkgo / Suplementos Dietéticos USP 37

h?sta sequed~d al vacío e~ un baño de agua mante- PRUEBAS ESPECÍFICAS

nido a 50º. Disolver el residuo en 20,0 ml de Diluyente. • LÍMITE DE ÁCIDOS GINKGÓLICOS
Sistema cromato~ráfico Soluc!?n A: i\c!do fosf?r!co al 0,01 % en agua
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) Soluc1on B: ACldo fosfonco al O 01 % en acetonitrilo
Modo: HPLC Fase móvil: Ver la Tabla 2. '
Detector: Evaporativo de dispersión de luz. [NOTA-
Los parámetros del detector se ajustan para lograr la Tabla 2
mejor relación señal-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.] Tiempo Solución A Solución B
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 Cmln\ (%\ (%\
Temperatura de la columna: 25 ± 1º o 25 75
Velocidad de flujo: 1 ml/min 6 10 90
Volumen de inyección: 15 µL 7 10 90
Aptitud del sistema 8 25 75
Muestras: Soluciones estándar
Requisitos de aptitud 10 25 75
Similitud de los cromato~ramas: Los cromatogra- Solución estándar: Disolver ER Ácidos Ginkgólicos USP
mas de las Soluciones estandar son similares al croma- en metano! y diluir con agua, si fuera necesario, hasta
tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac- o~ten~~ una concentración de 0,25 µg/ml de ácidos
tonas Terpénicas de Ginkgo USP usado. ginkgol1cos, calculados como la suma de ácidos congé-
Desviación estándar relativa: No más de 2 0% de- neres; ácido ginkgólico e 13:0, ácido ginkgólico c 15:1
terminada a partir del pico de bilobálido en 'iny~ccio­ y ácido ginkgólico c 17:1.
nes repetidas. Solución muestra: Transferir 0,5 g de Extracto en Polvo
Coeficiente de correlación: No menos de a un matraz volumétrico de 1 O ml, agregar 8 ml de
0,995 para la línea de regresión, según se determina metano! para disolver y diluir con agua a volumen.
en el Análisis. Sistema cromato~ráfico
Análisis (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra Modo: HPLC
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de Detector: UV 21 O nm
los analitos pertinentes en los cromatogramas de las Columna: 4,6 mm x 5 cm; relleno L7 desactivado para
Soluciones estándar por comparación con el cromato-
bases
gram_a de referencia del lot~ de E~ Lactonas Terpénicas Temperatura de la columna: 35º
de Ginkgo USP usado. Medir las areas de los picos de Velocidad de flujo: 1 ml/min
los anali~os. Graf!car los logaritn:i9s de las respuestas Volumen de inyección: 100 µL
de los picos pert1~entes en func1on de los logaritmos Aptitud del sistema
de las concentraciones, en mg/ml, de cada analito de Muestra: Solución estándar
las Soluciones estándar y determinar la línea de regre- Requisitos de aptitud
sión, usando un análisis de cuadrados mínimos. Similit1;1d de l<?s ~romatogramas: El cromatograma
A partir de las gráfic~s, dete~mine la concentración, C, obte~1do es similar al crom,atograma de referencia
en mg/ml, del anal1to pertinente en la Solución mues- provisto con el lote de ER Acidos Ginkgólicos USP
tra.
usado.
Calcular por separado los porcentajes de bilobálido Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
(C1sH180s), ginkgólido A (C20H24Ü9), ginkgólido B ácido ginkgólico c 15:1
(C20H24Ü10) y ginkgólido C (C20H24Ü11) en la porción Desv.iación ~s~ánd~r re~~tiva: No más. de 5,0% para
de Extracto en Polvo tomada: el pico de aCldO ginkgohco C 15:1 en inyecciones
Resultado = (C/VV) x 2000 repetidas
Análisis
C = concentración del analito pertinente en la Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Solución muestra (mg/ml) [NOTA-ldentifi~?r los picos de los analitos pertinentes
W = peso de
Extracto en Polvo tomado para por comparac1qn con el cromatograma de referencia
preparar la Solución muestra (mg) del lote de ER Acidos Ginkgólicos USP usado. Si se
Calcular el porcentaje total de lactonas terpénicas en la observa el deterioro de las formas de los picos, lavar la
porción de Extracto en Polvo tomada sumando los columna usando una mezcla de metano! y agua (9: 1)
porcentajes calculados para cada analito. durante 30 minutos.]
Criterios de aceptación Calcular la concentración, en µg/g, de cada ácido gink-
Lactonas terpénicas totales: 5,4%-12 0% gólico en la porción de Extracto en Polvo tomada:
Bilobálido: 2,6%-5,8% '
Suma de ginkgólido A, ginkgólido B y ginkgólido C: Resultado = (ru! rs) x (Cs/ V1/) x P x 1 O
2,8%-6,2% ru = área del pico del analito pertinente de la
CONTAMINANTES Solución muestra
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas rs = área del pico del analito pertinente de la
(561): Cumple con los requisitos. Solución estándar
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 µg/g Cs = concentración de ER Ácidos Ginkgólicos USP
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- en la Solución estándar (mg/ml)
tal de microorganismos ~erobios no excede de 104 ufc/g, W = peso del Extracto en Polvo tomado para
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y preparar la Solución muestra (mg)
levaduras no excede de 10 3 ufc/g . P = cont~nido del ácido ginkgólico pertinente en
• AUSENCIA DE MIC~~ORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum- ER Acidos Ginkgólicos USP (µg/g)
ple coi: los requ1s1tos de las pruebas para determinar la Calcular la cantidad totaf de ácidos ginkgólicos,
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli. sumando los contenidos individuales.
USP 37
<;:riterios de aceptación: No más de 5 µg/g
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto en Polvo
Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 5.0%
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Disolven-
tes Residuales en Extractos Botánicos (565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Proteger de la hume-
dad. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se preparó el artículo. La etiqueta tam-
bién indica el contenido de glicósidos de flavonol y de
lactonas terpénicas, el disolvente de extracción usado
para la preparación y la relación entre el material vegetal
cru,do inicial y el Extracto en Polvo.
• ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Clorogénico USP
ER ~actonas Terpénicas de Ginkgo USP
ER Acidos Ginkgólicos USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaempferol USP
ER Quercetina USP
ER Rutina USP
Ginseng Americano
DEFINICIÓN
El Ginseng Americano consiste en las raíces secas de Panax
quinquefolius L. (Fam. Araliaceae). Contiene no menos de
4,0% de ginsenósidos totales, calculados con respecto a la
materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metanol
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP en metano!
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Americano reducido a polvo fino a un ma-
traz volumétrico de 25 mL equipado con un condensa-
dor de reflujo. Agregar 10,0 mL de una mezcla de me-
tano! y agua (7:13), y calentar bajo reflujo durante 15
minutos. Enfriar, filtrar y diluir el filtrado con metano!
hasta 10,0 ml.
Adsorbente: Capa de gel de sílice de 0,25 mm, por lo
regular de 20 cm de longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil A: Cloroformo, metano! y agua (13:7:2).
Usar la fase inferior.
Fase móvil B: Alcohol butílico, acetato de etilo y agua
(4:1 :5). Usar la fase superior.
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehído
en 1O mL de ácido acético glacial, agregar 85 mL de
metano!, mezclar y agregar cuidadosamente 5 mL de
ácido sulfúrico.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar en una cámara que contenga Fase móvil A
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
10,5 cm a partir del origen. Retirar las placas y dejar
que se sequen. Girar las placas 90º y desarrollar en
una cámara que contenga Fase móvil B hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido 1 0,5 cm a partir
del origen. Retirar las placas y dejar que se sequen.
Suplementos Dietéticos / Ginseng 6005
Rociar con Solución reveladora. Calentar las placas a
105º-11 O' durante 1O minutos y observar.
Requisitos de aptitud: El orden, de arriba hacia abajo,
de ginsenósidos en las placas cromatográficas es: Rg2 (a
la izquierda) y Rg1 (a la derecha), Rf, Re, Rd, Re, Rb2 (a
la izquierda) y Rb1 (a la derecha) y Ro. Los ginsenósidos
Rg2, Rg1, Rf, Re y Rd se encuentran en la mitad superior
de las placas; los ginsenósidos remanentes se encuen-
tran en la mitad inferior después de cromatografiar con
la Fase móvil B. La Solución estándar A no presenta una
mancha para ginsenósido Rf. La Solución estándar B pre-
senta una mancha para ginsenósido Rf.
Criterios de aceptación: Las manchas de la Solución
muestra corresponden a las de la Solución estándar A.
• B. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósidos
Rg1, Re, Rb,, Rb2, Rc2 y Rd de la Solución muestra corres-
ponden a los de la Solución estándar A, se_gún se obtie-
nen en la prueba de Contenido de Ginsenosidos. El co-
ciente de respuesta entre los picos de ginsenósido Rb2 y
Rb1 es menos de 0,4, y el cociente de respuesta entre los
picos de ginsenósido Rg, y Rb1 es menos de 0,3. El cro-
matograma no presenta un pico significativo al tiempo
de retención correspondiente al de ginsenósido Rf de la
Solución estándar B, según se obtiene en la prueba de
Contenido de Ginsenósidos.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS
Solución A: Agua
Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase móvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o 100
64 5 76 24
77 76 24
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
Solución estándar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Americano USP, equivalente
a aproximadamente 2 mg de ginsenósido Rb1, a un re-
cipiente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solución estándar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP, equivalente a
aproximadamente 2 mg de ginsenósido Rg1, a un reci-
piente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solución muestra: Reducir 100 g de Ginseng Ameri-
cano a polvo y transferir aproximadamente 1,0 g del
polvo, pesados con exactitud, a un matraz de fondo
redondo de 100 mL equipado con un condensador de
reflujo. Agregar 50 mL de Diluyente y unos pocos gra-
nos de piedra pómez, calentar a ebullición en un baño
de agua bajo reflujo durante 1 hora, enfriar y filtrar.
Lavar el matraz y el residuo con 20 mL de Diluyente y
pasar a través del mismo filtro. Combinar los filtrados y
evaporar en un evaporador rotatorio a 50º hasta seque-
dad. Disolver el residuo en 10,0 mL de Diluyente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
µm
6006 Ginseng / Suplementos Dietéticos
Temperatura de la columna: 25"
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1O ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar B
Requisitos de aptitud:
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiá-
tico USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada para la suma de las áreas de los picos de
los 6 ginsenósidos principales, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los ginsenósidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd en
las Soluciones estándar y la Solución muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de Re-
ferencia provisto con el ER Extracto en Polvo de Gin-
seng Americano USP y medir las respuestas de los
picos.
Calcular los porcentajes de ginsenósidos individuales en
la porción de Ginseng Americano tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de ginsenósido Rg1, Re,
Rb,, Re, Rb2 o Rd de la Solución muestra
(5 = respuesta del pico de ginsenósido Rg1, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solución estándar
correspondiente
Cs = concentración de ginsenósido Rg1, Re, Rb1, Re,
Rb 2 o Rd en la Solución estándar
correspondiente (mg/ml)
V = volumen de Solución muestra (mL)
w = peso de Ginseng Americano tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje de ginsenósidos totales en la
porción de Ginseng Americano tomada sumando los
porcentajes individuales.
Criterios de aceptación: No menos de 4,0% de ginse-
nósidos totales con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 100 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Raíces fusiformes o cilíndricas, en oca-
siones con ramificaciones, por lo regular de 1-1 O cm y
en ocasiones de hasta 20 cm de largo y de hasta
2,5 cm de diámetro en la corona, con una o más cica-
trices de inserción del tallo. Coloración externa amarilla
pálida a dorada, textura áspera, con anillos horizontales
prominentes y finos rebordes longitudinales como resul-
tado del secado. Presenta cicatrices de inserción de raí-
ces o raicillas finas. Cuando se presenta una base de
tallo, las escamas son delgadas y se desprenden (a dife-
rencia de P. ginseng, en el que las escamas en la base
del tallo son carnosas y persistentes). La fractura es
corta; la superficie fracturada es de color blanco a mar-
USP 37
fil, con un olor aromático distintivo y anillos de canales
secretores presentes en el floema secundario.
Histología
Sección transversal de la raíz: Presenta múltiples ca-
pas de células suberosas de paredes delgadas. El
floema secundario se caracteriza por lagunas de aire
conspicuas; parénquima de almacenamiento que con-
tiene almidón en abundancia; unos pocos elementos
cribosos que se encuentran en pequeños grupos; y
anillos de canales secretores esquizógenos. Cada canal
secretor está revestido internamente con 6-8 células
epiteliales que carecen de almidón. El xilema se carac-
teriza por un parénquima de almacenamiento que
contiene almidón en abundancia y unos pocos ele-
mentos traqueales compuestos por traqueidas no ligni-
ficadas y vasos reticulados o espiralados ligeramente
lignificados que carecen de canales secretores y que se
encuentran aislados o en grupos pequeños. En ocasio-
nes se presentan cristales en drusas dentro de las célu-
las parenquimáticas vasculares. El xilema primario
diarco o triarco se encuentra en el centro de la raíz.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g del artículo, redu-
cido a polvo fino, a 105º durante 2 horas: pierde no más
de ) 0,0% de su peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar protegiendo
del calor.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la J;>lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
Ginseng Americano en Polvo
DEFINICIÓN
El Ginseng Americano en Polvo es Ginseng Americano redu-
cido a polvo fino o muy fino. Contiene no menos de
4,0% de ginsenósidos totales, calculado con respecto a la
materia seca .
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano!
Solución estándar B: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP en metano!
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Americano en Polvo a un matraz de 25 ml
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y agua (7:13) y
calentar bajo reflujo durante 15 minutos. Enfriar, filtrar
y diluir el filtrado con metano! hasta 10,0 ml.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, típicamente de 20 cm de largo (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil A: Cloroformo, metano! y agua (13:7:2).
Usar la fase inferior.
Fase móvil B: Alcohol butílico, acetato de etilo y agua
(4:1 :5). Usar la fase superior.
Solución reveladora: Disolver 0,5 ml de anisaldehído
en 1O ml de ácido acético glacial, agregar 85 ml de
USP 37
metanol, mezclar, y agregar con cuidado, 5 mL de
ácido sulfúrico.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar en una cámara que contenga Fase móvil A,
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
1 0,5 cm desde el origen. Retirar la placas y dejar que
se sequen. Girar las placas 90º y desarrollar en una
cámara que contenga Fase móvil B, hasta que el frente
de la fase móvil haya recorrido 10,5 cm desde el ori-
gen. Retirar la placas y dejar que se sequen. Rociar con
Solución reveladora. Calentar las placas a 105-11 Oº du-
rante 1 O minutos y observar.
Requisitos de aptitud: El orden de ginsenósidos en las
placas cromatográficas, desde arriba hacia abajo, es: Rg 2
(a la izquierda) y Rg, (a la derecha), Rf, Re, Rd, Re, Rb2
(a la izquierda) y Rb, (a la derecha), y Ro. Ginsenósidos
Rg 2, Rg 1, Rf, Re y Rd se encuentran en la mitad superior
de las placas; el resto de los ginsenósidos se encuentran
en la mitad inferior después de cromatografiar con Fase
móvil B. La Solución estándar A no muestra ninguna
mancha para ginsenósido Rf. La Solución estándar B pre-
senta una mancha para ginsenósido Rf.
Criterios de aceptación: Las manchas de la Solución
muestra corresponden a las de la Solución estándar A.
• B. Los tiempos de retención de los picos para ginsenósi-
dos Rg,, Re, Rb,, Rb2, Rc2 y Rd de la Solución muestra
corresponden a los de la Solución estándar A, según se
obtienen en la prueba de Contenido de Ginsenósidos. El
cociente de respuesta entre los picos para ginsenósidos
Rb2 y Rb1 es menor de 0,4 y el cociente de respuesta
entre los picos para ginsenosidos Rg, y Rb, es menor de
0,3. El cromatograma no muestra ningún pico principal
en el tiempo de retención correspondiente al del ginse-
nósido Rf de la Solución estándar 8, según se obtienen en
la prueba de Contenido de Ginsenósidos.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS
Solución A: Agua
Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase móvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo
<min)
Solución A
(O/o)
Solución B
(%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o 100
64 5 76 24
77 76 24
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
Solución estándar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Americano USP equivalente
a aproximadamente 2 mg de ginsenósido Rb 1, a un re-
cipiente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solución estándar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP equivalente a
aproximadamente 2 mg de ginsenósido Rg1, a un reci-
piente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Americano en Polvo pesado con exactitud,
a un matraz de 100 mL, de fondo redondo equipado
con un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de Dilu-
yente y unos granos de piedra pómez, calentar a ebulli-
ción en un baño de agua bajo reflujo durante 1 hora,
enfriar y filtrar. Lavar el matraz y el residuo con 20 mL
de Diluyente y pasar a través del mismo filtro. Combinar
los filtrados y evaporar en un evaporador rotatorio a
Suplementos Dietéticos / Ginseng 6007
50' hasta sequedad. Disolver el residuo en 10,0 mL de
Diluyente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
µm
Temperatura de la columna: 25º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiá-
tico USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada para la suma de las áreas de los picos de
los 6 ginsenósidos principales en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar ginsenósidos Rg,, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd en las
Soluciones estándar y la Solución muestra, comparando
los cromatogramas con el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el ER Extracto en Polvo de Ginseng
Americano USP y medir las respuestas de los picos.
Calcular los porcentajes de ginsenósidos individuales en
la porción de Ginseng Americano en Polvo tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de ginsenósido Rg1, Re,
Rb,, Re, Rb2 o Rd de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de ginsenósido Rg,, Re,
Rb,, Re, Rb2 o Rd de la Solución estándar
correspondiente
= concentración de ginsenósido Rg,, Re, Rb,, Re,
Rb2 o Rd en la Solución estándar
correspondiente (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
w = peso de Ginseng Americano en Polvo tomado
para preparar la Solución muestra (mg)
Calcular el porcentaje de ginsenósidos totales en la
porción de Ginseng Americano en Polvo tomada
sumando los porcentajes individuales.
Criterios de aceptación: No menos de 4,0% de ginse-
nósidos totales con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón ama-
rillento pálido con un olor ligeramente aromático. Células
parenquimáticas ovales llenas de gránulos de almidón y
cristales drusas de oxalato de calcio aislados. Vasos secre-
tores de color marrón amarillento con contenido marrón
amarillento.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g, reducido a polvo
fino, a 1 05º durante 2 horas: pierde no más de 1 0,0%
de ;;u peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8%
6008 Ginseng /Suplementos Dietéticos USP 37

REQUISITOS ADICIONALES obtienen en la prueba de Contenido de Ginsenósidos. El

• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- cociente de respuesta entre los picos de ginsenósido Rb2
permeables. Proteger de la luz, la humedad y el calor. y Rb1 es menos de 0,4, y el cociente de respuesta entre
• ETIQUETADO: La etiqueta declara el nombre científico en los picos de ginsenósido Rg1 y Rb 1 es menos de 0,3. La
latín, y después de la denominación oficial, las partes de Solución muestra no presenta un pico significativo al
la ¡;ilanta contenidas en el artículo. tiempo de retención correspondiente al de ginsenósido
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Rf de la Solución estándar B, según se obtiene en la
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP prueba de Contenido de Ginsenósidos.
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS
Solución A: Agua
Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Extracto en Polvo de Ginseng Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Americano Tabla 1
DEFINICIÓN Tiempo Solución A Solución B
El Extracto en Polvo de Ginseng Americano se prepara a {min) (%) (%)
partir de las raíces secas reducidas a polvo de Panax quin- o 76 24
quefolius L. (Fam. Araliaceae) usando disolventes adecua- 12 76 24
dos y se seca hasta obtener un polvo. Contiene no menos 28 65 35
de 10,0% de ginsenósidos totales, calculados con res-
pecto a la materia anhidra. La relación entre el material 51 5 56 5 43 5
vegetal crudo inicial y el Extracto en Polvo de Ginseng 52 5 o 100
Americano está entre 3:1 y 7:1. 64 5 76 24
77 76 24
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
DELGADA Solución estándar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
Solución estándar A: 20 mg/mL de ER Extracto en tracto en Polvo de Ginseng Americano USP, equivalente
Polvo de Ginseng Americano USP en metanol a aproximadamente 2 mg de ginsenósido Rb1, a un re-
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto en cipiente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Polvo de Ginseng Asiático USP en metanol Solución estándar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
Solución muestra: 20 mg/mL en metanol tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP, equivalente a
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía aproximadamente 2 mg de ginsenósido Rg1, a un reci-
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla- piente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
cas para TLC) Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
Volumen de aplicación: 20 µL en Polvo de Ginseng Americano, equivalente a aproxi-
Fase móvil A: Cloroformo, metanol y agua (13:7:2). madamente 5 mg de ginsenósidos, a un recipiente ade-
Usar la fase inferior. cuado. Disolver en 10,0 mL de Diluyente, sometiendo a
Fase móvil B: Alcohol butílico, acetato de etilo y agua ultrasonido durante 1 O minutos y filtrar.
(4:1 :5). Usar la fase superior. Sistema cromato9ráfico
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehído (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
en 1O mL de ácido acético glacial, agregar 85 mL de Modo: HPLC
metanol, mezclar y agregar cuidadosamente 5 mL de Detector: UV 203 nm
ácido sulfúrico. Columnas
Análisis Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
Solución muestra µm
Desarrollar en una cámara que contenga Fase móvil A Temperatura de la columna: 25º
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
10,5 cm a partir del origen. Retirar las placas y dejar Volumen de inyección: 1 O µL
que se sequen. Girar las placas 90º y desarrollar en Aptitud del sistema
una cámara que contenga Fase móvil B hasta que el Muestra: Solución estándar B
frente de la fase móvil haya recorrido 10,5 cm a partir Requisitos de aptitud:
del origen. Retirar las placas y dejar que se sequen. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Rociar con Solución reveladora. Calentar las placas a es similar al Cromatograma de Referencia provisto
105º-11 Oº durante 1 O minutos y observar. con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiá-
Requisitos de aptitud: El orden, de arriba hacia abajo, tico USP usado.
de ginsenósidos en las placas cromatográficas es: Rg2 (a Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
la izquierda) y Rg1 (a la derecha), Rf, Re, Rd, Re, Rb2 (a terminada para la suma de las áreas de los picos de
la izquierda) y Rb1 (a la derecha) y Ro. Los ginsenósidos los 6 ginsenósidos principales, en inyecciones
Rg2, Rg1, Rf, Re y Rd se encuentran en la mitad superior repetidas
de las placas; los ginsenósidos remanentes se encuen- Análisis
tran en la mitad inferior después de cromatografiar con Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
la Fase móvil B. La Solución estándar A no presenta una Solución muestra
mancha para ginsenósido Rf. La Solución estándar B pre- Identificar los ginsenósidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd en
senta una mancha para ginsenósido Rf. las Soluciones estándar y la Solución muestra compa-
Criterios de aceptación: Las manchas de la Solución rando los cromatogramas con el Cromatograma de Re-
muestra corresponden a las de la Solución estándar A. ferencia provisto con el ER Extracto en Polvo de Gin-
• B. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósi- seng Americano USP y medir las respuestas de los
dos Rg1, Re, Rb1, Rb2, Re y Rd de la Solución muestra picos.
corresponden a los de la Solución estándar A, según se
USP 37
Calcular los porcentajes de ginsenósidos individuales en
la porción de Extracto en Polvo de Ginseng Americano
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x P
ru = respuesta del pico de ginsenósidos Rg,, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solución muestra
= respuesta del pico de ginsenósidos Rg 1, Re,
Rb,, Re, Rb2 o Rd de la Solución estandar
correspondiente
Cs = concentración de ginsenósidos Rg,, Re, Rb,,
Re, Rb2 o Rd en la Solución estándar
correspondiente (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Ginseng Americano en la Solución muestra
(mg/mL)
p = cantidad declarada, como porcentaje, de cada
ginsenósido pertinente en el ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP
Calcular el porcentaje de ginsenósidos totales en la
porción de Extracto en Polvo de Ginseng Americano
tomada sumando los porcentajes individuales.
Criterios de aceptación: No menos de 1 0,0% de gin-
senósidos totales con respecto a la materia anhidra
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921 ): No más de
7,0%
• EXTRACTOS BOTÁNICOS, Residuo de Evaporación (565):
Cumple con los requisitos.
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método 11 (611): No más de
0,25%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artículo. Etiquetar indi-
cando el contenido de ginsenósidos totales, el disolvente
de extracción usado para la preparación y la relación en-
tre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en Polvo.
Cumple con los requisitos de etiquetado en Extractos Bo-
tánjcos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
Ginseng Americano, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Ginseng Americano contienen Extracto en
Polvo de Ginseng Americano. Las Cápsulas contienen no
menos de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad
declarada de Extracto, calculado como la suma de ginse-
nósidos Rg,, Re, Rb,, Re, Rb2 y Rd.
Suplementos Dietéticos / Ginseng 6009
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución muestra
Cápsulas de gelatina blanda: Transferir una porción
del contenido de las Cápsulas, equivalente a 100 mg
de Extracto en Polvo, a un embudo de separación que
contenga 30 mL de una mezcla de hexanos, metano! y
agua (20:15:1 O), disolver en esta mezcla, y recoger la
capa inferior. Lavar la capa superior con tres porciones
de 15 mL de una mezcla de metanol y agua (15:1 O), y
combinar los lavados con la capa inferior. Evaporar
hasta sequedad al vacío a 45º-50º. Disolver el residuo
en 5 mL de metano!.
Cápsulas de gelatina dura: Transferir una porción del
contenido de las Cápsulas, equivalente a 1 00 mg de
Extracto en Polvo, a un matraz Erlenmeyer. Extraer a
una temperatura de 55º con tres porciones de 20 mL
de una mezcla de metano! y agua (2:8). Evaporar los
extractos combinados hasta sequedad al vacío a
45º-50º. Disolver el residuo en 5 mL de metano!.
Solución estándar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano!
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP en metano!
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil A: La fase inferior de una mezcla de cloro-
formo, metanol y agua (13:7:2)
Fase móvil B: La fase superior de una mezcla de al-
cohol butílico, acetato de etilo y agua (4:1 :5)
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehído
en 1O mL de ácido acético glacial, agregar 85 mL de
metano!, mezclar, y agregar cuidadosamente 5 mL de
ácido sulfúrico, y mezclar.
Análisis
Muestras: Solución muestra, Solución estándar A y Solu-
ción estándar B
Desarrollar los cromatogramas en una cámara que
contenga Fase móvil A hasta que el frente de la fase
móvil haya recorrido 1 0,5 cm a partir del origen. Reti-
rar las placas de la cámara y dejar que se sequen.
Girar las placas 90º ( desarrollar en una cámara que
contenga Fase móvi B hasta que el frente de la fase
móvil haya recorrido 1 0,5 cm a partir del origen. Reti-
rar las placas de la cámara y dejar que se sequen.
Rociar con Solución reveladora. Calentar las placas a
1 05º-l l Oº durante 1 O minutos y observar. El orden
de los ginsenósidos en las placas, de arriba a abajo,
es: Rg2 (a la izquierda) y Rg, (a la derecha), Rf, Re,
Rd, Re, Rb2 (a la izquierda) y Rb, (a la derecha) y Ro.
Los ginsenósidos Rg2, Rg,, Rf, Re y Rd se encuentran
en las mitades superiores de las placas; los ginsenósi-
dos remanentes se encuentran en las mitades inferio-
res después de cromatografiar con la Fase móvil B.
Criterios de aceptación: La Solución estándar A no pre-
senta una mancha para ginsenósido Rf. La Solución es-
tándar B presenta una mancha para ginsenósido Rf. Las
manchas de la Solución muestra corresponden a las de
la Solución estándar A.
• B. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósidos
Rg 1, Re, Rb,, Rb2, Rc2 y Rd en el cromatograma de la
Solución muestra corresponden a los de la Solución están-
dar, según se obtienen en la prueba de Contenido de Gin-
senósidos. El cociente de respuesta entre los picos de Rb2
y Rb 1 es menos de 0,4; y el cociente de respuesta entre
los picos de Rg, y Rb, es menos de 0,3. La Solución mues-
tra no presenta un pico significativo al tiempo de reten-
ción correspondiente al de ginsenósido Rf que se observa
en la Solución de aptitud del sistema, según se obtienen
en la prueba de Contenido de Ginsenósidos.
601 O Ginseng /Suplementos Dietéticos USP 37

CONTENIDO , Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-

• CONTENIDO DE GINSENOSIDOS terminada para la suma de las áreas de los picos de
Método 1 los seis ginsenósidos principales en inyecciones
Diluyente: Agua y alcohol (3:2) repetidas
Solución A: Agua Análisis
Solución B: Acetonitrilo y agua (4: 1) Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. Identificar los ginsenósidos Rg1, Re, Rb 1, Re, Rb2 y Rd
en la Solución estándar y la Solución muestra compa-
Tiempo Solución A Solución B rando los cromatogramas con el Cromatograma de
(min) (O/o) lº/o) Referencia provisto con el ER Extracto en Polvo de
o 76 24
Ginseng Americano USP usado, y medir las respues-
tas de los picos.
12 76 24 Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsenósido per-
28 65 35 tinente (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porción del
51 5 56 5 43 5 contenido de Cápsulas tomada:
52 5 o 100
64 5 76 24 Resultado = O, 3 x (ru/rs) x Cs x P
77 76 24 ru área del pico de cada ginsenósido pertinente
=
de la Solución muestra
Solución estándar: Una solución de ER Extracto en rs = área del pico de cada ginsenósido pertinente
Polvo de Ginseng Americano USP en Diluyente que de la Solución estándar
contenga el equivalente de 0,2 mg/ml de ginsenósido Cs = concentración de ER Extracto en Polvo de
Rb1 Ginseng Americano USP en la Solución
Solución muestra (para Cápsulas de gelatina blanda): estándar (mg/ml)
Abrir no menos de 20 Cápsulas, transferir el contenido P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
a un recipiente adecuado, y mezclar hasta homogenei- ginsenósido pertinente en el lote de ER
zar. Transferir una porción, que se espera contenga Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
una cantidad de Extracto equivalente a 12 mg de gin- usado
senósidos, a un matraz adecuado con tapón. Agregar Calcular el contenido total de ginsenósidos, T, en
5,0 ml de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido mg, sumando las cantidades de los ginsenósidos
durante 5 minutos. Agregar 25,0 ml de una mezcla de individuales.
metanol y agua (4:6), y agitar durante 50 minutos en Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con
un agitador automático. Transferir 15,0 ml de la emul- respecto a la cantidad declarada:
sión obtenida a un tubo de centrífuga con tapón,
agregar 800 mg de cloruro de sodio, agitar durante 30 Resultado = T X (Awr/W) X (100/LE) X (100/L)
segundos, y centrifugar hasta obtener una fase .supe-
rior transparente. Diluir 1,0 ml de la fase superior con T = contenido total de ginsenósidos en la porción
4 ml de agua en un tubo adecuado y transferir la so- del contenido de Cápsulas tomada (mg)
lución a una columna que contenga 360 mg de re- Awr = peso promedio del contenido de Cápsulas
lleno L2 previamente tratado con 3,0 ml de metanol (mg/Cápsula)
seguidos de 8,0 ml de agua. [NOTA-Eluir lentamente W = peso de la porción del contenido de Cápsulas
en todas las etapas de elución, a una velocidad no tomada (mg)
mayor de 1 gota/segundo. No usar vacío.] Enjuagar el LE = contenido total de ginsenósidos, mg, en
tubo con 5 ml de agua, transferir a la columna te- 100 mg del Extracto usado para preparar las
niendo cuidado de eluir lentamente, y desechar el Cápsulas
eluato. Repetir la elución con 5 ml de una mezcla de L = cantidad de Extracto por Cápsula según la
metanol y agua (4:6), y desechar el eluato. Eluir los cantidad declarada (mg/Capsula)
ginsenósidos con 5,0 ml de metanol. Evaporar la solu- Método 2
ción bajo una corriente de nitrógeno a 40º (50 minu- Diluyente, Solución A, Solución B, Fase móvil,
tos) y disolver el residuo con 1,0 ml de una solución Solución de aptitud del sistema, Sistema
de acetonitrilo y agua (1 :4). cromatográfico y Requisitos de aptitud: Proceder
Solución de aptitud del sistema: 24 mg/ml de ER Ex- según se indica en Metodo 1.
tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP en Diluyente. Disolvente A: Fase superior de una mezcla que con-
Filtrar. siste en hexano, metanol y agua (4:3:2)
Sistema cromato~ráfico Disolvente B: Fase inferior de una mezcla que consiste
(ver Cromatografm (621 ), Aptitud del Sistema.) en hexano, metanol y agua (4:3:2)
Modo: HPLC Solución estándar: Una solución de ER Extracto en
Detector: UV 203 nm Polvo de Ginseng Americano USP en Diluyente que
Columna contenga el equivalente a 1 mg/ml de ginsenósido
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1 Rb1
Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de Solución muestra A (para Cápsulas de gelatina
3 µm blanda): Abrir no menos de 20 Cápsulas y transferir el
Temperatura de la columna: 25º contenido a un recipiente adecuado. Mezclar hasta ho-
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min mogeneizar y transferir una porción, que se espera
Volumen de inyección: 1 O µL contenga una cantidad de Extracto equivalente a
Aptitud del sistema 15 mg de ginsenósidos totales, a un matraz de 50 ml.
Muestra: Solución de aptitud del sistema (inyectar Agregar 10,0 ml de Disolvente A y someter a ultraso-
20 µL) nido durante 3-5 minutos a 25º-30º. Transferir la solu-
Requisitos de aptitud ción a un embudo de separación de 125 ml. Agregar
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma 1 O ml de Disolvente B al residuo y someter a ultraso-
de la Solución de aptitud del sistema es similar al Cro- nido durante 3-5 minutos a 25º-30º. Transferir la solu-
matograma de Referencia provisto con el lote de ER ción al mismo embudo de separación. Repetir el pro-
Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP usado. cedimiento anterior dos veces (el volumen total será
aproximadamente 60 ml). Agitar y luego dejar que las
USP 37
fases se separen. Recoger la fase inferior combinada en
un matraz de fondo redondo y lavar la fase superior
combinada dos veces con 1O mL de Disolvente B. Eva-
porar la fase inferior combinada hasta sequedad al va-
cío a 45º-50º. Transferir el residuo a un matraz volu-
métrico de 1O mL usando volúmenes pequeños de
metano! y diluir con metano! a volumen.
Solución muestra B (para Cápsulas de gelatina dura):
Pesar el contenido de no menos de 20 Cápsulas y
mezclar. Transferir una porción de la mezcla, que se
espera contenga una cantidad de Extracto equivalente
a 15 mg de ginsenósidos totales, a un matraz Erlenme-
yer. Agregar 15 mL de metanol y agitar hasta mezclar.
Someter a ultrasonido a 25º-30º durante 30 minutos.
Enfriar, pasar a través de papel de filtro, y regresar el
residuo al matraz Erlenmeyer. Agregar otros 15 mL de
metanol, someter a ultrasonido la mezcla a 25º-30º
durante 30 minutos, y filtrar. Lavar el residuo con tres
porciones de 15 mL de metano!. Evaporar los extractos
y el lavado combinados hasta sequedad al vacío a
45º-50º. Transferir el residuo a un matraz volumétrico
de 1O mL usando volúmenes pequeños de metanol y
diluir con metanol a volumen.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Identificar los ginsenósidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd
en la Solución estándar y la Solución muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de
Referencia provisto con el ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP, y medir las respuestas de
los picos.
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsenósido per-
tinente (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porción del
contenido de Cápsulas tomada:
Resultado = O, 1 x (ru/rs) x Cs x P
ru = área del pico de cada ginsenósido pertinente
de la Solución muestra
rs = área del pico de cada ginsenósido pertinente
de la Solución estándar
Cs = concentración
de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP en la Solución
estándar (mg/ml)
P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsenósido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
usado
Calcular el contenido total de ginsenósidos, T, en
mg, sumando las cantidades de los ginsenósidos
individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con
respecto a la cantidad declarada:
Resultado = T x (Awr/W) x (100/LE) x (100/L)
T = contenido total de ginsenósidos en la porción
del contenido de Cápsulas tomada (mg)
Awr = peso promedio del contenido de Cápsuías
(mg/Cápsula)
w = peso de la
porción del contenido de Cápsulas
tomada (mg)
= contenido total de ginsenósidos, mg, en
100 mg del Extracto usado para preparar las
Cápsulas
L = cantidad de Extracto por Cápsula según la
cantidad declarada (mg/Capsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de Extracto,
calculado como la suma de ginsenósidos Rg1, Re, Rb1,
Re, Rb2 y Rd
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Desintegración
Suplementos Dietéticos / Ginseng 6011
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del cual se prepararon las Cápsulas. La etiqueta
también indica la cantidad de Extracto en mg/Cápsula.
Etiquetar las Cápsulas indicando el porcentaje de ginse-
nósidos en el Extracto contenido en las Cápsulas. Para
Cápsulas de gelatina blanda, indicar el método de Conte-
nido de Ginsenósidos con el que cumple el producto úni-
camente si no se usa el Método 7.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
Ginseng Americano, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Ginseng Americano contienen Extracto en
Polvo de Ginseng Americano. Las Tabletas contienen no
menos de 90,0% y no más de 110,0% de Extracto, calcu-
lado como la suma de ginsenósidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2
y Rd.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano!
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP en metanol
Solución muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo fino equivalente a 100 mg de Ex-
tracto a un matraz Erlenmeyer. Extraer a una tempera-
tura de 55º con tres porciones de 20 mL de una mezcla
de metanol y agua (2:8). Evaporar los extractos combi-
nados hasta sequedad al vacío a 45º-50º. Disolver el
residuo en 5 mL de metano!.
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil A: La fase inferior de una mezcla de cloro-
formo, metano! y agua (13:7:2)
Fase móvil B: La fase superior de una mezcla de al-
cohol butílico, acetato de etilo y agua (4:1 :5)
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehído
en 1O mL de ácido acético glacial, agregar 85 mL de
metano!, mezclar, y agregar cuidadosamente 5 mL de
ácido sulfúrico, y mezclar.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo. Desarrollar en
una cámara que contenga Fase móvil A hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido 10,5 cm a partir
del origen. Retirar las placas de la cámara y dejar que
se sequen. Girar las placas 90 y desarrollar en una
cámara que contenga Fase móvil B hasta que el frente
de la fase móvil haya recorrido 10,5 cm a partir del
origen. Retirar las placas de la cámara y dejar que se
6012 Ginseng /Suplementos Dietéticos
sequen. Rociar con Solución reveladora. Calentar las
placas a 1 05 -11 O' durante 1 O minutos y observar. El
orden de los ginsenósidos en las placas, de arriba a
abajo, es: Rg 2 (a la izquierda) y Rg, (a la derecha), Rf,
Re, Rd, Re, Rb2 (a la izquierda) y Rb1 (a la derecha) y
Ro. Los ginsenósidos Rg2, Rg,, Rf, Re y Rd se encuen-
tran en las mitades superiores de las placas; los ginse-
nósidos remanentes se encuentran en las mitades in-
feriores después de cromatografiar con la Fase móvil
B.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción estándar A no presenta una mancha para ginsenó-
sido Rf. La Solución estándar B presenta una mancha
para ginsenósido Rf. Las manchas de la Solución muestra
corresponden a las de la Solución estándar A.
• B. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósidos
Rg 1, Re, Rb 1, Rb 2, Rc2 y Rd en el cromatograma de la
Solución muestra corresponden a los de la Solución están-
dar, según se obtienen en la prueba de Contenido de Gin-
senósidos. El cociente de respuesta entre los picos de Rb2
y Rb 1 es menos de 0,4; y el cociente de respuesta entre
los picos de Rg 1 y Rb, es menos de 0,3. El cromatograma
de la Solución muestra no presenta un pico significativo al
tiempo de retención correspondiente al de ginsenósido
Rf que se observa en la Solución de aptitud del sistema,
según se obtienen en la prueba de Contenido de Ginsenó-
sidos.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS
Diluyente: Agua y alcohol (3:2)
Solución A: Agua
Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o ·- 100
64 5 76 24
77 76 24
Solución estándar: Una solución de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en Diluyente que con-
tenga el equivalente a 1 mg/mL de ginsenósido Rb,
Solución muestra: Pesar con exactitud y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir a un
matraz Erlenmeyer una porción, pesada con exactitud,
del polvo que se espera contenga una cantidad de Ex-
tracto equivalente a 15 mg de ginsenósidos totales,
agregar 15 mL de metano], y agitar hasta mezclar. So-
meter a ultrasonido a 25º-30º durante 30 minutos. En-
friar, pasar a través de papel de filtro, y regresar el resi-
duo al matraz Erlenmeyer. Agregar otros 15 mL de
metanol, someter a ultrasonido la mezcla a 25º-30º du-
rante 30 minutos, y filtrar. Lavar el residuo con tres por-
ciones de 15 mL de metano!. Evaporar los extractos y
lavados combinados hasta sequedad al vacío a 45º-50º.
Transferir el residuo a un matraz volumétrico de
10,0 mL usando volúmenes pequeños de metano! y di-
luir con metanol a volumen.
Solución de aptitud del sistema: 24 mg/mL de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP en Diluyente.
Filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columna
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
µm
Temperatura de la columna: 25"
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema (inyectar
20 µL)
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución de aptitud del sistema es similar al Cro-
matograma de Referencia provisto con el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada para la suma de las áreas de los picos de
los seis ginsenósidos principales en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Identificar los ginsenósidos Rg,, Re, Rb,, Re, Rb2 y Rd
en la Solución estándar y la Solución muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de
Referencia provisto con el ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP, y medir las respuestas de los
picos.
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsenósido per-
tinente (Rg,, Re, Rb,, Re, Rb2 y Rd) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = O, 1 x (ru/rs) x Cs x P
ru = área del pico de cada ginsenósido pertinente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de cada ginsenósido pertinente
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP en la Solución
estándar (mg/ml)
P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsenósido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
usado
Calcular el contenido total de ginsenósidos, T, en mg,
sumando las cantidades de los ginsenósidos
individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con
respecto a la cantidad declarada:
Resultado = T X (Awr/W) X (1 00/LE) X (100/L)
T = contenido total de ginsenósidos en la porción
de Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porción de Tabletas tomada (mg)
LE = contenido total de ginsenósidos, mg, en
1 00 mg del Extracto usado para preparar las
Tabletas
L = cantidad de Extracto por Tableta según la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de Extracto
en Polvo, calculado como la suma de ginsenósidos Rg,,
Re, Rb,, Re, Rb2 y Rd
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
USP 37 Suplementos Dietéticos / Ginseng 601 3

El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1oi ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
P?;tir. de.1 que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
b1en indica la cantidad de Extracto en mg/Tableta. Eti-
quetar las Tabletas indicando el porcentaje de ginsenósi-
do~ totales en el Extracto contenido en las Tabletas.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
pondiente a escina en la Solución estándar. Se pueden
observar otras bandas de menor intensidad entre las zo-
nas debidas a ginsenósidos Rb 1 y Re, y la zona más
cercana al origen corresponde a ginsenósido Re. Se
pueden observar otras manchas en el tercio inferior del
cromatograma.
• B. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósidos
Rg,, Re, Rf, Rb,, Re y Rd en el cromatograma de la Solu-
ción, muestra .corresponden a los de la Solución estándar,
segun se obtienen en la prueba de Contenido de Ginsenó-
s1dos Rb1 y Rg1. El cociente entre las áreas de los picos de
ginsenósido Rb2 y ginsenósido Rb1 es no menos de 0,4 (a
d1ferenc1a de Gmseng Americano).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS RB, Y Re;,
Solución A: Agua
Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.

Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) íº/o\ (%\
Ginseng Asiático o 76 24
DEFINICIÓN 12 76 24
El Ginseng Asiático consiste en las raíces secas de Panax gin- 28 65 35
seng C.A. Mey. (Fam. Araliaceae). Contiene no menos de 51 5 56 5 43 5
0,_2?fo de ginsenósido Rg, y no menos de O, 1% de ginse- 52 5 o 100
nos1do Rb,, ambos calculados con respecto a la materia 64 5 76 24
seca.
77 76 24
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
DELGADA Solución estándar: Transferir una cantidad de ER Ex-
Solución estándar: 5 mg/mL de arbutina y de escina, tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP, equivalente a
en metanol 2 mg de ginsenósido Rg,, a un recipiente adecuado y
Solución muestra: 1,0 g de Ginseng Asiático reducido disolver en 10,0 mL de Diluyente. [NOTA-No se espera
a polvo fino a un matraz de 25 mL equipado con un que las concentraciones de ginsenósido Rg 1 y ginsenó-
condensador de reflujo. Agregar 10,0 mL de una mezcla s1do Rb, en esta solución sean iguales y éstas se deter-
de metanol y agua (7:3), y calentar bajo reflujo durante minan basándose en las cantidades declaradas presentes
15 minutos. Enfriar, filtrar y diluir el filtrado con meta- en ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP.]
no! hasta 10,0 ml. Solución muestra: Reducir 100 g de Ginseng Asiático a
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía polvo y transferi.r aproximadamente 1,0 g del polvo, pe-
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla- sados con exactitud, a un matraz de fondo redondo de
cas para TLC) 1 00 mL equipad.o con un condensador de reflujo. Agre-
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas gar 50 mL de Diluyente y unos pocos granos de piedra
Fase, r:nóvil: La capa s~perior de una mezcla de alcohol pómez, calentar a ebullición en un baño de agua bajo
but1l1co, acetato de etilo y agua (10:2,5:5) en una cá- reflujo durante 1 hora, enfriar y filtrar. Lavar el matraz y
mara no saturada el residuo con 20 mL de Diluyente y pasar a través del
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehído mismo filtro. Combinar los filtrados y evaporar en un
en 1O mL de ácido acético glacial, agregar 85 mL de evaporador rotatorio a 50º hasta sequedad. Disolver el
metanol, mezclar, agregar cuidadosamente 5 mL de residuo en 10,0 mL de Diluyente.
ácido sulfúrico y mezclar. Sistema cromato9ráfico
Análisis (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Modo: HPLC
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la Detector: UV 203 nm
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar- Columnas
tos de la longitud de la placa. Retirar la Flaca de la Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
cámara, marcar el frente de la fase móvi y dejar que la Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
placa se seque. Rociar con Solución reveladora. Calentar µm
la placa a 105º- l l Oº durante 1O minutos y observar la Temperatura de la columna: 25º
placa. Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución Volumen de inyección: 1 O µL
estándar presenta, en el tercio superior, una zona de Aptitud del sistema
~olo~ marrón correspondiente a arbutina y, en el tercio
Muestra: Solución estándar
mf~nor, una zona de color gris correspondiente a Requisitos de aptitud:
eso na. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta es similar al Cromatograma de Referencia provisto
zonas de color gris violáceo correspondientes a ginsenó- con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiá-
sido Rg, en la parte superior y a ginsenósido Re en la tico USP usado.
parte media y entre las zonas correspondientes a arbu- Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
tina y escina en la Solución estándar. Una zona de color terminada para la suma de las áreas de los picos de
gris violáceo correspondiente a ginsenósido Rb 1 se loca- los 6 ginsenósidos principales, en inyecciones
liza al mismo valor RF que la zona de color gris corres- repetidas
 6014 Ginseng / Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular los porcentajes de ginsenósidos Rb, y Rg 1 en la
porción de Ginseng Asiático tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de ginsenósido Rg1 o
ginsenósido Rb, de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de ginsenósido R5:11 o
ginsenósido Rb, de la Solución estandar
Cs = concentraciónde ginsenósido Rg1 o
ginsenósido Rb, en la Solución estándar
(mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Ginseng Asiático tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación
Ginsenósido Rg1: No menos de 0,2% con respecto a
la materia seca
Ginsenósido Rb1: No menos de O, l % con respecto a
la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método,111 (231): No más de 20 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis ~~Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requ1s1tos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 100 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Raíces fusiformes o cilíndricas, con olor
aromático distintivo, en ocasiones con ramificaciones,
por lo regular de 1-1 O cm y en ocasiones de hasta
20 cm de largo y de hasta 2,5 cm de diámetro en la
corona, con una o más cicatrices de inserción del tallo.
Coloración externa amarilla pálida a dorada, textura ás-
pera en la parte inferior, con anillos horizontales promi-
nentes y finos rebordes longitudinales como resultado
del secado. Presenta cicatrices de inserción de raíces o
raicillas finas. Las fracturas son cortas, con la superficie
fracturada, de color blanco a marfil y exponen un anillo
de canales secretores presentes en el floema secundario.
Histología
Sección transversal de la raíz: Presenta múltiples ca-
pas de células suberosas de paredes delgadas. El
floema secundario se caracteriza por lagunas de aire
conspicuas; parénquima de almacenamiento que con-
tiene almidón en abundancia; unos pocos elementos
cribosos; y anillos de canales secretores esquizógenos.
El xilema se caracteriza por un parénquima de almace-
namiento que contiene almidón en abundancia, unos
pocos elementos traqueales y carencia de canales se-
cretores. En ocasiones se presentan cristales en drusas
son células parenquimffiticas vasculares.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 2,0%,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
c9hol, Método 2 (561): No menos de 14,0%
• P~RDIDA PO_R SECADO (7~ 1): Secar 1,0 g de Ginseng Asiá-
tico reducido a polvo fino a 105º durante 2 horas: pierde
no ,más de 12,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%, determinado en 1,0 g de Ginseng Asiá-
ticq reducido a polvo fin9. , Rg,, Re, Rf, Rb,, Re y Rd en el cromatograma de la Solu-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 1,0%
USP 37
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar en un lugar fresco y seco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
Ginseng Asiático en Polvo
DEFINICIÓN
El Ginsen9 Asiático en Polvo ~s Ginseng Asiático reducido a
polvo fino o a polvo muy fino. Contiene no menos de
o,prode ginsenósido Rg, y no menos de 0, 1 % de ginse-
nos1do Rb,, ambos calculados con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 5 mg/mL de arbutina y de escina,
en metano!
Solución muestra: 1,0 g de Ginseng Asiático en Polvo
en un matraz de 25 mL equipado con un condensador
de reflujo. Agregar 10,0 mL de una mezcla de metanol
y agua (7:3), y calentar bajo reflujo durante 15 minu-
tos. Enfriar, filtrar y diluir el filtrado con metanol hasta
10,0 ml.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas
Fase móvil: La capa superior de una mezcla de alcohol
butílico, acetato de etilo y agua (10:2,5:5) en una cá-
mara no saturada
Solución reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehído
en 1 O mL de ácido acético glacial y agregar 85 mL de
metanol, mezclar y agregar cuidadosamente 5 mL de
ácido sulfúrico a esta mezcla.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la longitud de la placa. Retirar la flaca de la
cámara, marcar el frente de la fase móvi y dejar que la
placa se seque. Rociar con Solución reveladora. Calentar
la placa a 105º-l l Oº durante 1 O minutos y observar la
placa.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar presenta, en el tercio superior, una zona de
color marrón correspondiente a arbutina y, en el tercio
inferior, una zona de color gris correspondiente a
escina.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
zonas de color gris violáceo correspondientes a ginsenó-
sido Rg, en la parte superior y a ginsenósido Re en la
parte media y entre las zonas correspondientes a arbu-
tina y escina en la Solución estándar. Una zona de color
gris viol~ceo correspondiente a ginsenósido Rb1 se loca-
fiza al mismo valor RF que la zona de color gris corres-
pondiente a escina en la Solución estándar. Se pueden
observar otras bandas de menor intensidad entre las zo-
nas debidas a ginsenósidos Rb, y Re, y la zona más
cercana al origen corresponde a ginsenósido Re. Se
pueden observar otras manchas en el tercio inferior del
cromatograma.
• B. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósidos
ción muestra corresponden a los de la Solución estándar
según se obtienen en la prueba de Contenido de Ginse,;ó-
sidos Rb, y Rg,. El cociente entre las áreas de los picos de
USP 37 Suplementos Dietéticos / Ginseng 6015

ginsenósido Rb2 y ginsenósido Rb, es no menos de 0,4 (a C1 = concentración de ginsenósido Rg, o

diferencia de Ginseng Americano). ginsenósido Rb, en la Solución estándar
(mg/mL)
COMPOSICIÓN V = volumen final de la Solución muestra (mL)
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS RB, Y RG, W = peso de Ginseng Asiático en Polvo tomado
Solución A: Agua para preparar fa Solución muestra (mg)
Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1) Criterios de aceptación
Fase móvil: Ver la Tabla 7. Ginsenósidos Rg1: No menos de 0,2% con respecto a
la materia seca
Tabla 1 Ginsenósido Rb1: No menos de O, 1 o/o con respecto a
la materia seca
Tiempo Solución A Solución B
lmln) (O/o) (O/o) CONTAMINANTES
o 76 24 • METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 pprn
12 76 24 • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
28 65 35 lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
51 5 56 5 43 5 requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
52 5 o 100 tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
64 5 76 24 El recuento total combinado de hongos filamentosos y
77 76 24 levaduras no excede de 102 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Diluyente: Alcohol y agua (4:6) ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Solución estándar: Transferir una cantidad de ER Ex- ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
tracto en Polvo de Ginseng Asiático USP, equivalente a cus aureus.
2 mg de ginsenósido Rg,, a un recipiente adecuado y
disofver en 10,0 mL de Diluyente. [NOTA-No se espera PRUEBAS ESPECÍFICAS
que las concentraciones de ginsenósido Rg, y ginsenó- • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón ama-
sido Rb, en esta solución sean iguales y éstas se deter- rillento pálido con un ligero olor aromático. Al microsco-
minan basándose en las cantidades declaradas presentes pio, el polvo presenta las siguientes características: trazas
en ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP.] de súber compuesto de células poligonales de paredes
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g delgadas pero principalmente con felodermis en el exte-
de Ginseng Asiático en Polvo, pesados con exactitud, a rior; una corteza amplia de células parenquimáticas con
un matraz de fondo redondo de 100 mL equipado con numerosos canales secretores dispuestos en zonas con-
un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de una mez- céntricas; xilema parenquimático con traqueidas no ligni-
cla de Diluyente y unos pocos granos de piedra pómez, ficadas y vasos ligeramente lignificados con engrosamien-
calentar a ebullición en un baño de agua bajo reflujo tos espiralados y reticulados, aislados o en grupos
durante 1 hora, enfriar y filtrar. Lavar el matraz y el pequeños; pequeños gránulos de almidón de 0,5-1,0 µm
residuo con 20 mL de Diluyente y pasar a través del de diámetro en todas las células parenquimáticas; y, en
mismo filtro. Combinar los filtrados y evaporar en un ocasiones, en las células de la región central se observan
evaporador rotatorio a 50º hasta sequedad. Disolver el grupos de cristales oxalat,o de calcio.
residuo en 10,0 mL de Diluyente. • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
Sistema cromato9ráfico (56,1): No más de 2,0%,
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
Modo: HPLC cohol, Método 2 (561): No menos de 14,0%
Detector: UV 203 nm • PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar 1,0 g de Ginseng Asiá-
Columnas tico en Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1 12,_!)% de su peso. , .
Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3 • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
µm No más de 8,0%, determinado en 1,0 g de Ginseng Asiá-
Temperatura de la columna: 25º ticq en Polvo. , ,
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
Volumen de inyección: 1 O µL (561): No más de 1,0%
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar REQUISITOS ADICIONALES
Requisitos de aptitud • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma cerrados y almacenar en un lugar fresco y seco.
es similar al Cromatograma de Referencia provisto • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiá- latín y después de la denominación oficial, la parte de la
tico USP usado. pla.rta de donde se obtuvo el artículo.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de- • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
terminada para la suma de las áreas de los picos de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
los 6 ginsenósidos principales, en inyecciones
repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular los porcentajes de ginsenósidos Rb1 y Rg, en la Extracto en Polvo de Ginseng Asiático
porción de Ginseng Asiático en Polvo tomada:
DEFINICIÓN
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100 El Extracto en Polvo de Ginseng Asiático se prepara a partir
de Ginseng Asiático mediante maceración, percolación o
ru = respuesta del pico de ginsenósido Rg, o ambos procesos realizados a temperatura ambiente con
ginsenósido Rb, de la Solución muestra disolventes adecuados tales como alcohol, metanol, agua
rs = respuesta del pico de ginsenósido R_g1 o o mezclas de estos disolventes, y concentrando el extracto
ginsenósido Rb, de la Solución estandar fluido a temperaturas por debajo de 50'. La relación entre
6016 Ginseng /Suplementos Dietéticos USP 37

el material vegetal crudo inicial y el Extracto en Polvo de COMPOSICIÓN

Ginseng Asiático está entre 3:1 y 7:1. Contiene no menos • CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS
de 3,0% de ginsenósidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd com- Solución A: Agua
binados, calculado con respecto a la materia anhidra. Solución B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Puede contener otras sustancias agregadas. Fase móvil: Ver la Tabla 7.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA Tabla 1
DELGADA Tiempo Solución A Solución B
Columna de extracción: Usar una columna de extrac- <min) (%) (%)
ción en fase sólida que contenga relleno Cl 8 con un o 76 24
tamaño de partícula de 55 a 105 µm y una relación 12 76 24
entre la masa de sorbente y el volumen de la columna
28 65 35
de 360 mg/0,85 mL o equivalente. Acondicionar la co-
lumna antes de usar lavando con 3 mL de metano! y 51 5 ~·
56 5 43 5
8 mL de agua. 52 5 o 100
Solución estándar: Transferir aproximadamente O, 1 g -· 64 5 76 -- 24
de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP a un 77 76 24
matraz volumétrico de 5 mL y proceder según se indica
en Solución muestra, comenzando donde dice "Disolver Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
en agua". Solución estándar: 24 mg/mL de ER Extracto en Polvo
Solución muestra: Aproximadamente 1,0 g de Extracto de Ginseng Asiático USP en Diluyente. Disolver some-
en Polvo de Ginseng Asiático en un matraz volumétrico tiendo a ultrasonido durante 1 O minutos, mezclar y
de 25 mL. Disolver en agua, sometiendo a ultrasonido si filtrar.
fuera necesario. Diluir con agua a volumen. Transferir Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
4,0 mL de esta solución a la Columna de extracción, la- estándar, excepto que se debe usar Extracto en Polvo
var con 1 O mL de agua y desechar el eluato. Eluir la de Ginseng Asiático.
columna con 2 mL de metano!. [NOTA-No usar vacío, Sistema cromato9ráfico
eluir manualmente y de forma lenta.] Recoger el eluato (Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
en un vial adecuado. Modo: HPLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro- Detector: UV 203 nm
matografía de 0,2 mm sobre una placa para cromato- Columnas
grafía en capa delgada de alta resolución Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Volumen de aplicación: 1O µL, en bandas Columna analítica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
Fase móvil: Cloroformo, metano! y agua (65:35:1 O). µm
Usar la fase inferior. Temperatura de la columna: 25º
Solución reveladora: Alcohol, anhídrido acético y ácido Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
sulfúrico (18:1 :1) Volumen de inyección: 20 µL
Análisis Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Muestra: Solución estándar
Saturar la cámara con Fase móvil durante 2 horas. De- Requisitos de aptitud
sarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar- es similar al Cromatograma de Referencia provisto
tos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiá-
cámara, marcar el frente de la fase móvil y dejar que la tico USP usado.
placa se seque. Rociar con Solución reveladora y calen- Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
tar en un horno a 105º durante 1 O minutos. Observar terminada para la suma de las áreas de los picos de
inmediatamente la placa a la luz blanca. los 6 ginsenósidos principales, en inyecciones
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta, repetidas
entre otras manchas, ocho manchas de color violeta Análisis
amarronado a valores RF de aproximadamente 0,70; Muestras: Solución estándar y Solución muestra
0,60; 0,50; 0,36; 0,30; 0,28; 0,20yO,18, que corres- Identificar los picos de ginsenósidos por comparación
ponden en color y valores RF a aquéllas obtenidas para con el Cromatograma de Referencia provisto con el
la Solución estándar. lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
• B. Agregar 2 mL de ácido acético glacial a O, 1 g de Ex- usado y medir las áreas de los picos de los 6 ginsenósi-
tracto en Polvo de Ginseng Asiático, entibiar durante 5 dos principales.
minutos en un baño de agua caliente y filtrar. Agregar Calcular el porcentaje de cada ginsenósido pertinente
con cuidado 0,5 mL de ácido sulfúrico a 1,0 mL del (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porción de Extracto
filtrado. en Polvo de Ginseng Asiático tomada:
Criterios de aceptación: Se desarrolla un color marrón
rojizo en la zona de contacto. Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x P
• C. Los tiempos de retención de los picos de ginsenósidos
Rg1, Re, Rf, Rb1, Rb2, Re y Rd en el cromatograma de la ru = área del pico de cada ginsenósido pertinente
Solución muestra corresponden a los de la Solución están- de la Solución muestra
dar, según se obtienen en la prueba de Contenido de Gin- r5 = área del pico de cada ginsenósido pertinente
senósidos. El cociente entre las áreas de los picos de Rb2 y de la Solución estándar
Rb1 es no menos de 0,4 (a diferencia de Ginseng Cs = concentración de ER Extracto en Polvo de
Americano). Ginseng Asiático USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de
Ginseng Asiático en la Solución muestra
(mg/mL)
P = cantidad declarada, como porcentaje, de cada
ginsenósido pertinente en el ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP
USP 37
Calcular el porcentaje de ginsenósidos sumando los
porcentajes de cada ginsenósido pertinente.
Criterios de aceptación: No menos de 3,0% con res-
pecto a la materia anhidra
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS (231 ): ,No más de 30 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis ~e Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requ1s1tos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 300 ufc/
g. El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 00 ufc/g. , ·
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): No más de
7,0%, deter!,llinado en una muestra de O, 15 g
• DETERMINACION DE ALCOHOL, Método 11 (611): No más de
0,25%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Cumple con los requisitos
en Extractos Botánicos (565).
• ETIQUETADO: Cumple con los requisitos en Extractos Botá-
nic9s (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
Ginseng Asiático, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Ginseng Asiático se preparan a partir de Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asiático. Contienen no menos
de 90,0% y no más de 110,0% de Extracto en Polvo,
calculado como la suma de ginsenósidos Rg, Re Rb 1 Re
Rb2 y Rd. ' ' ' '
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: 5 mg/mL de arbutina y de escina,
en metanol
Solución muestra: Transferir el equivalente a 1 00 mg
de Extracto en Polvo, a partir de Tabletas reducidas a
polvo, a un matraz Erlen,meyer y extraer tres veces,
cada una con una porcion de 20 mL de una mezcla de
metanol y agua (4:1 ), en un baño a 55º durante 30
minutos, mezclando con un agitador magnético. Evapo-
rar los extractos combinados hasta sequedad al vacío a
una temperatura entre 45º y 50º, y disolver el residuo
en 1O mL de una mezcla de metano! y agua (3:2).
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas
Fase móvil: La fase superior de una mezcla de alcohol
butílico, acetato de etilo y agua (4:1 :2) en una cámara
no saturada
Solución reveladora: 0,5 mL de anisaldehído en 1 O ml
de ácido acético glacial. Agregar 85 ml de metanol,
agregar CU1dadosamente 5 mL de ácido sulfúrico, y
mezclar.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo. Retirar la placa
de la cámara de desarrollo y dejar que se seque. Ro-
ciar con Solución reveladora. Calentar la placa a
1 05º-l l Oº durante 1 O minutos y observar la placa.
Cri~erios _de aceptación: El cromatograma de la Solu-
oon estandar presenta, en el tercio superior, una zona
Suplementos Dietéticos / Ginseng 601 7
de color m.arrón correspondiente a arbutina y, en el
tercio inferior, una zona de color gris correspondiente a
escina; Entre estas dos zonas, el cromatograma de la
Soluoon ml'.estra pres.enta ~o.nas de color gris violáceo
correspond1ent~s. a ginsenos1do Rg 1 en la porción supe-
rior y a ginsenos1do Re en la parte media. Una zona de
color gris violáceo correspondiente a ginsenósido Rb 1 se
localiza al mismo valor Rr que la zona de color gris
correspondiente a escina en el cromatograma de la So-
lución estándar. Se pueden observar otras bandas de
menor intensidad entre las zonas debidas a ginsenósi-
dos Rb, y Re, y la zona más cercana al origen corres-
ponde a ginsenósido Re. Se pueden observar otras
manch.as en el tercio inferior del cromatograma .
• B. Los tiempos de retención de los analitos pertinentes
de ~a Soluc10n, muestra .corresponden a los de la Solución
es.tanda_r,. segun s.e obtienen en la prueba de Contenido de
Gmsenos1dos. El tiempo de retencion del pico de ginsenó-
si.~o Rf 9e la Soluc!ón muestra corresponde al de la Solu-
oon estandar, segun se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Ginsenósidos.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GINSENÓSIDOS
Diluyente: Agua y alcohol (3:2)
Solución A: Agua
Soluciór:i ~: Acetonitrilo y agua ( 4: 1)
Fase mov1I: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
lmin) (º/o) íº/o)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o 100
64 5 76 24
~
77 76 24
Solución estándar: 40 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Ginseng Asiático USP en Diluyente. Filtrar.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad del polvo
equivalente a 200 mg de Extracto en Polvo a un matraz
Erlenmeyer y extraer tres veces, cada una con una por-
ción de 20 mL de una mezcla de metanol y agua (4:1 ),
en un baño a 55º durante 30 minutos, mezclando con
un agitador magnético. Evaporar los extractos combina-
dos hasta sequedad al vacío a una temperatura entre
45º y 50º. Disolver el residuo en 5,0 ml de Diluyente y
filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columna
Guarda colum,na: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analitica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
µm
Temperatura de la columna: 25º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar es similar al Cromatograma de
Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada para la suma de las áreas de los picos de
los seis ginsenósidos principales en inyecciones
repetidas
6018 Ginseng / Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Registrar los cromatogramas, identificar los picos de
ginsenósidos por comparación con el Cromatograma
de Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asiático USP usado, y medir las
áreas de los picos de los seis ginsenósidos principales.
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsenósido per-
tinente (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = 0,05 x (ru/rs) x Cs x P
ru = área del pico de cada ginsenósido pertinente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de cada ginsenósido pertinente
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Asiático USP en la Solución estándar
(mg/mL)
P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsenósido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
usado
Calcular el contenido total de ginsenósidos, T, en mg,
sumando las cantidades de ginsenósidos individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con respecto
a la cantidad declarada:
Resultado = T X (Awr/W) X (100/LE) X (100/L)
T = contenido total de ginsenósidos en la porción
de Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porción de Tabletas tomada (mg)
LE = contenido total de ginsenósidos en 100 mg
del Extracto usado para preparar las Tabletas
(mg)
L = cantidad de Extracto por Tableta según la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de Extracto
en Polvo, calculado como la suma de ginsenósidos Rg1,
Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1000 ufc/g.,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Las
Tabletas cumplen con los requisitos de las pruebas para
determinar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia
coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
bién indica la cantidad de Extracto en Polvo, en mg/
Tableta, y el contenido, en mg, de ginsenósidos por
109 mg de Extracto en Polvo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asiático USP
USP 37
Ginseng Siberiano-ver Eleuterococo en
Suplementos Dietéticos
Glicina-ver Glicina en Monografías Generales
Glucosamina, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Glucosamina se preparan a partir de Clorhi-
drato de Glucosamina, Sulfato de Glucosamina Cloruro
Sódico, Sulfato de Glucosamina Cloruro Potásico o una
mezcla de cualquiera de estos. Las Tabletas contienen no
menos de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad
declarada de glucosamina (C6HnNOs).
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de
Glucosamina .
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191):
Cumple con l9s requisitos.
• c. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERAL~S, Sulfatos (191):
Cumple con los requisitos. [NOTA-Unicamente para Ta-
bletas que declaran contener glucosamina sulfato sódico
o glucosamina sulfato potásico]
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Solución amortiguadora: En un matraz volumétrico de
1 L, disolver 3,5 g de fosfato dibásico de potasio en
agua. Agregar 0,25 mL de hidróxido de amonio, diluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con ácido fosfó-
rico a un pH de 7,5.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solución estándar: 3,75 mg/mL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción pesada con
exactitud de material reducido a polvo fino, equivalente
a aproximadamente 312 mg de glucosamina, a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 60 mL de Dilu-
yente y someter a ultrasonido durante 1O minutos. Agi-
tar mecánicamente durante 15 minutos. Diluir con
Diluyente a volumen y mezclar. Pasar una porción de
esta solución a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
[NOTA-El pico de la unidad de glucosamina eluye apro-
ximadamente a los 1O minutos. El cromatograma pre-
senta un pico adicional de gran tamaño cerca del vo-
lumen muerto, debido al ión cloruro.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
glucosamina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
teóricos
 USP 37
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análi.sis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6HllNOs) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x (Mc1/M,2) x 100
ru = respuesta del pico de glucosamina de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de glucosamina de la
Solución estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de glucosamina en la
Solución muestra (mg/mL)
M,1 = peso molecular de glucosamina, 179,1 7
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptación: 90,0%-11 0,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución.
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solución estándar: Disolver una cantidad adecuada de
ER Clorhidrato de Glucosamina USP en agua hasta ob-
tener una concentración similar a la esperada en la So-
lución muestra.
Solución muestra: Porción filtrada de la solución en
análisis
Solución amortiguadora: Mezclar 1,0 mL de ácido fos-
fórico con 2 L de agua y ajustar con hidróxido de pota-
sio a un pH de 3,0.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora (2:3)
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
glucosamina
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6HllNOs) disuelta:
Resultado= (ru!rs) x (Cs x VIL) x (M,1/M,2) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/mL)
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de glucosamina
(mg/Tableta)
M,1 = peso molecular de glucosa mina, 179,17
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Tolerancias: No menos de 75% (Q) de la cantidad de-
clarad,a de glucosamina (C6HllNOs) ,
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
Suplementos Dietéticos / Glucosamina 6019
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el tipo de sal de glucosa-
mina contenido en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Glucosamina y Condroitina Sulfato de
Sodio, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Glucosamina y Condroitina Sulfato de Sodio
se preparan a partir de Clorhidrato de Glucosamina, Sul-
fato de Glucosamina Cloruro Sódico, Sulfato de Glucosa-
mina Cloruro Potásico o una mezcla de cualquiera de es-
tos, con Condroitina Sulfato de Sodio. Las Tabletas
contienen no menos de 90,0% y no más de 120,0% de
las cantidades declaradas de condroitina sulfato de sodio
y glucosamina (C6HllNOs).
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremadamente
higroscópica una vez que se seca. Evitar la exposición a la
atmósfera y pesar inmediatamente.]
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención de los picos principales de la
Solución muestra corresponde a los de la Solución están-
dar, según se obtienen en la prueba de Contenido de
Glucosamina.
• B. ELECTROFORESIS (726)
Solución amortiguadora de acetato de bario: Disolver
25,24 g de acetato de bario en 900 mL de agua. Ajustar
con ácido acético a un pH de 5,0 y diluir con agua
hasta 1000 mL.
Reactivo de tinción: Azul de toluidina al O, 1 % (p/v) en
ácido acético O, 1 M
Solución estándar: Usar la Solución estándar de media
concentración de la prueba de Contenido de Condroitina
Sulfato de Sodio.
Solución muestra: Preparar según se indica en la
prueba de Contenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Análisis: Llenar las cámaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequeña cámara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solución amortiguadora de acetato de bario. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
1 2-14 cm, en Solución amortiguadora de acetato de ba-
rio durante 1 O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
absorbente. Usando un aplicador 2 adecuado para elec-
troforesis, aplicar volúmenes iguales (0,5 µL) de la Solu-
ción muestra y de la Solución estándar al lado más bri-
llante de la membrana colocada en posición en un
soporte de aplicador adecuado o en un puente de se-
paración en la cámara. Asegurar que ambos extremos
de la membrana estén sumergidos a una profundidad
de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cámaras con solu-
ción amortiguadora. Aplicar una constante de 60 V
(6 mA al principio) durante 2 horas. [NOTA-Llevar a
cabo la aplicación de soluciones y voltaje dentro de los
5 minutos, porque un mayor secado del papel absor-
bente reduce la sensibilidad.]
Colocar la membrana en una bandeja de tinción de
plástico y, con el lado de la aplicación hacia abajo,
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo de tin-
1 Las membranas de acetato de celulosa adecuadas para electroforesis están
disponibles en Malta Chemetron SRL, Milán, Italia (www.maltachemetron.
com); Fluka Chemical Corp., Milwaukee, WI; y DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com).
'Los aplicadores adecuados están disponibles e11 DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com) y Helena Laboratories, Bedumont, TX (www.helena.lU111).
6020 Glucosamina / Suplementos Dietéticos
ción durante 5 minutos. Luego, mezclar la solución
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y
decolorar en ácido acético al 5% hasta que el fondo se
aclare.
Criterios de aceptación: La mancha principal de la So-
lución muestra presenta la misma migración que la man-
cha principal de la Solución estándar.
[NOTA-Documentar los resultados tomando una foto-
grafía dentro de los 15 minutos de completada la
decoloración.]
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Diluyente: Transferir 29 µL de ácido acético y 5 mL de
acetonitrilo a un matraz volumétrico de 100 mL que
contenga 50 mL de agua. Diluir con agua a volumen.
Solución amortiguadora de borato: 0,2 M (76,3 g/L
de borato de sodio en agua) ajustada con ácido clorhí-
drico SR a un pH de 9,5
Solución amortiguadora de acetato: 6,80 g/L de ace-
tato de sodio trihidrato en agua ajustada con ácido acé-
tico diluido a un pH de 5,9
Reactivo de derivatización: En un tubo de cultivo de
polipropileno de 14 mL, disolver 50 mg de o-ftalalde-
hído en 1,25 mL de metanol anhidro. Agregar 50 µL de
ácido 3-mercaptopropiónico y 11,2 mL de Solución
amortiguadora de borato y mezclar suavemente. Dejar
en reposo en la oscuridad durante 30 minutos antes de
usar. [NOTA-La concentración del reactivo se mantiene
agregando 1O µL de ácido 3-mercaptopropiónico cada
2 días. Se debe almacenar en la oscuridad a tempera-
tura ambiente y se puede usar durante no más de 2
semanas.]
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora de ace-
tato (1 :9)
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en agua. Dejar en reposo a tempera-
tura ambiente durante 1 hora.
Solución muestra: Transferir el equivalente a 25 mg de
glucosamina, a partir de Tabletas reducidas a polvo fino
(no menos de 20), a un matraz volumétrico de 25 ml.
Diluir con Diluyente a volumen. Mezclar en un mezcla-
dor de vórtice hasta suspender el polvo en solución.
Someter a ultrasonido en un baño de agua a 65º du-
rante 20 minutos. Retirar del baño, mezclar durante 5
minutos con ayuda de un agitador magnético y
centrifugar.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 340 nm
Columna: 3,0 mm x 5 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Cinco alícuotas individuales de la Solución
estándar derivatizadas según se indica en Análisis. Cada
alícuota derivatizada se inyecta una sola vez.
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para el anó-
mero f3 y el anomero a son 1,0 y 1,8, respectiva-
mente. El tiempo de retención para el anómero f3 es
no menos de 4 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en
cinco inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 100 µL del Reactivo de derivatización y 100 µL
de la Solución estándar o la Solución muestra a un vial
que contenga 400 µL de Solución amortiguadora de bo-
rato. Dejar que la derivatización prosiga durante 1 mi-
nuto. Inyectar las soluciones derivatizadas inmediata-
mente después de la reacción de derivatización.
USP 37
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (CÓH 1 iN05) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = respuesta del pico del anómero f3 de la
Solución muestra derivatizada
rs = respuesta del pico del anómero f3 de la
Solución estándar derivatizada
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de glucosamina en la
Solución muestra (mg/mL)
Mr1 = peso molecular de glucosamina, 179, 17
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0%
• CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobásico de potasio, 492 mg de fosfato dibásico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en aproximada-
mente 900 mL de agua y ajustar con hidróxido de po-
tasio o ácido fosfórico a un pH de 7,0 ± 0,2. Diluir con
agua hasta 1 L y mezclar minuciosamente.
Soluciones estándar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/mL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solución muestra: Transferir el equivalente a 100 mg
de condroitina sulfato de sodio, a partir de Tabletas re-
ducidas a polvo fino (no menos de 20), a 60 mL de
agua. Agitar hasta suspender el polvo en la solución.
Someter a ultrasonido en un baño de agua a 65º du-
rante 20 minutos. Retirar del baño y mezclar o agitar
durante 5 minutos. Diluir con agua hasta 100 mL y cen-
trifugar o pasar a través de un filtro adecuado.
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración volumétrica con detección
fotométrica
Solución volumétrica: 1 mg/mL de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua. Desgasificar antes de usar.
Detección del punto final: Turbidimétrica con una
sonda fototoeléctrica
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir 5,0 mL de la Solución estándar y de la Solu-
ción muestra a sendos vasos de valoración. Agregar
25 mL de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con una sonda fotoeléctrica ya
sea a 420; 550 ó 660 nm. Ajustar el instrumento a
cero en modo de absorbancia. Valorar con Solución
volumétrica usando la sonda fotoeléctrica para deter-
minar el punto final turbidimétricamente. A partir de
una ecuación de regresión lineal, que se calcula
usando los volúmenes de Solución volumétrica consu-
midos en función de las concentraciones de las Solu-
ciones estándar, determinar la concentración de sul-
fato de condroitina sulfato de sodio en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solución muestra
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de condroitina sulfato
de sodio en la Solución muestra (mg/mL)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución.
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Determinar el porcentaje de la cantidad declarada de
glucosamina (C6H13NOs) disuelta usando el siguiente
método.
Solución estándar: Proceder según se indica en la
prueba de Contenido de Glucosamina. Diluir con una
cantidad adecuada de agua, si fuera necesario.
Solución muestra: Usar la solución en análisis.
Solución amortiguadora de borato, Solución amorti-
guadora de acetato, Reactivo de derivatización, Fase
móvil y Sistema cromatográfico: Proceder según se
indica en la prueba de Contenido de Glucosamina.
Análisis: Preparar según se indica en la prueba de Con-
tenido de Glucosamina.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6H13NOs) disuelta:
Resultado= (rulrs) x (Cs x VIL) x (M,¡/M,2) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
derivatizada
rs = área del pico de la Solución estándar
derivatizada
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mglmL)
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de glucosamina
(mglTableta)
M,1 = peso molecular de glucosamina, 179, 17
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de glucosamina (C6HllNOs)
Determinar el porcentaje de la cantidad declarada de
condroitina sulfato de sodio disuelta usando el siguiente
método.
Soluciones estándar, Solución volumétrica y Dilu-
yente: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Solución muestra: Usar la solución en análisis.
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio disuelta:
Resultado= (C x VIL) x 100
C = concentración determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solución muestra
(mglmL)
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de condroitina sulfato de
sodio (mglTableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de condroitina sulfato de sodio
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica los tipos de sales de glu-
cosamina contenidos en el artículo y las fuentes de las
que se obtuvo la condroitina. Etiquetar indicando las
fuentes de la condroitina sulfato de sodio, ya sea bovina,
porcina, avícola o una mezcla de cualquiera de éstas. La
etiqueta indica en el panel frontal el contenido de con-
droitina sulfato de sodio con respecto a la materia seca.
Suplementos Dietéticos / Glucosamina 6021
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Glucosamina y Metilsulfonilmetano,
Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Glucosamina y Metilsulfonilmetano se prepa-
ran a partir de Clorhidrato de Glucosamina, Sulfato de
Glucosamina Cloruro Sódico, Sulfato de Glucosamina Clo-
ruro Potásico o una mezcla de cualquiera de estos, con
Metilsulfonilmetano. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no más de 120,0% de la cantidad declarada de
glucosamina (C6HuNOs) y no menos de 90,0% y no más
de 110,0% de la cantidad declarada de metilsulfonilme-
tano (C2H602S).
IDENTIFICACIÓN
• A. PRESENCIA DE GLUCOSAMINA: Los tiempos de retención
de los picos principales de la Solución muestra correspon-
den a los de la Solución estándar, según se obtienen en
Contenido de Glucosamina.
• B. PRESENCIA DE METILSULFONILMETANO: El tiempo de re-
tención del pico principal de la Solución muestra corres-
ponde al de la Solución estándar, según se obtienen en
Contenido de Metilsulfonilmetano.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Diluyente: Transferir 29 µL de ácido acético y 5 mL de
acetonitrilo a un matraz volumétrico de 100 mL que
contenga 50 mL de agua y diluir con agua a volumen.
Solución amortiguadora de borato: 0,2 M (76,3 glL
de borato de sodio en agua) ajustada con ácido clorhí-
drico SR a un pH de 9,5. [NOTA-La solución amorti-
guadora debe almacenarse a temperatura ambiente. Se
debe entibiar para disolver si se presenta cristalización.]
Solución amortiguadora de acetato: 6,80 glL de ace-
tato de sodio trihidrato en agua, ajustada con ácido
acético diluido a un pH de 5,9
Reactivo de derivatización: En un tubo de cultivo de
polipropileno de 14 mL, disolver 50 mg de o-ftalalde-
hído en 1,25 mL de metanol anhidro. Agregar 50 µL de
ácido 3-mercaptopropiónico y 11,2 mL de Solución
amortiguadora de borato, y mezclar suavemente. Dejar
en reposo en la oscuridad durante 30 minutos antes de
usar. [NOTA-La concentración del reactivo se mantiene
agregando 1 O µL de ácido 3-mercaptopropiónico cada
2 días. Se debe almacenar en la oscuridad a tempera-
tura ambiente y se puede usar durante no más de 2
semanas.]
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora de ace-
tato (1 :9)
Solución estándar: 1,0 mglmL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en agua. Dejar en reposo a tempera-
tura ambiente durante 1 hora.
Solución muestra: Transferir el equivalente a 25 mg de
glucosamina, a partir de no menos de 20 Tabletas, re-
ducidas a polvo fino, a un matraz volumétrico de 25 mL
y diluir con Diluyente a volumen. Mezclar en un mezcla-
dor de vórtice hasta suspender el polvo en solución.
Someter a ultrasonido en un baño de agua a 65º du-
rante 20 minutos. Retirar del baño, mezclar durante 5
minutos con ayuda de un agitador magnético y
centrifugar.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
6022 Glucosamina / Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 340 nm
Columna: 3,0 mm x 5 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Cinco alícuotas individuales de la Solución
estándar derivatizadas según se indica en Análisis. Cada
alícuota derivatizada se inyecta una sola vez.
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para el anó-
mero f) y el anomero a son 1,0 y 1,8, respectiva-
mente. El tiempo de retención para el anómero f3 es
no menos de 4 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en
cinco inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 100 µL del Reactivo de derivatización y 100 µL
de la Solución estándar o la Solución muestra a un vial
que contenga 400 µL de Solución amortiguadora de bo-
rato. Dejar que la derivatización prosiga durante 1 mi-
nuto. Inyectar las soluciones derivatizadas inmediata-
mente después de la reacción de derivatización.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de gluco-
samina (C6H 1 ;N0 5) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = respuesta del pico del anómero f3 de la
Solución muestra derivatizada
rs = respuesta del pico del anómero f3 de la
Solución estándar derivatizada
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de glucosamina en la
Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de glucosamina, 179,17
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
• CONTENIDO DE METILSULFONILMETANO
Diluyente: Transferir 950 ml de metano! a un matraz
volumétrico de 1 L. Agregar 0,60 ml de éter metílico de
dietilenglicol y diluir con metano! a volumen.
Solución estándar: 0,4 mg/ml de ER Metilsulfonilme-
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50º du-
rante 1 minuto y dejar que se enfríe a temperatura
ambiente.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Disolver una porción del material reducido
a polvo fino, equivalente a 1 Tableta, en Diluyente y
someter a ultrasonido durante 15 minutos a 50º. Dejar
que se enfríe a temperatura ambiente, diluir con Dilu-
yente a volumen y mezclar. Diluir cuantitativamente con
Diluyente hasta obtener una concentración final de
0,4 mg/ml de metilsulfonilmetano. Transferir 1 ml de la
suspensión a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml y
centrifugar durante 20 segundos. Usar el sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar, de 0,53 mm x 30 m; recubrimiento
de fase G2 de 5 µm
USP 37
Temperatura
Columna: 120'
Inyector: 250
Detector: 250º
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 5 ml/min
Volumen de inyección: 1 µL
Tipo de inyector: Relación de partición, 2:1
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el cociente de respuesta entre los picos de metilsulfo-
nilmetano y éter metílico de dietilenglicol, en inyec-
ciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de me-
tilsulfonilmetano (C2H502S) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
metilsulfonilmetano y éter metílico de
dietilenglicol de la Solución muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
metilsulfonilmetano y éter metílico de
dietilenglicol de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Metilsulfonilmetano USP
en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de metilsulfonilmetano
en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos de Disolución.
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Determinar el porcentaje de glucosamina disuelta según
se indica a continuación.
Solución estándar: Preparar según se indica en la
prueba de Contenido de Glucosamina. Diluir con una
cantidad adecuada de agua, si fuera necesario.
Solución muestra: Usar la solución en análisis.
Solución amortiguadora de borato, Solución amorti-
guadora de acetato, Reactivo de derivatización, Fase
móvil, Sistema cromatográfico y Análisis: Proceder
según se indica en la prueba de Contenido de
Glucosamina.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C5H13NÜs) disuelta:
Resultado= (ru/rs) x (Cs x VIL) x (M,1/M,2) x 100
ru = área del pico obtenida de la Solución muestra
derivatizada
rs = área del pico obtenida de la Solución estándar
derivatizada
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/ml)
V = volumen de Medio, 900 ml
L = cantidad declarada de glucosamina
(mg/Tableta)
M,, = peso molecular de glucosamina, 179,1 7
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de (C6Hl3NOs)
 USP 37
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES . la aplicación de soluciones y voltaje dentro de los 5
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. .
• ETIQUETADO: La etiqueta indica los tipos de sales de glu-
cosamina contenidos en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
ER Metilsulfonilmetano USP
Dimetil sulfona.
C2H602S 94, 13
Glucosamina, Condroitina Sulfato de
Sodio y Metilsulfonilmetano, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Glucosamina, Condroitina Sulfato de Sodio y
Metilsulfonilmetano se preparan a partir de Clor~i~rato de
Glucosamina, Sulfato de Glucosamina Cloruro Sod1co, Sul-
fato de Glucosamina Cloruro Potásico o una mezcla de
cualquiera de estos, con Condroitina ~ulfato de Sodio y
Metilsulfonilmetano. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no más de 120,0% 9e las cantida?es declaradas
de condroitina sulfato de sodio y glucosamina (C6HBNOs)
y no menos de 90,0% y no más de 110,0% de la canti-
dad declarada de metilsulfonilmetano (C2H602S).
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodi? es extrema_d~,mente
higroscópica una vez que se seca. Evitar la expos1c1on a la
atmósfera y pesar inmediatamente.]
IDENTIFICACIÓN
• A. PRESENCIA DE GLUCOSAMINA: El tiempo de retención
del pico principal de la Solución mue~tra corresponde al
de la Solución estándar, según se obtienen en la prueba
de Contenido de Glucosamina.
• 8. PRESENCIA DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
(Ver Electroforesis (726).) . .
Solución amortiguadora de acetato de bario: Disolver
25,24 g de acetato de bario en 900 n:L _de agua. Ajustar
con ácido acético a un pH de 5,0 y d1lu1r con agua
hasta 1 000 ml.
Reactivo de tinción: Azul de toluidina al O, 1 % (p/v) en
ácido acético O, 1 M
Solución estándar: Usar la Solución estándar de media
concentración de Contenido de Condroitina Sulfato de
Sodio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Conte-
nido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Análisis: Llenar las cámaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequeña cámara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solución amortiguadora de acetato de bono. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
12-14 cm, en Solución amortiguadora de acetato de ba:
ria durante 1 O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente y luego secar entre dos hojas de papel
absorbente. 'con ayuda de un aplicador 2 adecuado para
electroforesis, aplicar volúmenes iguales (0,5 µL) de So-
lución muestra y Solución estándar en el lado más bri-
llante de la membrana colocada en posición en un so-
porte de aplicador adecuado o en un puente de
separación en la cámara. Asegurar que ambos ext_remos
de la membrana estén sumergidos a una profundidad
de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cámaras con solu-
1 Las membranas de acetato de celulosa para electroforesis adecuadas están
disponibles en Malta Chemetron SRL, Milán, Italia (www.maltachemetron.
com); Fluka Chemical Corp., Milwaukee, WI; y D1aSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com). , . . .
2 Los aplicadores adecuados estan disponibles en D1aSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com) y Helena Laboratones, Beaumont, TX (www.helena.com).
Suplementos Dietéticos/ Glucosamina 6023
ción amortiguadora. Aplicar una constante de 60 voltios
(6 mA al inicio) durante 2 horas. [NOTA--Llevar a cabo
minutos, porque un mayor secado del papel absorbente
reduce la sensibilidad.]
Colocar la membrana en una bandeja de tinción de
plástico y, con el lado de la aplicación hacia .abajo, .
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo cJ,e tm-
ción durante 5 minutos. Luego, mezclar la soluc1on
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y
decolorar en ácido acético al 5% hasta que el fondo se
aclare.
Criterios de aceptación: La banda principal de la Solu-
ción muestra presenta la misma migración que la banda
principal de la Solución estándar. [NOTA-Documentar
los resultados tomando una fotografía dentro de los 15
minutos de completada la decoloración.]
• c. PRESENCIA DE METILSULFONILMETANO: El tiempo de re-
tención del pico principal de la Solución muestra corres-
ponde al de la Solución estándar, según se obtienen en
Contenido de Metilsulfonilmetano.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Diluyente: Transferir 29 µL de ácido acético y 5 mL de
acetonitrilo a un matraz volumétrico de 100 mL que
contenga 50 mL de agua y diluir con agua a volumen.
Solución amortiguadora de borato: 0,2 ~ ~76,3 g/L,
de borato de sodio en agua) ajustada con ac1do clorh1-
drico SR a un pH de 9,5
Solución amortiguadora de acetat.o: 6,80 g/L, d.e ace-
tato de sodio trihidrato en agua, ajustada con ac~do
acético diluido a un pH de 5,9. [NOTA-La soluc1on
amortiguadora se deb_e .almacenar a temperatura am-
biente y se puede ent1b1ar para disolver s1 se presenta
cristalización.]
Reactivo de derivatización: En un tubo de cultivo de
polipropileno de 14 mL, disolver 50 mg de o-ftalalde-
hído en 1 25 mL de metanol anhidro. Agregar 50 µL de
ácido 3-~ercaptopropiónico y 11,2 mL de Solución.
amortiguadora de borato y mezclar suavemente. Depr
en reposo en la oscuridad d~rante 30 n:inutos ante~ de
usar. [NOTA-La conc~ntracion del reactivo _s,e mantiene
agregando 1 O µL de acido 3-mercaptoprop1on1co cada
2 días. Se debe almacenar en la oscuridad a tempera-
tura ambiente y se puede usar durante no más de 2
semanas.]
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora de ace-
tato (1 :9) .
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en agua. Dejar en reposo a tempera-
tura ambiente durante 1 hora.
Solución muestra: Transferir el equivalente a 25 mg de
glucosamina, a p~rtir de no menos de 2~ T_abletas, re-
ducidas a polvo fino, a un matraz volumetnco de 25 mL
y diluir con Diluyente a volumen. Mezclar en un -~ezcla­
dor de vórtice hasta suspender el polvo en soluc1on.
Someter a ultrasonido en un baño de agua a 65º du-
rante 20 minutos. Retirar del baño, mezclar durante 5
minutos con ayuda de un agitador magnético y
centrifugar.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 340 nm
Columna: 3,0 mm x 5 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema .,
Muestras: Cinco alícuotas individuales de la Soluc1on
estándar derivatizadas según se indica en Análisis. Cada
alícuota derivatizada se inyecta una sola vez. .·
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para_ el ano-
mero {J y el anomero u. son 1,0 y 1,8, respectiva-
6024 Glucosamina /Suplementos Dietéticos
mente. El tiempo de retención para el anómero /3 es
no menos de 4 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en
cinco inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 1 00 µL del Reactivo de derivatización y 100 µL
de la Solución estándar o de la Solución muestra a un
vial que contenga 400 µL de Solución amortiguadora de
borato y dejar que la derivatización proceda durante 1
minuto. Inyectar las soluciones derivatizadas inmedia-
tamente después de la reacción de derivatización.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6H1 ,NOs) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = respuesta del pico del anómero f3 de la
Solución muestra derivatizada
rs = respuesta del pico del anómero f3 de la
Solución estándar derivatizada
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de glucosamina en la
Solución muestra (mg/ml)
M,¡ = peso molecular de glucosamina, 179,1 7
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
• CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Soluciones estándar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/ml de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solución muestra: Transferir el equivalente a 100 mg
de condroitina sulfato de sodio, a partir de no menos
de 20 Tabletas, reducidas a polvo fino, a 60 ml de agua
y agitar hasta suspender el polvo en la solución. Some-
ter a ultrasonido en un baño de agua a 65º durante 20
minutos. Retirar del baño, mezclar o agitar durante 5
minutos, diluir con agua hasta 100 ml y centrifugar o
pasar a través de un filtro adecuado.
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobásico de potasio, 492 mg de fosfato dibásico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en aproximada-
mente 900 ml de agua y ajustar con hidróxido de po-
tasio o ácido fosfórico a un pH de 7,0 ± 0,2. Diluir con
agua hasta 1 L y mezclar minuciosamente.
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración volumétrica con detección
fotométrica
Solución volumétrica: 1 mg/ml de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua
Detección del punto final: Turbidimétrica con una
sonda fototoeléctrica
Análisis: Transferir 5,0 ml de la Solución estándar y de
la Solución muestra a sendos vasos de valoración y agre-
gar 25 ml de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con una sonda fotoeléctrica ya
sea a 420; 550 ó 660 nm. Ajustar el instrumento a cero
en modo de absorbancia. Valorar con Solución volumé-
trica usando la sonda fotoeléctrica para determinar el
punto final turbidimétricamente. A partir de una ecua-
ción de regresión lineal, gue se calcula usando los volú-
menes de Solución volumetrica consumidos en función
de las concentraciones de las Soluciones estándar, deter-
minar la concentración de condroitina sulfato de sodio
en la Solución muestra.
USP 37
Calcular el porcentaje de condroitina sulfato de sodio
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solución muestra
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de condroitina sulfato
de sodio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
• CONTENIDO DE METILSULFONILMETANO
Diluyente: Transferir 950 ml de metanol a un matraz
volumétrico de 1 L. Agregar 0,60 ml de éter metílico de
dietilenglicol y diluir con metanol a volumen.
Solución estándar: 0,4 mg/ml de ER Metilsulfonilme-
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50º du-
rante 1 minuto y dejar que se enfríe a temperatura
ambiente.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Disolver una porción del material reducido
a polvo fino, equivalente a 1 Tableta, en Diluyente y
someter a ultrasonido durante 15 minutos a 50º. Dejar
que se enfríe a temperatura ambiente. Diluir cuantitati-
vamente con Diluyente hasta obtener una concentración
final de 0,4 mg/ml de metilsulfonilmetano. Transferir
1 ml de la suspensión a un tubo de microcentrífuga de
1,5 ml y centrifugar durante 20 segundos. Usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar, de 0,53 mm x 30 m, recubierta con
fase G2 de 5 µm
Temperatura
Columna: 1 20º
Inyector: 250º
Detector: 250º
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 5 ml/min
Volumen de inyección: 1 µL
Tipo de inyección Relación de partición, 2:1
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el cociente de respuesta entre los picos de metilsulfo-
nilmetano y éter metílico de dietilenglicol, en inyec-
ciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de me-
tilsulfonilmetano (C2H602S) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de
metilsulfonilmetano y éter metílico de
dietilenglicol de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de
metilsulfonilmetano y éter metílico de
dietilenglicol de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Metilsulfonilmetano USP
en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de metilsulfonilmetano
en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos de Disolución.
USP 37
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Determinar el porcentaje de glucosamina disuelta según
se indica a continuación.
Solución amortiguadora de borato, Solución amorti-
guadora de acetato, Reactivo de derivatización,
Fase móvil, Sistema cromatográfico y Análisis: Pro-
ceder según se indica en la prueba de Contenido de
Glucosa mina.
Solución estándar: Preparar según se indica en la
prueba de Contenido de Glucosamina. Diluir con una
cantidad adecuada de agua, si fuera necesario.
Solución muestra: Usar la solución en análisis.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6HnNOs) disuelta:
Resultado= (rulrs) x (Cs x VIL) x (M,¡IM,2) x 100
ru = área del pico obtenida de la Solución muestra
derivatizada
r5 = área del pico obtenida de la Solución estándar
derivatizada
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mglmL)
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de glucosamina
(mglTableta)
M, 1 = peso molecular de glucosamina, 179,1 7
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de (C6HnNOs)
Determinar el porcentaje de condroitina sulfato de so-
dio disuelta según se indica a continuación.
Solución volumétrica, Diluyente, Soluciones estándar
y Análisis: Proceder según se indica en la prueba de
Contenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Solución muestra: Usar la solución en análisis.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio disuelta:
Resultado= (C x VIL) x 100
C = concentración determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solución muestra
(mglmL)
V =volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de condroitina sulfato de
sodio (mglTableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de condroitina sulfato de sodio
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica los tipos de sales de glu-
cosamina contenidos en el artículo y las fuentes de las
que se obtuvo la condroitina. Etiquetar indicando las
fuentes de la condroitina sulfato de sodio, ya sea bovina,
porcina, avícola o una mezcla de cualquiera de éstas. La
etiqueta indica en el panel frontal el contenido de con-
drqitina sulfato de sodio con respecto a la materia seca.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
ER Metilsulfonilmetano USP
Dimetil sulfona.
C2H602S 94, 1 3
Suplementos Dietéticos / Glucosamina 6025
Clorhidrato de Glucosamina
'
C6 HuN0 5 · HCI 215,63
o-Glucose, 2-amino-2-deoxy-, hydrochloride;
Clorhidrato de 2-amino-2-desoxi-,B-D-glucopiranosa
[66-84-2].
DEFINICIÓN
El Clorhidrato de Glucosamina contiene no menos de
98,0% y no más de 102,0°/ci de clorhidrato de glucosa-
mina (C 6 HnNOs · HCI), calculado con respecto a la sustan-
cia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN ~N EL INFRARROJO (197K)
• B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191 ):
Cumple con los requisitos.
• C. El tiempo de retención del pico de glucosamina de la
Solución muestra corresponde al de la Solución estándar,
según se obtienen en la Valoración.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Solución amortiguadora: En un matraz volumétrico de
1 L, disolver 3,5 g de fosfato dibásico de potasio en
agua. Agregar 0,25 mL de hidróxido de amonio, diluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con ácido fosfó-
rico a un pH de 7,5.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solución estándar: 3,8 mglmL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente
Solución muestra: 3,8 mglmL de Clorhidrato de Gluco-
samina en Diluyente. [NOTA-Agitar por medios mecáni-
cos para ayudar en la disolución.]
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 mLlmin
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-El pico de la unidad de glucosamina eluye apro-
ximadamente a los 1O minutos. El cromatograma pre-
senta un pico adicional de gran tamaño cerca del vo-
lumen muerto, debido al ión cloruro.]
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
glucosamina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
teóricos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de clorhidrato de glucosamina
(C 6 H13 NOs · HCI) en la porción de Clorhidrato de Glu-
cosamina tomada:
Resultado= (rulrs) x (CICu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de la Solución estándar
6026 Glucosamina / Suplementos Dietéticos
C = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/ml)
(¡, = concentración de Clorhidrato de Glucosamina
en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 98,0%-1 02,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 0,1%
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221 ): Una porción de
O, 1 O g no presenta más sulfato que el correspondiente a
0,25 ml de ácido sulfúrico 0,020 N (No más de 0,24%).
• ARSÉNICO, Método 11 (211): No más de 3 ppm
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 1 o ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica (781 S): +70,0º a
+73 Oº
Sol~ción muestra: 25 mg/ml. Medir la rotación especí-
fica 3 horas después de su preparación.
• PH (791)
Solución muestra: 20 mg/ml
<;riterios de aceptación: 3,0-5,0
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105º
durante 2 horas: pierde no más de 1,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Sulfato de Glucosamina Cloruro
Potásico
(C6H14NOs)2S04 · 2KCI 605,52
Bis(D-glucose, 2-amino-2-deoxy-), sulfate potassium chloride
complex;
Complejo de sulfato de bis(2-amino-2-desoxi-/3-D-glucopira-
nosa) con cloruro de potasio (-,-) [38899-05-7J.
DEFINICIÓN
El Sulfato de Glucosamina Cloruro Potásico contiene no me-
nos de 98,0% y no más de 102,0% de sulfato de glucosa-
mina cloruro potásico [(C6H14NÜs)2SÜ4 · 2KCI], calculado
con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
Muestra: Transferir 50 mg de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Potásico a un tubo de centrífuga y disolver en
2 ml de agua. Agregar 0,5 ml de cloruro de bario SR y
centrifugar. Recoger el sobrenadante y evaporar hasta
sequedad. Secar el residuo a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: El espectro IR de la Muestra
corresponde al de una preparación similar de ER Clorhi-
drato de Glucosamina USP, excepto que se debe omitir
la adición de cloruro de bario SR .
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191) y
Potasio (191 ): Cumple con los requisitos.
• C. El tiempo de retención del pico de glucosamina de la
Solución muestra corresponde al de la Solución estándar,
según se obtienen en la Valoración.
• D. SULFATOS: En la prueba de Contenido de Sulfatos, des-
pués de la adición de cloruro de bario SR, se forma un
precipitado blanco.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Solución amortiguadora: En un matraz volumétrico de
1 L, disolver 3,5 g de fosfato dibásico de potasio en
USP 37
agua, agregar 0,25 ml de hidróxido de amonio, diluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con ácido fosfó-
rico a un pH de 7,5.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solución estándar: 3,8 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente. Agitar durante 5 minu-
tos mecánicamente para disolver por completo .
Solución muestra: Transferir 263 mg de Sulfato de Glu-
cosamina Cloruro Potásico a un matraz volumétrico de
50 ml. Disolver en 30 ml de Diluyente y agitar mecáni-
camente. Diluir con Diluyente a volumen .
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-El pico de la unidad de glucosamina eluye apro-
ximadamente a los 1O minutos. El cromatograma pre-
senta picos adicionales cerca del volumen muerto, de-
bido a los contraiones.]
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
glucosamina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
teóricos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de sulfato de glucosamina cloruro
potásico [(C6H14NOs)2S04 · 2KCI] en la porción de Sul-
fato de Glucosamina Cloruro Potásico tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Potásico en la Solución muestra
(mg/ml)
M,, = peso molecular de sulfato de glucosamina
cloruro potásico, 605,52
M,2 = dos veces el peso molecular de clorhidrato de
glucosamina, 431,26
Criterios de aceptación: 98,0%-102,0% con respecto
a la sustancia seca
OTROS COMPONENTES
• CONTENIDO DE SULFATOS
Muestra: 1 g de Sulfato de Glucosamina Cloruro
Potásico
Análisis: Transferir la Muestra a un vaso de precipitados
de 250 ml y disolver en 100 ml de agua. Agregar 4 ml
de ácido clorhídrico 6 N. Calentar la solución a ebulli-
ción y agregar, mezclando constantemente, suficiente
cloruro de bario SR hirviendo para precipitar completa-
mente el sulfato. Agregar 2 ml adicionales de cloruro
de bario SR y digerir en un baño de vapor durante 1
hora. Pasar la mezcla a través de un filtro de papel sin
cenizas. Transferir el residuo cuantitativamente a un fil-
tro nuevo y lavar el residuo con agua caliente hasta
que, al agregar 1 ml de nitrato de plata SR a 5 ml del
lavado, no se obtenga ningún precipitado. Transferir el
papel que contiene el residuo a un crisol tarado. Carbo-
nizar el papel, sin quemar, e incinerar el crisol y su con-
USP 37
tenido hasta peso constante. Calcul.ar el contenido de
sulfato multiplicando el peso obtenido por 0,411 6.
Criterios de aceptación: 15,5%-1 6,5%
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): 26,5%-31,0%
• SODIO: Una solución (1 en 1O) analizada en un alambre
de platino no imparte un color amarillo pronunciado a
una llama no luminosa.
• ARSÉNICO, Método 11 (211): No más de 3 µg/g
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 1 o ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica(781 S)
Solución muestra: 35 mg/ml. Medir la rotación especí-
fica 3 horas después de su preparación.
Criterios de aceptación: +47,0º a +53,0º
• PH (791)
Solución muestra: 20 mg/ml
Criterios de aceptación: 3,0-5,0
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
durante 2 horas: pierde no más de 1,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Sulfato de Glucosamina Cloruro Sódico
(C6H14NOs)2S04 · 2NaCI 573,31
Bis(D-glucose, 2-amino-2-deoxy-), sulfate sodium chloride
complex;
Complejo de sulfato de bis(2-amino-2-desoxi-f:l-D-glucopira-
nosa) con cloruro de sodio(-,-) [38899-05-7].
DEFINICIÓN
El Sulfato de Glucosamina Cloruro Sódico contiene no me-
nos de 98,0% y no más de 102,0% de sulfato de glucosa-
mina cloruro sódico [(C6H14NOs)2SÜ4 · 2NaCI], calculado
con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
Muestra: Transferir 50 mg de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Sódico a un tubo de centrífuga y disolver en
2 ml de agua. Agregar 0,5 ml de cloruro de bario SR y
centrifugar. Recoger el sobrenadante y evaporar hasta
sequedad. Secar el residuo a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: El espectro IR de la Muestra
corresponde al de una preparación similar de ER Clorhi-
drato de Glucosamina USP, omitiendo la adición de clo-
ruro de bario SR .
• B. IDENTIFICACIÓN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191) y
Sodio (191 ): Cumple con los requisitos.
• C. El tiempo de retención del pico de glucosamina de la
Solución muestra corresponde al de la Solución estándar,
según se obtienen en la Valoración. .
• D. SULFATOS: En la prueba de Contenido de Sulfatos, des-
pués de la adición de cloruro de bario SR, se forma un
precipitado blanco.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Solución amortiguadora: En un matraz volumétrico de
1 L, disolver 3,5 g de fosfato dibásico de potasio en
agua, agregar 0,25 ml de hidróxido de amonio, diluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con ácido fosfó-
rico a un pH de 7,5.
Suplementos Dietéticos / Glucosamina 6027
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solución estándar: 3,8 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente. Agitar mecánicamente
durante 5 minutos para disolver completamente.
Solución muestra: Transferir 250 mg de Sulfato de Glu-
cosamina Cloruro Sódico a un matraz volumétrico de
50 ml. Disolver en 30 ml de Diluyente y agitar mecáni-
camente. Diluir con Diluyente a volumen .
Sistema cromato9ráfico
(Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 µm
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O ill
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-El pico de la unidad de glucosamina eluye a
aproximadamente 1 O minutos. El cromatograma pre-
senta picos adicionales cerca del volumen muerto, de-
bidos a los contra-iones.]
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
glucosamina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
teóricos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de sulfato de glucosamina cloruro
sódico [(C6H14NÜs)2S04 · 2NaCI] en la porción de Sul-
fato de Glucosamina Cloruro Sódico tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (Mr1/M,2) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Sódico en la Solución muestra
(mg/ml)
M, 1 = peso molecular de sulfato de glucosamina
cloruro sódico, 573,31
M,2 = dos veces el peso molecular de clorhidrato de
glucosamina, 431,26
Criterios de aceptación: 98,0%-1 02,0% con respecto
a la sustancia seca
OTROS COMPONENTES
• CONTENIDO DE SULFATOS
Muestra: 1 g de Sulfato de Glucosamina Cloruro Sódico
Análisis: Transferir la Muestra a un vaso de precipitados
de 250 ml y disolver en 100 ml de agua. Agregar 4 ml
de ácido clorhídrico 6 N. Calentar la solución a ebulli-
ción y agregar, mezclando constantemente, suficiente
cloruro de bario SR en ebullición, para precipitar com-
pletamente el sulfato. Agregar 2 ml de cloruro de bario
SR adicionales y digerir en un baño de vapor durante 1
hora. Pasar la mezcla a través de un papel de filtro sin
cenizas. Transferir el residuo cuantitativamente a un
nuevo filtro y lavar el residuo con agua caliente h~sta
que no se forme precipitado al agregar 1 ml de nitrato
de plata SR a 5 ml de lavado. Transferir el papel que
contiene el residuo a un crisol tarado. Carbonizar el pa-
pel sin encenderlo, e incinerar el crisol y su contenido
ha;ta peso constante. Calcular el contenido de sulfato
multiplicando el peso obtenido por 0,4116.
6028 Glucosamina / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 16,3%-17,3%
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): 22,5%-26,0%
• ARSÉNICO, Método 11 (211): No más de 3 µg/g
• POTASIO
Análisis: Acidificar 5 ml de una solución (1 en 20) con
ácido acético 6 N y agregar 5 gotas de cobaltinitrito de
sodio SR.
Criterios de aceptación: No se forma precipitado.
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 1o ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica (781 S)
Solución muestra: 35 mg/ml. Medir la rotación especí-
fica 3 horas después de su preparación.
Criterios de aceptación: +50,0º a +55,0º
• PH (791)
Solución muestra: 20 mg/ml
Criterios de aceptación: 3,0-5,0
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105º
durante 2 horas: pierde no más de 1,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Ácido Glutámico
CsH9NQ4 147, 13
t,-Glutamic acid;
Acido S-2-aminopentanodioico [56-86-0].
DEFINICIÓN
El Ácido Glutámico contiene no menos de 98,5% y no más
de 101,5% de ácido L-glutámico (CsH9NQ4), calculado
con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO , que la mancha principal de la Solución estándar.
Muestra: 140 mg de Acido Glutámico
Blanco: Mezclar 6 ml de ácido fórmico y 50 ml de
ácido acético glacial.
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Acido perclórico O, 1 N SV
Detección del punto final: Potenciométrica
Análisis: Disolver la Muestra en 6 ml de ácido fórmico y
50 ml de ácido acético glacial, y valorar con la Solución
volumétrica. Realizar una determinación con el Blanco.
Calcular el porcentaje de ácido glutámico (CsH9NÜ4)
en la Muestra tomada:
Resultado= {[(Vs - Va) x N x f)/W} x 100
Vs = volumen de Solución volumétrica consumido
por la Muestra (ml)
Va = volumen de Solución volumétrica consumido
por el Blanco (ml)
USP 37
N = normalidad real de la Solución volumétrica
(mEq/mL)
F = factor de equivalencia, 147, 1 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 98,5%-1 01,5% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de o, 1%
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Solución estándar: 0,40 ml de ácido clorhídrico 0,01 O
N ,
Muestra: 0,7 g de Acido Glutámico
Criterios de aceptación: No más de 0,02%
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Solución estándar: ,0,25 ml de ácido sulfúrico 0,020 N
Muestra: 1,2 g de Acido Glutámico
Criterios de aceptación: No más de 0,02%
• HIERRO (241): No más de 1 o µg/g
• METALES PESADOS, Método 7 (231): No más de 10 µg/g
• COMPUESTOS RELACIONADOS ,
Solución estándar: 0,05 mg/ml de ER Acido Glutámico
USP en agua
Solución muestra: 1 O mg/ml en una solución de amo-
níaco SR y agua (1 :1)
S9lución de aptitud del siste1J1a: 0,4 m_g/ml de ER
Acido Aspártico USP y de ER Acido Glutamico USP en
agua
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Alcohol butílico, ácido acético glacial y
agua (3:1:1)
Solución reveladora: 2 mg/ml de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N (95:5)
Aptitud del sistema
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solución
de aptitud del sistema presenta dos manchas clara-
mente separadas.
Análisis: Después de secar la placa al aire, repetir el
proceso de desarrollo. Despues de secar la placa al aire
por segunda vez, rociar con Solución reveladora y calen-
tar a una temperatura entre 100º y 105º durante apro-
ximadamente 15 minutos. Observar la placa bajo luz
blanca.
Criterios de aceptación: Ninguna mancha secundaria
de la Solución muestra es de mayor tamaño o intensidad
Impurezas individuales: No más de 0,5%
Impurezas totales: No más de 2,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica (781 S)
Solución muestra: 1 00 mg/ml, en ácido clorhídrico
2N
Análisis: Proceder según se indica en el capítulo, ex-
cepto que se debe medir a 20º.
Criterios de aceptación: +31,5º a +32,5º
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105°
durante 3 horas: pierde no más de O, 1% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER -4.cido Aspártico USP
ER Acido Glutámico USP
 USP 37
Glutatión
Sii
() o •
Hü
J OH
NH o
CioH11Ni06S 307,32
Pentanoic acid, 2-amino-5-[(R)- l-(carboxymethylamino)-
3-mercapto-l -oxopropan-2-ylamino]-5-oxo, (S);
N-(N-L-y-Glutamil-L-cisteinil)glicina [70-18-8).
DEFINICIÓN
El Glutatión contiene no menos de 98,0% y no más de
101,0% de C10H11Ni06S, como glutatión, calculado con
respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROIO (197K)
• B. ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica (781 S)
Solución muestra: 40 mg/mL en agua
Criterios de aceptación: -15,5º a -1 7,5º, a 20º
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Muestra: 500 mg de glutatión previamente secado
Sistema volumétrico
(Ver Volumetría (541 ).)
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Yodo O, 1 N SV
Detección del punto final: Visual
Blanco: 50 mL de ácido metafosfórico (1 en 50)
Análisis: Disolver la Muestra en 50 mL de ácido meta-
fosfórico (1 en 50) y valorar con la Solución volumétrica.
Calcular el porcentaje de glutatión (C10H11Ni06S) en la
porción de Glutatión tomada:
Resultado = [(V - B) X N X F X 100)/W
V = volumen de solución volumétrica consumido
por la Muestra (mL)
B = volumen de solución volumétrica consumido
por el Blanco (mL)
N = normalidad de la solución volumétrica
(mEq/mL)
F =factor de equivalencia, 307,32 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 98,0%-101,0% con respecto
a la materia seca
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• AMONIO
Solución estándar: 1 O µg de amonio, a partir de una
solución de cloruro de amonio diluida
Solución muestra: 50 mg de Glutatión
Análisis: Transferir la Solución muestra y la Solución es-
tándar a sendos recipientes de 25 mL provistos con ta-
pas y disolver en 1 mL de agua. Agregar 0,30 g de
óxido de magnesio. Cerrar inmediatamente después de
colocar bajo las tapas un cuadrado de papel de manga-
neso/plata de 5 mm de lado humedecido con unas po-
cas gotas de agua. Agitar por rotación suave, evitando
proyecciones de líquido, y dejar en reposo a 40º du-
rante 30 minutos.
Criterios de aceptación: Si el papel de manganeso/
plata Fresenta un color gris, éste no es más intenso
q_ue e estándar (no más de 200 ppm) .
• ARSENICO (211 ): No más de 2 ppm
• CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221 ): Disolver 0,7 g con
agua hasta obtener 15 mL. La solución no presenta más
cloruro que el correspondiente a 0,20 mL de ácido clor-
hídrico 0,020 N (no más de 200 ppm).
Suplementos Dietéticos / Glutatión 6029
• CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221 ): Disolver 0,8 g con
agua hasta obtener 15 mL. La solución no presenta más
sulfato que el cmrespondiente a 0,25 mL de ácido sul-
fúrico 0,020 N (no más de 300 ppm) .
METALES PESADOS, Método I (231 ): No más de 1 o ppm
• HIERRO (241): No más de 1 O ppm
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de O, 1 %
Impurezas Orgánicas
• PROCEDIMIENTO
Fase móvil: 6,8 g/L de fosfato diácido de potasio con
2,02 g/L de 1-heptanosulfonato de sodio. Ajustar con
ácido fosfórico a un pH de 3,0. Mezclar 970 mL de esta
solución con 30 mL de metano!.
Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/ml de ER L-
Fenilalanina USP, 0,,5 mg/ml de ER Glutatión USP y.
0,5 m_g/mL 9e ER Acido Ascórbico USP en Fas~, movtl
Solucion estandar: 0,01 mg/mL de ER Glutat1on USP
en Fase móvil. [NOTA-Esta solución tiene una concen-
tración equivalente a 2,0% de la concentración de la
Solución muestra.]
Solución muestra: 50 mg de glutatión en 100 ml de
Fase móvil. [NOTA--Dejar la solución en reposo durante
5 minutos antes de su uso.]
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º .
Velocidad de flujo: Ajustar de manera que el tiempo
de retención de glutatión sea aproximadamente 5
minutos.
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5,0 entre los picos de
ácido ascórbico y glutatión; y no menos de 5,0 en-
tre los picos de glutatión y L-fenilalanina
Desviación estándar relativa: No más de 1,5% en
inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución e<;tándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de cualquier impureza en la por-
ción de Glutatión tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta de cualquier pico de la Solución
muestra diferente de glutatión
rs = respuesta del pico de glutatión de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Glutatión USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Glutatión en la Solución
muestra (m_g/mL)
Criterios de aceptacion
Impureza individual: No má_s, de 1,5% para la impu-
reza con el tiempo de retenc1on relativo de aproxima-
damente 4
Impurezas totales: No más de 2,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS ,
• TRANSPARENCIA Y (OLOR DE LA SOLUCION
Solución muestra: O, 1 g/ml en agua
Análisis: Usando tubos idénticos de vidrio incoloro,
transparente y neutro con base plan~ y _un diámetr.o
interno de 15-25 mm, comparar el l1qu1do a examinar
con agua, siendo la profundidad de la capa 40 mm.
Comparar los colores bajo luz diurna difusa, observando
verticalmente contra un fondo blanco .
Criterios de aceptación: La solución es transparente e
incolora.
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): No más de 0,5%, 105º du-
rante 3 horas
6030 Glutatión / Suplementos Dietéticos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
impermeables.
• ESTAl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Ascórbico USP
ER Glutatión USP
ER L-Fenilalanina USP
Guggul
DEFINICIÓN
El Guggul es la oleogomorresina que se obtiene por incisión
o se produce por exudación espontánea del tallo y las
ramas de Commiphora wightii (Arnott) Bhandari, también
conocida como Commiphora mukul (Hook. ex. Stocks)
Engl. o Ba/samodendrum mukul (Hook.) (Fam. Bursera-
ceae). Contiene no menos de 1,0% de gugulesteronas E y
Z, calculado con respecto a la materia seca como gugu-
lesterona Z.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1 O mg/ml de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 0,5 g
de Guggul triturado a un tubo de centrífuga. Agregar
25 ml de acetonitrilo y agitar durante 1 minuto. Calen-
tar en un baño de agua durante 1 0-15 minutos agi-
tando, enfriar, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Fase móvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Volumen de aplicación: 1 O µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cámara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas a valores RF de aproxima-
damente 0,38 y 0,47, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res RF a las bandas de la Solución estándar.
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta picos para gugulesterona E y Za
tiempos de retención que corresponden a los de la So-
lución estándar A.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E Y Z
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solución estándar A: 1 O mg/ml de ER Extracto de
Guggul Purificado USP en acetonitrilo, calentando. Pa-
sar la solución a través de un filtro con un tamaño de
poro de 0,45 µm antes de la inyección.
Solución estándar B: O, 1 mg/ml de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solución a través de un
filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de la
inyección.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Guggul triturado a un matraz Erlenmeyer y extraer
USP 37
cuatro veces cada una con una porción de 50 ml de
acetonitrilo. Agitar durante 1 minuto y someter a reflujo
en un baño de agua durante 30 minutos, mezclando
con un agitador magnético. Evaporar los extractos com-
binados hasta aproximadamente 50 ml y transferir a un
matraz volumétrico de 1 00 ml. Diluir con acetonitrilo a
volumen y pasar a través de un filtro con un tamaño de
poro de 0,45 µm antes de la inyección.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Temperatura de la columna: 27 ± 1 º
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en
inyecciones repetidas para el pico de gugulesterona
Z, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Dejar que la Solución estándar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retención de guguleste-
rona Z, según se determina en Solución estándar B.
Usando el cromatograma de la Solución estándar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retención de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Calcular el porcentaje de gugulesteronas E y Z como
gugulesterona Zen la porción de Guggul tomada:
Resultado = (ru/rs) X e X (V/W) X 100
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER Gugulesterona Z USP en
la Solución estándar B (m_g/ml)
V = volumen final de la Solucion muestra, 100 ml
W = peso de Guggul tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)// (231):, No más de 20 µg/g,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El Guggul se produce en conglomera-
dos redondeados o irregulares de lágrimas, de varios
tamaños, de color marrón claro a oscuro, ligeramente
pegajosos al tacto, con olor aromático característico y
un sabor aromático astringente.
USP 37
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1 ): No más de 1% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 33%
• EXTRACTOS SOLUBLES EN ACETATO DE ETILO
Muestra: Aproximadamente 5,0 g de Guggul reducido
a polvo grueso
Análisis: Transferir la Muestra a un matraz Erlenmeyer
con tapón de vidrio. Agregar 25 mL de éter de petró-
leo, tapar el matraz, agitar durante 1 hora, filtrar y de-
sechar el filtrado. Repetir dos veces y secar el residuo al
vacío sobre pentóxido de fósforo a temperatura am-
biente durante 8 horas. Triturar el material seco y ex-
traer con cuatro cantidades, cada una de 25 mL, de
acetato de etilo, agitando cada vez durante 1 hora a
temperatura ambiente, seguida por filtración a través de
un embudo de vidrio sinterizado (tamaño de poro Nº
3). Evaporar los filtrados combinados bajo presión redu-
cida en un matraz tarado, secar el residuo al vacío so-
bre pentóxido de fósforo a temperatura ambiente du-
rante 12 horas y pesar. Determinar el porcentaje de
extractos solubfes en acetato de etilo, calculados a par-
tir del peso de Guggul tomado.
~riterios de aceptación: 22%-30%
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g a 105º durante 2
horas: pierde no más,de 8,0% de su peso.
• RESIDUO DE INCINERACION (281): No más de 10,0%, inci-
nerado a 800 ± 25º
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar en
un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín de las especies de Commiphora de las que se ob-
tiene la oleogomorresina y, después de la denominación
ofic;ial, la parte de la planta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Extracto de Guggul Nativo
DEFINICIÓN
El Extracto de Guggul Nativo se prepara a partir de Gu9gul,
usando acetato de etilo, alcohol o metanol. La relacion
entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto Nativo
es aproximadamente 9:1. Contiene no menos de 5,0% de
gugulesteronas E y Z, calculadas con respecto a la materia
anhidra como gugulesterona Z. No contiene sustancias
agregadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solución muestra: Homogeneizar el Extracto de Gug-
gul Nativo calentando en un baño de agua a 60º-80º.
Preparar una solución de 5 mg/mL en acetonitrilo
calentando.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Fase móvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Suplementos Dietéticos / Guggul 6031
Volumen de aplicación: 1O µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cámara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas a valores RF de aproxima-
damente 0,38 y 0,47, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res RF a las bandas en el cromatograma de la Solución
estándar.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta picos para gugulesterona E y Za
tiempos de retención que corresponden a los de la So-
lución estándar A.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GUGULESTERONAS EY Z
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solución estándar A: 1O mg/mL de ER Extracto de
Guggul Purificado USP en acetonitrilo, calentando. Pa-
sar la solución a través de un filtro con un tamaño de
poro de 0,45 µm antes de la inyección .
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar fa solución a través de un
filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de la
inyección .
Solución muestra: Homogeneizar el Extracto de Gug-
gul Nativo calentando en un baño de agua a 60º-80º.
Disolver una cantidad pesada de Extracto Nativo homo-
geneizado, calentando, en acetonitrilo hasta obtener
una solución con una concentración conocida de apro-
ximadamente 0,2 mg/mL de gugulesteronas E y Z. Pa-
sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm antes de la inyección.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Temperatura de la columna: 27 ± 1º
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de gugulesterona Z (inyecciones repetidas),
Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Dejar que la Solución estándar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retención de guguleste-
rona Z, según se determina en Solución estándar B.
Usando el cromatograma de la Solución estándar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
6032 Guggul / Suplementos Dietéticos
los tiempos de retención de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Calcular el porcentaje de gugulesteronas E y Z como
gugulesterona Z en la porción de Extracto de Guggul
Nativo tomada:
Resultado = (rulrs) x Cs x (V/W) x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER Gugulesterona Z USP en
la Solución estándar B (m9/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra (mL)
W = peso de Extracto Nativo tomado para preparar
la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 5,0% de gugu-
lesteronas E y Z, calculado como gugulesterona Z, con
respecto a la materia anhidra.
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• EXTRACTOS BOTÁNICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921): No más de
5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar en
un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de Ja denominación oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artículo. c~rr:iple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botamcos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Extracto de Guggul Purificado
DEFINICIÓN
El Extracto de Guggul Purificado se prepara a partir de Ex-
tracto de Guggul Nativo mediante fraccionamiento
usando metano! acuoso. Contiene no menos de 90,0% y
no más de 110,0% de la cantidad declarada de gugules-
teronas E y Z, calculado como gugulesteronas Z. Puede
ser un extracto semisólido sin sustancias agregadas o ex-
tracto en polvo que contenga sustancias agregadas
adecuadas.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1 O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calent~".do. . inyecciones repetidas para el pico de gugulesterona
Solución muestra: 1O mg/mL en aceton1tnlo, a partir
de Extracto de Guggul Purificado, disolver calentando,
enfriar y centrifugar.
USP 37
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.) .
Fase móvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Volumen de aplicación: 1O µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cámara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la SC!lu-
ción muestra presenta bandas a valores RF de aproxima-
damente 0,38 y 0,47, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res RF a las bandas en el cromatograma de la Solución
estándar. ,
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta picos para gugulesterona E y Z a
tiempos de retención que corresponden a los de la So-
lución estándar A.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E Y Z
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solución estándar A: 1 O mg/mL de ER Extracto de
Guggul Purificado USP en acetonitrilo, calentando. Pa-
sar la solución a través de un filtro con un tamaño de
poro de 0,45 µm antes de la inyección .
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solución a través de un
filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de la
inyección .
Solución muestra: Disolver una cantidad pesada de Ex-
tracto de Guggul Purificado, calentando, en acetonitrilo
hasta obtener una solución con una concentración co-
nocida de aproximadamente 0,2 mg/mL de guguleste-
ronas E y Z. Pasar a través de un filtro con un tamaño
de poro de 0,45 µm antes de la inyección.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Temperatura de la columna: 27 ± 1 º
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en
Z, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
USP 37
Dejar que la Solución estándar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retención de guguleste-
rona z según se determina en Solución estándar B.
Usandb el cromatograma de la Solución estándar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retención de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Calcular el porcentaje de gugulesteronas E y Z como
gugulesterona Zen la porción de Extracto de Guggul
Purificado tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER Gugulesterona Z USP en
la Solución estándar B (m_g/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra (mL)
W = peso de Extracto de Guggul Purificado
tomado para preparar la Solución muestra
Criterios d~m2~eptación:
90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de gugulesteronas E y Z, calculado como gu-
gulesteronas Z
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• EXTRACTOS BOTÁNICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022):
Cumple con los requisitos de las prueb~s para .determinar
la ausencia de Salmonella spp. y Eschenchta colt.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar en
un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Guggul, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Guggul se preparan a partir de Extracto de
Guggul Nativo o Extracto de Guggul Purificado. Las Table-
tas contienen no menos de 90,0% y no más de 110,0%
de la cantidad declarada de Extracto, calculado como la
suma de gugulesteronas E y Z.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solución muestra: Reducir a polvo y transferir una por-
ción de las Tabletas equivalente a 1 00 mg de Extracto a
un matraz Erlenmeyer. Extraer tres veces, cada una con
Suplementos Dietéticos/ Guggul 6033
25 mL de acetonitrilo, en un baño de agua a 55° du-
rante 15 minutos mezclando con un agitador magné-
tico y filtrar. Evaporar los extractos combinados hasta
sequedad al vac10 a una temperatura entre 45º y 50º,
disolver el residuo en 1O mL de acetonitrilo, centrifugar
y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Fase móvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Volumen de aplicación: 1O µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cámara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas a valores R, de aproxima-
damente 0,38 y 0,47, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res RF a las bandas en el cromatograma de la Solución
estándar. ,
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta picos para gugulesterona E y Za
tiempos de retención que corresponden a los de la So-
lución estándar A.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E V Z
Fase móvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solución estándar A: 1 O mg/mL de ER Extracto de
Guggul Purificado USP en acetonitrilo, calentando. Pa-
sar la solución a través de un filtro con un tamaño de
poro de 0,45 µm antes de la inyección.
Solución estándar B: O, l mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solución a través de un
filtro con un tamaño de poro de 0,45 µm antes de la
inyección.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad pesada del
polvo, equivalente a aproximadamente 1 O mg de gugu-
lesteronas E y Z, a un matraz Erlenmeyer, y extraer
cinco veces, cada una con una porción de 20 mL de
acetonitrilo, agitar durante durante 1 minuto y someter
a reflujo en un baño de agua durante 30 minutos, mez-
clando con un agitador magnético. Evaporar los extrac-
tos combinados hasta sequedad al vacío a una tempera-
tura de 45º-50º. Disolver el residuo en 50,0 mL de
acetonitrilo y pasar a través de un filtro con un tamaño
de poro de 0,45 µm antes de la inyección.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Temperatura de la columna: 27 ± 1 º
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
6034 Guggul / Suplementos Dietéticos
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solución estándar A
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de gugulesterona Z (inyecciones repetidas),
Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Dejar que la Solución estándar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retención de guguleste-
rona Z, según se determina en Solución estándar B.
Usando el cromatograma de la Solución estándar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retención de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Calcular el contenido de 9ugulsteronas E y Z como gu-
gulsterona Zen la porcion de Tabletas tomada:
C, = (ru/rs) x Cs x V
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER Gugulesterona Z USP en
la Solución estándar B (m9/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra (mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Extracto
de Guggul tomada:
Resultado= e, X (Awr!W) X (100/LE) X (100/L)
C, = contenido de gugulesteronas E y Z en la
porción de Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de las Tabletas (mg)
W = peso de las Tabletas reducidas a polvo tomado
(mg)
LE = porcentaje declarado de la suma de
gugulesteronas E y Z en el Extracto usado
para preparar las Tabletas
L = cantidad declarada de Extracto (mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto, calculado como la suma de gu-
gulesteronas E y Z
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumple con el re-
quisito de Desintegración únicamente; 30 minutos, omi-
tiendo el uso del disco.
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
• DISOLVENTES RESIDUALES (467): Cumple con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
bién indica la cantidad de Extracto, en mg/Tableta y el
contenido, en mg, de gugulesteronas E y Z por 100 mg
de Extracto.
USP 37
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Glutamina-ver Glutamina en Monografías
Generales
Gymnema
DEFINICIÓN
La Gymnema consta de las hojas secas de Gymnema sylves-
tre (Retz.) R. Br. ex Schult. (Fam. Asclepiadaceae). Con-
tiene no menos de 1,0% de ácidos gymnémicos, calcula-
dos como gymnemagenina con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Cumple con los requisitos de Pruebas Específicas, Ca-
racterísticas Botánicas.
• 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Aproximadamente 0,5 g de Gym-
nema, reducida a polvo fino, en 5 mL de metano!. So-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de diclorometano, metano( y
ácido fórmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Una mezcla de metano! y
ácido sulfúrico (9: 1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografía en capa delgada de alta reso-
lución adecuada y secar al aire (ver Cromatografía
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cámara
saturada, retirar la placa de la cámara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatización, ca-
lentar a 11 Oº durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor RF de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solución
estándar A y la banda más prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
en color marrón bajo luz blanca y en color azul bajo
luz UV.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posición a las bandas del cromato-
grama de la Solución estándar 8: dos bandas a un valor
RF de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solución estándar
A; la banda más prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrón bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
USP 37
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de ésta.
• C. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnémicos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retención correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solución estándar A y un
pico adicional correspondiente a ácido
desacilgymnémico.
COMPOSICIÓN , , Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
• CONTENIDO DE ACIDOS GVMNEMICOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 ml de agua y agregar 0,5 ml de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1000 ml, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min)
(%) (%)
o 75 25
20 45 55
25 40 60
30 40 60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solución de hidróxido de potasio: Hidróxido de pota-
sio al 12% en agua
Solución de ácido clorhídrico: Ácido clorhídrico 4 N
Solución estándar A: 0,3 mg/ml de ER Gymnemage-
nina USP en metanol
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y
2 ml de Solución de hidróxido de potasio, someter a re-
flujo en un baño de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 ml de Solución de
ácido clorhídrico, someter a reflujo en un baño de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solución con Solución de hidróxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, transferir a un matraz volumétrico de
50 ml, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 0,75 g
de Gymnema, reducidos a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 100 ml
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
25 ml de Disolvente y 2 ml de Solución de hidróxido de
potasio, someter a reflujo en un baño de agua durante
1 hora y enfriar a temperatura ambiente. Agregar
5,5 ml de Solución de ácido clorhídrico, someter a reflujo
en un baño de agua durante 2 horas y enfriar a tempe-
ratura ambiente. Ajustar la solución con Solución de hi-
dróxido de potasio a un pH de 7,5-8,5, filtrar en un
matraz volumétrico de 100 ml, diluir con Disolvente a
volumen y mezclar. Antes de inyectar, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A mente sobre toda la periferia, uniseriados, multicelula-
Suplementos Dietéticos / Gymnema 6035
Temperatura de la columna: 25 ± l'
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gymnemagenina, Solución estándar A
el pico de gymnemagenina, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto Nativo de Gym-
nema USP usado, identificar los tiempos de retención
de los picos correspondientes a ácido desacilgymné-
mico y gymnemagenina de la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de ácidos gymnémicos, calcula-
dos como gymnemagenina, en la porción de Gym-
nema tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (V/ W) x 1 00
ru = área del pico de gymnemagenina de la
Solución muestra
rs = área del pico de gymnemagenina de la
Solución estándar A
Cs = concentración de gymnemagenina en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
W = peso de Gymnema usada para preparar la
Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método /JI (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
101 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Hojas opuestas; pecioladas; simples,
elípticas u ovadas; de ápice agudo; margen entero;
base aguda a acuminada; venación reticulada; rubes-
centes en ambas superficies, la superficie dorsa es más
pubescente; aproximadamente 2-6 cm de largo,
1-4 cm de ancho; la superficie superior es de color ma-
rrón amarillento, la superficie inferior es de color verde
oscuro; sabor amargo, al masticarla tiene la propiedad
de paralizar el sentido del gusto durante unas pocas
horas para sustancias dulces y amargas, particularmente
sustancias dulces. El artículo farmacopeico consiste en
hojas secas, quebradizas y de color verde a verde
amarillento.
Microscópicas
Sección transversal del pecíolo: En forma de herra-
dura. Se encuentran tricomas distribuidos profusa-
6036 Gymnema / Suplementos Dietéticos
res y de paredes anchas. Una capa de células
epidérmicas de paredes gruesas; 4-5 capas de corteza
colenquimatosa; y parénquima interno. Los haces vas-
culares se presentan como un arco en la parte media,
tres en número-dos laterales pequeños y uno grande
en medio. El haz de la parte media consta de efemen-
tos de xilema agrupados en hileras radiales, rodeadas
por floema. El xilema consta de elementos de vasos,
traqueidas y fibras. Se presentan cristales en forma de
roseta en las células colenquimáticas y parenquimáti-
cas, con mayor número en las células hacia ef centro.
Los gránulos de almidón son poligonales, simples o
compuestos, en grupos de dos o más, hilio indistinto.
Sección transversal de la lámina: Células de la epi-
dermis superior e inferior de paredes delgadas, cubier-
tas con una cutícula estriada delgada. Tricomas en am-
bas superficies, de una a tres células, uniseriados, y de
paredes gruesas. Una sola capa en empalizada debajo
de la epidermis superior que ocupa un tercio del gro-
sor de la lámina, seguida por 3-5 capas de células
parenquimáticas con grandes espacios intercelulares.
Sección transversal de la nervadura central: Células
de la epidermis superior e inferior de paredes delga-
das, cubiertas con una cutícula estriada delgada. Se
presentan tricomas uniseriados, de una a tres células y
de paredes gruesas, seguidos por 4-5 capas de células
parenquimáticas compactas en ambos lados de la ner-
vadura central; se presentan haces vasculares colatera-
les que forman un arco.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
coh,ol, Método I (561): ,No menos de 20%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
fi1étodo I (561): No menos de 20%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Gymnema reducida a polvo fino
Análisis: Secar a 105º durante 3 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 7,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema reducida a polvo fino
Cri,terios de aceptación:, No más de 15% , Rr de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema reducida a polvo fino
Criterios de aceptación: No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
plaJ1ta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Extracto Nativo de Gymnema
DEFINICIÓN
El Extracto Nativo de Gymnema se prepara a partir de Gym-
nema usando mezclas hidroalcohólicas. La relación entre
el material vegetal y el extracto es aproximadamente 8:1.
Contiene no menos de 5,0% de ácidos gymnémicos, cal-
culado como gymnemagenina con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metanol
USP 37
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución muestra: 20 mg/mL de Extracto Nativo de
Gymnema en metano!. Someter a ultrasonido durante
1O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de diclorometano, metanol y
ácido fórmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Una mezcla de metanol y
ácido sulfúrico (9: 1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografía en capa delgada de alta reso-
lución adecuada y secar al aire (ver Cromatografía
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cámara
saturada, retirar la placa de la cámara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatización, ca-
lentar a 11 Oº durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm .
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor Rr de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnema9enina en la Solución
estándar A y la banda más prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
en color marrón bajo luz blanca y en color azul bajo
luz UV.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posición a las bandas del cromato-
grama de la Solución estándar B: dos bandas a un valor
banda debida a gymnemagenina en la Solución estándar
A; la banda más prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrón bajo
luz blanca y en coror azul bajo luz UV; y en el tercio
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de ésta .
• B. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnémicos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retención correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solución estándar A y un
pico adicional correspondiente a ácido
desacilgymnémico.
COMPOSICIÓN , ,
• CONTENIDO DE ACIDOS GYMNEMICOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 75 25
20 45 55
25 40 60
USP 37
Tabla 1 (Continuación)
Tiempo Solución A Solución B
Cmin' (%) (O/o)
30 40 60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solución de hidróxido de potasio: Hidróxido de pota-
sio al 12% en agua , Cs
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico 4 N
Solución estándar A: 0,3 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 100 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 mL de Disolvente y
2 mL de Solución de hidróxido de potasio, someter a re-
flujo en un baño de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 mL de Solución de
ácido clorhídrico, some~er a reflujo en un baño de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solución con Solución de hidróxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, transferir a un matraz volumétrico de
50 mL, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
Nativo de Gymnema, equivalente a aproximadamente
30 mg de ácidos gymnémicos, a un matraz de fondo
redondo de 100 mL equipado con un condensador de
reflujo. Agregar 25 mL de Disolvente y 2 mL de Solución
de hidróxido de potasio, someter a reflujo en un baño de
agua durante 1 hora y enfriar a temperatura ambiente.
Agregar 5,5 mL de Solución de ácido clorhídrico, someter
a reflujo en un baño de agua durante 2 horas y enfriar
a temperatura ambiente. Ajustar la solución con Solu-
cjón de hidróxido de po,tasio a un pH de 7,5-8,5, transfe-
rir a un matraz volumetrico de 100 mL, diluir con Disol-
vent~ a volum~n y mezclar. Antes de inyectar, pasar a
traves de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,6 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gymnemagenina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de gymnemagenina 'en
inyecciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A
Solu~ión estándar B y el cromatograma de referenci~
provisto con el lot~ de ~~ Extract.o Nativo de Gym-
nema USP usado, 1dent1f1car los tiempos de retención
d~ los picos correspondientes a ácido desacilgymné-
m1co y gymnemagenina de la Solución muestra.
Suplementos Dietéticos/ Gymnema 6037
Calcular el porcentaje de ácidos gymnémicos, calcula-
dos como gymnemagenina, en la porción de Extracto
Nativo de Gyrnnema tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( C5/ Cu) x 100
ru = área del pico de gymnemagenina de la
Solución muestra
rs = área del pico de gymnemagenina de la
Solución estándar A
= concentración de gymnemagenina en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto Nativo de
Gymnema en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: No menos de 5,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)// (231): No más de 20 µg/g
• A~!ICULOS ~E ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
llSIS cf~ Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requ1s1tos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g .
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple co~ los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp. y Escherichia coli.
PR~EBAS ESPECÍFICAS
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto Nativo de Gymnema
Análisis: Secar a 105º durante 3 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 5,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Nativo de Gymnema
Cri,terios de aceptación~ No más de 8% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Nativo de Gymnema
Criterios de aceptación: No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Extracto Purificado de Gymnema
DEFINICIÓN
El Extracto Puri.ficado de Gymnema se prepara a partir de
Extracto Nativo de Gymnema mediante precipitación
usando solución de acido clorhídrico diluido. La relación
entre el material vegetal y el extracto es aproximada-
mente 25:1. Contiene no menos de 90,0% y no más de
110,0% de la cantidad declarada de ácidos gymnémicos
cal~ulado como gymnemagenina, con respecto a la ma-'
tena seca. Puede contener sustancias agregadas adecua-
das como vehículos.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
6038 Gymnema / Suplementos Dietéticos
Solución estándar B: 20 mg/ml de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución muestra: 20 mg/ml de Extracto Purificado
de Gymnema en metano!. Someter a ultrasonido du-
rante 1O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de diclorometano, metano/ y
ácido fórmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Una mezcla de metano/ y
ácido sulfúrico (9:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografía en capa delgada de alta reso-
lución adecuada y secar al aire (ver Cromatografía
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cámara
sat~rada, retirar la placa de la cámara, secar al aire,
denvatizar la placa con Reactivo de derivatización, ca-
lentar a 11 Oº durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor RF de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solución
estándar A y la banda más prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
en color marrón bajo luz blanca y en color azul bajo
luz UV.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posición a las bandas del cromato-
grama de la Solución estándar B: dos bandas a un valor
RF de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solución estándar
A; la banda más prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrón bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de ésta.
• B. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnémicos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta un pico principal a un tiempo de
r~tención correspondiente al del pico ,de gy!Tlnemage-
rnna en el cromatograma de la Solucion estandar A y un
pico adicional correspondiente a ácido
desacilgymnémico.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ÁCIDOS GYMNÉMICOS.
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 ml de agua y agregar 0,5 ml de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1000 ml, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (O/o) (º/o)
o 75 25
20 45 55
25 40 60
USP 37
Tabla 1 (Continuación)
Tiempo Solución A
-~
Solución B
(min) (%) (%)
30 40 60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solución de hidróxido de potasio: Hidróxido de pota-
sio al 12% en agua
Solución de ácido clorhídrico: Ácido clorhídrico 4 N
Solución estándar A: 0,3 mg/ml de ER Gymnemage-
nina USP en metanol
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 1 00 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y
2 ml de Solución de hidróxido de potasio, someter a re-
flujo en un baño de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 ml de Solución de
ácido clorhídrico, someter a reflujo en un baño de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solución con Solución de hidróxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, transferir a un matraz volumétrico de
50 ml, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto
Purificado de Gymnema, equivalente a aproximada-
mente 30 mg de ácidos gymnémicos, a un matraz de
fondo redondo de 1 00 ml equipado con un condensa-
dor de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y 2 ml de
Solución de hidróxido de potasio, someter a reflujo en un
baño de agua durante 1 hora y enfriar a temperatura
ambiente. Agregar 5,5 ml de Solución de ácido clorhí-
drico, someter a reflujo en un baño de agua durante 2
horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajustar la solu-
ción con Solución de hidróxido de potasio a un pH de
7,5-8,5, transferir a un matraz volumétrico de 100 ml,
diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes de in-
yectar, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros ml del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gymnemagenina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de gymnemagenina, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A
Solución estándar By el cromatograma de referenci~
provisto con el lote de ER Extracto Nativo de Gym-
nema USP usado, identificar los tiempos de retención
de los picos correspondientes a ácido desacilgymné-
mico y gymnemagenina en el cromatograma de la So-
lución muestra.
USP 37
Calcular el porcentaje (P) de ácidos gymnémicos, calcu-
lados como gymnemagenina, en la porción de Ex-
tracto Purificado de Gymnema tomada:
P = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de gymnemagenina de la
Solución muestra
rs = área del pico de gymnemagenina de la
Solución estándar A
Cs = concentración de gymnemagenina en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto Purificado de
Gymnema en la Solución muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
ácidos gymnémicos en la porción de Extracto
Purificado de Gymnema tomada:
Resultado= (P/L) x 100
P = contenido de ácidos gymnémicos según se
determinó anteriormente (%)
L = cantidad declarada de ácidos gymnémicos (%)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto Purificado de Gymnema
Análisis: Secar a 105º durante 3 horas.
Cri,terios de aceptación:, No más de 5,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Purificado de Gymnema
Cri,terios de aceptación~ No más de 8% , en color marrón bajo luz blanca y en color azul bajo
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Purificado de Gymnema
Criterios de aceptación: No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo. Etiquetar indi-
cando el contenido de ácidos gymnémicos, como por-
centaje. Cumple con otros requisitos de etiquetado en
Extr:actos Botanicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Gymnema en Polvo
DEFINICIÓN
La Gymnema en Polvo es Gymnema reducida a polvo o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 1,0% de ácidos
Suplementos Dietéticos / Gymnema 6039
gymnémicos, calculado como gymnemagenina, con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Cumple con los requisitos de Pruebas Específicos, Ca-
racterísticas Botánicas.
• B. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metanol
Solución estándar B: 20 mg/mL de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metanol. Someter a ultrasonido
durante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Aproximadamente 0,5 g de Gym-
nema en Polvo en 5 mL de metanol. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de diclorometano, metanol y
ácido fórmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: Una mezcla de metanol y
ácido sulfúrico (9:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografía en capa delgada de alta reso-
lución adecuada y secar al aire (ver Cromatografía
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cámara
saturada, retirar la placa de la cámara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatización, ca-
lentar a 11 Oº durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solución
estándar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor RF de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solución
estándar A y la banda más prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
luz UV .
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posición a las bandas del cromato-
grama de la Solución estándar B: dos bandas a un valor
RF de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solución estándar
A; la banda más prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrón bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de ésta.
• C. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnémicos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retención correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solución estándar A y un
pico adicional correspondiente a ácido
desacilgymnémico.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ÁCIDOS GYMNÉMICOS.
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
6040 Gymnema / Suplementos Dietéticos
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 75 25
20 45 55
25 40 60
30 40
60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solución de hidróxido de potasio: Hidróxido de pota-
sio al 1 2% en agua
Solución de ácido clorhídrico: Ácido clorhídrico 4 N
Solución estándar A: 0,3 mg/ml de ER Gymnemage-
nina USP en metanol
Solución estándar B: Transferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y
2 ml de Solución de hidróxido de potasio, someter a re-
flujo en un baño de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 ml de Solución de
ácido clorhídrico, someter a reflujo en un baño de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solución con Solución de hidróxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, transferir a un matraz volumétrico de
50 ml, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 0,75 g
de Gymnema en Polvo, pesados con exactitud, a un
matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y
2 ml de Solución de hidróxido de potasio, someter a re-
flujo en un baño de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 ml de Solución de
ácido clorhídrico, someter a reflujo en un baño de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solución con Solución de hidróxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, filtrar en un matraz volumétrico de
1 00 ml, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. An-
tes de inyectar, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A f.1étodo I (561 ):No menos de 20%
Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
gymnemagenina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de gymnemagenina, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
USP 37
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto Nativo de Gym-
nema USP usado, identificar los tiempos de retención
de los picos correspondientes a ácido desacilgymné-
mico y gymnemagenina de la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de ácidos gymnémicos, calcula-
dos como gymnemagenina, en la porción de Gym-
nema en Polvo tomada:
Resultado = (ru/r5) x C5 x (V/W) x 100
ru = área del pico de gymnemagenina de la
Solución muestra
rs = área del pico de gymnemagenina de la
Solución estándar A
Cs = concentración de gymnemagenina en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
W = peso de Gymnema en Polvo usada para
preparar la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)// (231):_ No más de 20 µg/g_
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 Q3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Microscópicas
Al microscopio, presenta fragmentos de la epidermis su-
perior e inferior, con células epidérmicas poligonales,
de paredes delgadas y rectas, cubiertas con una cutí-
cula estriada y con estomas anomocíticos; se encuen-
tran presentes tricomas en ambas superficies, de una a
tres células, uniseriados, y con paredes gruesas; frag-
mentos de células colenquimáticas y parenquimáticas,
algunos contienen rosetas de oxalato de calcio; gránu-
los de almidón, poligonales, simples o compuestos, hi-
lio indistinto; fragmentos de vasos reticulados y espira-
l51dos, y traqueidas. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método I (561): No menos de 20%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Gymnema en Polvo
Análisis: Secar a 105º durante 3 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 7,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema en Polvo
Cri,terios de aceptación~ No más de 15% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema en Polvo
Criterios de aceptación: No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta usada para preparar el artículo.
USP 37
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Hidrastis
DEFINICIÓN
El Hidrastis se compone de las raíces y rizomas secos de
Hydrastis canadensis L. (Fam. (Ranunculaceae). Contiene
no menos de 2,0% de hidrastina (C21 H21 N06) y no menos
de 2,5% de berberina (C20Hl8N04), calculado con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Cloruro de Berbe-
rina USP y de ER Hidrastina USP en metano!
Solución muestra: Reducir a polvo fino el rizoma y la
raíz. Transferir 0,5 g del polvo a un vial de vidrio ade-
cuado y agregar 0,5 mL de carbonato de sodio al 10%.
Agregar 5 mL de metano! y calentar durante 1O minu-
tos en un baño de agua a 60º. Enfriar a temperatura
ambiente, filtrar y secar bajo una corriente de nitró-
geno. Agregar 0,5 mL de metano! para disolver el
residuo.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 1 0-20 µL, en bandas
Fase móvil: Acetato de etilo, alcohol butílico ácido fór-
mico y agua (5:3:1 :1) ' rs
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa, secar al aire y observar bajo luz
UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: Los cromatogramas presentan
zonas con fluorescencia de color amarillo limón debidas
a berberina a u~ valor Rr de aproximadamente 0,53 y
una fluorescencia de color blanco azulado debida a hi-
drastina a un valor Rr de aproximadamente 0,42.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE BERBERINA E HIDRASTINA Y LÍMITE DE
PALMATINA
Fase móvil: Disolver 9,93 g de fosfato monobásico de
potasio en 730 mL de agua, agregar 270 mL de aceto-
nitrilo, mezclar, filtrar y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de fosfato monobásico de po-
tasio O, 1 M y acetonitrilo (60:40)
Solución estandar: 0,05 mg/mL de ER Cloruro de Ber-
berina USP y de ER Hidrastina USP en una mezcla de
metano! y agua (1 :1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de palmatina en una mezcla de agua y metano! (1 :1)
con una concentración conocida de aproximadamente
0,05 mg/mL. Mezclar volúmenes iguales de esta solu-
ción y de la Solución estándar.
Solución muestra: Reducir a polvo fino una cantidad
de Hidrastis y transferir aproximadamente O, 12 g, pesa-
dos con exactitud, a un matraz volumétrico de 50 ml.
Agregar 40 mL de Disolvente, someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos y agitar durante 1O minutos. Diluir con
Disolvente a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Suplementos Dietéticos / Hidrastis 6041
Modo: HPLC
Detector: UV 235 nm
Columna: 4,6 mm x 150 mm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No. menos de 1,5 entre los picos de ber-
berina y palmat1na, y no menos de 1,5 entre los pi-
cos de hidrastina y palmatina, Solución de aptitud del
sistema
Factor de capacidad: No menos de 3,0, determi-
nado a partir de los picos de hidrastina y berberina,
Solución estándar
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos determinados a partir de los picos de hidras-
tina y berberina, Solución estándar
Factor de asimetría: No más de 2,0, determinado a
partir de los picos de hidrastina y berberina, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2 5% de-
terminada a partir de los picos de hidrastina' y b'erbe-
rina en inyecciones repetidas, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular los porcentajes de berberina e hidrastina en la
porción de Hidrastis tomada:
Resultado = (ru!rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de berberina o hidrastina de la
Solución muestra
= área del pico de berberina o hidrastina de la
Solución estándar
Cs = concentración de berberina o hidrastina en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Hidrastis reducida a polvo usado para
preparar la Solución muestra (mg)
Con los valores obtenidos del cromatograma de la
Solución muestra, dividir el área del pico de berberina
por el área de cualquier pico en el sitio de palmatina
(si estuviera presente).
Criterios de aceptación: No menos de 2,0% de hi-
drastina (C21 H21 N06) y no menos de 2,5% de berbe-
rina (C20H1sN04), con respecto a la materia seca. La
relació~ entre la? áreas de .l?s picos de berberina y
cualquier otro pico en el s1t10 de palmatina es mayor
de 50:1.
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)// (231): No más de 20 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macr?scópicas: El rizom~ es n~doso, subcilíndrico y en
ocasiones con un tallo aereo. Tiene 1-5 cm de longitud
y 2-1 O mm de diámetro. En la parte externa, el rizoma
es de color marrón a anaranjado amarillento oscuro,
con surcos profundos y marcado con numerosas cicatri-
ces escamosas de inserción del tallo y yemas. Numero-
sas raíces quebradizas brotan desordenadamente del
mismo lado del eje principal. Las fracturas son cortas y
resinosas, con una corteza de color amarillo oscuro a
marrón amarillento, bordes de color amarillo verdoso y
un centro de color anaranjado amarillento de apariencia
cerosa. También se presenta un círculo interrumpido de
pequeños haces fibrovasculares radialmente alargados.
Las raíces son filiformes, de hasta 35 cm de longitud y
de 1 mm de diámetro, curvadas o torcidas, enredadas
6042 Hidrastis / Suplementos Dietéticos
entre sí o rotas. Las fracturas son cortas y quebradizas y
presentan en su interior un color anaranjado amarillento
a amarillo verdoso.
Histología
Sección transversal del rizoma y la raíz: El rizoma
presenta células suberosas poligonales de color marrón
amarillento con paredes delgadas a ligeramente grue-
sas. Los haces vasculares en forma de cuña están sepa-
rados por radios medulares amplios. Los elementos tra-
queales están lignificados y presentan puntuaciones en
forma de hendidura. Tambien se presentan unos pocos
vasos grandes con engrosamientos reticulados. El te-
jido parenquimático está compuesto por células poli-
gonales con abundantes granos de almidón simples o
compuestos de hasta 8 µm de diámetro. En la corteza
y la médula se encuentran presentes unas pocas célu-
las con formas irregulares productoras de resina. Asi-
mismo, en los tejidos parenquimáticos se encuentran
presentes masas de materia granular de color marrón
anaranjado. Las raíces tienen una sola capa de células
suberosas irregularmente alargadas. Los elementos tra-
queales se asocian con fibras lignificadas. En ocasiones,
se presentan fragmentos de la epidermis cerca de la
base del rizoma y están compuestos por células con
garedes gruesas, lignifi,cadas en forma de rosario.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2 g de Hidrastis redu-
cida a polvo fino a 1 00º durante 5 horas: pierde no más
de ,12,0% de su peso. , con una concentración conocida de aproximadamente
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 9%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar protegiendo de la luz, la hume-
dad y el calor.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la glanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cloruro de Berberina USP
ER Hidrastina USP
Hidrastis en Polvo
DEFINICIÓN
El Hidrastis en Polvo es Hidrastis reducido a polvo fino o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 2,0% de hidras-
tina (C21 H21 N0 6 ) y no menos de 2,5% de berberina
(C20HrnN04), calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Cloruro de Berbe-
rina USP y de ER Hidrastina USP en metanol
Solución muestra: Transferir aproximadamente 0,5 g
de Hidrastis en Polvo, pesado con exactitud, a un vial
de vidrio adecuado y agregar 0,5 mL de carbonato de
sodio al 10%. Agregar 5 mL de metanol y calentar du-
rante 1 O minutos en un baño de agua a 60º. Enfriar a
temperatura ambiente, filtrar y secar bajo una corriente
de nitrógeno. Agregar 0,5 mL de metanol para disolver
el residuo.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
USP 37
Volumen de aplicación: 1 0-20 µL, en bandas
Fase móvil: Acetato de etilo, alcohol butílico, ácido fór-
mico y agua (5:3:1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa, secar al aire y observar bajo luz
UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: Los cromatogramas presentan
zonas con fluorescencia de color amarillo limón debidas
a berberina a un valor Rr de aproximadamente 0,53 y
una fluorescencia de color blanco azulado debida a hi-
drastina a un valor Rr de aproximadamente 0,42.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE BERBERINA E HIDRASTINA Y LÍMITE DE
PALMA TINA
Fase móvil: Disolver 9,93 g de fosfato monobásico de
potasio en 730 mL de agua, agregar 270 mL de aceto-
nitrilo, mezclar, filtrar y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de fosfato monobásico de po-
tasio O, l M y acetonitrilo (60:40)
Solución estandar: 0,05 mg/mL de ER Cloruro de Ber-
berina USP y de ER Hidrastina USP en una mezcla de
metanol y agua (1 :1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de palmatina en una mezcla de agua y metanol (1 :1)
0,05 mg/mL. Mezclar volúmenes iguales de esta solu-
ción y de la Solución estándar.
Solución muestra: Transferir aproximadamente O, 12 g
de Hidrastis en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz volumétrico de 50 ml. Agregar 40 mL de Disol-
vente, someter a ultrasonido durante 5 minutos y agitar
durante 1 O minutos. Diluir con Disolvente a volumen,
mezclar y filtrar.
Sistema cromato!;Jráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 235 nm
Columna: 4,6 mm x 150 mm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de ber-
berina y palmatina, y no menos de 1,5 entre los pi-
cos de hidrastina y palmatina, Solución de aptitud del
sistema
Factor de capacidad: No menos de 3,0, determi-
nado a partir de los picos de hidrastina y berberina,
Solución estándar
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos determinados a partir de los picos de hidras-
tina y berberina, Solución estándar
Factor de asimetría: No más de 2,0, determinado a
partir de los picos de hidrastina y berberina, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,5%, de-
terminada a partir de los picos de hidrastina y berbe-
rina en inyecciones repetidas, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular los porcentajes de berberina e hidrastina en la
porción de Hidrastis en Polvo tomada:
Resultado= (r11/r1) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de berberina o hidrastina de la
Solución muestra
USP 37
r, = área del pico de berberina o hidrastina de la
Solución estándar
C1 = concentración de berberina o hidrastina en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Hidrastis en Polvo usado para
preparar la Solución muestra (mg)
Con los valores del cromatograma de la Solución
muestra, dividir el área del pico de berberina por el
área de cualquier pico en el sitio de palmatina (si
estuviera presente).
Criterios de aceptación: No menos de 2,0% de hidras-
tina (C21 H21 N06) y no menos de 2,5% de berberina
(C 20 H, 8 N04), con respecto a la materia seca. La relación
entre las áreas de los picos de berberina y cualquier
otro pico en el sitio de palmatina es mayor de 50:1.
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método fil (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: El polvo es de color amarillo
oscuro a amarillo moderadamente verdoso, con olor aro-
mático y sabor amargo. Se presentan abundantes gránu-
los de almidón con formas esféricas u ovoides; los gránu-
los son simples o compuestos, en ocasiones con con hilo
en forma de hendidura. Las células parenquimáticas va-
rían de poligonales a redondas y están rellenas de almi-
dón o resina de color marrón. Se encuentran presentes
elementos traqueales con puntuaciones en forma de hen-
didura y unos pocos vasos reticulados de gran tamaño,
además de células epidérmicas alargadas de paredes
gruesas en forma de rosario. También se presentan frag-
mentos delgados de capa suberosa.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2 g de Hidrastis en
Polvo a 100º durante 5 horas: pierde no más de 12,0%
de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 9% , una mezcla de metanol y agua (1 :1). Someter a ultraso-
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 5%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar protegiendo de la luz y la
humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, las partes de
la glanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cloruro de Berberina USP
ER Hidrastina USP
Extracto en Polvo de Hidrastis
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Hidrastis se prepara a partir de raíces
y rizomas secos y reducidos a polvo de Hydrastis canaden-
sis L. (Fam. Ranunculaceae), usando disolventes adecua-
dos. Contiene no menos de 5% de hidrastina (C21H21N06)
y no menos de 10% de la suma de berberina (C20H1sN04)
e hidrastina, calculado con respecto a la materia seca. La
relación entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo es 2:1.
Suplementos Dietéticos/ Hidrastis 6043
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Cloruro de Berbe-
rina USP y de ER Hidrastina USP en metanol
Solución muestra: 1 O mg/mL de Extracto en Polvo en
una mezcla de metanol y agua (1: 1 ). Someter a ultraso-
nido durante 20 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y filtrar.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 10-20 µL, en bandas
Fase móvil: Acetato de etilo, alcohol butílico, ácido fór-
mico y agua (5:3:1 :1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa, secar al aire y observar bajo luz
UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: Los cromatogramas presentan
zonas con fluorescencia de color amarillo limón debidas
a berberina a un valor RF de aproximadamente 0,53 y
una fluorescencia de color blanco azulado debida a hi-
drastina a un valor RF de aproximadamente 0,42.
COMPOSICIÓN ,
• CONTENIDO DE BERBERINA E HIDRASTINA Y LIMITE DE
PALMATINA
Fase móvil: Disolver 9,93 g de fosfato monobásico de
potasio en 730 mL de agua, agregar 270 mL de aceto-
nitrilo, mezclar, filtrar y desgasificar.
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Cloruro de Ber-
berina USP y de ER Hidrastina USP en una mezcla de
metano! y agua (1 :1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de palmatina en una mezcla de agua y metanol (1 :1)
con una concentración conocida de aproximadamente
0,05 mg/mL. Mezclar volúmenes iguales de esta solu-
ción y de la Solución estándar.
Solución muestra: 2 mg/mL de Extracto en Polvo en
nido durante 20 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y filtrar. [NOTA-La mezcla que se va a usar en
esta prueba no debe someterse a las condiciones espe-
cificadas en la prueba de Pérdida por Secado. Se usa una
muestra separada para determinar el contenido con res-
pecto a la materia seca.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 235 nm
Columna: 4,6 mm x 150 mm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de ber-
berina y palmatina, y no menos de 1,5 entre los pi-
cos de hidrastina y palmatina, Solución de aptitud del
sistema
Factor de capacidad: No menos de 3,0, determi-
nado a partir de los picos de hidrastina y berberina,
Solución estándar
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos determinados a partir de los picos de hidras-
tina y berberina, Solución estándar
Factor de asimetría: No más de 2,0, determinado a
partir de los picos de hidrastina y berberina, Solución
estándar
6044 Hidrastis / Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 2,5%, de-
terminada a partir de los picos de hidrastina y berbe-
rina en inyecciones repetidas, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular los porcentajes de berberina e hidrastina en la
porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de berberina o hidrastina de la
Solución muestra
rs = área del pico de berberina o hidrastina de la
Solución estándar
C5 = concentración de berberina o hidrastina en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Solución muestra (mg/mL)
Con los valores del cromatograma de la Solución
muestra, dividir el área del pico de berberina por el
área de cualquier pico en el sitio de palmatina (si
estuviera presente).
Criterios de aceptación: No menos de 5% de hidras-
tina y no menos de 10% de la suma de hidrastina y
berberina, con respecto a la materia seca. La relación
entre las áreas de los picos de berberina y cualquier
otro pico en el sitio de palmatina es mayor de 50:1.
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos .
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de 5,0% de
su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar protegiendo de la luz y la
humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. Etiquetar
indicando el contenido de hidrastina y berberina, el disol-
vente de extracción usado para la preparación y la rela-
ción entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto
en Polvo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cloruro de Berberina USP
ER Hidrastina USP
Hidroxocobalamina-ver
Hidroxocobalamina en Monografías Generales
Histidina-ver Histidina en Monografías
Generales
USP 37
lsoleucina-ver lsoleucina en Monografías
Generales
Jengibre
DEFINICIÓN
El jengibre es el rizoma seco de Zingiber officinale Roscoe
(Fam. Zingiberaceae), pelado, parcialmente pelado o sin
pelar. Se conoce comercialmente como jengibre no
blanqueado.
IDENTIFICACIÓN
•A.
Análisis: Reducir a polvo 5 g de jengibre. Agregar 5 mL
de ácido acético diluido, preparado diluyendo 1 parte
de ácido acético glacial con 1 parte de agua, a 1 g de
jengibre, reducido a polvo, y agitar durante 15 minu-
tos. Filtrar y agregar unas gotas de oxalato de amonio
SR al filtrado.
Criterios de aceptación: No se produce más que una
ligera turbidez.
• B.
Muestra: 50 mg del residuo obtenido en la prueba de
Artículos de Origen Botánico, Extractos Solubles en
Alcohol.
Análisis: Disolver la Muestra en 25 mL de agua y ex-
traer esta solución con dos porciones de 15 mL de éter.
Combinar los extractos etéreos y evaporar en una cáp-
sula de porcelana. Agregar 5 mL de solución de ácido
sulfúrico (7,5 en 10,0) y 5 mg de vainillina al residuo.
Dejar en reposo durante 15 minutos y agregar un volu-
men igual de agua.
Criterios de aceptación: La solución se torna azul
celeste. , ,
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: Proceder según se indica en Solu-
ción muestra, excepto que se deben usar 0,2 g de ER
jengibre en Polvo USP .
Solución estándar B: Usar la Solución de aptitud del sis-
tema, preparada según se indica en la prueba de Conte-
nido de Gingeroles y Gingerdionas.
Solución muestra: Reducir a polvo 5 g de Jengibre.
Transferir 0,2 g de Jengibre reducido a polvo a un tubo
de ensayo, agregar 5 mL de metanol, agitar durante 30
minutos y centrifugar. Aplicar el sobrenadante a la
placa.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de aplicación: 20 µL para la Solución muestra
y la Solución estándar A; 40 µL para la Solución estándar
B ,
Fase móvil: Eter y hex9nos (7:3)
Solución reveladora: Acido sulfúrico al 10% en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo. Observar la
placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la placa con Solu-
ción reveladora, calentar a 100º-105º durante 1 O mi-
nutos y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una mancha debida a gingeroles
que ocurre a un valor R1 de 0,2. Se puede presentar
una mancha de shogaoles a un valor RF de 0,4, corres-
pondiente a la presente en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B. [NOTA-Los cromatogramas de la Solu-
ción muestra y Solución estándar A pueden Fresentar
otras manchas en la región superior y en e origen de la
placa.]
USP 37 Suplementos Dietéticos / Jengibre 6045

COMPOSICIÓN C = concentración de ER Capsaicina USP en la

• CONTENIDO DE GINGEROLES Y GINGERDIONAS Solución estándar (mg/mL)
Solución A: Acetonitrilo, ácido fosfórico diluido (1 en W = peso de jengibre usado en la prueba de
1000) y metano! (55:44:1) Artículos de Origen Botánico, Extractos Solubles
Solución B: Acetonitrilo en Alcohol (g)
Fase móvil: Usar la Solución A durante no menos de Criterios de aceptacion: No menos de 0,8%
siete veces el tiempo de retención de capsaicina.
Lavado de la columna: Después de cada corrida cro- CONTAMINANTES
matográfica, lavar la columna, según se indica en la • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
Tabla 7. (561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 os ufc/g; el recuento total
Tabla 1
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Tiempo Solución A Solución B cede de 10 3 ufc/g; el recuento de bacterias Gram-negati-
(min) (%) (O/o) vas tolerantes a la bilis no excede d~ 1 0 3 ufc/g.
o 100 o • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
2 o 100 ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
12 o 100
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
14 100 o PRUEBAS ESPECÍFICAS
29 100 o • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Los rizomas de jengibre se presentan
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Capsaicina USP en piezas aplanadas horizontal y lateralmente ramifica-
en metano! das simpodialmente. Los rizomas enteros son de
Solución de aptitud del sistema: Reconstituir el conte- 5-15 cm de largo, de 1,5-6 cm de ancho y de hasta
nido de 1 vial de ER Mezcla de Componentes de jengi- 2 cm de grosor; a veces se dividen longitudinalmente;
bre USP en 1 mL de la Solución estándar. su parte externa presenta un color beige amarillento
Solución muestra: Usar el filtrado reservado de la pálido o marrón claro, es estriada longitudinalmente y
prueba de Artículos de Origen Botánico, Extractos Solubles algo fibrosa; las ramificaciones son aplanadas, obova-
en Alcohol. das, cortas, aproximadamente de 2 cm de largo, y cada
Sistema cromato9ráfico una termina con una cicatriz hendida en el tallo; la frac-
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) tura es corta con fibras salientes o, a veces, resinosas; su
Modo: HPLC interior es de color marrón amarillento, presenta una
Detector: UV 282 nm endodermis amarilla que separa la corteza estrecha de
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 la estela ancha, observándose múltiples puntos amari-
Velocidad de flujo: 1 ml/min llentos, células secretoras y numerosos puntos grisáceos
Volumen de inyección: 25 µL más grandes, haces vasculares, dispersos en toda la su-
Aptitud del sistema perficie. El rizoma sin pelar presenta, además, una capa
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del externa de súber marrón oscuro. Las características
sistema morfológicas de distintas variedades y formas de jengi-
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 6-ginge- bre provenientes de distintas áreas geográficas se espe-
rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8; cifican en la Tabla 7 del capítulo de información general
1,0; y 1,9, respectivamente, Solución de aptitud del Información Complementaria para Artículos de Origen Bo-
sistema.] tánico (2030).
Requisitos de aptitud Histología: Un corte transversal del rizoma pelado pre-
Resolución: No menos de 3,0 entre los picos de senta una corteza constituida por capas múltiples de
6-gingerol y capsaicina; y no menos de 10,0 entre los células parenquimáticas con abundantes gránulos de al-
picos de capsaicina y 6-shogaol, Solución de aptitud midón simples, grandes, aplanados, ovoides o en forma
del sistema de saco, de 5-15 µm de ancho y 30-60 µm de largo,
Factores de asimetría: No más de 2,0 para los picos con un hilio excéntrico, algunos con estrías transversales
de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solución de ap- leves. La corteza también presenta numerosas células
titud del sistema oleorresinosas con un contenido de color amarillo o
Desviación estándar relativa: No más de 2,5%, Solu- marrón amarillento y haces vasculares colaterales disper-
ción estándar sos; una única capa de células endodérmicas sin almi-
Análisis dón; una estela central ancha constituida por células
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu- parenquimáticas abundantes en almidón y células oleo-
ción de aptitud del sistema rresinosas similares a las de la corteza, y que contiene
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos haces vasculares colaterales dispersos, algunos recubier-
a gingeroles y gingerdionas, que se presentan aproxi- tos de una vaina de fibras tabicadas no lignificadas con
madamente a los siguientes tiempos de retencion, re- un lumen ancho. Además de lo mencionado anterior-
lativos a 1,0 para capsaicina: 0,8 para 6-gingerol; mente, el rizoma sin pelar presenta una zona externa
1,5 para 8-gingerol A; 2,2 para 8-gingerol B; 2,5 para de células suberosas de color marrón oscuro.
6-gingerdiol; 2,6 para 6-gingerdiona; 3,4 para 10-gin- • LÍMITE DE SHOGAOLES
gerol y 5,2 para 8-gingerdiona. Análisis: A partir de los cromatogramas obtenidos en la
Calcular el porcentaje de gingeroles y gingerdionas en prueba de Contenido de Gingeroles y Gingerdionas, cal-
la muestra tomada: cular la suma de las respuestas correspondientes a los
picos de shogaoles, que se presentan a los siguientes
Resultado = (rr/rs) x (Cs/W) x 1 O tiempos de retención, relativos a 1,0 para capsaicina:
1,9 para 6-shogaol; 4,2 para 8-shogaol; y 5,8 para
rr = suma de las respuestas de los picos de 10-shogaol.
gingeroles y gingerdionas de la Solución Calcular el porcentaje de shogaoles en la porción
muestra tomada:
r5 = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
estándar Resultado= (rr/r1) x (C/W) x 10
6046 Jengibre / Suplementos Dietéticos
r, = suma de las respuestas de los picos de
shogaoles de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Capsaicina USP en la
Solución estándar, preparada según se indica
en la prueba de Contenido de Gingeroles y
Gingerdionas (mg/mL)
W = peso de jengibre usado en la prueba de
Artículos de Origen Botánico, Extractos Solubles
en Alcohol ($))
Criterios de aceptacion: No más de O, 18%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(56,1): No más de 2,0%,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561)
Análisis: Recoger el filtrado en un matraz volumétrico
de 100 mL y diluir con alcohol a volumen. Evaporar
50 mL del filtrado a una temperatura que no exceda de
90º. [NOTA-Reservar el residuo para usarlo en la
prueba de Identificación B y reservar el volumen rema-
nente del filtrado para usarlo en las pruebas de Límite
de Shogaoles y Contenido de Gingeroles y Gingerdionas.]
Criterios de aceptación: Se encuentra no menos de
4,5% de residuo .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de Almidón,
Método 1 (561): No menos de 42%, usando el Método
la de los Procedimientos Generales .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561 ): No más de 1,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Determinación de Aceite
Volátil (561): No menos de 1,8 mL/100 g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Solubles en Agua
(56,1): No menos de 1,~%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Método 2 (561): No menos de 10,0%
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921 ): No más de
10%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo. El artículo está exento de
los requisitos de las Advertencias Generales con respecto a
la dedaración de embarazo y lactancia (sección 10.40.50.
Etiquetado de Productos Botánicos).
(11)
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP
ER Capsaicina USP
ER Mezcla de Componentes de jengibre USP
ER Jengibre en Polvo USP
Jengibre, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de jengibre se preparan a partir de jengibre en
Polvo y contienen no menos de 90,0% y no más de
110,0% de la cantidad declarada de gingeroles, ginger-
dionas y shogaoles; y no menos de 90,0% de la cantidad
declarada de aceite volátil.
IDENTIFICACIÓN
•A.
Análisis: Reducir a polvo una cantidad del contenido de
Cápsulas equivalente a 5 g de jengibre. Agregar a una
cantidad equivalente a 1 g de jengibre 5 mL de ácido
acético diluido que se prepara diluyendo 1 parte de
ácido acético glacial con 1 parte de agua y agitar du-
USP 37
rante 15 minutos. Filtrar y agregar unas pocas gotas de
oxalato de amonio SR al filtrado.
Criterios de aceptación: Se produce no más que una
leve turbidez.
•B.
Muestra (ver Artículos de Origen Botánico (561 ), Extractos
Solubles en Alcohol, Método 2): Recoger el filtrado en
un matraz volumétrico de 100 mL y diluir con alcohol a
volumen. Evaporar 50 mL del filtrado a una temperatura
que no exceda de 90º. Usar 50 mg del residuo para la
prueba.
Análisis: Disolver la Muestra en 25 mL de agua y ex-
traer con dos porciones de 15 mL de éter. Combinar los
extractos etéreos y evaporar en una cápsula de porce-
lana. Agregar al residuo 5 mL de solución de ácido sul-
fúrico (7,5 en 10,0) y 5 mg de vainillina. Dejar en re-
poso durante 15 minutos y agregar un volumen igual
de agua.
Criterios de aceptación: La solución se torna de color
azul celeste.
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: Proceder según se indica en Solu-
ción muestra, excepto que se debe usar 0,2 g de ER
jengibre en Polvo USP.
Solución estándar B: Usar la Solución de aptitud del sis-
tema, preparada según se indica en la prueba de Conte-
nido de Gingeroles, Gingerdionas y Shogaoles.
Solución muestra: Reducir a polvo una cantidad del
contenido de Cápsulas equivalente a 5 g de jengibre.
Transferir una cantidad equivalente a 0,2 g de jengibre
a un tubo de ensayo, agregar 5 mL de metano!, agitar
durante 30 minutos y centrifugar. Aplicar el sobrena-
dante a la placa.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de aplicación: 20 µL para la Solución estándar
A y para la Solución muestra; 40 µL para la Solución es-
tándar B ,
Fase móvil: Eter y hex9nos (7:3)
Solución reveladora: Acido sulfúrico al 10% en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo. Observar la
placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la placa con Solu-
ción reveladora, calentar a 100º-105º durante 1O mi-
nutos y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una mancha debida a gingeroles
que ocurre a un valor RF de 0,2; y se puede presentar
una mancha de shogaoles a un valor RF de 0,4, corres-
pondiente a la presente en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B. [NOTA-Los cromatogramas de la Solu-
ción estándar A y de la Solución muestra pueden
presentar otras manchas en la región superior y en el
origen de la placa.]
CONTENIDO
• CONTENIDO DE GINGEROLES, GINGERDIONAS Y SHOGAOLES
Solución A: Acetonitrilo, ácido fosfórico diluido (1 en
1000) y metanol (55:44:1)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Usar la Solución A durante no menos de
siete veces el tiempo de retención de capsaicina.
Lavado de la columna: Después de cada corrida cro-
matográfica, lavar la columna según se indica en la
Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmln) (%) (%)
o 100 o
2 o 100
USP 37
Tabla 1 (Continuación)
Solución A
Tiempo Solución B
Cmin) (O/o) {O/o)
12 o 100
14 100 o Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
29 100 o declarada de gingeroles, gingerdionas y shogaoles
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Capsaicina USP
en metanol
Solución de artitud del sistema: Reconstituir el conte-
nido de 1 via de ER Mezcla de Componentes de jengi-
bre USP en 1 mL de la Solución estándar.
Solución muestra: Mezclar y reducir a polvo fino el
contenido de no menos de 20 Cápsulas, y transferir una
cantidad equivalente a 2,0 g de jengibre reducido a
polvo a un matraz Erlenmeyer con tapón de vidrio.
Agregar 50 mL de alcohol, tapar el matraz y macerar
durante 24 horas, agitando frecuentemente durante las
primeras 8 horas, y luego dejando en reposo durante
16 horas. Filtrar y usar el filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 282 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
M~estras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 6-ginge-
rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8;
1,0 y 1,9, respectivamente, Solución de aptitud del
sistema.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 3,0 entre los picos de
6-gingerol y capsaicina; y no menos de 10,0 entre los
picos de capsaicina y 6-shogaol, Solución de aptitud
del sistema
Factores de asimetría: No más de 2,0 para los picos
de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solución de ap-
titud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% para
el pico de capsaicina en inyecciones repetidas, Solu-
cion estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu-
ción de aptitud del sistema
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos
a gingeroles y gingerdionas, que se presentan aproxi-
madamente a los siguientes tiempos de retencion, re-
lativos a 1,0 para capsaicina: 0,8 para 6-gingerol;
1,5 _para ~-gingerol A; 2,2_ para ~-gingerol B; 2,5 para
6-gmgerd1ol; 2,6 para 6-gmgerd1ona; 3,4 para 10-gin-
gerol y 5,2 para 8-gingerdiona.
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos
a shogaoles, que se presentan aproximadamente a los
siguientes tiempos de retención, relativos a 1,0 para
capsaicina: l, 9 para 6-shogaol; 4,2 para 8-shogaol y
5,8 para 10-shogaol.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de gin-
geroles, gingerdionas y shogaoles en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (rr/rs) x Cs x (V/Wu) x (Awc!L) x 100
= suma de las respuestas de los picos de
gingeroles, gingerdionas y shogaoles de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Capsaicina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
Suplementos Dietéticos /jengibre 6047
Wu = peso de la porción de Cápsulas tomada (mg)
Awc = peso promedio del contenido de las Cápsulas
(mg)
L = cantidad declarada de gingeroles,
gingerdionas y shogaoles (mg/Cápsula)
Calcular la cantidad (Ga), en mg, de 6-gingerol en cada
Cápsula tomada:
Ga = (ru/rs) x (Cs/W) x V x A
ru = respuesta del pico de 6-gingerol de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Capsaicina USP de la
Solución estándar (mg/mL)
W = peso de jengibre reducido a polvo usado en la
preparación de la Solución muestra (g)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
A , = peso promedio ,de llenado de las Cápsulas (g)
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Determinación de Aceite
Volátil (561)
Muestra: Reducir a polvo fino una cantidad de Cápsu-
las, equivalente a 100 g de jengibre en polvo.
Criterios de aceptación: No menos de 1,4 mL/l 00 g
(no menos de 90,0% de la cantidad declarada de aceite
volátil)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos pe Disolución.
Medio: Acido clorhídrico O, 1 N; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
[NOTA-Colocar en cada vaso de disolución un número
de Cápsulas equivalente a 20 mg de las cantidades de-
claradas de gingeroles, gingerdionas y shogaoles.]
Solución A, Solución B, Fase móvil, Lavado de la co-
lumna, Solución de aptitud del sistema, Sistema cro-
matográfico y Aptitud del sistema: Proceder según
se indica en la prueba de Contenido de Gingeroles, Gin-
gerdionas y Shogaoles.
Solución madre del estándar: Usar la Solución estándar
preparada en la prueba de Contenido de Gingeroles, Gin-
gerdionas y Shogaoles.
Solución estámfar: 0,025 mg/mL de ER Capsaicina
USP, a partir de Solución madre del estándar, en Medio
Solución muestra: Transferir una alícuota de solución
de cada vaso de disolución a un vial adecuado. Dejar
en reposo durante 5 minutos de manera que el polvo
sedimente en la suspensión o centrifugar hasta obtener
un sobrenadante transparente. Pasar a través de un fil-
tro de membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm
o menor.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Dejar que la Solución muestra eluya durante no
menos de tres veces el tiempo de retención de
capsaicina.]
Calcular la cantidad disuelta, G, en mg, de 6-gingerol
de cada Cápsula tomada:
G = (ru/rs) x (C/N) x V
ru = respuesta del pico de 6-gingerol de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
estándar
c = concentración de ER Capsaicina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
N = número de Cápsulas en cada vaso
V = volumen de Medio; 500 mL
6048 Jengibre / Suplementos Dietéticos USP 37

Calcular el porcentaje de la cantidad relativa disuelta
de 6-gingerol:
Resultado = (G/Go) x 100
Go = contenido de 6-gingerol en cada Cápsula
según ~e deterr:iina en la prueba de '
Contemdo de Gmgeroles, Gingerdionas y
Shogaoles (mg)
Tolerancias: No menos de 60% del contenido de
6-gingerol (Ci 1H2604)
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
p~~nt? d~ la que se P.reparó el artículo. La etiqueta tam-
b1en 1nd1ca el conte~1do de gingeroles, gingerdionas y
shogaoles, en mg/Capsula, y el contenido de aceite volá-
til, en µL/Cápsula. El artículo está exento de los requisitos
d.~ las Advertencias Generales con respecto a la declara-
c1on de embarazo y lactancia (sección 10.40.50. Etíque-
tad,o de Productos Botánicos).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Capsaicina USP
ER Mezcla de Componentes de Jengibre USP
ER Jengibre en Polvo USP
Volumen d~ apli~ación: 20 pL para la Solución muestra
Y la Solucion estandar A; 40 pL para la Solución estándar
B
Fase ~óvil: Éter y hex9nos (7:3)
Soluc1on reveladora: Acido sulfúrico al 10% en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A Solución estándar B y
Solución muestra '
Proceder ~egún se indica en el capítulo. Observar la
placa ba10 luz UV a 254 nm. Rociar la placa con Solu-
ción reveladora, calentar a 100º- l 05º durante 1O mi-
nutos y examinar bajo luz diurna.
Cr!!erios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
c1on muestra presenta una mancha debida a gingeroles
que ocurre a un valor RF de 0,2. Se puede presentar
una mancha de shogaoles a un valor RF de O 4 corres-
pondiente a la presente en el cromatograma 'd~ la Solu-
c(~n estándar B. [NOTA-Los cromatogramas de la Solu-
oon muestra y de la Solución estándar A pueden
presentar otras manchas en la región superior y en el
origen de la placa.]
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE GINGEROLES Y GINGERDIONAS
Solución A: Acetonitrilo, ácido fosfórico diluido (1 en
1000) y metanol (55:44:1)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Usar la Solución A durante no menos de
siete veces el tiempo de retención de capsaicina.
Lavado ~~ la columna: Después de cada corrida cro-
matograf1ca, lavar la columna según se indica en la
Tabla 1.

Jengibre en Polvo Tabla 1

DEFINICIÓN Tiempo Solución A Solución B

El Jengi~re en Polvo es jengibre reducido a polvo fino o Cmin) (%) (%)
muy fino. o 100 o
2 o 100
IDENTIFICACIÓN 12 o 100
•A.
Análisis: Agregar 5 mL de ácido acético diluido, prepa- 14 100 o
rado diluyendo 1 parte de ácido acético glacial con 29 100 o
1 parte de agua, a 1 g de jengibre en Polvo y agitar
durante 15 minutos. Filtrar y agregar unas pocas gotas Solución estándar: O, 1 mg/ml de ER Capsaicina USP
de oxalato de amonio SR al filtrado. en metanol
Criterios de aceptación: Se produce no más que una so.lución de .ªrtitud del sistema: Reconstituir el conte-
leve turbidez. nido de 1 v1a de ER Mezcla de Componentes de jengi-
bre USP en 1 ml de la Solución estándar.
•B.
Muestra: 50 mg del residuo obtenido en la prueba de Solución muestra: Usar el filtrado reservado de la
Artículos de Origen Botánico, Extractos Solubles en Alcohol prueba de Artículos de Origen Botánico, Extractos Solubles
Análisis: Disolver la Muestra en 25 mL de agua y ex- en Alcohol.
traer e.sta solución con dos porciones de 15 mL de éter. Sistema cromato9ráfico
Combinar los extractos etéreos y evaporar en una cáp- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
sula, ~e porcelana. Agregar 5 mL de solución de ácido Modo: HPLC
sul!unco (7,5 en 10,0) y 5 mg de vainillina al residuo. Detector: UV 282 nm
Dejar. en reposo durante 15 minutos y agregar un volu- Columna: 4,6 mm x 25 cm· relleno L1
men igual de agua. Velocidad de flujo: 1 ml/~in
Criterios de aceptación: La solución se torna azul Volumen de inyección: 25 µL
celeste. Aptitud del sistema
M~estras: Solución estándar y Solución de aptitud del
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
sistema
[NOTA-Lo~ ~iempos de retención relativos para 6-ginge-
Solución estándar A: Proceder según se indica en la
Solución muestra, excepto que se deben usar O 2 g de rol, capsa1c1na y 6-shogaol son aproximadamente O 8·
ER jengibre en Polvo USP. ' 1,0 y 1,9, respectivamente, Solución de aptitud del ' '
Solución estándar B: Usar la Solución de aptitud del sis- sistema.]
tema, preparada según se indica en la prueba de Conte- Requisitos de aptitud
Res~lución: No menos de 3,0 entre los picos de
nido de Gingero/es y Gingerdionas.
6~gingerol y c~p.saicina; y no menos de 10,0 entre los
Solución muestra: Transferir 0,2 g de Jengibre en Polvo
picos de capsa1cina y 6-shogaol, Solución de aptitud
a un tubo de ~nsayo, agreg.ar 5 mL de metanol, agitar
durante 30 minutos y centrifugar. Aplicar el sobrena- del sistema
Factore~ de asimetrí~:. No más de 2,0 para los picos
dante a la placa.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro- de 6-g1ngerol, capsa1c1na y 6-shogaol, Solución de ap-
matografía de 0,50 mm titud del sistema
USP 37 Suplementos Dietéticos /jengibre 6049

Desviación estándar relativa: No más de 2,5%, Solu- r1 = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
ción estándar estándar
Análisis Cs = concent,ración de ER Capsaicina USP en la
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu- Solucion estándar, preparada según se indica
ción de aptitud del sistema en la prueba de Contenido de Gingeroles y
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos Gingerdionas (mg/ml)
a gingeroles y gingerdionas, que se presentan aproxi- W = peso de Jengibre en Polvo usado en la prueba
madamente a los siguientes tiempos de retencion, re- de Artículos de Origen Botánico, Extractos
lativos a 1,0 para capsaicina: 0,8 para 6-gingerol; Solubles en Alcohol (g)
1,5 para 8-gingerol A; 2,2_ para 8-gingerol B; 2,5 pa_ra Cri,terios de aceptación:, No más de O, 18% , .
6-gingerdiol; 2,6 para 6-gingerd1ona; 3,4 para 1 O-g1n- • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Ac1do
gerol y 5,2 para 8-gingerdiona. (56,1): No más de 2,0%,
Calcular el porcentaje de gingeroles y gingerdionas en • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
la muestra tomada: cohol, Método 2 (561)
Análisis: Recoger el filtrado en un matraz volumétrico
Resultado = (rr!rs) x (Cs/W) x 1 O de 100 ml y diluir con alcohol a volumen. Evaporar
50 ml del filtrado a una temperatura que no exceda de
rr = suma de las respuestas de los picos de 90º.
gingeroles y gingerdionas de la Solución Criterios de aceptación: Se encuentra no menos de
muestra 4,5% de residuo. [NOTA-Reservar el residuo para usarlo
rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solución en la prueba de Identificación By reservar el volumen
estándar remanente del filtrado para usarlo en las pruebas de
Cs = concentración de ER Capsaicina USP en la Límite de Shogaoles y Contenido de Gingeroles y
Solución estándar (mg/ml) Gingerdionas.J
W = peso de Jengibre en Polvo usado en la prueba • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de Almidón,
de Artículos de Origen Botánico, Extractos Método 7 (561): No menos de 42%, usando el Método
Solubles en Alcohol (g) la de los Procedimientos Generales .
Criterios de aceptación: No menos de 0,8% • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Determinación de Aceite
• METALES PESADOS (231): No más de 20 ppm
Volátil (561): No menos de 1,8 ml/l 00 g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Solubles en Agua
(561): Cumple con los requisitos. (56,1 ): No menos de 1, <:!,%
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
tal bacteriano no excede de 105 ufc/g; el recuento total Método 2 (561): No menos de 10,0%
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex- • DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921 ): No más de
cede de 1 Q3 ufc/g; el recuento de bacterias Gram negati- 10%
vas tolerantes a la bilis no excede d~ 1 0 3 ufc/g .
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- REQUISITOS ADICIONALES
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de_terminar la • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1. cerrados. Proteger de la luz y de la humedad, y almace-
nar en un lugar fresco.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Al microscopio, el Jengibre latín y después de la denominación oficial, la parte de la
en Polvo muestra principalmente gránulos de almidón y planta' de donde se obtuvo el artículo. El artículo está
las células parenquimáticas que los contienen; gránulos exento de los requisitos de las Advertencias Generales con
de almidón simples, grandes, aplanados, ovoides o en respecto a la declaración de embarazo y lactancia (sec-
forma de saco, de 5-1 5 µm de ancho y 30-60 Jlm de ción 10.40.50. Etiquetado de Productos Botánicos).
largo, con un hilio excéntrico, algunos con estnas trans- • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
versales leves; células parenquimaticas que contienen sus- ER Capsaicina USP
tancias resinosas de color marrón amarillento a marrón ER Mezcla de Componentes de Jengibre USP
oscuro; grupos de fibras tabicadas grandes, no lignifica- ER Jengibre en Polvo USP
das, de paredes finas y de lumen amplio; porciones de
fibras tabicadas con vasos unidos; vasos grandes con en-
grosamiento anillado, espiralado o reticulado, a menudo
acompañados por células parenquimáticas con contenido
marran; oleorresina en fragmentos o gotitas, que se tiñen
con yodo SR y yoduro de potasio SR; y rara vez, frag- Jengibre, Tintura
mentos de tejido suberoso marrón, normalmente obser-
vados en la superficie. No se encuentran células escleren- DEFINICIÓN
quimáticas, tricomas ni oxalato de calcio. Preparar la Tintura de Jengibre según se indica a
• LIMITE DE SHOGAOLES continuación.
Análisis: A partir de los cromatogramas obtenidos en la
prueba de Contenido de Gingeroles y Gingerdionas, cal-
cular la suma de las respuestas de los picos debidos a lennibre 200 n
shogaoles, que se presentan a los siguientes tiempos de Una mezcla de Alcohol y Agua (7:3),
retención, relativos a 1,0 para capsaicina: 1,9 para cantidad suficiente oara obtener 1000 ml
6-shogaol; 4,2 para 8-shogaol y 5,8 para 10-shogaol.
Calcular el porcentaje de shogaoles en la porción de Preparar la Tintura según se indica en, Extractos Botánicos
Jengibre en Polvo tomada: (565), Tinturas, Proceso de Maceraoon. Contiene no menos
de O, 1 0% de gingeroles.
Resultado= (rr!rs) x (Cs/W) x 1 O
rr = suma de las respuestas de los picos de
shogaoles de la Solución muestra
6050 jengibre / Suplementos Dietéticos USP 37

IDENTIFICACIÓN [NOTA-Los tiempos de retención relativos para 6-ginge-

• PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8;
DELGADA 1,0 y 1, 9, respectivamente, Solución de aptitud del
Solución estándar A: Transferir 0,2 g de ER Jengibre en sistema.]
Polvo USP a un tubo de ensayo, agregar 5 mL de meta- Requisitos de aptitud
no!, agitar durante 30 minutos y centrifugar. Aplicar el Resolución: No menos de 3,0 entre los picos de
sobrenadante a la placa. 6-gingerol y capsaicina; y no menos de 10,0 entre los
Solución estándar B: Usar la Solución de aptitud del sis- picos de capsaicina y 6-shogaol, Solución de aptitud
tema, preparada según se indica en la prueba de Conte- del sistema
nido de Gingeroles. Factores de asimetría: No más de 2,0 para los picos
Solución muestra: Tintura de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solución de ap-
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro- titud del sistema
matografía de 0,50 mm Desviación estándar relativa: No más de 2,5%, Solu-
Volumen de aplicación: 20 µL para la Solución muestra ción estándar
y la Solución estándar A; 40 µL para la Solución estándar Análisis
B , Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu-
Fase móvil: Eter etílico,y hexanos (7:3) ción de aptitud del sistema
Solución reveladora: Acido sulfúrico al 10% en alcohol Calcular el porcentaje de gingeroles en la porción de
Análisis Tintura tomada:
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra Resultado = (ru! rs) x Cs x O, 1
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente tres cuar- ru = suma de las respuestas de los picos de
tos de la placa. Retirar la placa de la cámara y secar. gingeroles de la Solución muestra
Observar la placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
placa con Solución reveladora, calentar a 100º-l 05º estándar
durante 1O minutos y observar bajo luz diurna. Cs = concentración de ER Capsaicina USP en la
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- Solución estándar (mg/mL)
ción muestra presenta una mancha debida a gingeroles Criterios de aceptación: No menos de O, 10%
que ocurre a un valor RF de 0,2. Se puede presentar
OTROS COMPONENTES
una mancha de shogaoles a un valor RF de 0,4, corres-
pondiente a la presente en el cromatograma de la Solu- • DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método I (611 ): No menos
ción estándar B. [NOTA-Los cromatogramas de la Solu- de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada
ción muestra y de la Solución estándar A pueden de C2HsOH
presentar otras manchas en la región superior y en el CONTAMINANTES
origen de la placa.] • ARSÉNICO, Método 11 (211 ): No más de 1 ppm
CONTENIDO
• MET,ALES PESADOS, Método, 111 (231 ): No más de 1 µg/g o
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
• CONTENIDO DE GINGEROLES
lisis cj~ Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
Solución A: Acetonitrilo, ácido fosfórico diluido (1 en
1000) y metanol (55:44:1) requ1s1tos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Usar la Solución A durante no menos de tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
siete veces el tiempo de retención de capsaicina. y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
Lavado de la columna: Después de cada corrida cro- levaduras no excede de 103 ufc/g.
matográfica, lavar la columna según se indica en la PRUEBAS ESPECÍFICAS
Tabla 1. • LÍMITE DE 6-SHOGAOL
Análisis: Usando los cromatogramas de la prueba de
Tabla 1 Contenido de Gingeroles, calcular el porcentaje de 6-sho-
Tiempo Solución A Solución B
gaol en la porción de Tintura tomada:
Cmin) (O/o) {%)
Resultado= (ru/rs) x Cs x O, 1
o 100 o
2 o 100 ru = respuesta del pico de 6-shogaol de la Solución
12 o 100 muestra
14 100 o rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solución
29 100 o estándar
Cs = concentración de ER Capsaicina USP en la
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Capsaicina USP Solución estándar (mg/mL)
en metanol ~riterios de aceptación: ,No más de 0,034%
Solución muestra: Tintura • LIMITE DE RESIDUOS No VOLATILES: Evaporar una porción
Solución de artitud del sistema: Reconstituir el conte- de 1O mL en una cápsula de platino o porcelana tarada y
nido de 1 vía de ER Mezcla de Componentes de Jengi- secar a 105º durante 6 horas: el peso del residuo es
bre USP en 1 mL de la Solución estándar. 80-; 120 mg. ,
Sistema cromato9ráfico • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) No más d~ 0,5%
Modo: HPLC • PESO ESPECIFICO (841): 0,90-0,95
Detector: UV 282 nm • OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 Botánicos (565), Envasado y Almacenamiento.
Velocidad de flujo: 1 mL/min REQUISITOS ADICIONALES
Volumen de inyección: 25 µL • ETIQUETADO: Etiquetar indicando que sólo debe utilizarse
Aptitud del sistema para fines de fabricación, además de la información espe-
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del cificada en Extractos Botánicos (565), Tinturas, Etiquetado.
sistema Este artículo está exento de los requisitos de las Adverten-
USP 37
cias Generales con respecto a la declaración de embarazo
y lactancia (sección 10.40.50. Etiquetado de Productos
Botánicos).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Capsaicina USP
ER Mezcla de Componentes de Jengibre USP
ER Jengibre en Polvo USP
Leucina-ver Leucina en Monografías
Generales
• CONTENIDO DE LICOPENO TODO
Levocarnitina-ver Levocarnitina en
Monografías Generales
Levocarnitina, Solución Oral-ver
Levocarnitina, Solución Oral en Monografías
Generales
Levocarnitina, Tabletas-ver Levocarnitina,
Tabletas en Monografías Generales
Licopeno
C40Hs6 536,88
[ 502-65-8].
DEFINICIÓN
El Licopeno es una mezcla de isómeros geométricos de lico-
peno. Contiene no menos de 96,0% y no más de 1 01,0%
de licopeno (CoHs6), calculado con respecto a la sustancia
seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA VISIBLE (197U)
Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
Solución de prueba: Preparar según se indica en Solu-
ción muestra en la prueba de Contenido de Licopeno.
Criterios de aceptación: Cumple con los requisitos del
capítulo. El cociente entre A476/Asos es 1, 10-1, 14.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Licopeno
todo E, Licopeno SZ y Compuestos Relacionados.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LICOPENO
Solución madre de la muestra: Transferir 25 mg de Li-
copeno y 25 mg de butil hidroxitolueno a un matraz
volumétrico de 100 ml. Agregar 60 mL de cloruro de
metileno y someter a ultrasonido hasta disolver. Diluir
con cloruro de metileno a volumen.
Solución muestra: Transferir 2,0 mL de Solución madre
de la muestra a un matraz volumétrico de 200 mL y
diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ) .)
Suplementos Dietéticos / Licopeno 6051
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 476 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de licopeno (C 0 H56 ) en la por-
ción de Licopeno tomada:
Resultado = Au![(a x Cu)] x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
a = absortividad de licopeno puro en ciclohexano,
331 (mL · mg 1 ·cm 1)
Cu = concentración de la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 96,0%-1 01,0% con respecto
a la sustancia seca
f, LICOPENO SZ Y COMPUES-
TOS RELACIONADOS
Fase móvil: terc-Butil metil éter, metanol y tetrahidrofu-
rano (784:665:74)
Solución estándar: Transferir una cantidad pesada de
ER Licopeno USP, equivalente a aproximadamente 5 mg
de licopeno, a un matraz volumétrico de 250 mL. Agre-
gar aproximadamente 60 unidades de preparación de
proteasa alcalina bacteriana u otra enzima adecuada y
aproximadamente 25 mg de butil hidroxitolueno. Agre-
gar 2,5 mL de hidróxido de amonio diluido (2 en 1 00)
en agua y mezclar. Colocar en un baño ultrasónico a
50º durante 1 O minutos, rotar el matraz ocasionalmente
para evitar que el material se pegue a la superficie de
vidrio y continuar hasta que el material se haya disper-
sado sin grumos. Agregar 5 mL de tetrahidrofurano,
40 mL de alcohol deshidratado y mezclar. Colocar en
un baño ultrasónico durante aproximadamente 1 mi-
nuto. Enfriar a temperatura ambiente y diluir con terc-
butil metil éter a volumen. Agitar vigorosamente y
luego dejar que el precipitado sedimente. Filtrar el
sobrenadante.
Solución madre de la muestra: Transferir 15 mg de Li-
copeno a un matraz volumétrico de 25 mL y disolver en
tetrahidrofurano que contenga 50 mg/L de butil hidro-
xitolueno. Diluir con el mismo disolvente a volumen.
Solución muestra: Pipetear y transferir 2 mL de Solución
madre de la muestra a un matraz volumétrico de 50 mL
y agre;:¡ar 8 mL de tetrahidrofurano. Diluir con terc-butil
metil eter a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 472 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, relleno L62 de 5 µm; una
segunda columna conectada en serie, de 4,6 mm x
25 cm, relleno L62 de 3 µm. [NOTA-Las columnas
nuevas pueden requerir acondicionamiento.]
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de licopeno todo E y licopeno 5Z son 1,0 y aproxi-
madamente 1,07, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de lico-
peno todo E y licopeno 5Z
Factor de asimetría: 0,8-2,0 para el pico de licopeno
todo E
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de licopeno todo E
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de licopeno todo E en la porción
de Licopeno tomada:
Resultado = (rd r1) x T
6052 Licopeno / Suplementos Dietéticos
rr = respuesta del pico del isómero de licopeno
todo E
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de isómeros de licopeno totales
obtenidos en la prueba de Contenido de
Licopeno
Criterios de aceptación: No menos de 70,0% de lico-
peno todo E
Calcular el porcentaje de isómero de licopeno 5Z en la
porción de Licopeno tomada:
Resultado = (rsz/rr) x T
rsz = respuesta del pico del isómero 5Z de licopeno
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de isómeros de licopeno totales
obtenidos en la prueba de Contenido de
Licopeno
Criterios de aceptación: No más de 23,0% del isó-
mero de licopeno 5Z
Calcular el porcentaje de compuestos relacionados en la
porción de Licopeno tomada:
Resultado = (rs/r1) x T
rs = suma de las respuestas de todos los picos,
excepto el pico de licopeno todo E y el pico
de licopeno 5Z
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de isómeros de licopeno totales
obtenidos en la prueba de Contenido de
Licopeno
Criterios de aceptación: No más de 9,0% de otros
compuestos relacionados calculados como licopeno
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 0,2%
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 1 ppm o ximadamente 5 mg de licopeno, a un matraz volumé-
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra al vacío
sobre pentóxido de fósforo a 40º durante 4 horas: pierde
no mas de 0,2% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte. Almace-
nar en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: Etiquetar indicando si el artículo es de ori-
gen natural o sintético. Si es de origen natural, etiquetar
indicando la fuente natural, incluyendo su nombre cientí-
fico en latín.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Licopeno USP
Preparación de Licopeno
DEFINICIÓN
La Preparación de Licopeno es una combinación de Lico-
peno con una o más sustancias inertes y antioxidantes
adecuados. Puede presentarse en forma sólida o líquida
oleosa. Contiene no menos de 95,0% y no más de
120,0% de la cantidad declarada de licopeno (C40Hs6),
calculado con respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA VISIBLE (197U)
Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
Solución de prueba: Preparar según se indica en Solu-
ción muestra en la prueba de Contenido de Licopeno.
Criterios de aceptación: Cumple con los requisitos del
capítulo. El cociente entre A416/ Asas es 1, 10-1,14 en ci-
USP 37
clohexano. El cociente entre A472 / A104 es 1,09-1, 1 3 en
alcohol isopropílico.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LICOPENO
Procedimiento para preparaciones oleosas
Solución madre de la muestra: Transferir una canti-
dad pesada de Preparación oleosa que contenga
25 mg de licopeno a un matraz volumétrico de
100 ml. Agregar 25 mg de butil hidroxitolueno y
60 ml de cloruro de metileno, y someter a ultrasonido
hasta disolver. Diluir con cloruro de metileno a volu-
men.
Solución muestra: 2,0 ml de Solución madre de la
muestra diluidos con ciclohexano hasta 200,0 ml
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 476 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de lico-
peno (C40Hs6) en la porción de Preparación tomada:
Resultado = Au![(a x Cu)] x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
a = absortividad de licopeno puro en ciclohexano,
331 (ml. mg-1. cm·l)
Cu = concentraciónnominal de licopeno en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 95,0%-120,0% con respecto
a la sustancia anhidra
Procedimiento para preparaciones sólidas
Solución madre de la muestra: Transferir una canti-
dad pesada de Preparación sólida, equivalente a apro-
trico de 200 ml. Agregar aproximadamente 60
unidades de preparación de proteasa alcalina bacte-
riana u otra enzima adecuada y aproximadamente
25 mg de butil hidroxitolueno. Agregar 2,5 ml de hi-
dróxido de amonio diluido (2 en 100) en agua y mez-
clar. Colocar en un baño ultrasónico a 50º durante 1 O
minutos, rotar el matraz ocasionalmente para evitar
que el material se pegue a la superficie de vidrio y
continuar hasta que el material se haya dispersado sin
grumos. Agregar 5 ml de tetrahidrofurano, 40 ml de
alcohol deshidratado y mezclar. Colocar en un baño
ultrasónico durante aproximadamente 1 minuto. En-
friar a temperatura ambiente y diluir con terc-butil me-
til éter a volumen. Agitar vigorosamente y luego dejar
en reposo hasta que el sólido sedimente.
Solución muestra: 2,0 ml de Solución madre de la
muestra diluidos con alcohol isopropílico hasta 25,0 ml
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 472 nm
Blanco: Alcohol isopropílico
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de lico-
peno en la porción de Preparación tomada:
Resultado = Aul[(a x Cu)] x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
a = absortividad de licopeno puro en alcohol
isopropílico, 320 (ml. mg-1 . cm-1)
Cu = concentración nominal de licopeno en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 95,0%-120,0% con respecto
a la sustancia anhidra
USP 37
• CONTENIDO DE LICOPENO TODO E, LICOPENO SZ Y COMPUES-
TOS RELACIONADOS
Fase móvil: terc-Butil metil éter, metanol y tetrahidrofu-
rano (784:665:74)
Solución estándar: Transferir una cantidad pesada de
ER Licopeno USP, equivalente a aproximadamente 5 mg
de licopeno, a un matraz volumétrico de 250 ml. Agre-
gar aproximadamente 60 unidades de preparación de
proteasa alcalina bacteriana u otra enzima adecuada y
aproximadamente 25 mg de butil hidroxitolueno. Agre-
gar 2,5 mL de hidróxido de amonio diluido (2 en 100)
en agua y mezclar. Colocar en un baño ultrasónico a
50º durante 1 O minutos, rotar el matraz ocasionalmente
para evitar que el material se pegue a la superficie de
vidrio y continuar hasta que el material se haya disper-
sado sin grumos. Agregar 5 mL de tetrahidrofurano,
40 mL de alcohol deshidratado y mezclar. Colocar en
un baño ultrasónico durante aproximadamente 1 mi-
nuto. Enfriar a temperatura ambiente y diluir con terc-
butil metil éter a volumen. Agitar vigorosamente y
luego dejar que el precipitado sedimente. Filtrar el
sobrenadante.
Solución muestra para preparaciones oleosas: Trans-
ferir una cantidad de Preparación oleosa, equivalente a
15 mg de licopeno, a un matraz volumétrico de 25 mL
y disolver en tetrahidrofurano que contenga 50 mg/L
de butil hidroxitolueno. Diluir con el mismo disolvente
a volumen. Pipetear y transferir 2 mL de esta solución a
un matraz volumétrico de 50 mL y agregar 8 mL de te-
trahidrofurano. Diluir con terc-butil metil éter a
volumen.
Solución muestra para preparaciones sólidas: Transfe-
rir una cantidad pesada de Preparación sólida, equiva-
lente a aproximadamente 5 mg de licopeno, a un ma-
traz volumétrico de 250 mL. Agregar aproximadamente
60 unidades de preparación de proteasa alcalina bacte-
riana u otra enzima adecuada y aproximadamente
25 mg de butil hidroxitolueno. Agregar 2,5 mL de hi-
dróxido de amonio diluido (2 en 100) en agua y mez-
clar. Colocar en un baño ultrasónico a 50º durante 1 O
minutos, rotar el matraz ocasionalmente para evitar que
el material se pegue a la superficie de vidrio y continuar
hasta que el material se haya dispersado sin grumos.
Agregar 5 mL de tetrahidrofurano, 40 mL de alcohol
deshidratado y mezclar. Colocar en un baño ultrasónico
durante aproximadamente 1 minuto. Enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir con terc-butil metil éter a volu-
men. Agitar vigorosamente y luego dejar que el precipi-
tado sedimente. Filtrar el sobrenadante.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 472 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, relleno L62 de 5 µm; una
segunda columna conectada en serie, de 4,6 mm x
25 cm, relleno L62 de 3 µm. [NOTA-Las columnas
nuevas pueden requerir acondicionamiento.]
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para los pi-
cos de licopeno todo E y licopeno 5Z son 1,0 y aproxi-
madamente 1,07, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de lico-
peno todo E y licopeno 5Z
Factor de asimetría: 0,8-2,0 para el pico de licopeno
todo E
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de licopeno todo E
Suplementos Dietéticos / Licopeno 6053
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de licopeno todo E en la porción
de Preparación tomada:
Resultado = (rr/ rr) x 100
rE = respuesta del pico del isómero de licopeno
todo E
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No menos de 65,0% de lico-
peno todo E
Calcular el porcentaje del isómero de licopeno 5Z en la
porción de Preparación tomada:
Resultado = (r5¿/ r 1) x 1 00
rsz = respuesta del pico del isómero de licopeno 5Z
rr = suma de las respuesta de todos los picos
Criterios de aceptación: No más de 23,0% del isó-
mero de licopeno 5Z
Calcular el porcentaje de compuestos relacionados en la
porción de Preparación tomada:
Resultado = (rs/ rr) x 1 00
rs = suma de las respuestas de todos los picos,
excepto el pico de licopeno todo E y el pico
de licopeno 5Z
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No más de 14% de otros
compuestos relacionados calculados como licopeno
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): No más de
8,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte. Almace-
nar la Preparación oleosa en un lugar fresco y la Prepara-
ción sólida a temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: Etiquetar indicando el nombre y el conte-
nido de antioxidantes y sustancias inertes agregadas. Eti-
quetar indicando si el artículo se preparó con licopeno de
origen natural o sintético. Si se preparó con licopeno de
origen natural, etiquetar indicando la fuente natural, in-
cluyendo su nombre científico en latín.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Licopeno USP
Extracto de Tomate con Licopeno
DEFINICIÓN
El Extracto de Tomate con Licopeno es un extracto de ace-
tato de etilo de los lípidos naturales del tomate. Se pro-
duce a partir de la pulpa de frutos maduros de Lycopersi-
con esculentum Mili. (Fam. Solanaceae), después de
eliminar la fracción de tomate hidrosoluble. Contiene no
menos de 95,0% y no más de 105,0% de la cantidad
declarada de licopeno (C40Hs6). Contiene no menos de
4,7% y no más de 12,0% de licopeno (C40Hs6), no menos
de 0,8% de la cantidad combinada de fitoflueno (C40H6s)
y fitoeno (C4oH64), no menos de 0,2% de beta caroteno
(C40Hs6) y no menos de 1,0% de tocoferoles (C23H4sÜ2),
con respecto a la sustancia anhidra. Los tocoferoles se
pueden agregar como antioxidantes.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRESENCIA DE LICOPENO, FITOFLUENO Y FITOENO
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de otros Corotenoides y Tocoferoles.
6054 Licopeno / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
los picos de licopeno, fitoflueno y fitoeno de la Solución
muestra, corresponden a los de la Solución estándar C.
• 8. RELACION DE LICOPENO TODO E Y LICOPENO 5Z
Solución madre de butil hidroxitolueno: Proceder se-
gún se indica en la prueba de Contenido de Licopeno.
Fase móvil: Diisopropiletilamina al 0,05% en n-hexano;
someter a ultrasonido durante 3-4 minutos.
Solución muestra: Proceder según se indica en la
prueba de Contenido de Licopeno, excepto que se debe
diluir 5 a 100 con n-hexano.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 472 nm
Columna: Dos de 4,0 mm x 25 cm; r~lleno L3 de 5
µm (con un tamaño de poro de 300 A), conectadas en
serie
Temperatura de la columna: 22º
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
[NOTA-El pico de licopeno todo E eluye en 30-45
minutos.]
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para lico-
peno todo E y licopeno 5Z son 1,00 y dentro del inter-
valo 1,04-1, 1 O, respectivamente.]
Análisis
Muestra: Solución muestra
Medir las áreas de los dos picos principales y calcular
el cociente de sus áreas:
Resultado = rudrU2
ru1 = área del pico de licopeno 5Z
rU2 = área del pico de licopeno todo E
Criterios de aceptación: No más de O, 1O para el co-
ciente de sus áreas
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE LICOPENO
Solución madre de butil hidroxitolueno: 5 mg/ml de
butil hidroxitolueno en cloruro de metileno. [NOTA-
Esta solución se puede almacenar protegida de la luz
durante hasta 3 meses.]
Fase móvil: Acetonitrilo, cloruro de metileno, n-hexano
y metano! (850:25:25:100). Agregar diisopropiletilamina
al 0,05%, mezclar y someter a ultrasonido durante 3-4
minutos.
Diluyente: Acetonitrilo, cloruro de metileno, n-hexano,
butil hidroxitolueno y metano! (600:150:100:0,5:150).
Agregar diisopropiletilamina al 0,05%, mezclar y some-
ter a ultrasonido durante 3-4 minutos.
Solución estándar A: Transferir una cantidad pesada de
ER Licopeno USP, equivalente a aproximadamente 5 mg
de licopeno, a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar aproximadamente 60 unidades de preparación de
proteasa alcalina bacteriana u otra enzima adecuada y
aproximadamente 25 mg de butil hidroxitolueno. Agre-
gar 2,5 mL de hidróxido de amonio diluido en agua (2
en 100), mezclar y colocar en un baño ultrasónico a
50º durante 1O minutos, rotando el matraz ocasional-
mente, para evitar que se adhiera material a la superfi-
cie del vidrio. Continuar hasta que el material se dis-
perse y no contenga grumos. Agregar 5 ml de
tetrahidrofurano y agitar hasta que no quede ningún
precipitado de color. Agregar otra porción de 2 ml de
tetrahidrofurano y 40 ml de Diluyente, y agitar hasta
que la mezcla sea homogénea. Diluir con Diluyente a
volumen, agitar vigorosamente y dejar en reposo, si
fuera necesario, hasta gue sedimente el sólido.
Calcular la concentracion exacta de esta solución me-
diante el si~uiente método.
Solución estandar B: Agregar 1 O ml de alcohol y
1O ml de Solución madre de butil hidroxitolueno a 2,0 ml
USP 37
de Solución estándar A y diluir con n-hexano hasta
100 ml. Preparar por triplicado.
Determinar la absorbancia de la Solución estándar B a la
absorbancia máxima a aproximadamente 472 nm,
usando una mezcla de alcohol, Solución madre de butil
hidroxitolueno y n-hexano (10:10:80) como blanco.
Calcular la concentración de Solución estándar A, en
µg/ml, de licopeno:
Resultado = (Ax/ F) x 50 000
Ax = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de la Solución estándar B
F = absortividad de licopeno puro en n-hexano a
472 nm, 345
Solución estándar C: Transferir una cantidad pesada de
ER Extracto de Tomate con Licopeno USP, equivalente a
aproximadamente 6 mg de licopeno, a un matraz volu-
métrico de 100 ml y disolver en 1 ml de Solución ma-
dre de butil hidroxitolueno y 9 ml de cloruro de meti-
leno, usando un sonicador. Diluir con Diluyente a
volumen hasta obtener una solución con una concen-
tración conocida de aproximadamente 0,06 mg/ml de
licopeno.
Solución madre de la muestra: Entibiar el Extracto de
Tomate con Licopeno a 50º en un baño de agua. Re-
volver bien con una varilla de vidrio o una espátula.
Pesar y disolver una cantidad de 1-1,2 g de la muestra
en 1O ml de Solución madre de butil hidroxitolueno y
30 ml de cloruro de metileno, y someter a ultrasonido
la solución durante 1 minuto para disolver la muestra
completamente. Enfriar a temperatura ambiente y diluir
con cloruro de metileno hasta 100 ml.
Solución muestra: Diluir la Solución madre de la mues-
tra con Diluyente (1 en 1 O).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 472 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7 de 5 µm
Temperatura de la columna: 39 ± 1 º
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar A
[NOTA-El tiempo de retención de licopeno es aproxi-
madamente 6 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 1,5% para
el área del pico de licopeno
Análisis
Muestras: Solución estándar A o Solución estándar C y
Solución muestra
Medir las respuestas de los picos principales de
licopeno.
Calcular el porcentaje de licopeno en la porción de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/\t\I) x D x 100
ru = área del pico de licopeno de la Solución
muestra
rs = área del pico de licopeno de la Solución
estándar A o de la Solución estándar C
Cs = concentración de licopeno en la Solución
estándar A o en la Solución estándar C
(µg/mL)
V = volumen de Solución madre de la muestra (ml)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solución madre de la
muestra (mg)
D = factor de dilución usado para preparar la
Solución muestra a partir de Solución madre
de la muestra
USP 37
Criterios de aceptación: No menos de 95,0%-no más
de 105,0% de la cantidad declarada de licopeno; no
menos de 4,7%-no más de 12,0% de licopeno (C 40 H56 )
• CONTENIDO DE OTROS (AROTENOIDES Y TOCOFEROLES (FITO-
FLUENO, FITOENO, BETA (AROTENO Y TOCOFEROLES)
Solución madre de butil hidroxitolueno, Diluyente,
Solución estándar A, Solución estándar B, Solución
estándar C y Solución muestra: Proceder según se
indica en la prueba de Contenido de Licopeno.
Fase móvil: Acetonitrilo, cloruro de metileno, n-hexano
y metanol (19:1 :1 :19). Agregar diisopropiletilamina al
0,05%, mezclar y someter a ultrasonido durante 3-4
minutos.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis; a 472 nm para licopeno; a 450 nm para
beta caroteno; a 350 nm para fitoflueno y a 288 nm
para fitoeno y tocoferol
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 39 ± 1 º
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar C
[NOTA-Los tiempos de retención relativos son aproxi-
madamente 0,6 para los isómeros de tocoferol;
1,0 para licopeno todo E; 1,5-1,7 para los isómeros de
beta caroteno; 1,6-1,8 para los isomeros de fitoflueno
y 1,8-2,2 para fitoeno.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Ces similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Tomate con Licopeno USP usado.
Desviación estándar relativa: No más de 2% para
licopeno todo E
Análisis
Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
Localizar los picos de los isómeros de licopeno, de
beta caroteno, de fitoflueno y el pico de fitoeno me-
diante comparación con el cromatograma de referen-
cia provisto con el lote correspondiente de ER Ex-
tracto de Tomate con Licopeno USP. Medir la suma
de las respuestas de los picos de los isómeros de lico-
peno a 472 nm en la Solución estándar A. [NOTA-Los
isómeros de licopeno pueden resolverse en más de
un pico en este sistema cromatográfico.] En la Solu-
ción muestra, medir la suma de las respuestas de los
picos de los isómeros de beta caroteno a 450 nm, la
suma de las respuestas de los picos de los isómeros
de fitoflueno a 350 nm, la respuesta del pico de fi-
toeno a 288 nm y la suma de las respuestas de los
picos de todos los tocoferoles a 288 nm.
Determinar la concentración de Solución estándar A
según se indica en la prueba de Contenido de ' rs
Licopeno.
Calcular el porcentaje de beta caroteno en la porción
de Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado= (ru!rs) x Cs x (V/IN) x O x Fx 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
isómeros de beta caroteno a 450 nm de la
Solución muestra
rs = área del pico de licopeno a 472 nm de la
Solución estándar A
Cs = concentración de licopeno en la Solución
estándar A (µg/mL)
V =volumen de Solución madre de la muestra (mL)
w = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solución madre de la
muestra (mg)
Suplementos Dietéticos / Licopeno 6055
O = factor d_e dilución usado para preparar la
SoluC1on muestra, a partir de la Solución
madre de la muestra
F = cociente entre las absortividades de licopeno
puro y beta caroteno puro, 345/259,2
Calcular el porcentaje de fitoflueno en la porción de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/IN) x O x F x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
isómeros de fitoflueno a 350 nm de la
Solución muestra
rs = suma de las respuestas de los picos de los
isómeros de licopeno a 472 nm de la
Solución estándar A
Cs = concentración de licopeno en la Solución
estándar A (µg/mL)
V = volumen de Solución madre de la muestra (mL)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solución madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilución usado para preparar la
Solución muestra, a partir de la Solución
madre de la muestra
F = cociente entre las absortividades de licopeno
puro y fitoflueno puro, 345/l 35
Calcular el porcentaje de fitoeno en la porción de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado = (ru! rs) x Cs x (V/IN) x O x F x 100
ru = área de la respuesta del pico de fitoeno a 288
nm de la Solución muestra
rs = suma de las respuestas de los picos de los
isómeros de licopeno a 472 nm de la
Solución estándar A
Cs = concentración de licopeno en la Solución
estándar A (µg/mL)
V = volumen de Solución madre de la muestra (mL)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solución madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilución usado para preparar la
Solución muestra, a partir de la Solución
madre de la muestra
F = cociente entre las absortividades de licopeno
puro y fitoeno puro, 345/125
Calcular el porcentaje de tocoferoles en la porción de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada para
preparar la Solución muestra:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (V/IN) x O x F x 100
ru = suma de las respuestas de todos los picos de
tocoferol a 288 nm de la Solución muestra
= suma de las respuestas de los picos de los
isómeros de licopeno a 472 nm de la
Solución estándar A
Cs = concentración de licopeno en la Solución
estándar A (µg/mL)
V = volumen de Solución madre de la muestra (mL)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solución madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilución usado para preparar la
Solución muestra, a partir de la Solución
madre de la muestra
F = cociente entre la absortividad de licopeno
puro y la absortividad promedio de los
tocoferoles, 345/8,5
Criterios de aceptación: No menos de 0,8% de la can-
tidad combinada de fitoflueno (C40H6s) y fitoeno
(C40H64), no menos de 0,2% de beta caroteno (CoH16)
 6056 Licopeno / Suplementos Dietéticos USP 37

y no menos de 1,0% de tocoferoles (C28H4802), con res- • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
pecto a la sustancia anhidra ER Licopeno USP
ER Extracto de Tomate con Licopeno USP
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 1o µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): No más de 4 ng/g del total de aflatoxinas Bl,
B2, Gl y G2; no más de 2 ng/g de aflatoxina Bl
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
Ácido Alfa Lipoico
(561): Cumple con los requisitos. o
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- il
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g 'OH

y el recuento total combinado de hongos filamentosos y

levaduras no excede de 2 x 102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- CaH14Ü2S2 206,33
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la Thioctic acid;
~cido 1,2-ditiolano-3-pentanoico;
ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia coli y Pseudomo-
nas aeruginosa. Acido l ,2-ditiolano-3-valérico [l 077-28-7].

PRUEBAS ESPECÍFICAS , DEFINICIÓN

• TRANSPARENCIA DE LA SOLUCION El Ácido Alfa Lipoico contiene no menos de 99,0% y no más
Análisis: Entibiar la muestra a 50º en un baño de agua. de 101,0% de CsH14Ü2S2, calculado con respecto a la sus-
Revolver bien con una varilla de vidrio o una espátula y tancia seca.
transferir 1 g de Extracto directamente a un matraz vo- IDENTIFICACIÓN
lumétrico de 100 ml. Agregar 50 ml de cloruro de me- • A. El tiempo de retención del pico del ácido alfa lipoico
tileno y someter a ultrasonido la solución durante 1 mi- de la Solución muestra corresponde al de la Solución es-
nuto para disolver completamente la muestra. Llevar a tándar, según se obtienen en la Valoración.
temperatura ambiente y diluir con cloruro de metileno • B. ABSORCION EN EL INFRARROJO (197K)
a volumen.
Criterios de aceptación: La solución es transparente: VALORACIÓN
no se forma depósito ni turbidez. • PROCEDIMIENTO
• MÉTODOS DEL REÓMETRO ROTATORIO (912) Solución amortiguadora: 0,68 g/L de fosfato monobá-
Análisis: Equilibrar el Extracto de Tomate con Licopeno sico de potasio
a 37º en un vial de vidrio de 30 ml. Determinar la vis- Fase móvil: Metano!, Solución amortiguadora y acetoni-
cosidad usando un viscosímetro rotatorio equipado con trilo (58:46:9). Ajustar con solución de ácido fosfórico
un vástago (Nº 6) que tenga un cilindro de 1,47 cm de (8,3 en 100) a un pH de 3,0-3, 1. ,
diámetro y O, 16 cm de altura acoplado a un eje de Solución estándar: 1,0 mg/ml de ER Acido Alfa Lipoico
0,32 cm de diámetro, con una distancia de 3,02 cm USP en Fase móvil ,
desde la parte superior del cilindro a la punta inferior Solución muestra: 1,0 mg/ml de Acido Alfa Lipoico en
del eje. El vástago gira a la velocidad y profundidad de Fase móvil
inmersión adecuadas para obtener una lectura de escala Sistema cromato9ráfico
del 10%-90% de la escala total. Calcular la viscosidad, (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
en centipoises, multiplicando la lectura de la escala por Modo: HPLC
la constante del vástago y la velocidad usada. Detector: UV 215 nm
Criterios de aceptación: No más de 5000 cent~oises Columna: 4,6 mm x 250 mm; relleno L1
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921): No mas de Temperatura de la columna: 35º
0,8% Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
• DISTRIBUCIÓN DEL TAMAÑO DE PARTÍCULA Volumen de inyección: 20 µL
(Ver Microscopía Óptica (776).) Aptitud del sistema
Análisis: Transferir 1 gota a un portaobjetos para mi- Muestra: Solución estándar
croscopio y esparcir uniformemente. Se puede usar iso- Reguisitos de aptitud
propanol como diluyente, si fuera necesario. Examinar Eficiencia de la columna: No menos de 1O 000 pla-
el portaobjetos bajo un microscopio equipado con un tos teóricos
micrómetro ocular calibrado, usando un aumento de Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
450x. Hacer un barrido del portaobjetos y anotar el ta- ácido alfa lipoico
maño de las partículas individuales. Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
Criterios de aceptación: No menos de 98% de las par- ácido alfa lipoico
tículas tienen una longitud inferior a 20 µm cuando se Análisis
miden a lo largo del eje más largo, no menos de 60% Muestras: Solución estándar y Solución muestra
de las partículas tienen una longitud inferior a 5 µm y Calcular el porcent9je de ácido alfa lipoico (CaH14Ü2S2)
no menos de 40% de las partículas tienen una longitud en la porción de Acido Alfa Lipoico tomada:
inferior a 2 µm.
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- ru = respuesta del pico de la Solución muestra
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar rs = respuesta del pico de ,la Solución estándar
fresco. C5 = concentración de ER Acido Alfa Lipoico USP en
• ETIQUETADO: Etiquetar indicando el contenido de lico- la Solución estándpr (mg/ml)
peno como un porcentaje y que el material se debe ca- Cu = concentración de Acido Alfa Lipoico en la
lentar a 50º y mezclar antes de usar. Etiquetar indicando Solución muestra (mg/ml)
el nombre científico en latín y la parte de la planta de la Criterios de aceptación: 99,0%-101,0% con respecto
que se obtuvo el artículo. a la sustancia seca
USP 37
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): Menos de 0,1%
• METALES PESADOS, tvfétodo 11 (231 ): No más de 1 o ppm
• PUREZA CROMATOGRAFICA, PROCEDIMIENTO 1
Solución amortiguadora, Fase móvil, Solución están-
dar, Solución muestra y Sistema cromatográfico:
Proceder según se indica en la Valoración.
Solución estándar diluida: Diluir la Solución estándar (1
en 1 000) con Fase móvil.
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar diluida
Requisitos de aptitud
Relación señal-ruido: No menos de 1 O
Desviación estándar relativa: No más de 10,0%
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcylar el porcentaje de cada impureza en la porción
de Acido Alfa Lipoico tomada:
Resultado = (ru! rr) x 100
ru = respuesta del pico de cada impureza individual
de la Solución muestra
r, = suma de las respuestas de todos los picos de
la Solución muestra
Criterios de aceptación
Impurezas individuales: No más de O, 1 %
Impurezas totale~: No más de 2,0%
• PUREZA CROMATOGRAFICA, PROCEDIMIENTO 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccLón actínica.]
Solución estándar A: 40,0 mg/ml de ER Acido Alfa Li-
poico USP en dimetilformamida , • CONTENIDO DE ÁCIDO ALFA LIPOICO
Solución estándar B: 20,0 mg/ml de ER Acido Alfa Li-
poico USP en dimetilformamida, a partir de Solución es-
tándar A
Solución estándar C: 10,0 mg/ml de ER Ácido Alfa Li-
poico USP en dimetilformamida, a partir de Solución es-
tándar B
Solución muestra: 40,0 mg/ml de Ácido Alfa Lipoico
en dimetilformamida
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Alcohol n-propílico, acetato de etilo, agua
e hidróxido de amonio al 25% (40:40:10:5). Dejar que
la cámara se sature durante al menos 1 hora.
Cámara saturada con vapor de yodo: Transferir 4 g
de cristales de yodo a un vidrio de reloj pequeño y
colocar en una cámara cromatográfica. Dejar que la
cámara se sature durante al menos 2 horas.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo, excepto que se
debe desarrollar hasta que el frente de la fase movil
haya recorrido 1 O cm. Retirar la placa y dejar que se
seque al aire hasta que el amoniaco desaparezca por
completo. Calentar a 50º durante 20 minutos, enfriar
la placa y colocarla en la Cámara saturada con vapor
de yodo hasta que las manchas se tornen visibles. El
valor RF de la mancha del ácido alfa lipoico es
0,25-0,30 y el de la mancha del ácido lipoico polimé-
rico es O.
Criterios de aceptación: Ninguna mancha diferente de
la mancha de ácido alfa lipoico de la Solución muestra,
es más intensa que la mancha al valor R, = O de la
Solución estándar A.
Suplementos Dietéticos/ Lipoico 6057
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• INTERVAW 9 TEMPERATURA DE FUSIÓN (741): 60,0º-62,0º
• ROTACION OPTICA, Rotación Específica (781 S)
Solución muestra: 50 mg/ml de Acido Alfa Lipoico en
alcohol deshidratado
<;:riterios de aceptación: -1,0' a +l,Oº
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra al vacío a
40 durante 3 horas: pierde no más de 0,2% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ESTÁl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Alfa Lipoico USP
Ácido Alfa Lipoico, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Ácido Alfa Lipoico contienen no menos de
90,0% y no más de 115,0% de la cantidad declarada de
CsH14Ü2S2.
IDENTIFICACIÓN
• El tiempo de retención del pico principal de la Solución
muestra corresponde al de la Solución estándar, según se
obtienen en la prueba de Contenido de Acido Alfa Lipoico.
CONTENIDO
Fase móvil: Ácido fosfórico 0,025 M y acetonitrilo
(62:38)
Solución estándar: 0,05 mg/ml de ER Ácido Alfa Li-
poico USP en acetonitrilo y agua (1 :1)
Solución muestra A (para Cápsulas de gelatina dura):
Vaciar y mezclar el contenido de no menos de 20 Cáp-
sulas. Transferir una porción del polvo, equivalente a
100 mg de ácido alfa lipoico, a un recipiente adecuado.
Agregar 70 ml de una mezcla de acetonitrilo y agua
(1 :1 ), y agitar mecánicamente durante 45 minutos.
Transferir a un matraz volumétrico de 100 ml, diluir
con la mezcla de acetonitrilo y agua (1 :1) a volumen, y
filtrar una porción de esta preparación, desechando los
primeros 5 ml del filtrado. Transferir 5,0 ml del filtrado
remanente a un matraz volumétrico de 1 00 ml y diluir
con acetonitrilo y agua (1 :1) a volumen.
Solución muestra B (para Cápsulas de gelatina blanda):
Usando un instrumento cortante adecuado, abrir un nú-
mero contado de Cápsulas equivalente a 500 mg de
ácido alfa lipoico. Transferir el contenido y las cubiertas
a un recipiente adecuado con tapón, agregar 500,0 ml
de una mezcla de acetonitrilo y agua (1 :1 ), y agitar
mecánicamente durante 45 minutos. Filtrar una porción
de esta preparación, desechando los primeros 5 ml del
filtrado. Transferir 5,0 ml del filtrado remanente a un
matraz volumétrico de 1 00 ml y diluir con acetonitrilo
y agua (1 :1) a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 300 platos
teóricos
Factor de asimetría: No más de 1,2 para ácido alfa
lipoico
6058 Lipoico / Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 1,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
apropiada
Calcular el porcentaje de ácido alfa lipoico en la por-
ción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra A o
Solución muestra B
r1 = respuesta del pico de )a Solución estándar
Cs = concentración de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido alfa lipoico en
la Solución muestra A o Solución muestra B
(mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 1 (para Cápsulas de gelatina dura): 100 rpm
Aparato 2 (para Cápsulas de gelatina blanda): 75 rpm
Tiempo: 60 min , Modo: HPLC
Solución estándar: 1 mg/ml de ER Acido Alfa Lipoico
USP en una mezcla de acetonitrilo y agua (1 :1 ). Diluir
con agua para obtener una concentración de 0,02 mg/
ml.
Solución muestra: Retirar una porción de la solución
en análisis y filtrar, desechando la primera porción del
filtrado. Transferir una alícuota a un matraz volumétrico
y diluir con agua a volumen para obtener una solución
con una concentración esperada de 0,02 mg/ml ácido
alfa lipoico.
Fase móvil y Sistema cromatográfico: proceder según
se indica en la prueba de Contenido de Acido Alfa
Lipoico.
Volumen de inyección: 50 µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de ácido alfa lipoico (CsH14Ü2S2)
disuelto:
Resultado = (ru/rs) X (V X c X D/L) X 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
V =volumen de Medio de, disolución, 900 ml
C = concentración de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solución estándar (mg/ml)
D = factor de dilución de la muestra
L = cantidad declarada de ácido alfa lipoico
(mg/Cápsula)
Tolerancias: No menos de 70% de la cantidad decla-
rada de CsH14Ü2S2.
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ácido Alfa Lipoico USP
Ácido Alfa Lipoico, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Ácido Alfa Lipoico contienen no menos de
90,0% y no más de 115,0% de la cantidad declarada de
CsH1402S2.
USP 37
IDENTIFICACIÓN
• El tiempo de retención del pico principal de la Solución
muestra corresponde al de la Solución estándar, según se
obtienen en la prueba de Contenido de Acido Alfa Lipoico.
CONTENIDO ,
• CONTENIDO DE ACIDO ALFA LIPOICO
Fase móvil: Ácido fosfórico 0,025 M y acetonitrilo
(62:38) .
Solución estándar: 0,05 mg/ml de ER Acido Alfa Li-
poico USP en acetonitrilo y agua (1: 1)
Solución muestra: Transferir el equivalente a 100 mg
de ácido alfa lipoico, a partir de no menos de 20 Table-
tas reducidas a polvo fino, a un recipiente adecuado.
Agregar 70 ml de una mezcla de acetonitrilo y agua
(1 :1 ), y agitar mecánicamente durante 45 minutos por
medios mecánicos. Transferir a un matraz volumétrico
de 100 ml, diluir con la mezcla de acetonitrilo y agua
(1 :1) a volumen, y filtrar una porción de esta prepara-
ción, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Trans-
ferir 5,0 ml del filtrado remanente a un matraz volumé-
trico de 100 ml y diluir con acetonitrilo y agua (1 :1) a
volumen.
Sistema cromato!Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Detector: UV 220 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 300 platos
teóricos
Factor de asimetría: No más de 1,2 para ácido alfa
lipoico
Desviación estándar relativa: No más de 1,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
ácido alfa lipoico (CsH14Ü2S2) en la porción de Table-
tas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de )a Solución estándar
Cs = concentración de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido alfa lipoico en
la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolución
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 2: 7 5 rpm
Tiempo: 60 min .
Solución madre del estándar: 1 mg/ml de ER Acido
Alfa Lipoico USP en una mezcla de acetonitrilo y agua
(1 : 1)
Solución estándar: 0,02 mg/ml, a partir de Solución
madre del estándar en agua
Solución muestra: Retirar una porción de la solución
en análisis y filtrar, desechando la primera porción del
filtrado. Transferir una alícuota a un matraz volumétrico
y diluir con agua a volumen para obtener una solución
con una concentración esperada de 0,02 mg/ml ácido
alfa lipoico.
Fase móvil y Sistema cromatográfico: proceder según
se indica en la prueba de Contenido de Acido Alfa
Lipoico.
USP 37 Suplementos Dietéticos / Luteína 6059

Volumen de inyección: 50 µL Criterios de aceptación: El valor R1 de la mancha prin-

Análisis cipal de la Solución muestra corresponde al de la Solu-
Muestras: Solución estándar y Solución muestra ción estándar.
Calcular el porcentaje de ácido alfa lipoico (CsH14Ü2S2)
disuelto: CONTENIDO
• PROCEDIMIENTO
Resultado = (ru/rs) X (V X cX D/L) X 100 Muestra: Una porción del polvo, a partir de no menos
de 20 Tabletas reducidas a polvo fino, equivalente a
ru = área del pico de la Solución muestra 75 mg de clorhidrato de lisina
rs = área del pico de la Solución estándar Blanco: Proceder según se indica en Análisis omitiendo
V =volumen de Medio de, disolución, 900 mL la Muestra.
C = concentración de ER Acido Alfa Lipoico USP en Sistema volumétrico
la Solución estándar (mg/mL) (Ver Volumetría (541 ).)
D = factor de dilución de la muestra Modo: Valoración directa
L = cantidad declarada de ácido alfa lipoico Solución volumétrica: Ácido perclórico O, 1 N SV
(mg/Tableta) Detección del punto final: Potenciométrica o visual
Tolerancias: No menos de 70% de la cantidad decla- Análisis: Disolver la Muestra en 5 mL de acetato mercú-
rada eje ácido alfa lipoico (CsH1402S2)., rico SR, con calentamiento suave. Enfriar y luego agre-
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091): gar 50 mL de ácido acético glacial. Cuando sea necesa-
Cumplen con los requisitos rio, agregar 3 gotas de cristal violeta SR. Valorar con
Solución volumétrica. Realizar una determinación con el
REQUISITOS ADICIONALES Blanco .
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de clor-
cerrados. hidrato de L-lisina (C6H14N202 · HCI) en la porción de
• ETIQUETADO: Cuando las Tabletas son recubiertas, así lo Muestra tomada:
ind)ca el etiquetado.
• ESTAi,IDARES DE REFERENCIA USP (11) Resultado = {[(Vs - Va) x N x f]/W} x 100
ER Acido Alfa Lipoico USP
V5 = volumen de Solución volumétrica consumido
por la Muestra (mL)
Va = volumen de Solución volumétrica consumido
por el Blanco (mL)
Acetato de Lisina-ver Acetato de Lisina en N = normalidad real de la Solución volumétrica
(mEq/mL)
Monografías Generales F =factor de equivalencia, 91,33 mg/mEq
W = cantidad nominal de clorhidrato de L-lisina en
la Muestra tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0-120,0%
Clorhidrato de Lisina-ver Clorhidrato de
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
Lisina en Monografías Generales • DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos de Desintegración.
Tiemp9: 20 min
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
Clorhidrato de Lisina, Tabletas
REQUISITOS ADICIONALES
DEFINICIÓN • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
Las Tabletas de Clorhidrato de Lisina contienen no menos cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
de 90,0% y no más de 120,0% de la cantidad declarada • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
de C6H14N202 · HCI, como clorhidrato de L-lisina. ER Clorhidrato de L-Lisina USP
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,4 mg/mL de ER Clorhidrato de L-
Lisina USP en agua Luteína
Solución muestra: Una solución filtrada en agua, equi-
valente a 0,4 mg/mL de clorhidrato de lisina, a partir de
Tabletas reducidas a polvo.
Sistema cromato9ráf1co
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía C40Hs602 568,87
/)-r-Carotene-3,3'-diol (3R,3'R,6'R) [127-40-2].
de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1O µL DEFINICIÓN
Fase móvil: Alcohol isopropílico e hidróxido de amo- La Luteína es la fracción purificada que se obtiene de la
nio (70:30) saponificación de la oleorresina de Tagetes erecta L. Con-
Solución reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en una tiene no menos de 80,0% de carotenoides totales calcula-
mezcla de alcohol butílico y ácido acético 2 N (95:5) dos como luteína (C0Hs602). Contiene no menos de
Análisis 74,0% de luteína y no más de 8,5% de zeaxantina, am-
Muestras: Solución estándar y Solución muestra bos calculados como luteína (C0Hs602), con respecto a la
Desarrollar la placa y secar a 100º-105º hasta que el sustancia anhidra.
amoníaco desaparezca por completo. Rociar con Solu-
ción reveladora y calentar a 100º-105º durante 15 mi-
nutos. Observar la placa bajo luz blanca.
6060 Luteína / Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA VISIBLE (197U)
Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
Solución muestra: Preparar según se indica en Solu-
ción muestra en la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales.
Criterios de aceptación: Cumple con los requisitos del
capítulo. El cociente de absorbancia entre A446/Am es
1,09-1, l 4.
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Luteína.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7:7:6)
Solución madre de la muestra: 0,3 mg/mL de Luteína
en Diluyente
Solución muestra: 3,0 µg/mL de Luteína en alcohol
deshidratado, a partir de la dilución de Solución madre
de la muestra
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 446 nm
Blanco: Alcohol deshidratado
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de carotenoides totales (7),
como luteína (C40Hs602), en la porción de Luteína
tomada:
Resultado = A/(F x C)
A = absorbancia de la Solución muestra
F = coeficiente de extinción (E 1%) de luteína en
alcohol (100 mL. g 1 • cm- 1 ), 2550
C = concentración de luteína en la Solución
muestra (g/mL)
Criterios de acepJación: No menos de 80,0%
• CONTENIDO DE LUTEINA
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (3: 1)
Solución estándar: 150 µg/mL de ER Luteína USP en
Fase móvil
Solución muestra: Transferir 1 mL de la Solución madre
de la muestra de la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales y evaporar bajo una corriente de nitrógeno
hasta sequedad. Agregar 1 mL de Fase móvil y someter
a ultrasonido hasta disolver.
Sistema cromatowáfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis a 446 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para luteína
y zeaxantina son aproximadamente 1,0 y 1,05,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,0 entre luteína y
zeaxantina
Factor de asimetría: No más de 2,0
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje del pico de luteína como el área
total detectada en la porción de Luteína tomada:
Resultado = (ru/rr) x 100
USP 37
ru = respuesta del pico de luteína
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No menos de 85%
Calcular el porcentaje de luteína en la porción de Lu-
teína tomada:
Resultado = (ru/rr) x T
ru = respuesta del pico individual
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de carotenoides totales, según se
determina en la prueba de Contenido de
Carotenoides Totales
Criterios de aceptación: No menos de 74,0% de lu-
teína con respecto a la sustancia anhidra
• ZEAXANTINA Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Fase móvil, Solución estándar, Solución muestra y Sis-
tema cromatográfico: Proceder según se indica en
Contenido de Luteína.
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de zeaxantina como el área total
detectada en la porción de Luteína tomada:
Resultado= (ru/rr) x 100
ru = respuesta del pico de zeaxantina
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No más de 9,0%
Calcular el porcentaje de zeaxantina en la porción de
Luteína tomada:
Resultado = (ru!rr) x T
ru = respuesta del pico de zeaxantina
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de carotenoides totales, según se
determina en la prueba de Contenido de
Carotenoides Totales
Calcular el porcentaje de otros compuestos relacionados
en la porción de Luteína tomada:
Resultado = (ru!rr) x 100
ru = respuesta del pico individual de cualquier otro
pico en el cromatograma (excluyendo
zeaxantina y luteína)
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No más de 8,5% de zeaxan-
tina; no más de 1,0% de cualquier otro compuesto re-
lacionado individual con respecto a la sustancia anhidra
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 2,0%
• PLOMO (251): No más de 1 ~pm
• METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 5 ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): No más de
1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases se-
llados herméticamente y resistentes a la luz y al oxígeno.
Alll)acenar en un lugar fresco.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Luteína USP
USP 37
Luteína, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Sápsulas de Luteína contienen no menos de 95,0% y no
mas de 1 30,0% de la cantidad declarada de luteína
(C40Hs602). Pueden contener no más de 9% de zeaxantina
del contenido de carotenoides totales.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales.
Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
Relación: A446/ A474, 1,09-1, 14
• B.,, El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
cJOn muestra corresponde al de la Solución estándar se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Lutefna y
Zeaxantina.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7: 7:6)
Solución madre de la muestra: Pesar no menos de 1 O
Cápsulas .en ur_i frasco de pesad.a tarado. Con ayuda de
una cuchilla afilada u otro medio adecuado abrir cuida-
dosamente las Cápsulas, sin perder el mate~ial de la cu-
bierta y transferir tanto como sea posible del contenido
combinado de las Cápsulas a un recipiente adecuado.
Retirar c.ualquier sustanci.a adherida a las Cápsulas vacías
y los residuos de las cubiertas lavando con varias por-
ci~nes pequeñas de n-hexano. ¡;>esechar los lavados y
deiar que las ~ub1ertas de las Capsulas vacías y los res-
tos de las cubiertas se sequen en una corriente de aire
seco hasta que el olor a n-hexano sea imperceptible.
Pesar l~s cubiertas de las Cápsulas vacías y los restos de
las cubiertas en el frasco de pesada tarado original y
c?lcul~r el peso neto p;omedio por Cápsula por diferen-
cia. Disolver una porc1on pesada con exactitud del con-
tenido combinado de las Cápsulas en Diluyente mez-
cl_an.do con ~na barra magnética durante 30 minutos y
dtlu1r con Diluyente hasta un volumen desi9nado para
obtener una solución con una concentracion nominal
de 0,2 mg/mL de luteína.
Solución muestra: Diluir una porción de la Solución ma-
dre de la mu~stra con alcohol deshidratado para prepa-
rar una solución con una concentración nominal de
2,0 µg/mL de luteína.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
longitud de onda analítica: 446 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Alcohol deshidratado
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el contenido de carotenoides totales como lu-
teína (C0Hs602), (T), en mg/Cápsula, en las Cápsulas
tomadas:
Resultado = [(A x D x V)!(F x W)] x Aw
A = absorbancia de la Solución muestra
D = dilución para obtener la Solución muestra a
partir de la Solución madre de la muestr~
V = volumen de la Solución muestra (mL)
F = absortividad de la luteína en alcohol 255 O
(ml/mg . cm) ' '
w = peso del contenido de las cápsulas para
preparar la Solución madre de la muestra
(mg)
= peso promedio del contenido de las cápsulas
(mg/Cápsula)
Suplementos Dietéticos/ Luteína 6061
• CONTENIDO DE LUTEÍNA Y ZEAXANTINA
Fase ~óvil: ,Hexano y acetato de etilo (3: 1)
Soluc1on estandar: 150 pg/mL de ER Luteína USP en
Fase móvil
Solución muestra: Transferir 1 mL de Solución madre de
la muestra de la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales y evaporar bajo una corriente de nitrógeno
hasta sequedad. Agregar 1 mL de Fase móvil y someter
a ultrasonido hasta disolver.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografm (621 ), Aptitud del sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis a 446 nm
Colu~na: 4,6 n;m x 25 cm; relleno L3 de 5 µm
Velocidad de flu¡o: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para luteína
y zeaxa.ntina son aproximadamente 1,0 y 1,05,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resoluci?n: No menos de 1,0 entre luteína y
zeaxant1na
Factor de asimetría: No más de 2 O
Desviación estándar relativa: No 'más de 2 0%
Análisis '
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de lu-
teína en las Cápsulas tomadas:
Resultado= [(ru/r1) x T] x (100/L)
ru = respuesta del pico de luteína
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = contenid_o de carotenoides totales según se
determinaron en la prueba de Contenido de
Carotenoides Totales (mg/Cápsula)
L = cantidad declarada de luteína (mg/Cápsula)
Calcular. el porcentaje de zeaxantina con respecto al
contenido de carotenoides totales en las Cápsulas
tomadas:
Resultado = (rz/ rr) x 100
rz = respuesta del pico de zeaxantina
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: 95,0%-130,0% de la cantidad
declarada de luteína; no más de 9,0% de zeaxantina en
el contenido de carotenoides totales
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de Desintegración.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: Etiquetar indicando la cantidad de luteína y
la c;antidad de zeaxantina por Cápsula.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Luteína USP
Luteína, Preparación
DEFINICIÓN
La Preparación de Luteína es una combinación de Luteína
con una o más sustancias inertes. Puede presentarse en
forma sólida o líquida. Contiene no menos de 95,0% y no
más de 1 30,0% de la cantidad declarada de luteína, cal-
6062 Luteína / Suplementos Dietéticos
culada como C40 Hs602 con respecto a la sustancia anhi-
dra. Contiene no menos de 85,0% de luteína y no más
de 9,0% de zeaxantina, ambos con respecto al contenido
de carotenoides totales.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Longitud de onda analítica: 300-700 nm
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales.
Cociente: A446/A474, 1, 09-1, 14
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la prueba de Contenido de Luteína.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7:7:6)
Solución madre de la muestra A (para preparaciones
sólidas de luteína que declara contener gelatina):
Transferir una cantidad de Preparación, equivalente a
3,5 mg de luteína, a un tubo de centrífuga de 50 ml.
Agregar 15 mL de agua tibia, 60 unidades de prepara-
ción de proteasa alcalina bacteriana y 1 mg de brome-
lina. Tapar y someter a ultrasonido durante 20 minutos
agitando por rotación suave ocasionalmente. Enfriar a
temperatura ambiente y agregar 20,0 mL de cloruro de
metileno. Agitar durante 1 minuto y centrifugar durante
5 minutos a 2000 rpm. Retirar la fase acuosa superior y
agregar 2-3 g de sulfato de sodio anhidro a la capa roja
remanente.
Solución madre de la muestra B (para otras preparacio-
nes sólidas de luteína): Transferir una cantidad de Pre-
paración, equivalente a 1,5 mg de luteína, a un tubo de
centrífuga de 50 ml. Agregar 15 ml de agua tibia, ta-
par, y someter a ultrasonido durante 30 minutos agi-
tando por rotación suave ocasionalmente. Enfriar a tem-
peratura ambiente y agregar 30,0 ml de acetato de
etilo y 2-3 g de cloruro de sodio. Agitar durante 1 mi-
nuto y centrifugar durante 5 minutos a 2000 rpm. Usar
la capa superior de color rojo anaranjado.
Solución madre de la muestra C (para suspensiones lí-
quidas de luteína en aceite): Transferir una cantidad
pesada de Preparación equivalente a 20 mg de luteína a
un matraz volumétrico de 100 ml y diluir con Diluyente
a volumen. Agregar una barra magnética y mezclar du-
rante 30 minutos.
Solución muestra: Transferir 1,0 ml de Solución madre
de la muestra A o 1,0 ml de Solución madre de Ja mues-
tra B o 1,0 ml de Solución madre de Ja muestra Ca un
matraz volumétrico de 100 ml, y diluir con alcohol des-
hidratado a volumen.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 446 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Alcohol deshidratado
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de carotenoides totales (T)
como luteína (C40Hs602) en la Preparación:
Resultado =(A X V X D X 100)/(F X W)
A = absorbancia de la Solución muestra
F = absortividad de la luteína en alcohol, 255,0
(ml/mg ·cm)
V = volumen de disolvente orgánico (20,0 ml para
la Solución madre de Ja muestra A, 30,0 ml
para la Solución madre de Ja muestra B y
100,0 ml para la Solución madre de la
muestra C) usado en la preparación de las
Soluciones madre de Ja muestra
USP 37
D = factor de dilución usado para preparar la
Solución muestra a partir de las Soluciones
madre de Ja muestra
W = peso de la Preparación tomada para preparar
las Solus:iones madre de la muestra (mg)
• CONTENIDO DE LUTEINA
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7:7:6)
Fase móvil: Hexano y acetato de etilo (75:25)
Solución estándar: 150 µg/ml de ER Luteína USP en
Fase móvil
Solución muestra: Transferir 1,0 ml de Solución madre
de la muestra A o 1,0 ml de Solución madre de Ja mues-
tra B o 2,0 ml de Solución madre de la muestra C de la
prueba de Contenido de Carotenoides Totales a un vial
adecuado. Evaporar el disolvente hasta sequedad bajo
una corriente de nitrógeno. Agregar 1,0 ml de Fase mó-
vil y someter a ultrasonido hasta disolver.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 446 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para luteína
y zeaxantina son aproximadamente 1,0 y 1,05,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,0 entre luteína y
zeaxantina
Factor de asimetría: No más de 2
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución muestra
Calcular el porcentaje de luteína relativa a los carote-
noides totales en la Preparación tomada:
Resultado = (ru/r1) x 100
ru = respuesta del pico individual de luteína
r1 = suma de las respuestas de todos los picos
Calcular el porcentaje de luteína en la Preparación
tomada:
Resultado =(ru/r1) x T
ru = respuesta del pico individual de luteína en la
Solución muestra
r1 = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de carotenoides totales según se
determina en la prueba de Contenido de
Carotenoides Totales
Criterios de aceptación: No menos de 85,0% de lu-
teína en el contenido de carotenoides totales, y la Pre-
paración contiene 95,0%-130,0% de la cantidad decla-
rada de luteína, calculada como C40Hs6Ü2, con respecto
a la sustancia anhidra.
• ZEAXANTINA Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Disolvente, Fase móvil, Solución estándar, Solución
muestra y Sistema cromatográfico: Proceder según
se indica en la prueba de Contenido de Luteína.
Análisis
Muestra: Solución muestra
Volumen de inyección: 1O µL
Calcular el porcentaje de zeaxantina relativa a los caro-
tenoides totales en la Preparación tomada:
Resultado =(ru/r1) x 100
ru = respuesta del pico individual de zeaxantina
r1 =suma de las respuestas de todos los picos
USP 37
Criterios de aceptación
Zeaxantina: No más de 9,0%
Cualquier otro compuesto relacionado individual:
No más de 1,0%
Compuestos relacionados totales (incluyendo zeaxan-
tina): No más de 15,0%
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 2,0%
• PLOMO (251 ): No más de 1 ppm
• METALES PESADOS (231): No más de 1o ppm
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): No más de
10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases se-
llados herméticamente y resistentes a la luz y al oxígeno.
Almacenar en un lugar fresco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que este artículo no está
destinado para su administración directa en humanos o
animales.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Luteína USP
Gluconato de Magnesio-ver Gluconato de
Magnesio en Monografías Generales
Gluconato de Magnesio, Tabletas-ver
Gluconato de Magnesio, Tabletas en
Monografías Generales
Óxido de Magnesio, Cápsulas-ver Óxido
de Magnesio, Cápsulas en Monografías
Generales
Óxido de Magnesio, Tabletas-ver Óxido
de Magnesio, Tabletas en Monografías
Generales
Gluconato de Manganeso-ver Gluconato
de Manganeso en Monografías Generales
Hierro, Carbonilo-ver Hierro, Carbonilo en
Monografías Generales
Hojas del Árbol de Nuez de Malabar
DEFINICIÓN
Las Hojas del Árbol de Nuez de Malabar, también conocidas
comercialmente como vasaka, consisten en las hojas secas
de justicia adhatoda L., también conocida como Adhatoda
vasica Nees (Fam. Acanthaceae). Contiene no menos de
Suplementos Dietéticos /Malabar 6063
0,6% de vasicina, calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Las Hojas del Árbol de Nuez de Malabar cumplen con
los requisitos de Pruebas Específicas, Características Botáni-
cas.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Vasicina USP en
metano!. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solución estándar B; 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución mue~tra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar, reducidas a
polvo fino y pesadas con exactitud, a un matraz de
fondo redondo de 250 mL equipado con un condensa-
dor de reflujo. Agregar 50 mL de metano!, someter a
reflujo en un baño de agua durante 15 minutos, enfriar
a temperatura ambiente y decantar el sobrenadante.
Repetir hasta que el último extracto se torne incoloro.
Combinar los extractos, filtrar, concentrar al vacío y
ajustar el volumen hasta 25 mL usando metano!.
[NOTA-Reservar el filtrado para su uso en la prueba de
Contenido de Vasicina.]
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas de 4 mm
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metano! y
amoníaco (8: 2: 0,2)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 ), Cromatografía en capa delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar y observar
bajo UV a 254 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de extinción a un valor
RF de aproximadamente 0,35 para vasicina, correspon-
diente a una zona en el cromatograma de la Solución
estándar A. El cromatograma de la Solución muestra
también presenta una zona de extinción adicional a un
valor RF de aproximadamente 0,53 para vasicinona, co-
rrespondiente a una zona similar en el cromatograma
de la Solución estándar B. Se pueden observar otras zo-
nas menores en los cromatogramas de la Solución mues-
tra y la Solución estándar B.
• C. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra de la
prueba de Contenido de Vasicina presenta un pico princi-
pal a un tiempo de retención correspondiente al de vasi-
cina en el cromatograma de la Solución estándar A. Iden-
tificar otros picos en la Solución muestra por comparación
con el cromatograma de la Solución estándar B y el cro-
matograma de referencia proyisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
USP usado. La Solución muestra presenta un pico adicio-
nal correspondiente a vasicinona.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE VASICINA
Solución amortiguadora: Disolver 1,36 g de fosfato
diácido de potasio anhidro en 900 mL de agua. Agregar
2,0 mL de acido fosfórico. Diluir con agua hasta
1000 mL y filtrar.
Fase móvil: Solución amortiguadora, acetonitrilo y tetra-
hidrofurano (92:5:3)
6064 Malabar / Suplementos Dietéticos
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Vasicina USP en
metanoL Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solución estándar B; 5,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metanol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos. Antes de la inyección, pasar a través
de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor.
Solución muestra: Diluir la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Identificación A (1 :5),
con metanol. Antes de la inyección, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor y desechar la primera parte del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 O de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
de los picos de vasicina y vasicinona son 1,00 y 1,23,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP
usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de vasi-
cina y vasicinona, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminado a partir del pico de vasicina en inyecciones
repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar A de
la Solución estándar By el cromatograma de refer~n­
cia provist9 con el lote de ER Extracto en Polvo de
Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP usado, iden-
tificar los tiempos de retención de los picos corres-
pondientes a vasicina y vasicinona.
Calcular ~I porcentaje de vasicina en la porción de Ho-
jas del Arbol de Nuez de Malabar tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/VV) x 100
ru = respuesta del pico de vasicina de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de vasicina de la Solución
estándar A
C1 = concentración de ER Vasicina USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen de la Solu~ión muestra (mL)
W = peso de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
tomado para preparar la Solución muestra
(mg)
Criterios de aceptación: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)// (231): No más de 20 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 1 ufc/g.
USP 37
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel!a spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Hojas simples de color verde a marrón
grisáceo opaco, con pubescen'cia diminuta, lanceoladas
a ovado-lanceoladas, base ahusada y ápice ligeramente
acumina,do, de 10-20 cm de largo, 3-1 O cm de ancho,
con peciolos de 2-8 cm de largo y 8-1 O pares de nerva-
duras laterales reticuladas; olor característico y sabor
amargo. El artículo farmacopeico consiste en hojas se-
~as, par!idas y de color marrón grisáceo.
H1stolog1a
Sección transversal de las hojas: Las células epidérmi-
cas superiores son uniformes en tamaño y con forma
sin~osa, mientr~s que las células epidérmicas inferiores
vanan en tamano y son menos onduladas; 4-6 capas
de células colenquimáticas debajo de la epidermis en
la región de la nervadura central; presenta dos capas
de celulas en empalizada con cistolitos alargados, los
cu~le_s están auserite_s en las células epidérmicas (carac-
tenst!ca de d1agnost1co que no se observa en las hojas
tje Atlanthus excelsa, un adulterante de las Hojas del
Arbol de Nuez de Malabar); glóbulos de aceite disper-
sos en capas esponjosas y en empalizada; numerosos
estomas diacíticos o anomocíticos; se observan trico-
m~s 9laridulares y no glandulares en ambas capas
, ep1derm1cas. ,
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Hojas del Ar-
bol de Nuez de Malabar reducidas a polvo fino a 105º
du~ante 3 horas: pierde f}O más de 12,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 21 %, determinado en 1,0 g de Hojas del Ár-
bol, de Nuez de Malabar _reducidas a polvo fino. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 2%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11),
ER Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de
Malabar USP
ER Vasicina USP
Ho,·as del Árbol de Nuez de Malabar en
Povo
DEFINICIÓN
Las Hojas del Árbol de Nuez de Malabar en Polvo son Hojas
del Arbol de_ Nuez de_ Malabar reducidas a polvo o a
polvo muy fino. Contienen no menos de 0,6% de vasi-
cina, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Las Hojas del Árbol de Nuez de Malabar en Polvo
cumplen con los requisitos de Pruebas Específicas, Carac-
terísticas Botánicas .
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Vasicina USP en
metanol. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
USP 37
Solución estándar B; 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución mue~tra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar en Polvo, pesa-
dos con exactitud, a un matraz de fondo redondo de
250 mL equipado con un condensador de reflujo. Agre-
gar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un baño de
agua durante 15 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el
último extracto se torne incoloro. Combinar los extrac-
tos, filtrar, concentrar al vacío y ajustar el volumen
hasta 25 mL usando metano!. lNOTA-Reservar el fil-
trado para su uso en la prueba de Contenido de Vasi-
cina.]
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 10-15 µm (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 1O µL, en bandas de 4 mm
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metano! y
amoníaco (8: 2: 0,2)
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 ), Cromatografía en Capa Delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cámara, secar y observar
bajo UV a 254 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de extinción a un valor
RF de aproximadamente 0,35 para vasicina, correspon-
diente a una zona en el cromatograma de la Solución
estándar A. El cromatograma de la Solución muestra
también presenta una zona de extinción adicional a un
valor RF de aproximadamente 0,53 para vasicinona, co-
rrespondiente a una zona similar en el cromatograma
de la Solución estándar B. Se pueden observar otras zo-
nas menores en los cromatogramas de la Solución mues-
tra y la Solución estándar B.
• C. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra de la
prueba de Contenido de Vasicina presenta un pico princi-
pal a un tiempo de retención correspondiente al de vasi-
cina en el cromatograma de la Solución estándar A. Iden-
tificar otros picos en la Solución muestra por comparación
con el cromatograma de la Solución estándar B y el cro-
matograma de referencia proyisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
USP usado. La Solución muestra presenta un pico adicio-
nal correspondiente a vasicinona.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE VASICINA
Solución amortiguadora: Disolver 1, 36 g de ortofos-
fato diácido de potasio anhidro en 900 mL de agua de
grado HPLC. Agregar 2,0 mL de ácido fosfórico. Diluir
con agua hasta 1 000 mL y filtrar.
Fase móvil: Solución amortiguadora, acetonitrilo y tetra-
hidrofurano (92:5:3)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Vasicina USP en
metano!. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solución estándar B; 5,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos. Antes de la inyección, pasar a través
de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor.
Solución muestra: Diluir la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Identificación A (1 :5),
con metano!. Antes de la inyección, pasar a través de
)uplementos Dietéticos / Malabar 6065
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor y desechar la primera parte del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 O de 5 pm
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del .sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
de los picos de vasicina y vasicinona son 1,00 y 1,23,
respectiva mente. j
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP
usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de vasi-
cina y vasicinona, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de vasicina en inyecciones
repetidas, Solución estandar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, de
la Solución estándar By el cromatograma de referen-
cia provist9 con el lote de ER Extracto en Polvo de
Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP usado, iden-
tificar los tiempos de retención de los picos corres-
pondientes a vasicina y vasicinona.
Calcular ~I porcentaje de vasicina en la porción de Ho-
jas del Arbol de Nuez de Malabar en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de vasicina de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de vasicina de la Solución
estándar A
Cs = concentración de ER Vasicina USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V =volumen de la Soluf:iÓn muestra (mL)
W = peso de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
en Polvo tomado para preparar la Solución
muestra (m<;¡)
Criterios de aceptacion: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método /JI (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Polvo de color marrón ver-
doso; con olor característico y sabor amargo. Al micros-
copio, presenta células parenquimáticas con cistolitos
alargados; glóbulos de aceite; células epidérmicas con
numerosos estomas diacíticos o anomocíticos, con trico-
mas rugosos glandulares y no glandulares, de 1 a 3 célu-
las y paredes delgadas.
6066 Malabar / Suplementos Dietéticos
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Hojas del Ár-
bol de Nuez de Malabar en Polvo a 1 05' durante 3 ho-
ras: pierde no más de 12,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561): ,
No más de 21 %, determinado en 1,0 g de Hojas del Ar-
bol de Nuez de Malabar en Polvo. , • B. HPLC: El cromatograma de la Solución muestra de la
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561 ): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente. . . . ,.
• ETIQUETADO: La etiqueta 1nd1ca el nombre c1ent1f1co en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11),
ER Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de
Malabar USP
ER Vasicina USP
Extracto en Polvo de Hojas del Árbol de
Nuez de Malabar
DEFINICIÓN , Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
El Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
se prepara a partir de Hojas del Arbol de Nuez de Mala-
bar usando disolventes adecuados tales como agua, meta-
no! o una mezcla de estos disolventes. La relacion entre el
material vegetal y el extracto está entre 8:1 y 5:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no más de 11 0,0% de la
cantidad declarada de vasicina. Puede contener sustancias
agregadas adecuadas como portadores.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Vasicina USP en
metanol. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solución estándar B; 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metanol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 1 5 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución m,uestra: 50 mg/mL de Extracto en Polvo de
Hojas del Arbol de Nuez de Ma_labar en metanol. _Some-
ter a ultrasonido durante aproximadamente 15 minu-
tos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño promedio de part1cula de 1 0-15 µm (placas
para TLC)
Volumen de aplicación: 1 O µL, en bandas de 4 mm
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, metanol y
amoníaco (8: 2: 0,2)
Análisis
Muestras: Solución estándar A Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 ), Cromatografía en Capa Delgada). Usar
una cámara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase móvil haya recor~ido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa de la cámara, secar y observar bajo UV a 254
nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona de ext!n_ción a un valor
RF de aproximadamente O, 35 para vas1c1na, corresp?n-
diente a una zona en el cromatograma de la Soluoon
estándar A. El cromatograma de la Solución muestra
también presenta una zona de extinción adicional a un
USP 37
valor RF de aproximadamente 0,53 para vasicinona, co-
rrespondiente a una zona similar en el cromatograma
de la Solución estándar B. Se pueden observar otras zo-
nas menores en los cromatogramas de la Solución mues-
tra y la Solución estándar B.
prueba de Contenido de Vasicina presenta un pico princi-
pal a un tiempo de retención correspondiente al de vasi-
cina en el cromatograma de la Solución estándar A. lde~­
tificar otros picos en la Solución muestra por comparac1on
con el cromatograma de la Solución estándar By el cro-
matograma de referencia proyisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
USP usado. La Solución muestra presenta un pico adicio-
nal correspondiente a vasicinona.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE VASICINA
Solución amortiguadora: Disolver 1, 36 g de fosfato
diácido de potasio anhidro en 900 mL de agua de
grado HPLC. Agregar 2,0 mL de ácido fosfórico. Diluir
con agua hasta 1000 mL y filtrar.
Fase móvil: Solución amortiguadora, acetonitrilo y tetra-
hidrofurano (92:5:3)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Vasicina USP en
metanol. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solución estándar B; 5,0 mg/mL de ER Extracto en
metanol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos. Antes de la inyección, pasar a través
de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor.
Solución muestra: 5,0 mg/mL de Extracto en Polvo en
metanol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos. Antes de la inyección, pasar a través
de un filtro de membrana con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor y desechar la primera parte del
filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 O de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
de los picos de vasicina y vasicinona son 1,00 y 1,23,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP
usado.
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de vasi-
cina y vasicinona, Solución estándar B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de vasicina en inyecciones
repetidas, Solución estandar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, de
la Solución estándar By el cromatograma de referen-
cia provist9 con el lote de ER Extracto en Polvo d_e
Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP usado, iden-
tificar los tiempos de retención de los picos corres-
pondientes a vasicina y vasicinona.
Calcular el porcentaje de vasicina en la porción de Ex-
tracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x 100
USP 37
ru = respuesta del pico de vasicina de la Solución
muestra
r5 = respuesta del pico de vasicina de la Solución
estándar A
Cs = concentración de ER Vasicina USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de Hojas
del Árbol de Nuez de Malabar en la Solución
muestra (m9/mL)
Criterios de aceptacion: 90,0%-11 0,0% de la cantidad
declarada de vasicina
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos .
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo a 105º durante 3 horas: pierde no más de 5,0% de
su peso.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11),
ER Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de
Malabar USP
ER Vasicina USP
Manzanilla
DEFINICIÓN
La Manzanilla se compone de capítulos florales secos de Ma-
tricaria recutita L. (Matricaria chamomilla L., Matricaria cha-
momilla L. var. courrantiana, Chamomilla recutita L.) Raus-
chert (Fam. Asteraceae alt. Compositae). Contiene no
menos de 0,4% de aceite volátil azul, no menos de 0,3%
de apigenina-7-glucósido y no menos de O, 15% de deri-
vados de bisabolano, calculado como levomenol.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1,0 mg/mL de borneol, 2,0 mg/mL
de acetato de bornilo y 0,4 mg/mL de guaiazuleno en
tolueno
Solución muestra: Reducir 1,0 g de Manzanilla a polvo
grueso usando un mortero de porcelana. Transferir a
una columna cromatográfica de 1,5 cm x 15 cm y api-
sonar suavemente con un manguito corto de goma. En-
juagar la mano de mortero y el mortero dos veces con
1O mL de cloruro de metileno cada vez. Verter los en-
juagues en la columna. Recoger el percolado en un ma-
traz de cuello largo y estrecho, y eliminar el disolvente
Suplementos Dieteticos / Manzanilla 6067
mediante evaporación en un bano de agua. Disolver el
residuo en 0,5 ml de tolueno.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm
Fase móvil: Cloroformo
Solución reveladora: Mezclar anisaldehído, ácido acé-
tico glacial y metanol (0,5: 1O: 85). Luego, agregar cui-
dadosamente 5 mL de ácido sulfúrico a esta solución.
Volumen de aplicación: 1O µL, en bandas de 3 mm x
20mm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta: la Solución muestra presenta diversas zonas de
extinción, la mayor de las cuales se debe al en-in-
dicicloéter y tiene el mismo valor RF que la banda
debida al acetato de bornilo en la Solución estándar.
Hay además otra banda debida a Ja matricina cerca
de la línea de aplicación. Rociar la placa uniforme-
mente con la Solución reveladora. Observar la placa
en luz diurna mientras se calienta a 100º-l 05º du-
rante 5-1 O minutos. El cromatograma obtenido a
partir de la Solución estándar presenta en el tercio in-
ferior una zona de color amarillo amarronado que se
torna gris violáceo después de unas pocas horas, lo
cual se debe al borneol; en el medio, una zona de
color marrón amarillento a gris debida al acetato de
bornilo; y en el tercio superior una zona de color rojo
intenso con un borde azul debido al guaiazuleno.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
una zona azul debida a la matricina cerca del punto de
partida; varias zonas de color rojo violáceo, una de las
cuales se debe al bisabolol, a valores RF entre los de
borneol y acetato de bornilo; una zona de color marrón
debida al en-in-dicicloéter, a un valor RF correspon-
diente al del acetato de bornilo; zonas de color rojo
debido a terpenos, a valores RF similares a los del guaia-
zuleno; y otras zonas que aparecen en las partes media
e inferior del cromatograma.
• B.
Análisis: Disolver 0,25 g de dimetilaminobenzaldehído
en una mezcla de 5 mL de ácido fosfórico, 45 mL de
ácido acético y 45 mL de agua. Transferir 2,5 mL de
esta solución y O, 1 ml de la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Identificación A, a un
tubo de ensayo. Calentar en un baño de agua durante
2 minutos y dejar que se enfríe. Agregar 5 mL de éter
de petróleo y agitar.
Criterios de aceptación: La capa acuosa tiene un color
azul verdoso o azul nítido.
COMPOSICIÓN ,
• CONTENIDO DE APIGENINA-7-GLUCOSIDO
Ácido fosfórico diluido: Mezclar 5,0 mL de ácido fosfó-
rico en 50 mL de a9ua. Diluir con agua hasta 100 ml.
Solución A: Solucion de f9sfato monobásico de potasio
de 0,005 M. Ajustar con Acido fosfórico diluido a un pH
de 2,55 ± 0,05.
Solución B: Acetonitrilo y metanol (1 3:7)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 74 26
74 26
3
22 15 85
27 74 26
30 74 26
Solución estándar: 25,0 µg/ml de ER Apigenina-7-glu-
cósido USP y 10,0 µg/mL de 7-metoxicumarina en me-
tanol y agua (1 :1)
6068 Manzanilla / Suplementos Dietéticos USP 37

Solución muestra: Transferir 1,0 g de Manzanilla a un Modo: Cromatografía de Gases

matraz adecuado equipado con un condensador de re- Detector: Ionización a la llama
flujo y un mezclador. Agregar 80,0 ml de metanol y Columna: Capilar, de sílice fundida, de 0,32 mm x 30
someter la mezcla a reflujo mezclando durante 1 hora. m; recubierta con una película de fase Gl 6 de 0,25
Enfriar el matraz a temperatura ambiente, pasar el ex- µm
tracto a través de papel de f~ltr_o plegado y recoger el Temperatura
filtrado en un matraz volumetrrco de 100 ml. Enjuagar Columna: Ver la Tabla 2.
el matraz con 3 ml de metanol, verter los enjuagues
metanólicos a través del papel de filtro y agregar el Tabla 2
filtrado al matraz volumétrico. Diluir con metanol a vo-
lumen y mezclar. Transferir 25,0 ml de la solución fil- Tiempo de
trada a un matraz de fondo redondo equipado con un Espera
condensador de reflujo y un mezclador, agregar 5,0 ml (Hold Time)
de solución de hidróxido de sodio preparada disol- Temperatura Rampa de Temperatura a la Tempe-
viendo 0,4 g de hidróxido de sodio en 5,0 ml de agua, Inicial Temperatura Final ratura Final
y someter la mezcla a reflujo durante 25 minutos. En- (º) íº/min\ (º\ ímin)
friar el matraz y ajustar la solución con ácido clorhídrico 70 4 230 10
a un pH de 5,0-6,2. Transferir cuantitativamente la so-
lución a un matraz volumétrico de 50 ml, diluir con Detector: 250º
metanol a volumen y filtrar, desechando los primeros Inyector: 220º
1O ml del filtrado. Gas transportador: Helio
Sistema cromatográfico Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.) Volumen de inyección: 1 µL
Modo: HPLC Aptitud del sistema
Detector: UV 335 nm Muestra: Solución estándar
Columna: 4 mm x 12,5 cm; relleno L1 Requisitos de aptitud
Velocidad de flujo: 1 ml/min Factor de asimetría: No más de 1,8 para levomenol
[NOTA-Hacer ajustes, si fuera necesario, para obtener Desviación estándar relativa: No mas de 2,0%
tiempos de retención relativos de 0,63 para apigenina- Análisis
7-glucósido y 1,0 para 7-metoxicumarina.] Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Volumen de inyección: 15 µL Medir las áreas de los picos. Identificar los picos debi-
Aptitud del sistema dos a levomenol, óxido de bisabolol B, óxido de bisa-
Muestra: Solución estándar bolol y óxido de bisabolol A en la Solución muestra,
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para apige- usando el tiempo de retención de levomenol en la
nina-7-glucósido, 7-metoxicumarina, apigenina, trans- Solución estándar y los tiempos de retención relativos
espiroéter y cis-espiroéter son aproximadamente 0,63; aproximados de 0,89; 0,97 y l, 1 para óxido de bisa-
1,0; 1,2; 1,6 y 1,8, respectivamente.] bolol B, óxido de bisabolol y óxido de bisabolol A,
Requisitos de aptitud respectivamente, con referencia al pico de levomenol.
Resolución: No menos de 3,5 entre apigenina-7-glu- Calcular el porcentaje de los derivados de bisabolano en
cósido y 7-metoxicumarina la porción de Manzanilla tomada:
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
apigenina-7-glucósido Resultado = (rr/rs) x Cs x (V/W) x 100
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra rr = suma de las áreas de los picos de óxido de
[NOTA-Dejar que la Solución muestra eluya durante no bisabolol B, óxido de bisabolol, levomenol y
menos de 6 veces el tiempo de retencion de apige- óxido de bisabolol A de la Solución muestra
nina-7-glucósido.] rs = área del pico de levomenol de la Solución
Calcular el porcentaje de apigenina-7-glucósido en la estándar
porción de Manzanilla tomada: Cs = concentración de ER Levomenol USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100 V = volumen de Solución muestra (ml)
W = peso de Manzanilla tomado para preparar la
ru = respuesta del pico de apigenina-7-glucósido Solución muestra (mg)
de la Solución muestra Cri,terios de aceptación~ No menos de O, 15%
rs = respuesta del pico de apigenina-7-glucósido • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Determinación de Aceite
de la Solución estándar Volátil (561)
Cs =concentración de ER Apigenina-7-glucósido Análisis: Proceder según se indica, excepto que se debe
USP en la Solución estándar (mg/ml) usar 60 g de Manzanilla reducida a polvo grueso como
V =volumen de Solución muestra (ml) muestra de prueba, un matraz de fondo redondo de
w = peso de Manzanilla tomado para preparar la 2 L, 300 ml de agua como líquido de destilación y
Solución muestra (mg) 0,5 ml de xileno en el tubo graduado. Destilar durante
Criterios de aceptación: No menos de 0,3% 4 horas a una velocidad de 3-4 ml/minuto.
• CONTENIDO DE DERIVADOS DE 81SABOLANO Criterios de aceptación: Se encuentra no menos de
Solución estándar: 1 mg/ml de ER Levomenol USP en 0,4% de aceite volátil azul. [NOTA-Conservar los acei-
ciclohexano tes volátiles para usar en la prueba de Contenido de De-
Solución muestra: Transferir los aceites volátiles obteni- rivados de Bisaba/ano.]
dos en la prueba de Artículos de Origen Botánico (561 ),
Determinación de Aceite Volátil a un matraz volumétrico CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento
de 25 ml, enjuagar el tubo graduado del aparato con
una pequeña porción de ciclohexano, transferir el en- bacteriano total no excede de 105 ufc/g, el recuento total
juague al matraz volumétrico de 25 ml, agregar ciclo- combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
hexano a volumen y mezclar. cede de 10 3 ufc/g y el recuento de bacterias Gram-nega-
Sistema cromato~rafico tivas tolerantes a la bilis no excede de 10 3 ufc/g.
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella sr:;p. y EschE'richio coli .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, RE'siduos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El capítulo floral es semiesférico, de
aproximadamente 6 mm de diámetro, compuesto de
unas pocas florecillas radiadas, y numerosas florecillas
del disco que se encuentran sobre un receptáculo ro-
deado por un involucro (la Matricaria discoidea se dife-
rencia por tener sólo florecillas del disco). El involucro
es verde, formado por dos o tres hileras de brácteas
lanceoladas, glabras e imbricadas con ápices redondea-
dos y bordes membranosos blanquecinos. Las florecillas
radiadas, que habitualmente se caen, tienen de
10-20 pistilos; la corola es ligulada y blanca, si bien se
oscurece a una longitud de 6 mm y a un grosor de
aproximadamente 2 mm, tiene 3 dientes y está atrave-
sada por cuatro nervaduras principales. Las florecillas
del disco son amarillas, perfectas, de aproximadamente
2 mm de longitud; la corola es tubular con cinco dien-
tes; cinco estambres son epipéta\os y singenésicos. El
receptáculo es hueco (a diferencia de las especies de
Chrysantemum y Anthemís), semiesférico en los capítulos
florales jóvenes y cónico en los más viejos, tiene de
3-1 O mm de ancho y carece de páleas. El aquenio es
ovoide y tiene de tres a cinco nervaduras longitudinales.
Microscópicas: Separar el capítulo en sus partes y exa-
minar al microscopio. La epidermis externa abaxial de
las brácteas del involucro presenta un margen membra-
noso con una capa simple de células elongadas radial-
mente y una parte central formada por tejido clorofílico
cubierto de células epidérmicas elongadas con paredes
laterales sinuosas, estomas y tricomas secretores. Los
haces vasculares están rodeados de numerosas esclerei-
das elongadas y punteadas, con lúmenes bastante gran-
des. En vista superficial, las corolas liguladas y tubulares
presentan células isodiamétricas o elongadas con pare-
des más o menos onduladas y unos pocos tricomas
glandulares. La parte externa de la epidermis de las flo-
recillas liguladas se compone de células papilares con
cutícula estriada desde los extremos. En el mesófilo, al-
gunas veces se observan grupos muy pequeños de oxa-
lato de calcio. A lo largo de todo el mesófilo discurren
cuatro nervaduras principales, algunas veces acompaña-
das por una o dos nervaduras más, que son más cortas
y discurren paralelas a las nervaduras principales. Cada
una de las dos nervaduras medias principales se divide
en dos cerca del extremo y se anastomosan de dos en
dos con las nervaduras laterales para formar tres arcos
en los tres dientes terminales de la lígula. Los ovarios de
ambos tipos de florecillas son de formas ovales a esféri-
cas, y tienen en su base un anillo esclerótico formado
por una hilera simple de células. La epidermis del ovario
está compuesta de células elongadas con paredes sinuo-
sas, entre las que se ubican tricomas secretores. Los
ovarios contienen grupos muy pequeños de oxalato de
calcio. En las florecillas tubulares, la parte inferior de
cada filamento estaminal está rodeada por células de
paredes gruesas. Los extremos de los dos estigmas po-
seen células epidérmicas papilosas. Los granos de polen
tienen un diámetro de aproximadamente 30 µm y son
redondeados y triangulares, con tres poros germinales y
una exina espinosa.
• FLORES PARTIDAS: No más de 25% pasa a través de un
tamiz de malla estándar Nº 25 (ver Estimación de la Distri-
bución del Tamaño de Partícula por Tamizado Analítico
(786)).
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
Suplementos Dietéticos / Pino Marítimo 6069
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cemzas Totales (561 ):
No rn,ís de l 3,0%, determinado en 1,0 g de Manzanilla
en polvo.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, despues de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo. El artículo está exento de
los requisitos de las Advertencias Generales con respecto a
la declaración de embarazo y lactancia (sección 10.40.50.
Etiquetado de Productos Botánicos).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina-7-glucósido USP
ER Levomenol USP
Pino Marítimo
DEFINICIÓN
El Pino Marítimo consiste en la corteza de tallos de Pínus
pínaster Aiton (Pinus marítima Poir.) Fam. Pinaceae. Con-
tiene no menos de 8,0% y no más de 12,0% de prociani-
dinas, calculado con respecto a la materia seca.
[NOTA--Este artículo está destinado solamente a la prepara-
ción de extractos y no para el consumo humano directo.]
IDENTIFICACIÓN
• A. PRESENCIA DE PROCIANIDINAS
Muestra: Reducir a polvo l g de Pino Marítimo seco.
Usar 1 O mg.
Análisis: Agregar la Muestra a 1 ml de metano\ y agre-
gar 6 mL de una mezcla de butano\ y ácido clorhídrico
(95:5). Calentar durante 2 minutos en un baño de
agua.
Criterios de aceptación; La solución se tom~ roja.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 25 mg/mL de ER Extracto de Pino
Marítimo USP en alcohol
[NOTA-Reservar una porción de esta solución para usar
en la prueba de Identificación c.]
Solución muestra: Agregar 2 g de material seco redu-
cido a polvo a 20 ml de agua. Colocar en un baño de
agua durante 20 minutos y centrifugar. Extraer el sobre-
nadante con 40 ml de acetato de etilo. Evaporar la
capa de acetato de etilo hasta sequedad bajo una co-
rriente de nitrógeno, con calor suave. Disolver el resi-
duo así obtenido en 0,25 ml de alcohol.
Sistema cromato!Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(50:5:3)
Solución reveladora: Alcohol v ácido fosfórico (1 : 1)
que contenga 1 % de vainilliná.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas, secar la placa con ayuda
de una corriente de aire, rociar la placa con la Solución
reveladora y calentar a 115º durante 15 minutos.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta tres bandas rojas que aparecen en
el tercio medio del cromatograma correspondientes a
dos procianidinas diméricas y catequina .al mismo valor
Rr de bandas similares en la Solución estandar. E:I croma-
tograma de la Solución muestra también presenta una
banda azul entre la banda superior debida a procianidi-
nas diméricas y la banda debida a catequina, al mismo
6070 Pino Marítimo /Suplementos Dietéticos
valor Rr de una banda similar encontrada en el croma-
tograma de la Solución fStándar. , Longitud de onda: 551 nm
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: Usar la Solución estándar, prepa-
rada según se indica en la prueba de Identificación B.
Solución estándar B: 1 mg/mL de ácido ferúlico y de
ácido protocatéquico
Solución muestra: Usar la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Identificación B.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Cloruro de metileno, metanol, ácido acé-
tico glacial y agua (80:15:2:2)
Solución reveladora: Solución de cloruro férrico al 5%
en metanol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Desarrollar el cromatograma, secar la placa a 11 Oº y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta y larga. Los cromatogramas de la Solución es-
tándar A y Solución estándar B presentan bandas en el
tercio medio y el tercio superior correspondientes a
ácido protocatéquico y ácido ferúlico, respectiva-
mente. Rociar la placa con la Solución reveladora y
calentar a 115º durante 15 minutos. Las bandas debi-
das a ácido ferúlico y ácido protocatéquico se tornan
de color verde grisáceo. Bandas de color verde grisá-
ceo se hacen visibles en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A por encima y por debajo del ácido
p~otocatéquic<;>, indicand<? la presencia de ácido ca-
fe1co y catequ1na, respectivamente.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas debidas a catequina,
ácido protocatéquico, ácido cafeico y ácido ferúlico que
corresponden en color y valores Rr a las del cromato-
grama de la Solución estándar A y Solución estándar B.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PROCIANIDINAS
Solución reactivo A: Butanol y ácido clorhídrico (95:5)
[NOTA-Preparar esta solución en el día de su uso.]
Solución reactivo B: Disolver 2 g de sulfato férrico
amónico en una mezcla de 100 mL de agua y 17,5 mL
de ácido clorhídrico. [NOTA-Esta solución puede usarse
dentro de los 15 días desde su preparación.]
Solución estándar: 95 µg/mL de procianidinas, a partir
de ER Extracto de Pino Marítimo USP en metano!
Solución madre de la muestra: Secar Pino Marítimo
triturado a 11 Oº durante 3 horas. Colocar 1,9 g del ma-
terial triturado en un vial de 20 mL y agregar 1 O mL de
metanol. Sellar el vial y someter a ultrasonido durante 2
minutos. Calentar en agua hirviendo durante 1 O minu-
tos. Enfriar a temperatura ambiente, dejar que se sedi-
mente y transferir el sobrenadante a un matraz volumé-
trico de 100 mL, pasándolo a través de un filtro con un
tamaño de poro de 0,45 µm. Lavar el sedimento dos
veces con 1 O mL de metano! y transferir la solución al
mismo matraz volumétrico de 1 00 mL, pasándolo nue-
vamente a través de un filtro con un tamaño de poro
de 0,45 µm. Diluir con metanol a volumen.
Solución muestra: Diluir la Solución madre de la mues-
tra con metanol (1 en 20).
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
USP 37
Modo: Vis
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 1,0 mL de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de metanol a sendos viales de 1 O ml. Agre-
gar a ca<;]_? vial 6'.0 mL de Solución reactivo A y 0,25 mL
d.e Soluoon reactwo B. Sellar los viales con tapas pre-
cintadas. Mezclar y calentar en un baño de agua du-
rant~ 40 minutos. Enfriar rápidamente a temperatura
ambiente en un baño de hielo. Transferir cuantitativa-
mente estas soluciones, con ayuda de Solución reactivo
A, a sendos matraces volumétricos de 1 O mL y diluir
con Solución reactivo A a volumen.
Determinar la absorbancia de las soluciones obtenidas a
partir de la Solución estándar y la Solución muestra,
usando la solución que contiene metanol como
blanco.
Calcular el porcentaje de procianidinas totales en la por-
ción de Pino Marítimo tomada:
Resultado= (Au/As) x Cs x (V!W) x D x P
Au = absorbancia de la solución, a partir de la
Solución muestra
As = absorbancia de la solución, a partir de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Extracto de Pino
Marítimo USP en la Solución estándar
(mg/mL)
V = volumen de la Solución madre de la muestra
(mL)
w = peso de Pino Marítimo tomado para preparar
la Solución madre de la muestra (mg)
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de Solución madre de la
muestra, 20
p = porcentaje de procianidinas en ER Extracto de
Pino Marítimo USP
Criterios de aceptación: 8,0%-12,0% con respecto a
la materia seca
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Los trozos de corteza típicamente tie-
nen 1-3 cm de grosor. La corteza interna es plana a
levemente cóncava, blanquecina a marrón claro, con ra-
yas longitudinales; su superficie es brillosa y ligeramente
irregular, y tiene sólo unos pocos milímetros de grosor.
Se observa un cambio abrupto en una secuencia de ca-
pas casi paralelas, duras y convexas, que se alternan
con capas lisas de color marrón claro. Se encuentran
hasta 50 o más capas, según la edad de la corteza. La
superficie externa de la corteza es de color marrón ro-
jizo oscuro y está compuesta por parches escamosos
irregulares, con fisuras profundas en forma de V. La su-
perficie externa también puede ser gris, verde grisácea
o amarillo verdoso debido a la presencia de líquenes.
Microscópicas (sección transversal de la corteza): La
corteza interna clara tiene rayas laterales irregulares for-
madas por 3-5 capas de células cribosas, deígadas y
largas, con paredes celulares horizontales con puntua-
ciones grandes y células parenquimáticas poligonales
grandes que contienen un único gránulo de almidón
redondeado e irregular, de 3-15 mm de ancho. Las ra-
yas laterales están separadas entre sí por células paren-
quimáticas radiales. Las células parenquimáticas radiales
tienen una apariencia homogénea, con un ancho de
1-4 capas celulares y de 4-20 capas celulares de alto;
cada célula contiene un único gránulo de almidón re-
dondeado e irre9ular, de 3-15 mm de ancho. También
se encuentran celulas parenquimáticas cilíndricas de pa-
redes delgadas dispuestas en filas verticales con prismas
de oxalato de calcio. La parte exterior de la corteza
interna contiene células con forma de placa, de perider-
USP 37
mis no diferenciada y peridermis más antigua con múl-
tiples capas de felógeno. El felógeno desarrolla de 3-7
filas de súber hacia el exterior y de 2-4 filas de células
pequeñas de felodermis hacia el interior. La parte más
antigua y externa de la corteza está formada por seccio-
nes lignificadas de células de felodermis y de súber, de
15-35 mm de ancho, separadas por felógeno colap-
sado. Las células de felodermis y de súber miden hasta
1 00 mm de ancho y tienen forma cuadrada, rectangu-
lar, poligonal o irregular. Las paredes celulares son inco-
loras. Las células de felodermis son moderadamente
punteadas con un contenido marrón rojizo. Las paredes
del súber son más gruesas, marcadamente punteadas,
de contorno ondulado y tienen un contenido marrón
amarillento a rojo amarronado. Entre las capas de felo-
dermis y súber se disponen en forma radial capas de
células parenquimáticas radiales, de 5-8 células de es-
pesor, redondeadas a extendidas radialmente, con pare-
des delgadas, marcadamente punteadas con células co-
lapsadas y células cribo~as muertas .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 5% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 1,5%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de Agua (561):
No más de 35,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Almacenar a 25º, con va-
riaciones permitidas entre 15º y 30º. Conservar en un
envase bien cerrado. Proteger de la humedad y del calor
excesivo.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto de Pino Marítimo USP
Extracto de Pino Marítimo
DEFINICIÓN
El Extracto de Pino Marítimo se prepara a partir de Pino
Marítimo reducido a polvo usando disolventes adecuados.
Contiene no menos de 65% y no más de 75% de procia-
nidinas, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRESENCIA DE PROCIANIDINAS
Solución muestra: Disolver 50 mg de Extracto en 6 mL
de una mezcla de butanol y ácido clorhídrico (95:5).
Análisis: Calentar durante 2 minutos en un baño de
agua.
Criterios de aceptación; La solución se torn9 roja.
• 8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar A: 25 mg/mL de ER Extracto de Pino
Marítimo USP en metanol
Solución estándar B: 1 mg/mL de ácido ferúlico y de
ácido protocatéquico en metanol
Solución muestra: 25 mg/mL de Extracto en metano!
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Cloruro de metileno, metanol, ácido acé-
tico glacial y agua (80:15:2:2)
Solución reveladora: Solución de cloruro férrico al 5%
en metano!
Suplementos Dietéticos / Pino Marítimo 6071
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Desarrollar el cromatograma, secar la placa a 11 oc y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta y larga. Los cromatogramas de la Solución es-
tándar A y Solución estándar B presentan bandas en el
tercio medio y el tercio superior correspondientes a
ácido protocatéquico y ácido ferúlico, respectiva-
mente. Rociar la placa con la Solución reveladora y
calentar a 115º durante 15 minutos. Las bandas debi-
das a ácido ferúlico y ácido protocatéquico se tornan
de color verde grisáceo. Bandas de color verde grisá-
ceo se hacen visibles en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A por encima y por debajo del ácido
protocatéquico, indicando la presencia de ácido ca-
feico y catequina, respectivamente.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas debidas a catequina,
ácido protocatéquico, ácido cafeico y ácido ferúlico que
corresponden en color y valores RF a las del cromato-
grama de la Solución estándar A y Solución es,tándar B.
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: Usar la Solución estándar A, prepa-
rada según se indica en la prueba de Identificación B.
Solución muestra: Usar la Solución muestra, preparada
según se indica en la prueba de Identificación B.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 5 µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico y agua
(50:5:3) ,
Solución reveladora: Acido fosfórico y alcohol (1 :1)
que contenga 1 % de vainillina
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Proceder según se indica en el capítulo, excepto que se
debe secar la placa con ayuda de una corriente de
aire, rociar la placa con Solución reveladora y calentar a
115º durante 15 minutos. Aparecen tres bandas rojas
en el tercio medio del cromatograma de la Solución
estándar correspondientes a dos procianidinas diméri-
cas y catequina. El cromatograma de la Solución están-
dar también presenta una banda azul entre la banda
superior debida a procianidinas diméricas y la banda
debida a catequina.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra contiene bandas que corresponden a las
encontradas en el cromatograma de la Solución
estándar.
• D. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Solución A: Metano!
Solución B: 1 mg/mL de ácido fosfórico en agua
Fase móvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 8 92
40 34 66
45 2 98
50 2 98
52 8 92
57 8 92
Solución estándar: 2 mg/mL de ER Extracto de Pino
Marítimo USP en Solución A. Pasar a través de una
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
6072 Pino Marítimo /Suplementos Dietéticos
Solución muestra: Agregar 20 mg de Extracto a 1O ml
de Solución A y someter a ultrasonido durante 1O minu-
tos para disolver. Pasar a través de una membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros 4 ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 desactivado
para bases, con un tamaño de partícula menor de 5
µm
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al cromatograma de referencia provisto con
el lote de ER Extracto de Pino Marítimo USP usado.
Resolución: No menos de 3,0 entre taxifolina y ácido
ferúlico
Factor de asimetría: No más de 2,0 para taxifolina
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Identificar los picos de catequina, ácido cafeico, taxifo-
lina y ácido ferúlico por comparación del cromato-
grama de la Solución estándar con el cromatograma de
referencia.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta picos de catequina, ácido cafeico,
taxifolina y ácido ferúlico a los tiempos de retención
cor~espondientes a los del cromatograma de la Solución
estandar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PROCIANIDINAS
Solución reactivo A: Butanol y ácido clorhídrico (95:5)
[NOTA-Preparar esta solución en el día de su uso.]
Solución reactivo B: Disolver 2 g de sulfato férrico
amónico en una mezcla de 100 ml de agua y 1 7,5 ml
de ácido clorhídrico. [NOTA-Esta solución puede usarse
dentro de los 15 días desde su preparación.]
Solución estándar: 95 µg/ml de procianidinas, a partir
de ER Extracto de Pino Marítimo USP en metanol
Solución madre de la muestra: Transferir 250 mg de
Extracto a un matraz volumétrico de 100 ml. Disolver
con metanol y diluir con el mismo disolvente a
volumen.
Solución muestra: Diluir la Solución madre de Ja mues-
tra con metanol (1 en 20).
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda: 551 nm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 1,0 ml de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de metanol a sendos viales de 1 O ml. Agre-
gar a cada vial 6,0 ml de Solución reactivo A y 0,25 ml
de Solución reactivo B. Sellar los viales con tapas pre-
cintadas. Mezclar y calentar en un baño de agua du-
rante 40 minutos. Enfriar rápidamente a temperatura
ambiente en un baño de hielo. Transferir cuantitativa-
mente estas soluciones, con ayuda de Solución reactivo
A, a sendos matraces volumétricos de 1 O ml y diluir
con Solución reactivo A a volumen.
USP 37
Determinar la absorbancia de las soluciones obtenidas a
partir de la Solución estándar y la Solución muestra,
usando la solución que contiene metanol como
blanco.
Calcular el porcentaje de procianidinas totales en la por-
ción de Extracto tomada:
Resultado= (Au!As) x C5 x (V/W) x O x P
Au = absorbancia de la solución, a partir de la
Solución muestra
As = absorbancia de la solución, a partir de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Extracto de Pino
Marítimo USP en la Solución estándar
(mg/ml)
V = volumen de la Solución madre de Ja muestra
(ml)
W = peso de Extracto de Pino Marítimo tomado
para preparar la Solución madre de la muestra
(mg)
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de Solución madre de la
muestra, 20
P = porcentaje de procianidinas en ER Extracto de
Pino Marítimo USP
Criteric;>s de aceptación: 65%-75% con respecto a la
materia seca
CONTAMINANTES
• EXTRACTOS BOTÁNICOS, Metales Pesados (565): Cumple
COI} los requisitos. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto du-
ran¡e 3 horas a 11 Oº: pierde no más de 8,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
!)Jo más de 0,7%
• LIMITE DE SUSTANCIAS INSOLUBLES EN AGUA
Análisis: Pesar 0,50 g de Extracto y mezclar en 50 ml
de agua a 20º durante 15 minutos. Pasar a través de un
filtro de vidrio sinterizado, previamente pesado. Secar el
filtro a 11 Oº durante 3 horas, enfriar a temperatura am-
biente y pesar el filtro. Calcular la cantidad de material
insoluble en agua.
Criterios de aceptación: No más de 10% de la canti-
dad de Extracto tomada
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a 25º, con variaciones permitidas
entre 15º y 30º. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo, además
de la información requerida en Extractos Botánicos (565),
Etiquetado.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto de Pino Marítimo USP
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Melatonina 6073

ru = respuesta del pico de la Solución muestra

rs = respuesta del pico de la Solución estándar
Melatonina Cs = concentración de ER Melatonina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Melatonina en la Solución
muestra (m~/mL)
Criterios de aceptacion: 98,5-101,5% con respecto a
la sustancia seca
IMPUREZAS
C13H16N202 232,28 • RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 0,1%
N-Acetyl-5-methoxytrypta mi ne; • CLORUROS y SULFATOS, Cloruros ( 221)
N-(2-(5-Metoxi-1 H-indol-3-il)etil) acetamida [73-31-4]. Estándar: 0, 1O mL de ácido clorhídrico 0,020 N
Muestra: 0,36 g de Melatonina
DEFINICIÓN Criterios de aceptación: No más de 0,02%
La Melatonina contiene no menos de 98,5% y no más de • METALES PESADOS (231): No más de 20 µg/g
101,5% de melatonina (C13H16N202), calculado con res- • COMPUESTOS RELACIONADOS
pecto a la sustancia seca. Solución A: Acetonitrilo
Solución B: Usar Solución amortiguadora, preparada se-
IDENTIFICACIÓN
gún se indica en la Valoración.
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
• 8. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Longitud de onda analítica: 277 nm
Solución muestra: 1O µg/mL de Melatonina en alcohol Tabla 1
isopropílico Tiempo Solución A Solución B
Criterios de aceptación: Cumple con los requisitos. Las (mln) (%) (%\
absortividades, calculadas con respecto a la sustancia o 25 75
seca, no difieren en má~ de 3,0%.
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
7 25 75
Análisis: Proceder se~ún se indica en la Valoración. 15 80 20
Criterios de aceptacion: El tiempo de retención del 18 25 75
pico principal de la Solución muestra corresponde al de 25 25 75
la Solución estándar.
Diluyente: Mezcla de Solución A y Solución B (25:75)
VALORACIÓN Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER
• PROCEDIMIENTO Melatonina USP y 0,02 mg/mL de ER Compuesto Rela-
Solución amortiguadora: 0,5 g/L de fosfato monobá- cionado A de Melatonina USP en Diluyente
sico de potasio en agua. Ajustar con ácido fosfórico a Solución estándar: 5 µg/mL de ER Melatonina USP en
un pH de 3,5 y filtrar. Diluyente
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora Solución muestra: 1 mg/mL de Melatonina en
(25:75) Diluyente
Solución de aptitud del sistema: 0, 1 mg/mL de ER Sistema cromato9ráfico
Melatonina USP y 0,02 mg/mL de ER Compuesto Rela- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
cionado A de Melatonina USP en Fase móvil Modo: HPLC
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Melatonina USP Detector: UV 222 nm
en Fase móvil Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Solución muestra: 0, 1 mg/mL de Melatonina en Fase Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
móvil Volumen de inyección: 1O µL
Sistema cromato9ráfico Aptitud del sistema
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) Muestra: Solución de aptitud del sistema
Modo: HPLC [NOTA-Los tiempos de retención relativos para com-
Detector: UV 222 nm puesto relacionado A de melatonina y melatonina son
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm 0,4 y 1,0, respectivamente.]
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min Requisitos de aptitud
Volumen de inyección: 1O µL Resolución: No menos de 4,0 entre melatonina y
Aptitud del sistema compuesto relacionado A de melatonina
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
estándar el pico de melatonina
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para com- Análisis
puesto relacionado A de melatonina y melatonina son Muestras: Solución estándar y Solución muestra
0,4 y 1,0, respectivamente.] Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la
Requisitos de aptitud porción de Melatonina tomada:
Resolución: No menos de 4 entre melatonina y com-
puesto relacionado A de melatonina, Solución de apti- Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu- ru = respuesta del pico de cada impureza individual
ción estándar de la Solución muestra
Análisis r5 = respuesta del pico de melatonina de la
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Solución estándar
Calcular el porcentaje de melatonina en la porción de Cs = concentración de ER Melatonina USP en la
Melatonina tomada: Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Melatonina en la Solución
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 muestra (mg/mL)
6074 Melatonina /Suplementos Dietéticos USP 37

Criterios de aceptación ru = respuesta del pico de la Solución muestra

Impurezas individuales: No más de O, 1 % r1 = respuesta del pico de la Solución estándar
Impurezas totales: No más de 1,0% C1 = concentración de ER Melatonina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
PRUEBAS ESPECÍFICAS Cu = concentración nominal de melatonina en la
• PÉRDIDA POR SECADO \731) Solución muestra (mg/mL)
Análisis: Secar una muestra al vacío a 80º durante 3 Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
horas.
Criterios de aceptación: No más de 1,0% PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
REQUISITOS ADICIONALES (2040): Cumplen con los requisitos de Disolución
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- Medio: Agua, 500 mL
pe~meables. Proteger de la luz. Aparato 2: 50 rpm
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Tiempo: 30 min
ER Melatonina USP Solución estándar: Disolver una cantidad adecuada de
ER Compuesto Relacionado A de Melatonina USP ER Melatonina USP en agua para obtener una concen-
2-(5-Metoxi- l H-indol-3-il)etanamina. tración similar a la esperada en la Solución muestra.
C11H14N20 190,24 Solución muestra: Porción filtrada de la solución en
análisis
Análisis: Proceder según se indica en Contenido, ha-
ciendo los ajustes necesarios.
Calcular la cantidad disuelta de melatonina
Melatonina, Tabletas (C13 H16N202) como porcentaje de la cantidad
declarada:
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Melatonina contienen no menos de 90,0% y Resultado= (ru!rs) x (C1 xVIL)x100
no más de 110,0% de la cantidad declarada de melato-
nina (C13H16N202). ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
IDENTIFICACIÓN Cs = concentración de ER Melatonina USP en la
• A. El tiempo de retención del pico principal de la Solu- Solución estándar (mg/mL)
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se- V = volumen de Medio, 500 mL
gún se obtienen en Contenido. L = cantidad declarada de melatonina
(mg/Tableta)
CONTENIDO Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
• PROCEDIMIENTO rada ge melatonina (C13H16N202). ,
Solución amortiguadora: 0,5 g/L de fosfato monobá- • VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
sico de potasio en agua. Ajustar con ácido fosfórico a Cumplen con los requisitos.
un pH de 3,5 y filtrar.
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución amortiguadora IMPUREZAS
(25:75) • COMPUESTOS RELACIONADOS
Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Solución A: Acetonitrilo
Melatonina USP y 0,02 mg/mL de ER Compuesto Rela- Solución B: Usar Solución amortiguadora, preparada se-
cionado A de Melatonina USP en Fase móvil gún se indica en Contenido.
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Melatonina USP Fase móvil: Ver la Tabla 7.
en Fase móvil
Solución muestra: Porción filtrada de la solución en Tabla 1
Fase móvil, equivalente a O, 1 mg/mL de Melatonina, a
partir de no menos de 20 Tabletas reducidas a polvo Tiempo Solución A Solución 8
fino (min) (%) (%)
Sistema cromato9ráfico o 25 75
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) 7 25 75
Modo: HPLC 15 80 20
Detector: UV 222 nm 18 25 75
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
25 25 75
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL Diluyente: Mezcla de Solución A y Solución B (25:75)
Aptitud del sistema Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución Melatonina USP y 0,02 mg/mL de ER Compuesto Rela-
estándar cionado A de Melatonina USP en Diluyente
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para com- Solución estándar: 5 µg/mL de ER Melatonina USP en
puesto relacionado A de melatonina y melatonina son Diluyente
0,4 y 1,0, respectivamente.] Solución muestra: Solución filtrada en Diluyente, equi-
Requisitos de aptitud valente a 1 mg/mL de melatonina, a partir de no menos
Resolución: No menos de 4 entre melatonina y com- de 20 Tabletas reducidas a polvo fino
puesto relacionado A de melatonina, Solución de apti- Sistema cromato9ráfico
tud del sistema (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mela-
tonina (C13 H16 N202) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Csl Cu) x 1 00
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Metilsultonilmetano 6075

Modo: HPLC Solución estándar: 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme-

Detector: UV 222 nm tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50 du-
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm rante 1 minuto y dejar que se enfríe a temperatura
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min ambiente.
Volumen de inyección: 1 O µL Solución muestra: 0,4 mg/mL de Metilsulfonilmetano
Aptitud del sistema en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50u durante 1
Muestra: Solución de aptitud del sistema minuto y dejar que se enfríe a temperatura ambiente.
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para com- Sistema cromato9ráfico
puesto relacionado A de melatonina y melatonina son (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
0,4 y 1,0, respectivamente.] Modo: Cromatografía de Gases
Requisitos de aptitud Detector: Ionización a la llama
Resolución: No menos de 4,0 entre melatonina y Columna: Capilar, de 0,53 mm x 30 m recubierta con
compuesto relacionado A de melatonina fase G2 de 5 µm
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Temperatura
el pico de melatonina Columna: 120º
Análisis Inyector: 250º
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Detector: 250º
Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la Gas transportador: Helio
porción de Tabletas tomada: Velocidad de flujo: 5 mL/min
Relación de partición: 2:1
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100 Volumen de inyección: 1 µL
Aptitud del sistema
ru = respuesta del pico de cada impureza individual Muestra: Solución estándar
de la Solución muestra Requisitos de aptitud
r5 = respuesta del pico de melatonina de la Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
Solución estándar el cociente de respuesta entre los picos de metilsulfo-
Cs = concentración de ER Melatonina USP en la nilmetano y di(etilenglicol) metil éter en inyecciones
Solución estándar (mg/mL) repetidas
Cu = concentración nominal de melatonina en la Análisis
Solución muestra (mg/mL) Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Criterios de aceptación Calcular el porcentaje de metilsulfonilmetano (C2H602S)
Impurezas individuales: No más de O, 1% en la porción de Metilsulfonilmetano tomada:
Impurezas totales: No más de 1,0%
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- Ru = cociente de respuesta entre los picos de
permeables y resistentes a la luz. metilsulfonilmetano y di(etilenglicol) metil
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de Melatonina éter de la Solución muestra
en ,mg/Tableta. Rs = cociente de respuesta entre los picos de
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) metilsulfonilmetano y di(etilenglicol) metil
ER Melatonina USP éter de la Solución estándar
ER Compuesto Relacionado A de Melatonina USP Cs = concentración de ER Metilsulfonilmetano USP
2-(5-Metoxi- l H-indol-3-il)etanamina. en la Solución estándar (mg/mL)
C11 Hi4N20 190,24 Cu = concentración de Metilsulfonilmetano en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 98,0%-1 02,0% con respecto
a la sustancia anhidra

Metilsulfonilmetano
C2H602S 94, 13
Dimethyl sulfone;
Sulfonilbismetano [67-71-0].
DEFINICIÓN
El Metilsulfonilmetano contiene no menos de 98,0% y no
más de 102,0% de metilsulfonilmetano (C2H602S), calcu-
lado con respecto a la sustancia anhidra. La pureza cro-
matográfica es no menos de 99,8%.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (l 97K)
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en la Valoración.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Diluyente: Transferir 950 mL de metanol a un matraz
volumétrico de 1 L. Agregar 0,60 mL de di(etilenglicol)
metil éter y diluir con metanol a volumen.
IMPUREZAS
• METALES PESADOS, fvfétodo I q31): No más de 3 µ,g/g
• PUREZA CROMATOGRAFICA Y LIMITE DE DIMETIL SULFOXIDO
Solución madre del estándar: 1,0 mg/mL de ER Dime-
til Sulfóxido USP en metanol
Solución de control de sensibilidad: 2,0 µg/mL, a par-
tir de Solución madre del estándar en metano!
Solución de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Di-
metil Sulfóxido USP y 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme-
tano USP en metanol. En un matraz volumétrico de
50 mL, disolver 20 mg de ER Metilsulfonilmetano USP
en 5 ml de Solución madre del estándar y diluir con me-
tano! a volumen.
Solución muestra: 2 mg/mL de Metilsulfonilmetano en
metanol. Someter a ultrasonido a 50º durante 1 minuto
y dejar que se enfríe a temperatura ambiente.
Sistema cromatográfico: Proceder según se indica en
la Valoración.
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de control de sensibilidad y Solución
de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Relación señal-ruido: No menos de 1 O para el pico
de dimetil sulfóxido, Solución de control de sensibilidad
Resolución: No menos de 2,0 entre dimetil sulfóxido
y metilsulfonilmetano, Solución de aptitud del sistema
6076 Metilsulfonilrnetano / Suplementos Dietéticos USP 37

Análisis Sistema cromatográfico

Muestra: Solución muestra (Ver Cromatogruf!O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porción Modo: Cromatografía de Gases
de Metilsulfonilmetano tomada: Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar, de 0,53 mm x 30 rn recubierta con
Resultado = (ru/ r1) x 100 fase G2 de 5 pm
Temperatura
ru = respuesta de cada impureza en la Solución Columna: 120'
muestra Inyector: 250º
r1 = suma de las respuestas de todos los picos Detector: 250
diferentes del pico de disolvente Gas transportador: Helio
Criterios de aceptación Velocidad de flujo: 5 ml/min
Impurezas individuales: No más de O, 1% de dimetil Volumen de inyección: 1 pL
sulfóxido; no más de 0,05% de cualquier otra impu- Tipo de inyector: Relación de partición, 2:1
reza individual Aptitud del sistema
Impurezas totales: No más de 0,2% para todas las Muestra: Solución estándar
impurezas, incluyendo dimetil sulfóxido Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
PRUEBAS ESPECÍFICAS
el cociente de respuesta entre los picos de rnetilsulfo-
• INTERVALO O TEMPERATURA DE FUSIÓN (741):
nilmetano y dietilenglicol rnetil éter en inyecciones
108,SU-llOY repetidas
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >: El recuento to- Análisis
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g Muestras: Solución estándar y Solución muestra
o mL, y el recuento total combinado de hongos filamen- Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de rne-
tosos y levaduras no excede de 102 \Jfc/g o ml. tilsulfonilrnetano (C2H602S) en la porción de Tabletas
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
tornada:
ple con los requisitos para determinar la ausencia de Es-
cherichia coli en 1 O g. Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): No más de
O, 1%. [NOTA-Se pueden requerir 500 mg de metilsulfo- Ru = cociente de respuesta entre los picos de
nilmetano para este análisis.] metilsulfonilrnetano y dietilenglicol metil éter
de la Solución muestra
REQUISITOS ADICIONALES
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien metilsulfonilmetano y dietilenglicol metil éter
cerrados. de la Solución estándar
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Cs = concentración de ER Metilsulfonilmetano USP
ER Dimetil Sulfóxido USP en la Solución estándar (mg/mL)
ER Metilsulfonilmetano USP Cu = concentración nominal de metilsulfonilmetano
Dimetil sulfona. en la Solución muestra (mg/mL)
C2H602S 94, 13 Criterios de aceptación: 90,0%-110,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisit9s de Desintegración; 30 minutos.
Metilsulfonilmetano, Tabletas • VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.

DEFINICIÓN REQUISITOS ADICIONALES

Las Tabletas de Metilsulfonilmetano contienen no menos de
90,0% y no más de 11 0,0% de la cantidad declarada de
metilsulfonilmetano (C2H602S).
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en el Procedimiento de Contenido.
CONTENIDO
• PROCEDIMIENTO
Diluyente: Transferir 950 mL de metanol a un matraz
volumétrico de 1 L. Agregar 0,60 mL de dietilenglicol
metil éter y diluir con metano! a volumen.
Solución estándar: 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme-
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50º du-
rante 1 minuto y dejar que se enfríe a temperatura
ambiente.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Disolver una porción del material reducido
a polvo fino, equivalente a 1 Tableta, en Diluyeme, y
someter a ultrasonido durante 15 minutos a 50º. Dejar
que se enfríe a temperatura ambiente, diluir con Dilu-
yente a volumen y mezclar. Diluir cuantitativamente con
Diluyente hasta obtener una concentración final de
0,4 mg/mL de metilsulfonilrnetano. Transferir 1 mL de la
suspensión a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL y
centrifugar durante 20 segundos. Usar el sobrenadante.
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Metilsulfonilmetano USP
Dimetil sulfona.
C2H602S 94, 1 3
Metionina-ver Metionina en Monografías
Generales
Minerales, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Minerales contienen dos o más minerales
derivados de sustancias generalmente reconocidas como
seguras, que presentan dos o más de los siguientes ele-
mentos en forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre,
flúor, yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, ní-
quel, fósforo, potasio, selenio, estaño, vanadio y cinc. Las
Cápsulas contienen no menos de 90,0% y no más de
125,0% de las cantidades declaradas de calcio (Ca), cobre
(Cu), hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn), fós-
USP 37
foro (P), potasio (K) y cinc (Zn); y no menos de 90,0% y
no más de 160,0% de las cantidades declaradas de boro
(B), cromo (Cr), flúor (F), yodo (1), molibdeno (Mo), ní-
quel (Ni), selenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V). No con-
tienen vitaminas. Pueden contener otras sustancias agre-
gadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando en el eti-
quetado el método usado únicamente si no se usa el Mé-
todo 1. Se pueden usar soluciones estándar de absorción
atómica disponibles comercialmente para los minerales, si es
aplicable, cuando se describe la preparación de una Solución
madre del estándar en las siguientes valoraciones. Usar agua
desionizada cuando se especifica agua. Cuando se especifica
espectrofotometría de absorción atómica en la valoración, se
pueden modificar las concentraciones de las Soluciones es-
tándar y de las Soluciones muestra para ajustarse al intervalo
lineal o de trabajo del instrumento.]
• CALCIO, Método 1
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico 0, 125
N 120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
Solución estándar de calcio: 400 µg/mL de calcio. Pe-
sar 1,001 g de carbonato de calcio, previamente secado
a 300º durante 3 horas y enfriado en un desecador du-
rante 2 horas. Disolver en 25 mL de ácido clorhídrico
1 N. Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de
carbono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 1 00 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/mL de calcio.
Solución de polisorbato 80: Polisorbato 80 diluido con
alcohol (1 en 1 O)
Solución muestra: Transferir 5 Cápsulas a un matraz
volumétrico de 100 ml. [NOTA-Para Cápsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cápsulas. Abrir las
Cápsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un recipiente adecuado. Eliminar cual-
quier contenido que se adhiera a las cubiertas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cápsulas vac1as, calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas y transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a 5
Cápsulas, a un matraz volumétrico de 100 ml.] Agregar
15 mL de agua, 1O mL de ácido clorhídrico 6 N y 1 mL
de Solución de polisorbato 80 al matraz. Calentar sobre
una placa de calentamiento o baño de vapor, agitando
por rotación suave intermitentemente, hasta que las
Cápsulas se desintegren por completo o el contenido se
disuelva. Calentar a ebullición suave durante 15 minu-
tos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen y fil-
trar, desechando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir
esta solución con ácido clorhídrico O, 125 N para obte-
ner una concentración de 2 µg/mL de calcio, agre-
gando 1 mL de Solución de cloruro de lantano por
100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara~ Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,7 nm
Suplementos Dietéticos / Minerales 6077
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
calcio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ$)/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• CROMO, Método 1
Solución estándar de cromo: 1000 µg/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio previamente secado a
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
de 100 mL, y transferir 15,0 y 20,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL
de cromo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de cromo y omitir
el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a )57,9 nm
Blanco: Acido clorhídrico 0, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C =concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ$)/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 1
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% (v/v) y diluir con una solución de
6078 Minerales /Suplementos Dietéticos
ácido nítrico al 1 % (viv) hasta 1000 ml. Esta solución
contiene 1000 µg/ml de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 200 ml. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 µ~/ml de cobre.
Solucion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/ml de cobre y omitir
el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORURO, Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua en un matraz vo-
lumétrico de 1000 ml. Dejar que la solución se equili-
bre a temperatura ambiente y diluir con agua a volu-
men. Ajustar con unas pocas gotas de ácido acético a
un pH de 7,0.
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumétrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de ácido perclórico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro efe
sodio, previamente secado a 100º durante 4 horas y
enfriado en un desecador, en agua
Solución madre intermedia A: 100 µg/ml de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de fluoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1O µg/ml de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 ml de
Solución madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 ml de Solución
madre intermedia A a sendos matraces volumétricos de
100 ml diferentes. Agregar a cada matraz 10,0 ml de
ácido clorhídrico 1 N, 25 ml de Solución de acetato de
sodio 3 M y 25,0 ml de Solución de citrato de sodio. Di-
luir el contenido de cada matraz con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y
10,0 µg/ml de fluoruro.
USP 37
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando las Cápsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cápsulas mezclado, equivalente a
200 µg de fluoruro, a un matraz volumétrico de
100 ml. Agregar 10,0 ml de ácido clorhídrico 1 N,
25,0 ml de Solución de acetato de sodio 3 M y 25,0 ml
de Solución de citrato de sodio. Diluir con agua a
volumen.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir 50,0 ml de cada una de las Soluciones están-
dar y de la Solución muestra a sendos vasos de preci-
pitados de plástico, que contengan una barra mezcla-
dora recubierta de plástico. Medir los potenciales (ver
pH (791 )), en mV, de las Soluciones estándar y de la
Solución muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mínima de ±0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador específico para ión fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al realizar las mediciones, sumergir los electrodos en
la solución, mezclar en un agitador magnético con su
parte suf,erior aislada hasta lograr el equilibrio (1-2
minutos , y registrar el potencial. Enjuagar y secar los
electrodos entre mediciones, procurando evitar que
se dañe el cristal del electrodo específico para el ión.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/ml, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de res-
puesta estándar así obtenida y del potencial medido
de la Solución muestra, determinar la concentración,
C, en µg/ml, de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flúor (F) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• FLUORURO, Método 2
[NOTA-Usar recipientes de plástico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulfúrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ_g/ml de fluoruro.
Solucion estándar
[NOTA-Acondicionar la columna de extracción en fase
sólida especificada para su uso en la Solución estándar
y la Solución muestra de la siguiente manera. Usando
vacío a una presión que no exceda de 5 mm de mer-
curio, lavar la columna con un volumen de columna
de metanol seguido de un volumen de columna de
Solución amortiguadora de pH 7O, O. No dejar que la
parte superior de la columna se seque. Si la parte su-
perior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.]
Transferir 10,0 ml de Solución madre del estándar a un
matraz volumétrico de 100 ml. Agregar 75 ml de
agua y ajustar con hidróxido de sodio O, 1 N a un pH
de 10,4 ± O, 1. Diluir con agua a volumen. Filtrar, dese-
chando los primeros 15 ml del filtrado. Transferir
25,0 ml del filtrado a un matraz volumétrico de
50 ml. Agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidró-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
ción amortiguadora de pH 7O, O a volumen. El u ir una
porción de esta solucion a través de una columna de
USP 37
extracción en fase sólida de 3 mL que contenga re-
lleno L1, la cual se conecta a través de un adaptador a
una segunda columna de extracción en fase solida que
contenga relleno de intercambio catiónico fuerte de
sulfonilpropilo. Desechar los primeros 3 mL del eluato
y recoger el resto del eluato en un matraz adecuado
para inyección en el cromatógrafo.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un recipiente de 1 00 mL. Si fuera necesario, eliminar
cualquier contenido que se adhiera a las cubiertas va-
cías lavando con varias porciones de éter. Desechar los
lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda
de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en el frasco de pesada tarado y calcular
el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
a una cantidad nominal de 1 mg de flúor, a un matraz
volumétrico de 100 mL. Agregar 15 mL de agua y agi-
tar vigorosamente. Enjuagar las paredes del matraz con
15 mL de agua y dejar en reposo durante 1 O minutos.
Diluir con agua hasta 85 mL, ajustar con hidróxido de
sodio 1 N a un pH de 10,4 ± O, 1 y diluir con agua
hasta 100 mL. Proceder según se indica en Solución es-
tándar, comenzando donde dice "Filtrar, desechando
los primeros 15 mL del filtrado."
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L17
Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO
Agua de bromo: Agregar 100 mL de agua a 20 mL de
bromo en un frasco con tapón de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Análisis: Retirar el contenido de las Cápsulas cortando
las Cápsulas para abrirlas. Mezclar y determinar el peso
de los contenidos. Transferir una cantidad del conte-
nido, equivalente a 3 mg de yodo, a un crisol de ní-
quel. Agregar 5 g de carbonato de sodio, 5 mL de solu-
ción de hidróxido de sodio al 50% (p/v) y 1 O mL de
alcohol, procurando que toda la muestra se hume-
dezca. Calentar el crisol en un baño de vapor hasta
evaporar el alcohol, luego secar el crisol a 100º durante
30 minutos para evitar salpicaduras durante el calenta-
miento subsiguiente. Transferir el crisol con su conte-
nido a un horno calentado a 500º y calentar el crisol
durante 15 minutos. [NOTA-El calentamiento a 500º es
necesario para carbonizar cualquier materia orgánica
Suplementos Dietéticos / Minerales 6079
presente; se puede usar una temperatura más alta, si
fuera necesario, para asegurar la carbonización com-
pleta de toda la materia orgánica.J Enfriar el crisol,
agregar 25 mL de agua, cubrir el crisol con un vidrio de
reloj y calentar a ebullición suave durante 1 O minutos.
Filtrar la solución y lavar el crisol con agua hirviendo,
recogiendo el filtrado y los lavados en un vaso de preci-
pitados. Agregar ácido fosfórico hasta que la solución
sea neutra frente al anaranjado de metilo y luego agre-
gar 1 mL de ácido fosfórico en exceso. Agregar un ex-
ceso de Agua de bromo y calentar la solución a ebulli-
ción suave hasta que se torne incolora y luego durante
5 minutos más. Agregar unos pocos cristales de ácido
salicílico y enfriar la solución a 20º. Agregar 1 mL de
ácido fosfórico y 0,5 g de yoduro de potasio, y valorar
el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,005 N SV,
agregando almidón SR cuando el color del yodo libe-
rado haya desaparecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = V x NA x F x lme X (Aw/W) x (100/ L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(mL)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
F = factor de corrección para convertir mg a µg,
1000 µg/mg
lme = miliequivalente de 1, 21, 16 mg/mEq
Aw = peso promedio del contenido de las Cápsulas
W = peso de la muestra del contenido de las
Cápsulas tomado
L = cantidad declarada de yodo (µg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 7
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
1 00 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 mL. Disolver en 25 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 µg/mL de
hierro.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 5 µg/mL de hierro y omitir el uso de Solución de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a .?48, 3 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
6080 Minerales / Suplementos Dietéticos
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µ5)/mL)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 7.
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 mL, disolver en 50 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solución con una concentración de 1000 µg/mL de
magnesio.
Solución madre del estándar: 20 µg/mL de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 mL. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/mL de
magnesio.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra de manera que contenga 0,4 µg/mL magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO, Método 7
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso, a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 20 mL de ácido nítrico, diluir con
ácido clorhídrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solución con una concentración de 1000 µg/mL de
manganeso.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 µg/mL de manganeso.
USP 37
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de manganeso y
omitir el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
mangane,so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 7
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/mL de molibdeno.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir cada una con Diluyente a volu-
men para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 µg/mL de molibdeno.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe tomar un número de
Cápsulas o una porción del contenido de las Cápsulas
equivalente a una cantidad nominal de 1000 µg de mo-
libdeno y realizar diluciones apropiadas para obtener
una concentración final de 1O µg/mL de molibdeno,
omitiendo la adición de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
USP 37
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en ~tg/ml,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-1 60,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4,98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: Transferir 40 g
de cloruro estannoso a un vaso de precipitados, agre,gar
20 ml de ácido clorhídrico 6,5 N y calentar la solucion
hasta que el cloruro estannoso se disuelva. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1 00 ml.
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solución en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/ml de molibdeno, a partir de
molibdato de amonio, en agua
Muestra: Retirar el contenido de un número contado
de Cápsulas cortando las Cápsulas para abrirlas. Mezclar
y determinar el peso de los contenidos. Usar una canti-
dad del contenido de las Cápsulas, equivalente a una
cantidad nominal de 40 µg de molibdeno.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 465 nm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solución estándar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de ácido nítrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de
reloj y calentar a ebullición lentamente sobre una
placa de calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 6 ml de ácido percló-
rico, cubrir los vasos de precipitados con un vidrio de
reloj y continuar el calentamiento hasta que la diges-
tión sea completa, lo cual se indica cuando el líquido
se torna incoloro o amarillo pálido. Evaporar las solu-
ciones en los vasos de precipitados hasta sequedad.
Enjuagar las paredes de los vasos de precipitados y
los vidrios de reloj con agua, y agregar más agua a
cada vaso de precipitados hasta completar 50 ml en
cada vaso de precipitados. Calentar las soluciones
acuosas a ebullición suave durante unos pocos minu-
tos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 gotas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidró-
xido de amonio. Agregar 8,2 ml de ácido clorhídrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumétricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumétricos
correspondientes y diluir con agua a volumen. Trans-
ferir 50,0 ml de cada solución a embudos de separa-
ción. Agregar a cada embudo de separación 1,0 ml
de Solución de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solución de
Suplementos Dietéticos/ Minerales 6081
sulfato ferroso, 4,0 ml de Solucion de tiocianato de po-
tasio, 1,5 ml de Solución de cloruro estannoso al 20%
y 15,0 ml de alcohol amílico, y agitar los embudos
de separacion durante 1 minuto. Dejar que las capas
se separen y desechar las capas acuosas. Agregar
25 ml de Solución de cloruro estannoso diluida a cada
embudo de separación y agitar suavemente durante
15 segundos. Dejar que las capas se separen y dese-
char las capas acuosas. Transferir la capa organica de
cada embudo de separación a un tubo de centrífuga
y centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Deter-
minar las absorbancias de las fases orgánicas de la
Solución estándar y la Muestra, y corregir con el
Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(V x Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancia de la solución a partir de la
Muestra
As = absorbancia de la solución a partir de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución estándar analizada,
2,0 ml
Cs = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• FÓSFORO, Método 7
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de ácido sulfúrico por
100 ml de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secados a 1 05º durante 2 horas y almacenados en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1 000 µg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 µg/ml de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando las Cápsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cápsulas, equivalente a una canti-
dad nominal de 1 00 mg de fósforo a 25 ml de ácido
nítrico, y digerir sobre una placa de calentamiento du-
rante 30 minutos. Agregar 15 ml de ácido clorhídrico y
continuar la digestión hasta que cese la producción de
humos marrones. Enfriar y transferir el contenido del
matraz a un matraz volumétrico de 500 ml con ayuda
de pequeñas porciones de agua. Diluir con agua a volu-
men. Transferir 1 0,0 ml de esta solución a un matraz
volumétrico de 100 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 650 nm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir a sendos matraces volumétricos de 25 ml,
5,0 ml de la Solución estándar, de la Solución muestra
 6082 Minerales / Suplementos Dietéticos
y de agua para proporcionar el blanco. Agregar a
cada uno de los tres matraces 1,0 mL de Solución de
molibdato de amonio, de Solución de hidroquinona y
de Solución de bisulfilo de sodio, y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Diluir el contenido de los matra-
ces con agua a volumen y dejar los matraces en re-
poso durante 30 minutos. Determinar las absorban-
cias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au!As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
C = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fósforo (P)
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 1 00 µg/mL de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105º durante 2 horas, en agua
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µg/mL de potasio. , . . . Transferir el contenido del matraz a un matraz volumé-
Solucion muestra: Proceder segun se indica en Cafeto,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de potasio y omitir
el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
• SELENIO, Método 7
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 7. , de amonio diluido con agua (1 en 2)
Solución estándar de selenio: [PRECAUCION-EI Selenio
es tóxico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
USP 37
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1 000
Ltg/mL de selenio.
s'olución madre del estándar: 100 µg/mL de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada solución con Diluyente a volumen para obte-
ner soluciones que contengan 5,0; 10,0 y 25,0 µg/mL
de selenio.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando las Cápsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad.
del contenido de las Cápsulas, equivalente a una canti-
dad nominal de 1000 µg de selenio a un matraz ade-
cuado y agregar 12 mL de ácido nítrico. [NOTA-El volu-
men de ácido nítrico se puede variar para asegurar que
el polvo se disperse uniformemente.] Agitar el matraz
por rotación suave cuidadosamente hasta dispersar la
muestra de prueba. Someter a ultrasonido durante 1 O
minutos o hasta que la muestra de prueba se disuelva
por completo. Calentar la solución a ebullición suave
durante 15 minutos y enfriar a temperatura ambiente.
Agregar cuidadosamente 8 mL de ácido perclórico al
matraz, calentar el matraz hasta que aparezcan humos
de ácido perclórico y agitar el matraz por rotación
suave para disipar los humos. Repetir el calentamiento y
la agitación por rotación suave hasta que los humos
aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura ambiente.
trico de 50 mL con ayuda de Diluyente y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
selenio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2 ,
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico diluido
con a9ua (1 en 1 O)
Solucion de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disódico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
USP 37
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separación de 250 mL y agregar
200 mL de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la solución
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
marrón y cubrir la solución con una capa de ciclohe-
xano de 1 cm. Esta solución permanece estable durante
1 semana si se almacena en un refrigerador.
Solución madre del estándar: [PRECAUCIÓN-El Selenio
es tóxico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1 000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solución con ácido clorhídrico O, 125 N para obte-
ner una concentración de 2,0 µg/mL de selenio.
Solución estándar: Transferir 10,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agre-
gar 1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución de
ácido clorhídrico, y diluir con agua hasta 20 mL.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando las Cápsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cápsulas, equivalente a una canti-
dad nominal de 20 µg de selenio, a un matraz ade-
cuado. Agregar 1 O mL de ácido nítrico y entibiar suave-
mente sobre una placa de calentamiento. Continuar
calentando hasta que haya cesado la reacción inicial del
ácido nítris:o y luego agregar 3 mL de ácido perclórico.
[PRECAUCION-Tomar precauciones en esta etapa debido
a que la reacción de ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido perclórico
o hasta que el digerido comience a oscurecerse. Agre-
gar 0,5 mL de ácido nítrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de ácido ní-
trico si se presenta un oscurecimiento adicional. Digerir
durante 1 O minutos después de la primera aparición de
humos de ácido perclórico o hasta que el digerido se
torne incoloro. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 mL de So-
lución de ácido clorhídrico y devolver el matraz a la placa
de calentamiento para expulsar los residuos de ácido
nítrico. Calentar la mezcla durante 3 minutos después
de que comience a hervir. Enfriar el matraz a tempera-
tura ambiente y diluir con agua hasta 20 mL.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 380 nm
Blanco: 1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución
de ácido clorhídrico diluido con agua hasta 20 mL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco según se indica a continuación. Agregar 5 mL
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 ± O, 1. Agregar 5 mL de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotación suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50º y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paración. Transferir 10,0 mL de ciclohexano a cada
embudo de separación y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
c~pa de cliclohexano a un tubo de centrífuga y cen-
trifugar a 1 000 rpm durante 1 minuto para eliminar
Suplementos Dietéticos / Minerales 6083
cualquier residuo acuoso. Determinar las absorbancias
de las soluciones a partir de las Muestras contra la
solución a partir de Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Au/ A5 ) x [(V x Cs)/ Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar,
10 mL
Cs = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/mL)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra (µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 7
Solución estándar de cinc: 1000 µg/mL de cinc, a par-
tir de óxido de cinc disuelto en ácido clorhídrico 5 M
(3,89 mg/mL) y diluida con agua hasta el volumen fi-
nal. [NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M enti-
biando, si fuera necesario, enfriar y luego diluir hasta el
volumen final.]
Solu~ión madre del estándar: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solución mad,·e del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 1 00 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico 0, 125 N a volumen para
obtener .concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
mL de cinc.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 2 µg/mL de cinc y omitir el uso de Solución de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 213,8 r:im
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tánd?r en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determin_ar la concentración, C, en µg/mL, de
cinc en la Solucion muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declar9da de cinc_(Zn)
• BORO, NIQUEL, ESTANO y VANADIO, Método 7; CALC19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, fOSFORO
y CINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
6084 Minerales / Suplementos Dietéticos
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1) agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando 1 volumen de Solu-
ción madre de agua regia a 2 volúmenes de agua. Diluir
con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandia en solución de ácido
nítrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales
de interés en la solución.] Usando soluciones estándar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solución de ácido nítrico al 5% (v/
v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de solu-
ción estándar de elementos a un matraz volumétrico, y
diluir con solución de ácido nítrico al 5% (v/v) hasta
obtener una solución con concentraciones finales de
aproximadamente 1000 mg/L de calcio, 100 mg/L de
cobre, 250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio,
100 mg/L de manganeso, 800 mg/L de fósforo y
250 mg/L de cinc.
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lución estándar de elementos a un matraz volumétrico,
y diluir con solución de ácido clorhídrico al 20% (v/v)
hasta obtener una solución con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 100 mg/L de
cromo, de molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño
y de vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 1 y Solución madre del estándar 2,
según se reguiera, en Diluyente, para preparar una curva
de calibracion de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra: Pesar y transferir 5 Cápsulas a un
matraz volumétrico de 250 mL, y calentar suavemente
sobre una placa de calentamiento hasta que el conte-
nido comience a liberarse. Agregar cuidadosamente
25 mL de Solución madre de agua regia en incrementos
de 5 mL y agitar por rotación suave. Calentar, continuar
agitando por rotación suave hasta que las Cápsulas se
disuelvan en el ácido, retirar inmediatamente de la
fuente de calor y agregar 150 mL de agua. Enfriar y
diluir con agua a volumen. Filtrar aproximadamente
30 mL en un tubo de centrífuga usando un filtro de
nailon para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm.
Realizar los ajustes necesarios usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado para medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en el Análisis.]
USP 37
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en
las Soluciones estándar y la Solución muestra con un
sistema de plasma inductivamente acoplado usando
Diluyente como blanco. Graficar la emisión de las So-
luciones estándar en función de las concentraciones,
en mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir
de la gráfica así obtenida, determinar la concentra-
ción, C, en mg/L, de cada mineral de interés en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cada mineral tomado:
Resultado= ex (V/W) X Fx (Tw/L) X 100
e = concentración medida del elemento pertinente
en la Solución muestra (mg/L)
V = volumen de la Solución muestra (L)
w = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
Tw = peso promedio por Cápsula (mg)
L = cantidad declarada del elemento pertinente
(mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90%-125% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), mag-
nesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P) y cinc (Zn);
90%-160% de las cantidades declaradas de boro (B),
cromo (Cr), molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se),
estaño (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3x10 2 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Cáp-
sulas de Minerales. La etiqueta también indica la forma
salina del mineral usado como la fuente de cada ele-
mento. Cuando se proporciona más de un método de
valoración para un mineral en particular, el etiquetado
indica el método de valoración usado, sólo si no se usa el
Método 1.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Fluoruro de Sodio USP
Minerales, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Minerales contienen dos o más minerales
derivados de sustancias generalmente reconocidas como
seguras, que presentan dos o más de los siguientes ele-
mentos en forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre,
flúor, yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, ní-
quel, fósforo, potasio, selenio, estaño, vanadio y cinc. Las
USP 37
Tabletas contienen no menos de 90,0% y no más de
125,0% de las cantidades declaradas de calcio (Ca), cobre
(Cu), hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn), fós-
foro (P), potasio (K) y cinc (Zn); y no menos de 90,0% y
no más de 160,0% de las cantidades declaradas de boro
(B), cromo (Cr), flúor (F), yodo (1), molibdeno (Mo), ní-
quel (Ni), selenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V). No con-
tienen vitaminas. Pueden contener otras sustancias agre-
gadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando en el eti-
quetado el método usado únicamente si no se usa el Mé-
todo 1. Si aplica, se pueden usar soluciones estándar de
absorción atómica disponibles comercialmente para los mi-
nerales cuando se describe la preparación de una Solución
madre del estándar en las siguientes valoraciones. Usar agua
desionizada cuando se especifica agua. Cuando se especifica
espectrofotometría de absorción atómica en la valoración, se
pueden modificar las concentraciones de las Soluciones es-
tándar y de la Solución muestra para ajustarse al intervalo
lineal o de trabajo del instrumento.]
• CALCIO, Método 1
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N 50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
Solución estándar de calcio: 400 µg/mL de calcio. Pe-
sar 1,001 g de carbonato de calcio, previamente secado
a 300º durante 3 horas y enfriado en un desecador du-
rante 2 horas. Disolver en 25 mL de ácido clorhídrico
1 N. Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de
carbono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/mL de calcio.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana. Calentar el
crisol en una mufla mantenida a mantenida a 550º du-
rante 6-12 horas y enfriar. Agregar 60 mL de ácido
clorhídrico y calentar a ebullición suave sobre una placa
de calentamiento o en un baño de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumétrico de 100 ml. Enjuagar el crisol con
pequeñas porciones de ácido clorhídrico 6 N y agregar
los enjuagues al matraz. Diluir con agua a volumen y
filtrar, desechando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir
esta solución cuantitativamente con ácido clorhídrico
O, 125 N para obtener una concentración nominal de
2 µg/mL de calcio, agregando 1 mL de Solución de clo-
ruro de lantano por 100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 ml.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
Suplementos Dietéticos/ Minerales 6085
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
calcio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• CROMO, Método 1
Solución estándar de cromo: 1 000 µg/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio previamente secado a
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
de 100 mL, y transferir 15,0 y 20,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL
de cromo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de cromo y omitir
el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a ,357,9 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 1
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% (v/v) y diluir con una solución de
ácido nítrico al 1% (v/v) hasta 1000 mL. Esta solución
contiene 1000 µg/mL de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
6086 Minerales /Suplementos Dietéticos
ces volumétricos de 200 mL. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 µg/mL de cobre.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/mL de cobre y omitir
el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORURO, Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 mL de agua contenida en un
matraz volumétrico de 1000 ml. Dejar que la solución
se equilibre a temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de ácido acético
a un pH de 7,0.
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 mL de agua en un matraz volumétrico
de 1000 ml. Agregar 28 mL de ácido perclórico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/mL
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio, previamente secado a 100º durante 4 horas y
enfriado en un desecador, en agua
Solución madre intermedia A: 100 µg/mL de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de fluoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1O µg/mL de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 mL de
Solución madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 mL de Solución
madre intermedia A a sendos matraces volumétricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 10,0 mL de ácido clor-
hídrico 1 N, 25 mL de Solución de acetato de sodio 3 M
y 25,0 mL de Solución de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 µg/mL
de fluoruro.
Solución muestra: Transferir una cantidad de las Table-
tas reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad
nominal de 200 µg de fluoruro, a un matraz volumé-
trico de 100 ml. Agregar 10,0 mL de ácido clorhídrico
1 N, 25,0 mL de Solución de acetato de sodio 3 M y
25,0 mL de Solución de citrato de sodio, y diluir con
agua hasta 1 00 ml.
USP 37
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir 50,0 mL de cada una de las Soluciones están-
dar y de la Solución muestra a sendos vasos de preci-
pitados de plástico, que contengan una barra mezcla-
dora recubierta de plástico. Medir los potenciales (ver
pH (791 )), en mV, de las Soluciones estándar y de la
Solución muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mínima de ±0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador específico para ión fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al realizar las mediciones, sumergir los electrodos en
la solución, mezclar en un agitador magnético con su
parte superior aislada hasta lograr el equilibrio (1-2
minutos), y registrar el potencial. Enjuagar y secar los
electrodos entre mediciones, procurando evitar que
se dañe el cristal del electrodo específico para el ión.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/mL, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de res-
puesta estándar así obtenida y del potencial medido
de la Solución muestra, determinar la concentración,
C, en µg/mL, de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flúor (F) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• FLUORURO, Método 2
[NOTA-Usar recipientes de plástico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 mL
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1000 mL de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulfúrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solución madre del estándar: 220 µg/mL de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ9/mL de fluoruro.
Solucion estándar
[NOTA-Acondicionar la columna de extracción en fase
sólida especificada para su uso en la Solución estándar
y la Solución muestra de la siguiente manera. Usando
vacío a una presión que no exceda de 5 mm de mer-
curio, lavar la columna con un volumen de columna
de metano! seguido de un volumen de columna de
Solución amortiguadora de pH 70,0. No de¡· ar que la
parte superior de la columna se seque. Si a parte su-
perior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.]
Transferir 10,0 mL de Solución madre del estándar a un
matraz volumétrico de 100 ml. Agregar 75 mL de
agua y ajustar con hidróxido de sodio 0, 1 N a un pH
de 10,4 ± O, 1. Diluir con agua a volumen. Filtrar, dese-
chando los primeros 15 mL del filtrado. Transferir
25,0 mL del filtrado a un matraz volumétrico de
50 ml. Agregar 15,0 mL de agua y ajustar con hidró-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
ción amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porción de esta solucion a través de una columna de
extracción en fase sólida de 3 mL que contenga re-
lleno L1, la cual se conecta a través de un adaptador a
una segunda columna de extracción en fase solida que
contenga relleno de intercambio catiónico fuerte de
sulfonilpropilo. Desechar los primeros 3 mL del eluato
y recoger el resto del eluato en un matraz adecuado
para inyección en el cromatógrafo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de Tabletas reduci-
USP 37
das a polvo, equivalente a una cantidad nominal de
1 mg de flúor, a 15 ml de agua y agitar vigorosamente.
Enjuagar las paredes del matraz con 15 ml de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos. Diluir con agua
hasta 85 ml, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un
pH de 10,4 ± O, 1 y diluir con agua hasta 1 00 ml. Pro-
ceder según se indica en So/ucion estándar, comen-
zando donde dice "Filtrar, desechando los primeros
15 ml del filtrado."
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación est;';ndar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO
Agua de bromo: Agregar 1 00 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapón de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Análisis
Muestra: Tabletas
Transferir una porción de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a una cantidad nominal de 3 mg de
yoduro, a un crisol de níquel. Agregar 5 ,9 de carbo-
nato de sodio, 5 ml de solución de hidroxido de sodio
al 50% (p/v) y 1 O ml de alcohol, procurando que
toda la muestra se humedezca. Calentar el crisol en un
baño de vapor para evaporar el alcohol, luego secar el
crisol a 100º durante 30 minutos para evitar salpicadu-
ras durante el calentamiento subsiguiente. Transferir el
crisol con su contenido a un horno calentado a 500º y
calentar el crisol durante 15 minutos.[NOTA-EI calen-
tamiento a 500º es necesario para carbonizar cualquier
materia orgánica presente; se puede usar una tempe-
ratura más alta, si fuera necesario, para asegurar la car-
bonización completa de toda la materia orgánica.] En-
friar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullición suave
durante 1 O minutos. Filtrar la solución y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar ácido fosfó-
rico hasta que la solución sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de ácido fosfórico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solución a ebullición suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos más. Agre-
gar unos pocos cristales de ácido salicílico y enfriar la
solución a 20º. Agregar 1 ml de ácido fosfórico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
Suplementos Díetétirns / Minerales 6087
dón SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = V x NA x F x /,,,,. x (Aw! W) x (1 00/ L)
V =volumen de tiosulfato de sodio consumido
(mL)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
F = factor de corrección para convertir mg a µg,
1000 µg/mg
/,ne = miliequivalente de 1, 21, 1 6 mg/mEq
Aw = peso promedio de las Tabletas
W = peso de la porción de Tabletas tomada
L = cantidad declarada de yodo (µg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-1 60,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 1
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1 000 ml. Disolver en 25 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 1 00 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 µg/ml de
hierro.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 5 µg/ml de hierro y omitir el uso de Solución de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a ,?48,3 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µg/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO, Método 1
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 1.
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 ml, disolver en 50 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solución con una concentración de 1 000 µg/ml de
magnesio.
Solución madre del estándar: 20 µg/mL de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
6088 Minerales / Suplementos Dietéticos
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 mL. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/mL de
magnesio.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 0,4 µg/mL de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu =concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO, Método 1
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso, a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 20 mL de ácido nítrico, diluir con
ácido clorhídrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solución con una concentración de 1000 µg/mL de
manganeso.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 µg/mL de manganeso.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de manganeso y
omitir el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
mangane,so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
USP 37
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 1
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/mL de molibdeno.
Solución madre del estándar: 1 00 µg/mL de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave la solución
en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir cada una con Diluyente a volu-
men para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 µg/mL de molibdeno.
Solución muestra: Transferir una porción del polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1000 µg de mo-
libdeno, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de
ácido nítrico. [NOTA-El volumen de ácido nítrico se
puede variar para asegurar que el polvo se disperse uni-
formemente.] Agitar el matraz por rotación suave cuida-
dosamente hasta dispersar la muestra de prueba. Some-
ter a ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la
muestra de prueba se disuelva por completo. Calentar
la solución a ebullición suave durante 15 minutos y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente
8 mL de ácido perclórico, calentar hasta que aparezcan
humos de ácido perclórico, y agitar el matraz por rota-
ción suave para disipar los humos. Repetir el calenta-
miento y la agitación por rotación suave hasta que los
humos aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura am-
biente. Transferir cuantitativamente el contenido del
matraz a un matraz volumétrico de 100 mL con ayuda
de Diluyente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20: 1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
USP 37
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4,98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: Transferir 40 g
de cloruro estannoso a un vaso de precipitados, agre9ar
20 ml de ácido clorhídrico 6,5 N y calentar la solucion
hasta que el cloruro estannoso se disuelva. Enfriar y di-
luir con agua hasta 100 ml.
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solución en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/ml de molibdeno, a partir de
molibdato de amonio en agua
Muestra: Una porción de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a una cantidad nominal de 40 µg de
molibdeno
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 465 nm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solución estándar a
sendos vas?~ de p_re.cipitados de 200 ml. A<;¡regar
20 ml de ac1do rntnco a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullición lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 ml de ácido perclórico, cu-
brir los vasos de precipitados con un vidrio de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestión sea
completa, lo cual se indica cuando el líquido se torna
incoloro o amarillo pálido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar más agua hasta completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar la solu-
ción acuosa a ebullición suave durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 9otas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
de amonio. Agregar 8,2 ml de ácido clorhídrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumétricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumétricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solución a embudos de separación.
Agregar a cada embudo de separación 1,0 ml de Solu-
ción de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solución de sulfato
ferroso, 4,0 ml de Solución de tiocianato de potasio,
1,5 ml de Solución de cloruro estannoso al 20% y
15,0 ml de alcohol amílico, y agitar los embudos de
separación durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solución de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separación y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las capas se separen y desechar las ca-
pas acuosas. Transferir la capa orgánica de cada em-
budo. de separación a un tubo de cen~rífuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgánicas de la Solu-
ción estándar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Suplementos Dietéticos / Minerales 6089
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Au! A1) x [(V x Cs)! Mu] x 100
Au = absorbancia de la solución a partir de la
Muestra
As = absorbancia de la solución a partir de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución estándar analizada,
2,0 ml
Cs = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
,declarada ,de molibdeno (Mo)
• FOSFORO, Metodo 7
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de ácido sulfúrico por
100 ml de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secado a 105º durante 2 horas y almacenado en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen, y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 100 µg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 µg/ml de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
Solución muestra: [NOTA-Reducir a polvo fino y pesar
un número contado de Tabletas.] Transferir una porción
del polvo, equivalente a una cantidad nominal de
100 mg de fósforo, a 25 ml de ácido nítrico y digerir
sobre una placa de calentamiento durante 30 minutos.
Agre9ar 15 ml de ácido clorhídrico y continuar la di-
gestion hasta que cese la producción de humos marro-
nes. Enfriar y transferir el contenido del matraz a un
matraz volumétrico de 500 mL con ayuda de pequeñas
porciones de agua. Diluir con agua a volumen. Transfe-
rir 10,0 ml de esta solución a un matraz volumétrico de
100 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 650 nm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir a sendos matraces volumétricos de 25 ml,
5,0 ml de la Solución estándar, de la Solución muestra
y de agua para proporcionar el blanco. Agregar a
cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solución de
molibdato de amonio, de Solución de hidroquinona y
de Solución de bisulfito de sodio, y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Diluir el contenido de cada ma-
traz con agua a volumen y dejar los matraces en re-
poso durante 30 minutos. Determinar las absorban-
cias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Au! As) x ( Cs/ Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
6090 Minerales / Suplementos Dietéticos
C1 = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fósforo (P)
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 100 µg/mL de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105º durante 2 horas, en agua
Solución madre del estándar: 1O µg/mL de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ~/mL de potasio.
Solucion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 1 µg/mL de potasio y omitir el uso de Solución de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
• SELENIO, Método 1
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 1.
Solución estándar de selenio: [PRECAUCIÓN-El Selenio
es tóxico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1000
µg/mL de selenio.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones con concentraciones de 5,0; 10,0 y 25,0 µg/
mL de selenio.
USP 37
Solución muestra: Transferir una porción de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1000 µg de se-
lenio, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de ácido
nítrico. [NOTA-El volumen de ácido nítrico se puede
variar para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar el matraz por rotación suave cuidadosa-
mente hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva por completo. Calentar la solu-
ción a ebullición suave durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 mL
de acido perclórico al matraz, calentar el matraz hasta
que aparezcan humos de ácido perclórico y agitar el
matraz por rotación suave para disipar los humos. Repe-
tir el calentamiento y la agitación por rotación suave
hasta que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Transferir el contenido del matraz a
un matraz volumétrico de 50 mL con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20: 1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
selenio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2 ,
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico diluido
con a~ua (1 en 1O)
Solucion de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disódico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separación de 250 mL y agregar
200 mL de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la soíución
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
marrón y cubrir la solución con una capa de ciclohe-
xano de 1 cm. Esta solución permanece estable durante
1 semana si se almacena en un refrigerador.
Solución madre del estándar: [PRECAUCIÓN-El Selenio
es tóxico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir ía adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/mL de selenio. Diluir un volumen
USP 37
de la solución con ácido clorhídrico O, 125 N para obte-
ner una concentración de 2,0 µg/ml de selenio.
Solución estándar: Transferir 10,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agre-
gar 1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución de
ácido clorhídrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad no-
minal de 20 µg de selenio, a un matraz adecuado.
Agregar 1 O ml de ácido nítrico y entibiar suavemente
sobre una placa de calentamiento. Continuar calen-
tando hasta que haya cesado la reacción inicial del
ácido nítri~o y luego agregar 3 ml de ácido perclórico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a
que la reacción del ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido perclórico
o hasta que el digerido comience a oscurecerse. Agre-
gar 0,5 ml de ácido nítrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de ácido ní-
trico si se presenta aún más oscurecimiento. Digerir
durante 1 O minutos después de la primera aparición de
humos de ácido perclórico o hasta que el digerido se
torne incoloro. Enfriar el matraz, agregar 2,5 ml de So-
lución de ácido clorhídrico y volver a colocar el matraz
sobre la placa de calentamiento para expulsar los resi-
duos de ácido nítrico. Calentar la mezcla durante 3 mi-
nutos después de que comience a hervir. Enfriar el ma-
traz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 380 nm
Blanco: 1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución
de ácido clorhídrico diluida con agua hasta 20 ml
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco según se indica a continuación. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 ± O, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotación suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50º y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paración. Transferir 10,0 ml de ciclohexano a cada
embudo de separación y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrífuga y centri-
fugar a 1000 rpm durante 1 minuto para eliminar
cualquier residuo acuoso. Determinar las absorbancias
de las soluciones a partir de las Muestras contra la
solución a partir de Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Au!As) x [(Vx Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar,
10 ml
Cs = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra (µg)
Suplementos Dietéticos /Minerales 6091
Criterios de aceptación: 90,0º/ü-1 60,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 1
Solución madre del estándar de cinc: 1000 µg/ml de
cinc, a partir de óxido de cinc disuelto en ácido clorhí-
drico 5 M (3,89 mg/ml) y diluida con agua hasta el
volumen final. [NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M
entibiando, si fuera necesario, enfriar, y luego diluir
hasta el volumen final.]
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de cinc, a
partir de Solución madre del estándar de cinc diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
ml de cinc.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 2 µg/ml de cinc y omitir el uso de Solución de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 213,8 r;im
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas tornada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ$)/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/rnL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• BORO, NÍQUEL, ESTAÑO y VANADIO, Método 1; CALC19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, fOSFORO
y CINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1) agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando 1 volumen de Solu-
ción madre de agua regia a 2 volúmenes de agua. Diluir
con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandia en solución de ácido
nítrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Es necesario incluir sólo los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido nítrico al 5% (v/v),
pipetear y transferir la cantidad apropiada de solución
estándar de elementos, a un matraz volumétrico y diluir
con solución de ácido nítrico al 5% (v/v) hasta obtener
6092 Minerales / Suplementos Dietéticos
una solución con concentraciones finales de aproxima-
damente 1 000 mg/L de calcio, 1 00 mg/L de cobre,
250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 1 00 mg/L
de manganeso y 800 mg/L de fósforo y 250 mg/mL de
cinc.
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Es necesario incluir sólo los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lución estándar de elementos, a un matraz volumétrico
y diluir con solución de ácido clorhídrico al 20% (v/v)
hasta obtener una solución con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 100 mg/L de
cromo, de molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño
y de vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 7 y Solución madre del estándar 2,
según se requiera, en Diluyente, para preparar una curva
de calibración de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra 1 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados en la Solución madre del estándar
7 y la Solución madre del estándar 2): Pesar y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una por-
ción igual a 3,5 veces el peso promedio por Tableta a
un matraz volumétrico de 250 mL. Agregar lentamente
25 mL de Solución madre de agua regia en incrementos
de 5 mL seguidos de mezclado. [NOTA-Si la muestra
contiene carbonato, se producirá burbujeo. Esperar
hasta que cese el burbujeo para proceder.] Calentar la
solución a ebullición sobre una placa de calentamiento.
Continuar calentando suavemente hasta que cese la
producción de humos (aproximadamente 1 hora).
lNOTA-Si la muestra contiene selenio, digerir durante
no más de 15 minutos.] Retirar del calor, enfriar y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 ml
en un tubo de centrífuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando Dilu-
yente.
Solución muestra 2 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados únicamente en la Solución madre
del estándar 2): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porción igual a 3,5 veces
el peso promedio por Tableta a un matraz volumétrico
de 250 mL. Agregar lentamente 25 mL de Solución ma-
dre de agua regia en incrementos de 5 ml seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producirá burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solución a ebullición sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la producción de humos (apro-
ximadamente 1 hora). [NOTA-Si la muestra contiene
selenio, digerir durante no más de 15 minutos.] Retirar
del calor, enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar
aproximadamente 30 mL en un tubo de centrífuga
usando un filtro de nailon para jeringa con un tamaño
de poro de 5 µm. Si fuera necesario, realizar diluciones
adicionales usando Diluyente.
Solución muestra 3 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados únicamente en la Solución madre
del estándar 7): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porción pesada, igual al
peso promedio por Tableta, a un matraz volumétrico de
250 mL. Agregar lentamente 25 mL de Solución madre
de agua regia en incrementos de 5 mL seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producirá burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solución a ebullición sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la producción de humos (apro-
ximadamente 1 hora). Retirar del calor, enfriar y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 mL
USP 37
en un tubo de centrífuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando
Diluyente
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado para medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en el Análisis.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en las
Soluciones estándar y ia Solución muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado usando Dilu-
yente como blanco. Graficar la emisión de las Solucio-
nes estándar en función de las concentraciones, en
mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta que
mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir de la
gráfica así obtenida, determinar la concentración, C,
en mg/L, de cada mineral de interés en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral tomado:
Resultado= Cx (V/W) x Fx (Tw!L) x 100
C = concentración medida del elemento pertinente
en la Solución muestra (mg/L)
V = volumen de la Solución muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
Tw = peso promedio por Tableta (mg)
L = cantidad declarada del elemento pertinente
(mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), níquel (Ni), se-
lenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 1 0 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 10 2 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONAi.ES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• E:rrQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Minerales. La etiqueta también indica la forma sa-
lina del mineral usado como la fuente de cada elemento.
Cuando se proporciona más de un método de valoración
USP 37
para un mineral en particular, el etiquetado indica el mé-
toqo de valoración usado, sólo si no se usa el Método 7.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Fluoruro de Sodio USP
Extracto en Polvo de Mirtillo
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Mirtillo se prepara a partir de los
frutos maduros de Vaccinium myrtillus L. (Fam. Ericaceae)
usando disolventes adecuados como alcohol, metanol o
agua, o mezclas de estos disolventes. La relación entre el
material vegetal inicial y el Extracto en Polvo está entre
153:1 y 76:1. Contiene no menos de 36,0% de antocia-
nósidos, calculado como cloruro de cianidin-3-0-glucó-
sido, y no más de 1,0% de antocianidinas, calculado
como cloruro de cianidina, ambos calculados con res-
pecto a la materia anhidra.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 4 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Mirtillo USP en metanol. Centrifugar y usar el sobre-
nadante transparente.
Solución muestra: 4 mg/mL de Extracto en Polvo de
Mirtillo en metanol. Centrifugar y usar el sobrenadante
transparente.
Adsorbente: Usar placas para cromatografía en capa
delgada recubiertas con una capa de celulosa.
Volumen de apljcación: 1 O µL
Fase móvil A: Acido acético glacial, ácido clorhídrico y
agua (15:3:82),
Fase móvil B: Acido acético glacial y agua (6:4)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Usar una cámara saturada. Desarrollar los cromatogra-
mas usando Fase móvil A y secar la placa con ayuda
de una corriente de aire tibio. Desarrollar los croma-
togramas en la misma dirección usando Fase móvil B.
Observar la placa bajo luz visible.
Cri!erios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
Cton muestra presenta tres bandas rojas principales con
valores ~r de aproxir:i??amente 0,55; 0,65 y 0,70 que
son s1m1lares e!l pos1C1on y color a las bandas principa-
les correspondientes en el cromatograma de la Solución
estándar.
• B. Los tiempos de retención de los picos de antocianó-
sido en el cromatograma de la Solución muestra corres-
ponden a los del cromatograma de la Solución estándar
C! se_g~n se obtie~en. ~n la prue~a de Contenido de Anto-
C1anos1dos y AntoCtantdmas. Los picos debidos al cloruro
de delfinidin-3-0-galactósido y cloruro de delfinidin-3-0-
glucósido son los picos más intensos y son de intensidad
similar, y cada uno es más intenso que el pico debido al
cloruro de cianidin-3-0-glucósido. Los picos debidos al
cloruro de cianidin-3-0-galactósido, cloruro de delfinidin-
3-~-arabi.nósid<? Y. cloruro de cianidin-3-0-glucósido son
d~ 1.ntens1dad similar. Cada uno de los picos de antocia-
nos1do restantes es de menor intensidad que el pico de-
bido al cloruro de cianidin-3-0-glucósido.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ANTOCIANÓSIDOS Y ANTOCIANIDINAS
Disolvente: ,Metanol y ácido clorhídrico (49:1)
Diluyente: A~ido fosfórico al 85% y agua (1 :9)
Solución A: Acido fórmico y agua (1 :9)
Solución B: Acetonitrilo, metanol, ácido fórmico y agua
(45:45:20:80)
Suplementos Dietéticos / Mirtillo 6093
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
f-----º"----------+----
_21_ ______+________._7_ _ ___,
35 --- 75_ _ _,,_~-----~2=5----1
'----~4~5_________ ~ __ 3_5____--+-----=65~_ ___,
46 o 100
50 o 100
51 93 7
~60 93 7
Solución madre del estándar A: 0,4 mg/mL de ER Clo-
ruro de Cianidin-3-0-glucósido USP en Disolvente.
[NOTA-Disolver usando ultrasonido.]
Solución estándar A: 0,08 mg/mL de ER Cloruro de
Cianidi!l-3-0-glucósido USP, a partir de Solución madre
del estandar A en Diluyente. [NOTA--Esta solución se
mantiene estable durante 48 horas a 4º.]
Solución madre del estándar B: 0,5 mg/ml de ER Clo-
ruro de Cianidina USP en Disolvente. [NOTA-Disolver
usando ultrasonido.]
Solución estándar B: 0,01 mg/ml de ER Cloruro de
Cianidina USP, a partir de Solución madre del estándar B
en Diluyente. [NOTA-Esta solución se mantiene estable
durante 36 horas a 4º]
Solución estándar C: Transferir 125 mg de ER Extracto
en Polvo de Mirtillo USP a un matraz volumétrico de
100 ml, agregar 25 ml de Disolvente, someter a ultraso-
nido hasta disolver y diluir con Diluyente a volumen.
[NOTA-Esta solución se mantiene estable durante 48
horas a 4º.]
Solución muestra: Transferir 125 mg de Extracto en
Polvo de Mirtillo a un matraz volumétrico de 1 00 ml,
agregar 25 ml de Disolvente, someter a ultrasonido
hasta disolver, y diluir con Diluyente a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
[NOTA-Usar viales para HPLC silanizados y
desactivados.]
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 535 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura
Muestreador automático refrigerado: 4º
Columna: 30 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Ces similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ER Extracto en Polvo de
Mirtillo USP.
R~sol~ción: No. m,e~os de O,~ entre los picos de del-
f1nid1n-3-0-arab1nos1do, malvidin-3-0-galactósido y
petunidin-3-0-arabinosa, y no menos de 1,0 para
otros componentes, Solución estándar C
Intervalo del factor de asimetría: 0,8-2,0 para el
P'.CO de cloruro de cianidin-3-0-glucósido, Solución es-
tandar A
Desv.iación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de cloruro de cianidin-3-0-glucósido en inyec-
ciones repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Usando el cromatograma de Solución estándar C y el
Cromatowama de Referencia, identificar los tiempos
de retenc1on de los picos que corresponden a los dife-
rentes antocianósidos y antocianidinas. Los tiempos de
6094 Mirtillo /Suplementos Dietéticos USP 37

retención relativos aproximados, relativos a cloruro de Tabla 3 (Continuación)

cianidin-3-0-glucósido, se proporcionan para los anto-
Tiempo de
cianósidos en la Tabla 2 y para las antocianidinas en la Anallto Retención Relativo
Tabla 3.
Calcular por separado los porcentajes de cada antocia- Cloruro de oeonidina 2 27
nósido (ver la Tabla 2) en la porción de Extracto en Cloruro de malvidina 2 30
Polvo tomada:
Criterios de aceptación
Resultado =(ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 Suma de todos los antocianósidos: No menos de
36,0% con respecto a la materia anhidra
ru = respuesta del pico de cada uno de los Suma de todas las antocianidinas: No más de 1,0%
antocianósidos de la Solución muestra con respecto a la materia anhidra
rs = respuesta del pico de cloruro de cianidin-3-0-
CONTAMINANTES
glucósido de la Solución estándar A
= concentración de ER Cloruro de Cianidin-3-0- • METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 ppm
Cs
glucósido USP en la Solución estándar A • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
(mg/mL) lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la requisitos.
Solución muestra (mg/mL) • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021)
Recuento total de microorganismos aerobios: No
más de 104 ufc/g
Tabla 2 Recuento total combinado de hongos filamentosos y
Tiempo de levaduras: No más de 103 ufc/g ,
Ana lito Retención Relativo • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Cloruro de delfinidin-3-0-aalactósido o 61 ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Cloruro de delfinidin-3-0-alucósido o 73
Cloruro de cianidin-3-0-aalactósido o 84 PRUEBAS ESPECÍFICAS
Cloruro de delfinidin-3-0-arabinósido o 86 • FRACCIÓN INSOLUBLE EN ÁCIDO:
Cloruro de cianidin-3-0-alucósido 1 00 Muestra: 5 g de Extracto en Polvo finamente molido
Cloruro de oetunidin-3-0-aalactósido 1 08 Análisis: Transferir aproximadamente 1 g a un matraz
de 500 mL, agregar 200 mL de ácido clorhídrico O, 1 N
Cloruro de cianidin-3-0-arabinósido 1 11
y agitar vigorosamente durante 2 horas. Pasar la solu-
Cloruro de oetunidin-3-0-alucósido 1 24 ción a través de un filtro de vidrio sinterizado previa-
Cloruro de oeonidin-3-0-aalactósido 1 36 mente tarado, lavar el matraz con 30 mL de ácido clor-
Cloruro de oetunidin-3-0-arabinósido 1 39 hídrico O, 1 N y transferir los lavados al filtro. Lavar el
Cloruro de oeonidin-3-0-nlucósido 1 55 filtro con 30 mL de ácido clorhídrico O, 1 N en porcio-
Cloruro de malvidin-3-0-nalactósido 1 58 nes de 5 ml. Secar el filtro durante 3 horas a 105º,
enfriar en un desecador y pesar. Calcular el porcentaje
Cloruro de oeonidin-3-0-arabinósido 1 67
de la fracción insoluble en ácido.
Cloruro de malvidin-3-0-alucósido 1 76 Criterios de aceptación: No más de 5%
Cloruro de malvidin-3-0-arabinósido 1 91 • DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921): No más de
4,5%, determinado en 0,5 g
Calcular por separado los porcentajes de antocianidinas • RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 3,0%, deter-
(ver la Tabla 3) en la porción de Extracto en Polvo minado en 1,0 g
tomada: • EXTRACTOS BOTÁNICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
REQUISITOS ADICIONALES
ru = respuesta del pico de cada una de las • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
antocianidinas de la Solución muestra cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
rs = respuesta del pico de cloruro de cianidina de temperatura ambiente controlada.
la Solución estándar B • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Cs = concentración de ER Cloruro de Cianidina USP latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
en la Solución estándar B (mg/mL) planta a partir de la que se preparó el artículo. Cumple
Cu =concentración de Extracto en Polvo en la con los otros requisitos de etiquetado indicados en Ex-
Solución muestra (mg/mL) tractos Botánicos (565).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Tabla 3 ER Extracto en Polvo de Mirtillo USP
ER Cloruro de Cianidina USP
Tiempo de
ER Cloruro de Cianidin-3-0-glucósido USP
Ana lito Retención Relativo
Cloruro de delfinidina 1 28
Cloruro de cianidina 1 82
Cloruro de oetunidina 2 08
USP 37
MSM-ver Metilsulfonilmetano en Suplementos
Dietéticos
Niacina-ver Niacina en Monografías
Generales
Niacina, Tabletas-ver Niacina, Tabletas en
Monografías Generales
Niacinamida-ver Niacinamida en
Monografías Generales
Niacinamida, Tabletas-ver Niacinamida,
Tabletas en Monografías Generales
Oleovitaminas A y D-ver Oleovitaminas A
y O en Monografías Generales
Oleovitaminas A y D, Cápsulas-ver
Oleovitaminas A y O, Cápsulas en Monografías
Generales
Olmo-ver Olmo en Monografías Generales
Olmo Americano-ver Olmo en
Monografías Generales
Triglicéridos de Ácidos Omega-3
DEFINICIÓN ,
Los Triglicéridos de Acidos Omega-3 son una mezcla de
mono-, di- y triésteres de ácidos omega-3 con glicerol
que contiene principalmente triésteres y que se obtiene
por esterificación de ácidos omega-3 concentrados y puri-
ficados con glicerol o por transesterificación de los ésteres
etílicos de los ácidos omega-3 con glicerol. Los ácidos
omega-3 provienen del aceite del cuerpo de pescados de
las familias Engraulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeri-
dae, Salmonidae y Scombridae y se definen como los si-
guientes: ácido alfa-linolénico (Cl 8:3 n-3), ácido moróc-
tico (Cl 8:4 n-3), ácido eicosatetraenoico (C20:4 n-3),
ácido eicosapentaenoico (EPA, por sus siglas en inglés)
(C20:5 n-3), ácido heneicosapentaenoico (C21 :5 n-3),
ácido docosapentaenoico (C22:5 n-3) y ácido docosahe-
xaenoico (DHA, por sus siglas en inglés) (C22:6 n-3).
Contienen no menos de 58,0% de ácidos omega-3 totales
expresados como triglicéridos y no menos de la cantidad
declarada de EPA y DHA, expresada como ácidos grasos
libres. Pueden agregarse antioxidantes adecuados en con-
centraciones apropiadas.
Suplementos Dietéticos / Omega-3 6095
IDENTIFICACIÓN
• A. Los tiempos de retención de los picos del éster metí-
lico del ácido eicosapentaenoico y del éster metílico del
ácido docosahexaenoico de la Solución muestra en la,s
pruebas de Contenido de EPA y DHA y Contenido de. Acidos
Omega-3 Totales corresponden a los de los respectivos
compuestos de las Soluciones estandar. 51 el etiquetado
no declara EPA o DHA, el pico correspondiente a ese
ácido omega-3 no excede de 15,0% del área total detec-
tada de la Solución muestra en, las pruebas de Contenido
de EPA y DHA y Contenido de Acidos Omega-3 Totales.
• B. El tiempo de retención del pico correspondiente a los
triglicéridos de la Solución muestra corresponde al del
pico de triglicéridos de la Soluciúr1 Je aptitud del sistema
en la prueba de Contenido de Oligómeros y Glicéridos
Parciales.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE EPA Y DHA
Análisis: Proceder según se indica en, Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinación y Perfil de Acidos Grasos
Omega-3.
Criterios de aceptación: No menos de la cantidad de-
clarada, expr,esado como ácidos libres
• CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
Análisis: Proceder según se indica en, Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinación y Perfil de Acidos Grasos
Omega-3.
Criterios de aceptación: No menos de 58,0% de áci-
dos omega-3 tot9les, expresadq como triglicéridos
• CONTENIDO DE OLIGOMEROS Y GLICERIDOS PARCIALES
Fase móvil: Usar tetrahidrofurano. ,
Solución muestra: 1,00 mg/mL de Triglicéridos de Aci-
dos Omega-3 en Fase móvil
Solución de aptitud del sistema: 0,5 mg/mL de mono-
docosahexaenoína, 0,3 mg/mL de didocosahexaenoína
y 0,2 mg/mL de tridocosahexaenoína en Fase móvil.
[NOTA-Se pueden obtener grados adecuados de mo-
nodocosahexaenoína, didocosahexaenoína y tridocosa-
hexaenoína de Nu-Chek Prep.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Refractómetro diferencial
Columnas: Tres columnas en secuencia, de 7,8 mm x
30 cm, con relleno L21 de 7 µm. Dos de las columnas
tienen un tamaño de poro de 50 nm y la otra, un
tamaño de poro de 1 O nm, configuradas de modo tal
que las columnas con un tamaño de poro de 50 nm
sean las más próximas al inyector.
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Orden de elución: Tridocosahexaenoína, didocosa-
hexaenoína y monodocosahexaenoína
Resolución: No menos de 2,0 entre monodocosahe-
xaenoína y didocosahexaenoína, y no menos de 1,0
entre didocosahexaenoína y tridocosahexaenoína
Análisis
Muestra: Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales.
Calcular el porcer)taje de oligómeros en la porción de
Triglicéridos de Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (r11/ rT) x 1 00
ru = suma de las áreas de los picos con un tiempo
de retención menor que el del pico de
triglicérido
rr = suma de las áreas de todos los picos en el
cromatograma
6096 Omega-3 / Suplementos Dietéticos
Calcular el porcentaje de glicéridos parciales (m,ono y
diglicéridos) en la porción de Triglicéridos de Acidos
Omega-3 tomada:
Resultado = (ru!rr) x 100
ru = suma de las áreas de los picos que
corresponden a diglicéridos y monoglicéridos
rr = suma de las áreas de todos los picos en el
cromatograma
Criterios de aceptación: No más de 3,0% de oligóme-
ros y no más de 50,0% de glicéridos parciales
CONTAMINANTES
• LÍMITE DE ARSÉNICO
[NOTA-Para la preparación de tod~s ~as solu,ciones ,ac_uo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflon y pl~st1co
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a través de una resina de intercambio iónico de lecho
mixto, de ácido fuerte y de base fuerte. Sele~cionar to-,
dos los reactivos para que tengan un contenido de arse-
nico tan bajo como sea p~s.ible y alma_ce~ar todas la.s.
soluciones reactivo en rec1p1entes de vidrio de boros1h-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, teflón y plástico antes
de su uso empapando en ácido nítrico 8 N ti~io ~u­
rante 30 minutos y enjuagando con agua d~s1ornzada.]
Solución A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
20 ml de agua y 1 O ml d~ ácido nítric~, y entibia~ so-
bre una placa de calentamiento hasta disolver. De1ar
que la solución se enfríe, a _temperatura ambi~n.te, trans-
ferir a un matraz volumetnco de 100 ml y diluir con
agua desionizada a volumen.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de caler:i!amiento ~asta disolver los sóli~os.
Dejar que la soluc1on se enfn!'! ~ temperatura am~1erite,
transferir a un matraz volumetrico de 100 ml y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
(3:2:5). Un volumen de 5 µL proporciona 0,015 mg de
paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Estándar de Arsénico, preparada según se indica
en Arsénico (211 ), a un matraz volumétrico de 100 ml.
Agregar 40 ml de agua y 5 ml de ácido nítrico, y diluir
con agua a volumen. Esta solución contiene O, 1 O µg/ml
de arsénico.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de ar_s,énico.
Solución muestra: Para preparar la So/uCton muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrón de 2455 MHz. y una. potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimiento interno de teflón de 100 ml. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
para desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de escape para ventilar los humos. [PRE-
CAUCIÓN-Usar proteccion adecuada para los ojos, ade-
más de ropa y guantes protectores.] TrarJsferir aproxi-
madamente 500 mg de Triglicéridos de Acidos Omega-
3, pesados con una aproximación de O, 1 mg, a un vaso
de digestión con recubrimiento interno de teflón. Pre-
parar las muestras por duplicado. Agregar 15 ml de
ácido nítrico y agitar por rotación suave. Cubrir los va-
sos con tapas dejando cerrado el accesorio de venti~a­
ción. Digerir previamente durante toda la noche ba10
una campana. Colocar la membrana de ruptura en el
accesorio de ventilación y ajustar la tapa. Colocar todos
USP 37
los vasos en el plato giratorio del horno de microc:>nd_a,s.
Conectar los tubos de escape a la trampa de vent1lac1on
y conectar la línea del sensor de presión al vaso apro-
piado. Iniciar un procedimiento de digestión de ~os
etapas calentando ~I microondas con una potenc1_a del
15% durante 15 minutos, seguida de una potencia del
25% durante 45 minutos. Retirar el plato giratorio con
los vasos del horno y dejar que los vasos se enfríen a_
temperatura ambiente. LNOTA-Se puede usar un bano
de agua fresca para acelerar el proceso de enfria-
miento.] Ventilar los vasos cuando alcancen la tempera-
tura ambiente. Retirar las tapas y agregar lentamente
2 ml de peróxido de hidrógeno al 30% a cada uno.
Dejar que las reacciones cesen y sellar los vasos. Volver
a colocar los vasos en el plato giratorio del horno de
microondas y calentar durante 15 minutos adicionales a
una potencia del 30%. Retirar los vasos del horno y
dejar que se enfríen a temperatura ambient_e. Transferir
los digeridos enfriados a matraces volumétricos de
25 ml y diluir con agua a volumen. . , . .
Análisis: Pros¡ramar el horno de grafito segun se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min; carbonizar
la muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 ml/min; enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura de 20º y
un flujo de argón de 300 ml/min; atomizar a 2400º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido; y
limpiar a 2600º usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 se!;lundos.
Inyectar por separado volumenes iguales (20 µL) de las
Soluciones estándar, de la Solución muestra y del Blanco,
seguidos de una inyección de 5 µL de la Solución C
para cada una de las muestras, en el tubo de grafito
de un espectrómetro de absorción atómica con un
horno de grafito adecuado equipado con una lámpara
de cátodo hueco para arsénico. Determinar el área del
pico en la línea de emi~i,ón de arsénico a ) 93,7 n~,
corregida por la absorc1on de fondo. Graf1car las areas
de los picos corregidas de las Soluciones estándar en
función de sus contenidos de arsénico, en µg/ml, y
calcular la línea de regresión que mejor se ajuste a los
pu~tos. Determinar la concentra.sión, C, en ¡.ig/ml, de
arsenico en cada ml de la Soluc1on muestra interpo-
lando a partir de la línea de regresión.
Calcular el contenido de arsénico en la porción de Tri-
glicéridos de Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (C x V)/W
C = concentración de arsénico, según se obtuvo
anteriormente, en la Solución muestra
(µg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
W = peso de Triglicéridos de Acidos Omega-3
tomado para preparar la Solución muestra (g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plásticp
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a traves
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Selec~ionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo t?n
bajo como sea posible y al~a~enar todas. l~s solu~IOn~s
reactivo en recipientes de vidrio de borosi11cato. L1mp1ar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
empapando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desioniz?~a.] .
Solución A: 1 O g de fosfato monobas1co de amomo ul-
tra puro en 1 ml de ácido nítrico y 40 ml de agua para
USP 37
disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada hasta
100 ml.
Solución B: 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un
vaso de precipitados de teflón. Agregar 40 ml de agua
y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de
calentamiento hasta disolver los sólidos. Dejar que la
solución se enfríe a temperatura ambiente, transferir a
un matraz volumétrico de 100 ml y diluir con agua
desionizada a volumen.
Solución C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de
fosfato 111ás 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1: 19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volumé-
trico de 1 00 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml de esta solución a un segundo matraz volumé-
trico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solución
contiene O, 1 O}lg/ml de plomo.
Soluciones estandar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min; carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min; enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20º y un flujo
de argón de 300 ml/min; atomizar a 2100º usando una
rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5 se-
gundos con el flujo de argón detenido; y limpiar a
2600º usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos.
Inyectar por separado volúmenes iguales (20 µL) de las
Soluciones estándar, de la Solución muestra y del Blanco,
seguidos de una inyección de 5 µL de la Solución C
para cada una de las muestras, en el tubo de grafito
de un espectrómetro de absorción atómica con un
horno de grafito adecuado equipado con una lámpara
de cátodo hueco para plomo. Determinar el área del
pico en la línea de emisión de plomo a 283,3 nm,
corregida por la absorción de fondo. Graficar las áreas
de los picos corregidas de las Soluciones estándar en
función de sus contenidos de plomo, en µg/ml, y cal-
cular la línea de regresión que mejor se ajuste a los
puntos. Determinar la concentración, C, en µg/ml, de
plomo en cada ml de la Solución muestra interpolando
a partir de la línea de regresión.
Calcular el c9ntenido de plomo en la porción de Trigli-
céridos de Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (C x \l)/W
C = concentración de plomo, según se obtuvo
anteriormente, en la Solución muestra
(µg/ml)
V = volumen final de la Solucjón muestra (ml)
W = peso de Triglicéridos de Acidos Omega-3
tomado para preparar la Solución muestra (g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
.'iup!ementos Dieteticos / Omega-3 6097
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
empapando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1 O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico para
disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada hasta
100 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferir ;;: un matraz volumétrico de 100 ml y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona
0,2 mg d_e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar A: O, 1 372 mg/ml de ni-
trato de cadmio
Solución madre del estándar B: Solución madre del es-
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución
contiene O, 1 O µg/ml de cadmio. [NOTA-Antes de llevar
a volumen final, disolver en una porción de agua y
ácido nítrico.]
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
B con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de cadmio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min; carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min; enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20º y un flujo
de argón de 300 ml/min; atomizar a 2400º usando una
rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5 se-
gundos con el flujo de argón detenido; y limpiar a
2600º usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos.
Inyectar por separado volúmenes iguales (20 µL) de las
Soluciones estándar, de la Solución muestra y del Blanco,
seguidos de una inyección de 5 ~ll de la Solución C
para cada una de las muestras, en el tubo de grafito
de un espectrómetro de absorción atómica con un
horno de grafito adecuado equipado con una lámpara
de cátodo hueco para cadmio. Determinar el área del
pico en la línea de emisión de cadmio a 228,8 nm,
corregida por la absorción de fondo. Graficar las áreas
de los picos corregidas de las Soluciones estándar en
función de sus contenidos de cadmio, en µg/ml, y
calcular la línea de regresión que mejor se ajuste a los
puntos. Determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cadmio en cada ml de la Solución muestra interpo-
lando a partir de la línea de regresión.
C9lcular el contenido de cadmio en los Triglicéridos de
Acidos Omega-3 tomados:
Resultado= (C x \l)/W
C = concentración de cadmio, según se obtuvo
anteriormente, en la Solución muestra
(µg/ml)
V = volumen final de la So/ucjón muestra (ml)
W = peso de Triglicéridos de Acidos Omega-3
tomado para preparar la Solución muestra (g)
Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LÍMITE DE MERCURIO: Proceder según se indica en Mer-
curio (261), Método /la, excepto que se debe usar una
Solución Estándar de Mercurio con el equivalente a O, 1 ,ug/
ml de mercurio.
6098 Omega-3 /Suplementos Dietéticos
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico, combinando
los 2 digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL de Solu-
ción de Permanganato de Potasio.
S:riterios de aceptación: No más de O, l µg/g
• LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORINADOS
(PCBS, POR SUS SIGLAS EN INGLÉS)
Análisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en inglés) y
dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in-
glés) mediante la revisión B del método Nº 1613 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
ción del Medio Ambiente del Gobierno de los Estados
Unidos). Determinar el contenido de bifenilos policlora-
dos (PCB, por sus siglas en inglés) mediante la revisión
A del método Nº 1668 de la Environmental Protection
Agency (Agencia de Protección del Medio Ambiente del
Gobierno de los Estados Unidos).
Criterios de aceptación: La suma de PCDD y PCDF es
no más de 2,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
La suma de PCDD, PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos
policlorados, fármacos similares IUPAC no orto PCB-77,
PCB-81, PCB-126 y PCB-169 y fármacos similares IUPAC
mono orto PCB-105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-
156, PCB-157, PCB-167 y PCB-189) es no más de
10,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
PRUEBAS ESPECÍFICAS ,
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Acidez (401): No más
de 3 , Solución reveladora: Mezclar 0,5 mL de anisaldehído,
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Anisidina (401): No más
de 30,0 , 5 mL de ácido sulfúrico concentrado en el orden
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más
de 10,0
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
más de 2,0%
• ABSORBANCIA
Solución muestra: 0,24 mg/mL en isooctano
Criterios de aceptación: La absorbancia es no más de
0,73, determinada a 233 nm.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente controlada. Se puede envasar en frascos o
en otros envases de los cuales se haya expulsado el aire
por generación de vacío o mediante un gas inerte.
• ETIQUETADO: La etigueta indica el contenido promedio de
DHA y EPA, como acidos libres, en mg/g, y el contenido
total de ácidos omega-3, como ácidos libres, en mg/g.
También indica el nombre y la concentración de cual-
qu~er antioxidante agregado.
• ESTAl)IDARES DE REFERJNCIA USP (11)
E~ Ester Etílico del Acido Docosahexaenoico USP
Ester etílico del ácido todo cis-4,7, 1O,13, 16, 19-
docosahexaenoico.
C24H36Ü2 356,5~
E~ Ester Etílico del Acido Eicosapentaenoico USP
Ester etílico del ácido todo cis-5,8, 11, 14, l 7-eicosapen-
taenoico.
C22H34Ü2 330,51
E~ Tricosanoato de Metilo USP
Ester metílico del ácido tricosanoico.
C24H4sÜ2 368,64
Orovale, Raíz
DEFINICIÓN
La Raíz de Orovale es la raíz madura y desecada de Withania
somnífera (L.) Dunal (Fam. Solanaceae). Contiene no me-
nos de 0,3% de withanólidos, calculado con respecto a la
materia seca como la suma de agliconas de withanólidos,
USP 37
calculadas como withanólido A, y glicósidos de withanóli-
dos, calculados como withanósido IV.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: Aproximadamente 200 mg de ER
Extracto de Raíz de Orovale en Polvo USP en 1O mL de
metano!. Calentar suavemente durante 10-15 minutos,
centrifugar, y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar el
volumen remanente del sobrenadante para su uso en la
prueba de Contenido de Withanólidos.]
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de Raíz de Orovale, reducida a polvo fino, a un matraz
de 250 mL provisto con un condensador de reflujo.
Agregar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un
baño de agua durante 10-15 minutos, enfriar a tempe-
ratura ambiente, y decantar el sobrenadante. Repetir
hasta que el último extracto se torne incoloro. Combi-
nar los extractos, filtrar, concentrar al vacío hasta apro-
ximadamente 40 mL, y ajustar el volumen con metanol
hasta 50,0 ml. [NOTA-Reservar el volumen remanente
de la Solución muestra fara su uso en la prueba de Con-
tenido de Withanólidos.
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía de
0,25 mm
Volumen de aplicación: 25 µL
Fase móvil: Mezcla de acetato de etilo, tolueno y ácido
acético (45:55:3)
1O mL de ácido acético glacial, 85 mL de metanol y
especificado.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada
(ver Cromatografía (621 )). Usar una cámara saturada.
Desarrollar hasta que el frente de la fase móvil haya
recorrido aproximadamente 90% de la longitud de la
placa. Secar la placa, rociar con Solución reveladora,
calentar durante 5-1 O minutos a 100º, y observar
bajo luz visible .
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
cinco bandas principales de color azul grisáceo con va-
lores RF de aproximadamente O, 12; 0,29; 0,47; 0,67 y
0,73 que son similares en posición y color a las bandas
principales de la Solución estándar. Se observan otras
bandas de menor intensidad en la Solución muestra y la
Solución estándar.
• B. La Solución muestra de la prueba de Contenido de Wit-
hanólidos presenta picos principales a los tiempos de re-
tención correspondientes a los de withanólido A y witha-
nósido IV en la Solución estándar A y la Solución estándar
B, respectivamente. Identificar otros picos de withanóli-
dos en la Solución muestra por comparación con la Solu-
ción estándar C y el cromatograma de referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale
USP usado. La Solución muestra presenta picos adicionales
correspondientes a algunos de los siguientes withanóli-
dos: fisagulina D, 27-hidroxiwithanona, withanósido V,
withanósido VI, withaferina A, withastramonólido, witha-
nona y withanólido B.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE WITHANÓLIDOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, y mezclar.
Solución B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado
Solución estándar A: Disolver, usando calor suave, una
cantidad de ER Withanólido A USP en metano! para ob-
tener una solución con una concentración conocida de
aproximadamente O, 1 mg/ml.
Solución estándar B: Disolver, usando calor suave, una
cantidad de ER Withanósido IV USP en metano! para
USP 37 Suplementos Dietéticos / Orovale 6099

obtener una solución con una concentración conocida Análisis

de aproximadamente O, 1 mg/ml. Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
Solución estándar C: Diluir 5 mL de la Solución están- lución estándar C y Solución muestra
dar preparada en la prueba de Identificación A con me- Calcular el porcentaje de agliconas de withanólidos en
tano! hasta 1O mL y mezclar. Antes de la inyección, pa- la porción de Raíz de Orovale tomada:
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor. Resultado = 5(rT/rs)(Cs/W)
Solución muestra: Usar la Solución muestra preparada
en la prueba de Identificación A. Antes de la inyección, rT = suma de las respuestas de los picos de
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño withaferina A, withastramonolido,
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros withanólido A, withanona y withanólido B de
mL del filtrado. la Solución muestra
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. rs = respuesta del pico de withanólido A de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER Withanólido A USP en la
Tiempo Solución A Solución B
Solución estándar A (mg/mL)
tmln\ (O/o\ (O/o\
W = peso de Raíz de Orovale tomada para preparar
o 95 5 la Solución muestra (g)
18 55 45 Calcular el porcentaje de glicósidos de withanólidos en
25 20 80 la porción de Raíz de Orovale tomada:
28 20 80
30 95 5
Resultado = 5(rT/rs)(Cs/W)
40 95 5 rT = suma de las respuestas de los picos de
withanósido IV, withanósido V y withanósido
Sistema cromatográfico VI de la Solución muestra
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.) rs = respuesta del pico de withanósido IV de la
Modo: HPLC Solución estándar B
Detector: UV 227 nm Cs = concentración de ER Withanósido IV USP en la
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ex- Solución estándar B (mg/mL)
haustivo (end-capped); relleno L1 W = peso de Raíz de Orovale tomada para preparar
Temperatura: 27 ± 1º la Solución muestra (g)
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min Criterios de aceptación: La suma de los porcenta¡·es de
Volumen de inyección: 20 µL agliconas de withanólidos y glicósidos de withanó idos
Aptitud del sistema es no menos de 0,3%, calcufado con respecto a la ma-
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar C teria seca. [NOTA-Debido a las variaciones inherentes,
Usando el cromatograma de la Solución estándar C y el algunos de los withanólidos mencionados en esta
cromatograma de referencia provisto con el lote de prueba pueden presentarse en cantidades menores o
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP usado, pueden estar totalmente ausentes. Se considerará que la
identificar los tiempos de retención de los picos co- muestra cumple si la suma de los withanólidos totales
rrespondientes a los diversos glicósidos y agliconas de es no menos de 0,3%.]
withanólidos. Los tiempos de retención relativos apro-
ximados de los glicósidos y agliconas de withanólidos IMPUREZAS
se proveen en la tabla siguiente. Impurezas Inorgánicas ,
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
Tiempo (561 ): No más de 1,0%
Ana lito de Retención Relativo • METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 ppm
Withanósido IV o 70 Impurezas Orgánicas, , .
• PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Fisanulina D o 75 Orgánica Extraña (561): No más de 2,0%
27-Hidroxiwithanona o 80 • PROCEDIMIENTO 2: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método
Withanósido V o 89 General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Withanósido VI o 89 Cumple con los requisitos
Withaferina A o 92 PRUEBAS ESPECÍFICAS
Withastramonólido o 96 • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Withanólido A 1 00 Macroscópicas: Las raíces primarias son rectas, no rami-
Withanona 1 01 ficadas, cónicas o con forma de dedo, con un espesor
Withanólido B 1 14 que varía con la edad; algunas presentan una corona
que consiste en restos de la base del tallo; la superficie
Requisitos de aptitud externa es de color beige a amarillo grisáceo con arru-
El cromatograma de la Solución estándar C es similar al gas longitudinales; la factura es corta e irregular; las raí-
cromatograma de referencia provisto con el lote de ces secundarias son delgadas y fibrosas.
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP usado. Histología
Resolución: No menos de 1,0 para los picos de wit- Sección transversal de las raíces: Presenta una banda
hanólido A y withanona, Solución estándar C; no me- estrecha de súber plegado de color amarillento, con
nos de 3,0 entre el pico de withaferina A y el pico de corteza de tamaño moderado y madera ancha. Las cé-
los compuestos que coeluyen de withanósido V y wit- lulas suberosas son rectangulares, radialmente aplana-
hanósido VI, Solución estándar C das, no lignificadas y que contienen gránulos de almi-
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de dón y contenido de color marrón rojizo; el cámbium
withanólido A, Solución estándar A suberoso consiste en 2-4 hileras difusas de células; la
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en corteza secundaria está formada por 20-25 hileras de
inyecciones repetidas, pico de withanólido A, Solución células parenquimáticas de paredes delgadas, que con-
estándar A tienen gránulos de almidón, y en ocasiones presenta
cristales microesfenoidales de oxalato de caloo; el
floema consiste en tubos cribosos, células acompañan-
6100 Orovale /Suplementos Dietéticos
tes y parénquima floemático; el cámbium vascular
consiste en células parenquimáticas tangencialmente
alargadas; los vasos y traqueidas se encuentran en filas
radiales hacia la periferia de la madera; los radios me-
dulares son uniseriados o de 2 a 3 series, y que contie-
nen gránulos de almidón; vasos dispersos en grupos
incluidos en el parénquima; los vasos presentan engro-
samientos punteados y escalariformes, y las paredes
terminales presentan, por lo general, perforaciones;
también se encuentran dispersas en la madera unas
cuantas fibras con paredes gruesas lignificadas .
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Raíz de Oro-
vale reducida a polvo fino a 105º durante 3 horas: pierde
no más de 12,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%, determinado en 1,0 g de Raíz de Oro-
val~ reducida a polvo , con Solución reveladora, calentar durante 5-1 O minu-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 2 (561): No menos de 10,0%
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , Solución estándar.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sen,cia de Salmonella spp., y Escherichia coli
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Aflatoxinas (561): Cum-
ple con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP
ER Withanólido A USP
ER Withanósido IV USP
Orovale, Raíz en Polvo
DEFINICIÓN
La Raíz en Polvo de Orovale es Raíz de Orovale reducida a
polvo fino o a polvo muy fino.
IDENTIFICACIÓN
• A.PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Solución estándar: Calentar suavemente, durante
10-15 minutos, aproximadamente 200 mg de ER Ex-
tracto en Polvo de Raíz de Orovale USP en 1O mL de
metanol, centrifugar, y usar el sobrenadante. [NOTA-
Reservar el volumen remanente del sobrenadante fara
su uso en la prueba de Contenido de Withanólidos.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de Raíz en Polvo de Orovale a un matraz de 250 mL
provisto con un condensador de reflujo. Agregar 50 mL
de metano!, someter a reflujo en un baño de agua du-
rante 10-15 minutos, enfriar a temperatura ambiente, y
decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el último
extracto se torne incoloro. Combinar los extractos, fil-
trar, concentrar al vacío hasta aproximadamente 40 mL,
y ajustar el volumen con metanol hasta 50,0 ml.
[NOTA-Reservar el volumen remanente de la Solución
muestra para su uso en la prueba de Contenido de
Withanólidos.]
USP 37
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía de
0,25 mm
Volumen de aplicación: 25 µL
Fase móvil: Mezcla de acetato de etilo, tolueno y ácido
acético (45:55:3)
Solución reveladora: Mezclar 0,5 mL de anisaldehído,
1O mL de ácido acético glacial, 85 mL de metano! y
5 mL de ácido sulfúrico concentrado en el orden
mencionado.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada
(ver Cromatografía (621 )). Usar una cámara saturada.
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de
la fase móvil haya recorrido aproximadamente 90%
de la placa. Retirar la placa de la cámara, secar, rociar
tos a 100º, y observar bajo luz visible .
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
cinco bandas principales de color azul grisáceo con va-
lores RF de aproximadamente O, 12; 0,29; 0,47; 0,67 y
0,73 que son similares en posición y color a las bandas
principales de la Solución estándar. Se observan otras
bandas de menor intensidad en la Solución muestra y la
• B. La Solución muestra de la prueba de Contenido de Wi-
thanólidos presenta picos principales a los tiempos de re-
tención correspondientes a los de withanólido A y witha-
nósido IV en la Solución estándar A y la Solución estándar
B, respectivamente. Identificar otros picos de withanóli-
dos en la Solución muestra por comparación con la Solu-
ción estándar C y el cromatograma de referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale
USP. La Solución muestra presenta picos adicionales co-
rrespondientes a algunos de los siguientes withanólidos:
fisagulina D, 27-hidroxiwithanona, withanósido V, witha-
nós1do VI, withaferina A, withastramonólido, withanona y
withanólido B.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE WITHANÓLIDOS
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, y mezclar.
Solución B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado
Solución estándar A: Disolver, usando calor suave, una
cantidad de ER Withanólido A USP en metanol para ob-
tener una solución con una concentración conocida de
aproximadamente O, l mg/ml.
Solución estándar B: Disolver, usando calor suave, una
cantidad de ER Withanósido IV USP en metanol para
obtener una solución con una concentración conocida
de aproximadamente O, 1 mg/ml.
Solución estándar C: Diluir 5 mL de la Solución están-
dar preparada en la prueba de Identificación A con me-
tano! hasta 1O mL y mezclar. Antes de la inyección, pa-
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Usar la Solución muestra preparada
en la prueba de Identificación A. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (O/o) (%)
o 95 5
18 55 45
25 20 80
28 20 80
30 95 5
40 95 5
USP 37 Suplementos Dietéticos I Orovale 6101

Sistema cromatográfico r1 = respuesta del pico de withanósido IV de la

(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 227 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ex-
haustivo (end-capped); relleno L1
Temperatura: 27 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar C
Usando el cromatograma de la Solución estándar C y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP, identifi-
car los tiempos de retención de los picos correspon-
dientes a los diversos glicósidos y agliconas de witha-
nólidos. Los tiempos de retención relativos
aproximados de los glicósidos y agliconas de witha-
nólidos se proveen en la tabla siguiente.
-~
Solución estándar B
C = concentración de ER Withanósido IV USP en la
Solucion e>tándar B (mg/mL)
W = peso de Raíz en Polvo de Orovale tomada
. . para prepa.r?r la Solución muestra (g)
Cntenos de aceptac1,o.n: La sun;a. de los porcent?j_es de
agl1conas de w1thanol1dos y gl1cos1dos de withanol1dos
es no menos de 0,3% calculado con respecto a la ma-
teria seca [NOTA--Debido a las variaciones inherentes,
algunos de los withanólidos mencionados en la prueba
anterior pueden presentarse en cantidades menores o
pueden estar totalmente ausentes. Se considerará que la
muestra cumple si la suma de los withanólidos totales
es no menos de 0,3%.]
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561 ): No rnás de 1,0%

• METALES PESADOS, Método// (231): No más de 20 ppm

Tiempo
Impurezas Orgánica,s ,
Ana lito de Retención Relativo
• PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método
Withanósido IV o 70 General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Fisaaulina D o 75 Cumple con los requisitos
2 7-Hidroxiwithanona o 80
PRUEBAS ESPECÍFICAS
Withanósido V o 89 • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Withanósido Vi o 89 Macroscópicas: Polvo blanco o gris oscuro a marrón
Withaferina A o 92 claro con un olor característico y un sabor acre, amargo
Withastramonólido o 96 y mucilaginoso.
Withanólido A 1 00 Histología
Withanona 1 01 Examen microscópico: Presenta células suberosas co-
Withanólido B 1 14
lapsadas que contienen gránulos de almidón y conte-
nido de color marrón rojizo; células parenquimáticas
Requisitos de aptitud de la corteza de paredes delgadas que contienen grá-
El cromatograma de la Solución estándar Ces similar al nulos de almidón y en ocasiones presenta cristales mi-
cromatograma de referencia provisto con el lote de crosfenoidales de oxalato de calcio; vasos con engrosa-
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP. mientos punteados y escalariformes, y generalmente
Resolución: No menos de 1,0 para los picos de wi- con paredes terminales perforadas; unas pocas fibras
thanólido A y withanona, y no menos de 3,0 entre el con paredes gruesas lignificadas y puntuaciones sim-
pico de withaferina A y el pico de los compuestos ples; gránulos de almidón abundantes, en su mayoría
que coeluyen de withanósido V y withanósido VI, So- simples, en ocasiones compuestos, esféricos, ovalado
lución estandar c reniformes con hilo central.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de • PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar 1,0 g a 105º durante 3
withanólido A, Solución estándar A ho~as: pierde no más de) 2,0% de su peso.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
inyecciones repetidas, pico de withanólido A, Solución No más de 7,0%, determinado en 1,0 g de Raíz en Polvo
estándar A de Orovale
Análisis • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So- cohol, Método 2 (561): No menos de 10,0%
lución estándar C y Solución muestra • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Calcular el porcentaje de agliconas de withanólidos en tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
la porción de Raíz en Polvo de Orovale tomada: el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
Resultado = 5(rT/rs)(Cs/W) terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 Q3 ufc/g. ,
rT = suma de las respuestas de los picos de • PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
withaferina A, withastramonolido, SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
withanólido A, withanona y withanólido B de con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
la Solución muestra sen,cia de Salmonella spp., y Escherichia coli
rs = respuesta del pico de withanólido A de la • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Aflatoxinas (561): Cum-
Solución estándar A ple con los requisitos
Cs = concentración de ER Withanólido A USP en la
Solución estándar A (mg/mL) REQUISITOS ADICIONALES
W = peso de Raíz en Polvo de Orovale tomada • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
para preparar la Solución muestra (g) cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
Calcular el porcentaje de glicósidos de withanólidos en temperatura ambiente.
la porción de Raíz en Polvo de Orovale tomada: • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
Resultado = 5(rT/r1)(Cs/W) planta contenida en el artículo.

rT = suma de las respuestas de los picos de

withanósido IV, withanósido V y withanósido
VI en la Solución muestra
6102 Orovale /Suplementos Dietéticos USP 37

• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11) COMPOSICIÓN

ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP • CONTENIDO DE WITHANÓLIDOS
ER Withanólido A USP Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
ER Withanósido IV USP sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de ácido fosfó-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, y mezclar.
Solución B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado
Solución estándar A: Disolver, usando calor suave, una
cantidad de ER Withanólido A USP en metano! para ob-
Extracto en Polvo de Raíz de Orovale tener una solución con una concentración conocida de
aproximadamente O, 1 mg/mL.
DEFINICIÓN Solución estándar B: Disolver, usando calor suave, una
El Extracto en Polvo de Raíz de Orovale se prepara a partir cantidad ER Withanósido IV USP en metanol para obte-
de Raíz de Orovale usando metano!, alcohol, agua o mez- ner una solución con una concentración conocida de
clas de estos disolventes. Contiene no menos de 2,5% de aproximadamente O, 1 mg/mL.
withanólidos, calculado con respecto al extracto seco Solución estándar C: Diluir 5 mL de la Solución están-
como la suma de agliconas de withanólidos y glicósidos dar preparada en la prueba de Identificación A con me-
de withanólidos. tano! hasta 1 O mL y mezclar. Antes de la inyección, pa-
sar a través de un filtro de membrana con un tamaño
IDENTIFICACIÓN de poro de 0,45 µm o menor.
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA Solución muestra: Transferir aproximadamente 1 00 mg
DELGADA <201) de Extracto en Polvo de Raíz de Orovale, pesado, a un
Solución estándar: Calentar suavemente durante matraz volumétrico de 1 O mL, agregar aproximada-
1 0-15 minutos aproximadamente 200 mg de ER Ex- mente 7 mL de metano!, calentar suavemente en un
tracto en Polvo de Raíz de Orovale USP en 1O mL de baño de vapor durante 15-20 minutos, diluir con meta-
metano!, centrifugar, y usar el sobrenadante. [NOTA- no! a volumen, y mezclar. Antes de la inyección, pasar a
Reservar el volumen remanente del sobrenadan te fara través de un filtro de membrana con un tamaño de
su uso en la prueba de Contenido de Withanólidos. poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
Solución muestra: Calentar suavemente durante 10-15 mL del filtrado.
minutos aproximadamente 200 mg de Extracto en Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Polvo de Raíz de Orovale en 1 O mL de metano!, centri-
fugar, y usar el sobrenadante. Tiempo Solución A Solución B
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía de (min) (%) (%)
0,25 mm o 95 5
Volumen de aplicación: 25 µL
18 55 45
Fase móvil: Mezcla de acetato de etilo, tolueno y ácido
acético (45:55:3) 25 20 80
Solución reveladora: Mezclar 0,5 mL de anisaldehído, 28 20 80
1O mL de ácido acético glacial, 85 mL de metano! y 30 95 5
5 mL de ácido sulfúrico concentrado en el orden 40 95 5
mencionado.
Análisis Sistema cromatográfico
Muestras: Solución estándar y Solución muestra (Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada Modo: HPLC
(ver Cromatografía <621 )). Usar una cámara saturada. Detector: UV 227 nm
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ex-
la fase móvil haya recorrido aproximadamente 90% haustivo (end-capped); relleno L1
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la cá- Temperatura: 27 ± 1º
mara, secar, rociar con Solución reveladora, calentar Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
durante 5-1 O minutos a 100º, y observar bajo luz Volumen de inyección: 20 µL
visible. Aptitud del sistema
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta Muestras: Solución estándar A y Solución estándar C
cinco bandas principales de color azul grisáceo con va- Usando el cromatograma de la Solución estándar C y el
lores RF de aproximadamente 0, 12; 0,29; 0,47; 0,67 y Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
0,73 que son similares en posición y color a las bandas ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP usado,
principales de la Solución estándar. Se observan otras identificar los tiempos de retención de los picos co-
bandas de menor intensidad en la Solución muestra y la rrespondientes a los diversos glicósidos y agliconas de
Solución estándar. withanólidos. Los tiempos de retención relativos apro-
• B. La Solución muestra en la prueba de Contenido de Wi- ximados de los glicósidos y agliconas de withanólidos
thanólidos presenta picos principales a los tiempos de re- se proveen en la tabla siguiente.
tención correspondientes a los de withanólido A y witha-
nósido IV en la Solución estándar A y la Solución estándar Tiempo
B, respectivamente. Identificar otros picos de withanóli- Ana lito de Retención Relativo
dos en la Solución muestra por comparación con la Solu-
ción estándar C y el cromatograma de referencia provisto Withanósido IV o 70
con el lote de ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale Fisaaulina D o 75
USP usado. La Solución muestra presenta picos adicionales 27-hidroxiwithanona o 80
correspondientes a algunos de los siguientes withanóli- Withanósido V o 89
dos: fisagulina D, 27-hidroxiwithanona, withanósido V, Withanósido VI o 89
withanósido VI, withaferina A, withastramonólido, witha- Withaferina A o 92
nona y withanólido B.
Withastramonólido o 96
Withanólido A 1 00
Withanona 1 01
Withanólido B 1 14
USP 37
Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solución estándar Ces similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP usado.
Resolución: No menos de 1,0 para los picos de wi-
thanólido A y withanona, y no menos de 3,0 entre el
pico de withaferina A y el pico de los compuestos
que coeluyen de withanósido V y withanósido VI, So-
lución estandar c • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
withanólido A, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% en
inyecciones repetidas, pico de withanólido A, Solución
estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Calcular el porcentaje de agliconas de withanólidos en
la porción de Extracto en Polvo de Raíz de Orovale
tomada:
Resultado = (rT/rs)(Cs/W)
rT = suma de las respuestas de los picos de
withaferina A, withastramonolido,
withanólido A, withanona y withanólido B de
la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de withanólido A de la
Solución estándar A
Cs concentración de ER Withanólido A USP en la
= cida comercialmente como ortiga menor. Contiene no
Solución estándar A (mg/mL)
W = peso de Extracto en Polvo de Raíz de Orovale
tomado para preparar la Solución muestra (g)
Calcular el porcentaje de glicósidos de withanólidos en
la porción de Extracto en Polvo de Raíz de Orovale
tomada:
Resultado = (rT/rs)(Cs/W)
rT = suma de las respuestas de los picos de
withanósido IV, withanósido V y withanósido
VI de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de withanósido IV de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER Withanósido IV USP en la
Solución estándar B (mg/mL)
W peso de Extracto en Polvo de Raíz de Orovale
= acetato de etilo y metano!.
tomado para preparar la Solución muestrCf (g)
Criterios de aceptación: La suma de los porcenta¡es de
las agliconas de withanólidos y glicósidos de withanóli-
dos es no menos de 2,5%, calculado con respecto al
extracto seco. [NOTA-Debido a las variaciones inheren-
tes, algunos de los withanólidos me_ncionados en esta
prueba pueden presentarse en cantidades menores o
pueden estar totalmente ausentes. Se considerará que la
muestra cumple si la suma de los withanólidos totales
es no menos de 2,5%.]
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 20 ppm
Impurezas Orgánicas , Rociar la placa con Solución reveladora, calentar a una
• PROCEDIMIENTO: ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método
General para Análisis de Residuos de Plaguicidas (561):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g a 105º durante 3
horas: pierde no más de 6,0% de su peso.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 Q3 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cumple
Suplementos Dietéticos /Ortiga 61 03
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherich1a col1
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Aflatoxinas (561): Cum-
ple con los req,uisitos
• EXTRACTOS BOTANICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente c~ntrolada. . ,.
• ETIQUETADO: La etiqueta 1nd1ca el nombre c1entif1co en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se preparó el artículo. C_ur:iple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botamcos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Raíz de Orovale USP
ER Withanólido A USP
ER Withanósido IV USP
Ortiga
DEFINICIÓN
La Ortiga está constituida por las raíc~s y rizomas secos de
Urtica dioica L. ssp dioica (Fam. Urt1caceae) y puede con-
tener como un componente menor, Urtica uren_s L., cono-
menos de 0,8% de aminoácidos totales, no menos de
0,05% de f:l-sitosterol (C 29HsoÜ) y no menos de 3 µg/g de
escopoletina (C10Hs04), calculado con respecto a la ma-
teria seca.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Escopoletina
USP y 0,5 mg/mL de ER f:l-Sitosterol USP en m~tanol
Solución muestra: Extraer 1 g de polvo sometiendo a
reflujo con 1 O mL de una solución que contenga to-
lueno, acetato de etilo y metano! (7:2:1) durante 15
minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el filtrado ha~ta se-
quedad a presión reducida a menos de 40º y disolver el
residuo en 2 mL de la mezcla que contenga tolueno,
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de aplicación: 20 µL para la Solución mues-
tra; 1 O µL para la Solución estándar
Fase móvil: Dietil éter y metano! (9:1)
Solución reveladora: Acido fosfórico al 85%, vainillina
al 10% en etanol al 96% y agua (4,5: 1: 4,5)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar la placa y observar bajo luz UV a 365 nm .
temperatura entre 100º y 105º durante 1 O minutos y
observar la placa bajo luz diurna.
Criterios de aceptación: El croma_tog~ania de la Solu-
ción muestra presenta una zona ro¡o v1olacea correspon-
diente a f:l-sitosterol a} misnio valor Rr qu~ 1? zona d~ {3-
sitosterol en la SoluC1on estandar, zonas debilmente v1s1-
bles por encima y por debajo de f:l~sitosterol y u_na zona
rojo violácea correspondiente a f:l-s1tosterol-glucos1do .
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE f:l-SITOSTEROL
Reactivo de derivatización: Una solución que con-
tenga volúmenes iguales (1: 1: 1) de BSTF~ [N, O-bis(tri-
metilsilil)trifluoroacetam1da], p1ndina anhidra y una
61 04 Ortiga / Suplementos Dietéticos USP 37

mezcla de BSA [N,0-(trimetilsilil)acetamida], TMSI (N- Solución estándar: 0,02 pg/ml de ER Escopoletina USP
trimetilsililimidazol) y TMCS (trimetilclorosilano) (3: 3:2) en metanol
Solución de estándar interno: 1 O mg/ml de colesterol Solución madre de la muestra: Extraer 160 mg de Or-
en cloroformo tiga reducida a polvo fino en cada ml de metanol. Co-
Solución estándar: Disolver 50,0 mg de ER f3-Sitosterol locar en un baño ultrasónico durante 25 minutos y
USP en 2 ml de cloroformo, agregar 1,0 ml de Solución centrifugar.
de estándar interno y diluir con cloroformo hasta 5 ml. Solución muestra: Solución madre de la muestra diluida
Evaporar 0,5 ml a presión reducida y agregar 1 ml de con metano! 1 en 20
Reactivo de derivatización. Sistema cromato9ráfico
Solución muestra: Transferir 50,0 g de Ortiga reducida (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
a polvo fino a un aparato Soxhlet, agregar cloroformo y Modo: HPLC
extraer durante 6 horas. El volumen de cloroformo Detector: Fluorescencia; ajustado a una longitud de
usado es por lo menos el doble del volumen del dedal onda de excitación de 366 nm y una longitud de
con un matraz de tamaño adecuado. Evaporar el disol- onda de emisión de 420 nm
vente a presión reducida, agregar 1,0 ml de Solución de Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
estándar interno y diluir con cloroformo hasta 1 O ml. Velocidad de flujo: 1 ml/min
Transferir 0,5 ml de esta solución a un matraz de fondo Volumen de inyección: 1 O µL
redondo de 1 O ml, evaporar el disolvente a presión re- Aptitud del sistema
ducida y agregar 0,5 ml de Reactivo de derivatización. Muestra: Solución estándar
Sistema cromato9ráfico Requisitos de aptitud
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) Factor de capacidad (k'): No menos de 5, determi-
Modo: Cromatografía de Gases nado a partir del pico de escopoletina
Detector: Ionización a la llama Factor de asimetna: No más de 2,0 para el pico de
Columna: Capilar de sílice fundida; de 0,20 mm x 25 escopoletina
m recubierta con una película de fase G2 de 0,35 µm Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Temperatura Análisis
Inyector: 325º Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Detector: 325º Medir las respuestas de los picos de escopoletina.
Columna: 300º, durante 60 minutos Calcular el contenido de escopoletina (C,0Ha04), en
Gas transportador: Helio µg/g, en la porción de Ortiga tomada:
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 µL Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x O
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar ru = área del pico de escopoletina de la Solución
Requisitos de aptitud muestra
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico rs = área del pico de escopoletina de la Solución
de esterol estándar
Desviación estándar relativa: No más de 5,0% de- C5 = concentración de ER Escopoletina USP en la
terminada a partir de cada pico de esterol Solución estándar (µg/ml)
Análisis V = volumen de Solución madre de la muestra (ml)
Muestras: Solución estándar y Solución muestra W = peso de Ortiga tomado para preparar la
Calcular el porcentaje de /3-sitosterol en la porción de Solución muestra (g)
Ortiga tomada: O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de Solución madre de la
Resultado = (Ru! Rs) x (Ws/Wu) x 100 muestra
Criterios de aceptación: No menos de 3 µg/g con res-
Ru = cociente de respuesta entre los picos de /3- pecto a la materia seca
sitosterol y estándar interno de la Solución
muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de /3- Cambio en la redacción:
sitosterol y estándar interno de la Solución
estándar • CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS TOTALES
Ws = peso de ER /3-Sitosterol USP usado para Solución amortiguadora: Mezclar 5,40 g de acetato de
preparar la Solución estándar (mg) sodio anhidro, 0,3 ml de ácido acético glacial y agua
Wu = peso de Ortiga tomado para preparar la hasta un volumen final de 100 ml. Ajustar a un pH de
Solución muestra (mg) 5,5.
Criterios de aceptación: No menos de 0,05% con res- Solución reactivo: •solución que contenga 1,00 g de
pecto a la materia seca ninhidrina, 150 mg de hidrindantinae ERR (01-ago-2013) y
• CONTENIDO DE ESCOPOLETINA 37,5 ml de propilenglicol. Ajustar con Solución amorti-
Solución A: Agua guadora hasta 50,0 ml. [NOTA-Preparar la Solución re-
Solución B: Metano! activo en el día de su uso.] ,
Fase móvil: Ver la Tabla 7. Solución estál)dar: 20 µg/ml de ER Acido Glutámico
USP y de ER Acido Aspártico USP en agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino Ortiga y trans-
Tabla 1 ferir 1,0 g del artículo a 80 ml de agua. Colocar en un
Tiempo Solución A Solución B baño ultrasónico durante 25 minutos y centrifugar.
(min) (%) (%) Transferir el sobrenadante a un matraz volumétrico de
o 75 25 100 ml, diluir con agua a volumen y filtrar.
2 60 40
Blanco: Agua
Condiciones instrumentales
8 60 40 (Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
10 o 100
15 o 100
20 75 25
30 75 25
USP 37
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 570 nm
Celda: 1 cm
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Blanco
Transferir 5,0 mL de Solución estándar, Solución muestra
y Blanco a sendos matraces volumétricos de 50 mL.
Agregar 5,0 mL de Solución reactivo a cada matraz. Ca-
lentar en un baño de agua hirviendo durante 30 minu-
tos, enfriar y ajustar con una mezcla de etanol y agua
(1 :1) a volumen.
Calcular el porcentaje de aminoácidos totales en la por-
ción de Ortiga tomada:
Resultado= (Au/As) x Cs x (V!VV) x Fx 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar ,
C5 = suma de las concentraciones de ER Acido
Glutámico USP y ER Ácido Aspártico USP en
la Solución estándar (µg/mL)
V = volumen de la Solución muestra, 1 00 mL
W = cantidad de Ortiga tomada para preparar la
Solución muestra (mg)
F = factor de conversión de unidades,
0,001 mg/µ_g
Criterios de aceptacion: No menos de 0,8% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
103 ufc/g. , ER /3-Sitosterol USP
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El rizoma tiene una forma torcida irre-
gular, con un grosor de aproximadamente 3-1 O mm y
la parte externa es de color marrón grisáceo claro; pre-
senta un surco longitudinal con protuberancias tortuo-
sas de las que nacen raíces finas. En un corte transversal
del rizoma se observa que es fibroso y de color blanco
amarillento claro, y por lo general tiene una cavidad
medular pequeña. Las raíces son a menudo muy largas,
por lo general de un grosor de 0,5-2 mm, su parte ex-
terna es de color marrón amarillento claro y tienen al-
gunos surcos longitudinales profundos. En corte trans-
versal, la raíz presenta un color blanco pálido casi puro.
Microscópicas: La sección transversal del rizoma y la
raíz presenta las siguientes características. El rizoma
tiene un súber estrecho formado por células marrones
de pared delgada, unas pocas hileras de parénquima
cortical alargadas de manera tangencial y una región
pericíclica con numerosas fibras que se presentan de
forma individual o más frecuentemente, en grupos pe-
queños. Las fibras son muy alargadas, con paredes muy
gruesas y lignificadas. Algunas de las células del perici-
clo y de la parte externa del floema secundario contie-
nen grandes cristales compuestos globulares de oxalato
de calcio. La región cambial vascular es visible y con-
tinua, con grupos radiales estrechos de tejido vascular
separado por anchos radios medulares. El floema secun-
dario es principalmente parenquimatoso con grupos de
tejido criboso de pared delgada. El xilema es denso y
totalmente lignificado, contiene vasos dispersos aislados
o en grupos pequeños y está asociado con células de
parénquima xilemático moderadamente engrosadas y
Suplementos Dietéticos / Ortiga 61 05
numerosas fibras del xilema de paredes gruesas que
presentan puntuaciones en forma de hendidura. Los va-
sos individuales presentan puntuaciones areoladas bas-
tante grandes, muy cercanas entre sí, mientras que el
parénquima adyacente tiene puntuaciones simples o
areoladas. Los radios medulares marcan áreas alternadas
de células lignificadas y no lignificadas, que se presen-
tan como bandas tangenciales entre los haces vascula-
res, cada una formada por cinco o seis capas de células.
Las células lignificadas tienen paredes moderadamente
engrosadas con puntuaciones simples. La médula está
formada por un parénquima redondeado no lignificado
que se colapsa en su parte central para formar una cavi-
dad. Las ra1ces maduras muestran un súber delgado,
una felodermis estrecha y floema y xilema secundarios
con áreas alternadas de parénquima lignificado y no lig-
nificado en los radios medulares anchos, similares a los
qye se encuentran en ej rizoma.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(56)): No más de 2,0%,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No más de 10%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 > Secar 1,0 g de Ortiga, redu-
cido a polvo fino, a 105º durante 2 horas: pierde no más
de 12,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada .
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la glanta contenidas en el artículo.
• ESTAr,IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Aspártico USP
ER Acido Glutámico USP
ER Escopoletina USP
Ortiga en Polvo
DEFINICIÓN
La Ortiga en Polvo es Ortiga reducida a polvo fino o muy
fino. Contiene no menos de 0,8% de aminoácidos totales,
no menos de 0,05% de f3-sitosterol (C29Hs 00) y no menos
de 3 µg/g de escopoletina (C10Hs04), calculado con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Escopoletina
USP y 0,5 mg/mL de ER f3-Sitosterol USP en metanol
Solución muestra: Extraer 1 g de Ortiga en Polvo me-
diante reflujo con 1 O mL de una solución que contenga
tolueno, acetato de etilo y metanol (7:2:1) durante 15
minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el filtrado hasta se-
quedad a presión reducida a menos de 40º y disolver el
residuo en 2 mL de la mezcla que contiene tolueno,
acetato de etilo y metanol.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de aplicación: 20 µL para la Solución mues-
tra; 1 O µL para la Solución estándar
Fase móvil: Dietil éter y metanol (9:1)
Solución reveladora: Acido fosfórico al 85%, vainillina
al 10% en etanol al 96% y agua (4,5: 1: 4,5)
61 06 Ortiga / Suplementos Dietéticos USP 37

Análisis Criterios de aceptación: No menos de 0,05% con res-

Muestras: Solución estándar y Solución muestra pecto a la materia seca
Desarrollar la placa y observar bajo luz UV a 365 nm. • CONTENIDO DE ESCOPOLETINA
Rociar la placa con Solución reveladora, calentar a una Solución A: Agua
temperatura entre 100º y 105º durante 1O minutos y Solución B: Metanol
observar bajo luz diurna. Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona rojo violácea correspon- Tabla 1
diente a ,B-sitosterol al mismo valor RF que el ,B-sitosterol
de la Solución estándar, zonas débilmente visibles por Tiempo Solución A Solución B
encima y por debajo de ,B-sitosterol y una zona rojo (min) (%) (O/o)
violácea correspondiente a ,B-sitosterol-glucósido. o 75 25
2 60 40
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ,8-SITOSTEROL
8 60 40
Reactivo de derivatización: Una solución que con- 10 o 100
tenga volúmenes iguales (1 :1 :1) de BSTFA [N,0-bis(tri- 15 o 100
metilsilil)trifluoroacetamida], piridina anhidra y una 20 75 25
mezcla de BSA [N,0-(trimetilsilil)acetamida], TMSI (N- 30 75 25
trimetilsililimidazol) y TMCS (trimetilclorosilano) (3:3:2)
Solución de estándar interno: 1O mg/ml de colesterol Solución estándar: 0,02 µg/ml de ER Escopoletina USP
en cloroformo en metanol
Solución estándar: Disolver 50,0 mg de ER ,B-Sitosterol Solución madre de la muestra: 160 mg de Ortiga en
USP en 2 ml de cloroformo, agregar 1,0 ml de Solución Polvo en cada ml de metanol. Colocar en un baño ul-
de estándar interno y diluir hasta 5 ml con cloroformo. trasónico durante 25 minutos y centrifugar.
Evaporar 0,5 ml a presión reducida y agregar 1 ml de Solución muestra: Solución madre de Ja muestra diluida
Reactivo de derivatización. con metanol 1 en 20
Solución muestra: Transferir 50,0 g de Ortiga en Polvo Sistema cromato9ráfico
a un aparato Soxhlet, agregar cloroformo y extraer du- (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
rante 6 horas. El volumen de cloroformo usado es por Modo: HPLC
lo menos el doble del volumen del dedal con un matraz Detector: Fluorescencia; ajustado a una longitud de
de tamaño adecuado. Evaporar el disolvente a presión onda de excitación de 366 nm y una longitud de
reducida, agregar 1,0 ml de Solución de estándar interno onda de emisión de 420 nm
y diluir con cloroformo hasta 1O ml. Transferir 0,5 ml Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
de esta solución a un matraz de fondo redondo de Velocidad de flujo: 1 ml/min
1O ml, evaporar el disolvente a presión reducida y agre- Volumen de inyección: 1O µL
gar 0,5 ml de Reactivo de derivatización. Aptitud del sistema
Sistema cromato9ráfico Muestra: Solución estándar
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) Requisitos de aptitud
Modo: Cromatografía de Gases Factor de capacidad (k'): No menos de 5, determi-
Detector: Ionización a la llama nado a partir del pico de escopoletina
Columna: Capilar de sílice fundida; de 0,20 mm x 25 Factor de asimetna: No más de 2,0 para el pico de
m recubierta con una película de fase G2 de 0,35 µm escopoletina
Temperatura Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Inyector: 325º Análisis
Detector: 325º Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Columna: 300º, durante 60 minutos Medir las respuestas de los picos de escopoletina.
Gas transportador: Helio Calcular el contenido de escopoletina (C10Ha04), en
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min µg/g, en la porción de Ortiga en Polvo tomada:
Volumen de inyección: 1 µL
Aptitud del sistema Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x D
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud ru = área del pico de escopoletina de la Solución
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico muestra
de esterol rs = área del pico de escopoletina de la Solución
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%, de- estándar
terminada a partir de cada pico de esterol Cs = concentración de ER Escopoletina USP en la
Análisis Solución estándar (µg/ml)
Muestras: Solución estándar y Solución muestra V =volumen de Solución madre de Ja muestra (ml)
Calcular el porcentaje de .B-sitosterol en la porción de W = peso de Ortiga en Polvo tomado para
Ortiga en Polvo tomada: preparar la Solución madre de Ja muestra (g)
D = factor de dilución para preparar la Solución
Resultado = (Ru/Rs) x (Ws/Wu) x 100 muestra, a partir de Solución madre de Ja
muestra
Ru = cociente de respuesta entre los picos de .B- Criterios de aceptación: No menos de 3 µg/g con res-
sitosterol y estándar interno de la Solución pecto a la materia seca
muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de .B-
sitosterol y estándar interno de la Solución Cambio en la redacción:
estándar
Ws = peso de ER ,B-Sitosterol USP usado para • CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS TOTALES
preparar la Solución estándar (mg) Solución amortiguadora: Mezclar 5,40 g de acetato de
Wu = peso de Ortiga en Polvo tomado para sodio anhidro, 0,3 ml de ácido acético glacial y agua
preparar la Solución muestra (mg) hasta un volumen final de 100 ml. Ajustar a un pH de
5,5.
 USP 37
Solución reactivo: •Solución que contenga 1,00 g de
ninhidrina, 150 mg de hidrindantinae ERR (Ol-ago-2013¡ y
37,5 mL de propilenglicol. Ajustar con Solución amorti-
guadora hasta 50,0 mL. [NOTA-Preparar la Solución re-
activo en el día de su uso.] , • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Solución estál)dar: 20 µg/mL de ER Acido Glutámico
USP y de ER Acido Aspártico USP, en agua
Solución muestra: Transferir 1,0 g de Ortiga en Polvo a
80 mL de agua. Colocar en un baño ultrasónico durante
25 minutos y centrifugar. Transferir el sobrenadante a
un matraz volumétrico de 100 mL, diluir con agua a
volumen y filtrar.
Blanco: Agua
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 570 nm
Celda: 1 cm
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Blanco
Transferir 5,0 mL de Solución estándar, Solución muestra
y Blanco a sendos matraces volumétricos de 50 ml.
Agregar 5,0 mL de Solución reactivo a cada matraz. Ca-
lentar en un baño de agua hirviendo durante 30 minu-
tos, enfriar y ajustar con una mezcla de etanol y agua
(1 :1) a volumen.
Calcular el porcentaje de aminoácidos totales en la por-
ción de Ortiga en Polvo tomada:
Resultado = (Aul As) x Cs x (V/W) x F x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
Cs = suma de las concentraciones de ER Ácido
Glutámico USP y ER Ácido Aspártico USP en
la Solución estándar (µg/mL)
V = volumen de Solución muestra, 100 mL
W = cantidad de Ortiga en Polvo tomada para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de conversión de unidades,
0,001 mg/µ_g
Criterios de aceptacion: No menos de 0,8% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , Proceder según se indica en el capítulo. Observar las
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El polvo es de color amarillento a gris
amarronado.
Microscópicas: Al microscopio, usando solución de hi-
drato de cloral, presenta varios fragmentos de vasos
punteados y en red de diámetro muy variado, general-
mente de 50-150 µm. A veces presenta algunas fibras
de líber punteadas. También presenta fibras leñosas con
puntuaciones claras, de 200-800 µm de largo y células
parenquimáticas de paredes delgadas, que algunas ve-
ces contienen cristales de oxalato de calcio compuestos
y ocasionalmente tienen cristales unitarios y fragmentos
de súber que consisten en células aplanadas, de paredes
delgadas.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
Suplementos Dietéticos/ Ortiga 6107
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 10%
REQUISITOS ADICIONALES
permeables. Proteger de la luz y del calor excesivo.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la [llanta contenidas en el artículo.
• ESTAl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Aspártico USP
ER Acido Glutámico USP
ER Escopoletina USP
ER /3-Sitosterol USP
Extracto en Polvo de Ortiga
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Ortiga se prepara a partir de la
Ortiga triturada con alcohol al 60% u otros disolventes
adecuados. Contiene no menos de 5,0% de aminoácidos
totales, no menos de O, 1 % de /3-sitosterol (C29HsoO) y no
menos de 30 µg/g de escopoletina (C10H 8 04). La relación
entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
Polvo es de 10:1.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,05 mg/mL de ER Escopoletina
USP y 0,5 mg/mL de ER /3-Sitosterol USP en metanol
Solución muestra: Disolver 0,6 g de Extracto en Polvo,
en una mezcla de tolueno, acetato de etilo y metanol
(7:2:1). Filtrar y evaporar a presión reducida a una tem-
peratura inferior a 40º. Disolver el residuo en 2,0 mL de
la mezcla que contenga tolueno, acetato de etilo y
metano l.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de aplicación: 20 µL para la Solución mues-
tra; 1O µL para la Solución estándar
Fase móvil: Dietil éter y metanol (9:1)
Solución reveladora: Acido fosfórico al 85% y vaini-
llina al 10% en etanol al 96% y agua (4,5: 1: 4,5)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
placas bajo luz UV a 365 nm. Rociar la placa con
1 O mL de Solución reveladora, calentar a una tempera-
tura entre 100º y 105º durante 1 O minutos y observar
la placa bajo luz diurna.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona rojo violácea correspon-
diente a /3-sitosterol al mismo valor RF que la zona de /3-
sitosterol en la Solución estándar, zonas débilmente visi-
bles por encima y por debajo de .8-sitosterol y una zona
rojo violácea corresponsJiente a /3-sitosterol-_glucósido.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION DE CROMATOGRAFIA DE GASES
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de /3-Sitosterol.
Criterios de aceptación: El tiempo de retención de .8-
sitosterol de la Solución muestra corresponde al de la
Solución estándar.
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Escopoletína .
Criterios de aceptación: El tiempo de retención de es-
copoletina de la Solución muestra corresponde al de la
Solución estándar.
61 08 Ortiga / Suplementos Dietéticos USP 37

COMPOSICIÓN Tabla 1 (Conlinuación)

• CONTENIDO DE {.J-SITOSTEROL
Tiempo Solución A Solución B
Reactivo de derivatización: Una solución que con- (min) (O/o) (O/o)
tenga volúmenes iguales (1 :1 :1) de BSTFA [N, 0-bis(tri-
metilsilil)trifluoroacetamida], piridina anhidra y una 8 60 40
mezcla de BSA [N,0-(trimetilsilil)acetamida], TMSI (N- 10 o 100
trimetilsililimidazol) y TMCS (trimetilclorosilano) (3:3:2) 15 o 100
Solución de estándar interno: 1O mg/ml de colesterol 20 75 25
en cloroformo 30 75 25
Solución estándar: Disolver 50,0 mg de ER ,B-Sitosterol
USP en 2 ml de cloroformo, agregar 1,0 ml de Solución Solución estándar: 0,02 µg/ml de ER Escopoletina USP
de estándar interno y diluir con cloroformo hasta 5 ml. en metano!
Evaporar 0,5 ml a presión reducida y agregar 1 ml de Solución madre de la muestra: 8 mg/ml de Extracto
Reactivo de derivatización. en Polvo en metano!. Colocar en un baño ultrasónico
Solución muestra: Transferir 20,0 g de Extracto en durante 25 minutos y centrifugar.
Polvo a un aparato Soxhlet, tratar con cloroformo y ex- Solución muestra: Solución madre de la muestra diluida
traer durante 6 horas. El volumen de cloroformo usado con metano! 1 en 20
es por lo menos el doble del volumen del dedal con un Sistema cromato9ráfico
matraz de tamaño adecuado. Evaporar el disolvente a (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
presión reducida, agregar 1,0 ml de Solución de están- Modo: HPLC
dar interno y diluir con cloroformo hasta 1 O ml. Transfe- Detector: Fluorescencia; ajustado a una longitud de
rir 0,5 ml de esta solución a un matraz de fondo re- onda de excitación de 366 nm y una longitud de
dondo de 1O ml, evaporar el disolvente a presión onda de emisión de 420 nm
reducida y agregar 0,5 ml de Reactivo de derivatización. Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Sistema cromato9ráfico Velocidad de flujo: 1 ml/min
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) Volumen de inyección: 1O µL
Modo: Cromatografía de Gases Aptitud del sistema
Detector: Ionización a la llama Muestra: Solución estándar
Columna: Capilar de sílice fundida; de 0,20 mm x 25 Requisitos de aptitud
m recubierta con una película de fase G2 de 0,35 µm Factor de capacidad (k'): No menos de 5, determi-
Temperatura nado a partir del pico de escopoletina
Inyector: 325º Factor de asimetria: No más de 2,0 para el pico de
Detector: 325º escopoletina
Columna: 300º, durante 60 minutos Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Gas transportador: Helio Análisis
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Volumen de inyección: 1 µL Medir las respuestas de los picos de escopoletina.
Aptitud del sistema Calcular el contenido de escopoletina (C10Hs04), en
Muestra: Solución estándar µg/g, en la porción de Extracto en Polvo tomada:
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu)
de esterol
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%, de- ru = área del pico de escopoletina de la Solución
terminada a partir de cada pico de esterol muestra
Análisis r5 = área del pico de escopoletina de la Solución
Muestras: Solución estándar y Solución muestra estándar
Calcular el porcentaje de ,B-sitosterol en la porción de C5 = concentración de ER Escopoletina USP en la
Extracto en Polvo tomada: Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Resultado = (Ru!Rs) x (Ws/Wu) x 100 Solución muestra (g/ml)
Criterios de aceptación: No menos de 30 µg/g
Ru = cociente de respuesta entre los picos de ,B-
sitosterol y estándar interno de la Solución
muestra Cambio en la redacdón:
Rs = cociente de respuesta entre los picos de ,B-
sitosterol y estándar interno de la Solución • CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS TOTALES
estándar Solución amortiguadora: Mezclar 5,40 g de acetato de
Ws = peso de ER ,B-Sitosterol USP usado para sodio anhidro, 0,3 ml de ácido acético glacial y agua
preparar la Solución estándar (mg) hasta un volumen final de 100 ml. Ajustar a un pH de
Wu = peso de Extracto en Polvo en la Solución 5,5.
muestra (m9) Solución reactivo: •solución que contenga 1,00 g de
Criterios de aceptacion: No menos de O, 1o/o ninhidrina, 150 mg de hidrindantinae ERR (Ol-ago-2013J y
• CONTENIDO DE ESCOPOLETINA 37,5 ml de propilenglicol. Ajustar con Solución amorti-
Solución A: Agua guadora hasta 50,0 ml. [NOTA-Preparar la Solución re-
Solución B: Metanol activo en el día de su uso.] ,
Fase móvil: Ver la Tabla 7. Solución estál)dar: 20 µg/ml de ER Acido Glutámico
USP y de ER Acido Aspártico USP en agua
Solucrón muestra: Disolver 50 mg de Extracto en Polvo
Tabla 1 en 80 ml de agua, agitar durante 1O minutos, diluir
Tiempo Solución A Solución B con agua hasta 100 ml y filtrar.
Cm in) (%) (%) Blanco: Agua
o 75 25 Condiciones instrumentales
2 60 40 (Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
USP 37
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 570 nm
Celda: 1 cm
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Blanco
Transferir 5,0 mL de Solución estándar, Solución muestra
y Blanco a sendos matraces volumétricos de 50 ml.
Agregar 5,0 mL de Solución reactivo a cada matraz. Ca-
lentar en un baño de agua hirviendo durante 30 minu-
tos, enfriar y ajustar con una mezcla de etanol y agua
(1: 1) a volumen.
Calcular el porcentaje de aminoácidos totales en la por-
ción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (Au/As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
Cs = suma de las concentras:iones de ER Ácido
Glutámico USP y ER Acido Aspártico USP en
la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: No menos de 5,0%
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos .
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método 11 (611): No más de
1,0%, si estuviera presente.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos ~erobios no excede de 103 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple co~ los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de 8,0% de
su peso. , Muestras: Solución Estándar 7, Solución Estándar 2 So-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 20,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la denominación oficial
del artí~ulo! ,el n<?n:bre científico en latín y, después de la
denominac1on of1c1al, la parte de la planta a partir de la
que se preparó el artículo. Etiquetar indicando el conte-
nido de aminoácidos totales, /j-sitosterol, escopoletina el
d.i~olvente de extracción usado para prepararlo y la reÍa-
e1on entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto
en Polvo.
• ESTÁ~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Aspártico USP
ER Acido Glutámico USP
ER Escopoletina USP
ER ,B-Sitosterol USP
Pantenol-ver Pantenol en Monografías
Generales
Suplementos Dietéticos / Aceite de Pescado 61 09
Aceite de Pescado con Ácidos Omega-3
DEFINICIÓN
El Ac~i~e de Pescado ~on Ácidos Omega-3 es el aceite graso
purificado, desodorizado y winterizado obtenido de los
pescados d~ las familias Engraulidae, Carangidae, Clupei-
dae, Osmeridae! Scombroidae y Ammodytidae. Los ácidos
omega-3 se definen según se indica a continuación: ácido
~lf!'l lin<?lénico (Cl 8:? n-3), ácido moróctico (Cl 8:4 n-3),
ac1~0 e1cosatetraeno1co (C20:4 n-3), ácido eicosapentae-
no1co (EPA) (~2~:5 n-3), ácido heneicosapentaenoico
(C~l :5 n-3), ae1do d<?cosapentaenoico (C22:5 n-3) y
ac1do docosahexaeno1co (DHA) (C22:6 n-3). Contiene no
menos de 28:°_% (p(p) de ácidos omega-3 totales, expre-
sados como ac1dos libres, que consisten en no menos de
1 3,0% de E~A y no menos de 9,0% de DHA. Se pueden
agregar ant1ox1dantes adecuados en concentraciones
apropiadas.
IDENTIFICACIÓN
• Los tiempos de retención de los picos de éster metílico
del ácido eicosapentaenoico y ester metílico del ácido
docosahexaenoico de la Solución de Prueba 2 en la
prueba de Contenido de EPA y DHA corresponden a los de
los compuestos respectivos de la Solución Estándar 7. La
suma del área de los ésteres metílicos de EPA y DHA es
no menos de 22% del área total detectada para los éste-
res metílicos, y ningún otro pico tiene un área superior al
20% del área total detectada para ésteres metílicos. El
cromatograma de la Solución de Prueba 2 presenta al me-
nos 15 picos adicionales a los tiempos de retención de
los ésteres metílicos de ácidos grasos insaturados presen-
tados en la Solución Estándar 2 .
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE EPA Y DHA
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinación y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Análisis
lución de Prueba 7 y Solución de Prueba 2 '
Identificar los tiempos de retención de los picos de los
ésteres metílicos de ácidos grasos pertinentes compa-
rando el cromatograma de la Solución Estándar 2 con
el Cromatograma de Referencia provisto con el ER
Aceite de Pescado USP. Identificar el tiempo de reten-
ción del pico del estándar interno en el cromato-
grama de la Solución de Prueba 2 comparando con el
de la Solución de Prueba 7.
Calcular el porcentaje de,EPA o DHA en la porción de
Aceite de Pescado con Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (Ws/Wu) x F x 100
Rs = cociente entre las respuestas de los picos de
EPA o DHA y el estándar interno en el
cromatogn;ima de la Soluci9n Estándar 2
Ws = peso de ER Ester Etílico del Acido ,
Doc9sahexaenoico USP o de ER Ester Etílico
del Acido Eicosapentaenoico USP usado para
preparar la Solución Estándar 7 (mg)
Wu = peso del Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3 tomado para preparar la Solución
de Prueba 2 (mg)
F =factor para expresar el contenido de DHA
(0,921) y EPA (0,915) como ácidos grasos
libres
Ru = cociente de respuesta entre los picos de EPA o
DHA y el pico corregido del estándar interno
en el cromatograma de la Solución de Prueba
2 calculado según se indica a continuación:
Ru = 1 /[(ru2/rn) - (ru1/rn)]
611 O Aceite de Pescado / Suplementos Dietéticos
ru 7 = respuesta del pico en el sitio del estándar_,
interno en el cromatograma de la Soluc1on de
Prueba 2
r12 = respuesta del pico de EPA o DHA en el
cromatograma de la Solución de Prueba 2
ru 1 = respuesta de cualquier pico en el sitio del
estándar interno en el cromatograma de la
Solución de Prueba 7
r11 = respuesta del pico de EPA o DHA en el
cromatograma de la Solución de Prueba 7.
(NOTA-Si no se encuentra ningún pico en el
sitio del estándar interno en el cromatogra-
ma de la Solución de Prueba 7, Ru = rn/ru2.]
Criterios de aceptación: No menos de 13,0% (p/p) de
EPA y no mepos de 9,0% (p/p) de DHA
• CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinación y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Análisis:Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de EPAy OHA, excepto que se debe calcular el
contenido de ácidos omega-3 totales:
Resultado = EPA + DHA + (An-3(EPA + DHA)]/(A¡PA + AoHA)
EPA = contenido de EPA de la prueba de Contenido
de EPA y OHA [% (p/p)J
DHA = contenido de DHA de la prueba de Contenido
de EPA y OHA [% (p/p)]
An-3 = suma de las áreas de los picos
correspondientes a los esteres metílicos
Cl 8:3 n-3, Cl 8:4 n-3, C20:4 n-3, C21 :5 n-
3 y C22:5 n-3 en el cromatograma de la
Solución de Prueba 2
AErA = área del pico correspondiente al éster metílico
de EPA en el cromatograma de la Solución de
Prueba 2
AoHA = área del pico correspondiente al éster metílico
de DHA en el cromatograma de la Solución
de Prueba 2
Criterios de aceptación: No menos de 28,0% (p/p) de
ácidos omega-3 totales, expresados como ácidos libres
CONTAMINANTES
• LÍMITE DE ARSÉNICO
(NOTA-Para la preparación de tod?s ~as solu,ciones ,ac_uo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflon y pl?st1co
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a través de una resina de intercambio iónico de lecho
mixto de ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-
dos 1o's reactivos para que tengan un contenido de arsé-
nico tan bajo como sea posible y almacenar todas las
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosili-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, teflón y plástico antes
de su uso empapando en ácido nítrico 8 N ti~io ~u­
rante 30 minutos y enjuagando con agua des1onizada.]
Solución madre de paladio al 1%: Transferir 1 g de
metal de paladio ultra puro a un vaso de precipitados
de teflón. Agregar 20 mL de agua y 1 O mL de _ácido
nítrico, y entibiar sobre una placa de calentamiento
hasta disolver. Dejar que la solución se enfríe a tempe-
ratura ambiente, transferir a un matraz volumétrico de
100 mL, y diluir con agua desionizada a volumen.
Solución madre de nitrato de magnesio al 1%: Trans-
ferir 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de
precipitados de teflón. Agregar 40 mL de agua y 1 mL
de ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los sólidos. Dejar que la solución
se enfríe a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumétrico de 1 00 mL, y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solución modificadora de trabajo: Solución madre de
paladio al 7%, Solución madre de nitrato de magnesio al
7% y ácido nítrico al 2% (3:2:5). Un volumen de 5 µL
proporciona 0,015 mg de paladio y 0,01 mg de nitrato
de magnesio.
USP 37
Blanco: Ácido nítrico y agua (5 en 1 00)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 mL de
Solución Estándar de Arsénico, preparada según se indica
en la prueba de Arsénico (211 ), a un matraz volumétrico
de 100 ml. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de ácido
nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solución con-
tiene O, 1 O µg/mL de arsénico. ,
Soluciones estándar: Diluir la Solución madre del estan-
dar con el Blanco para obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de arsénico.
Solución muestra: Para preparar la Solución muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrón de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de teflón de 100 mL. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
para desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de escape para ventilar los humos. [PRE-
CAUCIÓN-Usar proteccion adecuada para los. ojos ad~­
más de ropa y guantes protectores.] Transferir aproxi-
madamente 500 mg de Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3, pesados con una aproximación de O, l _mg, a
un recubrimiento interno de teflón del vaso de diges-
tión. Preparar las muestras por duplicado. Agregar
15 mL de ácido nítrico y agitar por rotación suave. Cu-
brir los vasos con tapas dejando fuera el accesorio de
ventilación. Digerir previamente durante toda la noche
bajo una campana. Colocar la membrana de ruptura en
el accesorio de ventilación y ajustar la tapa. Colocar to-
dos los vasos en el plato giratorio del horno de mi-
croondas. Conectar los tubos de escape a la trampa de
ventilación y conectar el sensor de presión al vaso apro-
piado. Iniciar un procedimiento de digestión de dos
etapas calentando el microondas con una potenci_a del
15% durante 15 minutos, seguida de una potencia del
25% durante 45 minutos. Retirar el plato giratorio con
los vasos del horno y dejar que los vasos se enfríen a
temperatura ambiente. lNOTA-Se puede usar un baño
de agua fresca para acelerar el proceso de enfria-
miento.] Ventilar los vasos cuando alcancen la tempera-
tura ambiente. Retirar las tapas y agregar lentamente
2 mL de peróxido de hidrógeno al 30% a cada uno.
Dejar que las reacciones cesen y sellar los vasos. Volver
a colocar los vasos en el plato giratorio del horno de
microondas y calentar durante 15 minutos adicionales a
una potencia del)O%. Retirar los vasos _del horno y .
dejar que se enfrien a temperatura amb1en,te: Transferir
los digeridos enfriados a un matraz volumetrico de
25 mL y diluir con agua a volumen. . , . .
Análisis: Programar el horno de grafito segun se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-.
gundos y un flujo de argón de 300 ml/m1n. Carbonizar
la muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura de 20º y
un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2400º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido.
Limpiar a 2600º usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por separado
volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estándar, de
la Solución muestra y del Blanco, seguidos de una inyec-
ción de 5 µL de la Solución modificadora de trabajo para
cada una de las muestras, en el tubo de grafito de un
espectrómetro de absorción atómica con horno de gra-
fito equipado con una lá,mpara de_ cátodo h,ueco para .
arsénico. Determinar el area del pico en la linea de emi-
sión de arsénico a 193,7 nm, corregida por la absorción
de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas de
las Soluciones estándar en función de sus contenidos de
USP 37
arsénico, en µg/mL, y calcular la línea de regresión que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
ción, C, en µg/mL, de arsénico en cada mL de la Solu-
ción muestra interpolando a partir de la línea de
regresión.
Calcular el contenido de ,arsénico en la porción de
Aceite de Pescado con Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (C/W) x 25
W = peso de Aceite de Pescado con Ácidos
Omega-3 tomado para preparar la Solución
muestra (g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
empapando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución de fosfato monobásico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobásico de amonio ultra puro en
1 mL de ácido nítrico y 40 mL de agua para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 100 mL.
Solución de nitrato de magnesio al 1 %: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de teflón. Agregar 40 mL de agua y 1 mL de
ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los sólidos. Dejar que la solución
se enfríe a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumétrico de 100 mL, y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solución modificadora de trabajo: Solución de fosfato
monobásico de amonio al 70%, Solución de nitrato de
magnesio al 7% y ácido nítrico al 2% (2:1 :2). Un volu-
men de 5 µL proporciona 0,2 mg de fosfato más
0,01 mg ,de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (5 en 100)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 mL de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en la prueba de Metales Pesados (231 ), a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 40 mL de agua y
5 mL de ácido nítrico, y diluir con agua a volumen.
Transferir 1,0 mL de esta solución a un segundo matraz
volumétrico de 100 ml. Agregar 50 mL de agua y 1 mL
de ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
ción contiene O, 1 O µg/mL de plomo.
Soluciones estándar: Diluir la Solución madre del están-
dar con el Blanco para obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en la
prueba de Límite de Arsénico
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20º y un flujo
de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2100º usando
una rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5
segundos con el flujo de argón detenido. Limpiar a
2600º usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos. Inyectar por separado volúmenes
iguales (20 µL) de las Soluciones estándar, de la Solución
muestra y del Blanco, seguidos de una inyección de 5 µL
de la Solución modificadora de trabajo para cada una de
las muestras, en el tubo de grafito de un espectrómetro
Suplementos Dietéticos/ Aceite de Pescado 6111
de absorción atómica con horno de grafito equipado
con una lámpara de cátodo hueco para plomo. Deter-
minar el área del pico en la línea de emisión de plomo
a 283,3 nm, corregida por la absorción de fondo. Grafi-
car las áreas de los picos corregidas de las Soluciones
estándar en función de sus contenidos de plomo, en
µg/mL, y calcular la línea de regresión que mejor se
ajuste a los puntos. Determinar la concentracion, C, en
~1g/mL, de plomo en cada mL de la Solución muestra
interpolando a partir de la línea de regresión.
Calcular el conten[do de plomo en la porción de Aceite
de Pescado con Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (C/W) x 25
W = peso de Aceite de Pescado con Ácidos
Omega-3 tomado para preparar la Solución
muestra (g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
empapando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución de fosfato monobásico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobásico de amonio ultra puro en
40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 100 mL.
Solución de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de teflón. Agregar 40 mL de agua y 1 mL de
ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los sólidos. Dejar que la solución
se enfríe a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumétrico de 100 mL, y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solución modificadora de trabajo: Solución de fosfato
monobásico de amonio al 70%, Solución de nitrato de
magnesio al 7% y ácido nítrico al 2% a volumen (2:1 :2).
Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de fosfato y
0,01 mg ,de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (5 en 1 00)
Solución madre del estándar A: O, 1372 mg/mL de ni-
trato de cadmio en agua
Solución madre del estándar B: Solución madre del es-
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución
contiene O, 1 O µg/mL de cadmio. [NOTA-Antes de llevar
a volumen final disolver en una porción de agua y
ácido nítrico.]
Soluciones estándar: Diluir la Solución madre del están-
dar B con el Blanco para obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de cadmio.
Solución muestra: Preparar según se indica en la
prueba de Límite de Arsénico
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20º y un flujo
de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2400º usando
una rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5
segundos con el flujo de argón detenido. Limpiar a
2600º usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos. Inyectar por separado volúmenes
iguales (20 ,uL) de las Soluciones estándar, de la Solución
611 2 Aceite de Pescado / Suplementos Dietéticos
muestra y del Blanco, seguidos de una inyección de 5 µL
de la Solución modificadora de trabajo para cada una de
las muestras, en el tubo de grafito de un espectrómetro
de absorción atómica con horno de grafito equipado
con una lámpara de cátodo hueco para cadmio. Deter-
minar el área del pico en la línea de emisión de cadmio
a 228,8 nm, corregida por la absorción de fondo. Grafi-
car las áreas de los picos corregidas de las Soluciones
estándar en función de sus contenidos de cadmio, en
µg/mL, y calcular la línea de regresión que mejor se
ajuste a los puntos. Determinar la concentracion, C, en
µg/mL, de cadmio en cada mL de la Solución muestra
interpolando a partir de la línea de regresión. Calcular
el contenido de cadmio en el Aceite de Pescado con
Ácidos Omega-3 tomada:
Resultado = (C/W) x 25
W = peso de Aceite de Pescado con Ácidos
Omega-3 tomado para preparar la Solución
muestra (g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE MERCURIO: Proceder según se indica en Mer-
curio (261 ), Método /la, excepto que se debe usar una
Solución Estándar de Mercurio con el equivalente de
O, l µg/mL de mercurio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico combinando
los 2 digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL de Solu-
ción de Permanganato de Potasio.
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Análisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en inglés) y
dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in-
glés) mediante la revisión B del método Nº 1613 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
ción del Medio Ambiente del Gobierno de los Estados
Unidos). Determinar el contenido de bifenilos policlora-
dos (PCB, por sus siglas en inglés) mediante la revisión
A del método Nº 1668 de la Environmental Protection
Agency (Agencia de Protección del Medio Ambiente del
Gobierno de los Estados Unidos).
Criterios de aceptación: La suma de PCDD y PCDF es
no más de 2,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
La suma de PCDD, PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos
policlorados, fármacos similares IUPAC no orto PCB-77,
PCB-81, PCB-126 y PCB-169 y fármacos similares IUPAC
mono orto PCB-105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-
156, PCB-157, PCB-167 y PCB-189) es no más de
10,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Índice de Acidez (401): No más
de 3
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Índice de Anisidina (401): No más
de 20,0 , de Contenido de EPA y OHA corresponden a los de los
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más
de 5,0 , ción Estándar 7. La suma del área de los ésteres metílicos
• GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX)
(401): No más de 26, calculado:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = índice de peróxido
AV = índice de anisidina
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401):
No
más de 1,5%
• ESTEARINA: 1O mL permanecen transparentes después de
enfriar a Oº durante 3 horas
• ABSORBANCIA
Solución muestra: 0,24 mg/mL, en isooctano
Criterios de aceptación: La absorbancia es no más de
0,70, determinada a 233 nm.
USP 37
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente controlada. Se puede embotellar o envasar
en envases de los que se ha expulsado el aire mediante
producción de vacío o con un gas inerte.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido promedio de
DHA y EPA en mg/g. También indica el nombre y la con-
cerJtración de cualquier antioxidante agregado.
• ESTANDARES DE REFER~NCIA USP (11)
E~ Ester Etílico del Acido Docosahexaenoico USP
Ester etílico del ácido todo cis-4,7, 1O,13, 16, l 9-
docosahexaenoico.
C2 1H3602 356,5~
E~ Ester Etílico del Acido Eicosapentaenoico USP
Ester etílico del ácido todo cis-5,8, l 1, 14, 17-eicosapen-
taenoico.
C22H34Ü2 330,51
ER Aceite de Pescado USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Ester metílico del ácido tricosanoico.
C24H4aÜ2 368,64
Aceite de Pescado con Ácidos Omega-3,
Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Aceite de Pescado con Ácidos Omega-3
contienen no menos de 95,0% y no más de 195,0% de la
cantidad declarada de Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3, donde el Aceite de Pescado con Ácidos
Omega-3 es el aceite graso purificado, desodorizado y
winterizado obtenido de los pescados de las familias En-
graulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeridae, Scombroi-
dae y Ammodytidae. Los ácidos omega-3 se definen se-
gún se indica a continuación: ácido alfa linolénico (Cl 8:3
n-3), ácido moróctico (Cl 8:4 n-3), ácido eicosatetrae-
noico (C20:4 n-3), ácido eicosapentaenoico (EPA) (C20:5
n-3), ácido heneicosapentaenoico (C21 :5 n-3), ácido do-
cosapentaenoico (C22:5 n-3) y ácido docosahexaenoico
(DHA) (C22:6 n-3). Contiene no menos de 28,0% {p/p)
de ácidos omega-3 totales, expresados como ácidos libres,
que consisten en no menos de 13,0% de EPA y no menos
de 9,0% de DHA. Se pueden agregar antioxidantes ade-
cuados en concentraciones apropiadas.
IDENTIFICACIÓN
• El aceite contenido en las Cápsulas cumple con los requi-
sitos de la siguiente prueba: Los tiempos de retención de
los picos obtenidos de éster metílico del ácido eicosapen-
taenoico y éster metílico del ácido docosahexaenoico en
el cromatograma de la Solución de Prueba 2 en la prueba
compuestos respectivos en el cromatograma de la Solu-
de EPA y DHA es no menos de 22% del área total detec-
tada para los ésteres metílicos, y ningún otro pico en el
cromatograma tiene un área superior al 20% del área
total detectada para ésteres metílicos. El cromatograma
de la Solución de Prueba 2 presenta al menos 15 picos
adicionales a los tiempos de retención de los ésteres me-
tílicos de ácidos grasos insaturados presentados en la So-
lución Estándar 2.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ACEITE DE PESCADO: Pesar no menos de 1o
Cápsulas en un frasco de pesada tarado, abrir cuidadosa-
mente las Cápsulas, sin perder material de la cubierta, y
transferir el contenido combinado de las Cápsulas a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier sustan-
cia adherida a las cubiertas de las Cápsulas vacías la-
USP 37
vando con varias porciones pequeñas de 2,2,4-trimetil-
pentano. Desechar los lavados y dejar que las cubiertas
de las Cápsulas se sequen en una corriente de aire seco
hasta que se haya evaporado por completo el 2,2,4-tri-
metilpentano. Pesar las cubiertas de las Cápsulas vacías
en el frasco de pesada tarado original y calcular el peso
neto promedio por Cápsula.
Criterios de aceptacion: No menos de 95,0% y no
más de 1 05,0% de la cantidad declarada
• CONTENIDO DE EPA Y DHA
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinación y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Análisis
Muestras: Solución Estándar 7, Solución Estándar 2, So-
lución de Prueba 7 y Solución de Prueba 2
Identificar los tiempos de retención de los picos de los
ésteres metílicos de ácidos grasos pertinentes compa-
rando el cromatograma de la Solución Estándar 2 con
el Cromatograma de Referencia provisto con el ER
Aceite de Pescado USP. Identificar el tiempo de reten-
ción del pico del estándar interno en el cromato-
grama de la Solución de Prueba 2 comparando con el
de la Solución de Prueba 7.
Calcular el porcentaje de EPA o DHA en la porción de
aceite de pescado con ácidos omega-3 tomada de las
Cápsulas:
Resultado = (Ru/Rs) x (Ws/Wu) x F x 100
Rs = cociente entre las respuestas de los picos de
EPA o DHA y el estándar interno en el
cromatogréjma de la Soluci(m Estándar 2
Ws = peso de ER Ester Etílico del Acido ,
Docosahexaenoico USP o de ER Ester Etílico
del Ácido Eicosapentaenoico USP usado para
preparar la Solución Estándar 7 (mg)
Wu = peso del aceite de pescado con ácidos omega-
3 tomado para preparar la Solución de Prueba
2 (mg)
F = factor para expresar el contenido de DHA
(0,921) y EPA (0,915) como ácidos grasos
libres
Ru = cociente de respuesta entre los picos de EPA o
DHA y el pico corregido del estándar interno
en el cromatograma de la Solución de Prueba
2 calculado según se indica a continuación:
Ru = 1 /[(ru2/rn) - (rui/rr1)]
ru2 = f
respuesta del ico en el sitio del estándar
interno en e cromatograma de la Solución de
Prueba 2
=respuesta del pico de EPA o DHA en el
cromatograma de la Solución de Prueba 2
ru1 = respuesta de cualquier pico en el sitio del
estándar interno en el cromatograma de la
Solución de Prueba 7
= respuesta del pico de EPA o DHA en el
cromatograma de la Solución de Prueba 7.
[NOTA-Si no se encuentra ningún pico en el
sitio del estándar interno en el cromatogra-
ma de la Solución de Prueba 7, Ru = rn/ru2.]
Criterios de aceptación: No menos de 1 3,0% (p/p) de
EPA y no mepos de 9,0% (p/p) de DHA
• CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinación y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de EPAy DHA. Calcular el porcentaje de ácidos
omega-3 totales en la porción de aceite de pescado con
ácidos omega-3 tomada de las Cápsulas:
Resultado = EPA + DHA + [A,, ;(EPA + DHA)]/(AEPA + AoHA)
Suplementm DiPtéticos / Aceite de Pescado 611 3
EPA = contenido de EPA de la prueba de Contenido
df' EPA y D/-IA [% (p/p)]
DHA = contenido de DHA de la prueba de Contenido
de EPA y Dl-/A [% (p/p)]
A,, 1 = suma de las áreas de los picos ,.
correspondientes a los esteres met1l1cos
Cl 8:3 n-3, Cl 8:4 n-3, C20:4 n-3, C21 :5 n-
3 y C22:5 n-3 en el cromatograma de la
Solución de Prueba 2
ArrA = área del pico correspondiente a éster metílico
de EPA en el cromatograma de la Solución de
Prueba 2
AoHA = área del pico correspondiente a éster metílico
de DHA en el cromatograma de Solución de
Prueba 2
Criterios de aceptación: No menos de 28,0% (p/p) de
ácidos omega-3 totales, expresado como ácidos libres
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091 ):
Cumplen co~ los requisito) ,
• DESINTEGRACION Y DISOLUCION DE SUPLEMENTOS DIETETICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de la Prueba de Rup-
tura para Cápsulas Blandas
CONTAMINANTES
• LÍMITE DE ARSÉNICO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a través de una resina de intercambio iónico de lecho
mixto, de ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-
dos los reactivos para que tengan un contenido de arsé-
nico tan bajo como sea posible y almacenar todas las
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosili-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, teflón y plástico antes
de su uso empapando en ácido nítrico 8 N tibio du-
rante 30 minutos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución madre de paladio al 1%: Transferir 1 g de
metal de paladio ultra puro a un vaso de precipitados
de teflón. Agregar 20 ml de agua y 1 O ml de ácido
nítrico, y entibiar sobre una placa de calentamiento
hasta disolver. Dejar que la solución se enfríe a tempe-
ratura ambiente, transferir a un matraz volumétrico de
100 ml, y diluir con agua desionizada a volumen.
Solución madre de nitrato de magnesio al 1%: Trans-
ferir 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de
precipitados de teflón. Agregar 40 ml de agua y 1 ml
de ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los sólidos. Dejar que la solución
se enfríe a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumétrico de 100 ml, y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solución modificadora de trabajo: Solución madre de
paladio al 7%, Solución madre de nitrato de magnesio al
7% y ácido nítrico al 2% (3:2:5). Un volumen de 5 µL
proporciona 0,015 mg de paladio y 0,01 mg de nitrato
de magnfsio.
Blanco: Acido nítrico y agua (5 en 1 00)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Estándar de Arsénico, preparada según se indica
en la prueba de Arsénico (211 ), a un matraz volumétrico
de 1 00 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de ácido
nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solución con-
tiene O, 1 O µg/ml de arsénico.
Soluciones estándar: Diluir la Solución madre del están-
dar con el Blanco para obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de arsénico.
Solución muestra: Para preparar la Solución muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrón de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1%,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de teflón de 1 00 ml. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
6114 Aceite de Pescado / Suplementos Dietéticos
sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
para desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con uri tubo de escape para ventilar los humos. [PRE-
CAUCION-Usar proteccion adecuada para los ojos ade-
más de ropa y guantes protectores.] Transferir aproxi-
madamente 500 mg de contenido de Cápsulas,
pesados con una aproximación de O, 1 mg, a un recubri-
miento interno de teflón del vaso de digestión. Preparar
las muestras por duplicado. Agregar 15 mL de ácido ní-
trico y agitar por rotación suave. Cubrir los vasos con
tapas dejando fuera el accesorio de ventilación. Digerir
previamente durante toda la noche bajo una campana.
Colocar la membrana de ruptura en el accesorio de
ventilación y ajustar la tapa. Colocar todos los vasos en
el plato giratorio del horno de microondas. Conectar
los tubos de escape a la trampa de ventilación y conec-
tar el sensor de presión al vaso apropiado. Iniciar un
procedimiento de digestión de dos etapas calentando el
microondas con una potencia del 15% durante 15 mi-
nutos, seguida de una potencia del 25% durante 45
minutos. Retirar el plato giratorio con los vasos del
horno y dejar que fos vasos se enfríen a temperatura
ambiente. LNOTA-Se puede usar un baño de agua
fresca para acelerar el proceso de enfriamiento.j Ventilar
los vasos cuando alcancen la temperatura ambiente. Re-
tirar las tapas y agregar lentamente 2 mL de peróxido
de hidrógeno al 30% a cada uno. Dejar que las reaccio-
nes cesen y sellar los vasos. Volver a colocar los vasos
en el plato giratorio del horno de microondas y calentar
durante 15 minutos adicionales a una potencia del
30%. Retirar los vasos del horno y dejar que se enfríen
a temperatura ambiente. Transferir los digeridos enfria-
dos a un matraz volumétrico de 25 mL y diluir con
agua a volumen.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1O segundos usando una temperatura ajustada a
20º y un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a
2400º usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argón dete-
nido. Limpiar a 2600º usando una rampa de 1 segundo
y un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por
separado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones es-
tándar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución modificadora de
trabajo para cada una de las muestras, en el tubo de
grafito de un espectrómetro de absorción atómica con
horno de grafito equipado con una lámpara de cátodo
hueco para arsénico. Determinar el área del pico en la
línea de emisión de arsénico a 193,7 nm, corregida por
la absorción de fondo. Graficar las áreas de los picos
corregidas de las Soluciones estándar en función de sus
contenidos de arsénico, en µg/mL, y calcular la línea de
regresión que mejor se ajuste a los puntos. Determinar
la concentración, C, en µg/mL, de arsénico en cada mL
de la Solución muestra interpolando a partir de la línea
de regresión.
Calcular el contenido de arsénico en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
W = peso de aceite de pescado con ácidos omega-
3 tomado para preparar la Solución muestra
(g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
USP 37
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a través de una resina de intercambio iónico de lecho
mixto, de ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-
dos los reactivos para que tengan un contenido de
plomo tan bajo como sea posible y almacenar todas las
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosili-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, teflón y plástico antes
de su uso empapando en ácido nítrico 8 N tibio du-
rante 30 minutos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución de fosfato monobásico de amonio al 10%:
1O g de fosfato monobásico de amonio ultra puro en
1 mL de ácido nítrico y 40 mL de agua para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 100 ml.
Solución de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de teflón. Agregar 40 mL de agua y 1 mL de
ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los sólidos. Dejar que la solución
se enfríe a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumétrico de 100 mL, y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solución modificadora de trabajo: Solución de fosfato
monobásico de amonio al 70%, Solución de nitrato de
magnesio al 7% y ácido nítrico al 2% (2:1 :2). Un volu-
men de 5 µL proporciona 0,2 mg de fosfato más
0,01 mg ,de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (5 en 100)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 mL de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en la prueba de Metales Pesados (231 ), a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 40 mL de agua y
5 mL de ácido nítrico, y diluir con agua a volumen.
Transferir 1,0 mL de esta solución a un segundo matraz
volumétrico de 100 ml. Agregar 50 mL de agua y 1 mL
de ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
ción contiene O, 1O µg/mL de plomo.
Soluciones estándar: Diluir la Solución madre del están-
dar con el Blanco para obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en la
prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2100º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido.
Limpiar a 2600º usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por separado
volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estándar, de
la Solución muestra y del Blanco, seguidos de una inyec-
ción de 5 µL de la Solución modificadora de trabajo para
cada una de las muestras, en el tubo de grafito de un
espectrómetro de absorción atómica con horno de gra-
fito equipado con un lámpara de cátodo hueco para
plomo. Determinar el área del pico en la línea de emi-
sión de plomo a 283,3 nm, corregida por la absorción
de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas de
las Soluciones estándar en función de sus contenidos de
plomo, en µg/mL, y calcular la línea de regresión que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
ción, C, en µg/mL, de plomo en cada mL de la Solución
muestra interpolando a partir de la línea de regresión.
Calcular el contenido de plomo en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (C/W) x 25
USP 37
W = peso de aceite de pescado con ácidos omega-
3 tomado para preparar la Solución muestra
(g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a través de una resina de intercambio iónico de lecho
mixto, de ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-
dos los reactivos para que tengan un contenido de cad-
mio tan bajo como sea posible y almacenar todas las
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosili-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, teflón y plástico antes
de su uso empapando en ácido nítrico 8 N tibio du-
rante 30 minutos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución de fosfato monobásico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobásico de amonio ultra puro en
40 mL de agua y 1 mL de ácido nítrico para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 100 mL.
Solución de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de teflón. Agregar 40 mL de agua y 1 mL de
ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los sólidos. Dejar que la solución
se enfríe a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumétrico de 100 mL, y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solución modificadora de trabajo: Solución de fosfato
monobásico de amonio al 70%, Solución de nitrato de
magnesio al 7% y ácido nítrico al 2% a volumen (2:1 :2).
Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de fosfato y
0,01 mg ,de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (5 en 100)
Solución madre del estándar A: O, 1372 mg/mL de ni-
trato de cadmio en agua
Solución madre del estándar B: Solución madre del es-
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución
contiene O, 1 O µg/mL de cadmio. [NOTA-Antes de llevar
a volumen final disolver en una porción de agua y
ácido nítrico.]
Soluciones estándar: Diluir la Solución madre del están-
dar B con el Blanco para obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de cadmio.
Solución muestra: Preparar según se indica en la
prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2400º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido.
Limpiar a 2600º usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por separado
volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estándar, de
la Solución muestra y del Blanco, seguidos de una inyec-
ción de 5 µL de la Solución modificadora de trabajo para
cada una de las muestras, en el tubo de grafito de un
espectrómetro de absorción atómica con horno de gra-
fito equipado con un lámpara de cátodo hueco para
cadmio. Determinar el área del pico en la línea de emi-
sión de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absorción
de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas de
las Soluciones estándar en función de sus contenidos de
cadmio, en µg/mL, y calcular la línea de regresión que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
ción, C, en µg/mL, de cadmio en cada mL de la Solu-
ción muestra interpolando a partir de la línea de regre-
Suplementos Dietéticos /Aceite de Pescado 6115
sión. Calcular el contenido de cadmio en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
W = peso de aceite de pescado con ácidos omega-
3 tomado para preparar la Solución muestra
(g)
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE MERCURIO: Proceder según se indica en Mer-
curio (261), Método Ita, excepto que se debe usar una
Solución Estándar de Mercurio con el equivalente de
O, 1 µg/mL de mercurio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico combinando
los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL de So-
lución de Permanganato de Potasio.
~riterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Análisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en inglés) y
dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in-
glés) mediante la revisión B del método Nº 1613 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
ción del Medio Ambiente del Gobierno de los Estados
Unidos). Determinar el contenido de bifenilos policlora-
dos (PCB, por sus siglas en inglés) mediante la revisión
A del método Nº 1668 de la Environmental Protection
Agency (Agencia de Protección del Medio Ambiente del
Gobierno de los Estados Unidos).
Criterios de aceptación: La suma de PCDD y PCDF es
no más de 2,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
La suma de PCDD, PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos
policlorados, fármacos similares IUPAC no orto PCB-77,
PCB-81, PCB-126 y PCB-169 y fármacos similares IUPAC
mono orto PCB-105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-
156, PCB-157, PCB-167 y PCB-189) es no más de
10,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Índice de Acidez (401): No más
de 3
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Índice de Anisidina (401): No más
de 20,0 ,
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más
de 5,0 ,
• GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX)
(401): No más de 26, que se calcula:
(2 x PV) +AV
PV = índice de peróxido
AV = índice de anisidina
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401):
No
más de 1,5%
• ESTEARINA: 1 O mL permanecen transparentes después de
enfriar a Oº durante 3 horas
• ABSORBANCIA
Solución muestra: 0,24 mg/mL en isooctano
Criterios de aceptación: La absorbancia es no más de
0,70, determinada a 233 nm.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de ácido do-
cosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA)
en ,mg/Cápsula.
• ESTANDARES DE REFER~NCIA USP (11)
ER Ester Etílico del Acido Docosahexaenoico USP
Éster etílico del ácido todo cis-4, 7, 1O,13,16, 19-
docosahexaenoico.
C24Hi602 356,55
6116 Aceite de Pescado / Suplementos Dietéticos
E~ Éster Etílico del Ácido Eicosapentaenoico USP
Ester etílico del ácido todo ci5-5,8, 11, 14, 17-eicosapen-
taenoico.
C22Hi402 330,51
ER Aceite de Pescado USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Ester metílico del ácido tricosanoico.
C24H4s02 368,64
Aceite de Pescado con Ácidos Omega-3,
Cápsulas de Liberación Retardada
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Liberación Retardada de Aceite de Pescado
con Acidos Omega-3 son Cápsulas con recubrimiento en-
térico que contienen no menos de 95,0% y no más de
105,0% de la cantidad declarada de Aceite de Pescado
c;on Ácidos Omega-3, donde el Aceite .d.e Pescado con.
Acidos Omega-3 es el aceite graso purificado, desodori-
zado y winterizado obtenido de los pescados de las fami-
lias Engraulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeridae,
Scombroidae y Ammodytidae. Los ácidos omega-3 se de-
finen de la siguiente manera: ácido alfa linolénico (Cl 8:3
n-3), ácido moróctico (Cl 8:4 n-3), ácido eicosatetrae-
noico (C20:4 n-3), ácido eicosapentaenoico (EPA) (C20:5
n-3), ácido heneicosapentaenoico (C21 :5 n-3), ácido do-
cosapentaenoico (C22:5 n-3) y ácido docosahexaenoico
(DHA) (C22:6 n-3). Contiene no menos de 28,0% (p/p)
de ácidos omega-3 totales, expresados como ácidos libres,
que consisten en no menos de 1 3,0% de EPA y no menos
de 9,0% de DHA. Se pueden agregar antioxidantes ade-
cuados en concentraciones apropiadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. El aceite contenido en las Cápsulas cumple con los
requisitos de la siguiente prueba: Los tiempos de reten-
ción de los picos de éster metílico del ácido eicosapen-
taenoico y ester metílico del ácido docosahexaenoico en
el cromatograma de la Solución de Prueba 2 en la prueba
de Contenido de EPA y DHA corresponden a los de los
compuestos respectivos en el cromatograma de la Solu-
ción Estándar 7. La suma del área de los ésteres metílicos
de EPA y DHA es no menos de 22% del área total detec-
tada para los ésteres metílicos, y ningún otro pico tiene
un área superior al 20% del área total detectada para
ésteres metílicos. El cromatograma de la Solución de
Prueba 2 presenta al menos 15 picos adicionales a los
tiempos de retención de los ésteres metílicos de ácidos
grasos insaturados presentados en la Solución Estándar 2.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ACEITE DE PESCADO: Pesar no menos de 1 o
Cápsulas en un frasco de pesada tarado, abrir cuidadosa-
mente las Cápsulas, sin perder material de la cubierta, y
transferir el contenido combinado de las Cápsulas a un
vaso de precipitados de 100 mL. Retirar cualquier sustan-
cia adherida a las cubiertas de las Cápsulas vacías la-
vando con varias porciones pequeñas de 2,2,4-trimetil-
pentano. Desechar los lavados y dejar que las cubiertas
de las Cápsulas vacías se sequen en una corriente de aire
seco hasta que se haya evaporado por completo el
2,2,4-trimetilpentano. Pesar las cubiertas de las Cápsulas
vacías en el frasco de pesada tarado original y calcular el
peso neto promedio por Cápsula.
Criterios de aceptación: 95,0%-105,0% de la cantidad
declarada
• CONTENIDO DE EPA Y DHA
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinación y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
USP 37
Análisis
Muestras: Solución Estándar 7, Solución Estandar 2, So-
lución de Prueba 7 y Solución de Prueba 2
Identificar los tiempos de retención de los picos de los
ésteres metílicos de los ácidos grasos pertinentes
comparando el cromatograma de la Solución estándar
2 con el cromatograma de referencia provisto con el
ER Aceite de Pescado USP. Identificar el tiempo de
retención del pico del estándar interno de la Solución
de Prueba 2 comparando con el de la Solución de
Prueba 7.
Calcular el porcentaje de EPA o DHA en la porción de
aceite de pescado con ácidos omega-3 tomada de las
Cápsulas:
Resultado= (Ru/Rs) x (W5/Wu) x Fx 100
= cociente de respuesta entre los picos de EPA o
DHA y el estándar interno de la Solución
Estándar 2
Ws = peso de ER Éster Etílico del Ácido ,
Docosahexaenoico USP o de ER Ester Etílico
del Ácido Eicosapentaenoico USP usado para
preparar la Solución Estándar 7 (mg)
Wu = peso de aceite de pescado con ácidos omega-
3 tomado para preparar la Solución de Prueba
2 (mg)
F = factor para expresar el contenido de DHA
(0,921) y EPA (0,915) como ácidos grasos
libres
Ru = cociente de respuesta entre los picos de EPA o
DHA y el pico corregido del estándar interno
en el cromatograma de la Solución de Prueba
2, calculado según se indica a continuación:
Ru = 1 ![(ru2/rT2) - (ru1/rn)]
rU2 = respuesta del pico en el sitio del estándar
interno de la Solución de Prueba 2
rr2 = respuesta del pico de EPA o DHA de la
Solución de Prueba 2
ru 7 = respuesta de cualquier pico en el sitio del
estándar interno de la Solución de Prueba 7
rn = respuesta del pico de EPA o DHA de la
Solución de Prueba 7. [NOTA-Si no se en-
~uentra ningún pico en el sitio del estándar
interno, Ru = rr2! ru2.]
Criterios de aceptación: No menos de 13,0% (p/p) de
EPA y no me0os de 9,0% (p/p) de DHA
• CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinación y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de EPA y DHA.
Calcular el porcentaje de ácidos omega-3 totales en la
porción de aceite de pescado con ácidos omega-3 to-
mada de las Cápsulas:
Resultado = EPA + DHA + [An-1(EPA + DHA)]/(AErA + AoHA)
EPA = contenido de EPA de la prueba de Contenido
de EPA y DHA [% (p/p)J
DHA = contenido de DHA de la prueba de Contenido
de EPA y DHA [% (p/p)]
An 1 = suma de las áreas de los picos
correspondientes a los esteres metílicos
Cl 8:3 n-3, Cl 8:4 n-3, C20:4 n-3, C21 :5 n-
3 y C22:5 n-3 de la Solución de Prueba 2
= área del pico correspondiente al éster metílico
de EPA de la Solución de Prueba 2
Ao11A = área del pico correspondiente al éster metílico
de DHA de la Solución de Prueba 2
Criterios de aceptación: No menos de 28,0% (p/p) de
ácidos omega-3 totales, expresados como ácidos libres.
USP 37
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• VARIACIÓN DE,PESO (2091):, Cumplen con los requisitos.
• DESINTEGRACION y DISOLUCION (2040): Cumplen con los
requisitos de Desintegración, Cápsulas Blandas de Libera-
ción Retardada (con Recubrimiento Entérico)
CONTAMINANTES
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Trazas de Metales (401): No más
ge O, 1 ppm de Pb, de Cd, de As y de Hg
• LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORINADOS
Análisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policlorinadas (PCDD, por sus siglas en inglés) y
dibenzofuranos policlorinados (PCDF, por sus siglas en
inglés) mediante la revisión B del método Nº 161 3 de
la Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
ción del Medio Ambiente del Gobierno de los Estados
Unidos). Determinar el contenido de bifenilos policlori-
nados (PCB, por sus siglas en inglés) mediante la revi-
sión A del método Nº 1668 de la Environmental Protec-
tion Agency (Agencia de Protección del Medio
Ambiente del Gobierno de los Estados Unidos).
Criterios de aceptación: La suma de PCDD y PCDF es
no más de 2,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
La suma de PCDD, PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos
policlorinados, fármacos similares IUPAC no orto PCB-
77, PCB-81, PCB-126 y PCB-169 y fármacos similares
IUPAC mono orto PCB-105, PCB-114, PCB-118, PCB-
123, PCB-156, PCB-157, PCB-167 y PCB-189) es no
más de 10,0 pg/g de equivalentes tóxicos de la OMS.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Índice de Acidez (401): No más
de 3 , Volumen de aplicación: 15 µL de Solución estándar C,
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Anisidina (401): No más
de 20,0 , y de Solución estándar B, en bandas
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más
de 5,0 , (5:3)
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX)
(401): No más de 26, calculado:
Resultado = (2 x PV) +AV
PV = índice de peróxido
AV = índice de anisidina
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401):
No
más de 1,5%
• ESTEARINA: 1 O mL permanecen transparentes después de
enfriar a Oº durante 3 horas
• ABSORBANCIA
Solución muestra: 0,24 mg/mL en isooctano
Criterios de aceptación: No más de 0,70, determinada
a 233 nm.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de ácido do-
cosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA)
en ,mg/Cápsula.
• ESTA~DARES DE REFERJ:NCIA USP (11)
ER Ester Etílico del Acido Docosahexaenoico USP
Éster etílico del ácido todo cis-4, 7, 1O,13,16, 19-
docosahexaenoico.
C21H3602 356,5?
E~ Ester Etílico del Acido Eicosapentaenoico USP
Ester etílico del ácido todo cis-5,8, 11, 14, 1 7-eicosapen-
taenoico.
C22H34Ü2 330,51
ER Aceite de Pescado USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Sup!emrntos DiPtPticos / Pimienta Negra 611 7
Pimienta Negra
DEFINICIÓN
La Pimienta Negra consiste en los frutos secos desarrollados
completamente, pern sir1 madurar de Piper nigrum L.
(Fam. Piperaceae). Contiene no menos de 2,5% de pipe-
rina, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Pimienta Negra cumple con los requisitos de Prue-
bas Específicas, c;aracterísticas Botánicas.
• B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,9 mg/mL de ER Piperina USP en
metano!
Solución estándar B: 2,0 mg/mL de borneo! en
metano!
Solución estándar C: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Pimienta Negra USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante aproximadamente 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Someter a ultrasonido durante 1 O
minutos aproximadamente 0 . 5 g de Pimienta Negra, re-
ducida a polvo fino, en 5 mL de metano!, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621.), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamafío promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
7 µL de Solución muestra, y 3 µL de Solución estándar A
Fase móvil: Una mezcla de hexanos y acetato de etilo
Reactivo de derivatización: Una mezcla de 1 7 mL de
metano! enfriado en hielo, 2 mL de ácido acético,
1 mL de ácido sulfúrico y O, 1 mL de anisaldehído,
mezclados en ese orden.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada (ver Cromatografía (621 )). Usar una cámara sa-
turada y acondicionar la placa a una humedad
relativa de aproximadamente 33% usando un disposi-
tivo adecuado. Desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente de la fase móvil haya recorrido aproxi-
madamente 7 cm desde el borde inferior de la placa.
Retirar la placa de la cámara, secar y observar bajo
luz UV a 254 nm. Derivatizar con el Reactivo de deri-
vatización, calentar durante 5 minutos a ·¡ 00º y ob-
servar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: Bajo luz UV a 254 nm, el cro-
matograma de la Solución muestra presenta una banda
de extinción intensa a un valor R1 de aproximadamente
O, 15 correspondiente al valor Rr de la banda de pipe-
rina en el cromatograma de la Solución estándar A, una
banda de extinción a un valor Rr de aproximadamente
0,02, y tres bandas de extinción localizadas entre valo-
res Rr de aproximadamente 0,3 y 0,5. Bajo luz visible y
después de la derivatización, el cromatograma de la So-
lución muestra presenta bandas principales similares en
posición y color a las bandas principales del cromato-
grama de la Solución estándar C. Estas bandas incluyen
una banda de color verde oscuro, del mismo color y
valor Rr que la birnda de piperina en la Solución están-
dar A (valor Rr de aproximadarnenle O, 15), una banda
de color violeta débil a un valor Rr de aproximadamente
0,47 debajo de la posición de la banda debida a bor-
neo! en la Solucion estándor B, v una banda verdosa en
la parte inferior del cromatogr:Írna a un valor Rr de
6118 Pimienta Negra / Suplementos Dietéticos
aproximadamente 0,07. Se pueden observar otras ban-
das menores en los cromatogramas de la Solución mues-
tra y la Solución estándar C . No se detectan bandas
azules en el cromatograma de la Solución muestra a va-
lores Rf de aproximadamente O, 1O y 0,58 (a diferencia
del Pimienta Larga).
• C. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Piperina.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra obtenido a 343 nm presenta un pico prin-
cipal al tiempo de retención correspondiente a piperina.
Identificar otros picos de piperamida en el cromato-
grama de la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Pimienta Negra USP usado. El cromato-
grama de la Solución muestra presenta un pico adicional
correspondiente a piperilina. El cromatograma de la So-
lución muestra obtenido a 270 nm no presenta un pico
debido a (2f,4E)-N-isobutildecadienamida a un tiempo
de retención relativo de 1, 14 con respecto al pico de
piperina (a diferencia de Pimienta Larga).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PIPERINA
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (%) (%)
o 95 5 Cs
18 55 45
25 20 80
28 20 80
35 55 45
40 95 5 pecto a la materia seca
45 95 5
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usando material de
vidrio con protección actínica.]
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Piperina USP en
metanol
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP en
metanol para obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 0,5 mg/ml. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Pimienta Negra, reducida a polvo fino y pesada con
exactitud, a un matraz de 250 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 50 mL de metanol, so-
meter a reflujo en un baño de agua durante aproxima-
damente 20 minutos, dejar que sedimente y decantar el
sobrenadante. Repetir hasta que el último extracto sea
incoloro. Combinar los extractos, concentrar al vacío y
ajustar el volumen hasta 100 mL con metano!. Antes de
la inyección, pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, dese-
chando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 343 nm y 270 nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A perisperma central, ancho, blancuzco y hueco en el
USP 37
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Pimienta Negra USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
piperina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% de-
terminada a partir del pico de piperina en inyecciones
repetidas, Solución estandar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
[NOTA-LA Solución estándar A, Solución estándar By la
Solución muestra se mantienen estables durante 6 ho-
ras a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Pi-
mienta Negra USP usado, identificar los tiempos de
retención de los picos correspondientes a piperina y
piperilina en el cromatograma de la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de piperina en la porción de Pi-
mienta Negra tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solución muestra a 343
nm
rs = área del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solución estándar A a
343 nm
= concentración de piperina en la Solución
estándar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
W = peso de Pimienta Negra usada para preparar
la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 2,5% con res-
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 ufc/g; os
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1Q3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El fruto es una baya indehiscente de
una sola semilla, globosa, ovoide a oblonga y dura de
3,5-6 mm de diámetro; la superficie es de color negro
grisáceo a negro amarronado, áspera, con arrugas reti-
culadas elevadas, presenta restos de estigma sésil en la
punta y una cicatriz basal que presenta un punto de
unión con el eje; olor aromático característico; sabor pi-
cante caractenstico; semilla blanca y hueca.
Microscópicas
Corte transversal: Borde circular con margen corru-
gado; presenta un pericarpio exterior estrecho de color
amarronado; recubrimiento de semilla que encierra un
USP 37
centro; un canal estrecho que corre verticalmente y
que conecta al centro hueco del fruto con un endos-
perma pequeño adherido a los restos del estigma; se
encuentra presente un embrión pequeño en el endos-
perma; se presenta un proyección corta en la base que
muestra un punto de adhesión al eje.
Sección transversal: Presenta un pericarpio, testa y
perisperma bien diferenciados; el pericarpio consta de
una capa de epicarpio, un mesocarpio ancho y una
capa de endocarpio; la capa de epicarpio está cubierta
por una cutícula gruesa y contiene unos pocos esto-
mas y prismas pequeños de oxalato de calcio; el meso-
carpio se compone de 2-3 capas de células parenqui-
máticas que muestran grupos de esclereidas
lignificadas rectangulares a circulares, una zona ancha
(12-15 capas) de células parenquimáticas que corren
tangencialmente las cuales contienen granos de almi-
dón y presentan células oleosas ovaladas y aisladas,
una zona ancha (1 0-15 capas) de células parenquimá-
ticas, dispuestas de forma compacta, más pequeñas
que las de la zona exterior y presentando grupos de
haces fibrovasculares, 1-2 capas de células oleosas que
corren tangencialmente y 2-3 capas de células paren-
quimáticas de paredes gruesas; el endocarpio se com-
pone de una capa de células pétreas punteada engro-
sadas de tres lados (células en forma de vaso de
precipitados); la testa se compone de una capa de cé-
lulas rellenas de pigmento marrón; el perisperma es
muy ancho y se compone de células llenas de granos
de almidón, algunos granos de aleurona y células
oleosas.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 2,0%,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
coh,ol, Método I (561): N,o más de 10,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
A:fétodo I (561): No más de 9,0%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra reducida a polvo
fino
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 12,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra reducida a polvo
fino
Cri,terios de aceptación:, No más de 5,0% , servar bajo luz visible.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra reducida a polvo
fino
Criterios de aceptación: No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Piperina USP
ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP
Pimienta Negra en Polvo
DEFINICIÓN
La Pimienta Negra en Polvo es Pimienta Negra reducida a
polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 2,5%
de piperina, calculado con respecto a la materia seca.
Suplementos Dietéticos / Pimienta Negra 6119
IDENTIFICACIÓN
• A. La Pimienta Negra en Polvo cumple con los requisitos
de Pruebas Espe~íficas, Características Botánicas.
• B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,9 mg/mL de ER Piperina USP en
metano!
Solución estándar B: 2,0 mg/mL de borneo! en
metano!
Solución estándar C: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Pimienta Negra USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante aproximadamente 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Someter a ultrasonido durante 1 O
minutos aproximadamente 0,5 g de Pimienta Negra en
Polvo en 5 mL de metano!, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 15 µL de Solución estándar C,
7 µL de Solución muestra, y 3 µL de Solución estándar A
y de Solución estándar B, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de hexanos y acetato de etilo
(5:3)
Reactivo de derivatización: Una mezcla de 1 7 mL de
metano! enfriado en hielo, 2 mL de ácido acético,
1 mL de ácido sulfúrico y O, 1 mL de anisaldehído,
mezclados en ese orden .
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar 8, So-
lución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada (ver Cromatografta (621 )). Usar una cámara sa-
turada y acondicionar la placa a una humedad
relativa de aproximadamente 33% usando un disposi-
tivo adecuado. Desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente de la fase móvil haya recorrido aproxi-
madamente 7 cm desde el borde inferior de la placa .
Retirar la placa de la cámara, secar y observar bajo
luz UV a 254 nm. Derivatizar con el Reactivo de deri-
vatización, calentar durante 5 minutos a 100º y ob-
Criterios de aceptación: Bajo luz UV a 254 nm, el cro-
matograma de la Solución muestra presenta una banda
de extinción intensa a un valor RF de aproximadamente
O, 15 correspondiente al valor RF de la banda de pipe-
rina en el cromatograma de la Solución estándar A, una
banda de extinción a un valor RF de aproximadamente
0,02, y tres bandas de extinción de intensidades simila-
res, espaciadas a la misma distancia y localizadas entre
valores RF de aproximadamente 0,3 y 0,5. Bajo luz visi-
ble y después de la derivatización, el cromatograma de
la Solución muestra presenta bandas principales similares
en posición y color a las bandas principales del croma-
tograma de la Solución estándar C. Estas bandas inclu-
yen una banda de color verde oscuro, del mismo color
y valor RF que la banda de piperina en la Solución están-
dar A (valor RF de aproximadamente O, 15), una banda
de color violeta débil a un valor RF de aproximadamente
0,47 debajo de la posición de la banda debida a bor-
neo! en la Solución estándar B, y una banda verdosa en
la parte inferior del cromatograma a un valor RF de
aproximadamente 0,07. Se pueden observar otras ban-
das menores en los cromatogramas de la Solución mues-
tra y la Solución estándar C. No se detectan bandas azu-
les en el cromatograma de la Solución muestra a valores
RF de aproximadamente O, 1O y 0,58 (a diferencia de la
Pimienta Larga).
• C. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Piperina.
6120 Pimienta Negra /Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra obtenido a 343 nm presenta un pico prin-
cipal al tiempo de retención correspondiente a piperina.
Identificar otros picos de piperamida en el cromato-
grama de la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar B y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Pimienta Negra USP usado. El cromato-
grama de la Solución muestra presenta un pico adicional
correspondiente a piperilina. El cromatograma de la So-
lución muestra obtenido a 270 nm no presenta un pico
debido a (2E,4E)-N-isobutildecadienamida a un tiempo
de retención relativo de 1, 14 con respecto al pico de
piperina (a diferencia de la Pimienta Larga).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PIPERINA
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 ml de agua y agregar 0,5 ml de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1000 ml, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 95 5 cromatograma de la Solución estándar A a
18 55 45
25 20 80
28 20
80
35 55 45
40 95 5 preparar la Solución muestra (mg)
45 95 5 Criterios de aceptación:
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usando material de
vidrio con protección actínica.]
Solución estándar A: O, 1 mg/ml de ER Piperina USP en
metano!
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP en
metano! para obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 0,5 mg/ml. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Pimienta Negra en Polvo, pesados con exactitud, a
un matraz de 250 ml equipado con un condensador de
reflujo. Agregar 50 ml de metano!, someter a reflujo en
un baño de agua durante aproximadamente 20 minu-
tos, dejar que sedimente y decantar el sobrenadante.
Repetir hasta que el último extracto sea incoloro. Com-
binar los extractos, concentrar al vacío y ajustar el volu-
men hasta 100 ml con metano!. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 343 nm y 270 nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A tos de vasos espiralados; células parenquimáticas llenas
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
USP 37
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Pimienta Negra USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
piperina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% de-
terminada a partir del pico de piperina en inyecciones
repetidas, Solución estandar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
[NOTA-La Solución estándar A, Solución estándar By la
Solución muestra se mantienen estables durante 6 ho-
ras a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Pi-
mienta Negra USP usado, identificar los tiempos de
retención de los picos correspondientes a piperina y
piperilina en el cromatograma de la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de piperina en la porción de Pi-
mienta Negra en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x (5 x (V/W) x 100
ru = área del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solución muestra a 343
nm
rs = área del pico de piperina a partir del
343 nm
Cs = concentración de piperina en la Solución
estándar A (mg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
W = peso de Pimienta Negra en Polvo usada para
No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231 ): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
103 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Polvo de color gris negruzco; olor aro-
mático característico; sabor picante característico.
Microscópicas: Fragmentos de células de epicarpio po-
ligonales, algunas contienen pequeños prismas de oxa-
lato de calcio; células parenquimáticas que contienen
granos de almidón; celulas oleosas; esclereidas lignifica-
das; células pétreas punteadas y engrosadas de tres la-
dos (células en forma de vaso de precipitados) vistas
desde la superficie y desde los costados; células poligo-
nales de color marrón amarillento de la testa; fragmen-
de granos de almidón; granos de aleurona; gotas de
ac;eite; y granos de alm~dón.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método I (561 ): No menos de 10,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
Método I (561): No menos de 9,0%
USP 37
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra en Polvo
Análisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación:, No más de 12,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales \561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra en Polvo
Cri,terios de aceptación:, No más de 5,0% , luz UV a 254 nm. Derivatizar con el Reactivo de deri-
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
\561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra en Polvo
Criterios de aceptación: No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de la que se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Piperina USP
ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP
Extracto en Polvo de Pimienta Negra
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Pimienta Negra se prepara a partir
de Pimienta Negra usando disolventes adecuados tales
como acetato de etilo, metanol o una mezcla de estos
disolventes. La relación entre el material vegetal y el ex-
tracto es aproximadamente 15:1. Contiene no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
piperina con respecto a la materia seca. Puede contener
sustancias agregadas adecuadas como vehículos.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,9 mg/mL de ER Piperina USP en
metano!
Solución estándar B: 2,0 mg/mL de borneol en
metano!
Solución estándar C: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Pimienta Negra USP en metanol. Someter a ultraso-
nido durante aproximadamente 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Someter a ultrasonido durante apro-
ximadamente 1 O minutos una cantidad de Extracto en
Polvo, equivalente a aproximadamente 1 O mg de pipe-
rina, en 1 O mL de metanol, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía \621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 15 µL de Solución estándar C,
7 µL de Solución muestra, y 3 µL de Solución estándar A
y de Solución estándar B, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de hexanos y acetato de etilo
(5:3)
Reactivo de derivatización: Una mezcla de 1 7 mL de
metanol enfriado en hielo, 2 mL de ácido acético,
1 mL de ácido sulfúrico y O, 1 mL de anisaldehído,
mezclados en ese orden.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada (ver Cromatografw \621 )). Usar una cámara sa-
Suplementos Dietéticos/ Pimienta Negra 6121
turada y acondicionar la placa a una humedad
relativa de aproximadamente 33% usando un disposi-
tivo adecuado. Desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente de la fase móvil haya recorrido aproxi-
madamente 7 cm desde el borde inferior de la placa .
Retirar la placa de la cámara, secar y observar bajo
vatización, calentar durante 5 minutos a 1 00º y ob-
servar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: Bajo luz UV a 254 nm, el cro-
matograma de la Solución muestra presenta una banda
de extinción intensa a un valor Rr de aproximadamente
O, 15 correspondiente al valor R1 de la banda de pipe-
rina en el cromatograma de la Solución estándar A, una
banda de extinción a un valor R, de aproximadamente
0,02, y tres bandas de extinción de intensidades simila-
res, espaciadas a la misma distancia y localizadas entre
valores R, de aproximadamente 0,3 y 0,5. Bajo luz visi-
ble y después de la derivatización, el cromatograma de
la Solución muestra presenta bandas principales similares
en posición y color a las bandas principales del croma-
tograma de la Solución estándar C. Estas bandas inclu-
yen una banda de color verde oscuro, del mismo color
y valor Rr que la banda de piperina en la Solución están-
dar A (valor Rr de aproximadamente O, 15), una banda
de color violeta débil a un valor R, de aproximadamente
0,47 debajo de la posición de la banda debida a bor-
neo! en la Solución estándar B, y una banda verdosa en
la parte inferior del cromatograma a un valor Rr de
aproximadamente 0,07. Se pueden observar otras ban-
das menores en los cromatogramas de la Solución mues-
tra y la Solución estándar C. No se detectan bandas azu-
les en el cromatograma de la Solución muestra a valores
Rr de aproximadamente O, 1 O y 0,58 (a diferencia de la
Pimienta Larga).
• B. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Piperina.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra obtenido a 343 nm presenta un pico prin-
cipal al tiempo de retención correspondiente a piperina.
Identificar otros picos de piperamida en el cromato-
grama de la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Pimienta Negra USP usado. El cromato-
grama de la Solución muestra presenta un pico adicional
correspondiente a piperilina. El cromatograma de la So-
lución muestra obtenido a 270 nm no presenta un pico
debido a (2f,4E)-N-isobutildecadienamida a un tiempo
de retención relativo de 1, 14 con respecto al pico de
piperina (a diferencia de la Pimienta Larga).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PIPERINA
Solución A: Disolver O, 14 g de fosfato diácido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
ácido fosfórico. Diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
<min) (%) (O/o)
o 95 5
18 55 45
25 20 80
28 20 80
35 55 45
1
40 95 - 5
45 95 5
6122 Pimienta Negra /Suplementos Dietéticos
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usando material de
vidrio con protección actínica.]
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Piperina USP en
metanol
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP en
metanol para obtener una solución con una concentra-
ción de aproximadamente 0,5 mg/ml. Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir una cantidad pesada con
exactitud de Extracto en Polvo, equivalente a aproxima-
damente 25 mg de piperina, a un matraz volumétrico
de 25 mL, agregar 15 mL de metanol y someter a ultra-
sonido durante 1 O minutos. Enfriar a temperatura am-
biente, diluir con metano! a volumen y mezclar. Diluir
la solución obtenida en metano! (1 :1 O). Antes de la in-
yección, pasar a través de un filtro de membrana con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 343 nm y 270 nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm, 100
A • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Pimienta Negra USP usado.
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
piperina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,5% de-
terminada a partir del pico de piperina en inyecciones
repetidas, Solución estandar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
[NOTA-La Solución estándar A, la Solución estándar B y
la Solución muestra se mantienen estables durante 6
horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Pi-
mienta Negra USP usado, identificar los tiempos de
retención de los picos correspondientes a piperina y
piperilina en el cromatograma de la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de piperina en la porción de Ex-
tracto en Polvo tomada:
P = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solución muestra a 343
nm
rs = área del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Soluc1ón estándar A a
343 nm
Cs = concentración de piperina en la Solución
estándar A (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Solución muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
piperina en la porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = (PI L) x 100
P = contenido de piperina según se determinó
anteriormente (%)
USP 37
L = cantidad declarada de piperina (%)
Criterios de aceptación: 90%-110% con respecto a la
materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)// (231): No más de 20 µg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis 1~ Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
reqursrtos .
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PR~EBAS ESPECÍFICAS
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto en Polvo
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 7,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Piperina USP
ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP
Clorhidrato de Piridoxina-ver Clorhidrato
de Piridoxina en Monografías Generales
Clorhidrato de Piridoxina, Tabletas-ver
Clorhidrato de Piridoxina, Tabletas en
Monografías Generales
Citrato de Potasio-ver Citrato de Potasio
en Monografías Generales
Citrato de Potasio, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Citrato de Potasio contienen no menos de
90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada de
potasio (K).
IDENTIFICACIÓN
• A. La Solución muestra en Contenido produce líneas de
emisión o absorción a las longitudes de ondas caracterís-
ticas del pota~io.
• B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES, Citratos (191)
Análisis: Moler una Tableta hasta polvo fino en un mor-
tero. Transferir el polvo a un tubo de centrífuga, agre-
gar 2-5 mL de agua, someter a ultrasonido durante 1
minuto, agitar y centrifugar.
Criterios de aceptación: El sobrenadante cumple con
los requisitos de la prueba.
USP 37
CONTENIDO
• CONTENIDO DE POTASIO, PROCEDIMIENTO 1
[NOTA-Se encuentra disponible comercialmente una so-
lución madre del estándar con diferentes concentracio-
nes de potasio, la cual se puede usar para la prepara-
ción de la Solución madre del estándar. Puede realizarse
el ajuste volumétrico necesario en la Solución estándar.
Las concentraciones de la Solución estándar y la Solución
muestra pueden modificarse para que se adaften al
intervalo lineal o de trabajo del instrumento.
Solución madre del estándar: Solución de cloruro de
potasio, previamente secada a 105º durante 2 horas, en
agua que contenga 1000 mg/L de potasio.
Solución estándar: Agregar 20 mL de agua y 1 mL de
ácido nítrico a un matraz volumétrico de 50 mL, y mez-
clar meticulosamente. Pipetear y transferir 10,0 mL de
Solución madre del estándar a un matraz volumétrico, y
diluir con agua a volumen hasta obtener una solución
con una concentración conocida de aproximadamente
200 µ9/mL de potasio.
Solucion muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción, pesada con
exactitud, de las Tabletas reducidas a polvo, equivalente
a aproximadamente O, 1 g de potasio, a un matraz de
50 ml. Agregar 1 O mL de ácido nítrico y calentar la so-
lución a ebullición suave durante la cual se desprenda
humo. Calentar a ebullición la solución durante 30 mi-
nutos adicionales agitando por rotación suave en forma
constante, periodo durante el cual no debe observarse
desprendimiento de humo. Enfriar la solución hasta
temperatura ambiente. Transferir cuantitativamente
toda la solución a un matraz volumétrico de 500 mL,
diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema de plasma inductivamente acoplado
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectroscopía de emisión atómica
Longitud de onda analítica: 766,49 nm. [NOTA-Las
condiciones operativas pueden desarrollarse y optimi-
zarse basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. La configuración típica incluye una potencia de
radiofrecuencia (RF) de aproximadamente 1 300 vatios,
un flujo de antorcha de argón de aproximadamente
15 L/min, un flujo auxiliar de argón de aproximada-
mente 0,2 L/min y una velocidad de flujo del nebuliza-
dor de aproximadamente 0,8 L/min.]
Blanco: Solución de ácido nítrico al 2%
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Blanco
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta de la Solución muestra
rs = respuesta
de la Solución estándar
Cs = concentración de potasio en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de potasio
• CONTENIDO DE POTASIO, PROCEDIMIENTO 2
Solución madre del estándar A: 1 00 µg/mL de cloruro
de potasio, previamente secado a 105º durante 2 horas
en agua
Solución madre del estándar B: 1 O µg/mL de potasio,
a partir de Solución madre del estándar A en ácido clor-
hídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solución madre del estándar B a sendos ma-
traces volumétricos de 100 mL. Diluir el contenido de
cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen
para obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5;
2,0 y 2,5 µg/mL de potasio.
Suplementos Dietéticos / Potasio 6123
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir el equivalente a 5 Tabletas a un
crisol de porcelana. Calentar el crisol en una mufla
mantenida a 550~ durante 6-12 horas y enfriar. Agre-
gar 60 mL de ácido clorhídrico y calentar a ebullición
suave sobre una placa de calentamiento o en un baño
de vapor durante 30 minutos, enjuagando intermitente-
mente la superficie interior del crisol con ácido clorhí-
drico 6 N. Enfriar y transferir cuantitativamente el conte-
nido del crisol a un matraz volumétrico de 100 mL.
Enjuagar el crisol con pequeñas porciones de ácido clor-
hídrico 6 N y agregar los enjuagues al matraz. Diluir
con agua a volumen y filtrar, desechando los primeros
5 mL del filtrado. Diluir esta solución cuantitativamente
con ácido clorhídrico O, 125 N hasta obtener una con-
centración nominal de 2 µg/mL de potasio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 766,5 nm
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones, usando el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de la concentración, en µg/mL, y
trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco puntos
graficados. A partir de la gráfica así obtenida, determi-
nar la concentración, C, en ~tg/mL de potasio en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de potasio determinada en la
Solución muestra según se interpola a partir
de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 2 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Escherichia coli
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN (2040)
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 30 min
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de Pota-
sio, Procedimiento 7 o Procedimiento 2, en Contenido, re-
alizando los ajustes volumétricos necesarios.
Solución muestra: Si se usa el Contenido de Potasio,
Procedimiento 7, pipetear y transferir 1 0,0 mL de la so-
lución en análisis combinada y filtrada a un matraz
volumétrico de 50 mL y diluir con solución de ácido
nítrico al 2% hasta 50 mL. Si se usa el Contenido de
Potasio, Procedimiento 2, diluir la solución en análisis
combinada y filtrada con ácido clorhídrico O, 125 N
hasta una concentración que se encuentre dentro del
intervalo de las Soluciones estándar.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) disuelta:
Resultado = (C x O x VIL) x 100
6124 Potasio /Suplementos Dietéticos USP 37

C = concentracion medida de potasio en la en el máximo a 371 nm es 75,5-80,0, calculada con

So!ucion muPstra (mg/mL) respecto a la sustancia ¡;mhidra.
O = factor de dilución de la Solución muestra • C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
V = volumen de Medio, 900 mL Análisis: Proceder se9ún se indica en la Valoración.
L = cantidad declarada (mg/Tableta) Criterios de aceptacion: El tiempo de retención del
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla- pico principal de la Solución muestra corresponde al de
rada de K la Solución estándar, según se obtienen en la Valoración.
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
VALORACIÓN
REQUISITOS ADICIONALES • PROCEDIMIENTO
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Fase móvil: Metano!, agua y ácido fosfórico
cerrados. (100:100:1)
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de potasio en Solución de aptitud del sistema: 0,02 mg/ml de ER
términos de mg/Tabieta. Quercetina USP, de ER Kampferol USP y de ER lsorham-
netina USP en metano!
Solución estándar: Transferir 1 O mg de ER Quercetina
USP a un matraz volumétrico de 50 ml y agregar
20 ml de metano! para disolver. Agregar 20 ml de
Gluconato de Potasio-ver Gluconato de agua, mezclar y diluir con metano! a volumen.
Solución muestra: Transferir 1 O mg de Quercetina a un
Potasio en Monografías Generales matraz volumétrico de 50 ml y agregar 20 ml de meta-
no! para disolver. Agregar 20 ml de agua, mezclar y
diluir con metano! a volumen.
Sistema cromato9ráfico
Gluconato de Potasio, Solución Oral- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
ver Gluconato de Potasio, Solución Oral en Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Monografías Generales Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno l 1
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del Sistema
Gluconato de Potasio, Tabletas-ver Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
Gluconato de Potasio, Tabletas en Monografías estándar
Generales [NOTA-Los tiempos de retención relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son 1,0; 1 ,8 y 2,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre kaempferol e
Prolina-ver Prolina en Monografías isorhamnetina, Solución de aptitud del sístema
Generales Eficiencia de la columna: No menos de 2000 platos
teóricos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar
Agregar lo siguiente: Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de Quercetina en la porción de
Muestra tomada:
•Quercetina
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
/~OH
11 1 ru = respuesta del pico de la Solución muestra
HO!~Yº.Y,,~OH 1 . 2H,O r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Quercetina USP en la
Y(:('oH Solución estándar (mg/ml)
OH O
Cu = concentración de Quercetina en la Solución
muestra (m9/ml)
C1sH1o01 302,2 Criterios de aceptacion: 98,0%-102,0%, con respecto
2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-4H-1-benzopyran- a la sustancia anhidra
4-one;
Quercetina dihidrato 338,2 IMPUREZAS
[6151-25-3]. • RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de o, 1 %
• METALES PESADOS (231): No más de 20 µg/g
DEFINICIÓN • KAMPFEROL Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
la Quercetina contiene no menos de 98,0% y no más de Fase móvil, Solución de aptitud del sistema, Solución
102,0% de quercetina (C1sH1o01), calculado con respecto estándar, Solución muestra y Aptitud del sistema:
a la sustancia anhidra. Proceder según se indica en la Valoración.
Sistema cromatográfico: Proceder según se indica en
IDENTIFICACIÓN la Valoración pero usar detección UV a 270 nm .
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K). [NOTA-la sustan- Análisis
cia es un dihidrato.] Muestra: Solución muestra
• 8. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA (197U) Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la
Longitud de onda analítica: 210-450 nm porción de la Muestra tomada:
Solución muestra: 1 O µg/ml de Quercetina en meta-
no!. Filtrar si fuera necesario. Resultado = (ru/r1) x 100
Criterios de aceptación: El espectro presenta dos máxi-
mos de absorción a 255 nm y 371 nm. La absortividad
USP 37
ru = respuesta del pico de cada impureza individual
de la Solución muestra
rr = suma de las respuestas de todos los picos de
la Solución muestra
Criterios de aceptación
Kampferol: No más de 0,5%
Impurezas individuales: No más de O, 1%
Impurezas totales: No más de 2,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921)
Muestra: 100 mg
Criterios de aceptación: No más de 12,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados, impermeables y resistentes a la luz.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER lsorhamnetina USP
ER Kampferol USP
ER Quercetina USP .1t.usp31
Regaliz
DEFINICIÓN
El Regaliz consiste en las raíces, rizomas y estolones de Glyc-
yrrhiza glabra L. o Glycyrrhiza uralensis Fish. ex DC. (Fam.
Fabaceae). Contiene no menos de 2,5% de ácido glicirrí-
cico (C42H62016), calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 5 mg/mL de ER Ácido Glicirrícico
USP en una mezcla de alcohol y agua (7:3)
Solución muestra: 2 g de Regaliz reducido a polvo en
1 O mL de una mezcla de alcohol y agua (7:3). Calentar
agitando en un baño de agua durante 5 minutos, en-
friar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 2 µL
Fase móvil: Alcohol butílico, ácido acético glacial y
a_g,ua (7:1 :2)
Analisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma en una cámara no satu-
rada hasta una longitud de 1 O cm. Observar la placa
bajo luz a 254 nm.
Criterios de aceptación: Los cromatogramas presentan
una zona de color púrpura oscura, entre otras manchas,
debidas a ácido glicirncico a un valor RF de 0,4.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ÁCIDO GLICIRRÍCICO
Diluyente: Alcohol y agua (1 :1)
Solución A: Acido acético diluido (1 en 15)
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución A (2:?)
Solución estándar: 0,25 mg/mL de ER Acido Glicirrícico
USP en Diluyente
Solución muestra: Transferir 500 mg de Regaliz, redu-
cido a polvo, a un matraz adecuado. Agregar 70 mL de
Diluyente, agitar durante 15 minutos, centrifugar y de-
cantar el sobrenadante en un matraz volumétrico de
100 ml. Mezclar el residuo con 25 mL de Diluyente, agi-
tar durante 15 minutos, centrifugar y agregar el sobre-
nadante al matraz volumétrico. Diluir con Diluyente a
volumen y filtrar.
Suplementos Dietéticos / Regaliz 6125
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos determinados a partir de ácido glicirrícico
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido glicirrícico,
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de ácido glicirrícico (C2H62016)
en la porción de Regaliz tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de ácido glicirrícico de la
Solución muestra
rs = área del pico de ácido glicirrícico de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Ácido Glicirrícico USP en
la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
W = peso de Regaliz tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METftLES PESADOS, Método)// (231): No más de 30 µg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El tallo terrestre es casi cilíndrico, de
0,5-3,0 cm de diámetro y más de 1 m de longitud; es
de color marrón oscuro a marrón rojizo en el exterior y
arrugado longitudinalmente. A menudo presenta lenti-
celas, yemas pequeñas y hojas esacamosas. El corte
transversal presenta un borde bien definido entre el
floema y el xilema, y una estructura radial que frecuen-
temente presenta hendiduras radiadas.
Microscópicas: El corte transversal presenta varias capas
de súber de color marrón amarillento y una capa de
felodermis que tiene 1-3 células de espesor. La corteza
presenta radios medulares y se alternan porciones cribo-
sas obliteradas y radiadas. El floema presenta grupos de
fibras de floema rodeados por células con cristales, con
paredes gruesas pero no completamente lignificadas.
Los vasos están acompañados por fibras de xilema ro-
deadas por células con cristales y por células parenqui-
máticas del xilema. Las células parenquimáticas contie-
nen granos de almidón y a menudo contienen cristales
individuales de oxalato de calcio .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
coh,ol, Método 2 (561): ~o menos de 25,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(?61): No más de 2,0%
• PERDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105º
du~ante 6 horas: pierde 110 más de 12,0% de su peso/
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 2,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar en un lugar fresco y seco.
6126 Regaliz /Suplementos Dietéticos
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ácido Glicirrícico USP
Regaliz en Polvo
DEFINICIÓN
El Regaliz en Polvo es Regaliz reducido a polvo fino o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 2,5% de ácido .
glicirrícico (C42 H62016), calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA , CONTAMINANTES
Solución estándar: 5 mg/mL de ER Acido Glicirrícico
USP en una mezcla de alcohol y agua (7:3)
Solución muestra: 2 g de Regaliz en Polvo en 1 O mL de
una mezcla de alcohol y agua (7:3). Calentar agitando
en un baño de agua durante 5 minutos, enfriar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 2 µL
Fase móvil: Alcohol butílico, ácido acético glacial y
a~ua (7:1 :2)
Analisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma en una cámara no satu-
rada hasta una longitud de 1 O cm. Observar la placa
bajo luz a 254 nm.
Criterios de aceptación: Los cromatogramas presentan
una zona de color púrpura oscura, entre otras manchas,
debidas a ácido glicirncico a un valor Rr de 0,4.
COMPOSICIÓN , , No más de 7,0%
• CONTENIDO DE ACIDO GLICIRRICICO
Diluyente: Alcohol y agua (1 :1)
Solución A: Acido acético diluido (1 en 15)
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución A (2:~)
Solución estándar: 0,25 mg/mL de ER Acido Glicirrícico
USP en Diluyente
Solución muestra: Transferir 500 mg de Regaliz en
Polvo a un matraz adecuado. Agregar 70 mL de Dilu-
yente, agitar durante 15 minutos, centrifugar y decantar
el sobrenadante a un matraz volumétrico de 100 ml.
Mezclar el residuo con 25 mL de Diluyente, agitar du-
rante 15 minutos, centrifugar y agregar el sobrenadante
al matraz volumétrico. Diluir con Diluyente a volumen y
filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos determinados a partir de ácido glicirrícico
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido glicirrícico
USP 37
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de ácido glicirrícico (C42H62016)
en la porción de Regaliz en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de ácido glicirrícico de la
Solución muestra
r5 = área del pico de ácido glicirrícico de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Ácido Glicirrícico USP en
la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen final de Solución muestra (mL)
Wu = peso de Regaliz en Polvo tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
• METALES PESADOS, Método fil (231): No más de 30 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Es de color marrón amarillento claro y
tiene un olor ligero y sabor dulce.
Microscópicas: Al microscopio, el Regaliz en Polvo pre-
senta células parenquimáticas que contienen granos de
almidón y cristales solitarios de oxalato de calcio, frag-
mentos de células parenquimáticas, te¡·ido suberoso, ha-
ces de fibras esclerenquimáticas amari las acompañados
por hileras de células con cristales y vasos con puntua-
ciones reticuladas y escalariformes .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método 11, Extractos Solu-
bles en Alcohol (561): No menos de 25,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105º
durante 6 horas: pierde no más de 12,0% de su peso .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
,
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases
bien cerrados, en un lugar fresco y seco.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta contenida en el artículo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ácido Glicirrícico USP
Extracto en Polvo de Regaliz
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Regaliz se prepara a partir de Regaliz
triturado y extraído con agua u otros disolventes resi-
duales tales como alcohol, agua o mezclas de estos disol-
ventes. La relación entre el material vegetal crudo y el
Extracto en Polvo está entre 5:1 y 7:1. Contiene no me-
nos de 6,0% de ácido glicirrícico (C42H62016), calculado
con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA ,
Solución estándar: 5 mg/mL de ER Acido Glicirrícico
USP en una mezcla de alcohol y agua (7:3)
USP 37
Solución muestra: 60 mg/mL de Extracto en Polvo de
Regaliz en una mezcla de alcohol y agua (1: 1).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 2 µL
Fase móvil: Alcohol butílico, ácido acético glacial y
a9ua (7:1 :2)
Ana lisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma en una cámara no satu-
rada hasta una longitud de 1O cm. Observar la placa
bajo luz a 254 nm.
Criterios de aceptación: Los cromatogramas presentan
una zona de color púrpura oscura, entre otras manchas,
debidas a ácido glicirncico a un valor Rr de 0,4.
COMPOSICIÓN , , tra~tos Botánicos (565), Etiquetado.
• CONTENIDO DE ACIDO GLICIRRICICO
Diluyente: Al,cohol y agua (1 :1)
Solución A: Acido acético diluido (1 en 15)
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución A (2:~)
Solución estándar: 0,25 mg/mL de ER Acido Glicirrícico
USP en Diluyente
Solución muestra: Transferir 150 mg de Extracto en
Polvo de Regaliz a un matraz. Agregar 25 mL de Dilu-
yente, calentar a 50º durante 30 minutos, enfriar, cen-
trifugar y decantar el sobrenadante en un matraz volu-
métrico de 1 00 mL. Mezclar el residuo con 20 mL de
Diluyente, repetir el procedimiento anterior y diluir con
Diluyente a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
teóricos
Factor de asimetría: No más de 2,0
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de ácido glicirrícico (C42H62016)
en la porción de Extracto en Polvo de Regaliz tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = área del pico de ácido glicirrícico de la
Solución muestra
rs = área del pico de ácido glicirrícico de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Ácido Glicirrícico USP en
la Solución estándar (mg/ml)
V = volumen de Solución muestra, 100 mL
W = peso de Extracto en Polvo de Regaliz tomado
para preparar la Solución muestra (mg)
Criterios de aceptación: No menos de 6,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)!! (231): No más de 30 µg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105c
dur,ante 6 horas: pierde r;o más de 1 0,0% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No más de 12,0%
Suplementos Dieteticos /Rutina 6127
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artículo. La etiqueta tam-
bién indica el contenido de ácido glicirrícico, el disol-
vente o mezcla de disolventes de extracción usados para
la preparación y la relación entre el material inicial y el
producto final. La etiqueta presenta la siguiente declara-
ción: "Las cantidades excesivas o el uso durante periodos
prolongados de Regaliz pueden ocasionar hipertensión
arterial o niveles bajos de potasio, las cuales se han rela-
cionado con arritmiil y/o debilidad muscular. El Regaliz
puede empeorar los efectos de la insuficiencia cardíaca
congestiva, cirrosis o insuficiencia renal. El uso de diuréti-
cos puede incrementar el riesgo. Si está embarazada o
lactando, consulte con un profesional de la salud antes
de usar este producto." Cumple con los requisitos en Ex-
• ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Glicirrícico USP
Extracto Fluido de Regaliz-ver Extracto
Fluido de Regaliz, NF
Riboflavina-ver Ribof/avina en Monografías
Generales
Riboflavina, Tabletas-ver Riboflavina,
Tabletas en Monografías Generales
Riboflavina 5' -Fosfato Sódico-ver
Riboflavina 5' -Fosfato Sódico en Monografías
Generales
Agregar lo siguiente:
•Rutina
HO
OH
o~
• 3Hz0
OH
HO-<}-o OH
HO OH ~-(
Hci OH
C21H30Ü16 · 3H20 664,56
3-Rhamnoglucoside of 5,7,3',4'-tetrahydroxyflavonol;
6-0-a-L-Ramnopiranosil-¡3-o-glucósido de 2-(3,4-dihidroxife-
nil)-5,7-dihidroxi-4H-cromen-4-ona-3-ilo [250249-75-3].
DEFINICIÓN
La Rutina contiene no menos de 95,0% y no más de
101,0% de rutina (C21H30Ü16), calculado con respecto a la
sustancia anhidra .
6128 Rutina /Suplementos Dietéticos USP 37

IDENTIFICACIÓN Fase móvil: Ver la Tabla 7.

• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROIO (l 97K)
• 8. ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA (197U) Tabla 1
Longitud de onda analítica: 210-450 nm
Solución muestra: 20 µg/ml de Rutina en metano!. Fil- Tiempo Solución A Solución B
trar si fuera necesario. lmin) lº/o\ (O/o)
Criterios de aceptación: El espectro presenta dos máxi- o 50 50
mos de absorción a 257 nm y 358 nm. La absortividad 10 o 100
en el máximo a 358 nm es 30,5--33,0, calculada con 15 o 100
respecto a la sustancia anhidra. 16 50 50
• C. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se- 20 50 50
gún se obtienen en la prueba de Quercetino y Otros Com- Solución estándar A: Transferir 1O mg de ER Rutina
puestos Relacionados. USP a un matraz volumétrico de 1 O ml, agregar 2 ml
VALORACIÓN
de metano! y mezclar hasta disolver. Diluir con Solución
• PROCEDIMIENTO
B a volumen.
Muestra: 200 mg de Rutina Solución estándar B: 20 µg/ml de ER Rutina USP en
Blanco: 20 ml de dimetilformamida Solución B, preparada a partir de la dilución de Solución
Sistema volumétrico estándar A con Solución B
(Ver Volumetrío (541 ).) Solución estándar C: 20 µg/ml de ER Quercetina USP
Modo: Valoración directa en Solución B
Solución volumétrica: Hidróxido de tetrabutilamonio Solución muestra: Transferir 1 00 mg de Rutina a un
0,1 M SV matraz volumétrico de 100 mL, agregar 20 ml de meta-
Detección del punto final: Potenciométrica no! y mezclar hasta disolver. Diluir con Solución B a
Análisis: Disolver la Muestra en 20 ml de dimetilforma- volumen.
mida y valorar con Solución volumétrico. Realizar una de- Sistema cromato9ráfico
terminación con el Blanco y hacer las correcciones (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
necesarias. Modo: HPLC
Calcular el porcentaje de rutina (C21H30Ü16) en la por- Detector: UV 280 nm
ción de la Muestra tomada: Columna: 4 mm x 25 cm; relleno L7 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Resultado = {[(Vs - Va) x M x f]/W} x 100 Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Vs = volumen de la Solución volumétrico consumido Aptitud del Sistema
por la Muestro (mL) Muestra: Solución estándar A
Vs = volumen de la Solución volumétrica consumido [NOTA-Los tiempos de retención relativos para rutina,
por el Blanco (ml) kaempferol 3-rutinósido, isoquercitrósido y quercetina
M = molaridad real de la Solución volumétrica son 1,0; 1, 1; 1,2 y 2,5, respectivamente.]
(mmol/ml) Requisitos de aptitud
F = factor de equivalencia, 305,3 mg/mmol Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
W = peso de la Muestra (mg) de la Solución estándar A es similar al cromatograma
Criterios de aceptación: 95,0%-101,0%, con respecto de referencia provisto con el ER Rutina USP usado.
a la sustancia anhidra Resolución: No menos de 1,5, entre los picos de ru-
tina y kaempferol 3-rutinósido
IMPUREZAS Análisis
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de o, 1% Muestras: Solución estándar B, Solución estándar C y
• SUSTANCIAS QUE ABSORBEN LA LUZ Solución muestra
Longitud de onda analítica: 450 nm-800 nm Calcular el porcentaje de quercetina 1 en la porción de
Solución muestra: Disolver 0,200 g de Rutina en 40 ml Rutina tomada:
de 2-propanol. Mezclar durante 15 minutos, diluir con
2-propanol hasta 50,0 ml y filtrar. Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 100
Criterios de aceptación: La absorbancia de cualquier
sustancia es no más de O, 1O. ru = respuesta del pico de quercetina de la Solución
• SUSTANCIAS INSOLUBLES EN METANOL muestra
Muestra: 2,5 g rs = respuesta del pico de quercetina de la Solución
Análisis: Agitar la Muestro durante 15 minutos en estándar c
50 ml de metano! a 20º-25º. Filtrar bajo presión redu- Cs = concentración de ER Quercetina USP en la
cida a través de un filtro de vidrio sinterizado previa- Solución estándar C (mg/ml)
mente secado durante 15 minutos a 100º-105º, en- Cu = concentraciónde Rutina en la Solución muestro
friado en un desecador y tarado. Lavar el filtro tres (mg/mL)
veces con 20 mL de metano!. Secar el filtro durante 30 Calcular el porcentaje de cada impureza en la porción
minutos a 105º. Dejar que se enfríe y pesar. de Rutina tomada: [NOTA-No tomar en cuenta nin-
Criterios de aceptación: El residuo pesa no más de guna impureza menor de O, 1 %.]
75 mg (3%).
•METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 20 µg/g Resultado = (ru/r5) x (Cs/Cu) x F x 100
• QUERCETINA Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Solución A: Mezclar 50 ml de tetrahidrofurano con ru = respuesta del pico de cada impureza de la
950 ml de una solución de 15,6 mg/ml de fosfato mo- Solución muestra
nobásico de sodio. Ajustar con ácido fosfórico a un pH r5 = respuesta del pico de rutina de la Solución
de 3,0. estándar B
Solución B: Mezclar 400 ml de tetrahidrofurano con Cs = concentración de ER Rutina USP en la Solución
600 mL de una solución de 15,6 mg/ml de fosfato mo- estándar B (mg/ml)
-----
nobásico de sodio. Ajustar con ácido fosfórico a un pH 1 2-(3,4-Dihidroxifenil)-3,5,7-trihidroxi-4H-1-benzopiran-4-ona.
de 3,0.
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Salvia 6129

Cu = concentración
de Rutina en la Solución muestra Volumen de aplicación: 5 pl en bandas de 8 mm
(mg/mL) Fase móvil A: Una mezcla de acetato de etilo, cloro-
F = factor de corrección para cada impureza formo, tolueno, ácido fórmico y metanol (8:6:4:4:1)
individual (ver la Tabla 2) Fase móvil B: Una mezcla de eter de petróleo y ace-
Criterios de aceptación: Ver la Tabla 2. tato de etilo (4:1)
Análisis
Tabla 2 Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Tiempo Criterios de Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
de Reten- Factor de Aceptación, tografía en capa delgada de alta resolución adecuada.
ción Corrección No más de Usar una cámara saturada y acondicionar la placa a
Nombre Relativo 'J:\ (O/o)
una humedad relativa de aproximadamente 33%
Kaempferol usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los croma-
3-rutinósido• 11 1 20 togramas en la Fase móvil A hasta que el frente de la
lsoauercitrósidob 12 08 20 fase móvil haya recorrido aproximadamente 40% de la
Ouercetina - - 20 placa. Retirar la placa y dejar que se seque. Desarrollar
Cualquier otra im-
los cromatogramas en una cámara saturada que con-
oureza - 1 1 o tenga Fase móvil B hasta que el frente de la fase móvil
haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
lmourezas totales - - 40 placa. Retirar la placa, secar y observar bajo luz visible
• 3-[[6-0-(6-Desoxi-a-L-mannopiranosil)-/3-D-g lucopi ranosil]oxi]-5, 7-dihidro- y luz UV a 254 nm y 365 nm.
xi-2-(4-hidroxifenil)-4H-1-benzopiran-4-ona.
Criterios de aceptación
b 2-(3,4-Dihidroxifenil)-3-(/j-o-glucofuranosiloxi)-5, 7-dihidroxi-4H-1-benzo-
Bajo luz visible, el cromatograma de la Solución muestra
pi ran-4-ona.
presenta tres bandas con posiciones y colores similares
PRUEBAS ESPECÍFICAS a las béjndas en el cromatograma de la Solución están-
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921) dar B. Estas incluyen una banda de color rosado en el
Muestra: . 100 mg tercio superior del cromatograma, similar en valor Rr y
Criterios de aceptación: 7,5%-9,5% color a la banda de tanshinona llA en el cromatograma
de la Solución estándar A, una banda de color anaran-
ffEQUISITOS ADICIONALES jado amarillento en el tercio superior del cromato-
• ENVASADO Y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien grama y una banda de color anaranjado aproximada-
cerrados, impermeables y resistentes a la luz. mente a la mitad del cromatograma debida a
• ESTANDARES Di REFERENCIA USP {11) tanshinona 1 y criptotanshinona, respectivamente.
ER Qu~rcetina USP Bajo luz UV a 365 nm, el cromatograma de la Solución
ER Rutina USP•úsm muestra presenta tres bandas de color azul con posi-
ciones y colores similares a las ba_ridas en el cromato-
grama de la Solución estándar B. Estas incluyen una
banda de color azul intenso en el tercio inferior del
cromatograma, correspondiente en valor Rr y color a la
Salvia China banda de ácido salvianólico B en el cromatograma de
la Solución estándar A, y dos bandas menores de color
DEFINICIÓN azul en el tercio inferior del cromatograma y por en-
La Salvia China consta de las raíces y los rizomas secos de cima de la banda de ácido salvianólico B, debidas a
Salvia miltiorrhiza Bunge, también conocida como Dans- ácido litospérmico y ácido rosmarínico.
hen (Fam. Lamiaceae). Contiene no menos de O, 1% de Bajo luz UV a 254 nm, el cromatograma de la Solución
tanshinona llA; no menos de 0,2% de tanshinonas totales, muestra presenta bandas de extinción intensas a valo-
calculado como la suma de criptotanshinona, tanshinona 1 res Rr correspondientes a los de tanshinona llA y ácido
y tanshinona 11~ y no menos de 3,0% de ácido salvianó- salvianólico B en el cromatograma de la Solución están-
lico B; todos calculados con respecto a la materia seca. Se dar A. El cromatograma de la Solución muestra también
recolecta durante la primavera o el otoño. presenta otras bandas de extinción que corresponden
en valores Rr a las bandas en el cromatograma de la
IDENTIFICACIÓN Solución estándar B.
• A. La Salvia China cumple con los requisitos de Pruebas • C. HPLC
Específicas, Carac;terísticas Botánicas. Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
• B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA tenido de Tanshinonas.
Solución estándar A: Una mezcla de aproximadamente Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
0,5 mg/mL de ER Tanshin9na llA USP y aproximada- ción muestra presenta el pico más intenso a un tiempo
mente 1,5 mg/mL de ER Acido Salvianólico B USP en de retención correspondiente al de tanshinona llA en el
alcohol cromatograma de la Solución estándar A. El cromato-
Solución estándar B: Aproximadamente 0,25 g de ER grama de la Solución muestra presenta dos picos adicio-
Extracto en Polvo de Salvia China USP en 5,0 mL de nales correspondientes a tanshinona 1 y criptotanshi-
alcohol. Someter a ultrasonido durante 15 minutos, nona, de menor intensidad y que representan
centrifugar y usar el sobrenadante. aproximadamente la mitad del contenido total de
Solución muestra: Aproximadamente 1,0 g de Salvia tanshinonas.
China, reducida a polvo fino, en 5,0 mL de alcohol. So- •D. HPLC
meter a ultrasonido durante 15 minutos, centrifugar y Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
usar el sobrenadante. tenido de Acido Salvianólico B.
Sistema cromato9ráfico Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del- ción muestra presenta un pico a un tiempo de retención
gada.) correspondiente al de ácido salvianólico B en el croma-
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra- tograma de la Solución estándar A.
fía con un tamaño promedio de part1cula de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
61 30 Salvia / Suplementos Dietéticos
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE TANSHINONAS
Solución A: Ácido fosfórico al 0,02% en agua (v/v)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 39 61
6 39 61
20 10 90
20 5 39 61
25 39 61
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usar material de vi-
drio con protección actínica. La Solución estándar y la
Solución muestra se mantienen estables durante 24 ho-
ras a temperatura ambiente.] . Criterios de aceptación: No menos de O, 1% de tanshi-
Solución estándar A: 0,02 mg/mL de ER Tansh1nona llA
USP en metanol
Solución estándar B: 2 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Salvia China USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 15 minutos y pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm. Dese-
char los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Aproximadamente 300 mg de Salvia
China reducidos a polvo fino y pesados con exactitud,
en 40 mL de metano!. Someter a ultrasonido durante
1
30 minutos, filtrar en un matraz volumétrico de 50 mL
y lavar el residuo y el papel de filtro con unos pocos mL
de metano!. Ajustar con metanol a volumen, mezclar y
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm. Desechar los primeros mL del
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 20º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Salvia China USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
tanshinona llA, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de tanshinona llA en in-
yecciones repetidas, Solución estándar A . . ácido salvianólico B
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de cnp-
totanshinona y tanshinona 1, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar y So-
lución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar A,
Solución estándar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Salvia
China USP usado, identificar los tiempos de retención
de los picos correspondientes a las diferentes tanshino-
nas en el cromatograma de la Solución muestra. Los
tiempos de retención relativo~ aproximad?s para los
distintos picos de criptotansh1nona, tansh1nona 1 y
tanshinona llA son 0,75; 0,79 y 1,00, respectivamente.
USP 37
Calcular los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona
1 y tanshinona llA en la porción de Salvia China
tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V!VV) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
rs = área del pico de tanshinona llA de la Solución
estándar A
Cs = concentración de ER Tanshinona llA USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso tomado de Salvia China para preparar la
Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para analitos (1, 18 para
criptotanshinona, 1,31 para tanshinona 1 y
1,00 para tanshinona llA) .
Sumar los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona 1
y tanshinona llA.
nona llA y no menos de 0,2% de tanshinonas totales,
calculados cqn respecto a l;¡i materia seca
• CONTENIDO DE ACIDO SALVIANOLICO B
Solución A: Ácido fosfórico al O, 1% en agua (v/v)
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (78:22)
[NOTA-La Solución estándar y la Solución muestra se
. mantienen estables durante 12 horas a temperatura
ambiente.]
Disolvente: Metanol y agua (8:2) ,
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Acido Salvianólico
B USP en Disolvente
Solución madre de la muestra: Aproximadamente
150 mg de Salvia China, reducidos a polvo fino y pesa-
dos con exactitud, en 40 mL de Disolvente. Someter a
ultrasonido durante 30 minutos, filtrar en un matraz vo-
lumétrico de 50 mL, y lavar el residuo y el papel de
filtro con unos pocos mL de Disolvente. Ajustar con Di-
solvente a volumen, mezclar y centrifugar una porción.
Solución muestra: Diluir una porción del sobrenadante
de la Solución madre de la muestra (1 :2) con Disolvente,
mezclar y pasar a través de un filtro de membra~a con
un tamaño de poro de 0,45 µm. Desechar los primeros
2 mL del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 286 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 20 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de ácido salvianólico B en
inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar, identi-
ficar el tiempo de retención del pico correspondiente a
ácido salvianólico B en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de ácido salvianólico B en la por-
ción de Salvia China tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/VV) x D x 100
ru = área del pico de ácido salvianólico B de la
Solución muestra
rs = área del pico de ácido salvianólico B de la
Solución estándar
USP 37
C1 = concentración de ER Ácido Salvianólico B USP
en la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de la Solución madre de la muestra
(mL)
W = peso de Salvia China usada para preparar la
Solución madre de la muestra (mg)
O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra, 2
Criterios de aceptación: No menos de 3,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Para agua desionizada: Usar agua desionizada de al me-
nos 18 megaohmios.
Solución muestra: Usar Salvia China previamente se-
cada durante 2 horas a 60º, molida hasta polvo grueso.
Pesar con exactitud 0,5 g del polvo, transferir a un vaso
para microondas cerrado y agregar 5-1 O mL de ácido
nítrico concentrado. [NOTA-En caso de una reacción
severa, apartar el vaso hasta que la reacción cese.] Di-
gerir bajo presión siguiendo las recomendaciones del fa-
bricante del instrumento, enfriar a una temperatura me-
nor de 60º y retirar el vaso. Enfriar a temperatura
ambiente, transferir el contenido con ayuda de tres por-
ciones de 1 O mL de agua desionizada a un matraz volu-
métrico de 250 mL, diluir con agua desionizada a volu-
men y mezclar. [NOTA-Si se observan depósitos,
centrifugar y usar el sobrenadante.]
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 2 µg/g
Cadmio: No más de 0,3 µg/g
Plomo: No más de 5 µg/g
Mercurio: No más de 0,2 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos .
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. , lado como la suma de criptotanshinona, tanshinona 1 y
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
aus,encia de Salmonella SP,P· y Escherichia coli.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Rizomas cortos y gruesos, en ocasiones
con restos de tallos en el ápice. Raíces, largas, cilíndri-
cas, ligeramente curvadas, algunas ramificadas, con rai-
cillas, de 10-20 cm de largo, 0,3-1,5 cm de diámetro.
Superficie externa de color rojo amarronado y rojo
amarronado oscuro, áspera, con arru_gas longitudinales.
La corteza de las raíces, en su mayona de color marrón
purpúreo, está suelta y por lo general se descama; la
corteza de las raíces jóvenes se adhiere estrechamente
al leño y no es fácil de descamar. La textura es dura y
frágil, de fractura libre, con corteza de color rojo ama-
rronado y leño de color amarillo grisáceo o marrón pur-
púreo, que presenta haces vasculares, de color blanco
amarillento, dispuestos radialmente.
Microscópicas
Sección transversal: Súber, de 4-8 hileras de células
con contenido de color marrón; pueden presentarse
tejidos de ritidoma; corteza amplia, células parenqui-
máticas que presentan gránulos de color marrón ro-
jizo; floema estrecho, en forma de media luna; cám-
bium formando un anillo; vasos de xilema, lignificados,
principalmente escalariformes y reticulados, numerosos
cerca del anillo del cámbium y escasos cerca de la mé-
Suplementos Dietético~ / Salvia 61 31
dula; fibras de xilema en haces, radialmente dispersos;
médula en el centro .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561 ): No más de 2,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Método 7 (561): No menos de 15,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
A;fétodo 2 (561): No menos de 35,0%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Salvia China reducida a polvo fino
Análisis: Secar a 1 05º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 1 3%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 4,0 g de Salvia China reducida a polvo fino
Cri,terios de aceptación~ No más de 10% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenida en el artículo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Salvia China USP
•ER Ácido Salvianólico B USPe ERR (Ol-feb-2014)
ER Tanshinona llA USP
Salvia China en Polvo
DEFINICIÓN
La Salvia China en Polvo es Salvia China reducida a polvo o
a polvo muy fino. Contiene no menos de O, 1 % de tanshi-
nona llA; no menos de 0,2% de tanshinonas totales, calcu-
tanshinona llA; y no menos de 3,0% de ácido salvianólico
B; todos calculados con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. La Salvia China en Polvo cumple con los requisitos de
Pruebas Específic9s, Características Botánicas.
• B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: Una mezcla de aproximadamente
0,5 mg/mL de ER Tanshin9na llA USP y aproximada-
mente 1,5 mg/mL de ER Acido Salvianólico B USP en
alcohol
Solución estándar B: Aproximadamente 0,25 g de ER
Extracto en Polvo de Salvia China USP en 5,0 mL de
alcohol. Someter a ultrasonido durante 15 minutos,
centrifugar y usar el sobrenadante.
Solución muestra: Aproximadamente 1,0 g de Salvia
China en Polvo en 5,0 mL de alcohol. Someter a ultra-
sonido durante 15 minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato!;Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL en bandas de 8 mm
Fase móvil A: Una mezcla de acetato de etilo, cloro-
formo, tolueno, ácido fórmico y metano! (8:6:4:4:1)
Fase móvil B: Una mezcla de eter de petróleo y ace-
tato de etilo (4:1)
61 32 Salvia / Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las muestras en bandas a una pla~~ para croma-
tografía en capa delgada de alta rf'.sc;:iluc1on adecuada.
Usar una cámara saturada y acond1c1onar la placa a
una humedad relativa de aproximadamente 33%
usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los croma-
togramas en la Fase móvil A hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido aproximadamente 40% de la
placa. Retirar la placa y dejar que se seque. Desarrollar
los cromatogramas en una cámara saturada que co,n-.
tenga Fase móvil B hasta que el frente de la fase movll
haya recorrido aproximadamente tres cua~os de .1~
placa. Retirar la placa, secar y observar ba¡o luz v1s1ble
y luz UV a 254 nm y 365 nm.
Criterios de aceptación .,
Bajo luz visible, el cromatogram~ de la Soluoon r:nu_estra
presenta tres bandas con posiciones y colores similares
a las bandas en el cromatograma de la Solución están-
dar B. Éstas incluyen una banda de ~o~or rosado en el
tercio superior del cromatograma, s1m1lar en valor RF y
color a la banda de tanshinona llA en el cromatograma
de la Solución estándar A, una banda de color anaran-
jado amarillento en el tercio superior del cromato-
grama y una banda de color anaranjado ~ aproxima-
damente la mitad del cromatograma debida a
tanshinona 1 y criptotanshinona, respectivamente.
Bajo luz UV a 365 nm, el cromatograma de la Solución
muestra presenta tres bandas de color azul con posi-
ciones y colores similares a las bapdas en el cromato-
grama de la Solución estándar B. Estas .in~luyf'.n una
banda de color azul intenso en el tercio inferior del
cromatograma, correspondiente en valor RF y color a la
banda de ácido salvianólico B en el cromatograma de
la Solución estándar A, y dos bandas menores de color
azul en el tercio inferior del cromatograma y por en-
cima de la banda de ácido salvianólico B, debidas a
ácido litospérmico y ácido rosmarínico.
Bajo luz UV a 254 nm, el cromatograma de la Solución
muestra presenta bandas de extinció~ intensas a, v~lo­
res RF correspondientes a los de tanshinona llA.Y ac1d?
salvianólico B en el cromatograma de la So/uoon estan-
dar A. El cromatograma de la Solución muestra también
presenta otras bandas de extinción que corresponden
en valores RF a las bandas en el cromatograma de la
Solución estándar B.
• C. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Tanshinonas.
Criterios de aceptación: ~I cro~a~ograma de la. Solu-
ción muestra presenta el pico mas intens~ a un tiempo
de retención correspondiente al de tanshinona llA en el
cromatograma de la Solución estándar A. El c_romat~-.
grama de la Solución muestra rresenta do~ picos ad.1c10-
nales correspondientes a tanshinona 1 y cnptotansh1-
nona de menor intensidad y que representan
apro~imadamente la mitad del contenido total de
tanshinonas.
•D. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acido Salvianólico B.
Criterios de aceptación: E~ cromatograma de la So/u.-,
ción muestra presenta ~n. pico a .un ,t1.empo de retenc1on
correspondiente al de aodo salv1anohco B en el croma-
tograma de la Solución estándar A.
USP 37
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE TANSHINONAS
Solución A: Ácido fosfórico al 0,02% en agua (v/v)
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (O/o) (O/o)
o 39 61
6 39 61
20 10 90
20 5 39 61
25 39 61
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usar material de vidrio
con protección actínica. La Solución estándar y la Solu-
ción muestra se mantienen estables durante 24 horas a
temperatura ambiente.] .
Solución estándar A: 0,02 mg/mL de ER Tanshinona llA
USP en metano!
Solución estándar B: 2 mg/mL de ER Extracto en P<?lvo
de Salvia China USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 15 minutos y pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm. Dese-
char los primeros mL del filtrado. .
Solución muestra: Aproximadamente 300 mg de Salvia
China en Polvo, pesados con exactitud, en 40 mL de
metano!. Someter a ultrasonido durante 30 minutos y
filtrar en un matraz volumétrico de 50 ml. Lavar el resi-
duo y el papel de filtro con unos pocos mL de metano),
ajustar con metano! a volumen, mezclar:..Y pasar a traves
de un filtro de membrana con un tamano de poro de
0,45 µm. Desechar )<?s primeros mL del filtrado.
Sistema cromato~raf1co
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de .la columna: .20°
Velocidad de flu¡o: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 1OµL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Salvia China USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
tanshinona llA, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de tanshinona llA en in-
yecciones repetidas, Solución estándar A . .
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de cnp-
totanshinona y tanshinona 1, Solución estándar B
Análisis ,
Muestras: Solución estándar A, Solución estandar By
Solución muestra
Usando los cromatogramas de la Solución estándar~'
Solución estándar B y el cromatograma de referencia.
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Sal~~a
China USP usado, ident~ficar los tiempos de retenc1?n
de los picos correspondientes a las diferentes tanshino-
nas en el cromatograma de la Solución muestra. Los
tiempos de retención relativo~ aproximad?s para los
distintos picos de criptotanshinona, tanshino~a 1 y
tanshinona llA son 0,75; 0,79 y 1,00, respectivamente.
Calcular los porcentajes de cr:iptotanshi~ona, .tanshinona
1 y tanshinona llA en la porc1on de Salvia China en
Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
USP 37
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
r, = área del pico de tanshinona llA de la Solución
estándar A
C = concentración de ER Tanshinona llA USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
W = peso de Salvia China en Polvo tomada para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para analitos (1, 18 para
criptotanshinona, 1, 31 para tanshinona 1 y
1,00 para tanshinona llA)
Sumar los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona 1
y tanshinona llA.
Criterios de aceptación: No menos de O, 1 % de tanshi-
nona llA y no menos de 0,2% de tanshinonas totales,
calculados cqn respecto a 19 materia seca
• CONTENIDO DE ACIDO SALVIANOLICO B
Solución A: Ácido fosfórico al O, 1 % en agua (v/v)
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (78:22)
[NOTA-La Solución estándar y la Solución muestra se
mantienen estables durante 12 horas a temperatura
ambiente.]
Disolvente: Metanol y agua (8:2)
Solución estándar: O, 1 mg/mL de ER Ácido Salvianólico
B USP en Disolvente
Solución madre de la muestra: Aproximadamente
150 mg de Salvia China en Polvo, pesados con exacti-
tud, en 40 mL de Disolvente. Someter a ultrasonido du-
rante 30 minutos y filtrar en un matraz volumétrico de
50 ml. Lavar el residuo y el papel de filtro con unos
pocos mL de Disolvente, ajustar con Disolvente a volu-
men, mezclar y centrifugar una porción.
Solución muestra: Diluir una porción del sobrenadante
de la Solución madre de la muestra (1 :2) con Disolvente
mezclar y pasar a través de un filtro de membrana co~
un tamaño de poro de 0,45 µm. Desechar los primeros
2 mL del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 286 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 20 ± 1 º
Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido salvianólico B
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del pico de ácido salvianólico B en
inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar, identi-
ficar el tiempo de retención del pico correspondiente a
ácido salvianólico B en la Solucion muestra.
Calcular el porcentaje de ácido salvianólico B en la por-
ción de Salvia China en Polvo tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (V/W) x D x 100
ru = área del pico de ácido salvianólico B de la
Solución muestra
rs = área de pico de ácido salvianólico B de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Ácido Salvianólico B USP
en la Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de la Solución madre de la muestra
(mL)
w = peso de Salvia China en Polvo usada para
preparar la Solución muestra (mg)
Suplementos Dietéticos/ Salvia 6133
D =factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de la Solucron madre de la
muestra, 2
Criterios de aceptación: No menos de 3,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Para agua desionizada: Usar agua desionizada de al me-
nos 18 megaohmios.
Solución muestra: Usar Salvia China en Polvo previa-
mente secada durante 2 horas a 60º, pesar con exacti-
tud 0,5 g, transferir a un vaso para microondas cerrado
y agregar 5-1 O ml de ácido n1trico concentrado.
[NOTA-En caso de una reacción severa, apartar el vaso
hasta que la reacción cese.] Digerir bajo presión si-
guiendo las recomendaciones del fabricante del instru-
mento, enfri_ar a una temperatura menor de 60º, retirar
el vaso'. enfriar a temperatura ambiente, transferir el
contenido con ayuda de tres porciones de 1 O mL de
agua desionizada a un matraz volumétrico de 250 mL,
agregar agua desionizada a volumen y mezclar.
[NOTA-Si se observan depósitos, centrifugar y usar el
sobrenadante.]
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 2 µg/g
Cadmio: No más de 0,3 µg/g
Plomo: No más de 5 µg/g
IV!ercurio: No más de ,0,2 ~tg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
• PRUEBAS i;>E RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
lev?duras no excede de 1 oi ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple co~ los requisitos de las pruebas para determinar la
aus,enc1a de Salmonella SP,p. y Escherichia coli
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Presenta un color marrón amarillento a
marrón rojizo.
Microscópicas: Presenta fragmentos de células subero-
sas, subrectangulares o poligonales, que contienen pig-
mentos de color marrón amarillento, de 1 0-150 µm de
diámetro; células parenquimáticas de corteza, subcua-
dradas o poligonales, que contienen pigmentos de
color. marrón rojizo; células pétreas, subredondeadas,
subtnangulares, subrectangulares o de forma irregular,
algunas elongadas, en su mayoría de 14-70 µm de diá-
metro, de hasta 270 µm de largo; fibras mayoritaria-
mente en haces, fusiformes, con extremos puntiagudos
oblicuos o redondeados y romos, con estrías oblicuas o
entrelazadas, de 10-60 µm de diámetro; y vasos reticu-
lados y con puntuaciones, de hasta 120 µm de
diámetro .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Al-
coh,ol, Método 7 (561): t;Jo menos de 15,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua
A;fétodo 2 (561 ): No menos de 35,0% '
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Salvia China en Polvo
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación:, No más de 1 3%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 4,0 g de Salvia China en Polvo
Cri,terios de aceptación:, No más de 10% ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 3,0%
61 34 Salvia / Suplementos Dietéticos USP 37

REQUISITOS ADICIONALES de vidrio con protección actínica para proteger las solu-
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien ciones de la luz.]
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a Disolvente: ryletanol y acetona (1 :1)
temperatura ambiente. Solución A: Acido fosfórico y agua (3:997)
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en Solución B: Acetonitrilo
latín y, después de la denominación oficial, las partes de Solución C: Metano!
la r;>lanta de las que se obtuvo el artículo. Fase móvil: Ver la Tabla 1.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Salvia China USP Tabla 1
ER Ácido Salvianólico B USP
ER Tanshinona llA USP Tiempo Solución A Solución B Solución C
tmin) (%) (%) (O/o)

o 100 o o
10 85 15 o
30 70 20 10
Hierba de San Juan 40 10 75 15
55 5 80 15
DEFINICIÓN
La Hierba de San Juan está compuesta por las partes aéreas
56 100 o o
o sum1dades florales desecadas de Hypericum perforatum L. 66 100 o o
(Fam._ '.iyperica.ceae), recolectadas poco antes o durante la Solución estándar A: 2,5 µg/mL de ER Oxibenzona
florac1on. Contiene no menos de 0,04% del total combi- USP en Disolvente
nado de hipericina (C10H160s) y pseudohipericina Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Extracto en Polvo
(C30H1609), y no menos de 0,6% de hiperforina de Hierba de San Juan USP en Disolvente
(C1sHs2Ü4), con respecto a la materia seca. So~ución muestra: Pesar y reducir a polvo 1 O g de
IDENTIFICACIÓN Hierba de San Juan. Transferir 1 g a un matraz de fondo
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA redondo equipado con un condensador y protegido de
DELGADA la luz, agrec;¡ar 50 mL de Disolvente y una barra mezcla-
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Hiperósido USP d<?ra magnetica, y calentar a 60º durante 2 horas,
en metano! mientras se mezcla. Enfriar a temperatura ambiente y
Solución muestra: Reducir a polvo fino 50 g de Hierba pa~a~ a través de un papel de filtro a un matraz volu-
de San juan. Agitar 1 O g en 100 mL de metano! durante metnco de 50 mL. Lavar el matraz y el residuo en el
aproximadamente 15 minutos y filtrar. filtro con Disolvente y diluir con los lavados a volumen.
Sistema cromato9ráfico Pasar la solución a través de un filtro de membrana de
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del- teflón con un tamaño de poro de O 45 µm o menor y
gada.) usar el filtrado. '
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro- Sistema cromato9ráfico
matografía de 0,50 mm (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Volumen de aplicación: 20 µL Modo: HPLC
Fase móvil: Capa superior de una mezcla de acetato Detector: UV 270 nm y Vis 588 nm
de etilo, ácido acético glacial, ácido fórmico y agua Columnas
(1 O: 1, 1 : 1, 1 : 2,6) Guarda columna: Relleno L1
Solución reveladora A: Solución de 1 O mg/ml de di- Columna analítica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
fenilborinato de 2-aminoetilo en metanol Temperatura de la columna: 30º
Solución reveladora B: Solución de 50 mg/ml de po- Velocidad de flujo: 1 mL/min
lietilenglicol 400 en alcohol Volumen de inyección: 20 µL. [NOTA-Primero equili-
Análisis brar el sistema con Solución A al 100%.] '
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Aptitud del sistema
Aplicar las Muestras en bandas y dejar que se sequen. Muestra~: Solución estándar A (registrar las respuestas
~esarrollar y ~~iar que la placa se seque al aire. Ro-
de los picos a 270 nm) y Solución estándar B (registrar
ciar con Soluc1on reveladora A y dejar que la placa se las respuestas de los picos a 270 nm y 588 nm)
seque al ~i_re. Inmediatamente después, rociar la placa Requisitos de aptitud
con Soluoon reveladora By dejar que la placa se se- Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
que al aire. Observar la placa bajo luz UV a 365 nm. mas de la Solución estándar B son similares a los cro-
Cr!!erios de aceptación: . El cromatograma de la Solu- matogramas de referencia respectivos provistos con el
oon muestra presenta vanas zonas con fluorescencia lote de ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan
anaranjada amarillenta, una de las cuales, que aparece a USP usado.
un valor RF de aproximadamente 0,5, corresponde en Eficiencia de la columna: No menos de 1 00 000 pla-
valor RF e intensidad a una zona similar en el cromato- tos teóricos para oxibenzona, Solución estándar A
grama de la Solución estándar. El cromatograma de la Factor de asimetría: No más de 1,5 para oxiben-
Solución muestra presenta también dos zonas de fluores- zona, Solución estándar A
cencia roja, una a un valor RF de aproximadamente Desviación estándar relativa: No más de 2 0% Solu-
0,85 (presencia de hipericina) y la otra a un valor RF de ción estándar A ' '
aproximadamente 0,80 (presencia de pseudohipericina), Análisis
~ ?os zonas d~ mayor fluoresce~cia azul (presencia de Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
ac1dos clorogen1co y neoclorogenico) localizadas debajo Medir las áreas de los picos pertinentes a 270 nm en
de la zona del hiperósido amarilla a anaranjada el cromatograma de la Solución muestra.
amarillenta. Calcular por separado el porcentaje de hipericina
(C10H160s) y pseudohipericina (C10H1609) en la por-
COMPOSICIÓN ción de Hierba de San Juan tomada:
• CONTENIDO DE HIPERICINA Y PSEUDOHIPERICINA
[NOTA-Realizar todas las preparaciones de la muestra Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
con una exposición mínima a luz tenue y usar material
USP 37
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
r1 = área del pico de oxibenzona de la Solución
estándar A
C5 = concentración de ER Oxibenzona USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Hierba de San juan tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta relativa para el pico del
analito pertinente con respecto a
oxibenzona, 1,30 para hipericina y 1,24 para
pseudohipericina
Calcular el total combinado de hipericina y
pseudohipericina sumando los porcentajes
correspondientes, según se calcularon anteriormente.
Criterios de aceptación: No menos de 0,04% con res-
pecto a la materia seca
• CONTENIDO DE HIPERFORINA
Análisis: Usando los cromatogramas obtenidos en la
prueba de Contenido de Hipericina y Pseudohipericina,
calcular el porcentaje de hiperforina (C3sHs2Ü4) en la
porción de Hierba de San juan tomada:
Resultado= (ru/r:) x Cs x (V/VV) x Fx 100
ru = área del pico de hiperforina de la Solución
muestra
rs = área del pico de oxibenzona de la Solución
estándar A
C5 = concentración de ER Oxibenzona USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Hierba de San juan tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta para hiperforina con
respecto a oxibenzona, 0,46
Criterios de aceptación: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g; y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 0 2 ufc/g. , No más de 5,0%
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS EPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone//a spp. y Escherichia coli, y la ausen-
cia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: El tallo de borde doble es amarillo ver-
doso, redondeado y posee dos márgenes laterales que
discurren longitudinalmente en lados opuestos. La
planta tiene hojas alternas, sésiles, ovoides o alargadas,
de hasta 3,5 cm de longitud, con bordes lisos y sin pe-
los y con perforaciones translúcidas. Las flores son muy
numerosas, amarillas, de pedúnculo corto, pentámeras
y forman falsas umbelas de forma similar a los racimos
de uva. Los cinco sépalos lanceolados y con puntos ne-
gros tienen aproximadamente la mitad de la longitud
de los pétalos. Los pétalos son de color amarillo oscuro
y tienen forma de ovalas sesgados y bordes que termi-
nan en glándulas de color rojo oscuro. Los numerosos
estambres se agrupan en tres a seis haces (por lo gene-
ral tres). El ovario está coronado con tres estilos. Algu-
nos ovarios ya se han desarrollado en cápsulas triovula-
res ovales alargadas y verdosas con diferentes grados de
madurez. Cuando se muele, el material vegetal crudo se
distingue por las numerosas yemas florales de color
amarillo a marrón amarillento y pétalos individuales con
Suplementos Dietéticos/ San juan 6135
glándulas de color rojo oscuro en los bordes. Los frag-
mentos de hojas de color verde claro a verde amarro-
nado, caracterizados por marcescencia plegada, parecen
punteados cuando se observan a trasluz. Los fragmen-
tos del tallo son huecos, de color amarillo verdoso a
marrón rojizo y se distinguen por dos bordes
longitudinales.
Microscópicas: Los tallos poseen células epidérmicas
alargadas con paredes anticlinales de bordes rectos en
forma de rosario; cutícula lisa; frecuentes estomas para-
cíticos con dos pequeñas células epidérmicas adyacen-
tes; corteza de 5-6 hileras de colénquima; la estela (o
cilindro central) con un crecimiento secundario formado
por un anillo compactado de floema, con una extensa
área de xilema lignificado y pequeñas áreas de floema
intraxilar; médula parenquimatosa, lignificada y pun-
teada en los tallos más viejos; se pueden presentar glán-
dulas oleosas en la corteza y el floema.
La superficie superior de la hoja posee células poligona-
les con paredes anticlinales, ligeramente rebordeadas
en forma de rosario y sinuosas; las células de la super-
ficie inferior son más pequeñas, con paredes anticlina-
les más onduladas, con frecuentes estomas paracíticos
y a veces anomocíticos; cutícula lisa, más gruesa en la
superficie superior; las células epidérmicas de las ner-
vaduras, alargadas y con paredes rectas, ocasional-
mente se disponen en forma de rosario. Lámina con
una capa dorsiventral de células en empalizada; glán-
dulas oleosas grandes con la misma profundidad del
mesófilo esponjoso. La nervadura central posee un solo
haz colateral con un área pequeña de xilema lignifi-
cado. No se encuentran tricomas ni oxalato de calcio.
El sépalo de la flor posee características similares a las
de la hoja. Pétalo: células epidérmicas de paredes del-
gadas, alargadas y estrechas con paredes anticlinales
rectas en la superficie externa y onduladas en la super-
ficie interna. Estambre: capa fibrosa lignificada en la
pared de la antera; las células del filamento son alarga-
das, de paredes delgadas y con cutícula estriada; gra-
nos de polen subprolados de aproximadamente 20 µm
de diámetro, con tres poros y una exina lisa. Ovario:
células poligonales pequeñas con ~lándulas oleosas
subyacentes; testa de la semilla: celulas hexagonales
ge color marrón de paJedes gruesas .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 2,0%,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de Agua (561):
No más de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases im-
permeables. Proteger de la luz y la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la J;>lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hiperósido USP
ER Oxibenzona USP
ER Extracto en Polvo de Hierba de San Juan USP
ER Rutina USP
Hierba de San Juan en Polvo
DEFINICIÓN
La Hierba de San Juan en Polvo es Hierba de San Juan redu-
cida a polvo fino o muy fino. Contiene no menos de
0,6% de hiperforina (C1sHs2Ü4) y no menos de 0,04% de
hipericina (CioH160s) y pseudohipericina (C10H1609) com-
binadas, con respecto a la materia seca.
6136 San juan /Suplementos Dietéticos USP 37

IDENTIFICACIÓN equipado con un condensador y protegido de la luz,

• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA agregar 50 mL de Disolvente y una barra mezcladora
DELGADA magnética, y calentar a 60º durante 2 horas, mientras
Solución estándar: 0,5 mg/mL de ER Hiperósido USP se mezcla. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar
en metanol usando papel de filtro en un matraz volumétrico de
Solución muestra: Agitar 1O g de Hierba de San Juan 50 ml. Lavar el matraz y el residuo en el filtro con Di-
en Polvo en 100 mL de metano! durante 15 minutos y solvente, y diluir con los lavados a volumen. Pasar la
filtrar. solución a través de un filtro de membrana de teflón
Sistema cromato9ráfico con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor y usar el
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del- filtrado.
gada.) Sistema cromato9ráfico
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro- (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
matografía de 0,50 mm Modo: HPLC
Volumen de aplicación: 20 µL Detector: UV 270 nm y Vis 588 nm
Fase móvil: Capa superior de una mezcla de acetato Columnas
de etilo, ácido acético glacial, ácido fórmico y agua Guarda columna: Relleno L1
(1 O: 1, 1: 1, 1: 2,6) Columna analítica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Solución reveladora A: Solución de 1O mg/mL de di- Temperatura de la columna: 30º
fenilborinato de 2-aminoetilo en metano! Velocidad de flujo: 1 mL/min
Solución reveladora B: Solución de 50 mg/mL de po- Volumen de inyección: 20 µL. [NOTA-Primero, equili-
lietilenglicol 400 en alcohol brar el sistema con Solución A al 100%.]
Análisis Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución muestra Muestras: Solución estándar A (registrar las respuestas
Aplicar las Muestras en bandas y dejar que se sequen. de los picos a 270 nm) y Solución estándar B (registrar
Desarrollar y dejar que la placa se seque al aire. Ro- las respuestas de los¡icos a 270 nm y 588 nm)
ciar con Solución reveladora A y dejar que la placa se Requisitos de aptitu
seque al aire. Inmediatamente después, rociar la placa Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
con Solución reveladora By dejar que la placa se se- mas de la Solución estándar B son similares a los cro-
que al aire. Observar la placa bajo luz UV a 365 nm. matogramas de referencia respectivos provistos con el
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- lote de ER Extraco en Polvo de Hierba de San Juan
ción muestra presenta varias zonas con fluorescencia USP usado.
anaranjada amarillenta, una de las cuales aparece a un Eficiencia de la columna: No menos de 100 000 pla-
valor RF de aproximadamente 0,5, y corresponde en tos teóricos para oxibenzona
valor RF e intensidad a una zona similar en el cromato- Factor de asimetría: No más de 1,5 para oxibenzona
grama de la Solución estándar. El cromatograma de la Desviación estándar relativa: No mas de 2,0%, Solu-
Solución muestra presenta también dos zonas de fluores- ción estándar A
cencia roja, una a un valor RF de aproximadamente Análisis
0,85 (presencia de hipericina) y otro a un valor RF de Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
aproximadamente 0,80 (presencia de pseudohipericina), Medir las áreas de los picos pertinentes a 270 nm en
y dos zonas de mayor fluorescencia azul (presencia de el cromatograma de la Solución muestra.
ácidos clorogénico y neoclorogénico) localizadas debajo Calcular por separado el porcentaje de hipericina
de la zona amarilla a anaranjada amarillenta del (C30H15Üs) y pseudohipericina (C30H15Ü9) en la por-
hiperósido. ción de Hierba de San Juan en Polvo tomada:
COMPOSICIÓN Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x l/Fx 100
• CONTENIDO DE HIPERICINA Y PSEUDOHIPERICINA
[NOTA-Realizar todas las preparaciones de la muestra ru = área del pico del analito pertinente de la
con una exposición mínima a luz tenue y usar material Solución muestra
de vidrio con protección actínica para proteger las solu- r5 = área del pico de oxibenzona de la Solución
ciones de la luz.] estándar A
Disolvente: lyletanol y acetona (1 :1) Cs = concentración de ER Oxibenzona USP en la
Solución A: Acido fosfórico y agua (3:997) Solución estándar A (mg/mL)
Solución B: Acetonitrilo V =volumen de Solución muestra (mL)
Solución C: Metano! W = peso de Hierba de San Juan en Polvo tomado
Fase móvil: Ver la Tabla 1. para preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta relativa para el analito
Tabla 1 pertinente con respecto a oxibenzona,
1,30 para hipericina y 1,24 para
Tiempo Solución A Solución B Solución C pseudohipericina
(min) (%) (%) (%) Criterios de aceptación: No menos de 0,04% con res-
o 100 o o pecto a la materia seca
10 85 15 o • CONTENIDO DE HIPERFORINA
30 70 20 10 Análisis: Usando los cromatogramas obtenidos en la
40 10 75 15 prueba de Contenido de Hipericina y Pseudohipericina,
calcular el porcentaje de hiperforina (C3sHs2Ü4) en la
55 5 80 15 porción de Hierba de San Juan en Polvo tomada:
56 100 o o
66 100 o o Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 1 /F x 100
Solución estándar A: 2,5 µg/mL de ER Oxibenzona fu = área del pico de hiperforina de la Solución
USP en Disolvente muestra
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Extracto en Polvo rs = área del pico de oxibenzona de la Solución
de Hierba de San Juan USP en Disolvente estándar A
Solución muestra: Pesar 1O g de Hierba de San Juan en Cs = concentración de ER Oxibenzona USP en la
Polvo. Transferir 1 g a un matraz de fondo redondo Solución estándar A (mg/mL)
 USP 37
V = volumen de Solución muestra (mL)
W = peso de Hierba de San juan en Polvo tomado
para preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de respuesta para hiperforina con
respecto a oxibenzona, 0,46
Criterios de aceptación: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 2 ufc/g. , Fase móvil: Capa superior de una mezcla de acetato
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchw colt, y para la
ausencia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Polvo beige a marrón verdoso con olor
aromático y balsámico
Microscópicas: Células epidérmicas alargadas y poligo-
nales con paredes anticlinales engrosadas y en fc;i~ma de
rosario, algunas acompañ~<:Jas de estomas parac1t1c;os
(ocasionalmente, anomoc1t1cos); fragmentos de ho1as y
sépalos con glándulas esquizógenas de pigmento y
aceite· células epidérmicas de los pétalos alargadas, an-
gosta~ y de paredes delgadas, con paredes anticlinales
rectas y onduladas; vasos angostos y lignificados con
engrosamiento anillado o reticulado; traqueidas y vasos
traqueales con engrosamiento lignificado y pun_t~acio­
nes· fibras lignificadas de paredes gruesas con ap1ces
ah~sados y algunas puntuaciones obl~cuas; parénquima
lignificado y rectangular con puntuaciones; capa fibrosa
de la pared antera!; granos de polen, de 20-25 µm de
diámetro, con una exina lisa.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más de 2%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 5,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Contenido de Agua
(561): Nomásdel0,0%
REQUISITOS ADICIONALES . Sistema cromato9ráfico
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de _la l~z y de la hum~da~ ..
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latín y, después de la denominación_ oficial, las partes de
la glanta de donde se obtuvo el articulo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hiperósido USP
ER Oxibenzona USP
ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan USP
ER Rutina USP
Extracto en Polvo de Hierba de San
Juan
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Hierba d~ San juan se prepara a
partir de Hierba de San juan triturada, extra1da con 80%
de metanol u otros disolventes adecuados. Contiene no
menos de 90,0% y no más de 110,0% del total coi:nbi-
nado declarado de hipericina (CioH160s) y pseud,oh1pe-
ricina (C 30 H160 9), y no menos de 90,0% y no mas de
110,0% de hiperforina (CsHs2Ü4), con respecto a la ma-
teria seca.
Suplementos Dietéticos/ San juan 6137
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA: (presencia de hipericina, pseudohipericina, hi-
perósido y rutina)
Solución estándar: 50 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hierba de San juan USP en metanol. Agitar bien y
usar el sobrenadante transparente.
Solución muestra: 50 mg/mL de Extracto en Polvo en
metanol. Agitar bien y usar el sobrenadante
transparente .
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de aplicación: 1 O µL
de etilo, ácido acético glacial, ácido fórmico y agua
(10: 1,1: 1,1: 2,6) . . .
Solución reveladora A: 1 O mg/mL de d1fenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/mL de polientileglicol
400 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido no menos de 18 cm y secar
la placa con ayu?a de una corriente de aire. Roc;i~r la
placa con Solucion reveladora A, luego con Solucton
reveladora B y observar la placa bajo luz UV a 365
nm.
Criterios de aceptación: Las dos zonas rojas debi?as a
hipericina y pseudohipericina a valores RF de aproxima-
damente 0,85 y 0,80, respectivamente, en el cromato-
grama de la Solución muestra, corresponden ,en co}or y
valor RF a las del cromatograma de la Solucton estandar;
las dos zonas amarillas debidas a hiperósido y rutina a
valores RF de aproximadamente 0,50 y 0,35, respectiva-
mente, en el cromatograma de la Solución muestra, co-
rresponden en color y valor RF a las del cromatograma
de la Solución estándar. Pueden observarse otras zonas
de color de diferentes intensidades en el cromatograma
de la Solución muestra. ,
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA: (presencia de hiperforina) ,
Solución estándar y Solución muestra: Proceder segun
se indica en la prueba de Identificación A.
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,50 mm
Volumen de ~plicación: 1 O µL .
Fase móvil: Eter de petróleo y acetato de etilo (4: 1)
Solución reveladora: Preparar una solución que con-
tenga 0,38 g de sulfato cérico am9n_ico y 3,,8 _g de mo-
libdato de amonio en 100 ml de ac1do sulfurico 2 N.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cámara saturada
hasta que el frente de la fase móvil haya recorrido no
menos de 18 cm y secar la placa con ayuda de una
corriente de aire. Rociar la placa con Solución revela-
dora, calentar la placa a 140º durante 15 minutos y
observar bajo luz UV. . .
Criterios de aceptación: La zona azul debida a h1perfo-
rina a un valor RF de aproximadamente 0,54 en el cro-
matograma de la Solución muestra corresponde en color
y valor RF a la del cromatograma de la Solución
estándar.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE HIPERICINA Y PSEUDOHIPERICINA
[NOTA-Realizar todas las preparaciones de la muestra.
con una exposición mínima a luz tenue y usar material
61 38 San juan /Suplementos Dietéticos USP 37

de vidrio con protección actínica para proteger las solu- Cs = concentración de ER Oxibenzona USP en la
ciones de la luz.] Solución estándar A (mg/mL)
Disolvente: ~etanol y acetona (1 : 1) Cu = concentración nominal del contenido total de
Solución A: Acido fosfórico y agua (3:997) hipericinas en la Solución muestra (mg/mL)
Solución B: Acetonitrilo Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% con respecto
Solución C: Metanol a la materia seca
Fase móvil: Ver la Tabla 7. • CONTENIDO DE HIPERFORINA
Análisis: Usando los cromatogramas obtenidos en la
Tabla 1 prueba de Contenido de Hipericina y Pseudohipericina,
calcular el porcentaje de hiperforina (C 35 Hs2Ü4) en la
Tiempo Solución A Solución B Solución C porción de Extracto en Polvo de Hierba de San juan
lmin) (%) (%) (%) tomada:
o 100 o o
10 85 15 o Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 / F x 100
30 70 20 10
ru = área del pico de hiperforina de la Solución
40 10 75 15 muestra
55 5 80 15 rs = área del pico de oxibenzona de la Solución
56 100 o o estándar A
66 100 o o Cs = concentración de ER Oxibenzona USP en la
Solución estándar A (mg/mL)
Solución estándar A: 2,5 µg/mL de ER Oxibenzona Cu = concentración nominal de hiperforina en la
USP en Disolvente Solución muestra (mg/mL)
Solución estándar B: 1 mg/mL de ER Extracto en Polvo F = factor de respuesta relativa para hiperforina
de Hierba de San juan USP en Disolvente con respecto a oxibenzona, 0,46
Solución muestra: 1 mg/mL de Extracto en Polvo en Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% con respecto
una mezcla de metanol y agua (9:1 ). Someter a ultraso- a la materia seca
nido hasta disolver, pasar a través de un filtro de mem-
brana de teflón con un tamaño de poro de 0,45 µm o CONTAMINANTES
menor y usar el filtrado. • METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 50 µg/g
Sistema cromato9ráfico • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
Modo: HPLC requisitos.
Detector: UV 270 nm y Vis 588 nm • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Columnas tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g y el recuento total
Guarda columna: Relleno L1 combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Columna analítica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 cede de 10 3 ufc/g. ,
Temperatura de la columna: 30º • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Velocidad de flujo: 1 mL/min ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Volumen de inyección: 20 µL. [NOTA-Primero, equili- ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
brar el sistema con Solución A al 1 00%.]
PRUEBAS ESPECÍFICAS
Aptitud del sistema
• DET~RMINACIÓN DE AGUA, tylétodo I (921 ): No más de 5%
Muestras: Solución estándar A (registrar las respuestas
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
de los picos a 270 nm) y Solución estándar B (registrar
las respuestas de los¡icos a 270 y a 588 nm) No más de 7,0%
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Requisitos de aptitu
Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra- Botánicos (565), Residuo de Evaporación y Disolventes
mas de la Solución estándar B son similares a los cro- Residuales.
matogramas de referencia respectivos provistos con el REQUISITOS ADICIONALES
lote de ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
USP usado. permeables. Proteger de la luz y de la humedad.
Eficiencia de la columna: No menos de 1 00 000 pla- • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
tos teóricos para oxibenzona, Solución estándar A latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
Factor de asimetría: No más de 1,5 para oxiben- planta a partir de la que se preparó el artículo. La eti-
zona, Solución estándar A queta también indica el contenido de hipericina, pseudo-
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu- hipericina e hiperforina; el disolvente o mezcla de disol-
ción estándar A ventes de extracción usados para la preparación; y la
Análisis relación entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
Muestras: Solución estándar A y Solución muestra tracto en Polvo. La etiqueta lleva una leyenda que indica
Medir las áreas a 270 nm de los picos pertinentes en que "Se conocen algunos casos poco comunes de reac-
el cromatograma de la Solución muestra. ciones alérgicas y fotosensibilidad con el uso de la Hierba
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de hi- de San juan. La Hierba de San juan interactúa con nume-
pericina (C30H160s) y pseudohipericina (C30H1609) en rosos medicamentos. Consultar con un profesional de la
la porción de Extracto en Polvo de Hierba de San salud antes de usar."
juan tomada: • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Oxibenzona USP
Resultado= (L.ru1/f,) x (l/rs) x (Cs/Cu) x 100 ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan USP
L.ru; /f; = suma de las áreas de los picos de hipericina y ER Rutina USP
pseudohipericina de la Solución muestra
dividida por los factores de respuesta relativa
con respecto a oxibenzona, 1,30 para
hipericina y 1,24 para pseudohipericina
rs = área del pico de oxibenzona de la Solución
estándar A
USP 37 Suplementos Dietéticos / Schizochytrium 61 39

antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través

Aceite de Schizochytrium de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
DEFINICIÓN activos para que tengan un contenido de arsénico tan
El Aceite de Schizochytrium se obtiene mediante la fermen- bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
tación y extracción de algas del género Schizochytrium y reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
contiene no menos de 30,0% (p/p) de ácido docosahe- los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
xaenoico (DHA, por sus siglas en inglés, C22Hi202) (C22:6 remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
n-3), como el ácido graso poliinsaturado principal. Se tos y enjuagando con agua desionizada.]
pueden agregar antioxidantes adecuados en concentracio- Solución A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
nes apropiadas. puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
20 mL de agua y 1 O mL de ácido nítrico, y entibiar
IDENTIFICApÓN sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
• PERFIL DE ACIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA: que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
Proceder según se indica en Composición, Contenido de transferirla a un matraz volumetrico de 100 mL, y diluir
DHA. con asiua desionizada a volumen.
Análisis Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
Muestras: Solución Estándar 2 y Solución de Prueba 1 puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
Calcular el porcentaje de área de cada ácido graso 40 mL de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
como éster metílico en la Solución de Prueba 1: una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
Resultado = (ru/rT) x 100 transferirla a un matraz volumétrico de 100 mL, y diluir
con asiua desionizada a volumen.
ru =respuesta del pico de cada ácido graso Solucion C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
individual como éster metílico (3:2:5). Un volumen de 5 µL proporciona 0,015 mg de
rT = suma de las respuestas de todos los picos, paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
excepto los picos del disolvente y butil Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
hidroxitolueno Solución madre del estándar: Transferir 10,0 mL de
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de Solución Estándar de Arsénico, preparada sesiún se in-
los picos de éster metílico del ácido docosahexaenoico dica en Arsénico (211 ), a un matraz volumetrico de
y éster metílico del ácido eicosapentaenoico de la Solu- 100 mL. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de ácido ní-
ción de Prueba 1 corresponden a los de la Solución Es- trico, y diluir con agua a volumen. Esta solución con-
tándar 2, según se obtienen en la prueba de Contenido tiene O, 1 O µg/mL de arsénico.
de EPA y DHA. El porcentaje de área para los ésteres Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
metílicos de los ácidos grasos del cromatograma de la con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
Solución de Prueba 1 en la prueba de Contenido de EPA y 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de arsénico.
DHA cumple con los requisitos para cada ácido graso Solución muestra: Para preparar la Solución muestra,
presentado en la tabla siguiente. usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrón de 2455 MHz y una potencia de salida se-
Límite Límite leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1%,
Tiempo Anota- Inferí- Supe- equipado con vasos de material compuesto avanzado
de ción or rior con recubrimientos internos de teflón de 100 mL. Usar
Ácido Retención Abrevia- (~lo de (%de membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
Graso Relativo da Area) Área) sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
Ácido
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
dihomo-
con un tubo de escape para permitir el escape de los
gamma
humos. [PRECAUCIÓN-Usar protección adecuada para
linolénico o 71 20:3 n-6 17 28
los ojos además de ropa y guantes protectores.] Trans-
Ácido araqui- ferir aproximadamente 500 mg de Aceite de Schizochy-
dánico o 73 20:4 n-6 06 13 trium, pesados con una aproximación de O, 1 mg, a un
Ácido eicosa- vaso de digestión con recubrimiento interno de teflón.
pentaenoico Preparar las muestras por duplicado. Agregar 15 mL de
IEPA) o 79 20:5 n-3 13 39 ácido nítrico y agitar por rotación suave. Cubrir los va-
Ácido docosa- sos con tapas dejando fuera el accesorio de ventilación.
pentaenoico Digerir previamente durante toda la noche bajo una
IDPA n-6) o 94 22:5 n-6 10 5 16 5 campana. Colocar la membrana de ruptura en el acce-
Ácido docosa- sorio de ventilación y ajustar la tapa. Colocar todos los
hexaenoico vasos en el plato giratorio del horno de microondas.
IDHA) 1 00 22:6 n-3 30 o 40 o Conectar los tubos de escape a la trampa de ventila-
ción y conectar la línea del sensor de presión al vaso
apropiado. Iniciar un procedimiento de digestión de
COMPOSICIÓN dos etapas calentando el microondas con una potencia
• CONTENIDO DE DHA del 1 5% durante 15 minutos, seguida de una potencia
Análisis: Proceder según se indica en, Grasas y Aceites del 25% durante 45 minutos. Retirar el plato giratorio
Fijos (401 ), Determinación y Perfil de Acidos Grasos con los vasos del horno y dejar que los vasos se enfríen
Omega-3. a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede usar un
Criterios de aceptación: No menos de 30,0% (p/p) de baño de agua fresca para acelerar el proceso de enfria-
ácido docosahexaenoico (DHA) miento.] Ventilar los vasos cuando alcancen la tempera-
tura ambiente. Retirar las tapas y agregar lentamente
IMPUREZAS 2 mL de peróxido de hidrógeno al 30% a cada uno.
Impurezas Inorgánicas Dejar que las reacciones cesen y sellar los vasos. Volver
• LIMITE DE ARSENICO a colocar los vasos en el plato giratorio del horno de
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo- microondas y calentar durante 15 minutos adicionales
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico a una potencia del 30%. Retirar los vasos del horno y
6140 Schizochytrium /Suplementos Dietéticos
dejar que se enfríen a temperatura ambiente. Transferir
los digeridos enfriados a matraces volumétricos de
25 ml y diluir con agua a volumen.
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1O segundos usando una temperatura ajustada a
20º y un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a
2400º usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argón dete-
nido, y limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estan-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para arsénico. Determinar el área del pico en la línea
de emisión de arsénico a 193,7 nm, corregida por la
absorción de fondo. Graficar las áreas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estándar en función de sus
contenidos de arsénico, en µg/ml, y calcular la línea
de regresión que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentración, C, en µg/ml, de arsénico en cada
ml de la Solución muestra interpolando a partir de la
línea de regresión.
Calcular el contenido de arsénico en la porción de
Aceite de Schizochytrium tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración según se obtuvo anteriormente
W = peso de Aceite de Schizochytrium tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 1 ml de ácido nítrico y 40 ml de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de
fosfato m,ás 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volumé-
trico de 100 ml, agregar 40 ml de agua y 5 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml de esta solución a un segundo matraz volumé-
trico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
USP 37
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
ción contiene O, 1O µg/ml de plomo.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a 2100º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para plomo. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de plomo, en µg/ml, y calcular la línea de regresión
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centración, C, en µg/ml, de plomo en cada ml de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de
regresión.
Calcular el contenido de plomo en la porción de
Aceite de Schizochytrium tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Schizochytrium tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar A: O, 1 372 mg/ml de ni-
trato de cadmio
USP 37 Suplementos Dietéticos / Schizochytrium 6141

Solución madre del estándar B: Solución madre del es- • GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución más de 4,5%
contiene O, 1O µg/mL de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porción de agua y REQUISITOS ADICIONALES
ácido nítrico.] • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar permeables, resistentes a la luz y evitar la exposición al
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002; calor excesivo.
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/mL de cadmio. • ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de ácido do-
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución cosahexaenoico en mg/g. También indica el nombre y la
muestra en la prueba de Límite de Arsénico. COl)Centración de cualquier antioxidante agregado.
Análisis: Pro$Jramar el horno de grafito según se indica • ESTA!'."DARES DE REFER.f.NCIA USP (11)
a continuacion. Secar a 1 20º usando una rampa de 1 ER ~ster Etílico del ..;cido Docosahexaenoico USP
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se- ER Ester Etílico del Acido Eicosapentaenoico USP
gundos y un flujo de argón de 300 mL/min. Carbonizar ER Tricosanoato de Metilo USP
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 mL/min. Atomizar a 2400º Aceite de Schizochytrium, Cápsulas
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y DEFINICIÓN
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un Las Cápsulas de Aceite de Schizochytrium se preparan a par-
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa- tir de Aceite de Schizochytrium y contienen no menos de
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están- 95,0% y no más de 105,0% de la cantidad declarada de
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de ácido docosahexaenoico (DHA, por sus siglas en inglés;
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una C22H32Ü2) (C22:6 n-3).
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade- IDENTIFICA$::1ÓN
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco • PERFIL DE ACIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
para cadmio. Determinar el área del pico en la línea de Proceder según se indica en Contenido, Contenido de
emisión de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor- DHA.
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas Análisis
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos Muestras: Solución Estándar 2 y Solución de Prueba 7
de cadmio, en µg/mL, y calcular la línea de regresión Calcular el porcentaje de área de cada ácido graso
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con- como éster metílico en la Solución de Prueba 7:
centración, C, en µg/mL, de cadmio en cada mL de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de Resultado = (ru/rT) x 100
regresión.
Calcular el contenido de cadmio en la porción de ru = respuesta del pico de cada ácido graso
Aceite de Schizochytrium tomada: individual como éster metílico
rT = suma de las respuesta de todos los picos,
Resultado = (C/W) x 25 excepto por los picos del disolvente y butil
hidroxitolueno
C = concentración, según se obtuvo Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
anteriormente los picos de éster metílico del ácido docosahexaenoico
W = peso de Aceite de Schizochytrium tomado y del éster metílico del ácido eicosapentaenoico de la
para preparar la Solución muestra (g) Solución de Prueba 7 corresponden a los de la Solución
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g Estándar 2, según se obtienen en la prueba de Conte-
• LIMITE DE MERCURIO nido de EPA y DHA. El porcentaje de área para los éste-
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución res metílicos de los ácidos grasos del cromatograma de
muestra en la prueba de Límite de Arsénico, combi- la Solución de Prueba 7 en la prueba de Contenido de
nando los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL EPA y DHA cumplen con los requisitos para cada ácido
de Solución de Perman9anato de Potasio (ver Mercurio graso presentado en la tabla siguiente.
(261 ), Método /la y Metodo /lb, Reactivos).
Análisis: Proceder según se indica en Mercurio (261 ), Tiempo
Método /la y Método /lb, excepto que se debe usar una de Anota- Límite Límite
Solución Estándar de Mercurio con el equivalente a Reten- ción Inferior Superior
O, 1 µg/mL de mercurio. Ácido clón Abrevia- (%de (%de
Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g Graso Relativo da Área) Área)
PRUEBAS ESPECÍFICAS Ácido diho-
• GRASAS Y ACEITES FIJOS, Índice de Anisidina (401): No más mogamma
de 20,0 , linolénico o 71 20:3 n-6 17 28
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Acidos Grasos Libres (401): Los Ácido araqui-
ácidos grasos libres en 1 O g requieren para su neutraliza- dónico o 73 20:4 n-6 06 13
ción no más de 1,42 m~ de hidróxido de sodio 0, 1 N. Ácido eicosa-
• GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más pentaenoico
de 5,0 , fEPA' o 79 20:5 n-3 13 39
• GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX) Ácido docosa-
(401 ): No más de 26, calculado: pentaenoico
fDPA n-6) o 94 22:5 n-6 10 5 16 5
Resultado = (2 x PV) + AV Ácido docosa-
hexaenoico
PV = índice de peróxido
o
AV = índice de anisidina
fDHA) 1 00 22:6 n-3 30 o 40
6142 Schizochytrium /Suplementos Dietéticos
CONTENIDO
• CONTENIDO DE DHA
Solución de Prueba 1 y Solución de Prueba 2: Pesar
no menos de 1O Cápsulas en un frasco de pesada ta-
rado. Con una cuchilla afilada u otros medios apropia-
dos, abrir cuidadosamente las Cápsulas, sin perder ma-
terial de la cubierta, y transferir el contenido combina-
do de las Cápsulas a un vaso de precipitados de
100 ml. Retirar cualquier sustancia adherida a las cu-
biertas de las Cápsulas vacías lavando con varias porcio-
nes pequeñas de isooctano. Desechar los lavados y de-
jar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen en una
corriente de aire seco hasta que se haya evaporado por
completo el isooctano. Pesar las cubiertas de las Cápsu-
las vacías en el frasco de pesada tarado original y calcu-
lar el peso de llenado promedio (AFW, por sus siglas en
inglés) de aceite de schizochytrium en cada Cápsula.
Proceder con el contenido de las Cápsulas segun se in-
dica en el Análisis.
Análisis: Proceder según se indica e~ Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinación y Perfil de Acidos Grasos
Omega-3, Contenido de EPA y DHA.
Calcufar el porcentaje de la cantidad declarada de ácido
docosahexaenoico (DHA) en las Cápsulas tomadas:
Resultado= R x AFW/L
R = porcentaje de DHA en la porción de aceite
tomada de las Cápsulas
AFW = peso de llenado promedio de las Cápsulas
tomadas (mg)
L = cantidad declarada de DHA (mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: No menos de 95,0% y no
más de 105,0% de la cantidad declarada de DHA
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de la Prueba de Rup-
tura para Cápsulas Blandas. , del 15% durante 15 minutos, seguida de una poten-
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• LIMITE DE ARSENICO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de arsénico tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflon. Agregar
20 ml de agua y 1O ml de ácido nítrico, y entibiar
sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumetrico de 100 ml, y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
(3:2:5). Un volumen de 5 µL proporciona 0,015 mg de
paladio y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
USP 37
Blanco: Ácido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Estándar de Arsénico, preparada según se in-
dica en la prueba de Arsénico (211 ), a un matraz volu-
métrico de 100 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
ción contiene O, 1O µg/ml de arsénico.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de arsénico.
Solución muestra: Para preparar la Solución muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrón de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de teflón de 100 ml. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sión excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de es,cape para permiti~ el escape de los
humos. [PRECAUCION-Usar proteccion adecuada para
los ojos además de ropa y guantes protectores.]
Transferir aproximadamente 500 mg de aceite de schi-
zochytrium, a partir de las Cápsulas, pesados con una
aproximación de O, 1 mg, a un vaso de digestión con
recubrimiento interno de teflón. Preparar las muestras
por duplicado. Agregar 15 ml de ácido nítrico y agi-
tar por rotación suave. Cubrir los vasos con tapas de-
jando fuera el accesorio de ventilación. Digerir previa-
mente durante toda la noche bajo una campana.
Colocar la membrana de ruptura en el accesorio de
ventilación y ajustar la tapa. Colocar todos los vasos
en el plato giratorio del horno de microondas. Co-
nectar los tubos de escape a la trampa de ventilación
y conectar la línea del sensor de presión al vaso apro-
piado. Iniciar un procedimiento de digestión de dos
etapas calentando el microondas con una potencia
cia del 25% durante 45 minutos. Retirar el plato gira-
torio con los vasos del horno y dejar que los vasos se
enfríen a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede
usar un baño de agua fresca para acelerar el proceso
de enfriamiento.] Ventilar los vasos cuando alcancen
la temperatura ambiente. Retirar las tapas y agregar
lentamente 2 ml de peróxido de hidrogeno al 30% a
cada uno. Dejar que las reacciones cesen y sellar los
vasos. Volver a colocar los vasos en el plato giratorio
del horno de microondas y calentar durante 15 minu-
tos adicionales a una potencia del 30%. Retirar los
vasos del horno y dejar que se enfríen a temperatura
ambiente. Transferir los digeridos enfriados a un ma-
traz volumétrico de 25 ml y diluir con agua a
volumen.
Análisis: Pro~ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 115º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
fa muestra a 1000º usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1O segundos usando una temperatura ajustada a
20º y un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a
2400º usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argón dete-
nido, y limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones estan-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para arsénico. Determinar el área del pico en la línea
de emisión de arsénico a 193,7 nm, corregida por la
USP 37
absorción de fondo. Graficar las áreas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estándar en función de sus
contenidos de arsénico, en µg/ml, y calcular la línea
de regresión que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentración, C, en µg/ml, de arsénico en cada
ml de la Solución muestra interpolando a partir de la
línea de regresión.
Calcular el contenido de arsénico en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cápsulas tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1 O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 1 ml de ácido nítrico y 40 ml de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solución B: 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un
vaso de precipitados de teflón. Agregar 40 ml de agua
y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre una placa de
calentamiento hasta disolver los sólidos. Dejar que la
solución se enfríe a temperatura ambiente, transferirla a
un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir con agua
desionizada a volumen.
Solución C: Solución A, Solución By ácido nítrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona 0,2 mg de
fosfato 111ás 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: Transferir 10,0 ml de
Solución Madre de Nitrato de Plomo, preparada según se
indica en la prueba de Metales Pesados (231 ), a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 40 ml de agua y
5 ml de ácido nítrico, y diluir con agua a volumen.
Transferir 1,0 ml de esta solución a un segundo matraz
volumétrico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml
de ácido nítrico, y diluir con agua a volumen. Esta so-
lución contiene O, 1 O µg/ml de plomo.
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de plomo.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Programar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a 2100º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
Suplementos Dietéticos / Schizochytrium 6143
metro de absorción atómica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para plomo. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de plomo, en µg/ml, y calcular la línea de regresión
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centración, C, en µg/ml, de plomo en cada ml de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de
regresión.
Calcular el contenido de plomo en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentración, según se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cápsulas tomado
para preparar la Solución muestra (g)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparación de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, teflón y plástico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a través
de una resina de intercambio iónico de lecho mixto, de
ácido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, teflón y plástico antes de su uso
remojando en ácido nítrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solución A: 1 O g de fosfato monobásico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solución B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflón. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de ácido nítrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los sólidos.
Dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumétrico de 100 ml, y diluir
con ªSlua desionizada a volumen.
Solucion C: Solución A, Solución B y ácido nítrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 µL proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nítrico y agua (1 :19)
Solución madre del estándar A: O, 1372 mg/ml de ni-
trato de cadmio
Solución madre del estándar B: Solución madre del es-
tándar A, ácido nítrico y agua (2:1 :97). Esta solución
contiene O, 1 O µg/ml de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porción de agua y
ácido nítrico.]
Soluciones estándar: Diluir Solución madre del estándar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 µg/ml de cadmio.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución
muestra en la prueba de Límite de Arsénico.
Análisis: Pro9ramar el horno de grafito según se indica
a continuacion. Secar a 120º usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argón de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850º usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20º y
un flujo de argón de 300 ml/min. Atomizar a 2400º
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argón detenido, y
limpiar a 2600º con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volúmenes iguales (20 µL) de las Soluciones están-
dar, de la Solución muestra y del Blanco, seguidos de
6144 Schizochytrium /Suplementos Dietéticos USP 37

una inyección de 5 µL de la Solución C para cada una

de las muestras, en el tubo de grafito de un espectró-
metro de absorción atómica con horno de grafito ade- Selenometionina
cuado, equipado con una lámpara de cátodo hueco
para cadmio. Determinar el área del pico en la línea de
emisión de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor-
ción de fondo. Graficar las áreas de los picos corregidas
de las Soluciones estándar en función de sus contenidos
de cadmio, en µg/mL, y calcular la línea de regresión
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con- CsH1 i N02Se 196, 11
~utanoic acid, 2-amino-4-(methylseleno)-, (S)-;
centración, C, en µg/mL, de cadmio en cada mL de la
Solución muestra interpolando a partir de la línea de Acido (5)-2-amino-4-(metilselenil)butírico [1464-42-2].
regresión. Calcular el contenido de cadmio en las Cáp- DEFINICIÓN
sufas tomadas: La Selenometionina contiene no menos de 97,0% y no más
de 103,0% de selenometionina (C 5 H11 N02Se) y contiene
Resultado = (C/W) x 25
no menos de 39,0% y no más de 41,0% de selenio (Se),
C = concentración, según se obtuvo calculado con respecto a la sustancia tal como se
anteriormente encuentra.
W = peso del contenido de las Cápsulas tomado IDENTIFICACIÓN
para preparar la Solución muestra (g) • A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
,Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g
• LIMITE DE MERCURIO VALORACIÓN
Proceder según se indica en Mercurio (261), Método /la y • PROCEDIMIENTO
Método /lb, excepto que se debe usar una Solución Están- Fase móvil: 6,8 g/L de fosfato monobásico de potasio
dar de Mercurio con el equivalente a O, 1 µg/mL de en agua. Ajustar con ácido fosfórico a un pH de 2,75 ±
mercurio. 0,25.
Solución muestra: Preparar según se indica en Solución Solución de aptitud del sistema: O, 16 mg/mL de ER
muestra en la prueba de Límite de Arsénico, combi- Selenometionina USP y 0,8 mg/mL de ER L-Metionina
nando los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL USP en Fase móvil
de Solución de Permanganato de Potasio. Solución estándar: O, 16 mg/mL de ER Selenometionina
Criterios de aceptación: No más de O, 1 µg/g USP en Fase móvil
Solución muestra: O, 16 mg/mL de Selenometionina en
PRUEBAS ESPECÍFICAS , Fase móvil disueltos con ultrasonido. Pasar a través de
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Anisidina (401): No más un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
de 20,0, determinado eri el contenido de las Cápsulas µm .
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Acidos Grasos Libres (401): Los Sistema cromato~ráfico
ácidos grasos libres en 1O g requieren para su neutraliza- (Ver Cromatograf/G (621 ), Aptitud del Sistema.)
ción no más de 1,42 m~ de hidróxido de sodio O, 1 N. Modo: HPLC
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Peróxido (401): No más Detector: UV 220 nm
de 5,0, determinado en, el contenido de las Cápsulas Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 con recubri-
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidación Total (TOTOX) miento polar (polar end-capping)
(401): No más de 26 (determinado en el contenido de Velocidad de flujo: 1 mL/min
las Cápsulas), calculado como: Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Resultado = (2 x PV) + AV Muestra: Solución de aptitud del sistema
PV = índice de peróxido [NOTA-Los tiempos de retención relativos para metio-
AV = índice de anisidina nina y selenometionina son 0,8 y 1,0,
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No respectivamente.]
más de 4,5%, determinado en el contenido de las Requisitos de aptitud
Cápsulas Resolución: No menos de 3,0 entre metionina y
selenometionina
REQUISITOS ADICIONALES Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- selenometionina
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposición al Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
calor excesivo. el pico de selenometionina
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de ácido do- Análisis
cosahexaenoico en mg/Cápsula. También indica el nom- Muestras: Solución estándar y Solución muestra
bre y la concentración de cualquier antioxidante Calcular el porcentaje de selenometionina
ag~egado. (C 5 H11 N02Se) en la porción de Selenometionina
• ESTAl!IDARES DE REFERJNCIA USP (11) tomada:
ER Ester Etílico del Acido Docosahexaenoico USP
ER Éster Etílico del Ácido Eicosapentaenoico USP Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ER Tricosanoato de Metilo USP
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Selenometionina USP en
la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Selenometionina en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 97,0%-103,0% con respecto
a la sustancia tal como se encuentra
USP 37
IMPUREZAS
• METALES PESADOS, Método I (231 ): No más de 20 ppm
• LÍMITE DE SODIO
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de sodio, a
partir de cloruro de sodio, secado previamente a 105º
durante dos horas.
Soluciones estándar: 0,2; 0,5 y 1,0 µg/ml de sodio.
Pipetear y transferir 2,0; 5,0 y 10,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 2,0 ml de solución de
cloruro de potasio (1 en 5) y 1,0 ml de ácido clorhí-
drico, y diluir con agua a volumen.
Solución muestra: Transferir 1 00 mg de Selenometio-
nina a un matraz volumétrico de 100 ml, agregar
2,0 ml de solución de cloruro de potasio (1 en 5) y
1,0 ml de ácido clorhídrico, y diluir con agua a
volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 589 nm
Lámpara: Sodio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones. Graficar
las absorbancias de las Soluciones estándar en función
de sus concentraciones (µg/ml de sodio) y trazar la
recta que mejor se ajuste a los puntos graficados. A
partir de la gráfica así obtenida, determinar la con-
centración de sodio, CNa (µg/ml), en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de sodio en la porción de Sele-
nometionina tomada:
Resultado = (CNalCsA) x F x 100
CNa = concentración de sodio en la Solución muestra
(µg/ml), determinada a partir de la línea de
regresión
CsA = concentración de Selenometionina en la
Solución muestra (mg/mL)
F = factor de conversión, 0,001 mg/µg
Criterios de acept~ción: No más de O, 1 %
• PUREZA CROMATOGRAFICA
Solución estándar A: Transferir 50 mg de ER Selenome-
tionina USP a un matraz volumétrico de 1 O ml, agregar
2 ml de agua, calentar hasta disolver, si fuera necesario,
y diluir con metano! a volumen.
Solución estándar B: Transferir 1,0 ml de Solución es-
tándar A a un matraz volumétrico de 100 ml y diluir
con metano! a volumen.
Solución muestra: Transferir 50 mg de Selenometionina
a un matraz volumétrico de 1 O ml, agregar 2 ml de
agua, calentar hasta disolver, si fuera necesario, y diluir
con metano! a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: TLC
Absorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para
cromatografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 1 O µL
Fase móvil: Butano!, ácido acético glacial y agua
(4:1:1)
Solución reveladora: 2 mg/ml de ninhidrina en
alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Proceder según se indica en Cromatografía (621 ), Cro-
matografía en Capa Delgada. Dejar que se sequen las
Suplementos Dietéticos / Selenometíonina 6145
aplicaciones y desarrollar el cromnlograma en la Fase
móvil hasta que el frente de la fase móvil haya reco-
rrido tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la camara de desarrollo, marcar el frente de
la fase móvil y dejar que la tase móvil se evapore.
Localizar las manchas en la placa rociando con Solu-
ción reveladora y secando a 11 Oº durante 1 O minutos.
Criterios de aceptación: No más de 1,0%. El valor Rr
de la mancha principal de la Solución muestra corres-
ponde al de la Solución estándar A; y ninguna mancha,
diferente de la mancha principal de la Solución muestra
es de mayor tamaño o intensidad que la mancha princi-
pal de la Solución estándar B.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ROTACIÓN ÓPTICA, Rotación Específica (781 S)
Solución muestra: 1 O mg/ml en ácido clorhídrico 1 N
Criterios de aceptación: +1 7,0º a + 19,5º
• CONTENIDO DE SELENIO
[PRECAUCIÓN-El selenio es tóxico; manipular con cuidado.]
Solución madre del estándar: Disolver 1 g de selenio
metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico. Eva-
porar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y evaporar
hasta sequedad. Repetir tres veces la adición de agua y
la evaporación hasta sequedad. Disolver el residuo en
ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz volumétrico
de 1000 ml y diluir con ácido clorhídrico 3 N a volu-
men. Esta solución contiene 1000 µg/ml de selenio.
Soluciones estándar: 20, 50 y 1 00 µg/ml de selenio.
Pipetear y transferir 2,0; 5,0 y 10,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
100 ml. Diluir el contenido de cada matraz con agua a
volumen.
Solución muestra: O, 125 mg/ml de Selenometionina
en agua
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 196 nm
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones. Graficar
las absorbancias de las Soluciones estándar en función
de sus concentraciones (µ.g/ml de selenio) y trazar la
recta que mejor se ajuste a los puntos graficados. A
partir de la gráfica así obtenida, determinar la con-
centración de selenio, Cse (µg/ml), en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de selenio en la porción de Sele-
nometionina tomada:
Resultado = (Cse!CsA) x F x 100
Cse = concentración de selenio en la Solución
muestra (µg/ml), determinada a partir de la
línea de rewesión
CsA = concentracion de Selenometionina en la
Solución muestra (mg/ml)
F = factor de conversión, 0,001 mg/µg
Criterios de aceptación: 39,0%-41,0% con respecto a
la sustancia tal como se encuentra
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER L-Metionina USP
ER Selenometionina USP
6146 Serenoa / Suplementos Dietéticos
Serenoa
DEFINICIÓN
El Serenoa es el fruto maduro, parcialmente secado, de Sere-
noa repens (W. Bartram) Small (Fam. Arecaceae) [Serenoa
serrulatum Schult.; Soba/ serrulata (Michx.) Nutt. ex
Schult. & Schult. f.]. Contiene no menos de 2% (v/p) de
aceite volátil, no menos de 7% de extracto lipofílico y no
menos de 9,0% de ácidos grasos totales.
IDENTIFICACIÓN , ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
[NOTA-Realizar la siguiente prueba bajo una luz. tenue.]
Solución reactivo: 3,7 mg/ml de 4-bromometil~~-me-
toxicoumarina en acetona. Almacenar esta soluc1on en
un lugar oscuro. . duo con pequeñas porciones de alcohol~ R.ecoger el fil-
Solucion estándar: 5,0 g de estearato de magnesio en
un matraz de fondo redondo de 1 00 ml equipado con
un condensador de reflujo. Agregar 50 ml de éter,
20 ml de ácido nítrico al 12,5% y 20 ml de agua y
calentar hasta disolver completamente. Enfriar, transferir
el contenido del matraz a un embudo de separación y
retirar la fase acuosa inferior. Extraer dos veces la fase
etérea usando cada vez 4 ml de agua y separar las fases
acuosas. Extraer las fases acuosas combinadas con
15 ml de éter combinando los extractos etéreos. Evapo-
rar hasta sequedad y secar el residuo a 105º. Transferir
1 mg del residuo a un vial de vidrio ámbar con una
tapa de goma con abrazadera metálica. Agreg_ar 1 q mg
de carbonato de litio, 3 µL de tris-[2-(2-metox1etox1)
etil]amina y 1,0 mg de Solución reactivo. Colocar la tapa
de goma con la abrazadera metálica, secar a 105º du-
rante 2 horas y enfriar.
Solución muestra: 10,0 g de Serenoa reducida a pol:io
fino en un matraz de fondo redondo de 250 ml equi-
pado con un condensador de reflujo. Agregar 150 ml
de alcohol y calentar bajo reflujo en un baño de vapor
durante 1 hora. Enfriar, filtrar, lavar el residuo con al-
cohol y diluir los lavados y el filtrado combinados con
alcohol hasta 200,0 ml. Transferir 0,6 ml de esta solu-
ción a un matraz adecuado y evaporar hasta sequedad.
Agregar al ,residuo 1,0 ml de Solu~ión reactivo: Transferir
esta solucion con ayuda de una pipeta a un vial de
vidrio ámbar con una tapa de goma con abrazadera
metálica. Agregar 3 µL de tris-[2-q~meto~ietoxi)etil]
amina y 1 O mg de carbonato de ht10 al vial. Colocar la
tapa de goma con abrazadera metálica, secar a 105º
durante 2 horas y enfriar. .
Solución blanco: Agregar a 1 O mg de carbonato de li-
tio en un vial de vidrio ámbar con un tapón de goma
con abrazadera metálica, 3 µL de tris-[2-(2-metoxieto-
xi)etil]amina y 1,0 ml de Solución reactivo. Colocar la
tapa de goma con la abrazadera metálica, secar a 105º
durante 2 horas y enfriar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 2 µL
Fase móvil: Ciclohexano, acetato de etilo y ácido acé-
tico (70:30:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu-
ción blanco
Desarrollar los cromatogramas en la fase móvil hasta
que el frente de la fase móvil haya recorrido tres cuar-
tos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara cromatográfica, marcar el frente de la fase mó-
vil y dejar que la placa se seque al aire. Observar la
placa bajo luz UV de longitud de onda larga.
USP 37
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta al menos dos zonas de fluores~ .
cencia azul, cuyos valores R1 corresponden a zonas s1m1-
lares presentes en la Solución estándar. Las zonas de
fluorescencia azul de la Solución muestra aparecen por
encima de las zonas de fluorescencia azul presentes en
la Solución blanco.
COMPOSICIÓN
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO,Determinación de Aceite
Volátil (561): No menos de 2% (v/p) de un aceite que
solidifica en un sólido blanco,a temperatura ambiente
• CONTENIDO DE EXTRACTO LIPOFILICO
Análisis: Transferir 1 O g de Serenoa reducido a polvo a
un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con
un condensador de reflujo y agregar 150 ml de _al-.
cohol. Calentar el matraz en un baño de agua h1rv1endo
bajo reflujo durante 1 hora. Enfriar, filtrar y lavar el rE'.si-
trado y los lavados en un matraz volumetnco de
200 ml y diluir con alcohol a volumen. Evaporar
1 00,0 ml de esta solución hasta sequedad en un evapo-
rador rotatorio al vacío. Agregar 40 ml de n-hexano al
residuo, mezclar durante 5 minutos, filtrar y re~oger el
filtrado en un matraz de fondo redondo. Repetir la ope-
ración de lavado anterior con n-hexano dos veces mas y
recoger todos los filtrados en el mismo matraz. Usando
un evaporador rotatorio, evapora: el disolve~te orgá-
nico hasta sequedad. Secar el residuo obtenido a 105
0
durante 2 horas.
Criterios de aceptación: El peso del residuo es no me-
nos de 0,35 g (no menos de 7%).
• CONTENIDO DE ACIDOS GRASOS
Solución de estándar interno: 12 mg/ml de nonade-
cano en hexanos
Solución madre del estándar: Disolver cantidades de
ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP, ER
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP, ER
Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metilo USP,
ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo U.SP,
ER Palmitoleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo
USP y ER Linolenato de Metilo US~ en hexa,~os hast,a
obtener concentraciones de cada ester met1hco segun
se indica en la Tabla 7.
Tabla 1
Éster Metílico Concentración íma/mL)
Laurato de metilo 5
Oleato de metilo 5
Miristato de metilo 2
Palmitato de metilo 2
Linoleato de metilo 1
Caoroato de metilo 04
Caorilato de metilo 04
Caorato de metilo 04
Palmitoleato de metilo 04
Estearato de metilo 04
Linolenato de metilo 04
Solución estándar: Transferir 1,0 ml de Solución de es-
tándar interno a 5,0 ml de la Solución madre del
estándar.
Solución muestra: Reducir a polvo moderadamente
grueso 50 g de Serenoa seco. Transferir 1 g de polvo a
un matraz de fondo redondo de 1 00 ml equipado con
un condensador de reflujo enfriado con agua y una ba-
rra magnética. ~gregar 1 O ml de solución d.e hjd_róxido
de sodio metanolico 0,5 N (20 mg/ml de h1drox1do de
sodio en metano!) y calentar el matraz mezclando bajo
condiciones de reflujo durante 15 minutos. Pipetear y
transferir 5 ml de una solución de trifluoruro de boro
en metano! (140 mg/ml de trifluoruro de boro en me-
USP 37 Suplementos Dietéticos / Serenoa 614 7

tanol) a través del condensador de reflujo en el matraz Análisis

y continuar la ebullición durante 2 minutos más. Agre-
gar 5,0 ml de hexanos a través del condensador y con-
tinuar la ebullición durante 1 minuto adicional. Enfriar
el matraz, retirar el condensador, agregar 15 ml de so-
lución saturada de cloruro de sodio y agregar 1,0 ml
de Solución de estándar interno. Mientras la solución
está tibia, tapar el matraz y agitar vigorosamente. Pipe-
tear y transferir 1,0 ml de la capa superior de hexanos
a un tubo de ensayo con tapón de vidrio que contenga
una pequeña cantidad de sulfato de sodio anhidro. Fil-
trar la solución y, si fuera necesario, diluir un volumen
del filtrado con hexanos para obtener un volumen co-
nocido. [NOTA-Almacenar esta solución en un refrige-
rador hasta el momento de su uso.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar de sílice fundida, de 0,25 mm x 30
m, recubierta con una película de fase Gl 6 de 0,25
µm
Temperatura
Inyector: 250º
Detector: 300º
Columna: Ver la Tabla 2.
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de cada ácido graso en la porción
de Serenoa tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs x \/) x (1 /W) x (Mc1/Mr2) x
100
Ru = cociente de respuesta entre los picos del éster
metílico pertinente y estándar interno
obtenido de la Solución muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos del éster
metílico pertinente y estándar interno
obtenido de la Solución estándar
Cs = concentración del éster metílico respectivo en
la Solución madre del estándar (mg/ml)
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar (ml)
W = peso de Serenoa tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
M,1 = peso molecular del ácido graso pertinente
M,2 = peso molecular del éster metílico del ácido
graso pertinente
Criterios de aceptación: No menos de 9,0% para la
suma de los porcentajes de todos los ácidos grasos. Ver
la Tabla 4 para ácidos grasos individuales.

Tabla 2 Tabla 4

Tiempo de Ácidos Grasos Porcentajes

Espera Individuales (%)
(Hold Time) Ácido oleico No menos de 3 O
a Ácido láurico No menos de 2 O
Temperatura Rampa de Temperatura Temperatura Ácido mirística No menos de 1 2
Inicial Temperatura Final Final
Ácido oalmítico No menos de 1 O
(º) Cº/min) (º) Cmin)
Ácido linoleico No menos de O 4
120 o 120 3
Ácido caoroico No menos de O 2
120 50 220 12
Ácido caorílico No menos de O 2
Gas transportador: Helio Ácido cáorico No menos de O 2
Velocidad de flujo: 1 ml/min Ácido esteárico No menos de O 1
Volumen de inyección: 1 µL Ácido linolénico No menos de O 05
Aptitud del sistema Ácido oalmitoleico No menos de O 01
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Ver la Tabla 3 para los tiempos de retención
relativos.] CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS (231 ): ,No más de 1 µg/g o
Tabla 3 • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
Tiempo de • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Retención tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g y el recuento total
Éster Metílico Relativo combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Caoroato de metilo o 39 cede de 10 2 ufc/g. ,
Caorilato de metilo o 56 • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Caorato de metilo o 76 ple con los requisitos de la prueba para determinar la
Laurato de metilo o 94 ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli y la ausen-
cia de Staphylococcus aureus.
Nonadecano (estándar interno) 1o
Miristato de metilo 11 PRUEBAS ESPECÍFICAS
Palmitato de metilo 13 • CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Palmitoleato de metilo 1 35 Macroscópicas: Drupas subesféricas a ovoides, de apro-
Estearato de metilo 1 65
ximadamente 2-3 cm de longitud y aproximadamente
1,5 cm de espesor, de color marrón oscuro a negro con
Oleato de metilo 17
una superficie lisa y opaca y con grandes depresiones y
Linoleato de metilo 18 crestas irregulares causados por la contraccion al se-
Linolenato de metilo 20 carse; remanentes del estilo en la cúspide, la base pre-
senta una pequeña depresión con la cicatriz del pedi-
Requisitos de aptitud celo; el epicarpio y el sarcocarpio subyacente forman
Resolución: No menos de 1,5 entre estearato de me- una capa frágil que se desprende parcialmente y revela
tilo y oleato de metilo la capa dura de color marrón pálido del endocarpio que
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada uno rodea la semilla. Semilla irregularmente esférica a
de los picos de ésteres metílicos ovoide de hasta aproximadamente 1,2 cm de longitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0% para y 1 cm de ancho, dura, superficie finamente punteada
cada uno de los picos de ésteres metílicos de color marrón rojizo con un área más pálida, elevada
y membranosa sobre el rafe y el micrópilo; cuando se
6148 Serenoa / Suplementos Dietéticos
corta transversalmente, presenta una testa delgada, un
perisperma estrecho y un área grande de endosperma
denso, córneo y de color blanco grisáceo.
Microscópicas: La pulpa está cubierta por una epider-
mis de células pequeñas y paredes delgadas y consta
principalmente de un parénquima de células muy gran-
des y de paredes generalmente delgadas. Las capas más
externas contienen sustancias de color marrón; hacia el
interior, sólo se presentan células individuales con con-
tenidos marrones dispersas en el tejido; también se en-
cuentran ocasionalmente células petreas de gran ta-
maño bastante punteadas, con paredes gruesas y lumen
amplio. Los haces vasculares están acompañados de fi-
bras con células cobertoras (estigmas) que contienen
sólidos silíceos adjuntos. Las capas más internas de la
pared de la pulpa contienen células pétreas (astroescle-
reidas) casi completamente engrosadas, bastante pun-
teadas y de forma muy irregular. Las capas externas de
la cubierta de la semilla presentan células grandes de
paredes gruesas; las capas intermedias son de paredes
delgadas y las células son más pequeñas; las capas más
internas son de células pequeñas aplanadas. Todas las
células están llenas de una sustancia de color marrón.
En el exterior, el endosperma presenta células de pare-
des gruesas, sin puntuaciones y alargadas radialmente;
en las capas más profundas, las células son más gran-
des, de paredes gruesas y con puntuaciones bastante
gruesas. La laminilla media es claramente reconocible.
Las células contienen aleurona con cristaloides de
p~oteína. , ambiente .
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgánica Extraña
(~61): No más de 2,0%
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Serenoa redu-
cido a polvo fino a 105º durante 2 horas: pierde no más
de) 2,0% de su peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 5,0%, determinado en 1,0 g de Serenoa re-
du<;ido a polvo fino , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Caprato de Metilo USP
ER Caproato de Metilo USP
ER Caprilato de Metilo USP
ER Laurato de Metilo USP
ER Linoleato de Metilo USP
ER Linolenato de Metilo USP
ER Miristato de Metilo USP
ER Oleato de Metilo USP
ER Palmitato de Metilo USP
ER Palmitoleato de Metilo USP
ER Estearato de Metilo USP
Serenoa, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Serenoa contienen Extracto de Serenoa. Las
Cápsulas contienen no menos de 22,0% y no más de
34,0% de ácido láurico en la cantidad declarada de Ex-
tracto de Serenoa. El cociente entre las concentraciones
de ácido láurico y ácido caprílico es no menos de 8,5 y
no más de 1 7,5. El cociente entre las concentraciones de
ácido láurico y ácido mirística es no menos de 2,2 y no
más de 2,8.
USP 37
IDENTIFICACIÓN
• A. Los tiempos de retención de los picos de caprato de
metilo, caproato de metilo, caprilato de metilo, laurato
de metilo, linoleato de metilo, linolenato de metilo, miris-
tato de metilo, oleato de metilo, palmitato de metilo,
palmitoleato de metilo y estearato de metilo de la Solu-
ción muestra corresponden a los de la Solución est<jndar,
se_gún se obtienen en la prueba de Contenido de Acjdo
Laurico y l9s Cocientes entre las C9ncentraciones qe Acido
Láurico y Acido Caprílico, y entre Acido Láurico y Acido
Mirística.
• 8. PRESENCIA DE ESTEROLES
Solución madre de derivatización: N,0-bis(trimetilsilil)-
acetamida, trimetilsililimidazol y trimetilclorosilano
(3:3:2)
Solución de derivatización: Solución madre de derivati-
zación, bis(trimetilsilil)-trifluoroacetamida y piridina
(1:1:1)
Solución de estándar interno: 1O mg/mL de eicosanol
y 5 m;¡/mL de colesterol en cloroformo
Solucion madre del estándar: 0,75 mg/mL de ER He-
xacosanol USP y 1,4 mg/mL de ER /3-Sitosterol USP en
cloroformo
Solución estándar: Mezclar 5,0 mL de Solución madre
del estándar con 1,0 mL de Solución de estándar interno.
Evaporar 0,75 mL de esta solución hasta sequedad
usando una corriente de nitrógeno. Disolver el residuo
en 1,0 mL de Solución de derivatización y dejar en re-
poso durante no menos de 15 minutos a temperatura
Solución madre de aptitud del sistema A: 2 mg/mL
de tetracosanol, de octacosanol, de ER Hexacosanol USP
y de triacontanol en cloroformo
Solución de aptitud del sistema A: Mezclar 5,0 mL de
Solución madre de aptitud del sistema A con 1,0 mL de
Solución de estándar interno. Evaporar 0,75 mL de esta
solución hasta sequedad usando una corriente de nitró-
geno. Disolver el residuo en 1,0 mL de Solución de deri-
vatización y dejar en reposo durante no menos de 15
minutos a temperatura ambiente.
Solución madre de aptitud del sistema B: 2 mg/ml
de campesterol, de estigmasterol y de ER /3-Sitosterol
USP y 0,37 mg/mL de estigmastanol
Solución de aptitud del sistema B: Mezclar 5,0 mL de
Solución madre de aptitud del sistema B con 1,0 mL de
Solución de estándar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
solución hasta sequedad usando una corriente de nitró-
geno. Disolver el residuo en 1,0 mL de Solución de deri-
vatización y dejar en reposo durante no menos de 15
minutos a temperatura ambiente.
Solución de f3-colestanol: f3-colestanol en cloroformo
(1 en 100)
Solución muestra
Muestra: Un número de Cápsulas, equivalente a 1 O g
de Extracto de Serenoa.
Abrir las Cápsulas y transferir las cubiertas y el conte-
nido a un recipiente adecuado.
Transferir 5 g de la Muestra a un matraz de fondo re-
dondo de 250 mL, y evaporar al vacío a una tempe-
ratura de no más de 50º. Agregar 50 ml de una solu-
ción que se prepara disolviendo 1 30 mg/mL de
hidróxido de potasio en metanol y agua (4:1 ). Aco-
plar un condensador y someter a reffujo en un baño
a 100º hasta obtener una solución transparente. So-
meter a reflujo durante 1O minutos adicionales y en-
friar agregando 50 mL de agua a través del condensa-
dor. Transferir a un embudo de seraración,
enjuagando el matraz con un tota de 50 mL de agua
en pequeñas porciones. Extraer con 80 mL de éter,
agitando durante 30 segundos y repetir dos veces.
[NOTA-Si se forma una emulsion, se puede eliminar
agregando pequeñas cantidades de metanol. Transfe-
rir las capas etereas combinadas a un embudo de se-
paración y lavar con porciones sucesivas de 50 mL de
USP 37
agua hasta obtener un lavado neutro.] [NOTA-Si se
forma una emulsión, se puede eliminar agregando
pequeñas cantidades de metano!.] Pasar el extracto
etéreo a través de papel de filtro que contenga sul-
fato de sodio anhidro, lavar el filtro con 30 mL de
éter, y evaporar hasta sequedad al vacío. Disolver el
residuo en 2,0 mL de cloroformo. Extraer los esteroles
usando el siguiente sistema cromatográfico.
Sistema cromatográfico de extracción
Modo: TLC
Adsorbente: Placa para cromatografía recubierta con
gel de sílice de 0,25 mm con una zona de aplicación
previamente sumergida en 3 cm de una solución que
se prepara disolviendo 13 mg/mL de hidróxido de
potasio en metanol y agua (49:1)
Fase móvil: Hexanos y éter (7:3)
Volúmenes de aplicación: 200 µL de solución de clo-
roformo gue contenga residuos de Cápsulas y 20 µL
de Solucion de {3-colestanol
Después de que se hayan aplicado las manchas, dejar
que la placa se seque y calentar a 100º durante 1 hora
antes de usar. La placa se puede almacenar en un de-
secador que contenga cloruro de calcio hasta el mo-
mento de su uso. Desarrollar las placas hasta que el
frente de la fase móvil haya recorrido 17-19 cm. Man-
tener la cámara a una temperatura entre 15º y 20º.
Secar la placa en una corriente de aire tibio, luego
rociar con una solución alcalina de 2,7-diclorofluores-
ceína en alcohol (0,2 en 100). Observar la placa bajo
luz de longitud de onda de 366 nm e identificar las
bandas correspondientes a los esteroles refiriéndose a
la mancha de f3-colestanol. Raspar estas bandas y
transferirlas a un tubo de ensayo. Agregar 1 O mL de
cloroformo tibio y agitar durante 2 minutos con ayuda
de varias perlas de vidrio. Filtrar la solución clorofor-
mica, lavar el filtro con cloroformo, y evaporar el fil-
trado y los lavados combinados hasta sequedad al va-
cío. Disolver el residuo con algunas gotas de acetona
anhidra y evaporar al vacío. Secar el residuo en un
horno a 105º durante 15 minutos. Disolver el residuo
en 0,2 mL de Solución de derivatización. Usar la solu-
ción resultante como la Solución muestra para el análi-
sis mediante Cromatografía de Gases.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar, de 0,2 mm x 25 m, recubierta con
fase Gl de 0,33 µm de espesor
Temperatura
Detector: 325º
Inyector: 325º
Columna: Ver la tabla de programa de temperatura
siguiente.
Tiempo de
Espera (Hold
Time)
Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera-
Inicial Temperatura Final tura Final
(º) (º/mln) (º) lmin)
200 o 200 3 Solución estándar: Agregar 1,0 mL de Solución de es-
200 10 300 35
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
Velocidad del gas de compensación: 25 mL/min
Relación de partición: 1 :40
Volumen de inyección: 1 µL
Tipo de inyección: Sistema de inyección dividida
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema A y Solución
de aptitud del sistema B
Suplementos Dietéticos/ Serenoa 6149
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para tetraco-
sanol, octacosanol, hexacosanol y triacontanol son
0,89; 1,00; 1, 15 y 1, 36, respectivamente, Solución de
aptitud del sistema A; y los tiemf.os de retención relati-
vos para colesterol, campestero, estigmasterol, f:l-sitos-
tero y estigmastanol son 0,85; 0,92; 0,95; 1,00 y
1,01, respectivamente, Solución de aptitud del sistema
B.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2 entre f:l-sistosterol y es-
tigmastanol, Solución de aptitud del sistema B
Eficiencia de la columna: No menos de 200 000 pla-
tos teóricos para el pico de eicosanol, Solución de ap-
titud del sistema A; y no menos de 150 000 platos
teóricos para el pico de colesterol, Solución de aptitud
del sistema B
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico
pertinente, Solución de aptitud del sistema A; y no más
de 2,0 para cada pico pertinente, Solución de aptitud
del sistema B
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Identificar las señales correspondientes a los analitos
pertinentes por comparación con los cromatogramas
obtenidos con las Soluciones de aptitud del sistema A y
B.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
picos para campesterol, [3-sitosterol y estigmasterol,
identificados por sus tiempos de retención relativos con
respecto al pico de [3-sitosterol en la Solución estándar.
CONTENIDO , ,
• CONTENIDO DE ACIDO LAURICO Y LOS COCIENTES ENTRE LAS
CONCENTRACIONES DE ÁCIDO LÁURICO Y ÁCIDO CAPRÍLICO, Y
ENTRE ÁCIDO LÁURICO Y ÁCIDO MIRÍSTICO
Solución de estándar interno: 12 mg/mL de nonade-
cano en hexanos
Solución madre del estándar: Disolver cantidades de
ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP, ER
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo l,JSP, ER
Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metilo USP,
ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,
ER Palmitoleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo
USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos para
obtener una concentración de cada éster metílico según
se indica en la tabla siguiente.
Éster Metílico Concentración lmo/ml)
Laurato de metilo 5
Oleato de metilo 5
Miristato de metilo 2
Palmitato de metilo 2
Linoleato de metilo 1
Caoroato de metilo 04
Caorilato de metilo 04
Caorato de metilo 04
Palmitoleato de metilo 04
Estearato de metilo 04
Linolenato de metilo 04
tándar interno a 5,0 mL de la Solución madre del
estándar.
Solución muestra: Tomar un número de Cápsulas,
equivalente a 1O g de Extracto, abrir las Cápsulas, y
transferir las cubiertas y el contenido a un recipiente
adecuado. Transferir 1 00 mg a un vial con tapa de
rosca a prueba de presión y agregar 3,0 mL de una
solución de ácido sulfúrico en metanol (5 en 100). Ca-
lentar en un baño de aceite a 1 oou durante 2 horas,
agitando eventualmente. Dejar que se enfríe y agregar
1,0 mL de Solución de estándar interno, 10,0 mL de
agua, 1 g de cloruro de sodio y 5 mL de hexanos. Agi-
61 50 Serenoa / Suplementos Dietéticos USP 37

tar bien y dejar que las capas se separen completa- L1 = cantidad declarada de Extracto de Serenoa por
mente. Usar la capa de hexanos. [NOTA-Almacenar Cápsula (mg/Cápsula)
esta solución en un refrigerador antes su uso.] Usando estos porcentajes, calcular los cocientes
Sistema cromato9ráfico individuales entre la concentración de ácido láurico y
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.) ácido caprílico, y entre ácido láurico y ácido mirística
Modo: Cromatografía de Gases en la porción de Cápsulas tomada.
Detector: Ionización a la llama Criterios de aceptación: 22,0%-34,0% de ácido !áu-
Columna: Capilar de sílice fundida, de 0,25 mm x 30 rico en la cantidad declarada de Extracto de Serenoa. El
m, recubierta con una película de fase Gl 6 de 0,25 cociente entre ácido láurico y ácido caprílico es
µm 8,5-17,5. El cociente entre acido láurico y ácido mirís-
Temperatura tica es 2,2-2,8.
Detector: 300º
Inyector: 250º PRUEBAS DE DESEMPEÑO
Columna: Ver la tabla de programa de temperatura • DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
siguiente. (2040): Cumplen con los requisitos de Prueba de Rup-
tura para Cápsulas Blandas ,
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Tiempo de
Cumplen con los requisitos
Espera (Hold
Time) CONTAMINANTES
Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera- • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
Inicial Temperatura Final tura Final tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g, el recuento total
(º) (º/min) (º) (min) combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
120 o 120 3 cede de 1000 ufc/g, el recuento de coliformes no excede
120 50 220 12 de 100 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no excede
de 100 ufc/g. ,
Gas transportador: Helio • PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
Velocidad de flujo: 1 mL/min SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Las
Volumen de inyección: 1 µL Cápsulas cumplen con los requisitos de las pruebas para
Aptitud del sistema determinar la ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia coli
Muestra: Solución estándar y Staphylococcus aureus.
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ca-
proato de metilo, caprilato de metilo, caprato de me- REQUISITOS ADICIONALES
tilo, laurato de metilo, nonadecano (estándar interno), • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
miristato de metilo, palmitato de metilo, palmitoleato permeables y resistentes a la luz.
de metilo, estearato de metilo, oleato de metilo, lino- • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
leato de metilo y linolenato de metilo son aproximada- latín y después de la denominación oficial, el nombre del
mente 0,39; 0,56; 0,76; 0,94; 1,0; 1,1; 1,3; 1,35; artículo a partir del que se prepararon las Cápsulas. Eti-
1,65; 1,7; 1,8 y 2,0, respectivamente.] qu~tar indicando la cantidad de Extracto en mg/Cápsula.
Requisitos de aptitud • ESTANDARES DE REFERENCIA USP(l l)
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de es- ER Hexaconasol USP
tearato de metilo y oleato de metilo ER Caprato de Metilo USP
Factor de asimetna: No más de 2,0 para los picos de ER Caproato de Metilo USP
cada éster metílico ER Caprilato de Metilo USP
Desviación estándar relativa: No más de 5,0% para ER Laurato de Metilo USP
los picos de cada éster metílico ER Linoleato de Metilo USP
Análisis ER Linolenato de Metilo USP
Muestras: Solución estándar y Solución muestra ER Miristato de Metilo USP
Calcular los porcentajes de ácido !áurico, ácido mirís- ER Oleato de Metilo USP
tica y ácido caprílico en la cantidad declarada de Ex- ER Palmitato de Metilo USP
tracto de Serenoa en la porción de Cápsulas tomada: ER Palmitoleato de Metilo USP
ER Estearato de Metilo USP
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs x V/W) x (Mr1/M,2) x Aw/LE x ER /J-Sitosterol USP
100
Ru = cociente de respuesta entre los picos del éster
metílico pertinente y el estándar interno de
la Solucion muestra Serenoa en Polvo
Rs = cociente de respuesta entre los picos del éster
metílico pertinente y el estándar interno de DEFINICIÓN
la Solucion estándar El Serenoa en Polvo es Serenoa reducido a polvo fino o muy
Cs = concentración del éster metílico fino. Contiene no menos de 2% (v/p) de aceite volátil, no
correspondiente en la Solución madre del menos de 7% de extracto lipofílico y no menos de 9,0%
estándar (mg/mL) de ácidos grasos totales.
V = volumen de la Solución madre del estándar
tomado para preparar la Solución estándar IDENTIFICACIÓN
(5,0 mL) • A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
w = peso de muestra usado para preparar la DELGADA
Solución muestra (mg) [NOTA-Realizar la siguiente prueba bajo una luz tenue.]
= peso molecular del ácido graso pertinente Solución reactivo: 3,7 mg/mL de 4-bromometil-7-me-
= peso molecular del éster metílico del ácido toxicoumarina en acetona. Almacenar esta solución en
graso pertinente un lugar oscuro.
Aw = peso promedio del contenido de Cápsula Solucion estándar: 5,0 g de estearato de magnesio en
(mg/Cápsula) un matraz de fondo redondo de 100 mL equipado con
un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de éter,
USP 37
20 ml de ácido nítrico al 12,5% y 20 ml de agua y
calentar hasta disolver completamente. Enfriar, transferir
el contenido del matraz a un embudo de separación y
retirar la fase acuosa inferior. Extraer dos veces la fase
etérea usando cada vez 4 ml de agua y separar las fases
acuosas. Extraer las fases acuosas combinadas con
15 ml de éter combinando los extractos etéreos. Evapo-
rar hasta sequedad y secar el residuo a 105º. Transferir
1 mg del residuo a un vial de vidrio ámbar con una
tapa de goma con abrazadera metálica. Agregar 1O mg
de carbonato de litio, 3 µL de tris-[2-(2-metoxietoxi)
etil]amina y 1,0 mg de Solución reactivo. Colocar la tapa
de goma con la abrazadera metálica, secar a 105º du-
rante 2 horas y enfriar.
Solución muestra: 10,0 g de Serenoa en Polvo en un
matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 150 ml de alcohol y
calentar bajo reflujo en un baño de vapor durante 1
hora. Enfriar, filtrar, lavar el residuo con alcohol y diluir
los lavados y el filtrado combinados con alcohol hasta
200,0 ml. Transferir 0,6 ml de esta solución a un ma-
traz adecuado y evaporar hasta sequedad. Agregar al
residuo 1,0 ml de Solución reactivo. Transferir esta solu-
ción con ayuda de una pipeta a un vial de vidrio ámbar
con una tapa de goma con abrazadera metálica. Agre-
gar 3 µL de tris-[2-(2-metoxietoxi)etil]amina y 1O mg de
carbonato de litio al vial. Colocar la tapa de goma con
abrazadera metálica, secar a 105º durante 2 horas y
enfriar. Usar la solución enfriada.
Solución blanco: Agregar a 1O mg de carbonato de li-
tio en un vial de vidrio ámbar con una tapa de goma
con abrazadera metálica, 3 µL de tris-[2-(2-metoxieto-
xi)etil]amina y 1,0 ml de Solución reactivo. Colocar la
tapa de goma con la abrazadera metálica, secar a 105º
durante 2 horas y enfriar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/G (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicación: 2 µL
Fase móvil: Ciclohexano, acetato de etilo y ácido acé-
tico (70: 30: 1)
Análisis
Muestras: Solución estándar, Solución muestra y Solu-
ción blanco
Desarrollar los cromatogramas en la fase móvil hasta
que el frente de la fase móvil haya recorrido tres cuar-
tos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara cromatográfica, marcar el frente de la fase mó-
vil y dejar que la placa se seque al aire. Observar la
placa bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta al menos dos zonas de fluores-
cencia azul, cuyos valores RF corresponden a zonas simi-
lares presentes en la Solución estándar. Las zonas de
fluorescencia azul de la Solución muestra aparecen por
encima de las zonas de fluorescencia azul presentes en
la Solución blanco.
COMPOSICIÓN
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Determinación de Aceite
Volátil (561): No menos de 2 ml/l 00 g de un aceite
que solidifica en un sólido blanco a temperatura
ambiente
• CONTENIDO DE EXTRACTO LIPOFÍLICO
Análisis: Transferir 1O g de Serenoa en Polvo a un ma-
traz de fondo redondo de 250 ml equipado con un
condensador de reflujo y agregar 150 ml de alcohol.
Calentar el matraz en un baño de agua hirviendo bajo
reflujo durante 1 hora. Enfriar, filtrar y lavar el residuo
con pequeñas porciones de alcohol. Recoger el filtrado
y los lavados en un matraz volumétrico de 200 ml y
diluir con alcohol a volumen. Evaporar 100,0 ml de
Suplementos Dietéticos / Serenoa 61 51
esta solución hasta sequedad en un evaporador rotato-
rio al vacío. Agregar 40 ml de n-hexano al residuo,
mezclar durante 5 minutos, filtrar y recoger el filtrado
en un matraz de fondo redondo. Repetir la operación
de lavado anterior con n-hexano dos veces más y reco-
ger todos los filtrados en el mismo matraz. Usando un
evaporador rotatorio, evaporar el disolvente orgánico
hasta sequedad. Secar el residuo obtenido a 105º du-
rante 2 horas.
Criterios de aceptación: El peso del residuo es no me-
nos de 0,35 g (no menos de 7%).
• CONTENIDO DE ACIDOS GRASOS
Solución de estándar interno: 12 mg/ml de nonade-
cano en hexanos
Solución madre del estándar: Disolver cantidades de
ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP, ER
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP, ER
Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metilo USP,
ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,
ER Palmitoleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo
USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos hasta
obtener concentraciones de cada éster metílico según
se indica en la Tabla 7.
Tabla 1
Éster Metílico Concentración lma/mL)
Laurato de metilo 5
Oleato de metilo 5
Miristato de metilo 2
Palmitato de metilo 2
Linoleato de metilo 1
Caoroato de metilo 04
Caorilato de metilo 04
Caorato de metilo 04
Palmitoleato de metilo 04
Estearato de metilo 04
Linolenato de metilo 04
Solución estándar: Transferir 1,0 ml de Solución de es-
tándar interno a 5,0 ml de Solución madre del estándar.
Solución muestra: Transferir 1 g de Serenoa en Polvo a
un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con
un condensador de reflujo enfriado con agua y una ba-
rra magnética. Agregar 1O ml de solución de hidróxido
de sodio metanólico 0,5 N (20 mg/ml de hidróxido de
sodio en metanol) y calentar el matraz mezclando bajo
condiciones de reflujo durante 15 minutos. Pipetear y
transferir 5 ml de una solución de trifluoruro de boro
en metanol (140 mg/ml de trifluoruro de boro en me-
tano!) a través del condensador de reflujo en el matraz
y continuar la ebullición durante 2 minutos más. Agre-
gar 5,0 ml de hexanos a través del condensador y con-
tinuar la ebullición durante 1 minuto adicional. Enfriar
el matraz, retirar el condensador, agregar 15 ml de so-
lución saturada de cloruro de sodio y agregar 1,0 ml
de Solución de estándar interno. Mientras la solución
está tibia, tapar el matraz y agitar vigorosamente. Pipe-
tear y transferir 1,0 ml de la capa superior de hexanos
a un tubo de ensayo con tapón de vidrio que contenga
una pequeña cantidad de sulfato de sodio anhidro. Fif-
trar la solución y, si fuera necesario, diluir un volumen
del filtrado con hexanos para obtener un volumen co-
nocido. [NOTA-Almacenar esta solución en un refrige-
rador hasta el momento de su uso.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Capilar de sílice fundida, de 0,25 mm x 30
m, recubierta con una película de fase Gl 6 de 0,25
µm
61 52 Serenoa / Suplementos Dietéticos USP 37

Temperatura M, 1 = peso molecular del ácido graso pertinente

Inyector: 250" M,2 = peso molecular del éster metílico del ácido
Detector: 300" graso pertinente
Columna: Ver la Tabla 2. Criterios de aceptación: No menos de 9,0% para la
suma de los porcentajes de todos los ácidos grasos. Ver
Tabla 2 la Tabla 4 de ácidos grasos individuales.
Tiempo de
Tabla 4
Espera
(Hold Time) Ácidos Grasos Porcentajes
a Individuales (%\
Temperatura Rampa de Temperatura Temperatura Ácido oleico No menos de 3 O
Inicial Temperatura Final Final Ácido láurico No menos de 2 O
(º\ Cº/min) (º\ Cmin)
Ácido mirística No menos de 1 2
120 o 120 3
Ácido oalmítico No menos de 1 O
120 50 220 12
Ácido linoleico No menos de O 4
Gas transportador: Helio Ácido caoroico No menos de O 2
Velocidad de flujo: 1 ml/min Ácido caorílico No menos de O 2
Volumen de inyección: 1 µL Ácido cáorico No menos de O 2
Aptitud del sistema Ácido esteárico No menos de O 1
Muestra: Solución estándar
Ácido linolénico No menos de O 05
[NOTA-Ver la Tabla 3 para los tiempos de retención
relativos.] Ácido nalmitoleico No menos de O 01

Tabla 3 CONTAMINANTES
Tiempo de
• METALES PESADOS (231): No más de 1 µg/g o
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
Retención
(561): Cumple con los requisitos.
Éster Metílico Relativo
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Canroato de metilo o 39 tal bacteriano no excede de 104 ufc/g y el recuento total
Canrilato de metilo o 56 combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Caorato de metilo o 76 cede de 102 ufc/g. ,
Laurato de metilo o 94 • AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Nonadecano (estándar interno) 1o ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli y la ausen-
Miristato de metilo 11
cia de Staphylococcus aureus.
Palmitato de metilo 13
Palmitoleato de metilo 1 35 PRUEBAS ESPECÍFICAS
Estearato de metilo 1 65 • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
Oleato de metilo 17 (561): No más de 2%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Serenoa en
Linoleato de metilo 18
Polvo a 105º durante 2 horas: pierde no más de 12,0%
Linolenato de metilo 20 de su peso .
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
Requisitos de aptitud No más de 5,0%, determinado en 1,0 g de Serenoa en
Resolución: No menos de 1,5 entre estearato de me-
fu~ ,
tilo y oleato de metilo • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada uno (561): No más de 1,0%
de los picos de ésteres metílicos
Desviación estándar relativa: No más de 5,0% para REQUISITOS ADICIONALES .
cada uno de los picos de ésteres metílicos • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Análisis permeables. Proteger de la luz.
Muestras: Solución estándar y Solución muestra • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Calcular el porcentaje de cada ácido graso en la porción latín y, después de la denominac~ón oficial, la parte de la
de Serenoa en Polvo tomada: planta de donde se obtuvo el articulo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs X V) X (l/W) X (M,1/M,2) X ER Caprato de Metilo USP
100 ER Caproato de Metilo USP
ER Caprilato de Metilo USP
Ru = cociente de respuesta entre los picos del éster ER Laurato de Metilo USP
metílico pertinente y estándar interno ER Linoleato de Metilo USP
obtenido de la Solución muestra ER Linolenato de Metilo USP
R5 = cociente de respuesta entre los picos del éster ER Miristato de Metilo USP
metílico pertinente y estándar interno ER Oleato de Metilo USP
obtenido de la Solución estándar ER Palmitato de Metilo USP
Cs = concentración del éster metílico respectivo en ER Palmitoleato de Metilo USP
la Solución madre del estándar (mg/ml) ER Estearato de Metilo USP
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar (ml)
W = peso de Serenoa en Polvo tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Serenoa 6153

COMPOSICIÓN
Extracto de Serenoa
Cambio en la redacción:
DEFINICIÓN
• CONTENIDO DE ÁCIDOS GRASOS
Solución de estándar interno: 12 mg/ml de nonade-
Cambio en la redacción: cano en hexanos
Solución madre del estándar: Disolver cantidades de
El Extracto de Serenoa se obtiene a partir de Serenoa tritu- ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP, ER
rada mediante extracción con mezclas hidroalcohólicas o Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP, ER
éter de petróleo, o mediante extracción supercrítica con Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metil~ USP,
dióxido de carbono. La relación entre el material ve~etal ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,
crudo inicial y el Extracto está entre 8,0:1 y 14,3:1. El ER Palmitoleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo
Extracto contiene no menos de 80,0% de ácidos grasos, USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos hasta
no menos de 0,2% de esteroles y no menos de O, 1% de obtener concentraciones de cada éster metílico según
/j-sitosterol, todos con respecto a la materia anhidra .• (BR se indican en la Tabla 3.
oi-¡un-zo13¡ El Extracto lipofílico contiene no menos de O, 15%
y no más de 0,35% de alcoholes de cadena larga. El Ex-
tracto hidroalcohólico contiene no menos de 0,01 % y no Tabla 3
más de O, 15% de alcoholes de cadena larga. No contiene Concentración
sustancias agregadas. Éster Metílico (ma/mL)
Laurato de metilo 5
IDENTIFICACIÓN
Oleato de metilo 5
Miristato de metilo 2
Cambio en la redacción: Palmitato de metilo 2
Linoleato de metilo 1
• A. CROMATOGRAFÍA DE GASES ,
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de Aci- Caoroato de metilo 04
dos Grasos. Caorilato de metilo 04
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de Caorato de metilo 04
los 11 picos principales de la Solución muestra corres- Palmitoleato de metilo 04
oonden a los del cromatograma de la Solución estándar. Estearato de metilo 04
"Los intervalos de relación entre la concentración de Linolenato de metilo 04
ácido !áurico y la concentración .del ácido graso. respec:,-
tívo en el Extracto preJ?arado. us~ndo mezclas h1droalco· Solución estándar: Transferir 1,0 ml de Solución de es-
holicas o éter de p1:1troleo se indican en la Tabla 1. los tándar interno a 5,0 ml de Solución madre del estándar.
intervalos de relación entre la concentración de ácido Solución muestra: Transferir 100 mg de Extracto a un
!áurico y la concentración del ácido graso respectivo en vial con tapa de rosca a prueba de presión y agregar
el. Extracto preparado .mediante extracción supercr:ítica 3,0 ml de una solución de ácido sulfúrico en metanol
con d.ióxido de.carbono se indican en la Tablá 2 •• (BR01- (5 en 100). Calentar a 100º en un baño de aceite du-
¡ur>-2(}ni rante 2 horas, agitando ocasionalmente. Dejar que se
enfríe y agregar 1,0 ml de Solución de estándar interno,
Tabla 1 10,0 ml de agua, 1 g de cloruro de sodio y 5 ml de
Relación Relación
hexanos. Agitar bien, dejar que las capas se separen
Ácidos Grasos Mínima Máxima
completamente y usar la capa de hexanos. [NOTA-Al-
macenar en un refrigerador hasta el momento de su
Cáorico 90 16 uso.]
Caoroico 85 24 Sistema cromato9ráfico
Caorílico 85 17 5 (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Linoleico 50 16 Modo: Cromatografía de Gases
Linolénico 31 5 55 Detector: Ionización a la llama
Mirística 22 28
Columna: Capilar de sílice fundida, de 0,25 mm x 30
m; recubierta con una película de fase Gl 6 de 0,25
Oleico o 60 1 15 µm
Pal mítico 28 39 Temperaturas
Esteárico 14 26 Inyector: 250º
Detector: 300º
Columna: Ver la Tabla 4.
•Tabla 2
Relación Relación Tabla 4
Ácidos Grasos Mínima Máxima Tiempo de
Cáorico 90 16 Espera
Caproico 90 40 (Hold Time)
Capn1ico 85 17 5 a la
Temperatura Rampa de Temperatura Temperatura
Linoleico 40 80
Inicial Temperatura Final Final
linolénico 35 60 _{°} lº/min) _{°} Cmin)
Mirística 22 28 120 o 120 3
Oleico o 60 1 15 120 50 220 12
Palmítico 28 39
Esteárico 13 20
• SR Ol-·un-2013
6154 Serenoa / Suplementos Dietéticos USP 37

Gas transportador: Helio Solución de aptitud del sistema A: Mezclar 5,0 ml de

Velocidad de flujo: 1 ml/min Solución madre de aptitud del sistema A con 1,0 ml de
Volumen de inyección: 1 µL Solución de estándar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
Aptitud del sistema solución hasta sequedad usando una corriente de nitró-
Muestra: Solución estándar geno. Disolver el residuo en 1,0 ml de Solución de deri-
[NOTA-Ver la Tabla 5 para los tiempos de retención vatización B y dejar en reposo durante no menos de 15
relativos.] minutos a temperatura ambiente.
Solución madre de aptitud del sistema B: 2 mg/ml
Tabla 5 de campesterol, de estigmasterol y de ER ¡3-Sitosterol
USP, y 0,37 mg/ml de estigmastanol
Tiempo de Solución de aptitud del sistema B: Mezclar 5,0 ml de
Retención Solución madre de aptitud del sistema B con 1,0 ml de
Éster Metílico Relativo Solución de estándar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
Caoroato de metilo o 39 solución hasta sequedad usando una corriente de nitró-
Caorilato de metilo o 56 geno. Disolver el residuo en 1,0 ml de Solución de deri-
Caorato de metilo o 76 vatización B y dejar en reposo durante no menos de 15
Laurato de metilo o 94 minutos a temperatura ambiente.
Solución madre del estándar: 0,75 mg/ml de ER He-
Nonadecano (estándar interno) 1o xacosanol USP y 1,4 mg/ml de ER ,B-Sitosterol USP en
Miristato de metilo 11 cloroformo
Palmitato de metilo 13 Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
Palmitoleato de metilo 1 35 del estándar con 1,0 ml de Solución de estándar interno.
Estearato de metilo 1 65 Evaporar 0,75 ml de esta solución hasta sequedad
Oleato de metilo 17 usando una corriente de nitrógeno. Disolver el residuo
en 1,0 ml de Solución de derivatización By dejar en re-
Linoleato de metilo 18 poso durante no menos de 15 minutos a temperatura
Linolenato de metilo 20 ambiente.
Solución muestra: Transferir 3,35 g de Extracto a un
Requisitos de aptitud matraz de fondo redondo de 50 ml. Agregar 1,0 ml de
Resolución: No menos de 1,5 entre los picos de es- Solución de estándar interno y evaporar al vacío a una
tearato de metilo y oleato de metilo temperatura que no exceda los 50º. Agregar 20 ml de
Factor de asimetna: No más de 2,0 para cada uno una solución preparada disolviendo 130 g de hidróxido
de los picos de ésteres metílicos de potasio en 200 ml de agua en un matraz volumé-
Desviación estándar relativa: No más de 5,0% para trico de 1000 ml y diluir con metano! a volumen. Co-
cada uno de los picos de ésteres metílicos nectar un condensador y someter a reflujo en un baño
Análisis a 100º durante 2 horas. Transferir cuantitativamente
Muestras: Solución estándar y Solución muestra esta solución a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
Calcular el porcentaje de cada ácido graso en la porción con agua a volumen. Transferir una porción de 3 ml a
de Extracto tomada: un cartucho 1 que contenga tierra de diatomeas capaz
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs x V) x (1 /W) x (Mr1/M,2) x de retener 3 ml de fase acuosa.
100 Absorber la solución en la columna al vacío durante 20
minutos hasta que la columna deje de estar fría. Eluir
Ru = cociente de respuesta entre los picos del éster los analitos de la columna con 90 ml de cloruro de
metílico pertinente y estándar interno de la metileno y evaporar el eluato hasta sequedad. Disolver
Solución muestra el residuo en 1,0 ml de Solución de derivatización B y
Rs = cociente de respuesta entre los picos del éster dejar en reposo durante no menos de 15 minutos a
metílico pertinente y estándar interno de la temperatura ambiente.
Solución estándar Sistema cromato9ráfico
Cs = concentración del éster metílico respectivo en (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
la Solución madre del estándar (mg/ml) Modo: Cromatografía de Gases
V =volumen de la Solución madre del estándar Detector: Ionización a la llama
usado para preparar la Solución estándar (ml) Columna: Capilar, de 0,2 mm x 25 m; recubierta con
W = peso de Extracto tomado para preparar la una capa de fase G1 de 0,33 µm
Solución muestra (mg) Temperaturas
M,, = peso molecular del ácido graso pertinente Inyector: 325º
Mr2 = peso molecular del éster metílico del ácido Detector: 325º
graso pertinente Columna: Ver la Tabla 6.
Criterios de aceptación: •No menos de 80,0% para la
suma de los porcentajes de todos los ácidos grasos, con Tabla 6
respecto a la materia anhidra e (BR 01.¡un-2013¡ Tiempo de
Espera
Cambio en la redacción: (Hold Time)
a la
• CONTENIDO DE ALCOHOLES DE CADENA LARGA Y ESTEROLES Temperatura Rampa de Temperatura Temperatura
Solución de derivatización A: Bis(trimetilsilil)aceta- Inicial Temperatura Final Final
mida, trimetilsililimidazol y trimetilclorosilano (3:3:2) (º) (º/min) (º) (min)
Solución de derivatización B: Solución de derivatización 200 o 200 3
A, bis(trimetilsilil)trifluoroacetamida y piridina (1 :1 :1) 200 10 300 35
Solución de estándar interno: 1 O mg/ml de eicosanol
' Un cartucho adecuado es el Extrelut NT3, o un cartucho equivalente.
y 5 m.9/ml de colesterol en cloroformo
Solucion madre de aptitud del sistema A: 2 mg/ml
de tetracosanol, de octacosanol, de ER Hexacosanol USP
y de triacontanol en cloroformo
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Soja 6155

Gas transportador: Helio Calcular el cor1tenido total de esteroles como porcentaje

Velocidad de flujo: 0,5 mL/min sumando los porcentajes individuales.
Flujo del gas de compensación: 25 ml/min Criterios de aceptación: •No menos de 0,2% para la
Volumen de inyección: 1 µL suma de los porcentajes de todos los esteroles y no
Tipo de inyección: Dividida; relación de partición, menos de O, 1% de /3-sitosterol, ambos con respecto a
1 :40 la materia anhidra e (BR 01-iun-2013¡
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema A y Solución CONTAMINANTES
de aptitud del sistema B • METALES PESADqs, Método 11 (231): No más de 40 µg/g
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para tetraco- • EXTRACTOS BOTANICOS, Residuos de Plaguicidas (565):
sanol, hexacosanol, octacosanol y triacontanol son Cumple con los requisitos.
0,89; 1,00; 1, 15 y 1,36, respectivamente, Solución de
PRUEBAS ESPECÍFICAS
aptitud del sistema A. Los tiempos de retención relati- • DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método 11 (611 > (si estuviera
vos fara colesterol, campesterol, estigmasterol, /3-sitos-
tero y estigmastanol son 0,85; 0,92; 0,95; 1,00 y presente): No más de ) %
1,01, respectivamente, Solución de aptitud del sistema • GRASAS y ACEITES FIJOS, l,ndice de Yodo (401): 40-50
B.]
• GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Saponificación (401):
210-250
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2 entre los picos de /3-
sistosterol y estigmastanol, Solución de aptitud del sis- Eliminar lo siguiente:
tema B
Eficiencia de la columna: No menos de 200 000 pla- •. GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401):
tos teóricos para el pico de eicosanol, Solución de ap- 1,8%-3,So/oe (BR 01-jun-2013)
titud del sistema A; y no menos de 1 50 000 platos • DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921): Se encuentra
teóricos para el pico de colesterol, Solución de aptitud no más de 3% en el Extracto hidroalcohólico.
del sistema B
Factor de asimetría: No más de 2,0 para cada pico REQUISITOS ADICIONALES
pertinente, Solución de aptitud del sistema A; y no más • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Cumple con los requisitos
de 2,0 para cada pico pertinente, Solución de aptitud en Extractos Botánicos (565), Envasado y Almacenamiento
del sistema B • ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
Análisis latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
Muestras: Solución estándar y Solución muestra planta a partir de la que se preparó el artículo. La eti-
Identificar las señales correspondientes a los analitos queta indica también el contenido de ácidos grasos y
pertinentes comparándolos con los cromatogramas ob- esteroles y la relación entre el material vegetal crudo ini-
tenidos con la Solución de aptitud del sistema A y la cial y el Extracto. Cumple con los requisitos de Extractos
Solución de aptitud del sistema B. Bo~anicos, (565) Etiquetado.
Calcular por separado los porcentajes de tetracosanol, • ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
hexacosanol, octacosanol y triacontanol, respectiva- ER Hexacosanol USP
mente, en la porción de Extracto tomada: ER Caprato de Metilo USP
ER Caproato de Metilo USP
Resultado= (Ru/Rs) X (Cs X\/) X (1/W) X 100 ER Caprilato de Metilo USP
ER Laurato de Metilo USP
Ru = cociente de respuesta entre los picos del ER Linoleato de Metilo USP
alcohol de cadena larga pertinente y ER Linolenato de Metilo USP
estándar interno de la Solución muestra ER Miristato de Metilo USP
Rs = cociente de respuesta entre los picos de ER Oleato de Metilo USP
hexacosanol y estándar interno de la Solución ER Palmitato de Metilo USP
estándar ER Palmitoleato de Metilo USP
Cs = concentración de hexacosanol en la Solución ER Estearato de Metilo USP
madre del estándar (mg/mL) ER /3-Sitosterol USP
V = volumen de Solución madre del estándar usada
para preparar la Solución estándar (mL)
W = peso de Extracto tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
Calcular el contenido total de alcoholes de cadena larga
como porcentaje sumando los porcentajes individuales. Serina-ver Serina en Monografías Generales
Calcular por separado los porcentajes de campesterol,
estigmasterol, /3-sitosterol y estigmastanol,
respectivamente, en la porción de Extracto tomada:
Ascorbato de Sodio-ver Ascorbato de
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs x \/) x (1/W) x 100 Sodio en Monografías Generales
Ru = cociente de respuesta entre los picos del
esterol pertinente y estándar interno de la
Solución muestra lsoflavonas de Soja, Cápsulas
Rs = cociente de respuesta entre los picos de /3-
sitosterol y estándar interno de la Solución
DEFINICIÓN
estándar Las Cápsulas de lsoflavonas de Soja contienen Extracto en
Cs = concentración de /3-sitosterol en la Solución
madre del estándar (mg/mL) Polvo de lsoflavonas de Soja. Las Cápsulas contienen no
V = volumen de Solución madre del estándar usada menos de 90,0% y no más de 11 0,0% de la cantidad
para preparar la Solución estándar (mL) declarada del Extracto, representados por la suma del
w = peso de Extracto tomado para preparar la contenido de las isoflavonas daidzina, glicitina, genistina y
Solución muestra (mg) una o más de las siguientes isoflavonas: malonil daidzina,
mé:lonil glicitina, malonil genistina, acetil daidzina, acetil
glicitina, acetil genistina, daidzeína, gliciteína y genisteína.
6156 Soja / Suplementos Dietéticos
IDENTIFICACIÓN
• Los tiempos de retención de los picos de daidzina~ glici-
tina y genistina en el cromatograma de la Soluoon mues-
tra corresponden a los de las Soluciones estándar A-E,
según se obtienen en Contenido de lsoflavonas.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (2:3)
Solución de estándar interno: 2,0 mg/mL de ER Api-
genina USP en dimetil sulfóxido. [NOTA-Esta solución
es estable durante 6 meses cuando se almacena a tem-
peratura ambiente en un envase de vidrio resistente a la
luz cerrado herméticamente.]
Solución de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isoflavonas 1: Calentar 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP en una cápsula de porce-
lana poco profunda a 120u ~urante 12.0 minutos y
transferir a un tubo de centrifuga, equipado con una
tapa de rosca de PTFE º. co.n recubrimi~nto interno de
polietileno. Agregar lo s1gu1ente en volumenes exactos:
O 5 mL de Solución de estándar interno, 1O mL de aceto-
nitrilo (mezclar por rotación suave hasta dispersar) y
6,0 ml de agua. Tapar, agitar en un agitador orbital o
de movimiento tipo mufieca (wrist-act1on) durante_ 60
minutos, agregar 8,5 ml de agua, mezclar, y c~ntnfu­
gar. Pasar una porción del sobrenadante a traves de
una membrana de propileno hidrófilo o de PVDF con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros 5 ml del filtrado.
Solución de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isoflavonas 2: Transferir 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP a un tubo de centrífuga(
equipado con una tapa de rosca de PTFE ~ c~n recubri-
miento interno de pol1etileno. Agregar lo s1gu1ente en
volúmenes exactos: 0,5 ml de Solución de estándar
interno 1O mL de acetonitrilo (mezclar por rotación
suave hasta dispersar) y 6,0 ml de agua. Tapar, agitar
en un agitador orbital o de movimiento tipo muñeca
(wrist-action) durante 60 minutos, agregar 8,5 ml de
agua, mezclar, y centrifugar. Pasar una porción _del so-.
brenadante a través de una membrana de propileno hi-
drófilo o de PVDF con un tamaño de poro de 0,45 µm
o menor, desechando los primeros 5 ml del filtrado.
[NOTA-Todas las Soluciones estándar y la Solución madre
del estándar son estables durante 2 meses cuando se
almacenan a temperatura ambiente en un envase de
vidrio resistente a la luz cerrado herméticamente.]
Solución madre del estándar: Contiene lo siguiente en
dimetil sulfóxido: 2,0 mg/mL de ER Daidzina USP,
0,5 mg/ml de ER Glicitina USP, 2(0 n;g/mL de ER Ge-
nistina USP, 0,2 mg/ml de ER Da1dzema USP, O,~ m91
mL de ER Gliciteína USP y 0,2 mg/mL de ER Gen1stema
USP
Solución estándar A: Agregar 0,5 mL de Solución ma-
dre del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno
a un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
yente a volumen. .,
Solución estándar B: Agregar 1,0 mL de Soluc1on madre
del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno a
un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solución estándar C: Agregar 1,5 mL de Solución ma-
dre del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno
a un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
yente a volumen. .,
Solución estándar D: Agregar 2,0 ml de Soluoon ma-
dre del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno
a un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solución estándar E: Agregar 2,5 mL de Solución madre
del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno a
un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Diluyente
a volumen.
USP 37
Solución muestra
Cápsulas de gelatina dura: Pesar y reducir a polvo
fino el contenido de no menos de 20 Cápsulas. Trans-
ferir una cantidad, pesada con exactitud, del polvo
equivalente a no más de 5 mg de isoflavonas, a un
tubo de centrífuga de vidrio adecuado, equipado con
una tapa de rosca de PTFE o con recubrimiento
interno de polietileno. .
Cápsulas de gelatina blanda: Pesar y homogen1zar no
menos de 20 Cápsulas. Transferir una cantidad, pesada
con exactitud, de la mezcla equivalente a no mas de
5 mg de isoflavonas, a un tubo de centrífuga de vidrio
adecuado, equipado con una tapa de rosca de PTFE o
con recubrimiento interno de polietileno.
Agregar lo siguiente en volúmenes exactos al tubo de
centrífuga: 0,5 mL de Solución de estándar interno,
1 O mL de acetonitrilo (mezclar por rotación suave
hasta dispersar) y 6,0 ml de agua. Tapar, agitar en. un
agitador orbital o de movimiento tipo muñeca (wrist-
action) durante 60 minutos, agregar 8,5 mL de agua,
mezclar y centrifugar. Pasar una porción del sobrena-
dante a' través de una membrana de propileno hidró-
filo o de PVDF con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor, desechando los primeros 5 mL del filtrado.
[NOTA-No usar filtro~ de nailon. Analizar mues~ras
que contengan cantidades significativas de acet1I y/o
malonil isoflavonas dentro de las 4 horas de su
preparaciónJ
Solución A: Acido fosfórico al 0,05% en agua
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 90 10
60 70 30
60 5 10 90
63 5 10 90
64 90 10
74 90_ 10
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 3,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 0,65 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistem~ , ., . . .,
Muestras: Solucion estandar C, Soluc1on de venf1cac1on
de los tiempos de retención de acetil/malonil isoflavonas
7 y Solucion de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isoflavonas 2
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromato9ra-
mas obtenidos de la Solución estándar C, Solucion de
verificación de los tiempos de retención de acetil/malonil
isoflavonas 7 y Solución de verificación de los tien_ipos
de retención de acetil/malonil isoflavonas 2 son simila-
res a los Cromatogramas de Referencia provistos con
el ER Soja en Polvp Desgrasada USP. ,
Factor de asimetna: No menos de 0,8 y no mas de
1,2 para el pico de daidzina, Solución estándar C
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de genistina en inyecciones repetidas, Solución
estándar e
Resolución: No menos de 1,0 entre acetil glicitina y
malonil genistina, y no menos de 2,0 entre cualquier
otro par consecutivo de picos de isofla;'onas, Solución
de verificación de los tiempos de retenoon de acetli/
malonil isoflavonas 2
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C Solución estándar O, Solución están-
dar E Solución d~ verificación de los tiempos de retención
de a¿etil/malonil isoflavonas 1, Solución de verificación
de los tiempos de retención de acetil/malonil isoflavonas
2 y Solucion muestra . . . .. . .
Identificar los picos de da1dztna, gl1c1ttna, gernst1na,
daidzeína, gliciteína y ger:iisteína en los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar A-E comparando el
Cromatograma de Referencia F?rovis~o con el Estár:dar
de Referencia USP usado. Medir las areas de los picos
de los analitos y el estándar interno. Determinar el
cociente entre las áreas de los picos de cada analito y
el estándar interno. Graficar los cocientes de los picos
pertinentes en función de las concentraciones, en
mg/mL, de cada analito obt~nido a partir de las Sc;i~u­
ciones estándar ~-:E. y determinar la h~e~ de regres1~n
mediante un anal1s1s de cuadrados mtn1mos. Eí coefi-
ciente de correlación para cada línea de regresión es
no menos de 0,999. A partir~~ las gráficas obteni-
das determinar la concentrac1on, C, en mg/mL, de
daidzina, glicitina y genistina, además de daidzeína,
gliciteína y genisteína, si estuvieran presentes, ~n la_
Solución muestra. Identificar los picos de malornl da1d-
zina, malonil glicitina, acetil daidzina, acetil glicitina,
malonil genistina y acetil genistina en los cromatogra-
mas de las Soluciones de verificación de los tiempos de
retención de acetil/malonil isoflavonas comparando los
Cromatogramas de Referencia provist?s con el E~ .
Soja en Polvo D~sg_rasada_ Y~P. A part.ir _de las graf1~as
obtenidas de da1dztna, ghc1ttna y gernsttna, determi-
nar la concentración, C, en mg/mL, de los derivados
de malonil y acetil correspondientes, si estuvieran
presentes, en la Solución muestra:
Resultado = Ca x F
Ca = concentración obtenida a partir de la gráfica
pertinente (mg/mL)
F = factor de conversión de cada analito
(1,207 para. malonil daidzina; l, 1 ~1 F?ª~~
acetil daidztna; 1, 193 para malornl glic1ttna;
1,094 para acetil glicitina; 1_, 199 p~ra malonil
genistina y 1,097 para acet1I gernstma)
Calcular la cantidad, T, en mg, de isoflavonas totales
en la porción del contenido de Cápsulas tomada:
Resultado =V x CT
V = volumen final de la Solución muestra (mL)
CT =suma de las concentraciones (C) (mg/mL) de
todas las isoflavonas pertinentes
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja con respecto a la cantidad
declarada:
Resultado = T x (Awr/W) x (100/LE) x (100/L)
T = contenido de isoflavonas totales en la porción
del contenido de Cápsulas tomada (mg)
Awr = peso promedio del contenido de Cápsulas
(mg/Cápsula)
w = peso de la porción del contenido de Cápsulas
tomada (mg)
= contenido de isoflavonas totales, mg, en
100 mg del Extracto usado para preparar las
Cápsulas
L = cantidad de Extracto por Cápsula según la
cantidad declarada (mg/Capsula)
Criterios de aceptación: No menos de 90,0% y no
más de 11 O 0% de la cantidad declarada de Extracto,
representad~s por la suma del contenido d~ las isofla~o­
nas daidzina, glicitina, geni~tina_y ~na o mas _de !a.s _si-
guientes isoflavonas: malornl da1dztna, malornl gl1c1ttna,
Suplementos Dietéticos / Soja 61 5 7
malonil genistina, acetil daidzina, acetil ,91icitina, acetil
genistina, daidzeína, gliciteína y geniste1na
PRUEBAS DE DESEMPEÑO ,
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETETICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de,Desintegración
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Las
Cápsulas cumplen con los requisitos de las prueba~ p~ra
determinar la ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a
coli.
REQUISITOS ADICIONALES .
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominació~ oficial, e_I artícul? a.
partir del cuál se prepararon las Capsulas. Et1guetar tn~1-
cando la cantidad de Extracto, en mg, por Capsula. Eti-
quetar indicando el porcentaje de isoflavonas en el Ex-
tracto usado para preparar las Cápsulas.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina USP
ER Daidzeína USP
ER Daidzina USP
ER Soja en Polvo Desgrasada USP
ER Genisteína USP
ER Genistina USP
ER Gliciteína USP
ER Glicitina USP
Extracto en Polvo de lsoflavonas de
Soja
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja se prepara a
partir de las semillas de Glycine max Merr. (Fam. _Faba-
ceae) mediante extracción con agua o mezclas, h1droalco-
hólicas. Contiene no menos de 90,0% y no mas de
11 O 0% de la cantidad declarada de isoflavonas, calculado
con' respecto al extracto seco como la suma de daidzina,
glicitina, genistina y una o ~ás ~~ ~as siguien~es iso_fl~vo­
nas: malonil daidzina, malornl ghc1tma, malornl gernstma,
acetil daidzina, acetil glicitina, acetil genistina, daidzeína,
gliciteína y genisteína.
IDENTIFICACIÓN ,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de /soflavonas.
Criterios de aceptación: Los tiempos de retención de
los picos de la daidzina, glicitina y genistina de. la Solu-
ción muestra corresponden con los de las Soluciones es-
tándar A-E.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (2:3) .
Solución de estándar interno: 2,0 mg/mL de ER Ap1-
genina USP en dimetil sulfóxido. [NOTA-Esta solución
se mantiene estable durante 6 meses cuando se alma-
cena a temperatura ambiente en un envase de vidrio,
herméticamente cerrado y resistente a la luz.]
6158 Soja / Suplementos Dietéticos USP 37

Solución de aptitud del sistema 1: Transferir 1 g de ER malonil isoflavonas dentro de las 4 horas de su
Soia. en Polvo Desgrasada USP a un tubo de centrífuga, preparación.],
equipado con una tapa de rosca de PTFE o con recubri- Solución A: Acido fosfórico al 0,05% en agua
mie,nto interno de polietileno. Agregar lo siguiente en Solución B: Acetonitrilo
volumenes exactos: 0,5 mL de Solución de estándar Fase móvil: Ver la Tabla 7.
interno( 1O mL de acetonitrilo (agitar por rotación suave
para dispersar) y 6,0 mL de agua. Tapar, agitar en un Tabla 1
agitador orbital o de movimiento tipo muñeca (wrist
action) durante 60 minutos, agregar 8,5 mL de agua y Tiempo Solución A Solución B
centrifugar. Pasar una porción del sobrenadante a través (min) (%) {%)
de una membrana de PVDF o de propileno hidrófilo o 90 10
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor dese- 60 70 30
chando los primeros 5 mL del filtrado. ' 60 5 10 90
Solución de aptitud del sistema 2: Calentar 1 g de ER 63 5 10 90
Soia en Polvo Desgras.ada USP en una cápsula de porce-
lana de poca profundidad a 120º durante 120 minutos 64 90 10
y transferir a un tubo de centrífuga, equipado con una 74 90 10
tapa de rosca de PTFE o con recubrimiento interno de
polietileno. Agregar lo siguiente en volúmenes exactos: Sistema cromato9ráfico
0,5 mL de Solución de estándar interno, 1 O mL de aceto- (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
nitrilo (agitar por rotación suave para dispersar) y Modo: HPLC
6,0 mL de agua. Tapar, agitar en un agitador orbital o Detector: UV 260 nm
d~ movimiento tipo muñeca (wrist action) durante 60
Columna: 3,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
minutos, agregar 8,5 mL de agua y centrifugar. Pasar Temperatura de la columna: 40º
una porción del sobrenadante a través de una mem- Velocidad de flujo: 0,65 mL/min
brana de PVDF o de propileno hidrófilo con un tamaño Volumen de inyección: 5 µL
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros [NOTA-Se debe cumplir con las pruebas de Aptitud del
5 mL del filtrado. sistema 7 y 2.]
[NOTA-La Solución madre del estándar y las Soluciones Aptitud del sistema 1
estándar A-E se mantienen estables durante 2 meses Muestra: Solución estándar C
cuando se almacenan a temperatura ambiente en un Requisitos de aptitud
envase de vidrio, herméticamente cerrado y resistente Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
a la luz.] de la Soluci(m está:idar C es similar al cromatograma
So.luci~n ma_d~e del estándar: Contiene lo siguiente en
de referencia provisto con el lote de estándar de refe-
d1met1I sulfox1do: 2,0 mg/mL de ER Daidzina USP, rencia USP usado para las isoflavonas mencionadas.
0(5 .mg/mL de ER Glicitina USP, 2,0 mg/mL de ER Ge- Factor de asimetría: No menos de 0,8 y no más de
n1st1na USP, 0,2 mg/mL de ER Daidzeína USP O 2 mg/ 1,2 para el pico de daidzina
mL de ER Gliciteína USP y 0,2 mg/mL de ER Ge~iste1na Desviación estándar relativa: No más de 2 0% para
USP. el pico de genistina '
Solución estándar A: Agregar 0,5 mL de Solución ma- Aptitud del sistema 2
dre del estándar y 0,5 mL de Solución de estándar interno Muestras: Solución de aptitud del sistema 7 y Solución
a un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Dilu- de aptitud del sistema 2
yente a volumen. Requisitos de aptitud
Soluciól] estándar B: Agregar 1,0 mL de Solución madre Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
del estandar y 0,5 mL de Solución de estándar interno a n:1?S de la ~olución ~e aptitud del sistema 7 y la Solu-
un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Diluyente oon de aptitud del sistema 2 son similares a los provis-
a volumen. tos con el lote de ER Soja en Polvo Desgrasada USP
Solución estándar C: Agregar 1,5 mL de Solución ma- usado.
dre del estándar y 0,5 mL de Solución de estándar interno Resolución: No menos de 1,0 entre los picos de ace-
a un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Dilu- til glicitina y _malonil genistina, y no menos de 2,0
yente a volumen. entre cualquier otro par consecutivo de picos de
Solución estándar D: Agregar 2,0 mL de Solución ma- isoflavonas
dre del estándar y 0,5 mL de Solución de estándar interno Análisis
Mue~tras:, Soluciones e~tándar A-E y Solución muestra
a un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
Med1~ las areas de los picos de los analitos y del están-
yente a volumen.
Solución estándar E: Agregar 2,5 mL de Solución madre dar interno. Determinar el cociente entre las áreas de
del estándar y 0,5 mL de Solución de estándar interno a los picos de cada analito y del estándar interno. Grafi-
un matraz volumétrico de 25 mL, y diluir con Diluyente car los cocientes de los picos pertinentes en función
a volumen. de las concentraciones, en mg/mL, de cada analito ob-
Solución muestra: Transferir una cantidad de Extracto tenido de las Soluciones estándar A-E y determinar la
en Polvo de lsoflavonas de Soja, equivalente a no más línea de regresión mediante un análisis de cuadrados
de 5 mg de isoflavonas, a un tubo de centrífuga de mínimos .. ~l coeficiente de correlación para cada línea
de,r~gres1?n es n? menos de _0,999. A partir de las
30 mL de vidrio, equipado con una tapa de rosca de
PTFE o con recubrimiento interno de polietileno. Agre- graf1cas as1 obtenidas, determinar la concentración C
gar lo siguiente en volúmenes exactos: O 5 mL de Solu- en mg/mL, del analito pertinente en la Solución ' '
ción de est,ándar interno, 1 O mL de aceto~itrilo (agitar muestra.
r
por rotac~on suave par.a dispersar) 6,0 mL de agua.
Tapar, agitar en un agitador orbita o de movimiento
Calcular por separado los porcentajes de daidzina glici-
t~na y g.enistina, y de daidzeína, gli,citeína y geni~teína,
tipo muñeca (wrist action) durante 60 minutos, agregar s1 estuvieran presentes, en la porcion de Extracto en
8,5 mL de agua y centrifugar. Pasar una porción del Polvo de lsoflavonas de Soja tomada:
sobrenadante a través de una membrana de PVDF o de Resultado = (C/\IV) x V x 100
propileno hidrófilo con un tamaño de poro de 0,45 µm
o menor, desechando los primeros 5 mL del filtrado.
[NOTA-No usar filtros de nailon. Analizar las muestras
que contengan cantidades significativas de acetil y/o
 USP 37
C = concentración de cada isoflavona, según se
determinó anteriormente, para la Solución
muestra (mg/mL)
W = peso de Extracto en Polvo de lsoflavonas de
Soja tomado para preparar la Solución
muestra (mg)
V = volumen de solución final de la Solución
muestra (mL)
Identificar los picos de malonil daidzina, malonil
glicitina, acetil daidzina, acetil glicitina, malonil
genistina y acetil genistina, por comparación con los
cromatogramas de referencia provistos con ER Soja en
Polvo Desgrasada USP y por la diferencia en número
de picos entre la Solución de aptitud del sistema 7 y la
Solución de aptitud del sistema 2. [NOTA-Los derivados
de malonilo se convierten en derivados de acetilo por
calentamiento. Los derivados de malonilo son más
abundantes en la Solución de aptitud del sistema 7 y los
derivados de acetilo son más abundantes en la Solu-
ción de aptitud del sistema 2.] A partir de las gráficas
así obtenidas para daidzina, glicitina y genistina, deter-
minar la concentración correspondiente, C, en mg/mL,
de los derivados de malonilo y de acetilo, si estuvieran
presentes, en la Solución muestra.
Calcular por separado los porcentajes de malonil daid-
zina, acetil daidzina, malonil glicitina, acetil glicitina,
malonil genistina y acetil genistina en la porción de
Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja tomada:
Resultado = (C/W) x V x F x 100
C = concentración de cada isoflavona, según se
determinó anteriormente, para la Solución
muestra (mg/mL)
W = peso de Extracto en Polvo de lsoflavonas de
Soja tomado para preparar la Solución
muestra (mg)
V = volumen de solución final de Solución muestra
(mL)
F = factor de conversión: malonil daidzina, 1,207;
acetil daidzina, 1, 101; malonil glicitina,
1, 193; acetil glicitina, 1,094; malonil
genistina, 1, 199 y acetil genistina, 1,097
Calcular el porcentaje de isoflavonas en la porción de
Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja tomada (P),
sumando los porcentajes calculados para los analitos
presentes.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
isoflavonas en la porción de Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja tomada:
Resultado = (PI L) x 100
P = suma de los porcentajes individuales de cada
isoflavona en el Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja tomada, según se calculó
anteriormente (%)
L = cantidad declarada de isoflavonas en el
Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja (%)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% con respecto
al extracto seco
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS, Método)/ (231): No más de µg/g 19
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022):
Cumple con los requisitos de las pruebas para determinar
la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Suplementos Dietéticos/ Soja 6159
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 1 30º durante 2
horas: pierde no más de 7,0% de su peso.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Disolven-
tes Residuales y Residuos de Plaguicidas en Extractos Botá-
nicos (565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. La eti-
queta también indica el contenido de isoflavonas. Cum-
ple con los otros requisitos de etiquetado en Extractos
Botánicos (565).
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina USP
ER Daidzeína USP
ER Daidzina USP
ER Soja en Polvo Desgrasada USP
ER Genisteína USP
ER Genistina USP
ER Gliciteína USP
ER Glicitina USP
lsoflavonas de Soja, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de lsoflavonas de Soja contienen Extracto en
Polvo de lsoflavonas de Soja. Las Tabletas contienen no
menos de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad
declarada del Extracto, representados por la suma del
contenido de las isoflavonas daidzina, glicitina, genistina y
una o más de las siguientes isoflavonas: malonil daidzina,
malonil glicitina, malonil genistina, acetil daidzina, acetil
glicitina, acetil genistina, daidzeína, gliciteína y genisteína.
IDENTIFICACIÓN
• Los tiempos de retención de los picos de daidzina, glici-
tina y genistina en el cromatograma de la Solución mues-
tra corresponden a los de las Soluciones estándar A-E,
según se obtienen en Contenido de lsoflavonas.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (2:3)
Solución de estándar interno: 2,0 mg/mL de ER Api-
genina USP en dimetil sulfóxido. [NOTA-Esta solución
es estable durante 6 meses cuando se almacena a tem-
peratura ambiente en un recipiente de vidrio resistente
a la luz cerrado herméticamente.]
Solución de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isoflavonas 1: Calentar 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP en una cápsula de porce-
lana poco profunda a 120º durante 120 minutos y
transferir a un tubo de centrífuga, equipado con una
tapa de rosca de PTFE o con recubrimiento interno de
polietileno. Agregar lo siguiente en volúmenes exactos:
0,5 mL de Solución de estándar interno, 1 O mL de aceto-
nitrilo (mezclar por rotación suave hasta dispersar) y
6,0 mL de agua. Tapar, agitar en un agitador orbital o
de movimiento tipo muñeca (wrist-action) durante 60
minutos, agregar 8,5 mL de agua, mezclar, y centrifu-
gar. Pasar una porción del sobrenadante a través de
una membrana de propileno hidrófilo o de PVDF con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
los primeros 5 mL del filtrado.
Solución de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isoflavonas 2: Transferir 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP a un tubo de centrífuga,
61 60 Soja / Suplementos Dietéticos
equipado con una tapa de rosca de PTFE o con recubri-
miento interno de polietileno. Agregar lo siguiente en
volúmenes exactos: 0,5 ml de Solución de estándar
interno, 1 O ml de acetonitrilo (mezclar por rotación
suave hasta dispersar) y 6,0 ml de agua. Tapar, agitar
en un agitador orbital o de movimiento tipo muñeca
(wrist-action) durante 60 minutos, agregar 8,5 ml de
agua, mezclar, y centrifugar. Pasar una porción del so-
brenadante a través de una membrana de propileno hi-
drófilo o de PVDF con un tamaño de poro de 0,45 µm
o menor, desechando los primeros 5 ml del filtrado.
[NOTA-Todas las Soluciones estándar y la Solución madre
del estándar son estables durante 2 meses cuando se
almacenan a temperatura ambiente en un recipiente de
vidrio resistente a la luz cerrado herméticamente.]
Solución madre del estándar: Contiene lo siguiente en
dimetil sulfóxido: 2,0 mg/ml de ER Daidzina USP,
0,5 mg/ml de ER Glicitina USP, 2,0 mg/ml de ER Ge-
nistina USP, 0,2 mg/ml de ER Daidzeína USP, 0,2 me;¡/
ml de ER Gliciteína USP y 0,2 mg/ml de ER Genisteina
USP
Solución estándar A: Agregar 0,5 ml de Solución ma-
dre del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno
a un matraz volumétrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solución estándar B: Agregar 1,0 ml de Solución madre
del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno a
un matraz volumétrico de 25 ml, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solución estándar C: Agregar 1,5 ml de Solución ma-
dre del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno
a un matraz volumétrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solución estándar D: Agregar 2,0 ml de Solución ma-
dre del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno
a un matraz volumétrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solución estándar E: Agregar 2,5 ml de Solución madre
del estándar y 0,5 ml de Solución de estándar interno a
un matraz volumétrico de 25 ml, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solución muestra: Pesar con exactitud y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una can-
tidad, pesada con exactitud, del polvo equivalente a no
más de 5 mg de isoflavonas, a un tubo de centrífuga de
vidrio de 30 ml, equipado con una tapa de rosca de
PTFE o con recubrimiento interno de polietileno. Agre-
gar lo siguiente en volúmenes exactos: 0,5 ml de Solu-
ción de estándar interno, 1 O ml de acetonitrilo (mezclar
por rotación suave hasta dispersar) y 6,0 ml de agua.
Tapar, agitar en un agitador orbital o de movimiento
tipo muñeca (wrist-action) durante 60 minutos, agregar
8,5 ml de agua, mezclar, y centrifugar. Pasar una por-
ción del sobrenadante a través de una membrana de
propileno hidrófilo o de PVDF con un tamaño de poro
de 0,45 µm o menor, desechando los primeros 5 ml
del filtrado. [NOTA-No usar filtros de nailon. Analizar
muestras que contengan cantidades significativas de
acetil y/o malonil isoflavonas dentro de las 4 horas de
su preparació,n.]
Solución A: Acido fosfórico al 0,05% en agua
Solución B: Acetonitrilo
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
Cmin) (O/o) (O/o)
o 90 10
60 70 30
60 5 10 90
63 5 10 90
64 90 10
74 90 10
USP 37
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 3,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 0,65 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar C, Solución de verificación
de los tiempos de retención de acetil/malonil isoflavonas
7 y Solucion de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isof/avonas 2
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromatoc;¡ra-
mas obtenidos de la Solución estándar C, Solucion de
verificación de los tiempos de retención de acetil/malonil
isoflavonas 7 y Solucion de verificación de los tiempos
de retención de acetil/ma/onil isoflavonas 2 son simila-
res a los Cromatogramas de Referencia provistos con
el ER Soja en Polvo Desgrasada USP.
Factor de asimetría: No menos de 0,8 y no más de
1,2 para el pico de daidzina, Solución estándar C
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de genistina en inyecciones repetidas, Solución
estándar e
Resolución: No menos de 1,0 entre acetil glicitina y
malonil genistina, y no menos de 2,0 entre cualquier
otro par consecutivo de picos de isoflavonas, Solución
de verificación de Jos tiempos de retención de acetil/
malonil isoflavonas 2
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B, So-
lución estándar C, Solución estándar D, Solución están-
dar E, Solución de verificación de los tiempos de retención
de acetil/malonil isoflavonas 1, Solución de verificación
de Jos tiempos de retención de acetil/malonil isoflavonas
2 y Solucion muestra
Identificar los picos de daidzina, glicitina, genistina,
daidzeína, gliciteína y genisteína en los cromatogra-
mas de las Soluciones estándar A-E comparando con
el Cromatograma de Referencia provisto con el Están-
dar de Referencia USP usado. Medir las áreas de los
picos de los analitos y el estándar interno. Determinar
el cociente entre las áreas de los picos de cada ana-
lito y el estándar interno. Graficar los cocientes de los
picos pertinentes en función de las concentraciones,
en mg/ml, de cada analito obtenido a partir de las
Soluciones estándar A-E y determinar la línea de regre-
sión mediante un análisis de cuadrados mínimos. El
coeficiente de correlación para cada línea de regre-
sión es no menos de 0,999. A partir de las gráficas
obtenidas, determinar la concentración, C, en
mg/ml, de daidzina, glicitina y genistina, además de
daidzeína, gliciteína y geniste1na, si estuvieran presen-
tes, en la Solución muestra. Identificar los picos de
malonil daidzina, malonil glicitina, acetil daidzina,
acetil glicitina, malonil genistina y acetil genistina en
los cromatogramas de las Soluciones de verificación de
los tiempos de retención de acetil/malonil isoflavonas
comparando con los Cromatogramas de Referencia
provistos con el ER Soja en Pofvo Desgrasada USP. A
partir de las gráficas obtenidas de daidzina, glicitina y
genistina, determinar la concentración, C, en mg/ml,
de los derivados de malonil y acetil correspondientes,
si estuvieran presentes, en la Solución muestra:
Resultado =Ca x F
USP 37
C0 = concentración obtenida a partir de la gráfica
pertinente (mg/mL)
F = factor de conversión de cada analito
(l ,207 para malonil daidzina; 1, 101 para
acetil daidzina; 1, 193 para malonil glicitina;
1,094 para acetil glicitina; 1, 199 para malonil
genistina y 1,097 para acetil genistina)
Calcular la cantidad, T, en mg, de isoflavonas totales en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado =V x C1
V =volumen final de la Solución muestra (mL)
Cr = suma de las concentraciones (C) (mg/mL) de
todas las isoflavonas pertinentes
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja con respecto a la cantidad
declarada:
Resultado = T X (Awr!W) X (1 00/LE) X (1 00/L)
T = contenido de isoflavonas totales en la porción
de Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porción de Tabletas tomada (mg)
LE = contenido de isoflavonas totales, mg, en
100 mg del Extracto usado para preparar las
Tabletas
L = cantidad de Extracto por Tableta según la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptación: No menos de 90,0% y no
más de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto,
representados por la suma del contenido de las isoflavo-
nas daidzina, glicitina, genistina y una o más de las si-
guientes isoflavonas: malonil daidzina, malonil glicitina,
malonil genistina, acetil daidzina, acetil _glicitina, acetil
genistina, daidzeína, gliciteína y geniste1na
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Las
Tabletas cumplen con los requisitos de las pruebas para
determinar la ausencia de Sa/monella spp. y Escherichia
coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del cuál se prepararon las Tabletas. Etiquetar indi-
cando la cantidad de Extracto, en mg, por Tableta. Eti-
quetar indicando el contenido, como porcentaje, de iso-
fla'!onas en el Extracto usado para preparar las Tabletas.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina USP
ER Daidzeína USP
ER Daidzina USP
ER Soja en Polvo Desgrasada USP
ER Genisteína USP
ER Genistina USP
ER Gliciteína USP
ER Glicitina USP
Suplementos Dieleticos /Tanaceto 6161
Tanaceto
DEFINICIÓN
El Tanaceto consiste en las hojas secas de Tanacetum parthe-
nium (L.) Sch. Bip. (Fam. Asteraceae), recogidas cuando la
planta está en floración.
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención del pico de partenolida de la
Solución muestra corresponde al de la Solución estándar,
según se obtienen en la prueba de Contenido de
Partenolida.
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Partenolida USP
en metano!
Solución muestra: Transferir 1,0 g de Tanaceto redu-
cido a polvo fino a un matraz adecuado. Agregar 20 mL
de metano!, calentar el matraz sobre un bano de agua
a 60º durante 15 minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el
filtrado bajo presión reducida hasta sequedad y disolver
el residuo en 2,0 mL de metano!.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,5 mm, por lo regular de 20 cm de longitud
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil: Tolueno y acetona (85:15)
Solución reveladora: Solución al 0,5% de vainillina en
una mezcla de ácido sulfúrico y alcohol (4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido tres cuartos de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cámara cromatográ-
fica, marcar el frente de la fase móvil y dejar que se
seque al aire. Rociar la placa con Solución reveladora.
Después de 5 minutos, observar la placa bajo luz
diurna.
Criterios de aceptación: Una mancha azul en la parte
media del cromatograma de la Solución muestra que co-
rresponde en color y valor Rr a la mancha principal ob-
tenida en el cromatograma de la Solución estándar in-
dica la presencia de partenolida. El tercio inferior del
cromatograma de la Solución muestra puede presentar
dos manchas rosadas y el tercio superior puede presen-
tar una mancha rosada.
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,25 mg/mL de ER Rutina USP en
metano!
Solución muestra: Agregar 1 O mL de metanol a 1 g de
Tanaceto reducido a polvo fino y calentar en un baño
de agua a 60º durante 15 minutos. Enfriar y filtrar.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico anhidro,
ácido acético glacial y agua (1 O: 1, 1: 1, 1: 2,7)
Solución reveladora A: Solución al 1 % de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en metano!
Solución reveladora B: Solución al 5% (p/v) de poli-
etilenglicol 4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido tres cuartos de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cámara cromatográ-
fica y dejar que se seque al aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B
y observar la placa bajo luz UV a 366 nm.
Criterios de aceptación: En relación con el valor R, de
la mancha principal de la Solución estándar, el cromato-
grama de la Solución muestra 110 presenta una mancha
6162 Tanaceto /Suplementos Dietéticos
azul a un RF de 1, 1 (a diferencia de la manzanil/a ro-
mana) pero presenta una mancha verde a un Rr de 2,3
(a diferencia de Ja manzanilla alemana) y las manchas de
colores a valores RF indicados son las siguientes: 1,5
(anaranjado amarillento), 1,65 (verde amarillento), 2,0
(azul verdoso) y 2,25 (azul blanquecino).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PARTENOLIDA
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (9:11)
Solución estándar: 0,04 mg/ml de ER Partenolida USP
en metano!
Solución madre de la muestra: Reducir 100 g de Tana-
ceto a polvo fino. Transferir aproximadamente 1,0 g de
Tanaceto reducido a polvo fino, pesados con exactitud,
a un matraz adecuado. Agregar 100 ml de metano! y
calentar en un baño de agua a 60º durante 1O minutos.
Retirar el matraz del baño de agua, enfriar y filtrar. En-
juagar el matraz con tres porciones de 5 ml de metanol
y filtrar, agregando los enjuagues al filtrado. Transferir el
residuo remanente en el interior del filtro al mismo ma-
traz. Agregar 50 ml de metanol y continuar el procedi-
miento de enjuague según se describió anteriormente.
Evaporar los filtrados combinados bajo presión reducida
hasta sequedad y disolver el residuo en 20,0 ml de
metano!.
Solución muestra: Transferir 1 O ml de Solución madre
de Ja muestra a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con metanol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 210 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
partenolida
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de partenolida, en inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de partenolida en la porción de
Tanaceto tomada para preparar la Solución muestra:
Resultado = (ru/rs) x [Cs x (V/ltV)] x D x 100
ru = área del pico de partenolida de la Solución
muestra
rs = área del pico de partenolida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Partenolida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
V = volumen final de la Solución madre de Ja
muestra (ml)
w = peso del polvo usado para preparar la Solución
madre de la muestra (mg)
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra
Criterios de aceptación: No menos de 0,2% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 102 ufc/g.
USP 37
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Hojas de color verde amarillento, pe-
cioladas, por lo general de 2-5 cm de longitud, aunque
en ocasiones de hasta 1O cm, ovadas, marcadamente
divididas en 5 o, en ocasiones, 7 segmentos, cada uno
con un margen crenado grueso y ápice obtuso; ambas
superficies son pubescentes y la nervadura central es
prominente en la superficie inferior.
Histología: Células epidérmicas superiores e inferiores
con paredes anticlinales onduladas, cutícula estriada y
estomas anomocíticos, mas frecuentes en la epidermis
inferior; tricomas, más abundantes en la epidermis infe-
rior, de dos tipos; tricomas de recubrimiento uniseria-
dos con hasta 6 células basales isodiamétricas pequeñas
y células apicales alargadas y ahusadas, por lo general
en ángulos rectos con respecto al eje de las células ba-
sales; tricomas glandulares levemente hundidos, com-
puestos de un pedicelo corto, biseriado de 2 o 4 células
y una cabeza biseriada de 4 células, a cuyo alrededor la
cutícula forma un recubrimiento de tipo vesicular
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 10,0~o, incluyendo el pedicelo
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Método 2 (561): No menos de 15,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Tanaceto re-
ducido a polvo fino a 105º durante 1 hora: pierde no
más de 10,0% de su peso.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 12,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar en un lugar seco. Proteger de la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
plaJlta contenida en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Partenolida USP
ER Rutina USP
Tanaceto en Polvo
DEFINICIÓN
El Tanaceto en Polvo es Tanaceto reducido a polvo fino o a
polvo muy fino.
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención del pico de partenolida de la
Solución muestra corresponde al de la Solución estándar,
según se obtienen en la prueba de Contenido de
Partenolida. , ,
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1,0 mg/ml de ER Partenolida USP
en metanol
Solución muestra: Transferir 1,0 g de Tanaceto en
Polvo a un matraz adecuado. Agregar 20 ml de meta-
no!, calentar el matraz sobre un baño de agua a 60º
durante 15 minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el filtrado
bajo presión reducida hasta sequedad y disolver el resi-
duo en 2,0 ml de metano!.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,5 mm, por lo regular de 20 cm de longitud
USP 37
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil: Tolueno y acetona (85:15)
Solución reveladora: Solución al 0,5% de vainillina en
una mezcla de ácido sulfúrico y alcohol (4:1)
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido tres cuartos de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cámara cromatográ-
fica, marcar el frente de la fase móvil y dejar que se
seque al aire. Rociar la placa con Solución reveladora.
Después de 5 minutos, observar la placa bajo luz
diurna.
Criterios de aceptación: Una mancha azul en la parte
media del cromatograma de la Solución muestra que co-
rresponde en color y valor Rr a la mancha principal ob-
tenida en el cromatograma de la Solución estándar in-
dica la presencia de partenolida. El tercio inferior del
cromatograma de la Solución muestra puede presentar
dos manchas rosadas y el tercio superior puede presen-
tar una mancha rosada.
• C. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 0,25 mg/ml de ER Rutina USP en
metano!
Solución muestra: Agregar 1 O ml de metanol a 1 g de
Tanaceto en Polvo y calentar en un baño de agua a 60º
durante 15 minutos. Enfriar y filtrar.
Adsorbente: Capa de gel de sílice para cromatografía
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico anhidro,
ácido acético glacial y agua (1 O: 1, 1: 1, 1: 2,7)
Solución reveladora A: Solución al 1 % de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: Solución al 5% (p/v) de poli-
etilenglicol 4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma hasta que el frente de la
fase móvil haya recorrido tres cuartos de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cámara cromatográ-
fica y dejar que se seque al aire. Rociar la placa con
Solución reveladora A seguida de Solución reveladora B
y observar la placa bajo luz UV a 366 nm.
Criterios de aceptación: En relación con el valor Rr de
la mancha principal de la Solución estándar, el cromato-
grama de la Solución muestra no presenta una mancha
azul a un Rr de 1, 1 (a diferencia de la manzanilla ro-
mana) pero presenta una mancha verde a un Rr de 2,3
(a diferencia de la manzanilla alemana) y las manchas de
colores a valores Rr indicados son las siguientes: 1,5
(anaranjado amarillento), 1,65 (verde amarillento), 2,0
(azul verdoso) y 2,25 (azul blanquecino).
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PARTENOLIDA
Fase móvil: Acetonitrilo y agua (9:11)
Solución estándar: 0,04 mg/ml de ER Partenolida USP
en metanol
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Tanaceto en Polvo, pesados con exacti-
tud, a un matraz adecuado. Agregar 100 ml de meta-
no! y calentar en un baño de agua a 60º durante 1 O
minutos. Retirar el matraz del baño de agua, enfriar y
filtrar. Enjuagar el matraz con tres porciones de 5 ml de
metanol y filtrar, agregando los enjuagues al filtrado.
Transferir el residuo remanente en el interior del filtro al
mismo matraz. Agregar 50 ml de metanol y continuar
el procedimiento de enjuague según se describió ante-
riormente. Evaporar los filtrados combinados bajo pre-
sión reducida hasta sequedad y disolver el residuo en
20,0 ml de metanol.
Suplementos Dietéticos /Tanaceto 6163
Solución muestra: Transferir 1 O ml de Solución madre
de la muestra a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con metanol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
partenolida
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de partenolida, en inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de partenolida en la porción de
Tanaceto en Polvo tomada para preparar la Solución
muestra:
Resultado= (ru/r1) x [Cs x (V/W)] x O x 100
ru = área del pico de partenolida de la Solución
muestra
rs = área del pico de partenolida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Partenolida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
V = volumen final de la Solución madre de la
muestra (ml)
W = peso de Tanaceto en Polvo usado para
preparar la Solución madre de la muestra
(mg)
O = factor de dilución para preparar la Solución
muestra a partir de la Solución madre de la
muestra
Criterios de aceptación: No menos de 0,2% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• MET,ALES PESADOS (231 ): .f'Jo más de 20 ppm
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
Método 2 (561): No menos de 15,0%
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Tanaceto en
Polvo a 105º durante 1 hora: pierde no más de 10,0%
de ,su peso. ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,más de 12,0% , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Partenolida USP
ER Rutina USP
61 64 Té Verde / Suplementos Dietéticos USP 37

tiempos de retención correspondientes a los del croma-

tograma de la Solución estándar B.
Extracto en Polvo de Té Verde
Descafeinado COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE POLIFENOLES
DEFINICIÓN Solución A: Metanol, ácido fosfórico al 85% y agua
El Extracto en Polvo de Té Verde Descafeinado se prepara a (50: 3,5: 946,5)
partir de brotes de hojas y hojas jóvenes sin fermentar de Solución B: Acetonitrilo y metanol (95:5)
Camellia sinensis (L.) Kuntze (Fam. Theaceae), también co- Fase móvil: Ver la Tabla 7.
nocida como Thea sinensis L., usando disolventes adecua-
dos tales como alcohol, metanol, acetona o agua o mez- Tabla 1
clas de estos disolventes; la cafeína ha sido extraída. La
Tiempo Solución A Solución B
relación entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
lmin) {%) (%)
tracto en Polvo es 6:1-10:1. Contiene no menos de
60~0% de polifenoles, calculados como (-)-epigalocate- o 94 6
qu!n-3-0-galato, no mer:ios de 40,0% de (-)-epigalocate- 20 94 6
quin-3-0-galato y no mas de O, 1% de cafeína, calculados 50 78 22
con respecto a la materia anhidra. 70 38 62
75 94 6
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA 90 94 6
DELGADA
Solución estándar: 4 mg/mL de ER Extracto en Polvo Solución es~ándar A: O, 1 mg/mL de E~ (-)-Epi-
de Té Verde Descafeinado USP en una mezcla de al- galocatequin-3-0-galato USP en Solucion A
cohol y agua (4:1 ), someter a ultrasonido durante 1 O Solución estándar B: 0,4 mg/mL de ER Extracto en
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante transpa- Polvo de Té Verde Descafeinado USP en Solución A.
rente. [NOTA-Preparar en el momento de su uso. Si Mezclar y centrifugar.
requiere almacenamiento, almacenar a una temperatura Solución muestra: 0,4 mg/mL de Extracto en Polvo de
por debajo de -20º.] Té Verde Descafeinado en Solución A. Mezclar y
Solución muestra: 4 mg/mL de Extracto en Polvo de centrifugar.
Té Verde Descafeinado en una mezcla de alcohol y Sistema cromatográfico
agua (4:1 ), someter a ultrasonido durante 1 O minutos y (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
centrifugar. Usar el sobrenadante transparente. Modo: HPLC
Sistema cromatográfico Detector: UV 278 nm
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del- Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
gada.) Temperatura de la columna: 25 ± 1 º
Adsorbente: Usar una mezcla de gel de sílice para Velocidad de flujo: 0,8 ml/min
cromatografía con un tamaño promedio de partícula Volumen de inyección: 1 5 µL
de 5 µm (placas para HPTLC) Aptitud del sistema
Volumen de aplicación: 1 µL Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Fase móvil: Tolueno, acetona y ácido fórmico (9:9:2) Requisitos de aptitud
Reactivo de sumersión: Disolver 140 mg de sal de Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
fast blue B en 1 O mL de agua y agregar 140 mL de de la Solución estándar B es similar al cromatograma
metanol y 50 mL de diclorometano. LNOTA-Preparar de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
semanalmente y almacenar a 4º en la oscuridad.] Polvo de Té Verde Descafeinado USP usado.
Análisis Resolución: No menos de 1 entre el pico de (-)-epi-
Muestras: Solución estándar y Solución muestra g.a)ocate_quin-3-0-galato y el pico precedente, Solu-
Usar una cámara no. saturada y acondicionar la placa a oon estandar B
una humedad relativa de 30% usando un dispositivo Factor de asimetría: 0,8-2,0 para el pico de (-)-epi-
adecuado. Desarrollar los cromatogramas, secar la galocatequin-3-0-galato, Solución estándar A
placa a 100º, sumergir en el Reactivo de sumersión se- Desv.iación están~ar relativa: No más de 2,0% para
car y observar la placa inmediatamente bajo luz v(sible. el, pico de (-)-epigalocatequin-3-0-galato, Solucion es-
[NOTA-El cromatograma se mantiene estable hasta 30 tandar A
minutos; después de dicho periodo, el fondo de la Análisis
placa se oscurece sic;inificativamente.] Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Cri!erios de aceptacion: El cromatograma de la Solu- Solución muestra
oon muestra presenta bandas similares en posición y Registrar los cromatogramas y medir las áreas de los
P!~os de_ analitos. Usando el cromatograma de la Solu-
color.~ las b,andas principales en el cromatograma de la
Soluoon estandar. El cromatograma de la Solución mues- c~on estandar B y el cromatograma de referencia pro-
~ra presenta cuatro bandas principales de color anaran-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Té Verde
jado amarronado con valores RF de aproximadamente Descafeinado USP, identificar los tiempos de retención
0,38; ~,48; 0,52 y 0,62 correspondientes a (-)-epigalo- de los picos correspondientes a los diversos polifeno-
catequin-3-0-galato, (-)-epigalocatequina les. Los tiempos de retención relativos aproximados
(-)-epicatequin-3-0-galato y (-)-epicateq~ina, respecti- para los polifenoles se proveen en la Tabla 2.
vame~te. La ban~a más intensa es la correspondiente a
(-)-epigalocatequin-3-0-galato. La banda menos intensa Tabla 2
es la correspondiente a ,(-)-epicatequina. Tiempo de
• B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC Retención
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con- Analito Relativo
tenido de Polifenoles.
Cri!erios de aceptación: El cromatograma de la Solu- f-1-Eninalocaten uina o 56
cJOn muestra presenta picos .de (-)-epigalocatequina, ( +\-Catenuina o 68
(+)-catequ1na, (-)-ep1catequina, (-)-epigalocatequin-3-0- (-)-Enicatenuina o 98
galato, (-)-galocatequin-3-0-galato, (-)-epigalocatequin- (-)-En ina loca ten u in-3-0-nalato 1 00
3-0-(3 '-0-metil)-galato y (-)-epicatequin-3-0-galato a
USP 37 Sup!Pmentos Dieteticm / Té Verde 61 65

Tabla 2 (Continuación) Solución B: Acetonitrilo, meta11oi y ácido fosfórico al

·---------~-----------

Tiempo de 85°1ii (946,5: 50: 3,5)

Retención
Fase móvil: Ver la Tabla 3.
Relativo
1 09 Tabla 3
1 19
1 27
•;::,7,; .... ·1=-··~:;,fA_--_---+____-_s_o_1~~!~v:~ó )_n_B_--j

--- __Q_____ ----- _._l"-'0("--)- - - + - - - - - ' º ' - - - - - - - !

Calcular por separado los porcentajes de (-)-epigaloca-
i----~30~__ __j__ ____ ~l0~0~-----+---~º'--------I
tequina, (+)-catequina, (-)-epicatequina, (-)-epigaloca-
tequin-3-0-galato, (-)-galocatequin-3-0-galato, (-)-epi-
galocatequin-3-0-(3' -0-metil)-galato y (-)-epicatequin-
3-0-galato como (-)-epigalocatequin-3-0-galato en la 45
-+==-J-------
- !~-=----i-- 100 - --
~ ~~
o
porción de Extracto en Polvo tomada: 55 _L_ ____,1~0~0-----'----=º--~

Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 Solución estándar: 1 pg/ml de ER Cafeína USP en

metanol
ru = área del pico de cada polifenol de la Solución Solución muestra: 1 mgíml de Extracto en Polvo en
muestra metano!
rs = área del pico de (-)-epigalocatequin-3-0- Sistema cromato9ráfico
galato de la Solución estándar A (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Cs = concentración de ER (-)- Epigalocatequin-3-0- Modo: HPLC
galato USP en la Solución estándar A Detector: UV 272 nm
(mg/ml) Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L60 de 5 µm 1

Cu = concentración de Extracto en Polvo de Té Temperatura de la columna: 25 ~t 1 º

Verde Descafeinado en la Solución muestra
(mg/ml)
Sumar los porcentajes calculados para los polifenoles
individuales.
Criterios de aceptación: No menos de 40,0% de
(-)-epigalocatequin-3-0-galato y no menos de 60,0%
de polifenoles, calculados como (-)-epigalocatequin-
3-0-galato con respecto a la materia anhidra
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método)! (231): No más de 20 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia co/i.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• LÍMITE DE ÁCIDO GÁLICO
Solución A, Solución B, Fase móvil y Sistema cromato-
gráfico: Proceder según se indica en la prueba de
Contenido de Politeno/es.
Solución estándar: 0,2 mg/ml de ácido gálico en Solu-
ción A
Solución muestra: 20 mg/ml de Extracto en Polvo en
Solución A. Mezclar y centrifugar.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Registrar los cromatogramas y medir las áreas de los
picos de ácido gálico.
Calcular por separado los porcentajes de ácido gálico
en la porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ácido gálico en la Solución
estándar (mg/ml)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de Té
Verde Descafeinado en la Solución muestra
(mg/ml)
!=riterios de ~ceptación: No más de 1,0%
• LIMITE DE CAFEINA
Solución A: Metanol, tetrahidrofurano, ácido fosfórico
al 85% y agua (50:10:3,5:936,5)
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cafeína.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Registrar los cromatogramas y medir las áreas de los
picos de cafeína .
Calcular por separado los porcentajes de cafeína en la
porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Cafeína USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración de Extracto en Polvo de Té
Verde Descafeinado en la Solución muestra
(mg/ml)
Criterios de aceptación: No más de O, 1 %
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método la (921 ): No más de
6,0%, determinado en 0,5 g
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281 ): No más de 0,5%, deter-
minado en 1,0 g
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
(565), Requisitos Farmacopeicos Generales.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artículo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cafeína USP
ER (-}Epigalocatequin-3-0-galato USP
ER Extracto en Polvo de Té Verde Descafeinado USP
' En esta prueba tambien se pueden usar columnas con relleno L1 con recu-
brimiento exhau;tivo (end-capped).
6166 Tiamina /Suplementos Dietéticos
Clorhidrato de Tiamina-ver Clorhidrato
de Tiamina en Monografías Generales
Clorhidrato de Tiamina, Solución Oral-
ver Clorhidrato de Tiamina, Solución Oral en
Monografías Generales
Clorhidrato de Tiamina, Tabletas-ver
Clorhidrato de Tiamina, Tabletas en
Monografías Generales
Mononitrato de Tiamina-ver Mononitrato
de Tiamina en Monografías Generales
Mononitrato de Tiamina, Solución
Oral-ver Mononitrato de Tiamina, Solución
Oral en Monografías Generales
Tirosina-ver Tirosina en Monografías
Generales
Trébol Rojo
DEFINICIÓN
Cambio en la redacción:
El Trébol Rojo consiste en las •partes aéreas4 usm de Trifolium
pratense L. (Fam. Fabaceae). Contiene no menos de O 5%
de isoflavonas, calculado con respecto a la materia se~a
como la suma de daidzeína, genisteína, formononetina y
biocanina A.
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRuEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN
CAPA DELGADA
Solución estándar: Transferir 100 mg de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP a un tubo de centrífuga .con
tapa de rosca. Agregar 1 mL de una mezcla de alcohol
y agua (7:3), y calentar en un baño de vapor durante
1O minutos. Centrifugar y usar el sobrenadante
transRarente.
Solución muestra: Transferir 1 g del material vegetal re-
ducido a polvo a un tubo de centrífuga con tapa de
rosca. Agregar 1O ml de una mezcla de metanol y agua
(3:2), calentar en un baño de vapor durante 10-15 mi-
nutos, enfriar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 20-30 µl, en bandas de 2 cm
de largo
USP 37
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico ácido acé-
tico ~}acial y agua (100:11 :11 :27) '
Soluc1on reveladora A: 1O mg/ml de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de no
menos de 18 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Roc!~r la placa con Solución reveladora A seguida
de Soluc1on reveladora B y observar la placa bajo luz UV
a 365 nm.
Cr~!erios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
C1on muestra presenta una zona azul una zona verde
amarillenta y una zona anaranjada a'marillenta a valores
RF de aproximadamente 0,70; 0,55 y 0,50, respectiva-
mente, correspondientes en color y RF a las zonas en el
cromatograma de la Solución estándar. Pueden obser-
varse otras zonas coloreadas de diversas intensidades en
el cromatograma de la Solución muestra.• usm
Agregar lo siguiente:
•• A. El Trébol Rojo cumple con los requisitos en Pruebas
Espedficas, Características Botánicas .•usm
Agregar lo siguiente:
•• 8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de biocanina A y formononetina
Disolvente A: Metanol y agua (7:3)
Disolvente B: Metanol y agua (6:4)
Solución estándar A: 0,5 mg/ml de ER Biocanina A
USP en metano!
Solución estándar 8: 0,5 mg/mL de ER Formonone-
tina USP en metano!
Solución estándar C: 10 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un baf'lo de agua a 60°~80<? du-
rante l O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 0,5 g de Trébol Rojo re-
ducido a poJvo fino a un tubo de centrífuga, agreg.ar
5 ml de Disolvente B, agitar hasta dispersar, calentar
en !.!ºbaño ~e agua a 60º~80" duran.te 10 minutos,
enfriar, centrifugar y usar el sobrenadante. [No'fA2Re~
servar una porción del sobrenadante para la prueba de
ldentificacion C]
Sistema cromatográflco
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sHice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 4 µL de Solución estándar A,
de Solución estándar B y de Solución muestra, y 3 µL
de Solución estándar C, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, tolueno
y ácido fórmico (30:70: 1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizaclón: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B
Solución estándar C y Solución muestra '
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas
en una cámara saturada. Retirar la placa de la cá-
USP 37 Suplementos Dietéticos /Trébol Rojo 6167

mara, calentar a 100º durante 5 minutos, derivatizar Aptitud del sistema: La Solución estándar B presenta
la placa mientras esté tibia con el Reactivo de derivati- dos bandas amarillas, aproximadamente en la parte
zación, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm. media del cromatograma, la banda inferior corres-
Aptitud del sistema: La Solución estándar C presenta ponde en color y valor Rr a la banda debida a hiperó-
una banda verdosa, aproximadamente en la parte sido en el cromatograma de la Solución estándar A, la
media del cromatograma, correspondiente a la banda banda superior amarilla se debe a isoquercitrina; dos
debida a biocanina A en el cromatograma de la Solu- bandas de color verde o una banda ancha de color
ción estándar A, y una banda azulada, aproximada- verde, por encima de las bandas amarillas; y una
mente en un tercio del cromatograma, correspon- banda azul en el tercio superior del cromatograma.
diente a formononetina en el cromatograma de la Las bandas amarillas debidas a hiperósido e isoquerci-
Solución estándar B. Por debajo de la banda debida a trina están claramente separadas.
formononetina, el cromatograma de la Solución están- Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
dar C presenta una banda roja en el tercio inferior del ción muestra presenta las siguientes bandas similares
cromatograma. en posición y color a las bandas correspondientes en
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- el cromatograma de la Solución estándar B: una
ción muestra presenta las siguientes bandas principa- banda amarilla, aproximadamente en la parte media
les similares en posición y color a las bandas corres- del cromatograma correspondiente a la banda debida
pondientes en el cromatograma de la Solución a hiperósido en el cromatograma de la Solución están-
estándar C: dos bandas verdosas aproximadamente dar A; otra banda de color amarillo, a un valor Rr
en la parte media del cromatograma (a diferencia del ligeramente superior al de hiperósido; dos bandas de
trébol blanco, la soja y la alfalfa), una de estas bandas color verde, o una banda ancha de color verde, por
verdosas corresponde a la banda azul debida a bioca- encima de las bandas de color amarillo; y una banda
nina A en el cromatograma de la Solución estándar A; de color azul en el tercio superior del cromatograma.
y una banda azulada aproximadamente en un tercio 11.USP37
del cromatograma, correspondiente a la banda de-
bida a formononetina en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B; por debajo de la banda debida a for- Cambio en la redacción:
mononetina, el cromatograma de la Solución muestra
presenta una banda roja en el tercio inferior del ero~ • •D.,..usm PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
matograma .• usP31 Análisis: Proceder según se indica en Contenido de
lsoflavonas.
Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido
Agregar lo .siguiente: de /soflavonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii-
soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas:
"'• C. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de glicósidos de flavonas Resultado = (B + G)/(O + F)
Disolvente A: Metano! y agua (7:))
Disolvente B: Metano! y agua (6:4) B porcentaje de biocanina A
=
Solución estándar A: O, 1 mgJmL de ER Hipe!'ósido G porcentaje de genisteína
=
USP en metanol O porcentaje de daidzeína
=
Solución estándar B: 25 rng/ml.., de ER Extracto en F porcentaje de formononetina
=
Polvo de Trébol Rojo USP en Disolvente A Agi~ahhas~ Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
dispersar, calentar en un baño. de agua a 60"º--80º du- ción muestra presenta picos para daidzeína, genisteína,
rante 10 minutos, enfriar, centrifugar y usar el formononetina y biocanina A a tiempos de retención
sobrenadante. que corresponden a los del cromatograma de la Solu-
Solución muestra: Usar la solución según se prepa!'ó ción estándar A y el cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo-
en la prueba de Identificación 8. nas y 7-hidroxiisoflavonas está entre O, 1 y 1O.
Sistema cromat0,9ráfico
COMPOSICIÓN
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato- Cambio en la redacción:
grafía con un tamaño promedio de partícul.a de 5 µm
(placas para HPTLC) • CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Volumen de aplicación: 4 µL de Solución estándat:.A, Solución A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga
8 µL de Solución estándar B y 2 µL de Solución mues- ácido trifluoroacético al 0,05%.
tra, en bandas de 8 mm Solución B: Acetonitrilo que contenga ácido trifluoroa-
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- cético al 0,05%.
medad realtiva de aproximadamente 33%, usando un Fase móvil: Ver la Tabla 7.
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, ácido Tabla 1
fórmico, ácido acético glacial y agua (100:11 :11 :27)
Distancia de desarrollo: 6 cm Tiempo Solución A Solución B
Reactivo de derivatización: 5 mg/ml de difenilbori- (min) (O/o) (O/o)
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo o 100 o
Análisis 2 100 o
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y 25 87 13
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro- 75 80 20
matografía en capa delgada de alta resolución ade- 78 73 27
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas 80 55 45
en una cámara saturada. Retirar la placa de la cá- 11 o 50 50
mara, calentar a 100º durante 5 minutos, derivatizar 13 o 40 60
la placa mientras esté tibia con el Reactivo de derivati- 15 o 26 74
zación, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
16 o o 100
6168 Trébol Rojo / Suplementos Dietéticos
Tabla 1 (Continuación)
Tiempo Solución A Solución B
lmin) (%) (%)
18 1 100 o •Resultado
23 o 100 o
Disolvente: Alcohol y a9ua (1 :1)
Solución madre del estandar A: Transferir una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP, equi-
valente a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas,
a un matraz volumétrico de 250 mL. Agregar 15 mL de
alcohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disol-
ver y 9iluir son Disolvente a volumen. .,
Solucion estandar A: Evaporar 50 mL de Soluoon ma-
dre del estándar A hasta sequedad al vacío. Agregar
15 mL de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente la solución resultante, con ayuda de 15 mL de
alcohol, a un matraz volumétrico de 50 mL y diluir con
Disolvente a volumen. Centrifugar o filtrar a través de
una membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor.
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER Formononetina
USP, •0,02 mg/mL de ER Genisteína USP, 0,02 mg/mL
de ER Daidzeína USP y O, 1 mg/mL de ER Biocanina A
USP 4 usp 31 en una mezcla de n-propanol y agua (1 :1 ).
Someter a ultrasonido y filtrar a través de una mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,5 g de Trébol Rojo molido, pesados con exacti-
tud, a un matraz de 120 mL con tapón. Agregar exacta-
mente 100 mL de Disolvente, cerrar el matraz y agitar
en un agitador orbital o de movimiento tipo muñeca
(wrist-action) durante no menos de 12 horas.
Solución muestra: Evaporar 50 mL de Solución madre
de la muestra hasta sequedad al vacío a 40º. Agregar
15 mL de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente esta solución, con ayuda de 15 mL de alcohol, a
un matraz volumétrico de 50 mL y diluir con Disolvente
a volumen. Filtrar a través de una membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
primeros 4 mL del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Temperatura de la columna: 45º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A •y Solución estándar
B.._usP37
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
formononetina, •Solución estándar B.._usP31
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%,
•determinada a partir del pico de formononetina en
inyecciones repetidas, Solución estándar B... usm
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Identificar los picos correspondientes a daidzeína, genis-
teína, formononetina y biocanina A en el cromato-
grama de la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar A y el cromato-
grama de referencia. Medir las áreas de los picos de
los analitos.
USP 37
Calcular por separado los porcentajes de daidzeína, ge-
nisteína, formononetina y biocanina A en la porción de
Trébol Rojo tomada:
= (ru!rs) x Cs x (V/W) x O x 1 OO ... usm
ru = respuesta del pico de cada isoflavona
pertinente de la Solución muestra
rs = •respuesta del pico de daidzeína, genisteína,
formononetina o biocanina A4 usm de la
Solución estándar B
Cs = concentración de •daidzeína, genisteína,
formononetina o biocanina A... usm en la
Solución estándar B (mg/mL)
V = volumen de Solución madre de la muestra (mL)
w = peso de Trébol Rojo usado para preparar la
Solución muestra (mg)
4 4.U5P37
D = factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de la Solución madre de la
muestra, 1
Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de
daidzeína, genisteína, formononetina y biocanina A. No
menos de 0,5% de isoflavonas con respecto a la ma-
teria seca.
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
•• METALES PESADOS (231): No más de 1 O µgJg ... usm
Agregar lo siguiente:
4 • IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg!g ... usm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 4 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no más de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
Cambio en la redacción:
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Las inflorescencias del Trébol Rojo son
ovoides con una cúspide redondeada, en su mayoría de
12-34 mm de largo y de ancho, habitualmente sobre
un pedúnculo corto, arrugadas, purpúreas y más o me-
nos de color marrón cuando se secan, constan de mu-
chas flores papilionáceas, arracimadas y unidas en la
base por estípulas ciliadas, anchas y puntiagudas, de
color verde pálido con nervaduras más oscuras. Las flo-
res • 4 usm son de hasta 15 mm de largo y presentan lo
siguiente: cáliz con cinco dientes subulados verdes y
pubescentes, uno más lar_go que los otros cuatro; péta-
los unidos en un tubo mas o menos campanulado, algo
doblado hacia atrás e incoloro con venas de color púr-
pura rosado; estambres diadelfos; estilo delgado; leve
olor aromático parecido al té; y sabor dulce que se
vuelve ligeramente amargo. •Hojas trifolioladas, peciola-
USP 37
das, estipuladas, con estípulas fusionadas con el pecíolo;
folíolos peciolulados, de obovadas a oblongas-obovadas
o ampliamente elípticas .• usm
Microscópicas
•Flor: La epidermis del cáliz está compuesta por célu-
las poligonales con cutícula ligeramente estriada y es-
tomas anomocíticos ocasionares únicamente en la epi-
dermis externa; tricomas abundantes, uniseriados de
recubrimiento con dos células basales pequeñas, y de
paredes delgadas y una célula apical ahusada de pare-
des gruesas de hasta 1 mm de largo con una cut1cula
rugosa; tricomas glandulares, particularmente en la
epidermis inferior, cada uno con un pedicelo de una o
dos células y una cabeza formada por varias células
dispuestas en dos filas; las células epidérmicas de la
corola, papilosas en la punta, son alargadas con pare-
des ligeramente onduladas y una cutícula fuertemente
estriada; los haces vasculares de la corola y el cáliz
están rodeados por una capa de cristales que contiene
cristales prismáticos de oxalato de calcio; capa fibrosa
de anteras; granos de polen subesféricos, de 20-48
µm de diámetro con exina lisa, tres poros bien diferen-
ciados y tres surcos.
Sección transversal de la hoja: Dorsiventral; de una a
tres filas de células en empalizada bajo la epidermis
superior; mesófilo de células de parénquima espon-
joso; epidermis inferior; los tricomas de recubrimiento
en ambas epidermis son similares a los encontrados en
las flores; los tricomas glandulares, más próximos a las
venas en la epidermis inferior, son similares a los en-
contrados en las flores; haces vasculares colaterales, ro-
deados por una capa de cristales que contiene cristales
prismáticos de oxalato de calcio.
Sección transversal del tallo: Presenta crestas a lo
lar90 de la superficie, con grupos de células colenqui-
maticas bajo la capa epidérmica de las crestas; la epi-
dermis esta seguida por unas pocas capas de células
parenquimáticas; una médula central parenquimatosa
ancha, rodeada de grupos de haces vasculares separa-
dos por células parenquimáticas lignificadas de paredes
gruesas .•usP11
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(56,1): No más de 2,0%,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
fl.jétodo 2 (561): No menos de 15,0%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Análisis: Secar 1 g a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 12,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 1 0,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en un envase
bien cerrado y resistente a la luz. Proteger de la
humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la planta contenidas en el artículo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER Biocanina A USP
ER Daidzeína USP•usm
ER Formononetina USP
•ER Genisteína USP
ER Hiperósido USP •usm
ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP
Suplementos Dietéticos /Trébol Rojo 6169
Trébol Rojo en Polvo
DEFINICIÓN
El Trébol Rojo en Polvo es Trébol Rojo reducido a polvo o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 0,5% de isoflavo-
nas, calculado con respecto a la materia seca como la
suma de daidzeína, genisteína, formononetina y biocanina
A.
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN
CAPA DELGADA
Solución estándar: Transferir 1 00 mg de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP a un tubo de centrífuga con
tapa de rosca. Agregar 1 mL de una mezcla de alcohol
y agua (7:3), y calentar en un baño de vapor durante
1O minutos. Centrifugar y usar el sobrenadante
transparente.
Solución muestra: Transferir 1 g de Trébol Rojo en
Polvo a un tubo de centrífuga con ta¡a de rosca. Agre-
gar 1 O mL de una mezcla de metano y agua (3:2), ca-
lentar en un baño de vapor durante 1 0-15 minutos,
enfriar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 20-30 µL, en bandas de 2 cm
Fde mov1·1 : Acetato d e et1·¡o, ac1
aselargp ' 'd o f'orm1co,
· , 'd o ace-
ac1 ,
tico glacial y agua (100:11 :11 :27)
Solución reveladora A: 1O mg/mL de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metano!
Solución reveladora B: 50 mg/ml de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de no
menos de 18 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Rociar la placa con Solución reveladora A seguida
de Solución reveladora By observar la placa bajo luz UV
a 365 nm .
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona azul, una zona verde
amarillenta y una zona anaranjada amarillenta a valo-
res RF de aproximadamente 0,70; 0,55 y 0,50, respec-
tivamente, correspondientes en color y RF a las zonas
en el cromatograma de la Solución estándar. Pueden
observarse otras zonas coloreadas de díversas intensi-
dades en el cromatograma de la Solución muestra .• usP37
Agregar lo siguiente:
•• A. El Trébol Rojo en Polvo cumple con los requisitos en
Pruebas Específicas, Características Botánicas .• usP37
Agregar lo siguiente:
•• B. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de biocanina A y formononetina
Disolvente A: Metano! y agua (7:3)
Disolvente B: Metano! y agua (6:4)
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Biocanina A
USP en metano!
Solución estándar B: 0,5 mg/mL de ER Formonone-
tina USP en metano!
61 70 Trébol Rojo / Suplementos Dietéticos
Solución estándar C: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un baño de agua a 60º-80º du-
rante 1O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Transferir 0,5 g de Trébol Rojo en
Polvo a un tubo de centrífuga, agregar 5 mL de Disol-
vente B. Agitar hasta dispersar, calentar en un baño de
agua a 60º-80º durante 1 O minutos, enfriar, centrifu-
gar y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar u~~ P<?~­
ción del sobrenadante para la prueba de ldenttf¡cac1on
C]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 4 µL de Solución estándar A,
de Solución estándar B y de Solución muestra, y 3 µL
de Solución estándar C, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, tolueno
y ácido fórmico (30:70:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para HPLTC
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra-
mas en una cámara saturada. Retirar la placa de la
cámara, calentar a 100º durante 5 minutos, derivati-
zar la placa mientras esté tibia con el Reactivo de deri-
vatizacíón, secar al aire y observar bajo luz UV a 365
nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar C presenta
una banda verdosa, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, correspondiente a la banda
debida a biocanina A en el cromatograma de la· Solu-
ción estándar A, y una banda azulada, aproximada-
mente en un tercio del cromatograma, correspon-
diente a formononetina en el cromatograma de la
Solución estándar B. Por debajo de la banda debida a
formononetina, el cromatograma de la Soluciónestán-
dar C presenta una banda roja en el tercio inferior del
cromatograma.
Criterios i:te aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas principa-
les similares en posición y color a las banda~_ corres-
pondientes en el cromatograma de la Soluoon
estándar C: dos bandas verdosas aproximadamente
en la parte media del cromatograma (a diferencia del
trébol blanco, la soja y la alfalfa), una de estas bandas
verdosas corresponde a la banda debida a biocanina
A en el cromatograma de la Solución estándar A; y
una banda azulada aproximadamente en un tercio
del cromatograma, correspondiente a la banda de-
bida a formononetina en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B; por debajo de la banda debida a for-
mononetina, el cromatograma de la Solución muestra
presenta una banda roja en el tercio inferior del cro-
matograma .• usp31
USP 37
Agregar lo siguiente:
•• C. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de glicósidos de flavonas
Disolvente A: Metanol y agua (7:3)
Disolvente B: Metano! y agua (6:4)
Solución estándar A: O, 1 mg/ml de ER Hiperósido
USP en metano!
Solución estándar B: 25 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un baño de agua a 60º-80º du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Usar la solución según se preparó
en la prueba de Identificación B.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 4 µL de Solución estándar A,
8 µL de Solución estándar B y 2 µL de Solución mues-
tra, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, ácido
fórmico, ácido acético glacial y agua (100:11 :11 :27)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa par¡l HPTLC
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra-
mas en una cámara saturada. Retirar la placa de la
cámara calentar a 100º durante 5 minutos, derivati-
zar la placa mientras esté tibia con el Reactivo de deri-
vatización, secar al aire y observar bajo luz UV a 365
nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar B presenta
dos bandas amarillas, aproximadamente en la parte
media del cromatograma. la banda inferior corres-
ponde en color y valor RF a la banda. ~ebid~ a hij::>eró-
sido en el cromatograma de la Soluc1on estandar A, la
banda superior amarilla se debe a ísoquercitrina. La
solución también presenta dos bandas de color verde
o una banda ancha de color verde, por encima de las
bandas amarillas, y una banda azul en el. tercio s~pe­
rior del cromatograma. Las bandas amarillas debidas
a hiperósido e isoquercitrina están claramente
separadas.
Cri!erios de aceptación: ~I c~omatograma d.e I~ Solu-
cion muestra presenta las s1gu1entes bandas ~1m1lares
en posición y color a las bandas correspondientes en
el cromatograma de la Solución estándar B: una .
banda amarilla, aproximadamente en la parte media
del cromatograma correspondiente a la ban~~ debi9a
a hiperósido en el cromatograma de la Soluc1on estan-
dar A; otra banda de color amarillo, a un valor RF
ligeramente superior al de hiperósido; dos bandas de
color verde, o una banda ancha de color verde, por
encima de las bandas de color amarillo; y una banda
de color azul en el tercio superior del cromatograma.
4USP31
Cambio en la redacción:
• •D. 4 usm PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de
lsoflavonas.
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Trébol Rojo 6171

Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido exactitud, a un matraz de 120 ml con tapón. Agregar
de lsoflavonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii- exactamente 100 ml de Disolvente, cerrar el matraz y
soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas: agitar en un agitador orbital o de movimiento tipo mu-
ñeca (wrist-action) durante no menos de 12 horas.
Resultado = (8 + G)/(D + F) Solución muestra: Evaporar 50 ml de Solución madre
de la muestra hasta sequedad al vacío a 40º. Agregar
B porcentaje de biocanina A
= 15 ml de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño
G porcentaje de genisteína
= de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
D porcentaje de daidzeína
= mente esta solución, con ayuda de 15 ml de alcohol, a
F porcentaje de formononetina
= un matraz volumétrico de 50 ml y diluir con Disolvente
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- a volumen. Filtrar a través de una membrana con un
ción muestra presenta picos para daidzeína, genisteína, tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando los
formononetina y biocanina A a tiempos de retención primeros 4 ml del filtrado.
que corresponden a los del cromatograma de la Solu- Sistema cromato~ráfico
ción estándar A y el cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
nas y 7-hidroxiisoflavonas está entre O, 1 y 1 O. Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
COMPOSICIÓN
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Cambio en la redacción: Temperatura de la columna: 45º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
• CONTENIDO DE ISOFLAVONAS Volumen de inyección: 1 O µL
Solución A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga Aptitud del sistema
ácido trifluoroacético al 0,05%. Muestra: Solución estándar A •y Solución estándar
Solución B: Acetonitrilo que contenga ácido trifluoroa- B..t.uSP37
cético al 0,05%. Requisitos de aptitud
Fase móvil: Ver la Tabla 7. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Tabla 1
Polvo de Trébol Kojo USP usado.
Tiempo Solución A Solución B Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Cmin) (%) (%) formononetina, •Solución estándar B..t.usP3J
o 100 o Desviación estándar relativa: No más de 2,0%,
2 100 o •determinada a partir del pico de formononetina en
25 87 13
inyecciones repetidas, Solución estándar B•usm
Análisis
75 80 20 Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
78 73 27 Solución muestra
80 55 45 Identificar los picos correspondientes a daidzeína, genis-
11 o 50 50 teína, formononetina y biocanina A en el cromato-
13 o 40 60 grama de la Solución muestra por comparación con el
15 o 26 74
cromatograma de la Solución estándar A y el cromato-
grama de referencia. Medir las áreas de fos picos de
16 o o 100 íos analitos.
18 1 100 o Calcular por separado los porcentajes de daidzeína, ge-
23 o 100 o nisteína, formononetina y biocanina A en la porción de
Trébol Rojo en Polvo tomada:
Disolvente: Alcohol y a9ua (1 :1)
Solución madre del estandar A: Transferir una canti- "*'Resultado =(rul rs) x Cs x (V!W) x D x 100..t.usPJJ
dad de ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP, equi-
valente a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas, ru = respuesta del pico de cada isoflavona
a un matraz volumétrico de 250 ml. Agregar 15 ml de pertinente de la Solución muestra
alcohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disol- rs = •respuesta del pico de daidzeína, genisteína,
ver y diluir con Disolvente a volumen. formononetina o biocanina A..t.usp31 de la
Solución estándar A: Evaporar 50 ml de Solución ma- Solución estándar B
dre del estándar A hasta sequedad al vacío. Agregar Cs = concentración de •daidzeína, genisteína,
15 ml de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño formononetina o biocanina A..t.usp31 en la
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa- Solución estándar B (mg/ml)
mente la solución resultante, con ayuda de 15 ml de V = volumen de Solución madre de la muestra (ml)
alcohol, a un matraz volumétrico de 50 ml y diluir con w = peso de Trébol Rojo en Polvo usado para
Disolvente a volumen. Centrifugar o filtrar a través de preparar la Solución muestra (mg)
una membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o "*'..t.USP37
menor. D = factor de dilución para preparar la Solución
Solución estándar B: O, 1 mg/ml de ER Formononetina muestra, a partir de la Solución madre de la
USP, •0,02 m_g/ml de ER Genisteína USP, 0,02 mg/ml muestra, 1
de ER Daidzeina USP y O, 1 mg/ml de ER Biocanina A Criterios de aceptación: Sumar los porcentajes de
USP..t.usm en una mezcla de n-propanol y agua (1 :1 ). daidzeína, genisteína, formononetina y biocanina A. No
Someter a ultrasonido y filtrar a través de una mem- menos de 0,5% de isoflavonas con respecto a la ma-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor. teria seca.
Solución madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,5 g de Trébol Rojo en Polvo, pesados con
61 72 Trébol Rojo / Suplementos Dieteticos
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
.... METALES PESADOS (231 ): No más de 1o µg!g ... usP37
Agregar lo siguiente:
•• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 1,0 µg/g
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de) ,O µg!g ... usP37
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Método General para Aná-
lisis de Resicluos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no más de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
Cambio en la redacción:
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: •Los fragmentos de la epi-
dermis del cáliz están compuestos por células poligonales
con una cutícula ligeramente estriada y estomas anomo-
cíticos ocasionales; las células epidérmicas de la corola,
papilosas en la punta, son alargadas con paredes ligera-
mente onduladas y una cutícula fuertemente estriada; las
células epidérmicas superiores de los folíolos con paredes
sinuosas anticlinales y ligeramente en forma de rosario;
las células epidérmicas inferiores de los folíolos con pare-
des de sinuosas a onduladas; ambas células epidérmicas
presentan estomas anomocíticos, tricomas de recubri-
miento y tricomas glandulares; tricomas de recubri-
miento, uniseriados con dos células basales pequeñas de
paredes delgadas y una célula apical ahusada de paredes
gruesas de hasta 1 mm de largo con una cutícula rugosa;
tricomas glandulares, cada uno con un pedicelo de una o
dos células y una cabeza formada por varias células dis-
puestas en dos filas; granos de polen lisos casi esferoida-
les de 20 a 48 µm de diámetro; fibras de esclerénquima
con capa de cristales adherentes que contienen prismas
de oxalato de calcio ..... usr11
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Extractos Solubles en Agua,
Ajétodo 2 (561): No menos de 15,0%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g
Análisis: Secar la Muestra a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 12,0%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 10,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz. Proteger de la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artículo.
USP 37
Cambio en la redacción:
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER Biocanina A USP
ER Daidzeína USP ... u1ri1
ER Formononetina USP
•ER Genisteína USP
ER Hiperósido USP.t.usP37
ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP
Extracto en Polvo de Trébol Rojo
DEFINICIÓN
Cambio en la redacción:
El Extracto en Polvo de Trébol Rojo se prepara a partir de
Trébol Rojo mediante extracción con mezclas hidroalcohó-
licas u otros disolventes adecuados. • ... usr31 Contiene no
menos de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad
declarada de isoflavonas, calculado con respecto a la ma-
teria seca como la suma de daidzeína, genisteína, formo-
nonetina y biocanina A. Puede contener sustancias agre-
gadas adecuadas.
IDENTIFICACIÓN
Eliminar lo siguiente:
•• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN
CAPA DELGADA
Solución estándar: Transferir 100 mg de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP a un tubo de centrífuga con
tapa de rosca. Agregar 1 mL de una mezcla de alcohol
y agua (7:3), y calentar en un baño de vapor durante
1 O minutos. Centrifugar y usar el sobrenadante
transparente.
Solución muestra: Agitar una cantidad de Extracto en
Polvo, equivalente a 25 mg de la cantidad declarada de
isoflavonas, en 20 ml de metano!. Dejar en reposo du-
rante 15 minutos antes de usar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografía en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de sílice para cro-
matografía de 0,25 mm
Volumen de aplicación: 20-30 µL, en bandas de 2 cm
de largo
Fase móvil: Acetato de etilo, ácido fórmico, ácido acé-
tico ~!acial y agua (100:11 :11 :27)
Solución reveladora A: 1O mg/ml de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metano!
Solución reveladora B: 50 mg/mL de polietilenglicol
4000 en alcohol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
no menos de 18 cm y secar la placa en una corriente
de aire. Rociar la placa con Solución reveladora A se-
guida de Solución reveladora B y observar la placa
bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta una zona azul, una zona verde
amarillenta y una zona anaranjada amarillenta a valores
Rr de aproximadamente 0,70; 0,55 y 0,50, respectiva-
mente, correspondientes en color y Rr a las zonas en el
cromatograma de la Solución estándar. Pueden obser-
varse otras zonas coloreadas de diversas intensidades en
el cromatograma de la Solución muestra .... usp11
USP 37
Agregar lo siguiente:
•• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de biocanina A y formononetina
Disolvente A: Metano! y agua (7:3)
Disolvente B: Metano! y agua (6:4)
Solución estándar A: 0,5 mg/mL de ER Biocanina A
USP en metano!
Solución estándar B: 0,5 mg/mL de ER Formonone-
tina USP en metano!
Solución estándar C: 1O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un baño de agua a 60º-80º du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: 1 O mg/mL de Extracto en Polvo en
Disolvente A. Agitar hasta dispersar, calentar en un
baño de agua a 60°-80° durante 1 O minutos, enfriar,
centrifugar y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar
una r,orción del sobrenadante para la prueba de Identi-
ficación B.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 4 µL de Solución estándar A,
Solución estándar B y Solución muestra, y 3 µl de Solu-
ción estándar e, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, tolueno
y ácido fórmico (30:70:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B,
Solución estándar C y Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas
en una cámara saturada. Retirar la placa de la cá-
mara, calentar a 100º durante 5 minutos, derivatizar
la placa mientras esté tibia con el Reactivo de derivatí-
zación, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
Aptitud del sistema: la Solución estándar C presenta
una banda verdosa, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, correspondiente a la banda
debida a biocanina A en el cromatograma de la Solu-
ción estándar A, y una banda azulada, aproximada-
mente en un tercio del cromatograma, correspon-
diente a formononetina en el cromatograma de la
Solución estándar B. Por debajo de la banda debida a
formononetina, el cromatograma de la Solución están-
dar C presenta una banda roja en el tercio inferior del
cromatograma.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas principa-
les similares en posición y color a las bandas corres-
pondientes en el cromatograma de la Solución
estándar C: dos bandas verdosas aproximadamente
en la parte media del cromatograma (a diferencia del
trébol blanco, la soja y la alfalfa), una de estas bandas
verdosas corresponde a la banda azul debida a bioca-
nina A en el cromatograma de la Solución estándar A;
y una banda azulada aproximadamente en un tercio
del cromatograma, correspondiente a la banda de-
bida a formononetina en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B; por debajo de la banda debida a for-
mononetina, el cromatograma de la Solución muestra
presenta una banda roja en el tercio inferior del cro-
matograma .• usP37
Suplementos Dietéticos / Trébol Rojo 61 7 3
Agregar lo siguiente:
•• B. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Presencia de glicósidos de flavonas
Disolvente A: Metano! y agua (7:3)
Disolvente B: Metano! y agua (6:4)
Solución estándar A: O, 1 mg/mL de ER Hiperósido
USP en metano!
Solución estándar B: 25 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un baño de agua a 60º-80º du-
rante 1O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Usar la solución según se preparó
en la prueba de Identificación A.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromato-
grafía con un tamaño promedio de partícula de 5 µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 4 µL de Solución estándar A,
8 µL de Solución estándar B y 2 µL de Solución mues-
tra, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase móvil: Una mezcla de acetato de etilo, ácido
fórmico, ácido acético glacial y agua (100:11 :11 :27)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatización: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los crornatogramas
en una cámara saturada. Retirar la placa de la cá-
mara, calentar a 100º durante 5 minutos, derivatizar
la placa mientras esté tibia con el Reactivo de derívati-
zacíón, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
Aptitud del sistema: La Solución estándar B presenta
dos bandas amarillas, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, la banda inferior corres-
ponde en color y valor RF a la banda debida a hiperó-
sido en el cromatograma de la Solución estándar A, la
banda superior amarilla se debe a isoquercitrina; dos
bandas de color verde o una banda ancha de color
verde, por encima de las bandas amarillas; y una
banda azul en el tercio superior del crornatograma.
Las bandas amarillas debidas a hiperósido e isoquerci-
trina están claramente separadas.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta las siguientes bandas similares
en posición y color a las bandas correspondientes en
el cromatograma de la Solución estándar B: una
banda amarilla, aproximadamente en la parte media
del cromatograma correspondiente a la banda debida
a hiperósido en el cromatograma de la Solución están-
dar A; otra banda de color amarillo, a un valor RF
ligeramente superior al de hiperósido; dos bandas de
color verde, o una banda ancha de color verde, por
encima de las bandas de color amarillo; y una banda
de color azul en el tercio superior del cromatograma.
AUSP37
Cambio en la redacción:
• •c.• usm PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de lsoflavonas.
61 74 Trébol Rojo / Suplementos Dietéticos USP 37

Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido nido declarado de isoflavonas, a un matraz volumétrico
de lsof/avonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii- de 250 ml. Agregar 15 ml de alcohol deshidratado, so-
soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas: meter a ultrasonido hasta disolver y diluir con Disolvente
a volumen.
Resultado = (B + G)/(D + F) Solución muestra: Evaporar 50,0 ml de Solución madre
de la muestra hasta sequedad al vacío. Agregar 15 ml
B = porcentaje de biocanina A de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño de agua
G = porcentaje de genisteína durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente la so-
D = porcentaje de daidzeína lución resultante, con ayuda de 15 ml de alcohol, a un
F = porcentaje de formononetina matraz volumétrico de 50 ml y diluir con Disolvente a
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- volumen. Centrifugar o pasar a través de un filtro con
ción muestra presenta picos para daidzeína, genisteína, un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
formononetina y biocanina A a tiempos de retención Sistema cromato9ráfico
que corresponden a los del cromatograma de la Solu- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
ción estándar A. El cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo- Modo: HPLC
nas y 7-hidroxiisoflavonas está entre O, 1 y 10,0. Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm con
COMPOSICIÓN recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Temperatura de la columna: 45º
Cambio en la redacción: Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
• CONTENIDO DE ISOFLAVONAS Aptitud del sistema
Solución A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga Muestras: Solución estándar A •y Solución estándar
ácido trifluoroacético al 0,05%. B,..usP37
Solución B: Acetonitrilo que contenga ácido trifluoroa- Requisitos de aptitud
cético al 0,05%. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Fase móvil: Ver la Tabla 7. de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP usado.
Tabla 1
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
Tiempo Solución A Solución B formononetina, •Solución estándar B,..usm
lmin) (%) (%) Desviación estándar relativa: No más de 2,0%,
o 100 o •determinada a partir del pico de formononetina en
2 100 o inyecciones repetidas, Solución estándar B,..usm
Análisis
25 87 13
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
75 80 20 Solución muestra
78 73 27 Identificar los picos correspondientes a daidzeína, ge-
80 55 45 nisteína, formononetina y biocanina A en el cromato-
11 o 50 50 grama de la Solución muestra por comparación con el
13 o 40 60 cromatograma de la Solución estándar A y el cromato-
grama de referencia. Medir las áreas de los picos de
15 o 26 74
los analitos.
16 o o 100 Calcular por separado el porcentaje de cada isoflavona
181 100 o en la porción de Extracto en Polvo tomada:
23 o 100 o
•Resultado = (ru/ rs) x Cs x 100,..usm
Disolvente: Alcohol y ª.9ua (1 :1)
Solución madre del estandar A: Transferir una canti- ru = respuesta del pico de cada isoflavona
dad de ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP, equi- pertinente de la Solución muestra
valente a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas, rs = •respuesta del pico de daidzeína, genisteína,
a un matraz volumétrico de 250 ml. Agregar 15 ml de formononetina o biocanina A,..usm de la
alcohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disol- Solución estándar B
ver y diluir con Disolvente a volumen. Cs = concentración de •daidzeína, genísteína,
Solución estándar A: Evaporar 50 ml de Solución ma- formononetina o biocanina A,..usm en la
dre del estándar A hasta sequedad al vacío. Agregar Solución estándar B (mg/ml)
15 ml de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño ,._ •U5P31
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa- Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
mente la solución resultante, con ayuda de 15 ml de declarada de isoflavonas como la suma de daidzeína,
alcohol, a un matraz volumétrico de 50 ml y diluir con genisteína, formononetina y biocanina A, calculado con
Disolvente a volumen. Centrifugar o filtrar a través de respecto a la materia seca
una membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor. CONTAMINANTES
Solución estándar B: O, 1 mg/ml de ER Formononetina
USP, •0,02 mg/ml de ER Genisteína USP, 0,02 mg/ml Eliminar lo siguiente:
de ER Daidzeína USP y O, 1 mg/ml de ER Biocanina A
USP •usm en una mezcla de n-propanol y agua (1 : 1). .... METALES PESADOS, Método 11 (231): No más de 1 o µg/
Someter a ultrasonido y filtrar a través de una mem- g.._USP37
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución madre de la muestra: Transferir una cantidad
de Extracto en Polvo, equivalente a 30 mg del cante-
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Trébol Rojo 6175

Agregar lo siguiente: formononetina y biocanina A a tiempos de retención

que corresponden a los del cromatograma de la Solu-
•• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233) ción estándar A y el cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo-
Criterios de aceptación nas y 7-hidroxiisoflavonas está entre O, 1 y 1O.
Arsénico: No más de 1,0 µg/g CONTENIDO
Cadmio: No más de 0,5 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 1,0 µg!g.usm Cambio en la redacción:
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g, • CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
el recuento total combinado de hongos filamentosos y Solución A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de ente- ácido trifluoroacético al 0,05%.
robacterias es no más de 10 3 ufc/g. , Solución B: Acetonitrilo que contenga ácido trifluoroa-
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- cético al 0,05%.
ple con los requisitos de las pruebas .PªTª de.terminar la Fase móvil: Ver la Tabla 1.
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a co/J.
PRUEBAS ESPECÍFICAS Tabla 1
• PÉRDIDA POR SECADO (731) Tiempo Solución A Solución B
Análisis: Secar 1 g a 105º durante 2 horas. fmln\ (%) (O/o\
Criterios de aceptación: No más de 5,0% o 100 o
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Enva-
sado y Almacenamiento, Disolventes Residuales y Residuos
2 100 o
de Plaguicidas en Extractos Botánicos (565). 25 87 13
75 80 20
REQUISITOS ADICIONALES 78 73 27
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- 80 55 45
permeables y resistentes a la luz en un lugar fresco. 11 o 50 50
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín, y después de la denominació!1 oficié~_I, la parte ~e la 13 o 40 60
planta a partir de la que se preparo el articulo. La eti- 15 o 26 74
queta también indica el contenido de isoflavonas, el di- 16 o o 100
solvente o mezcla de disolventes de extracción usados 18 1 100 o
para la preparación y la relación entre el material vegetal 23 o 100 o
crudo inicial y el Extracto en Polvo. Cu~ple con los re-
quisitos de etiquetado en Extractos Botamcos (565). Disolvente: Alcohol y a~ua (1 :1)
Solución madre del estandar: Transferir una cantidad
Cambio en la redacción: de ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP, equivalente
a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas, a un
matraz volumétrico de 250 ml. Agregar 15 mL de al-
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
cohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disolver
"""tK Bíocallína A USP y diluir con Disolvente a volumen.
ER Daictieína USP•usp31 Solución estándar A: Evaporar 50 mL de Solución ma-
ER Formononetina USP dre del estándar hasta sequedad al vacío. Agregar 15 mL
•ER Cienistefna USP de ácido clorhídrico 2 N y calentar en un baño de agua
ER Hiperósido USP•usP37 durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente la so-
ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP lución resultante, con ayuda de 15 mL de alcohol, a un
matraz volumétrico de 50 mL y diluir con Disolvente a
volumen. Centrifugar o filtrar a través de una mem-
brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución estándar B: O, l mg/mL de ER Formononetina
Trébol Rojo, Tabletas USP, •0,02 m_g/mL de ER Genisteína USP, 0,02 mg/mL
de ER Daidzema USP y O, 1 mg/mL de ER Biocanina A
DEFINICIÓN USP•usm en una mezcla de n-propanol y agua (1: 1).
Las Tabletas de Trébol Rojo contienen Extracto en Polvo de Someter a ultrasonido y filtrar a través de una mem-
Trébol Rojo. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y brana con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
no más de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto Solución madre de la muestra: Pesar no menos de 20
en Polvo, calculado como isoflavonas. Tabletas y reducirlas a polvo. Transferir el equivalente a
40 mg de la cantidad declarada de isoflavonas a un ma-
IDENTIFICACIÓN , traz volumétrico de 250 ml. Agregar 15 mL de agua,
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC agitar hasta dispersar el polvo, agregar 15 mL de al-
Análisis: Proceder según se indica en Contenido de cohol deshidratado y 200 mL de Disolvente y someter a
/soflavonas. ultrasonido durante 30 minutos. Si se presentan partícu-
Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido las de color oscuro en el fondo del matraz, someter
de lsoflavonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii- nuevamente a ultrasonido durante 1O minutos adiciona-
soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas: les o hasta que desaparezcan. Enfriar a te~peratura am-
biente diluir con Disolvente a volumen y filtrar.
Resultado = (8 + G)/(D + F) Solución muestra: Transferir 50,0 ml de la solución re-
B = porcentaje de biocanina A sultante a un matraz de fondo redondo y evaporar
G = porcentaje de genisteína hasta sequedad al vacío. Agregar 15 mL de ácido clorhí-
D = porcentaje de daidzeína drico 2 N y calentar en un baño de agua duran~~ 30
F = porcentaje de formononetina minutos. Transferir cuantitativamente esta soluc1on, con
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu- ayuda de 15 ml de alcohol, a un matraz volumétrico de
ción muestra presenta picos para daidzeína, genisteína, 50 ml y diluir con Disolvente a volumen. Pasar 5 ml de
la solución a través de un filtro con un tamaño de poro
61 76 Trébol Rojo / Suplementos Dietéticos
de 0,45 pm, desechando los primeros 4 mL del filtrado.
Recoger el mL remanente de filtrado para su análisis.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Temperatura de la columna: 45º
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A •y Solución estándar
B•usr11
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Trébol Rojo USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
formononetina, •Solución estándar B•usm
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%,
•determinada a partir del pico de formononetina en
inyecciones repetidas, Solución estándar B•usm
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los picos correspondientes a daidzeína, genis-
teína, formononetina y biocanina A en el cromato-
grama de la Solución muestra por comparación con el
cromatograma de la Solución estándar A y el cromato-
grama de referencia. Medir las áreas de los picos de
los analitos.
Calcular el contenido de cada isoflavona, en mg, en la
porción de Tabletas tomada:
•Resultado = (ru/rs) x Cs x V x D.. usm
ru = respuesta del pico de cada isoflavona
pertinente de la Solución muestra
rs = •respuesta del pico de daidzeína, genisteína,
formononetina o biocanina A•vSP37 de la
Solución estándar B
Cs = concentración de •daidzeína, genisteína,
formononetina o biocanina A..,vsPJ1 en la
Solución estándar B (mg/mL)
V =volumen de Solución madre de la muestra (mL)
'1.'1.USP37
o = factor de dilución para preparar la Solución
muestra, a partir de la Solución madre de la
muestra, 1
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
Extracto en Polvo de Trébol Rojo tomado:
Resultado= e X (Awr!W) X (1 OOILE) X (100/L)
e = suma del contenido de isoflavonas en la
porción de Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de las Tabletas (mg)
W = peso de las Tabletas reducidas a polvo
tomadas (mg)
LE = porcentaje declarado de isoflavonas en el
Extracto en Polvo usado para preparar las
Tabletas
L = cantidad declarada de Extracto en Polvo
(mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% como
isoflavonas
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos de desintegración en Formas Farmacéuticas
Botánicas.
USP 37
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no más de 103 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del cual se prepararon las Tabletas. La etiqueta in-
dica también la cantidad, en mg, de Extracto en Polvo
por Tabletá. Etiquetar las tabletas indicando el contenido,
en mg, de isoflavonas por 100 mg de Extracto en Polvo.
Cambio en la redacción:
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
•ER Biocanina A USP
ER Daidzeína USP •usPJ1
ER Formononetina USP
•ER Genisteína USP..usr31
ER Extracto en Polvo de Trébol Rojo USP
Treonina-ver Treonina en Monografías
Generales
Triptófano-ver Triptófano en Monografías
Generales
Ubidecarenona
H,co~0 , l )"' 1
JC~'º
H
1
H3CO CH3
o
Cs9H90Ü4 863,34
2,5-Cyclohexadiene-1,4-dione, 2-
U2~6~ 10~ 14~ 18~22~26~ 30~340-
3,7, 11, 15, 19,23,27,31,35,39-decamethyl-
2,6, 10, 14, 18,22,26,30,34,38-tetracontadecaenyl]-5,6-di-
methoxy-3-methyl;
2-[(todo-0-3,7, 11, 15, 19,23,27,31,35,39-Decametil-
2,6, 1O,14, 18,22,26,30,34,38-tetracontadecaenil)-5,6-di-
metoxi-3-metil-p-benzoquinona [303-98-0].
DEFINICIÓN
La Ubidecarenona (Coenzima 010) contiene no menos de
98,0% y no más de 1 01,0% de ubidecarenona
(Cs9H90Ü4), calculado con respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (l 97K)
•B.
Análisis: Disolver 50 mg de Ubidecarenona en 1 mL de
éter etílico y agregar 1 O mL de alcohol deshidratado. A
2 mL de esta solución, agregar 3 mL de alcohol deshi-
USP 37
dratado y 2 mL de m;ilonato de dimetilo. Agregar 1 mL
de solución de hidróxido de potasio (1 en 5), gota a
gota.
Criterios de aceptación: Aparece un color azul.
VALORACIÓN
• PROCEDIMIENTO
Fase móvil: Metanol y alcohol deshidratado (65:35)
Solución de aptitud del sistema: 0,5 mg/mL de ER
Ubidecarenona USP y de ER Comfuesto Relacionado A
de Ubidecarenona USP en alcoho deshidratado. Calen-
tar a 50º durante 2 minutos, si fuera necesario, para
obtener una disolución completa.
Solución estándar: 1,0 mg/mL de ER Ubidecarenona
USP en alcohol deshidratado. Calentar a 50º durante 2
minutos, si fuera necesario, para obtener una disolución
completa.
Solución muestra: 1,0 mg/mL de Ubidecarenona en al-
cohol deshidratado. Calentar a 50º durante 2 minutos,
si fuera necesario, para obtener una disolución
completa.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 275 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 35º
Velocidad de flujo: Ajustar para obtener un tiempo de
retención de aproximadamente 11 minutos para
ubidecarenona.
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para com-
puesto relacionado A de ubidecarenona y ubidecare-
nona son aproximadamente 0,75 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4 entre compuesto relacio-
nado A de ubidecarenona y ubidecarenona
Desviación estándar relativa: No más de 0,8% para
ubidecarenona
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de ubidecarenona (Cs9H90Ü4) en
la porción de Ubidecarenona tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Ubidecarenona USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración de Ubidecarenona en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 98,0%-1 01,0% con respecto
a la sustancia anhidra
IMPUREZAS
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de o, 1%
• METALES PESADOS, fv!étodo 11 (231): No más de 20 ppm
• PUREZA CROMATOGRAFICA
Procedimiento 1: Coenzimas Q1,Qs, Qg, Qn e Impure-
zas Relacionadas
Fase móvil, Solución de aptitud del sistema, Solución
muestra, Sistema cromatográfico y Aptitud del sis-
tema: Proceder según se indica en la Valoración.
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de impurezas en la porción de
Ubidecarenona tomada:
Resultado= (rnlrr2) x 100
rn = suma de las respuestas de todos los picos,
diferente del de ubidecarenona
Suplementos Dietéticos / Ubidecarenona 61 77
ru = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No más de 1,0%
Procedimiento 2: Isómero (2Z) de Ubidecarenona e
Impurezas Relacionadas
Fase móvil: n-Hexano y acetato de etilo (97:3)
Solución de aptitud del sistema: 1 mg/mL de ER Ubi-
decarenona para Aptitud del Sistema USP en n-hexano
Solución muestra: 1 mg/mL de Ubidecarenona en n-
hexano
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 275 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para el isó-
mero (2Z) de ubidecarenona y ubidecarenona son
aproximadamente 0,85 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre el isómero (2Z)
de ubidecarenona y ubidecarenona
Análisis
Muestra: Solución muestra
Calcular el porcentaje de impurezas en la porción de
Ubidecarenona tomada:
Resultado = (rn/rn) x 100
rn = suma de las respuestas de todos los picos,
diferente del de ubidecarenona
rr2 = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptación: No más de 1,0%
Impurezas totales: No más de 1,5%, obtenidas de
los Procedimientos 7 y 2 de Pureza Cromatrográfica
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• DETERMINACIÓN DE AGUA, Método I (921 ): No más de
0,2%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerJados y resistentes a la luz.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ubidecarenona USP
ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
[coenzima Q9]
ER Ubidecarenona para Aptitud del Sistema USP
Ubidecarenona, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Ubidecarenona contienen no menos de
90,0% y no más de 115,0% de la cantidad declarada de
ubidecarenona (Cs9H90Ü4) .
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra 7 o de la Solución muestra 2 corresponde al
de la Solución estándar, según se obtienen en el Procedi-
miento, en Contenido.
CONTENIDO
• PROCEDIMIENTO
[NOTA-Realizar esta prueba rápidamente con un mínimo
de exposición a la luz actínica.]
Disolvente: n-Hexano y alcohol deshidratado (5:2)
Fase móvil: Acetonitrilo, tetrahidrofurano y agua
(55:40:5)
6178 Ubidecarenona /Suplementos Dietéticos
Solución madre del estándar: 1,0 mg/mL de ER Ubide-
carenona USP en Disolvente
Solución estándar: 40 pg/mL en alcohol deshidratado,
a partir de Solución madre del estándar
Solución madre de aptitud del sistema: 1,0 mg/mL
de ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
en Disolvente. Diluir una porción de esta solución con
alcohol deshidratado hasta obtener una concentración
de 40 pg/mL.
Solución de aptitud del sistema: Solución estándar y
Solución madre de aptitud del sistema (1 :1)
Solución muestra 1 (para Cápsulas de gelatina blanda):
Abrir un número de Cápsulas equivalente a 200 mg de
ubidecarenona, transferir cuantitativamente las cubiertas
y el contenido a un recipiente, agregar 1 00 mL de Di-
solvente y agitar mecánicamente durante 30 minutos.
Usando pequeñas porciones de Disolvente, transferir
cuantitativamente esta mezcla a un matraz volumétrico
de 200 mL y diluir con Disolvente a volumen. Centrifu-
gar una porción de esta solución, transferir 1,0 mL del
sobrenadante a un matraz volumétrico de 25 mL, agre-
gar 2,5 mL de una solución de cloruro férrico anhidro al
O, 1 o/o en alcohol y diluir con alcohol a volumen.
Solución muestra 2 (para Cápsulas de gelatina dura):
Vaciar y mezclar minuciosamente el contenido de no
menos de 20 Cápsulas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a 1 00 mg de ubidecarenona, a un matraz
volumétrico de 100 mL, agregar 60 mL de Disolvente y
agitar mecánicamente durante 30 minutos. Diluir con
Disolvente a volumen. Centrifugar una porción de esta
solución, transferir 1,0 mL del sobrenadante a un ma-
traz volumétrico de 25 mL, agregar 2,5 mL de una solu-
ción de cloruro férrico anhidro al O, 1 o/o en alcohol y
diluir con alcohol a volumen.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2,5 mL/min
Volumen de inyección: 1 5 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,5 entre ubidecarenona y
compuesto relacionado A de ubidecarenona, Solución
de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
ubidecarenona, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución muestra 7 o Solución muestra 2 y
Solución estándar
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H90Ü4) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de ubidecarenona de la Solución
muestra 7 o la Solución muestra 2
rs = área del pico de ubidecarenona de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ubidecarenona USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de ubidecarenona en
la Solución muestra 7 o la Solución muestra 2
(mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040>: Cumplen con los
requisitos de la prueba de Desintegración, excepto
USP 37
cuando el producto declara contener la forma hidrosolu-
ble de ubidecarenona. Las Cápsulas que declaran conte-
ner la forma hidrosoluble de ubidecarenona cumplen con
los requisitos de la prueba de Disolución, según se indica
a continuación.
Medio: Agua; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solución estándar: Disolver 25 mg de ER Ubidecare-
nona USP en 1 mL de éter etílico y diluir con alcohol
hasta obtener una concentración de 2,5 pg/ml.
[NOTA-Usar sólo una solución preparada
recientemente.]
Solución muestra: Diluir con alcohol un volumen de la
solución en análisis, previamente pasado a través de un
filtro adecuado con un tamaño de poro de 0,45 pm,
hasta obtener una concentración de 2,5 pg/mL de
ubidecarenona.
Fase móvil y Sistema cromatográfico: Proceder según
se indica en el Procedimiento, en Contenido, excepto el
Volumen de inyección.
Volumen de inyección: 1 00 pL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H90Ü4) disuelta:
Resultado= (ru/rs) x (Cs x Vx D/L) x 100
ru = área del pico de ubidecarenona de la Solución
muestra
rs = área del pico de ubidecarenona de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ubidecarenona USP en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de Medio, 500 mL
D = factor de dilución para la Solución muestra
L = cantidad declarada (mg/Cápsula)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de ubidecarenona (Cs9H90Ü4)
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• VARIACIÓN DE PESO (2091>: Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: Cuando el producto contiene la forma hi-
drqsoluble de ubidecarenona, la etiqueta así lo indica.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11>
ER Ubidecarenona USP
ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
Coenzima Q9.
Ubidecarenona, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Ubidecarenona contienen no menos de
90,0% y no más de 115,0% de la cantidad declarada de
ubidecarenona (Cs9H90Ü4).
IDENTIFICACIÓN
• A. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al de la Solución estándar, se-
gún se obtienen en el Procedimiento, en Contenido.
CONTENIDO
• PROCEDIMIENTO
[NOTA-Realizar esta prueba rápidamente con un mínimo
de exposición a la luz actínica.]
USP 37
Disolvente: n-Hexano y alcohol deshidratado (5:2)
Fase móvil: Acetonitrilo, tetrahidrofurano y agua
(11:8:1)
Solución madre del estándar: 1,0 mg/mL de ER Ubide-
carenona USP en Disolvente
Solución estándar: 40 µg/mL, a partir de Solución ma-
dre del estándar en alcohol deshidratado
Solución madre de aptitud del sistema: 1,0 mg/mL
de ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
en Disolvente. Diluir una porción de esta solución con
alcohol deshidratado hasta obtener una concentración
de 40 µg/ml.
Solución de aptitud del sistema: Solución estándar y
Solución madre de aptitud del sistema (1: 1)
Solución madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad
de polvo, equivalente aproximadamente a 100 mg de
ubidecarenona, a un matraz volumétrico de 100 mL,
agregar 60 mL de Disolvente y agitar mecánicamente
durante 30 minutos. Diluir con Disolvente a volumen y
mezclar. Centrifugar una porción de esta solución,
transferir 1,0 mL del sobrenadante a un matraz volumé-
trico de 25 mL y agregar 2,5 mL de una solución de
cloruro férrico anhidro al 0, 1% en alcohol. Diluir con
alcohol a volumen y mezclar.
Solución muestra: Centrifugar una porción de Solución
madre de la muestra, transferir 1,0 mL del sobrenadante
a un matraz volumétrico de 25 mL, agregar 2,5 mL de
una solución de cloruro férrico anhidro al O, 1% en al-
cohol y diluir con alcohol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2,5 mL/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,5 entre ubidecarenona y
compuesto relacionado A de ubidecarenona, Solución
de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
ubidecarenona, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H90Ü4) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de ubidecarenona de la Solución
muestra
rs = área del pico de ubidecarenona de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ubidecarenona USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de ubidecarenona en
la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisitos de la prueba de Desintegración, excepto
cuando el producto declara contener la forma hidrosolu-
ble de ubidecarenona. Las Tabletas que declaran conte-
ner la forma hidrosoluble de ubidecarenona cumplen con
los requisitos de Disolución, según se indica a
continuación.
Suplementos Dietéticos/ Uña de Gato 6179
Medio: Agua; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solución estándar: Disolver 25 mg de ER Ubidecare-
nona USP en 1 mL de éter etílico y diluir con alcohol
hasta obtener una concentración de 2,5 µg/mL.
[NOTA-Usar sólo una solución preparada
recientemente.]
Solución muestra: Diluir con alcohol un volumen de la
solución en análisis, previamente pasado a través de un
filtro adecuado con un tamaño de poro de 0,45 µm,
hasta obtener una concentración de 2,5 µg/mL de
ubidecarenona.
Fase móvil y Sistema cromatográfico: Proceder según
se indica en el Procedimiento, en Contenido, excepto el
Volumen de inyección.
Volumen de inyección: 100 µL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H90Ü4) disuelta:
Resultado = (ru/rs) x (Cs x V x D/L) x 100
ru = área del pico de ubidecarenona de la Solución
muestra
rs = área del pico de ubidecarenona de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ubidecarenona USP en la
Solución estándar (mg/mL)
V = volumen de Medio, 500 mL
D = factor de dilución para la Solución muestra
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de ubidecarenona (Cs9H90Ü4)
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: Cuando el producto contiene la forma hi-
drqsoluble de ubidecarenona, la etiqueta así lo indica.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ubidecarenona USP
ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
Coenzima Qg.
Uña de Gato
DEFINICIÓN
La Uña de Gato consiste en la corteza interna de los tallos
de Uncaria tomentosa (Willd.) DC. (Fam. Rubiaceae). Con-
tiene no menos de 0,3% de alcaloides oxindólicos penta-
cíclicos como isopteropodina, calculado con respecto a la
materia seca, como la suma de especiofilina, uncarina F,
mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 100 mg de ER Extracto en Polvo de
Uña de Gato USP en 2 mL de metanol. Someter a ultra-
sonido durante 5 minutos, agitando ocasionalmente.
Calentar en un baño de agua a 60º durante 15 minu-
tos, enfriar y centrifugar.
Solución muestra: 5 g de Uña de Gato en polvo en
1O mL de metanol. Someter a ultrasonido durante 5 mi-
nutos, agitando ocasionalmente. Calentar la mezcla en
un baño de agua a 60º durante 15 minutos, enfriar y
filtrar.
6180 Uña de Gato /Suplementos Dietéticos USP 37

Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía suficiente para obtener 1000 ml. Ajustar a un pH de
con un tamaño de partícula promedio de 1 0-15 µm 7,0 ± O, 1, agregando más de cualquiera de las
(placas para TLC) soluciones.
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas de 1 cm de Solución B: Acetonitrilo
longitud Solución C: Metanol y ácido acético glacial (99:1)
Fase móvil: Acetato de etilo y hexano (95:5) Fase móvil: Ver la Tabla 1.
Solución reveladora A: Disolver calentando 0,85 g de
nitrato básico de bismuto en 1 O ml de ácido acético Tabla 1
glacial y 40 ml de agua. Filtrar si fuera necesario (Solu-
ción A). Disolver 8 g de yoduro de potasio en 30 ml de Tiempo Solución A Solución B Solución C
agua (Solución B). Mezclar Solución A y Solución B (1 :1) Cmin) (%) (%) (%)
para obtener una solución madre. Diluir 1 ml de la so- o 65 35 o
lución madre con 2 ml de ácido acético ~lacial y 1O ml 17 65 35 o
de agua. [NOTA-Usar Solución A y Solucion B mezcladas 25 50 50 o
recientemente.]
Solución reveladora B: Usar una solución de nitrito de
30 50 50 o
sodio al 10% en agua. 31 o o 100
Análisis 36 o o 100
Muestras: Solución estándar y Solución muestra 39 65 35 o
Desarrollar el cromatograma hasta una longitud de no 49 65 35 o
menos de 1 2 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Sistema cromato9ráfico
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
de longitud de onda corta. El cromatograma de la Solu- Modo: HPLC
ción muestra presenta múltiples zonas que corresponden Detector: UV 245 nm
en valores Rr a las observadas en el cromatograma de la Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 µm con
Solución estándar. Se pueden observar otras zonas de recubrimiento exhaustivo (end-capped)
intensidades variables en la Solución muestra. Rociar la Velocidad de flujo: 0,75 ml/min
placa con Solución reveladora A seguida de Solución reve- Volumen de inyección: 1 O µL
ladora B, y observar la placa bajo fuz diurna. El croma- Aptitud del sistema
tograma de la Solución muestra presenta múltiples zonas Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
marrón anaranjadas que corresponden en color y valo- Requisitos de aptitud
res Rr a las observadas en el cromatograma de la Solu- Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
ción estándar. Se pueden observar otras zonas colorea- obtenido usando la Solución estándar A es similar al
das de intensidades variables en la Solución muestra. Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
• B. El cromatograma de la Solución muestra presenta picos tracto en Polvo de Uña de Gato USP.
de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pte- Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ropodina e isopteropodina a los tiempos de retención isopteropodina, Solución estándar B
que corresponden a los del cromatograma de la Solución Desviacion estándar relativa: No más de 2,0% para
estándar A, según se obtienen en la prueba de Contenido el pico de isopteropodina en inyecciones repetidas,
de Alcaloides Oxindólicos Pentacíclicos y Límite de Oxindoles Solución estándar B
Tetracíclicos. Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
COMPOSICIÓN Solución muestra
• CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDÓLICOS PENTACÍCLICOS Y LÍ- Medir las áreas de los picos del analito. Identificar los
MITE DE OXINDOLES TETRACÍCLICOS tiempos de retención de los picos correspondientes a
Solución estándar A: Disolver en metano! una canti- especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rin-
dad, pesada con exactitud, de ER Extracto en Polvo de cofilina, isorincofilina, pteropodina e isopteropodina
Uña de Gato USP, agitando durante 1 minuto. Diluir por comparación del cromatograma de la Solución es-
con metanol hasta obtener una solución con una con- tándar A con el Cromatograma de Referencia provisto
centración conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml con el lote del ER Extracto en Polvo de Uña de Gato
de la cantidad declarada de alcaloides oxindólicos tota- USP usado.
les. Pasar a través de un filtro con un tamaño de poro Calcular por separado los porcentajes de especiofilina,
de 0,45 µm o menor. uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rincofilina, isorin-
Solución estándar B: O, l mg/ml de ER lsopteropodina cofilina, pteropodina e isopteropodina, como isopte-
USP en metano!. Pasar a través de un filtro de nailon ropodina, en fa porción de Uña de Gato tomada:
con un tamaño de poro 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Pesar con exactitud aproximada- Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
mente 750 m9 de Uña de Gato molida y colocar en un
tubo de centrifuga de 1O ml. Someter a ultrasonido ru = respuesta del pico de cada alcaloide
con 2,5 ml de metano! durante 1O minutos. Centrifu- pertinente de la Solución muestra
gar y transferir esta solución a un matraz volumétrico rs = respuesta del pico de isopteropodina de la
de 1O ml. Repetir la extracción tres veces más, combi- Solución estándar B
nando los extractos en el matraz volumétrico de 1O ml Cs = concentración de ER lsopteropodina USP en la
y diluir con metanol a volumen. Transferir aproximada- Solución estándar B (mg/ml)
mente 3 ml de la solución a un tubo de ensayo que Cu = concentración de Uña de Gato en la Solución
contenga 300 mg de polvo de poliamida y agitar du- muestra (mg/ml)
rante 1 minuto. Pasar a través de un filtro de nailon con Calcular el contenido de alcaloides oxindólicos
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando pentacíclicos sumando los porcentajes de
la primera parte del filtrado. especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
Solución A: Preparar una solución amortiguadora de pteropodina e isopteropodina.
fosfato 1O mM de pH 7,0 filtrada y desgasificada mez- Calcular el contenido de alcaloides oxindólicos
clando 6 ml de hidróxido de sodio 1 N, 1O ml de fos- tetracíclicos sumando los porcentajes individuales de
fato monobásico de potasio 1 M y agua en cantidad rincofilina e isorincofilina.
USP 37 Suplementos Dietéticos / Una de Gato 61 81

Criterios de aceptación de diámetro) o compuestos (de 2-3 componentes de

Alcaloides oxindólicos pentacíclicos: No menos de hasta 15 um de diámetro).
0,3% • ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánico Extraña
Alcaloides oxindólicos tetracíclicos: No más de (561): No más de 2,0%
0,05% • PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 1 05' durante 2 ho-
ras:, pierde no más de 7,Q% de su peso.
CONTAMINANTES • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm No,más de 8,0% , _.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná- • ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Ando
lisis de Residuos de Plaguicidas (56.1): Cumple con los (561 ): No más de 2,0%
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- REQUISITOS ADICIONALES
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g; • ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
el recuento total combinado de hongos filamentosos y permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac- tura ambiente.
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de • ETIQUETADO: La etiqueta indica ei nombre científico en
101 ufc/g. , latín y, después de la denominación oficial, las partes de
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- la r;>lanta contenidas en el artículo .
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ausencia de Salmone/la spp. y Escherichia coli. ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Uña de Gato USP
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
[NOTA-El artículo farmacopeico está constituido sólo por
la corteza interna del tallo de U. tomentosa (Willd). DC.
Se proporcionan descripciones de otras partes de la Uña de Gato, Cápsulas
planta para ayudar a la recolección de la especie co-
rrecta. Debe determinarse el cumplimiento con los re-
DEFINICIÓN
quisitos utilizando toda la monografía y no únicamente
la descripción botánica.] Las Cápsulas de Uña de Gato contienen Extracto en Polvo
Macroscopicas: La Uña de Gato es una planta trepa- de Uña de Gato. Las Cápsulas contienen no menos de
dora leñosa con un tallo principal de hasta 20 cm de 90,0% y no más de 11 0,0% de la cantidad declarada de
diámetro y hasta 30 m de longitud. Las ramas son ob- Extracto en Polvo, calculado como alcaloides oxindólicos
tusamente cuadrangulares y generalmente pubescentes. pentacíclicos.
Las estípulas de las yemas son densamente tomentosas IDENTIFICACIÓN
en la parte superior (a diferencia de la U. guianensis, en • El cromatograma de la Solución muestra presenta picos de
la cual las estipulas son glabras) y sus pelos, a menudo especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, ptero-
con puntas curvadas, están enredados con los pelos podina e isopteropodina a tiempos de retención que co-
más largos de la hoja, conectando el par de estípulas rresponden a los de la Solución estándar A, según se ob-
por los márgenes, pero se separan cuando son más tienen en la prueba de Contenido de Alcaloides Oxindó-
adultas (a diferencia de la U. guianensis, en la cual las licos Pentacíclicos y Límite de Alcaloides Oxindólicos Tetrací-
estípulas se separan temprano en el desarrollo de la c/icos. El contenido de alcaloides oxindólicos tetracíclicos,
yema). Las espinas son rectas o en forma de hoz, no calculado como la suma de rincofilina e isorrincofilina, es
giradas en espiral (a diferencia de la U. guianensis), muy no más de 25% de la cantidad declarada de alcaloides
punzantes y leñosas, de 8 a 20 mm de longitud y de 3 oxindólicos pentacíclicos.
a 6 mm de ancho. Recién cortada, el color de la corteza
interna puede ser gris blancuzco, marrón amarillento o CONTENIDO , , ,
rojo oscuro, con fisuras longitudinales y ritidoma persis- • CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDOLICOS PENTACICLICOS Y LI-
tente. La parte interna tiene una textura fibrosa y lami- MITE DE ALCALOIDES 0XINDÓLICOS TETRACÍCLICOS
nar ligeramente pulverulenta con un polvo ferruginoso Solución A: Preparar una solución amortiguadora de
característico y un sabor extremadamente astringente. fosfato 1 O mM de pH 7,0 mezclando hidróxido de so-
Las ramas terminales tienen una sección cuadrangular y dio 1 N, fosfato monobásico de potasio 1 M y agua
una médula interna verde amarillenta. (3:5:492) y ajustar a un pH de 7,0 ± O, 1 agregando
Microscópicas: La peridermis con súber (felema) está más de cualquiera de las soluciones.
constituida por 6-8 hileras de células que tienen pare- Solución B: Acetonitrilo
des uniformemente engrosadas, un felógeno compri- Solución C: Metano! y ácido acético glacial (99:1)
mido y una felodermis con 1-7 hileras de esclereidas. Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
[NOTA-La peridermis y el felógeno deberían estar au-
sentes del artículo farmacopeico.] La corteza secundaria Tiempo Solución A Solución B Solución C
presenta anillos concéntricos de fibras separados por lmin) (%)
_("{o) (%)
anillos de parénquima; los anillos de fibras están fre-
cuentemente interrumpidos por hileras radiales de célu- o 65 35 o
las parenquimáticas (predominantemente de 1 célula de 17 65 35 o
ancho) o radios medulares estrechos (pocas células de 25 -------- 50 50 o
ancho) y forman haces de fibras rectangulares en una 30 50 50 o
red regular. En la vista longitudinal, las fibras aparecen 31 o o 100
con numerosas puntuaciones visibles; son abundantes 36 o o 100
en el parénquima los microcristales de oxalato de calcio
(de aspecto arenoso), pero generalmente no se encuen- 39 65 35 o
tran como cristales poliédricos grandes ni en forma de 49 65 35 o
estiloides con extremos bifurcados. Estas últimas formas
están presentes en general en el parénquima de la U. Solución estándar A: Disolver una cantidad, pesada
guianensis. Una sustancia marrón está dispersa en las con exactitud, de ER Extracto en Polvo de Uña de Gato
células parenquimáticas; el almidón es abundante y los USP en metano!, agitar durante 1 minuto, y diluir con
gránulos son simples (de forma circular de hasta 1 O µm metano! para obtener una solución con una concentra-
6182 Uña de Gato/ Suplementos Dietéticos
ción conocida de aproximadamente 0,5 mg/mL de la
cantidad declarada de alcaloides oxindólicos totales. Pa-
sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER lsopteropodina
USP en metanol. Pasar a través de un filtro de nailon
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Pesar con exactitud el contenido de
no menos de 20 Cápsulas y reducir a polvo. Transferir
una cantidad, pesada con exactitud, del polvo equiva-
lente a 20 mg de la cantidad declarada de alcaloides
oxindólicos pentacíclicos, a un tubo de centrífuga de
50 ml. Someter a ultrasonido con 1O mL de metano!
durante 1O minutos. Centrifugar y transferir esta solu-
ción a un matraz volumétrico de 50 ml. Repetir la ex-
tracción anterior tres veces más combinando los extrac-
tos en el matraz volumétrico de 50 mL y diluir con
metanol a volumen. Transferir 3 mL de la solución a un
tubo de ensayo que contenga 300 mg de poliamida en
polvo y agitar durante 1 minuto. Pasar a través de un
filtro de nailon con un tamaño de poro de 0,45 µm o
menor y desechar la primera parte del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 245 nm
Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 µm con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Velocidad de flujo: 0,75 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido usando la Solución estándar A es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Uña de Gato USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isopteropodina, Solución estándar B
Desviacion estándar relativa: No más de 2,0%, a
partir del pico de isopteropodina en inyecciones repe-
tidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Medir las áreas de los picos de los analitos. Identificar
los tiempos de retención de los picos correspondien-
tes a especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafi-
lina, pteropodina, isopteropodina, rincofilina e isorrin-
cofilina por comparación del cromatograma de la
Solución estándar A con el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Uña de Gato USP usado.
Calcular el contenido, en mg, de especiofilina, unca-
rina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopte-
ropodina, como isopteropodina, en la porción de
Capsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x V
ru = respuesta del pico de cada alcaloide
pertinente de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de isopteropodina de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER lsopteropodina USP en la
Solución estándar B (mg/mL)
V = volumen de dilución final de la Solución
muestra (mL)
Calcular el contenido, en mg, de alcaloides oxindólicos
pentacíclicos totales (Ce) en la porción de Cápsulas
tomada sumando los contenidos individuales de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
pteropodina e isopteropodina.
USP 37
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de Uña de
Gato con respecto a la cantidad declarada:
Resultado = Ce X (Awc/W) X (100/LE) X (100/L)
Ce = contenido de alcaloides oxindólicos
pentacíclicos totales en la porción de
Cápsulas tomada (mg)
Awe = peso promedio del contenido de Cápsulas
(mg/Cápsula)
W = peso de la porción de Cápsulas tomada (mg)
LE = contenido de alcaloides oxindólicos
pentacíclicos totales, mg, en 100 mg del
Extracto usado para preparar las Cápsulas
L = cantidad de Extracto por Cápsula según la
cantidad declarada (mg/Capsula)
Calcular el porcentaje de alcaloides oxindólicos
tetracíclicos con respecto al contenido de alcaloides
oxindólicos pentacíclicos en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado = (rT/rr) x 100
rT = suma de las respuestas de los picos de
rincofilina e isorrincofilina en el
cromatograma de la Solución muestra
rr = suma de las respuestas de los picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina,
isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina
en el cromatograma de la Solución muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto en Polvo calculado como alcaloi-
des oxindólicos pentacíclicos; se encuentra no más de
25% de alcaloides oxindólicos tetracíclicos con respecto
a la cantidad de alcaloides oxindólicos pentacíclicos.
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040>:, Cumplen con los requisitos de,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del cual se prepararon las Cápsulas. Si se preparan
con Extracto, la etiqueta también indica la cantidad, en
mg, de Extracto por Cápsula y el contenido, en mg, de
alcaloides oxindólicos pentac1clicos por 100 mg de Ex-
tracto en Polvo.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Uña de Gato USP
Uña de Gato en Polvo
DEFINICIÓN
La Uña de Gato en Polvo es Uña de Gato reducida a polvo
o polvo muy fino. Contiene no menos de 0,3% de alcaloi-
des oxindóhcos pentacíclicos como isopteropodina, calcu-
USP 37 Suplementos Dietéticos / Uña de Gato 6183

lado con respecto a la materia seca, como la suma de Solución muestra: Pesar con exactitud aproximada-
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, ptero- mente 750 mg de Uña de Gato en Polvo y colocar en
podina e isopteropodina. un tubo de centrífuga de 1 O ml. Someter a ultrasonido
con 2,5 ml de metano! durante 1 O minutos. Centrifu-
IDENTIFICACIÓN , , gar y transferir esta solución a un matraz volumétrico.
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA de 1 O ml. Repetir la extracción tres veces más, combi-
DELGADA nando los extractos en el matraz volumétrico de 1 O mL
Solución estándar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de y diluir con metano! a volumen. Transferir aproximada-
Uña de Gato USP en 2 ml de metano!. Someter a ultra- mente 3 mL de la solución a un tubo de ensayo que
sonido durante 5 minutos, agitando ocasionalmente, contenga 300 mg de polvo de poliamida y agitar du-
calentar en un baño de agua a 60º durante 15 minutos, rante 1 minuto. Pasar a través de un filtro de nailon con
enfriar y centrifugar. un tamaño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
Solución muestra: 5 g de Uña de Gato en Polvo en la primera parte del filtrado.
1 O ml de metano!. Someter a ultrasonido durante 5 mi- Solución A: Preparar una solución amortiguadora de
nutos, agitando ocasionalmente. Calentar la mezcla en fosfato 1 O mM de pH 7,0, filtrada y desgasificada, mez-
un baño de agua a 60º durante 15 minutos, enfriar y clando 6 mL de hidróxido de sodio 1 N, 1 O mL de fos-
filtrar. fato monobásico de potasio 1 M y agua en cantidad
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía suficiente para obtener 1000 mL. Ajustar a un pH de
con un tamaño de partícula promedio de 1 0-15 µm 7,0 ± O, 1 agregando más de cualquiera de las
(placas para TLC) soluciones.
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas de 1 cm de Solución B: Acetonitrilo
longitud Solución C: Metanol y ácido acético glacial (99:1)
Fase móvil: Acetato de etilo y hexano (95:5) Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Solución reveladora A: Disolver calentando 0,85 g de
nitrato básico de bismuto en 1 O ml de ácido acético
glacial y 40 ml de agua. Filtrar si fuera necesario (Solu- Tabla 1
ción A). Disolver 8 g de yoduro de potasio en 30 ml de Tiempo Solución A Solución B Solución C
agua (Solución B). Mezclar la Solución A y la Solución B (min) (%) (%) (O/o)
(1 :1) para obtener una solución madre. Diluir 1 ml de o 65 35 o
la solución madre con 2 ml de ácido acético glacial y 17 65 35 o
1 O ml de agua. [NOTA-Usar Solución A y Solución B
mezcladas recientemente.] 25 50 50 o
Solución reveladora B: Usar una solución de nitrito de 30 50 50 o
sodio al 10% en agua. 31 o o 100
Análisis 36 o o 100
Muestras: Solución estándar y Solución muestra 39 65 35 o
Desarrollar el cromatograma hasta una longitud de no 49 65 35 o
menos de 12 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Sistema cromato~váfico
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV (Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.)
de longitud de onda corta. El cromatograma de la Solu- Modo: HPLC
ción muestra presenta múltiples zonas que corresponden Detector: UV 245 nm
en valores RF a las observadas en el cromatograma de la Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 µm con
Solución estándar. Se pueden observar otras zonas de recubrimiento exhaustivo (end-capped)
intensidades variables en la Solución muestra. Rociar la Velocidad de flujo: 0,75 ml/min
placa con Solución reveladora A seguida de Solución reve- Volumen de inyección: 1 O µL
ladora By observar la placa bajo luz diurna. El cromato- Aptitud del sistema
grama de la Solución muestra presenta múltiples zonas Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
marrón anaranjadas que corresponden en color y valo- Requisitos de aptitud
res RF a las observadas en el cromatograma de la Solu- Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
ción estándar. Se pueden observar otras zonas colorea- obtenido usando la Solución estándar A es similar al
das de intensidades variables en la Solución muestra. Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
• B. El cromatograma de la Solución muestra presenta picos tracto en Polvo de Uña de Gato USP.
de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pte- Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ropodina e isopteropodina a tiempos de retención que isopteropodina, Solución estándar B
corresponden a los del cromatograma de la Solución es- Desviacion estándar relativa: No más de 2,0% para
tándar A, según se obtienen en la prueba de Contenido el pico de isopteropodina en inyecciones repetidas,
de Alcaloides Oxindólicos Pentacíc/icos y Límite de Oxindoles Solución estándar B
Tetracíc/icos. Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
COMPOSICIÓN , , , Solución muestra
• CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDOLICOS PENTACICLICOS Y LI- Medir las áreas de los picos del analito. Identificar los
MITE DE OXINDOLES TETRACÍCLICOS tiempos de retención de los picos correspondientes a
Solución estándar A: Disolver en metano! una canti- especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rin-
dad, pesada con exactitud, de ER Extracto en Polvo de cofilina, isorincofilina, pteropodina e isopteropodina
Uña de Gato USP, agitando durante 1 minuto. Diluir por comparación del cromatograma de la S_olución. es-
con metanol hasta obtener una solución con una con- tándar A con el Cromatograma de Referencia provisto
centración conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml con el lote del ER Extracto en Polvo de Uña de Gato
de la cantidad declarada de alcaloides oxindólicos tota- USP usado.
les. Pasar a través de un filtro con un tamaño de poro Calcular por separado los porcentajes de especiofüina,
de 0,45 µm o menor. uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rincofilina, 1sonn-
Solución estándar B: O, 1 mg/ml de ER lsopteropodina cofilina, pteropodina e isopteropodina, como isoptero-
USP en metanol. Pasar a través de un filtro de nailon
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
6184 Uña de Gato / Suplementos Dietéticos
podina, en la porción de Uña de Gato en Polvo
tomada:
Resultado= (ru/r\) x (C/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cada alcaloide
pertinente de la Solución muestra
r1 = respuesta del pico de isopteropodina de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER lsopteropodina USP en la
Solución estándar B (mg/mL)
Cu = concentración de Uña de Gato en Polvo en la
Solución muestra (mg/mL)
Calcular el contenido de alcaloides oxindólicos
pentacíclicos sumando los porcentajes de especiofilina,
uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e
isopteropodina.
Calcular el contenido de alcaloides oxindólicos
tetracíclicos sumando porcentajes individuales de
rincofilina e isorincofilina.
Criterios de aceptación
Alcaloides oxindólicos pentacíclicos: No menos de
0,3%
Alcaloides oxindólicos tetracíclicos: No más de
0,05%
CONTAMINANTES
• METALES PESADOS, Método 111 (231): No más de 20 ppm
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. , nitrato básico de bismuto en 1 O mL de ácido acético
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS: Presencia de fragmentos de
súber y células suberizadas, con paredes celulares unifor-
memente engrosadas. Presencia de esclereidas en la felo-
dermis. Los fragmentos de fibras cruzadas por radios vas-
culares están oscurecidos debido a la presencia de
microcristales de oxalato de calcio de aspecto arenoso.
Granos de almidón simples o compuestos dobles o triples
de hasta 15 µm de diámetro. Ausencia de estiloides, ge-
n,eralmente presentes en U. guianensis
• PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 105º durante 2 ho-
ras:, pierde no más de 7,Q% de su peso.
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 8,0%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Ácido
(561): No más de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Uña de Gato USP
USP 37
Extracto en Polvo de Uña de Gato
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Uña de Gato se prepara a partir de
Uña de Gato mediante extracción con mezclas hidroalco-
hólicas u otros disolventes adecuados. La relación entre el
material vegetal y el extracto está entre 4: 1 y 6: 1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no más de 11 0,0% de la
cantidad declarada de alcaloides oxindólicos pentacíclicos
como isopteropodina, calculado con respecto a la materia
seca, como la suma de especiofilina, uncarina F, mitrafi-
lina, isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina. Puede
contener sustancias agregadas adecuadas.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA
Solución estándar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de
Uña de Gato USP en 2 mL de metanol. Someter a ultra-
sonido durante 5 minutos, agitando ocasionalmente.
Calentar en un baño de agua a 60º durante 15 minu-
tos, enfriar y centrifugar.
Solución muestra: Agitar una cantidad de Extracto en
Polvo, equivalente a aproximadamente 25 mg de la
cantidad declarada de alcaloides oxindólicos pentacícli-
cos, en 20 mL de metanol. Dejar en reposo durante 15
minutos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatografía
con un tamaño de partícula promedio de 10-15 µm
(placas para TLC)
Volumen de aplicación: 20 µL, en bandas de 1 cm de
longitud
Fase móvil: Acetato de etilo y hexano (95:5)
Solución reveladora A: Disolver calentando 0,85 g de
glacial y 40 mL de agua. Filtrar si fuera necesario (Solu-
ción A). Disolver 8 g de yoduro de potasio en 30 mL de
agua (Solución B). Mezclar Solución A y Solución B (1 :1)
para obtener una solución madre. Diluir 1 mL de la so-
lución madre con 2 mL de ácido acético 9lacial y 1 O mL
de agua. [NOTA-Usar Solución A y Solucion B mezcladas
recientemente.]
Solución reveladora B: Usar una solución de nitrito de
sodio al 1 0% en agua.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Desarrollar el cromatograma hasta una longitud de no
menos de 12 cm y secar la placa en una corriente de
aire .
Criterios de aceptación: Observar la placa bajo luz UV
de longitud de onda corta. El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta múltiples zonas que corresponden
en valores RF a las observados en el cromatograma de la
Solución estándar. Se pueden observar otras zonas de
intensidades variables en la Solución muestra. Rociar la
placa con Solución reveladora A seguida de Solución reve-
ladora B, y observar la placa bajo luz diurna. El croma-
tograma de la Solución muestra presenta múltiples zonas
marrón anaranjadas que corresponden en color y valo-
res RF a las observadas en el cromatograma de la Solu-
ción estándar. Se pueden observar otras zonas colorea-
das de intensidades variables en la Solución muestra.
• B. El cromatograma de la Solución muestra presenta picos
de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pte-
ropodina e isopteropodina a los tiempos de retención
que corresponden a los del cromatograma de la Solución
estándar A, según se obtienen en la prueba de Contenido
de Alcaloides Oxindólicos Pentacíclicos y Límite de Oxindoles
Tetracíclicos. La suma de las áreas de los picos de los alca-
loides oxindólicos tetracíclicos rincofilina e isorincofilina
es menos de 25% de las áreas totales de los picos detec-
tados para alcaloides oxindólicos pentacíclicos.
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Uña de Gato 6185

COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDÓLICOS PENTACÍCLICOS Y LÍ-
MITE DE OXINDOLES TETRACÍCLICOS
Solución estándar A: Disolver en metanol una canti-
dad, pesada con exactitud, de ER Extracto en Polvo de
Uña de Gato USP, agitando durante 1 minuto. Diluir
con metanol hasta obtener una solución con una con-
centración conocida de aproximadamente 0,5 mg/mL
de la cantidad declarada de alcaloides oxindólicos tota-
les. Pasar a través de un filtro con un tamaño de poro
de 0,45 µm o menor.
Solución estándar B: 0, 1 mg/mL de ER lsopteropodina
USP en metanol. Pasar a través de un filtro de nailon
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Transferir una cantidad, pesada con
exactitud, de Extracto en Polvo equivalente a aproxima-
damente 5 mg de la cantidad declarada de alcaloides
oxindólicos pentacíclicos a un tubo de centrífuga de
1O ml. Agregar 2,5 mL de metanol y someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos. Centrifugar y transferir el so-
brenadante a un matraz volumétrico de 1 O ml. Repetir
la extracción tres veces más, combinando los extractos
en el matraz volumétrico de 1 O mL y diluir con metano!
a volumen. Transferir aproximadamente 3 mL de la so-
lución a un tubo de ensayo que contenga 300 mg de
polvo de poliamida y agitar durante 1 minuto. Pasar a
través de un filtro de nailon con un tamaño de poro de
0,45 µm o menor, desechando la primera parte del
filtrado.
Solución A: Preparar una solución amortiguadora de
fosfato 1 O mM de pH 7,0 filtrada y desgasificada, mez-
clando 6 mL de hidróxido de sodio 1 N, 1O mL de fos-
fato monobásico de potasio 1 M y agua en cantidad
suficiente para obtener 1000 ml. Ajustar a un pH de
7,0 ± O, 1, agregando más de cualquiera de las
soluciones.
Solución B: Acetonitrilo
Solución C: Metanol y ácido acético glacial (99:1)
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B Solución C
(min) (%) (%) (%)
o 65 35 o Alcaloides oxindólicos tetracíclicos: No más de 25%
17 65 35 o tacíclicos con respecto a la materia seca
25 50 50 o
30 50 50 o CONTAMINANTES
31 o o 100
o • PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
36 o 100
39 65 35 o y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
49 65 35 o levaduras no excede de 103 ufc/g. ,
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 245 nm
Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 µm con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Velocidad de flujo: 0,75 mL/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromato~ramas: El cromatograma
obtenido usando la Soluetón estándar A es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Uña de Gato USP.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isopteropodina, Solución estándar B
Desviacion estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de isopteropodina en inyecciones repetidas,
Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Medir las áreas de los picos del analito. Identificar los
tiempos de retención de los picos correspondientes a
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rin-
cofilina, isorincofilina, pteropodina e isopteropodina
por comparación del cromatograma de la Solución es-
tándar A con el Cromatograma de Referencia provisto
con el lote del ER Extracto en Polvo de Uña de Gato
USP usado.
Calcular por separado los porcentajes de especiofilina,
uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rincofilina, isorin-
cofilina, pteropodina e isopteropodina, como isoptero-
podina, en la porción de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = (r11/r1) x (C/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cada alcaloide
pertinente de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de isopteropodina de la
Solución estándar B
Cs = concentración de ER lsopteropodina USP en la
Solución estándar B (mg/mL)
Cu = concentración de Extracto en Polvo en la
Solución muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
alcaloides oxindólicos pentacíclicos en el Extracto en
Polvo:
Resultado = (I.PA/L) x 100
I.PA = suma de los percentajes de especiofilina,
uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
pteropodina e isopteropodina (%)
L = cantidad declarada de alcaloides pentacíclicos
como isopteropodina (%)
Calcular el contenido de alcaloides oxindólicos
tetracíclicos, sumando los porcentajes individuales de
rincofilina e isorincofilina.
Criterios de aceptación
Alcaloides oxindólicos pentacíclicos: 90,0%-110,0%
de la cantidad declarada con respecto a la materia
seca
de la cantidad declarada de alcaloides oxindólicos pen-
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): No más de 1 ppm o
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Extractos
Botánicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Plaguicidas.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 105º durante 2
horas: pierde no más de 10,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. La eti-
queta también indica el contenido de alcaloides oxindóli-
cos pentacíclicos, el disolvente o mezcla de disolventes
de extracción utilizados para la preparación y la relación
entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
6186 Uña de Gato / Suplementos Dietéticos
Polvo. Cumple con los requisitos en Extractos Botánicos
(5~5), Etiquetado.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Uña de Gato USP
Uña de Gato, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Uña de Gato contienen Extracto en Polvo de
Uña de Gato. Las Tabletas contienen no menos de 90,0%
y no más de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto
en Polvo, calculado como alcaloides oxindólicos
pentacíclicos.
IDENTIFICACIÓN
• El cromatograma de la Solución muestra presenta picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, ptero-
podina e isopteropodina a tiempos de retención que co-
rresponden a los de la Solución estándar A, según se ob-
tienen en la prueba de Contenido de Alcaloides
Oxindólicos Pentacíclicos y Límite de Alcaloides Oxindólicos
Tetracíclicos. El contenido de alcaloides oxindólicos tetra-
cíclicos, calculado como la suma de rincofilina e isorrin-
cofilina, es no más de 25% de la cantidad declarada de
alcaloides oxindólicos pentacíclicos.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDÓLICOS PENTACÍCLICOS V LÍ-
MITE DE ALCALOIDES 0XINDÓLICOS TETRACÍCLICOS
Solución A: Preparar una solución amortiguadora de
fosfato 1 O mM de pH 7,0 que se prepara mezclando
hidróxido de sodio 1 N, fosfato monobásico de potasio
1 M y agua (3:5:492), y ajustar a un pH de 7,0 ± O, 1
agregando más de cualquiera de las soluciones.
Solución B: Acetonitrilo
Solución C: Metano! y ácido acético glacial (99:1)
Fase móvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B Solución C
lmin) (%) (%) (%)
o 65 35 o pertinente de la Solución muestra
17 65 35 o rs
25 50 50 o Solución estándar B
30 50 50 o Cs
31 o o 100
36 o o 100
39 65 35 o Calcular el contenido, en mg, de alcaloides oxindólicos
49 65 35 o pentacíclicos totales (CT) en la porción de Tabletas
Solución estándar A: Disolver una cantidad, pesada
con exactitud, de ER Extracto en Polvo de Uña de Gato
USP en metano!, agitar durante 1 minuto, y diluir con
metano! para obtener una solución con una concentra-
ción conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml de la
cantidad declarada de alcaloides oxindólicos totales. Pa-
sar a través de un filtro con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor.
Solución estándar B: O, 1 mg/mL de ER lsopteropodina
USP en metano!. Pasar a través de un filtro de nailon
con un tamaño de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Pesar con exactitud no menos de 20
Tabletas y reducir a polvo. Transferir una cantidad, pe-
sada con exactitud, del polvo equivalente a 20 mg de la
cantidad declarada de alcaloides oxindólicos pentacícli-
cos a un tubo de centrífuga de 50 mL. Someter a ultra-
sonido con 1 O mL de metanol durante 1 O minutos.
Centrifugar y transferir esta solución a un matraz volu-
métrico de 50 ml. Repetir la extracción anterior tres ve-
ces más combinando los extractos en el matraz volumé-
USP 37
trico de 50 mL y diluir con metanol a volumen.
Transferir 3 ml de la solución a un tubo de ensayo que
contenga 300 mg de poliamida en polvo y agitar du-
rante 1 minuto. Pasar a través de un filtro de nailon con
un tamaño de poro de 0,45 µm o menor y desechar la
primera parte del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 245 nm
Columna: 4,6 mm x 1 O cm; relleno L1 de 3 µm con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Velocidad de flujo: 0,75 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido usando la Solución estándar A es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Uña de Gato USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
isopteropodina, Solución estándar B
Desviacion estándar relativa: No más de 2,0%, a
partir del pico de isopteropodina en inyecciones repe-
tidas, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Medir las áreas de los picos de los analitos. Identificar
los tiempos de retención de los picos correspondien-
tes a especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafi-
lina, pteropodina, isopteropodina, rincofilina e isorrin-
cofilina por comparación del cromatograma de la
Solución estándar A con el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Uña de Gato USP usado.
Calcular el contenido, en mg, de especiofilina, unca-
rina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopte-
ropodina, como isopteropodina, en la porción de Ta-
bletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x V
ru = respuesta del pico de cada alcaloide
= respuesta del pico de isopteropodina de la
= concentración de ER lsopteropodina USP en la
Solución estándar B (mg/mL)
V = volumen de dilución final de la Solución
muestra (mL)
tomada sumando los contenidos individuales de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
pteropodina e isopteropodina.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de Uña de
Gato con respecto a la cantidad declarada:
Resultado = CT x (Awr/W) x (100/L¡) x (100/L)
CT = contenido de alcaloides oxindólicos
pentacíclicos totales en la porción de
Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porción de Tabletas tomada (mg)
L¡ = contenido de alcaloides oxindólicos
pentacíclicos totales, mg, en 100 mg del
Extracto usado para preparar las Tabletas
L = cantidad de Extracto por Tableta según la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Calcular el porcentaje de alcaloides oxindólicos
tetracíclicos con respecto al contenido de alcaloides
USP 37
oxindólicos pentacíclicos en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (rT/rp) x 100
rT = suma de las respuestas de los picos de
rincofilina e isorrincofilina en el
cromatograma de la Solución muestra
rp = suma de las respuestas de los picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina,
isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina
en el cromatograma de la Solución muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto en Polvo calculado como alcaloi-
des oxindólicos pentacíclicos; se encuentra no más de
25% de alcaloides oxindólicos tetracíclicos con respecto
a la cantidad de alcaloides oxindólicos pentacíclicos.
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del cual se prepararon las Tabletas. La etiqueta
también indica la cantidad de Extracto en Polvo por Ta-
bleta, en mg. Etiquetar las Tabletas indicando el conte-
nido, en mg, de alcaloides oxindólicos pentacíclicos por
1 09 mg de Extracto en Polvo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Uña de Gato USP
Proantocianidinas Oligoméricas de
Semillas de Uva
DEFINICIÓN
Las Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva son
una fracción de un extracto de las semillas maduras de
Vitis vinífera L. (Fam. Vitaceae). Contiene no menos de
75,0% de proantocianidinas oligoméricas, calculado con
respecto a la materia anhidra. El extracto se prepara
usando disolventes adecuados tales como alcohol, meta-
no!, acetona, acetato de etilo, agua o mezclas de estos
disolventes, donde la relación entre el material vegetal ini-
cial y el extracto está entre 70:1 y 10:1. El extracto se
enriquece adicionalmente en proantocianidinas oligoméri-
cas mediante fraccionamiento con acetato de etilo u otros
medios.
IDENTIFICACIÓN
• A. PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA
DELGADA (201)
Adsorbente: Gel de sílice para cromatografía con un
tamaño de partícula promedio de 5 µm y un espesor
de capa de aproximadamente 0,2 mm (placas para
HPTLC)
Suplementos Dietéticos/ Semillas de Uva 6187
Solución estándar A: Disolver una cantidad de ER
Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva Puri-
ficadas USP en metanol, sometiendo a ultrasonido, para
obtener una solución con una concentración de aproxi-
madamente 5 mg/mL. Centrifugar si fuera necesario y
usar el sobrenadante transparente. [NOTA-Preparar en
el momento de su uso]
Solución estándar B: Disolver una cantidad de ER (+)-
Catequina USP en metanol, sometiendo a ultrasonido,
para obtener una solución con una concentración de
aproximadamente 1 mg/mL.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
estándar A, excepto que se deben usar Proantocianidi-
nas OVigoméricas de Semillas de Uva.
Fase movil: Una mezcla de acetona, tolueno y ácido
fórmico (15:15:5)
Solución reveladora: Disolver aproximadamente
1 00 mg de vainillina en 3 mL de metanol sometiendo a
ultrasonido. Agregar aproximadamente 3 mL de ácido
clorhídrico, diluir con metano! hasta 1 O mL, y mezclar
cuidadosamente bajo agua fría. [NOTA-Recientemente
preparada]
Volumen de aplicación: 15 µL, en bandas de 5-1 O mm
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafía (621 )). Usar una cámara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mó-
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa.
Retirar la placa de la cámara, secar, rociar con la Solu-
ción reveladora, secar, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptación: El cromatograma de la Solu-
ción muestra presenta bandas de color violeta rosado,
que corresponden en color y valor RF a las del cromato-
grama de la Solución estándar A, a los siguientes valores
RF aproximados: un par de bandas entre 0,20 y 0,23
(proantocianidinas triméricas), una banda a 0,28
(proantocianidina-Br3'-0-galato), una banda a 0,31
(proantocianidinas diméricas tifo B) y una banda a 0,43
((-)-epicatequin-3-0-galato). E cromatograma de la So-
lución muestra puede presentar una banda de color vio-
leta rosado a un valor RF aproximado de 0,49 (monó-
meros de flavan-3-ol residuales y/o ácido gálico) que
corresponde a la banda en el cromatograma de la Solu-
ción estándar B. También se pueden observar otras ban-
das de color violeta rosado.
• B. El cromatograma de la Solución muestra obtenido en
la prueba de Límite de Catequina y Epicatequina presenta
picos debidos al dímero B, de proantocianidina, dímero
B2 de proantocianidina, (-)-epicatequin-3-0-galato y un
pico ancho debido a otras proantocianidinas oligoméricas
a los tiempos de retención correspondientes a los del
cromatograma de la Solución estandar B.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE PROANTOCIANIDINAS 0UGOMÉRICAS
Solución de estándar interno: Preparar una solución
de butil hidroxitolueno en Fase móvil que contenga
aproximadamente 0,3 mg/mL.
Solución estándar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva
Purificadas USP en Solución de estándar interno para ob-
tener una solución con una concentración conocida de
aproximadamente 1,0 mg/mL.
Solución estándar B: Disolver una porción de ER (+)-
Catequina USP en Solución de estándar interno para ob-
tener una solución con una concentración conocida de
aproximadamente 0,2 mg/mL.
Solución muestra: Disolver una cantidad pesada de
Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva en
Solución de estándar interno para obtener una solución
con una concentración conocida de aproximadamente
6188 Semillas de Uva /Suplementos Dietéticos USP 37

1,0 mg/ml. Centrifugar y usar el sobrenadante
transparente.
Fase móvil: Preparar una mezcla filtrada y desgasificada
de tetrahidrofurano y una solución acuosa de bromuro
de litio (aproximadamente 1 mg/ml) (95:5).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Cplumna: 7,5 mm x 30 cm; relleno L21 de 5 µm, 500
A de aproximadamente 5 mg/ml. Centrifugar y usar el
Temperatura de la columna: 25º ± 1
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud: Medir las respuestas según se
determina en Análisis.
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% de-
terminada a partir del cociente entre las áreas de los
picos de proantocianidinas oligoméricas y el estándar
interno en inyecciones repetidas, Solución estándar A
Resolución: No menos de 3,0 entre los picos de mo-
nómeros y el estándar interno, Solución estándar B
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Cromatografiar la Solución estándar A y determinar el
comienzo y el final del intervalo del tiempo de reten-
ción para la integración de las proantocianidinas oli-
gomericas, a los puntos donde la respuesta del pico
principal es aproximadamente 0,5% de su máximo.
Registrar el cociente entre las áreas de los picos de
proantocianidinas oligoméricas y el estándar interno.
Cromatografiar la Solución estándar B y la Solución
muestra e identificar la ubicación de los monómeros.
Integrar las áreas de los picos principales dentro del
intervalo del tiempo de retención determinado con la
Solución estándar A, excluyendo el área arriba del pico
principal, en el sitio identificado para los monómeros,
usando un método de integración apropiado.
Calcular el porcentaje de las proantocianidinas oligo-
méricas en la porción de Proantocianidinas Oligoméri-
cas de Semillas de Uva tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
proantocianidinas oligoméricas y estándar
interno de la Solución muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
proantocianidinas oligoméricas y estándar
interno de la Solución estándar A
Cs = concentración de ER Proantocianidinas
Oligoméricas de Semillas de Uva Purificadas
USP en la Solución estándar A (mg/ml)
Cu = concentración de Proantocianidinas
Oligoméricas de Semillas de Uva en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: No menos de 75,0% con res-
pecto a la materia anhidra
IMPUREZAS
Impurezas Inorgánicas
• METALES PESADOS, Método " (231 ): No más de 1o ppm
Impurezas Orgánicas
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• LÍMITE DE CATEQUINA Y EPICATEQUINA
Solución A: Usar acetonitrilo.
Solución B: Usar una solución acuosa al 0,3% de ácido
fosfórico al 85%.
Disolvente: Preparar una mezcla de Solución A y Solu-
ción B (1 :9).
Solución estándar A: Disolver, sometiendo a ultraso-
nido, una cantidad pesada de ER ( + )-Catequina USP en
Disolvente para obtener una solución con una concen-
tración conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml.
Solución estándar B: Disolver, sometiendo a ultraso-
nido, una cantidad pesada de ER Proantocianidinas Oli-
goméricas de Semillas de Uva USP en Disolvente para
obtener una solución con una concentración conocida
sobrenadante transparente.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
estándar 8, excepto que se deben usar Proantocianidi-
nas Oli_goméricas de Semillas de Uva.
Fase movil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 10 90
45 20 80
65 60 40
66 10 90
85 10 90
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 278 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solución estándar B es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva
USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
catequina, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2% deter-
minada a partir del pico de catequina en inyecciones
repetidas, Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Usando el cromatograma de la Solución estándar A, de
la Solución estándar B y el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el lote de ER Proantocianidinas Oli-
goméricas de Semillas de Uva USP usado, identificar
los tiempos de retención de los picos correspondien-
tes a (+)-catequina y (-)-epicatequina. Los tiempos de
retención relativos aproximados de los picos son 1,0
y 1,43 para (+)-catequina y (-)-epicatequina,
respectivamente.
Calcular la suma de los porcentajes de (+)-catequina y
(-)-epicatequina en la porción de Proantocianidinas
Oligoméricas de Semillas de Uva tomada:
(ru/rs) X (Cs X V/W) X 100
ru = suma de las respuestas de los picos de (+)-
catequina y (-)-epicatequina de la Solución
muestra
rs = respuesta del pico de ( + )-catequina de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ER (+)-Catequina USP en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen final de la Solución muestra (ml)
w = peso de Proantocianidinas Oligoméricas de
Semillas de Uva tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
USP 37
Criterios de aceptación: No más de 19,0% con res-
pecto a la materia anhidra
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli .
• RESIDUO DE INCINERACIÓN (281): No más de 0,5%, deter-
minado sobre 5,0 g
• AGUA, Método la (921): No más de 8,0%
• FRACCIÓN INSOLUBLE EN AGUA
Análisis: Transferir aproximadamente 1 g a un matraz
adecuado. Agregar 100 mL de agua y agitar vigorosa-
mente durante 15 minutos. Pasar la solución a través de
un filtro de vidrio sinterizado previamente tarado, lavar
el matraz con 30 mL de agua, y transferir los lavados al
filtro. Lavar el filtro con 30 mL de agua en porciones de
5 ml. Secar el filtro durante 2 horas a 1 05º, enfriar en
un desecador, y pesar. Calcular el porcentaje de la frac-
ción insoluble en agua.
Criterios de aceptación: No más de 2%
• OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botánicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, la leyenda
"Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva".
Cumple con otros requisitos de etiquetado en Extractos
Bo~ánicos (565).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (+)-Catequina USP
ER Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva
USP
ER Proantocianidinas Oligoméricas de Semillas de Uva
Purificadas USP
Valeriana
DEFINICIÓN
La Valeriana está compuesta por las partes subterráneas de
Valeriana officinalis L. (Fam. Valerianaceae), incluidos el ri-
zoma, las raíces y los estolones. Contiene no menos de
0,5% de aceite volátil, no menos de 0,05% de ácido vale-
rénico (C,sH2202) y no menos de 0, 17% de ácidos valeré-
nicos totales, calculados como la suma de ácido hidroxi-
valerénico, ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico, con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Cumple con los requisitos en Pruebas Específicas, Ca-
racterísticas Botánicas
•B.
Solución muestra: 0,2 g de Valeriana, reducida a polvo
recientemente, en 5 mL de cloruro de metileno. Agitar
varias veces y dejar en reposo durante 5 minutos. Fil-
trar, lavar el filtro con 2 mL de cloruro de metileno,
combinar el filtrado y los lavados, y evaporar hasta se-
quedad. Disolver el residuo en 0,2 mL de cloruro de
metileno.
Análisis: Agregar 3 mL de una mezcla de volúmenes
iguales de ácido acético glacial y ácido clorhídrico al
25% a O, 1 mL de la Solución muestra, y agitar varias
veces.
Criterios de aceptación: Se desarrolla un color azul
dentro de los 15 minutos.
Suplementos Dietéticos / Valeriana 61 89
• C. CROMATOGRAFiA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,25 mg/mL de ER Ácido Valeré-
nico USP en metano!
Solución estándar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante .
Solución muestra: Aproximadamente 0,5 g de Vale-
riana, reducida a polvo fino, en 5 mL de metano!. So-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía ron un tamaño de partícula promedio de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL, como bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y ácido acético (60:38:2)
Reactivo de derivatización A: Una mezcla de ácido
acético glacial y ácido clorhídrico (1 :4)
Reactivo de derivatización B: 0,5 mL de p-anisalde-
hído, 1 O mL de ácido acético y 5 mL de ácido sul-
fúrico. Agregar a 85 mL de metano! helado y mezclar.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada. Usar una cámara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33% usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cámara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatización A, calentar a 120º durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatización B, calentar a 100º durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: Después del tratamiento con
Reactivo de derivatización A y calor, la Solución muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edulis)], aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Después del tratamiento con Reactivo de derivatización B
y calor, la Solución muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solución estándar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a ácido hidroxivalerénico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a ácido acetoxivalerénico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wallichi1)] y
una banda principal a un Rf correspondiente a la
banda de ácido valerénico de la Solución estándar A y
la Solución estándar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solución muestra y en la Solución están-
dar B.
• D. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valerénicos.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
un pico a un tiempo de retención correspondiente al
pico del ácido valerénico de la Solución estándar A. La
Solución muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes al ácido hidroxivalerénico y al ácido
acetoxivalerénico.
COMPOSICIÓN , ,
• CONTENIDO DE ACIDOS VALERENICOS
Solución A: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar y desgasificar.
6190 Valeriana / Suplementos Dietéticos
Solución B: Mezclar 6 rnl de ácido fosfórico al 85%
con 900 ml de metanol, diluir con metanol hasta
1000 ml, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase móvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo
(min}
Solución A
CO/o)
Solución B
(%)
o 40 60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y solución de ácido
fosfórico al O, 1% en agua (3:1) , rénico, con respecto a la materia seca
Solución estándar A: 0,02 mg/ml de ER Acido Valeré-
nico USP en metanol. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solución con una con~entra~~ón
de aproximadamente 20 mg/ml. Antes de la myeccron,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Valeriana, reducido a polvo fino y pesado con exacti-
tud a un matraz volumétrico de 50 ml, agregar
1 O,Ó ml de agua y agitar durante 2 mi~utos mient~as
se calienta en un baño de agua mantenido a aproxima-
damente 50º. Someter a ultrasonido durante 15 minu-
tos, agregar 35 ml de metanol y someter a ultrasonido
durante 15 minutos. Enfriar, diluir con metanol a volu-
men y mezclar. Antes de la inyección, pasar a través de
un filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm o menor, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento e>.,<-
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 µm, 100 A
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido valerénico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de ácido valerénico en inyecciones repetidas,
Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los ácidos valerénicos en el cromatograma de
la Solución muestra por comparación con los cromato-
gramas de la Solución estándar A, la Solución estándar B
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular los porcentajes de ácido hidroxivalerénico,
ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico en la por-
ción de Valeriana tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
USP 37
rs = área del pico del ácido valerénico de la
Solución estándar A
= concentración de ácido valerénico en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen de la Solución muestra (ml)
w = peso de Valeriana tomado para preparar la
Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito
(1, 1O para ácido hidroxivalerénico, 1,25 para
ácido acetoxivalerénico y 1,00 para ácido
valerénico)
Criterios de aceptación: No menos de 0,05% de ácido
valerénico (C1sH2202) y no menos de O, 1 7% de ácidos
valerénicos totales, calculado como la suma de ácido
hidroxivalerénico, ácido acetoxivalerénico y ácido vale-
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Determinación de Aceite
Volátil (561)
Muestra: 100 g, triturados recientemente en forma de
polvo grueso
Criterios de aceptación: No menos de 0,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 0,5 µg/g
Cadmio: No más de 1,0 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de O, 1 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 105 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 103 ufc/g, y las bacterias Gram-negativas tole-
rantes a la bilis no exceden de 10 3 u,fc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchta colt.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Macroscópicas: Rizomas: de color gris amarillento a
marrón grisáceo pálido; enteros o cortados en sentido
longitudinal; de hasta 5 cm de la~g~ y hast~ 3 cm de .
diámetro; base alargada o compnm1da, cubierta y fusio-
nada con numerosas raíces; los ápices presentan gene-
ralmente una cicatriz en forma de copa originada por
las partes aéreas, rara vez se encuentra la base del tallo,
la fractura revela la médula con una cavidad central, se
observa tabique transversal en la sección longitudinal.
Raíces: de color gris amarillento a marrón grisáceo pá-
lido con rayas longitudinales, numerosas, cilíndricas,
delgadas, de aproximadamente 1 O cm ~e longitud y.
hasta 3 mm de diámetro, unas pocas ra1ces secundarias
filiformes y frágiles, de fractura corta. Estolones: de.
color gris amarillento pálido, presenta nudos prominen-
tes separados por entrenudos estriados longitudinal-
mente, cada uno de 2-5 cm de longitud, fractura
fibrosa.
Microscópicas: Raíces: epidermis, capa pilífera con célu-
las papilosas, algunas ~esarrollad~s en forma de pel.os
radiculares y exoderm1s que consiste en una capa sim-
ple de células c,uadrangulare~ a P.oligonales con, paredes
suberizadas; globulos de aceite dispersos a traves de la
epidermis y la corteza; la corteza, ocupa la mayor pa;te
de la raíz, la parte externa consta de 2-4 capas de celu-
las resinosas, la parte interna está compuesta por nume-
rosas capas de células poligonales a subredondeadas lle-
nas de gránulos de almidón, con hei:ididuras; la,
endodermis formada por una capa simple de c~lulas 1.e-
vemente lignificadas, con puntos de Caspary ,d1ferenc1a-
dos; el periciclo formado por 1-2 capas de celulas tan-
USP 37
gencialmente alargadas, a veces no diferenciadas; el
floema, con haces vasculares que forman un anillo in-
terrumpido; el cámbium frecuentemente no diferen-
ciado; el xilema, continuamente distribuido, con vasos
poligonales, rodeando la médula central; la médula pre-
senta células con paredes levemente engrosadas que
contienen gránulos de almidón; los gránulos de almi-
dón, simples, hilio punteado, radiado o hendido, de
5-15 µm en diámetro; gránulos de almidón compues-
tos por 2-6 componentes. Los rizomas: similares a las
raíces excepto en la epidermis y la exodermis, reempla-
zadas parcialmente por una peridermis poco desarro-
llada; presencia de numerosos haces vasculares; médula
central más ancha, incluye hendiduras de diversos ta-
maños, las más grandes separadas por grupos de célu-
las pétreas.
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Materia Orgánica Extraña
(561): No más c}e 2,0%
• SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Muestra: 2 g, secados cuidadosamente a 40º y reduci-
dos a polvo grueso
Análisis: Mezclar la Muestra con 20 mL de alcohol al
70% y dejar en reposo durante 2 horas, agitando fre-
cuentemente. Filtrar, evaporar 5 mL del filtrado en un
baño de agua hasta sequedad y secar el residuo a 105º.
<;riterios de aceptación: No menos de 20%
• PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Valeriana reducida a polvo fino
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más _de 12%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,más de 12,0% , ,
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
de la luz y la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la ¡;>lanta contenidas en el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~xtracto en Polvo de Valeriana USP
ER Acido Valerénico USP
Valeriana en Polvo
DEFINICIÓN
La Valeriana en Polvo es Valeriana reducida a polvo fino o
muy fino. No contiene cristales de oxalato de calcio ni
gránulos de almidón extraños. Contiene no menos de
0,3% de aceite volátil, no menos de 0,04% de ácido vale-
rénico (C1sH2202) y no menos de O, 1 % de ácidos valeréni-
cos totales, calculados como la suma de ácido hidroxivale-
rénico, ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico, con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Cumple con los requisitos en Pruebas Específicas, Ca-
racterísticas Botánicas.
•B.
Solución muestra: 0,2 g de Valeriana en Polvo en 5 mL
de cloruro de metileno. Agitar varias veces y dejar en
reposo durante 5 minutos. Filtrar, lavar el filtro con
2 mL de cloruro de metileno, combinar el filtrado y los
lavados, y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo
en 0,2 mL de cloruro de metileno.
Análisis: Agregar 3 mL de una mezcla de volúmenes
iguales de ácido acético glacial y ácido clorhídrico al
25% a O, 1 mL de la Solución muestra y agitar varias
veces.
Suplementos Dietéticos /Valeriana 6191
Criterios de aceptación: Se desarrolla un color azul
dentro de los 15 minutos.
• C. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA ,
Solución estándar A: 0,25 mg/mL de ER Acido Valeré-
nico USP en metanol
Solución estándar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metanol. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Aproximadamente 0,5 g de Vale-
riana en Polvo en 5 mL de metanol. Someter a ultraso-
nido durante 1O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño de partícula promedio de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y ácido acético (60:38:2)
Reactivo de derivatización A: Una mezcla de ácido
acético glacial y ácido clorhídrico (1 :4)
Reactivo de derivatización B: 0,5 mL de p-anisalde-
hído, 1 O mL de ácido acético y 5 mL de ácido sul-
fúrico. Agregar a 85 mL de metano! helado y mezclar.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada. Usar una cámara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33% usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cámara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatización A, calentar a 120º durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatización B, calentar a 100º durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: Después del tratamiento con
Reactivo de derivatización A y calor, la Solución muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edulis)], aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Después del tratamiento con Reactivo de derivatización B
y calor, la Solución muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solución estándar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a ácido hidroxivalerénico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a ácido acetoxivalerénico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wallíchi1)] y
una banda principal a un RF correspondiente a la
banda del acido valerénico de la Solución estándar A y
la Solución estándar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solución muestra y en la Solución están-
dar B.
•D. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valerénicos.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
un pico a un tiempo de retención correspondiente al
pico de ácido valerénico de la Solución estándar A. La
Solución muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes a ácido hidroxivalerénico y a ácido
acetoxivalerénico.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ÁCIDOS VALERÉNICOS
Solución A: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar y desgasificar.
6192 Valeriana /Suplementos Dietéticos
Solución B: Mezclar 6 ml de ácido fosfórico al 85%
con 900 ml de metano!, diluir con metanol hasta
1000 ml, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cm in) (%) (%)
o 40 60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y solución de ácido
fosfórico al O, 1 % en agua (3:1) , . , rénico, con respecto a la materia seca
Solución estándar A: 0,02 mg/ml de ER Ac1do Valere-
nico USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solución con una con~entra~i,ón
de aproximadamente 20 mg/ml. Antes de la inyecc1on,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Valeriana en Polvo, pesado con exactitud, a un ma-
traz volumétrico de 50 ml, agregar 10,0 ml de agua y
agitar durante 2 minu~os mientra~ se calienta en ~n
baño de agua mantenido a aproximadamente 50 . So-
meter a ultrasonido durante 15 minutos, agregar 35 ml
de metanol y someter a ultrasonido durante 15 minu-
tos. Enfriar, diluir con metanol a volumen y mezclar.
Antes de la inyección, pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o me-
nor, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato~ráf1co
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ei;<-
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 µm, 100 A
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar Bes similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido valerénico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de ácido valerénico en inyecciones repetidas,
Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Identificar los ácidos valerénicos en el cromatograma de
la Solución muestra por comparación con los cromato-
gramas de la Solución estándar A, la Solución estándar B
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular los porcentajes de ácido hidroxivalerénico,
ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico en la por-
ción de Valeriana en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
USP 37
rs = área del pico del ácido valerénico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido valerénico en la
Solución estándar A (mg/ml)
V = volumen de la Solución muestra (ml)
w = peso de Valeriana en Polvo tomado para
preparar la Solución muestra (mg)
F = factor de conversión para cada analito
(1, 1O para ácido hidroxivalerénico, 1,25 para
ácido acetoxivalerénico y 1,00 para ácido
valerénico)
Criterios de aceptación: No menos de 0,04% ,d~ ácido
valerénico (C1sH2202) y no menos de 0, 1 % de acidos
valerénicos totales, calculados como la suma de ácido
hidroxivalerénico, ácido acetoxivalerénico y ácido vale-
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Determinación de Aceite
Volátil (561)
Muestra: 100 g de Valeriana en Polvo
Criterios de aceptación: No menos de 0,3%
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 0,5 µg/g
Cadmio: No más de 1,0 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
Mercurio: No más de 0, 1 µg/g
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para el
Análisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 5 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 Q3 ufc/g, y las bacterias Gram-negativas tole-
rantes a la bilis no exceden de 10 3 u,fc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchta colt.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS
Microscópicas: Numerosos gránulos de almidón, sim-
ples, hilio punteado, radial o hendido, de 5-15 µm en
diámetro· gránulos de almidón compuestos por 2-6
compon~ntes; negros, en forma de cruz bajo el micros-
copio de polarización. Células pétreas dispersas, solas o
agregadas, con células de lúmenes de varios tamaños,
de color blanco amarillento brillante o blanco brillante
bajo un microscopio de polarización; numerosos frag-
mentos de células parenquimáticas que contienen gló-
bulos de aceite volátil y gránulos de almidón; fragmen-
tos de fibras lignificadas de color amarillo pálido, .
dispersas, solas o agregadas; fragmentos d~ vasos, ret1-
culados, con pu,ntuaciones areoladas y esp1raladas.
• SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Muestra: 2 g de Valeriana en Polvo, cuidadosamente
secados a 40º
Análisis: Mezclar la Muestra con 20 ml de alcohol al
70% y dejar en reposo durante 2 horas, agitando fre-
cuentemente. Filtrar, evaporar 5 ml del filtrado en un
baño de agua hasta sequedad y secar el residuo a 105º.
Criterios de aceptación: No menos de 20%
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Valeriana en Polvo
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Criterios de aceptación: No más de 12%
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Totales (561):
No más de 12,0% ,
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No más de 5,0%
USP 37
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
de la luz y de la humedad.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y, después de la denominación oficial, las partes de
la glanta a partir de la que se preparó el artículo.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
ER Ácido Valerénico USP
Extracto en Polvo de Valeriana
DEFINICIÓN
El Extracto en Polvo de Valeriana se prepara a partir de Vale-
riana triturada usando mezclas hidroalcohólicas. Contiene
no menos de 0,3% de ácido valerénico (C1,H2202) y no
menos de 0,6% de ácidos valerénicos totales, calculados
como la suma de ácido hidroxivalerénico, ácido acetoxiva-
lerénico y ácido valerénico, con respecto a la materia
seca. La relación entre el material vegetal crudo inicial y el
Extracto está entre 4: 1 y 7: 1 .
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,25 mg/mL de ER Ácido Valeré-
nico USP en metano!
Solución estándar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metanol. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: 40 mg/mL de Extracto en metanol.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño de partícula promedio de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y ácido acético (60:38:2)
Reactivo de derivatización A: Una mezcla de ácido
acético glacial y ácido clorhídrico (1 :4)
Reactivo de derivatización B: 0,5 ml de p-anisalde-
hído, 1O ml de ácido acético y 5 mL de ácido sul-
fúrico. Agregar a 85 mL de metano! helado y mezclar.
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada. Usar una cámara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33% usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cámara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatización A, calentar a 120º durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatización B, calentar a 100º durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: Después del tratamiento con
Reactivo de derivatización A y calor, la Solución muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edulis)], aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Después del tratamiento con Reactivo de derivatización B
y calor, la Solución muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solución estándar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del ero-
'iuplementos Oieteticos /Valeriana 6193
matograma cJeliida a acido hidroxivalerénico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a acido acetoxivalerénico [a dife-
rencia de lil valPriana de Scouler (Valeriana wallichÍI)] y
una banda principal a un Rr correspondiente a la
banda del acido valerénico de la Solución estándar A y
la Solución estándar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solución muestra y en la Solución están-
dar B.
• B. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valerénicos.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
un pico a un tiempo de retención correspondiente al
pico del ácido valerénico de la Solución estándar A. La
Solución muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes al ácido hidroxivalerénico y al ácido
acetoxivalerénico.
COMPOSICIÓN
• CONTENIDO DE ÁCIDOS V ALERÉNICOS
Solución A: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 ml de agua, diluir con agua hasta 1 000 mL,
mezclar, filtrar y desgasificar.
Solución B: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de metano!, diluir con metano! hasta
1000 mL, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase móvil: Ver ia Tabla l.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
~-º------- - 40 60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metano! y solución de ácido
fosfórico al O, 1 % en agua (3: 1) ,
Solución estándar A: 0,05 mg/mL de ER Acido Valeré-
nico USP en metanol. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solución con una concentración
de aproximadamente 20 mg/mL. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 ~tm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Solución muestra: Someter a ultrasonido una porción
de Extracto en Disolvente para obtener una solución con
una concentración de aproximadamente 20 mg/ml.
Antes de la inyección, pasar a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm o me-
nor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento e~-
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 µm, 100 A
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido valerénico, Solución estándar A
6194 Valeriana/ Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de ácido valerénico en inyecciones repetidas,
Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Identificar los ácidos valerénicos en el cromatograma de
la Solución muestra por comparación con los cromato-
gramas de la Solución estándar A, la Solución estándar 8
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular los porcentajes de ácido hidroxivalerénico,
ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico en la por-
ción de Extracto en Polvo de Valeriana tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( C1/ Cu) x F x 100
ru = área del pico del analito pertinente de la
Solución muestra
= área del pico del ácido valerénico de la
Solución estándar A
= concentración de ácido valerénico en la
Solución estándar A (mg/mL)
Cu concentración del Extracto en la Solución
= nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
muestra (mg/mL)
F = factor de conversión para cada analito
(1, 1 O para ácido hidroxivalerénico, 1,25 para
ácido acetoxivalerénico y 1,00 para ácido
valerénico)
Criterios de aceptación: No menos de 0,3% de ácido
valerénico (C1sH2202) y no menos de 0,6% de ácidos
valerénicos totales, calculados como la suma de ácido
hidroxivalerénico, ácido acetoxivalerénico y ácido vale-
rénico, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
• IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptación
Arsénico: No más de 0,5 µg/g
Cadmio: No más de 1,0 µg/g
Plomo: No más de 5,0 µg/g
IV!ercurio: No más de ,O, 1 µg/g
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 04 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g, el recuento de coliformes no excede
de 10 3 ufc/g y el recuento de Enterobacterias no excede
de 10 3 ufc/g. , hído, 1 O ml de ácido acético y 5 mL de ácido sul-
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto
Análisis: Secar a 105º durante 2 horas.
Cri,terios de aceptación~ No más de 9%
• ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No más de 7,0%
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente contro-
lada. Proteger de la humedad y la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica la denominación oficial
del artículo, el nombre científico en latín y la parte de la
planta a partir de la que se preparó el artículo. Etiquetar
indicando el contenido de ácido valerénico y ácidos vale-
rénicos totales, y la relación entre el material vegetal
crudo inicial y el Extracto. Cumple con otros requisitos
de etiquetado en Extractos Botánicos (565).
USP 37
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
ER Ácido Valerénico USP
Valeriana, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Valeriana contienen Extracto en Polvo de
Valeriana. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y
no más de 120,0% de la cantidad declarada de Extracto
en Polvo de Valeriana, calculados como ácidos valerénicos,
equivalentes a la suma del ácido hidroxivalerénico, ácido
acetoxivalerénico y ácido valerénico.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,25 mg/mL de ER Ácido Valeré-
nico USP en metano!
Solución estándar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano!. Someter a ultraso-
sobrenadante.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
1 O Tabletas. Transferir una cantidad del polvo, equiva-
lente a 1 00 mg de Extracto en Polvo de Valeriana a un
matraz adecuado. Agregar 5 mL de agua y 3 mL de una
solución acuousa al 10% de hidróxido de potasio, ex-
traer con dos porciones de 5 mL de cloruro de metileno
y desechar la fase orgánica. Calentar la fase acuosa en
un baño de agua a 40º durante 1 O minutos, enfriar,
acidificar con ácido clorhídrico al 7% y extraer con dos
porciones de 5 mL de cloruro de metileno. Secar la fase
orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, filtrar, evaporar
el filtrado hasta sequedad y disolver el residuo en
2,0 mL de cloruro de metileno.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño de partícula promedio de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicación: 5 µL, en bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y ácido acético (60:38:2)
Reactivo de derivatización A: Una mezcla de ácido
acético glacial y ácido clorhídrico (1 :4)
Reactivo de derivatización B: 0,5 mL de p-anisalde-
fúrico. Agregar a 85 ml de metanol helado y mezclar .
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografía en capa delgada de alta resolución ade-
cuada. Usar una cámara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33% usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cámara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatización A, calentar a 120º durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatización 8, calentar a 100º durante 3 minutos y
examinar bajo luz blanca .
Criterios de aceptación: Después del tratamiento con
Reactivo de derivatización A y calor, la Solución muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edulis)], aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Después del tratamiento con Reactivo de derivatización B
y calor, la Solución muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solución estándar B. Estas bandas in-
USP 37
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a ácido hidroxivalerénico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a ácido acetoxivalerénico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wallichi1)] y
una banda principal a un Rr correspondiente a la
banda de ácido valerénico de la Solución estándar A y
la Solución estándar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solución muestra y en la Solución están-
dar B.
• B. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valerénicos.
Criterios de aceptación: La Solución muestra presenta
un pico a un tiempo de retención correspondiente al
pico de ácido valerénico de la Solución estándar A. La
Solución muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes a ácido hidroxivalerénico y a ácido
acetoxivalerénico.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE EXTRACTO DE VALERIANA
Solución A: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar y desgasificar.
Solución B: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de metanol, diluir con metanol hasta
1000 mL, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
(min) (%) (%)
o 40 60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y solución de ácido
fosfórico al O, 1 % en agua (3:1) , L
Solución estándar A: 0,02 mg/mL de ER Acido Valeré-
nico USP en metanol. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solución estándar B: Someter a ultrasonido una por-
ción de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solución con una concentración
de aproximadamente 20 mg/mL. Antes de la inyección,
pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas y
reducir a polvo. Transferir una porción del polvo, nomi-
nalmente equivalente a aproximadamente 3,0 mg de
ácidos valerénicos, a un matraz adecuado. Agregar
25,0 mL de Disolvente, agitar hasta dispersar el polvo,
someter a ultrasonido durante 1 O minutos y centrifugar.
Usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento e:>;<-
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 µm, 100 A
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Suplementos Dietéticos / Valeriana 6195
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido valerénico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de ácido valerénico en inyecciones repetidas,
Solución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Identificar los ácidos valerénicos en el cromatograma de
la Solución muestra por comparación con los cromato-
gramas de la Solución estándar A, la Solución estándar B
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Ex-
tracto en Polvo de Valeriana, como ácidos valerénicos
(suma de ácido hidroxivalerénico, ácido acetoxivaleré-
nico y ácido valerénico), en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= {[:L(ru x F)]!rs) x (C x V/W) x (100/Lt) x (Aw
x 100/L)
ru = áreas de los picos de los analitos pertinentes
de la Solución muestra
F = factor de conversión para cada analito
(1, 1 O para ácido hidroxivalerénico, 1,25 para
ácido acetoxivalerénico y 1,00 para ácido
valerénico)
rs = área del pico del ácido valerénico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido valerénico en la
Solución estándar A (mg/mL)
V = volumen de la Solución muestra (mL)
w = peso de la muestra de Tabletas reducidas a
polvo usada para preparar la Solución
muestra (mg)
= peso promedio de las Tabletas (mg/Tableta)
= cantidad declarada de ácidos valerénicos en
1 00 mg del Extracto en Polvo de Valeriana
usado¡ara preparar las Tabletas (mg)
= cantida declarada de Extracto en Polvo de
Valeriana por Tableta (mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-120,0%
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegración.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 03 ufc/g. ,
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz. Almacenar a temperatura
ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre científico en
latín y después de la denominación oficial, el artículo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
bién indica la cantidad, en mg, de Extracto en Polvo de
Valeriana por Tableta y el contenido, como porcentaje,
de ácidos valerénicos en el Extracto.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
ER Ácido Valerénico USP
6196 Valeriana /Suplementos Dietéticos
Valeriana, Tintura
DEFINICIÓN
La Tintura de Valeriana se prepara según se indica a
continuación.
Valeriana 200 o
Una mezcla de Alcohol y Agua (6:4) a (8:2),
una cantidad suficiente oara obtener 1000 ml
Preparar la Tintura según se indica en Extractos Botánicos
(565), Tinturas, Proceso de Maceración. La Tintura de Vale-
riana contiene no menos de 0,015% de ácidos valeréni-
cos, calculado como la suma de ácido hidroxivalerénico
ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico. ' mezclar, filtrar y desgasificar.
IDENTIFICACIÓN
• A. CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
Solución estándar A: 0,25 mg/mL de ER Ácido Valeré-
nico USP en metanol
Solución estándar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metanol. Someter a ultraso-
nido durante 1O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solución muestra: Centrifugar la Tintura y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatográfico
Adsorbente: Mezcla de gel de sílice para cromatogra-
fía con un tamaño promedio de part1cula de 2-1 O µm
(placas para HPTLC)
Volum.~n de ,aplicación: 5 µL de Solu~ión estándar A y
Solucton estandar B, y 1O µL de Solucion muestra, en
bandas de 8 mm
Fase móvil: Una mezcla de ciclohexano acetato de
etilo y ácido acético (60:38:2) ' necesario.
Reactivo de derivatización A: Una mezcla de ácido
acético glacial y ácido clorhídrico (1 :4)
Reactivo de derivatización B: 0,5 ml de p-anisalde-
hído, 1O mL de ácido acético y 5 mL de ácido sul-
fúrico. Agregar a 85 mL de metanol helado y mezclar
Análisis · un tar:naño de poro de 0,45 µm o menor, desechando
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar By
Solución muestra
Aplicar las, Muestras en bandas a una placa para cro-
matograf1a en capa delgada de alta resolución ade-
cuada. Usar una cámara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33% usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas hasta una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cámara, secar y derivatizar con Reactivo
de derivatización A, calentar a 120º durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatización B, calentar a 100º durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptación: Después de tratarla con el Re-
ª~!ivo de derivatización A y del calentamiento, la Solu-
cton muestra no presenta una banda de color azul in-
t~nso aproximadamente a la mitad del cromatograma
ni otras bandas significativas [a diferencia de la vale-
riana mexicana (Valeriana edulis)], aunque se pueden
observar bandas menores.
Desf ués de tratarla con el Reactivo de derivatización B y
de calentamiento, la Solución muestra presenta tres
bandas de color violeta en posiciones y colores simila-
res a las bandas de la Solución estándar B. Estas bandas
incluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a ácido hidroxivalerénico una
banda principal aproximadamente a la mitad del cro-
matc:igrama debi~a a ácido acetoxivalerénico [a dife-
rencia de la v~le~1ana de Scouler (Valeriana wallichi1)], y
una banda principal a un valor Rr correspondiente a la
banda de ácido valerénico de la Solución estándar A y
USP 37
de la Solución estándar B. Se pueden observar otras
bandas menores en la Solucion muestra y en la Solución
estándar B.
• B. HPLC
Análisis: Proceder según se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valerénicos.
Criter_ios de ac~ptación: La Solución muesta presenta
u:i pico ~ ~n t1emp51 ~e retención correspondiente al
pico de ac1do valerenico de la Solución estándar A. La
S?lución my~stra prese:ita pi,cos adicionales correspon-
dientes a ac1do h1drox1valerenico y a ácido
acetoxivalerénico.
CONTENIDO
• CONTENIDO DE ÁCIDOS VALERÉNICOS
Solución A: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1000 mL,
Solución B: Mezclar 6 mL de ácido fosfórico al 85%
con 900 mL de metanol, diluir con metanol hasta
1000 mL, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase móvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solución A Solución B
Cmln) (%) (%)
o 40 60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y una solución de
ácido fosfórico al O, 1 % en agua (3: 1)
So_lución estándar A: 0,02 mg/mL de ER Ácido Valeré-
nico USP en metanol. Someter a ultrasonido si fuera
'
S~l~ción estándar B: Someter a ultrasonido una por-
cion de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente hasta obtener una solución con una concentra-
~ión d~, aproximadame,nte 20 mg/ml. Antes de la
inyeccion, pasar a traves de un filtro de membrana con
los primeros mL del filtrado.
Solución muestra: Usar la Tintura. Antes de la inyec-
ción, pasar a través de un filtro de membrana con un
tamaño de poro de 0,45 µm o menor desechando los
primeros mL del filtrado. '
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; con recubrimiento ex-
haustivo (end-capped), relleno L1 de 5 µm, 100 A
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar A y Solución estándar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución estándar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
ácido valerénico, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2 0% para
el pico de ácido valerénico en inyecciones r~petidas
Solución estándar A '
Análisis
Muestras: Solución estándar A, Solución estándar B y
Solución muestra
Identificar los ácidos valerénicos en el cromatograma de
la Solución muestra por comparación con los cromato-
gramas de la Solución estándar A, Solución estándar B y
USP 37
el cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular el porcentaje de ácidos valerénicos (la suma de
ácido hidroxivalerénico, ácido acetoxivalerénico y
ácido valerénico) en la porción de Tintura tomada:
Resultado = {[:E(ru x f)]/rs} x Cs x O, 1
ru = áreas de los picos de los analitos pertinentes
de la Solución muestra
F = factor de conversión para cada analito
(1, 1O para ácido hidroxivalerénico, 1,25 para
ácido acetoxivalerénico y 1,00 para ácido
valerénico)
rs = área del pico de ácido valerénico de la
Solución estándar A
Cs = concentración de ácido valerénico en la
Solución estándar A (mg/mL)
Criterios de aceptación: No menos de 0,015% de áci-
dos valerénicos, calculado como la suma de hidróxido
valerénico, ácido acetoxivalerénico y ácido valerénico
OTROS COMPONENTES
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método I (611): No menos
de 90,0% y no más de 110,0% de la cantidad declarada
de alcohol (C2HsOH)
CONTAMINANTES
• ARTÍCULOS DE ORIGEN BOTÁNICO, Método General para Aná-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre oficial del artí-
culo, el nombre científico en latín y la parte de la planta
de la que se preparó el artículo. Etiquetar indicando el
contenido de ácidos valerénicos, la mezcla de disolventes
usada para la extracción y la relación entre el material
vegetal crudo inicial y la Tintura.
• ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Valerénico USP
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
Vallna-ver Valina en Monografías Generales
Vinpocetina
C22H26N202 350,45
Eburnamenine-14-carboxylic acid, ethyl ester, (3a, 16a)-;
Etil apovincamin-22-oato [42971-09-5).
DEFINICIÓN
La Vinpocetina contiene no menos de 98,5% y no más de
101,5% de C22H26N202, calculado con respecto a la sus-
tancia seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. ABSORCIÓN EN EL INFRARROJO (197K)
• B. El tiempo de retención del pico principal de la Solu-
ción muestra corresponde al del pico principal de la So/u-
Suplementos Dietéticos/ Vinpocetina 6197
ción madre del estándar, según se obtienen en la prueba
de Impurezas Orgánicas.
VALORACIÓN
• VOLUMETRÍA
(Ver Volumetría (541 ).)
Muestra: 300 mg de Vinpocetina en 50 mL de una
mezcla de anhídrido acético y ácido acético (1: 1)
Sistema volumétrico
Modo: Valoración directa
Solución volumétrica: Ácido perclórico O, 1 N SV
Detección del punto final: Potenciométrica
Análisis
Realizar una determinación con un blanco y hacer las
correcciones necesarias. Calcular el porcentaje de
C22H26N202 en la Muestra tomada:
Resultado = [(V - B) X N X F X 100)/W
V = volumen de solución volumétrica consumida
por la Muestra (mL)
B = volumen de solución volumétrica consumida
por el blanco (mL)
N normalidad de la solución volumétrica
=
(mEq/mL)
F = factor de equivalencia, 350,5 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 98,5%-101,5% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
Impurezas lnorgánic~s
• RESIDUO DE INCINERACION (281): No más de o, 1%
• METALES PESADOS, Método 11 (231 ): 1o ppm
Impurezas Orgánicas
• PROCEDIMIENTO
Solución de acetato de amonio: 15,4 g/L de acetato
de amonio en agua
Fase móvil: Acetonitrilo y Solución de acetato de amo-
nio (55:45)
Solución muestra: 1,00 mg/mL de Vinpocetina en Fase
móvil
Solución madre del estándar: 0,02 mg/mL de ER Vin-
pocetina USP en Fase móvil
Solución estándar 1: O, 12 mg/mL de ER Compuesto
Relacionado A de Vinpocetina USP y O, 1O mg/mL de ER
Compuesto Relacionado B de Vinpocetina USP, de ER
Compuesto Relacionado C de Vinpocetina USP y de ER
Co,~puesto Relacionado D de Vinpocetina USP en Fase
mov1I
Solución estándar 2: Diluir 1,0 mL de Solución madre
del estándar y 1,0 mL de Solución estándar 1 con Fase
móvil hasta 20,0 mL.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flu¡'o: 1,0 mL/min
Cromatografiar a Solución madre del estándar y la So-
lución estándar 2 e identificar el pico de vinpocetina
y los picos debidos a los compuestos relacionados
listados en la Tabla de Impurezas 1.
Volumen de inyección: 15 µL (volúmenes iguales
duplicados)
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar 2
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,0 entre compuesto rela-
cionado B de vinpocetina y compuesto relacionado
D de vinpocetina
Análisis
Muestras: Solución muestra y Solución estándar 2
Registrar los cromatogramas durante un mínimo de
tres veces el tiempo de retención de vinpocetina. No
6198 Vinpocetina / Suplementos Dietéticos USP 37

tomar en cuenta los picos con un área menor de 0,5 Solución muestra: 1 O mg/ml en dimetilformamida
veces el área del pico debido a vinpocetina en la So-
lución estándar 2. Calcular el porcentaje de los com- REQUISITOS ADICIONALES
puestos relacionados A, B, C y D de vinpocetina en la • ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
porción de Vinpocetina tomada: cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Resultado == (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Vinpocetina USP
ru == respuesta del pico de cada una de las ER Compuesto Relacionado A de Vinpocetina USP
impurezas conocidas de la Solución muestra ER Compuesto Relacionado B de Vinpocetina USP
r5 == respuesta del pico del Estándar ER Compuesto Relacionado C de Vinpocetina USP
correspondiente para cada una de las ER Compuesto Relacionado D de Vinpocetina USP
impurezas conocidas de la Solución estándar
2
C5 == concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente para cada una de las
impurezas conocidas en la Solución estándar Vitamina A-ver Vitamina A en Monografías
2 (mg/ml)
Cu == concentración de Vinpocetina en la Solución Generales
muestra (mg/ml)
Calcular el porcentaje de cualquier impureza individual no
especificada, como vinpocetina, en la porción de
Vinpocetina tomada: Vitamina A, Cápsulas-ver Vitamina A,
Cápsulas en Monografías Generales
Resultado == (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru == respuesta del pico de cada una de las
impurezas no especificadas de la Solución
muestra Vitamina A, Preparación Oral Líquida-
r5 == respuesta del pico de vinpocetina de la ver Preparación Oral Líquida de Vitamina A en
Solución estándar 2 Monografías Generales
Cs == concentración de ER Vinpocetina USP en la
Solución estándar 2 (mg/ml)
Cu == concentración de Vinpocetina en la Solución
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: Ver la Tabla de Impurezas 7. Vitamina 86, Tabletas-ver Clorhidrato de
Piridoxina, Tabletas en Monografías Generales
Tabla de Impurezas 1
Tiempo de Criterios de

Nombre
Retención
Relativo
Aceptación,
No más de CD/o\
Vitamina C, Tabletas-ver Ácido Ascórbico,
Vinoocetina 1 00 -
Tabletas, en Monografías Generales
Compuesto relacionado 0,40 0,6
A de vinpocetina•
Compuesto relacionado
B de vinPocetinah
0,75 0,5 Vitamina E-ver Vitamina E en Monografías
Compuesto relacionado 0,83 0,3
Generales
cde vinoocetina'
Compuesto relacionado 0,68 0,5
D de vinpocetinad
Impureza individual - 0,1
Vitamina E, Cápsulas-ver Vitamina E,
no especificada Cápsulas en Monografías Generales
Impurezas totales - 1 o
'Etil (12RS, 13a5R,1 3b5R)-13a-etil-12-hidroxi-2,3,5,6, 12, 13,13a,1 3b-octahi-
dro-1H-indolo[3,2,1-de]pirido[3,2, 1-ij][l ,5]naftiridin-12-carboxilato (etil
vincaminato). Vitamina E, Preparación-ver Vitamina E,
b Metil (1 3a5, 1 3b5)-13a-etil-9-metoxi-2,3,5,6, 13a,1 3b-hexahidro-1 H-indolo
[3,2, 1-de]pirido[3,2, 1-ij][l ,5]naftiridina-12-carboxilato (apovincamina). Preparación en Monografías Generales
'Etil (13a5,1 3bS)-1 3a-etil-1O-metoxi-2,3,5,6, 13a,1 3b-hexahidro-1 H-indolo
[3,2, 1-de]pirido[3,2, 1-ij][l ,5]naftiridin-12-carboxilato (metoxivinpocetina).
d Etil (12RS, 13aRS, 13bR5}-l 3a-etil-2,3,5,6, 12, 13, 13a, 13b-octahidro-1 H-in-
dolo[3,2, 1-de]pirido[3,2, 1-ij][l ,5]naftiridin-12-carboxilato (dihidrovinpoce-
tina).
Succinato de Vitamina E y
Polietilenglicol-ver Succinato de Vitamina
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PÉRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra al vacío a E y Polietilenglicol en NF
100º d,urapte 3 horas: No más de 0,5%
• ROTACION OPTICA, Rotación específica (781 S): De +127,0º
a + 134,0º, determinada a 20º.
USP 37
• BIOTINA, Método 1
Vitaminas Hidrosolubles, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Vitaminas Hidrosolubles contienen dos o
más de las siguientes vitaminas hidrosolubles: Ácido As-
córbico o su equivalente como Ascorbato de Calcio o As-
corbato de Sodio, Biotina, Cianocobalamina Ácido Fólico
Dexpantenol o Pantenol, Niacina o Niacina~ida Ácido '
Pantoténico (como Pantotenato de Calcio o PanÍ:otenato
de Calcio Racémico), Clorhidrato de Piridoxina Ribofla-
vina y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato cÍe Tiamina.
Las Cápsulas contie~en no menos de 90,0% y no más de
150,0% de las cantidades declaradas de ácido ascórbico
(C6Hs06), biotina (C10H16N203S), pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2Ü10), cianocobalamina (C63HssCoN 140 14P)
ácido fólico (C19H191':M?6), dexpantenol (S:9~19N0 4 ) o 1pan-
tenol (C9H19NÜ4), rnacina (C6HsN02) o rnacmamida
(C5H5N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI) ri-
boflavina (C11H20N4Ü5) y tiamina (C12H11CIN40S) comb
clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A, D, E o K. No contienen minerales para los que se de-
clare un valor nutrimental. Pueden contener otras sustan-
cias agregadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[~OTA-~n las sigui~ntes valoraciones, cuando se propor-
~1or:i~ mas de un ~e.todo de valoración para un ingrediente
m~1v1dual, los requ1s1tos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.], , Muestras: Solución estándar y Solución muestra
• ACIDO ASCORBICO
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco ~e pesada t~rado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de éter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cápsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un fr~sco de ¡;>esada tarado y calcu-
lar e~ peso neto pr<?med10 por Sapsula. Transferir una
porc1on ?el conte~1do de las Capsulas, equivalente a
una cantidad nominal de 100 mg de ácido ascórbico a
un matraz volumétrico de 200 mL y agregar 75 mL cÍe
• BIOTINA, Método 2
áci_do metafo~fórico-ácido acético SR. Tapar el matraz y
agitar mecarncamente durante 30 minutos. Diluir con
agua a volumen. Transferir una porción de la solución a
un tubo de centrífuga y centrifugar hasta obtener un
sobrenadante transparente. Pipetear y transferir 4 O mL
de esta solución a un matraz Erlenmeyer de 50 m'L y
agregar 5 mL de ácido metafosfórico-ácido acético SR.
Análisis: Valorar con solución estándar de dicloro-
fenol-indofenol SV hasta un color rosado que persista
durante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen
de solución estándar de diclorofenol-indofenol consu-
mido por una mezcla de 5,5 mL de ácido metafosfóri-
co-ácido acético SR y 15 mL de agua. A partir del equi-
valente de ácido ascórbico de la solución estándar de
diclorofenol-indofenol, calcular el contenido de ácido
ascórbico en cada Cápsula.
Criterios de aceptacion: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6H8 0 6)
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca0 12 . 2f-,'20)
• ASCORBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H7Na0 6)
Suplementos Dietéticos ! Vitaminas Hidrosolubles 6199
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: M_ezclar 85 mL de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 mL de ácido fosfórico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
S~lución mad~e d~I est~ndar: 0,333 mg/mL de ER Bio-
tina USP en d1metil sulfoxido
Solución e~tándar: 5 µg~mL de ER Biotina USP que se
prep?!ª diluyendo Solucion madr~ del estándar en, agua.
Solu~10~ muestr~,: Proceder segun se indica en Acido
Ascorb1co, hasta calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cáps_ul~s, equivalente a una ca~tidad nominal de 1 mg
de b1ot1na, a un matraz volumetrico de 200 ml. Agre-
gar 3 mL de dimetil sulfóxido y agitar por rotación
suave para humedecer el contenido. Colocar el matraz
en un baño de agua a 60º-70º durante 5 minutos. So-
meter a ultras?nido durante 5 minutos, diluir con agua
a volumen y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Medir !as áreas de !os picos de biotina. Calcular el por-
centa1e de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N2Ü3S) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
rs = área del pico de biotina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pue?en us~r r:riezclas deshidr~tadas que presenten for-
mul_ac~ones s~m1lares a los medios descritos en este pro-
ce~1m!ento siempre q~e, cuando se reconstituyan según
se. 1nd1c~, tengan prop1_edades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: O, 1 ng/mL de ER Biotina USP en
agua, que se prepara diluyendo Solución madre del es-
tandar con agua el día de la valoración.
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
C~psula". Transferir una porción del contenido de las
Capsulas, equivalente a 100 µg de biotina, a un matraz
volumétrico de 200 ml. Agregar 3 mL de alcohol al
50% y agitar por rotación suave hasta humedecer el
contenido. Calentar el matraz en un baño de agua a
60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
r~nte 5 r:rii~utos, ~ilui! con alcohol al 50% a volumen y
filtrar. Diluir cuant1tat1vamente un volumen del filtrado
y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con agua '
6200 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
para obtener una solución con una concentración de
O, 1 ng/ml.
Solucion de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
1 00 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1 O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1 O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
cíorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina- 5 ml
clorhidrato de oiridoxina
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
USP 37
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37° mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 ml de Solución madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodón, esterilizar en
un autoclave a 121 º durante 15 minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo esté-
ril que contenga 1 O ml de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37° mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 ml de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados para la
Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradifla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la contami-
nación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro que no contienen
Solución estándar (los blancos no inoculados). Incubar
los tubos a una temperatura entre 30º y 37º mante-
nida termostáticamente con un margen de ±0,5º hasta
que, después de 16-24 horas de incubación, no se
presente un aumento significativo de turbidez en los
tubos que contengan el nivel más alto de Estándar du-
rante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotómetro. Colocar la celda en
un espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
1 ATCC Nº 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Loc-
tobocil/us orobinosus 17-5.
USP 37
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta, según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (Ls)
como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en función
del logaritmo de los ml de la Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solución mues-
tra. Leer a partir de la curva estándar el logaritmo del
volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el loga-
ritmo del volumen, en ml, de la Solución muestra para
obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifica-
ción. Promediar los valores de X para cada uno de tres
o más niveles de dosificación para obtener X, que es
igual al logaritmo de la potencia relativa, M', de la
Solución muestra. Determinar la cantidad, en µg, de
biotina (C10H16N203S) en la porción de Cápsulas
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de biotina que se supuso
estaban presentes en la porción de Cápsulas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N203S) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de biotina en la porción de
Cápsulas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseño y Análisis de Va/oraciones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Límites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en más
de 0,08, realizar una o más determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dos o más valores de M que
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• CIANOCOBALAMINA, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua
Solución muestra: Pesar no menos de 30 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6201
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de éter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cápsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cápsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cápsulas, equivalente a
100 µg de cianocobalamina, a un matraz de 250 ml.
Agregar cuantitativamente 100,0 ml de agua y extraer
cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar 1O ml del
extracto y usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de cianocobalamina. Cal-
cular el porcentaje de la cantidad declarada de ciano-
cobalamina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado"' (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de cianocobalamina de la
Solución muestra
rs = área del pico de cianocobalamina de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HssCON14Ü14P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar: 1,0 ~Lg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que, después del periodo de incubación se-
gún se describe en Análisis, la diferencia en la transmi-
tancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml de
la Solución estándar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 y 0,04 ng/ml de la Solución estándar. Preparar
esta solución en el momento de su uso para cada
valoración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1,0 µg de cianocobalamina, a
un vaso apropiado que contenga, por cada g del conte-
nido de las Cápsulas tomado, 25 ml de una solución de
extracción acuosa preparada justo antes de su uso que
contiene 12, 9 mc;:¡/ml de fosfato di básico de sodio,
11,0 mg/ml de acido cítrico anhidro y 1 O mg/ml de
metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 º du-
rante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier partí-
cula del extracto sin disolver y filtrar o centrifuc:¡ar, si
fuera necesario. Diluir una alícuota de la solucion trans-
parente con agua hasta obtener una solución final que
6202 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
contenga una actividad de vitamina B12 equivalente
aproximadamente a la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 ml de
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1 O g de fosfato di básico de potasio en
agua para obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 100 µg de biotina y
20 mg de niacina en ácido acético 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion vitamínica B: Disolver 20 mg de ácido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m.9. de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de ácido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la fórmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
2, disolviendo cuidadosamente Cistina y Triptófano en
el ácido clorhídrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solución resultante. Agregar 1,00 ml de
agua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido as-
córbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar Solución de
polisorbato 80, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un
pH entre 5,5-6,0 y agregar Agua Purificada hasta
250 ml.
Tabla 2
L-Cistina O1 a
L-Triotófano O 05 a
Ácido clorhídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de xantina 5 ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de asoaraaina 5 ml
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro
5 a
Ácido ascórbico 1 a
Solución de oolisorbato 80 5 ml
USP 37
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya según se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la fórmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar
1 O ml de Preparación de jugo de tomate y 1 ml de Solu-
ción de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml.
Colocar porciones de 1 O ml de la solución en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O ml del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacil/us /eichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O ml de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. Inocular tres o más de los tubos, sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 2
[NOTA-Antes de usar por primera vez en esta valora-
ción un cultivo recientemente preparado, realizar no
menos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un
periodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura entre
30º y 40º mantenida termostáticamente con un mar-
gen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el lnóculo
si tienen más de 4 días de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias diarias o dos veces al día del cultivo por pun-
ción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus leich-
mannii a dos tubos estériles que contengan 1 O ml de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30º y 40º
mantenida termostáticamente con un margen de ±0,5º.
Centrifugar los cultivos en condiciones asépticas y de-
cantar el sobrenadante. Suspender las células del cultivo
en 5 ml de Medio de suspensión estéril y combinar.
Usando Medio de suspensión estéril, ajustar el volumen
de manera que una dilución 1 en 20 en solución salina
SR produzca una transmitancia del 70% cuando se lee
en un espectrofotómetro adecuado ajustado a una Ion-
' Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus leichmannii (listados como
Lactobacillus delbrueki1) como N· 7830 en ATCC, 10801 University Blvd., Ma-
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.org).
USP 37
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1 O mm, y leída contra solución salina SR ajustada a una
transmitancia del 100%. Preparar una dilución 1 en 400
de la suspensión ajustada usando Solución madre de me-
dio basal estéril. [NOTA-Esta dilución se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.] La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, y con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario se deben limpiar meticulo-
samente, usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por. 9uplic?do, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de fa Solucion estandar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no más de 1 O minutos, precalentando el autoclave, si
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zación y enfriamiento durante toda la valoración,
puesto que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 ml de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. Este estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o más. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminación con un microorganismo extraño, no to-
mar en cuenta los resultados de la valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6203
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta mediante el siguiente procedimiento. Deter-
minar y reemplazar cualquier transmitancia individual
aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular la res-
puesta a partir de la suma de los valores duplicados de
las transmitancias (Ls) como la diferencia, y= 2,00 - Ls.
Graficar esta respuesta en la ordenada del papel milime-
trado en función del logaritmo de los mL de la Solución
estándar por tubo sobre la abscisa, usando una escala
aritmética o logarítmica para la ordenada, la que pro-
porcione la mejor aproximación a una línea recta. Tra-
zar la recta o la curva de regresión que mejor se ajuste
a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solución mues-
tra. Leer a partir de la curva estándar el logaritmo del
volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solución muestra
para obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifi-
cación. Promediar los valores de X para cada uno de
los tres o más niveles de dosificación para obtener X,
que es igual al logaritmo de la potencia relativa, M',
de la Solución muestra. Determinar la cantidad, en µg,
de cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción
de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porción de
Capsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Cápsulas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Actividad de Vitamina 812 en Di-
seño y Análisis de Valoraciones Biológicas (111 ), El Inter-
valo de Confianza y los Límites de Ja Potencia). Si las dos
determinaciones difieren en más de 0,08, realizar una o
más determinaciones adicionales. A partir de la media
de dos o más valores de M que no difieran en más de
O, 15, calcular la potencia media de la preparación que
se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar§lda de ci,anocobalamina (C63HssCoN14Ü14P)
• Ac100 Fouco, Metodo 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
en metano! al 25%
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
matraz volumétrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
dróxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de ácido fosfórico 3 N y 240 ml de metano!.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso, agregando agua o metanol a la Fase móvil pre-
parada, para obtener una separación de la línea base
entre el ácido fólico y el estandar interno. El pH se
6204 Vitaminas Hidrosolubles / Sup!Pmentos Dietéticos
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA- El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1 000 ml y
agregar 220 ml de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
a9ua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. , Modo: HPLC
Solución estándar: 0,016 mg/ml de ER Acido Fálico
USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas a un tubo de centrífu9a adecuado y agregar
un volumen de Solución de estandar interno para obte-
ner una concentración nominal de 0,016 mg/ml de
ácido fálico. Agitar mecánicamente durante 1 O minutos
y centrifugar. Filtrar una porción del sobrenadante
transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fálico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0º!0
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fálico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de ácido fálico (C19H19N106) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fálico y metilparabeno de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fálico y metilparabeno de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fálico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fálico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar~da de ácido fálico (C19H19N106)
• ACIDO Fouco, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 60 µg/ml de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosul-
fonato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Ácido
Fálico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
del estándar con 10,0 ml de una mezcla de metano! y
ácido acético glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de
metano! y etilenglicol (1 :1 ). Agitar durante 15 minutos
USP 37
en un bafío de agua mantenido a 60c y enfriar. Filtrar,
desechando los primeros ml del filtrado. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a O, 3 mg de ácido fálico, a un
matraz de 125 ml con tapón. Agregar 10,0 ml de una
mezcla de metano! y ácido acético glacial (9:1 ), y
30,0 ml de una mezcla de metano! y etilenglicol (1 :1 ).
Agitar durante 15 minutos en un baño de agua mante-
nido a 60" y enfriar. Filtrar, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fálico
(C19H19N106) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de ácido fálico de la Solución
muestra
rs = área del pico de ácido fálico de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fálico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fálico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fálico (C,9H19N106)
Cambio en la redacción:
• DEXPANTENOL o PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 800 µg/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 µg/ml de ER Pantenol Racémico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 días .
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
una dilución de 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml
de pantenol, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua.
Solución muestra: Pesar no menos de 30 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir, tanto como sea
posible, el contenido a un vaso de precipitados. Retirar
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías lavando con varias porciones de éter. Dese-
char los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas
con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcular el
USP 37
peso neto promedio por Cápsula. Disolver una porción
del contenido de las Cápsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 1 00,0 ml de agua. Diluir cuantitativamente una por-
ción de esta solución con agua para obtener una con-
centración de 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml
de pantenol.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 m_L de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación a presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 ± O, 1 y diluir con agua hasta 1000 ml. Agreg.ar
20 g de carbón activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbón activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
tura de no menos de 1 Oº. Filtrar la solución si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 ± 5º y agregar solución de ácido clorhídrico (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina_, l_O µg/m_L _de clo;~idrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de b1ot1na en ac1do acet1co
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado al 25%. Almace-
nar en un refrigerador.
Solución salina A: 50 mg/ml de fosfato monobásico de
potasio y 50 mg/ml de fosfato dibásico de potasio en
agua. Agregar 1 O gotas de ácido clorhídrico por L de
solución. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: 20 mg/ml de sulfato de magnesio,
1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de sulfato fe-
rroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en agua.
Agregar 1 O gotas de ácido clorhídrico por L de la solu-
ción. Almacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: 200 µg/
ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 1 0%. Almacenar en un
refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: 50 mg/ml
de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de ácido oleico en al-
cohol al 20%. Almacenar en un refrigerador y usar den-
tro de los 30 días.
Medio de pantotenato modificado: •Disolver dextrosa
anhidra y acetato de sodio anhidro. ERR (Ol-feb-2014¡ en las
soluciones previamente mezcladas de acuerdo con la
Tabla 3 y ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 6,8. Diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de polisorbato 80 O 25 ml
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6205
Tabla 3 (Continuocion)
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracila 5 ml
Solución de riboflavina--clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio 5 ml
Solución de polisorbato 40--ácido oleico 5 ml
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pa.ntote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
ción final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediocaccus acidilactici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancreático de caseína, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidróxido de so-
dio O, 1 N o ácido clorhídrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar porciones de
1O ml de la solución a tubos de cultivo, tapar los tubos
y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar los tubos en un plano inclinado y almacenar en
un refrigerador. Preparar un cultivo mad~e de Pediococ-
cus acidilactici3 en un tubo con este medio. Incubar a
35º durante 20-24 horas y almacenar en un refrigera-
dor. Mantener el cultivo madre mediante transferencias
mensuales a tubos con medio inclinado preparado re-
cientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado estéril, a partir de un cultivo ma-
dre en medio inclinado e incubar a 35º durante 20-24
horas. Centrifugar la suspensión a partir de las porcio-
nes combinadas y lavar las células con Medio de panto-
tenato modificado estéril. Resuspender las células en sufi-
ciente Medio de pantotenato modificado estéril de .
manera que una dilución 1 en 50, cuando se analiza en
un tubo de ensayo de 1 3 mm de diámetro, proporcione
80% de transmisión de luz a 530 nm. Transferir porcio-
nes de 1,2 ml de esta suspensión madre a ampollas de
vidrio estériles, sellar, congelar en nitrógeno líquido y
almacenar en un congelador. En el día de la valoración,
dejar que las ampollas alcancen !a ~emperatura a~­
biente, mezclar el contenido y diluir 1 ml de cultivo
descongelado con solución salina estéril SR hasta
150 ml. [NOTA-Esta dilución se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba
deseada.]
Análisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3 O; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3'.0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado ~na serie d~ cinco tubos de cul-
tivo agregando las s1gu1entes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solución
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentración a cada tubo. Tapar los tubos con
tapas de metal y esterilizar en un autoclave a ~ 21 º
durante 5 minutos. Enfriar a temperatura ambiente en
un baño de agua fría e inocular cada tubo con 0,5 ml
del lnócu/o. Dejar que se incube a 37º durante 16 ho-
ras. Detener el crecimiento calentando a una tempera-
1 ATCC N 8042 es adecuado.
6206 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
tura de no menos de 80º, por ejemplo mediante la
aplicación de vapor a presión atmosférica en un esteri-
lizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y determinar la
transmitancia porcentual de las suspensiones, en celdas
de igual longitud de paso, en un espectrofotómetro
adecuado, a una longitud de onda de 530 nm.
Cálculo: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
para gráficos aritméticos, graficando la respuesta pro-
medio, como porcentaje de transmitancia, para cada set
de tubos de la curva estándar en función de las concen-
traciones del nivel del Estándar. La curva se traza conec-
tando cada par adyacente de puntos con una línea
recta. A partir de esta curva estándar, determinar me-
diante interpolación la potencia de cada tubo que con-
tenga porciones de Solución muestra. Para obtener las
respuestas individuales, dividir la potencia de cada tubo
por la cantidad de Solución muestra que se le agregó.
Calcular la respuesta media promediando las respuestas
individuales que varían de su media en no más de 15%,
usando no menos de la mitad del número total de tu-
bos. Calcular la potencia de la porción del material to-
mado para la valoración, multiplicando la respuesta me-
dia por el factor de dilución apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol (C9H19NÜ4) en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia de dexpantenol o pantenol en la
porción de Cápsulas tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porción de Cápsulas tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19NÜ4)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 1
Fase móvil: Ácido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno , 100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas mezclado y un volumen de Solución de están-
dar interno a un tubo de centrífuga para obtener una
concentración nominal de 0,6 mg/ml en la Solución
muestra.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio y
el estándar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(C18H32CaN2010) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
USP 37
Ru = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
R1 = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la absorción de humedad mientras se
pesa, en 500 ml de agua en un matraz volumétrico de
1 000 ml. Agregar 1 O ml de ácido acético 0,2 N y
100 ml de solución de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
ción de 50 µg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en el
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de la Solución estándar,
están dentro de la porción lineal de la curva de res-
puesta del logaritmo de la concentración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de 50 mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumétrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con a9ua a volumen y
filtrar. Diluir un volumen de esta solucion hasta obtener
una solución con aproximadamente la misma concen-
tración que la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación a presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-
biotina: 20 µg/ml de riboflavina, 1O µg/ml de clorhi-
drato de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acé-
USP 37
tico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador
y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/mL de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/mL de niacina y 40 µg/mL de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 4, y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 4
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro So
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de niridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 1 00 mL de agua.
Agregar 500 mg de dextrosa anhidra, 500 mg de ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la
mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se
disuelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la solu-
ción caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum 1,
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37° mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo esté-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6207
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados de la Solu-
ción estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 mL. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura óptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (Ls),
como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en función
del logaritmo de los mL de la Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estándar. Restar de cada logaritmo así obtenido, el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solución muestra
para obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifi-
cación. Promediar los valores de X para cada uno de
los tres o más niveles de dosificación para obtener X,
que es igual al logaritmo de la potencia relativa, M',
de la Solución muestra. Determinar la cantidad, en mg,
de pantotenato de calcio (C18H,2CaN2010) en la por-
ción de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
6208 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Cápsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (CrnHi2CaN2010) en la porción
de Cápsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Cápsulas tomada (mg) . gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado: Si la diferenc~a entre los dos
logaritmos de las potencias M es no mas de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valo!aciones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confwnza y los L1m1tes ,de
la Potencia). Si las dos determ1nac1ones d1f1eren en mas
de O 08 realizar una o más determinaciones adiciona-
les. Á p~rtir de la media de dos o más valores de M que
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando. . Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C,sH32CaN2Ü10)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Solución amortiguadora: Disolver 1 0,0 g de fosfato
monobásico de potasio en 2000 ml de agua y ajustar
con ácido fosfórico a un pH de 3,5.
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar nuevamente
cada 4 semanas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua , tos más y mezclar en un mezclador de vórtice durante
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 O mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumétrico de
250 ml. A9regar 1 O ml de metanol y agitar el matraz
por rotacion suave hasta dispersar el contenido d_e las
Cápsulas. Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromatowáfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C,sHi2CaN2010) en la porción
de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
r5 = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C18H12CaN2Ü10)
USP 37
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94)
Fase móvil: Una mezcla de metanol, ácido acético gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina_ USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumétrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
baño de agua caliente mantenido a 65º-70º durante 1 O
minutos, agitando regularmente o usando un mezcla-
dor de vórtice, hasta gue se disuelvan todos los mate-
riales sólidos. Enfriar rapidamente en un ba~o de ag~a.
fría durante 1 O minutos a temperatura ambiente y d1lu1r
con Diluyente a volumen. ,
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 r:ig
de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrífuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vórtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrífuga en un baño de agua caliente mantenido a
65º-70º, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al baño de agua caliente, calentar durante 5 minu-
30 segundos. Filtrar una porción de la solución, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtración.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C 6 H6 N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
r5 = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contienen niacina:
USP 37
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
= concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH1, N03 ·
HCI), riboflavina (Ci 1H20N406) y clorhidrato de
tiamina (Ci2H11CIN40S · HCI) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (Mr1!Mr2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Mr1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20) o niacina
(C6H5 N02), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI),
riboflavina (C11H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
• NIACINA, Método 2 • NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metanol (3:1)
Fase móvil: Solución de acetato de sodio O, 1 M
(1 3,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
un volumen pequeño de metanol (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulación.] Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados. Retirar cualquier contenido ad-
herido a las cubiertas lavando con varias porciones de
éter. Desechar los lavados y secar las cubiertas de las
Suplementos Dit>téticos /Vitaminas Hidrosolubles 6209
Cápsulas con ayuda de una corriente de aire seco. Pesar
las cubiertas de las Cápsulas vacías en un frasco de pe-
sada tarado y calcular el peso neto del contenido de las
Cápsulas. Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de 2 mg
de riboflavina, a un matraz volumétrico de 200 ml. Si la
riboflavina no se encuentra presente en la formulación,
usar una porción equivalente a una cantidad nominal
de 2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se encuentra
presente en la formulación, usar una porción equiva-
lente a una cantidad nominal de 20 mg de niacina o
niacinamida. Agregar 1 00,0 ml de Disolvente de extrac-
ción y mezclar durante 20 minutos, usando un agitador
de movimiento tipo muñeca (wrist-action). Sumergir el
matraz en un baño de agua mantenido a 70º-75º y
calentar durante 20 minutos. Mezclar en un mezclador
de vórtice durante 30 segundos, enfriar a temperatura
ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyección.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6Hs02)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil, Solución madre
del estándar, Solución estándar, Solución muestra y
Sistema cromatográfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder según se indica
en Niacina, Método 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C 6 H6N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
r5 = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
621 O Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil y Solución mues-
tra: Preparar según se indica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Clorhidrato de Piri-
doxina USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con Disolvente de extracción
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11NOi · HCI) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de piridoxina de la Solución
muestra
r1 = área del pico de piridoxina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi · HCI)
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción y Solución muestra: Preparar
según se indica en Niacina, Método 2.
Solución A: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina ¡or L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacia a un pH de
5,2.
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C i 1H20N406) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (C1/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
rs = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C, 1H20N406)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en ácido fosfórico al O, 1 %
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en ácido clorhídrico 0,2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Mezclar una porción del contenido de las
Cápsulas con un volumen de ácido clorhídrico 0,2 N
para obtener una concentración nominal de 0,02 mg/
ml de tiamina. Agitar durante 15 minutos con un agi-
tador de movimiento tipo muñeca (wrist action) y ca-
lentar a ebullición durante 30 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN4QS · HCI) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tia mina (C12H11Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (Mr1/Mr2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
USP 37
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/mL)
M,1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H17CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H17Ns04S)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/mL de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 mL de trietilamina, 15,0 mL
de ácido acético glacial y 350 mL de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/mL de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/mL de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/mL de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/mL de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 mL de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 mL con tapón. Agregar
10,0 mL de una mezcla de metano! y ácido acético gla-
cial (9:1) y 30,0 mL de una mezcla de metano! y etiíen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros mL del filtrado. , M,1
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 7,5 mg de niacina o niacina-
mida, 1,2 mg de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de
riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un
matraz de 125 mL con tapón. Agregar 10,0 mL de una
mezcla de metano! y ácido acético glacial (9: 1), y
30,0 mL de una mezcla de metano! y etilenglicol (1 :1 ).
Tapar, agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros mL del filtrado.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
r5 = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6211
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/mL)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CaH11 NOi ·
HCI), riboflavina (C11H2 0 N40 6) y clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN405 · HCI) (para productos que
contengan clorhidrato de tiamina) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
rs = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru!r1) x (C1/Cu) x (M,i/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/mL)
= peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi · HCI),
riboflavina (C17H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Cáp-
sulas de Vitaminas Hidrosolubles. La etiqueta también in-
dica la cantidad de cada vitamina en términos de unida-
des métricas por unidad de dosificación y, cuando sea
necesario, la forma salina presente. Cuando se propor-
ciona más de un método de valoración para una vita-
mina en particular, el etiquetado indica el método de
valoración usado únicamente si no se usa el Método 7.
Cuando los productos declaran contener pantenol, la eti-
queta indica el contenido equivalente de dexpantenol.
6212 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos USP 37

• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11) • ÁCIDO ASCÓRBICO

ER Biotina USP Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
Ácido (3aS,4S,6aR)-hexahidro-2-oxo-1 H-tieno[3,4-d]imi- 20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
dazol-4-valérico. lente a una cantidad nominal de 100 mg de ácido as-
C10H16N20iS 244,31 córbico, a un matraz volumétrico de 200 mL y agregar
ER Pantotenato de Calcio USP 75 mL de ácido metafosfórico-ácido acético SR. Tapar el
D-Pantotenato de calcio (2: 1). matraz y agitar mecánicamente durante 30 minutos. Di-
Cl8Hi2CaN2010 476,53 luir con agua a volumen. Transferir una porción de la
ER Cianocobalamina USP solución a un tubo de centrífuga y centrifugar hasta
Vitamina B12. obtener un sobrenadante transparente. Pipetear y trans-
C61H8sCoN14Ü14P 1355,37 ferir 4,0 mL de esta solución a un matraz Erlenmeyer de
ER Dexpantenol USP 50 mL, y agregar 5 mL de ácido metafosfórico-ácido
D-( +)-2,4-Dihidroxi-N-(3-hidroxipropil)-3,3- acético SR.
dimetilbutiramida. Análisis: Valorar con solución estándar de diclorofe-
C91;-l19NQ4 205,25 nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
ER Acido Fólico USP rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
Ácido N-[4-[[(2-amino-1,4-dihidro-4-oxo-6-pteridinil)me- solución estándar de diclorofenol-indofenol consumido
til]am i no ]benzoil]-L-glutámico. por una mezcla de 5,5 mL de ácido metafosfórico-ácido
C19H19N106 441,40 acético SR y 15 mL de agua. A partir del equivalente de
E~ Niacina USP ácido ascórbico de la solución estándar de diclorofe-
Acido nicotínico. nol-indofenol SV, calcular el contenido de ácido ascór-
C6HsN02 123, 11 bico en cada Tableta.
ER Niacinamida USP Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
Nicotinamida. declarada de ácido ascórbico (C6Hs06) ,
C6H6N20 122, 12 • ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Acido
ER Pantenol Racémico USP Ascórbico.
(±)-2, 4-Di h id rox i-N-( 3-h id ro xi pro pi 1)-3, 3-d ime ti 1-butana- Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
m ida. declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2t·fa0)
C9H19NQ4 205,25 • ASCORBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
ER Clorhidrato de Piridoxina USP Ascórbico.
Clorhidrato de piridoxol. Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
CsH11N03 · HCI 205,64 declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
ER Riboflavina USP • BIOTINA, Método 7
Riboflavina. [NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
C17H20N406 376,36 durante todo este procedimiento.]
ER Clorhidrato de Tiamina USP Fase móvil: Mezclar 85 mL de acetonitrilo, 1 g de per-
Monoclorhidrato de tiamina. clorato de sodio y 1 mL de ácido fosfórico, y diluir con
C12H11CIN4QS · HCI 337,27 agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 0,333 mg/mL de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfóxido
Solución estándar: 5 µg/mL de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solución madre del estándar en agua.
Vitaminas Hidrosolubles, Tabletas Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
DEFINICIÓN lente a una cantidad nominal de 1 mg de biotina, a un
Las Tabletas de Vitaminas Hidrosolubles contienen dos o matraz volumétrico de 200 ml. Agregar 3 mL de dime-
más de las siguientes vitaminas hidrosolubles: Ácido As- til sulfóxido y agitar por rotación suave hasta humede-
córbico o su equivalente como Ascorbato de <;alcio o As- cer el contenido. Colocar el matraz en un baño de agua
corbato de Sodio, Biotin9, Cianocobalamina, Acido Fólico, a 60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido
Niacina o Niacinamida, Acido Pantoténico (como Pantote- durante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
nato de Calcio o Pantotenato de Calcio Racémico), Clorhi- Sistema cromato9ráfico
drato de Piridoxina, Riboflavina y Clorhidrato de Tiamina (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
o Mononitrato de Tiamina. Las Tabletas contienen no me- Modo: HPLC
nos de 90,0% y no más de 150,0% de las cantidades Detector: UV 200 nm
declaradas de ácido ascórbico (C6Hs06) o su equivalente Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
como ascorbato de sodio o ascorbato de calcio, biotina Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
(C10H16N203S), pantotenato de calcio (ClBHJ2CaN2010), Volumen de inyección: 100 µL
cianocobalamina (C6JHssCoN14Ü14P), ácido fólico Aptitud del sistema
(C19H19N106), niacina (C6HsN02) o niacinamida Muestra: Solución estándar
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI), ri- Requisitos de aptitud
boflavina (C17H20N406) y tiamina (C12H11CIN4QS) como Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina. Análisis
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina Muestras: Solución estándar y Solución muestra
A, D, E o K. No contienen minerales para los que se de- Medir las áreas de los picos de biotina. Calcular el por-
clare un valor nutrimental. Pueden contener otras sustan- centaje de la cantidad declarada de biotina
cias agregadas declaradas en cantidades inobjetables. (C10H16N203S) en la porción de Tabletas tomada:

CONTENIDO Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100

[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual- rs = área del pico de biotina de la Solución
quiera de los métodos especificados, declarando el método estándar
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
7.] estándar (µg/mL)
USP 37
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N201S)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: O, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
a~ua, que se prepara diluyendo Solución madre del es-
tandar en agua en el día de la valoración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1 00 µg de biotina, a un matraz volumétrico de
200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al 50% y agitar por
rotación suave hasta humedecer el contenido. Calentar
el matraz en un baño de agua a 60º-70º durante 5
minutos. Someter a ultrasonido durante 5 minutos, di-
luir con alcohol al 50% a volumen y filtrar. Diluir un
volumen del filtrado cuantitativamente, y si fuera nece-
sario en diluciones sucesivas, con agua hasta obtener
una solución con una concentración de O, 1 ng/ml.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1 O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1 O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 621 3
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 mL
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 ml de Solución madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodón, esterilizar en
un autoclave a 121 º durante 15 minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo esté-
ril que contenga 1 O ml de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es ef lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 ml de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más niveles de los especificados de la So/u-
' ATCC N" 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente corno Lac-
tobacillus arabinosus 17-5.
6214 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
ción estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 mL. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotómetro. Colocar la celda en
un espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir de
la suma de los valores duplicados de la transmitancia
(Ls) como la diferencia, y = 2,00 - Ls. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en fun-
ción del logaritmo de los mL de la Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer a partir de la curva estándar el logaritmo del
volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el loga-
ritmo del volumen, en mL, de la Solución muestra para
obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres o
más niveles de dosificación para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de biotina (C1oH16N20 3S)
en la porción de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de biotina que se supuso
estaban presentes en la porción de Tabletas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N203S) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = [(antilog M)/N] x 100
USP 37
N = cantidad nominal de biotina en la porción de
Tabletas tomada (~1g)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valoraciones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Límites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en más
de 0,08, realizar una o más determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dos o más valores de M que
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• BIOTINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 800 mL de agua y 100 mL de
trietilamina a un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 80 mL de ácido fosfórico al 85% y diluir con agua a
volumen.
Fase móvil: Transferir 80 mL de acetonitrilo y 1 O mL de
Solución A a un matraz volumétrico de 1000 ml. Diluir
con a9ua a volumen.
Solucion estándar: 0,6 µg/mL de ER Biotina USP en
agua. [NOTA-Se usará una porción de la Solución están-
dar para determinar la recuperación porcentual de bio-
tina a fartir del procedimiento de Extracción en fase
sólida.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de Tabletas reduci-
das a polvo a un matraz volumétrico para obtener una
concentración nominal de 0,6 µg/mL de biotina. Agre-
gar agua hasta el 80% de la capacidad del matraz y
someter a ultrasonido durante 30-40 minutos, mez-
clando ocasionalmente, para disolver. Diluir con agua a
volumen y filtrar. Ajustar el pH de la solución con ácido
acético diluido o hidróxido de sodio O, 1 N a un valor
entre 6,0-7,0.
Extracción en fase sólida: [NOTA-Acondicionar la co-
lumna de extracción especificada en este procedimiento
de la siguiente manera. Lavar la columna con una por-
ción de 2 mL de metano!. Equilibrar con una porción de
2 mL de agua.]
Pipetear y transferir por separado 5,0 mL de la Solución
muestra y de la Solución estándar a columnas de ex-
tracción en fase sólida recientemente acondicionadas
que consistan en un relleno de modo mixto con una
masa de sorbente de 60 mg. [NOTA-El relleno de
modo mixto consiste en sorbentes de intercambio
aniónico y de fase reversa. El componente de fase re-
versa es un copolímero de N-vinilpirrolidona y divinil-
benceno. La unidad de intercambio aniónico es un
grupo trialquilamino. 2]
Lavar la columna con 1O mL de metano! al 30% (v/v)
en agua. Aplicar un volumen apropiado (4,9 mL) de
metano! al 30% (v/v) en ácido clorhídrico O, 1 N a la
columna. Recoger el eluato en un matraz volumétrico
de 5 mL, que contenga 100 µL de acetato de sodio al
40% (p/v) en agua, y diluir con metano! al 30% (v/v)
en ácido clorhídrico O, 1 N a volumen.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
2Un cartucho adecuado es el cartucho Waters Oasis MAX Vac RC, con ta-
maño de partícula de 30 µm, parte 186000371.
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y una porción de Solución
estándar que se haya sometido a la Extracción en fase
sólida.
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar y la Solución estándar que se haya so-
metido a la Extracción en fase sólida
Recuperación: 95%-100%, Solución estándar que se
haya sometido a la Extracción en fase sólida
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra que se
haya sometido a la Extracción en fase sólida
Medir las áreas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N203S) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de la Solución muestra
r5 = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• CIANOCOBALAMINA, Método 1 fuera necesario. Diluir una alícuota de la solución trans-
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 100 µg de cianocobalamina, a un matraz de
250 ml. Agregar cuantitativamente 100,0 ml de agua y
extraer cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar
1 O ml del extracto>'. usar el filtrado.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografm (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de cianocobalamina. Cal-
cular el porcentaje de la cantidad declarada de ciano-
cobalamina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción de Ta-
bletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de cianocobalamina de la
Solución muestra
rs = área del pico de cianocobalamina de la
Solución estándar
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6215
Cs = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (~tg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.)
Solución madre del estándar: 1,0 µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que después del periodo de incubación se-
gún se describe en el Análisis, la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml
de la Solución estándar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 y 0,04 ng/ml de la Solución estándar. Preparar
esta solución en el momento de su uso para cada
valoración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de las Tabletas redu-
cidas a polvo, equivalente a 1,0 µg de cianocobalamina,
a un vaso apropiado que contenga, por cada g de Ta-
bletas reducidas a polvo tomado, 25 ml de una solu-
ción de extracción acuosa preparada justo antes de su
uso que contiene, en cada 1 00 ml, 1,29 g de fosfato
dibásico de sodio, 1, 1 g de ácido cítrico anhidro y 1,0 g
de metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 º
durante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier par-
tícula del extracto sin disolver y filtrar o centrifugar, si
parente con agua hasta obtener una solución final que
contenga una actividad de vitamina Bi2 equivalente
aproximadamente a la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún se indica en Biotina, Método 2.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
se indica en Biotina, Método 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 ml de
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1 O g de fosfato di básico de potasio e,n.
agua para obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de ac1do
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 1 00 µg de biotina y
20 mg de niacina en ácido acético 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion vitamínica B: Disolver 20 mg de ácido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m,9, de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de ácido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
6216 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga l~s
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en ~I etiqueta<;Jo, produzc? un me-
dio comparable al obtenido de la formula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
2 disolviendo cuidadosamente Cistina y Triptófano en
Á~ido clorhídrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solución resultante. Agregar 1,00 mL de
agua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido as-
córbico. Filtrar, si tuera necesario. Agregar la Solución
de polisorbato 80, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a
un pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificadaz hasta
250 ml.
Tabla 2
O1 n
L-Cistina
L-Triotófano O 05 n
Ácido clohídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de xantina 5 ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de asoaraaina 5 ml
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Ácido ascórbico 1 a
Solución de oolisorbato 80 5 ml
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: LNOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los r:nismos i~gredi~nt~s
siempre que, cuando se reconstituya segun se rndrca en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la fórmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1 O mL de Preparación de jugo de tomate y 1 mL de Solu-
ción de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml.
Colocar porciones de 1O mL de la solución en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobaci/lus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de. 1 O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrrr los tu-
bos esterilizar en un autoclave a 121 e durante 15 mi-
nut~s y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
USP 37
cal. Inocular tres o más de los tubos sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 3
LNOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
rado por primera vez en esta valoración, realizar no me-
nos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.] Incubar durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 40º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. Almacenar en un
refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos ~res
veces por semana y no usarlos para preparar el Inoculo
si tienen más de 4 días de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias diarias o dos veces al día del cultivo por pun-
ción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el Jnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Realizar una transferencia de células del Cultivo madre
de Lactobacillus leichmannii a dos tubos estériles que
contengan 1O mL d~ Medio de cultivo cada uno. Incu-
bar estos cultivos durante 16-24 horas a una tempera-
tura entre 30º y 40º mantenida termostáticamente con
un margen de ±0,5º. Centrifugar los cultivos bajo con-
diciones asépticas y decantar el sobrenadante. Sus-
pender las células del cultivo en 5 mL de Medio de
suspensión y mezclar. Usando Medio de suspensión esté-
ril, ajustar el volumen de manera que una dilución 1
en 20 en solución salina SR produzca una transmitan-
cia del 70% cuando se lee en un espectrofotómetro
adecuado ajustado a una longitud de onda de 530
nm, equipado con una celda de 1O mm, y leer contra
el set de solución salina SR a una transmitancia del
100%. Preparar una dilución 1 en 400 de la suspen-
sión ajustada usando Solución madre de medio basal
estéril. [NOTA-Esta dilución se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba de-
seada.] La suspensión de células así obtenida es el lnó-
culo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario se deben limpiar meticulo-
samente, usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 ml de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la SoltfciÓn mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucion madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
i Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus /eichmannii (listados como
como N 7830 de ATCC, 1 0801 Urnvers1ty Blvd., Ma-
Lactobacillus delbruecki1)
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.org).
USP 37
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minut,os, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no mas de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zación y enfriamiento durante toda la valoración, de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 ml de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. El estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o más. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminación con un microorganismo extraño, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (Ls) como la diferencia, y=
2,00 - Ls. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los ml
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa
usando para la ordenada una escala aritmética e{ loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la recta o la curva de regresión
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer a partir de la curva estándar el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente
a cada uno de los valores de y comprendidos dentro
del intervalo entre los puntos extremos graficados
para el Estándar. Restar de cada logaritmo así obte-
nido el logaritmo del volumen, en ml, de la Solución
muestra para obtener la diferencia, X, de cada nivel
de dosificación. Promediar los valores de X para cada
uno de IQ_s tres o más niveles de dosificación para
obtener X, que es igual al logaritmo de potencia rela-
tiva, M', de la Solución muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de cianocobalamina
(C6iHssCoN14Ü14P) en la porción de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porción de
Tabletas tomada
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6217
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (CiHxKCoN 1.10 14 P) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= [(antilog M)/N) x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
. po~ción de Ta~letas tomada (,ug)
Deter_mmac1ones repetidas: Repetir toda la determi-
nac1on por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritl"llos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del milterial de prueba (ver Actividad de Vitamina 812
en Diseño y Análisis de Valoraciones Biológicas (111 ), El
Intervalo de Confianza y los Límites de la Potencia). Si
las dos determinaciones difieren en más de 0,08, reali-
zar una o más determinaciones adicionales. A partir de
la me?ia de dos o más valores de M que no difieran
en mas de O, 15, calcular la potencia media de la pre-
paración que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%--150,0% de la cantidad
, declar;;1da de cianocobalamina (C61HssCoN14Ü14P)
• Acmo Fouco, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
m~tr~z volumétrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
drox1do de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de ácido fosfórico 3 N y 240 ml de metanol.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1 000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso, agregando agua o metanol a la Fase móvil pre-
parada para obtener una separación de la línea base
entre e! ácido fálico y el estándar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metano! para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
asiua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar.
Solución estándar: 0,016 mg/ml de ER Ácido Fólico
USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 0,4 mg de ácido fálico, a un tubo de centrífuga
col?r ámbar de 50 ml. Agresia.r 25,0 ml de Solución de
estandar interno. Agitar mecan1camente durante 1 O mi-
nutos y centrifugar. Filtrar una porción del sobrena-
dante transparente J. usar el filtrado.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
6218 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fólico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fólico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de ácido fólico (C19H19N106) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución muestra
R5 = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de ácido fólico (C19H19N106)
• Acioo Fouco, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 60 µg/ml de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml y diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen. , madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Acido
Fólico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
del estándar con 10,0 ml de una mezcla de metanol y
ácido acético glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de
metanol y etilenglicol (1 :1 ). Agitar durante 15 minutos
en un baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar,
desechando los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 0,3 mg de ácido
fólico, a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metanol y ácido acético gla-
cial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etilen-
glicol (1 :1 ). Agitar durante 15 minutos en un baño de
agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los
primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fólico
(C19H19N106) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/C11) x 100
ru = área del pico de ácido fólico de la Solución
muestra
USP 37
rs = área del pico de ácido fólico de la Solucion
estándar
C = concentración de ER Ácido Fólico USP en la
Solución estándar (,ug/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fólico (C19H10N106)
• PANTOTENATO D,E CALCIO, Método 7
Fase móvil: Acido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 15 mg de pantotenato de calcio, a un tubo de
centrífuga. Agregar 25,0 ml de la Solución de estándar
interno y agitar vigorosamente durante 1 O minutos.
Centrifugar, filtrar y usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio y
el estándar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(C13H32CaN2010) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
R5 = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la absorción de humedad durante la pe-
sada, en 500 ml de agua en un matraz volumétrico de
1 000 ml. Agregar 1 O ml de ácido acético 0,2 N y
100 ml de solución de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
ción de 50 µg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en el
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de la Solución estándar,
USP 37
están dentro de la porción lineal de la curva de res-
puesta en función del logaritmo de la concentración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 50 mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumétrico de 1000 ml que
contenga 500 ml de agua. Agregar 1 O ml de ácido
acético 0,2 N y 100 ml de solución de acetato de sodio
(1 en 60), diluir con agua a volumen y filtrar. Diluir un
volumen de esta solución hasta obtener una solución
con aproximadamente la misma concentración que la
de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
1 00 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
So.lución de cistina-~~iptófano: Suspender 4,0 g de L-
c1stina en una soluc1on de 1,0 g de L-triptófano (o 2 O g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar'a
70º-80º, y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
~ir:a y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
aodo clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ~L. Almac~nar bajo tolueno en un refrigerador.
Soluc1on de pohsorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 2_0 µg/ml de riboflavina, 1 O µg/ml de clorhidrato
de t1amina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
dr~to de piridoxina:. 1 ~ µg/ml de ácido p-aminoben-
zo1c~,. 50 f._lg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de p1ndox1na en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua. Sl :3) .. Almacen~r en un refrigerador.
Soluc1on salma A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
S~lución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver la Dextrosa
anhidra y el Acetato de sodio anhidro en las soluciones
p_reviamente _me::c_!adas de acuerdo con la Tabla 3 y
aiustar con h1drox1do de sodio 1 N a un pH de 6 8.
Diluir con agua hasta 250 ml. ' t~bo, except9 a do,s de los cuatro tubos que no con-
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-trintófano 25 ml
Solución de nolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 (1
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6219
Tabla 3 (Continuauon)
Solución de adeni11a-ouanina--uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiarnina--bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de niridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio _anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bano de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos sembrando
por punción un cultivo puro de Lactoba¿illus plantarum1
incubando durante 1 6-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen dE'. ±0,5º: Almacenar en_ ~n refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punc1on del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series_ ?e tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Soluoon madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre
sien:ipre q~e produzca un lnóculo comparable al de' un
cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
c;ultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo esté-
n! que contenga 1 O ml de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cad,o, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución
estandar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 ml de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a ~endos tubos de en~ayo similares, por dupli-
cado, volumenes de la Soluc1on muestra correspondien-
tes a _t;es o ~ás d~ los niveles especificados para la
Soluc1on estandar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Col~Kar un set comple~o de tubos de Estándar y mues-
tra iuntos en una gra?1lla para t~bos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sec~1on de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnóculo a cada
tienen Soluc1on estandar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±_ü_,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
c1on, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera .. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un rec1p1ente apto para lectura óptica si fuera nece-
6220 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (Ls) como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la recta
o la curva de regresión que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer a partir de la curva estándar el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente
a cada uno de los valores de y comprendidos dentro
del intervalo entre los puntos extremos graficados
para el Estándar. Restar de cada logaritmo así obte-
nido el logaritmo del volumen, en mL, de la Solución
muestra para obtener la diferencia, X, de cada nivel
de dosificación. Promediar los valores de X para cada
uno de los tres o más niveles de dosificación para
obtener X, que es igual al logaritmo de potencia rela-
tiva, M', de la Solución muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de pantotenato de cal-
cio (ClBH32CaN2010) en la porción de Tabletas
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Tabletas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Tabletas tomada:
Resultado = [(antilog M)!N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Tabletas tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Limites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Solución amortiguadora: Disolver 10,0 g de fosfato
monobásico de potasio en 2000 mL de agua y ajustar
con ácido fosfórico a un pH de 3,5.
USP 37
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 O mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumétrico de 250 ml. Agregar
1 O mL de metano! y agitar el matraz por rotación suave
hasta dispersar. Diluir con agua a volumen, mezclar y
filtrar.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno Ll de 5 µm
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
rs = área del pico de pantetonato de calcio de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94)
Fase móvil: Una mezcla de metanol, ácido acético gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumétrico de 200 mL, y
agregar 180 mL de Diluyente. Sumergir el matraz en un
baño de agua caliente mantenido a 65º-70º durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vórtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
sólidos. Enfriar rápidamente en un baño de agua fría
durante 1O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg de clorhidrato
de piridoxina, de riboflavina y de clorhidrato de tia-
mina, a un tubo de centrífuga de 50 ml. Agregar
25,0 mL de Diluyente y mezclar usando un mezclador
de vórtice durante 30 segundos para suspender por
completo el polvo. Sumergir el tubo de centrífuga en
USP 37
un baño de agua caliente mantenido a 65º-70º, calen-
tar durante 5 minutos y mezclar en un mezclador de
vórtice durante 30 segundos. Devolver el tubo al baño
de agua caliente, calentar durante 5 minutos más y
mezclar en un mezclador de vórtice durante 30 segun-
dos. Filtrar una porción de la solución, enfriar a tempe-
ratura ambiente y usar el filtrado transparente. [NOTA-
Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la filtración.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
r5 = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N0 3 ·
HCI), de riboflavina (C11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (CdCu) x (Mr1/M,2) x 100
= área del pico de tiamina de la Solución muestra
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6221
r1 = área del pico de tiamina de la Solución
eótandor
C = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucion estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Mr1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C 6 H6 N 7 0) o niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi · HCI),
riboflavina (CPH20N106) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
• NIACINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metano! (3: 1)
Fase móvil: Solución de acetato de sodio O, 1 M
(13,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequeña cantidad de metano! (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulación.] Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 2 mg de riboflavina, a
un matraz volumétrico de 200 ml. Si la riboflavina no
se encuentra presente en la formulación, transferir una
porción del polvo, equivalente a una cantidad nominal
de 2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se encuentra
presente en la formulación, usar una porción del polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 20 mg de nia-
cina o niacinamida. Agregar 100,0 ml de Disolvente de
extracción y mezclar durante 20 minutos, usando un
agitador de movimiento tipo muñeca (wrist-action). Su-
mergir el matraz en un baño de agua mantenido a
70º-75º y calentar durante 20 minutos. Mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos, enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromatosráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyección.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (r,Jr.) x (C1/C11) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
6222 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
r1 = área del pico de niacina de la Solución
estándar
C = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacína (C6H5N02)
• NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A, Disolvente de extracción, Fase móvil, So-
lución madre del estándar, Solución estándar, Solu-
ción muestra, Sistema cromatográfico y Aptitud del
sistema: Usando ER Níacínamida USP en lugar de ER
Niacína USP, proceder según se indica en Niacina, Mé-
todo 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamída. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamída
(C 6 H6N 20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de niacínamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamída de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil y Solución mues-
tra: Preparar según se índica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11 N03 · HCI) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = área del pico de piridoxina de la Solución
muestra
rs = área del pico de piridoxina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Pirídoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (C 8 H 11 NO i · HCI)
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción y Solución muestra: Preparar
según se indica en Niacina, Método 2.
Solución A: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución A y meta-
no! (1 3:7). Agregar 2 ml de trietilamina por L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacia a un pH de
5,2.
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C, 1H20N406) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
r1 = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en ácido fosfórico al O, 1%
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en ácido clorhídrico 0,2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Mezclar una porción de las Tabletas
reducidas a polvo con un volumen de ácido clorhídrico
0,2 N para obtener una concentración de 0,02 mg/ml
de tiamina. Agitar durante 15 minutos con un agitador
de movimiento tipo muñeca (wrist action) y calentar a
ebullición durante 30 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de principales. Para pro-
ductos que contengan clorhidrato de tiamina, calcu-
lar el porcentaje de la cantidad declarada de clorhi-
drato de tiamina (Ci2H11CIN40S · HCI) en la porción
de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (rufrs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
1 0,0 ml de una mezcla de metanol y ácido acético gla-
cial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etilen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a 7,5 mg de niacina o niacinamida, 1,2 mg
de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de riboflavina y
1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un matraz de
125 ml con tapón. Agregar 10,0 ml de una mezcla de
Suplementos Dit>téticos /Vitaminas Hidrosolubles 6223
metanol y ácido acético glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una
mezcla de metano! y etilenglicol (1 :1 ). Tapar, agitar du-
rante 1 5 minutos en un baño de agua mantenido a 60º
y enfriar. Filtrar, desechando los primeros ml del
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina y niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
rs = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 ·
HCI), de riboflavina (C11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (Ci2H11CIN40S · HCI) (para productos que
contengan clorhidrato de tiamina) en la porción de
Tabletas tomada:
Res u Ita do = ( ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
rs = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (Ci2H11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C,/Cu) x (Mr1/M,z) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M, 2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6H1N02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi · HCI),
riboflavina (C 11H2oN406) y tia mina como clorhidrato de
6224 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
tiamina (CuH11CJN405 · HCI) o mononitrato de tiamina
(C 12H 11N·,04S)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excecje de 3 x 102 ufc/g.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Vitaminas Hidrosolubles. La etiqueta también in-
dica la cantidad de cada vitamina en términos de unida-
des métricas por unidad de dosificación y, cuando sea
necesario, la forma salina presente. Cuando se propor-
ciona más de un método de valoración para una vita-
mina en particular, el etiquetado indica el método de
val9ración usado únicamente si no se usa el Método 1.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER <;ianocobalamina USP
ER Acido Fólico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Riboflavina USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Hidrosolubles con Minerales,
Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales con-
tienen, una o más de las siguientes vitaminas hidrosolu-
bles: Acido Ascórbico o su equivalente como Ascorbato de
<;alcio o Ascorbato de Sodio, Biotina, Cianocobalamina
Acido ~ólico, Dexpantenol o Pantenol, Niacina o Niaci~a­
mida, Acido Pantoténico (como Pantotenato de Calcio o
Pantotenato de Calcio Racémico), Clorhidrato de Pirido-
xina, Riboflavina y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato
de Tiamina; y uno o más minerales, derivados de sustan-
c!as generalmen~e reconoc_ida~ como seguras, que propor-
cionan uno o mas de los s1gu1entes elementos en forma
ionizable: boro, calcio, cromo, cobre, flúor, yodo, hierro,
n:iagnesi~, mang_~neso, m<;>libde_no, níque~ fósforo, pota-
sio, selenio, estano, vanadio y cinc. Las Capsulas contie-
nen no menos de 90,0% y no más de 150,0% de las
cantidades declaradas de ácido ascórbico (C6Ha06) o sus
sales como ascorbato de calcio (C 12 H14Ca012 · 2H20) o as-
corbato de sodio (C6H1Na06), biotina (C10H16N203S), cia-
nocobalamina (C63HasCoN14Ü14P), ácido fólico
(C19H19N106), dexpantenol o pantenol (C9H19N0 4 ), panto-
tenato de calcio (C1sH32CaN2010), niacina (C6HsN02) o
niacinamida (C6H6N 2 0), clorhidrato de piridoxina
(CsH11 N03 · HCI), riboflavina (C11H20N406) y tia mina
(C12H11CIN40S) como clorhidrato de tiamina o mononi-
trato de tiamina; no menos de 90,0% y no más de
125,0% de las cantidades declaradas de calcio (Ca), cobre
USP 37
(Cu), hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn), fós-
foro (~), potasio (K) y cinc (Zn); y no menos de 90,0% y
no mas de 160,0% de las cantidades declaradas de boro
(B), cro~o (Cr)~ flúor (F), yodo (1), molibdeno (Mo), ní-
quel (~1), sel~rno (Se), estaño (Sn) y vanadio (V).
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A, D, E o K. Pueden contener otras sustancias declaradas
agregadas generalmente reconocidas como seguras en
cantidades inobjetables. '
CONTENIDO
[~OTA-~n las siguie_ntes valoraciones, cuando se propor-
~1or:i~ mas de un ~e.todo de valoración para un ingrediente
1n~1v1dual, los requ1s1tos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
1.], ,
• ACIDO ASCORBICO
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de éter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cápsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cápsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cápsulas, equivalente a
una cantidad nominal de 100 mg de ácido ascórbico a
un matraz volumétrico de 200 mL y agregar 75 mL c:Íe
ácido metafosfórico-ácido acético SR. Tapar el matraz y
agitar por medios mecánicos durante 30 minutos. Diluir
con agua a volumen. Transferir una porción de la solu-
ción a un tubo de centrífuga y centrifugar hasta obte-
ner un sobrenadante transparente. Pipetear y transferir
4,0 mL de esta solución a un matraz Erlenmeyer de
50 mL y agregar 5 mL de ácido metafosfórico-ácido
acético SR.
Análisis: Valorar con solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corre9ir por el volumen de
solución estándar de diclorofenol-indofenol SV consu-
mido por una mezcla de 5,5 mL de ácido metafosfóri-
co-~ci~fo acéti_co SR y 15 mL de ~9ua. A, partir del ácido
ascorb1co equivalente de la soluc1on estandar de diclo-
rofenol-indofenol SV, calcular el contenido de ácido as-
córbico en cada Cápsula.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6H 8 06) ,
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 21-:120)
• ASCORBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H7Na06)
• BIOTINA, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 85 mL de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 mL de ácido fosfórico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 0,333 mg/mL de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfóxido
Solución estándar: 5 µg/mL de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solución madre del estándar con
agua.
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 mg
de biotina, a un matraz volumétrico de 200 ml. Agre-
USP 37
gar 3 ml de dimetil sulfóxido y agitar por rotación
suave para humedecer el contenido. Colocar el matraz
en un baño de agua a 60'-70º durante 5 minutos. So-
meter a ultrasonido durante 5 minutos, diluir con agua
a volumen y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de biotina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de biotina
(C, 0 H1 6 N20 3 S) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir la
Solución madre del estándar con agua hasta una concen-
tración de O, l ng/ml de ER Biotina USP. , Solución de oolisorbato 80
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir una porción de contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de
100 µg de biotina, a un matraz volumétrico de 200 ml.
Agregar 3 ml de alcohol al 50% y agitar por rotación
suave hasta humedecer el contenido. Calentar el matraz
en un baño de agua a 60º-70º durante 5 minutos. So-
meter a ultrasonido durante 5 minutos, diluir con al-
cohol diluido a volumen y filtrar. Diluir un volumen del
filtrado cuantitativamente, y si fuera necesario en dilu-
ciones sucesivas, con agua para obtener una solución
con una concentración de O, 1 ng/ml.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6225
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g de D,L-triptó-
fano) en 700-800 ml de agua. Calentar a 70'-80" y
agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2) gota a gota,
mezclando, hasta que los sólidos se disuelvan. Enfriar y
diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1 o·.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1 O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y l O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal:
Disolver Dextrosa anhidra y Acetato de sodio anhidro en
las soluciones previamente mezcladas según la Tabla 7
y ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
O 25 ml
Dextrosa anhidra 1O a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-quanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 1 00 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º y dejar que los
tubos se enfríen en posición vertical. Inocular tres o más
de los tubos, sembrando por punción un cultivo puro
de Lactobacillus plantarum, 1 incubando durante 16-24
horas a una temperatura entre 30º y 37º mantenida
termostáticamente con un margen de ±0,5". Almacenar
----
1 ATCC N 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobacillus arobinosus 17-5.
6226 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
en un refrigerador. Preparar un cultivo reciente por
punción del cultivo madre una vez por semana y no
usarlo para preparar el lnócu/o si el cultivo tiene más de
1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que con-
tenga 0,5 ng de biotina a cada una de las series de
tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de Solución
madre de medio basal. Tapar los tubos con algodón,
esterilizar en un autoclave a 121 º y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus
plantarum a un tubo estéril que contenga 1 O ml de
Medio de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24
horas a una temperatura entre 30º y 37° mantenida
termostáticamente con un margen de ±0,5º. La sus-
pensión de células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por du-
plicado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la
Solución estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro
tubos vacíos similares 5,0 ml de Solucion madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agre9ar a tubos de ensayo similares, por duplicado,
volumenes de la Solucion muestra correspondientes a
tres o más niveles especificados de la Solución están-
dar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 ml.
Agregar a cada tubo 5,0 ml de la Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o sección de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º du-
rante 5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnóculo a
cada tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no
contengan Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º
y 37° mantenida termostáticamente con un margen
de ±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de in-
cubación, no se presente un aumento significativo
de turbidez en los tubos que contengan el nivel más
alto de Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la si-
guiente manera. Mezclar el contenido de cada tubo
y transferir a una celda de espectrofotómetro. Colo-
car la celda en un espectrofotómetro ajustado a una
longitud de onda específica de 540-660 nm y leer
la transmitancia cuando se alcance un estado esta-
cionario. Este estado estacionario se observa unos
pocos segundos después de la agitación cuando la
lectura del galvanómetro se mantenga constante du-
rante 30 segundos o más. Permitir aproximada-
mente el mismo intervalo de tiempo para la lectura
de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia del blanco inocu-
lado. Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el
blanco inoculado, leer la transmitancia de cada uno
de los tubos restantes. Si hay evidencia de contami-
nación con un microorganismo extraño, no tomar
en cuenta el resultado de la valoración.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (L) como la diferencia, y= 2,00 - L. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los ml de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
USP 37
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la línea
recta o la curva de regresión que mejor se ajuste a los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solución muestra. Leer, a
partir de la curva estándar, el logaritmo del volumen
de la Solución estándar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
de los puntos extremos graficados para el Estándar.
Restar de cada logaritmo así obtenido el logaritmo
del volumen, en ml, de la Solución muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
? más niveles de dosificación para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de ER Biotina USP co-
rrespondiente a la biotina en cada mg de la porción
de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de biotina que se supuso
estaba presente en cada mg de la porción de
Cápsulas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• CIANOCOBALAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1O µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de
100 µg de cianocobalamina, a un matraz de 250 ml.
Agregar cuantitativamente 100,0 ml de agua y extraer
cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar 1 O ml del
extracto y usar el filtrado transparente.
Sistema cromato!;Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de cianocobalamina.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
USP 37
cianocobalamina (C6iH88CoN14Ü14P) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cianocobalamina de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de cianocobalamina de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C6iHssCoN14Ü14P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este frocedimiento.]
Solución madre de estándar de cianocobalamina:
1,0 µg/ml de ER Cianocobalamina USP en alcohol al
25%. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar de cianocobalamina con agua
hasta un volumen medido tal que después del periodo
de incubación según se describe en el Análisis, la dife-
rencia en la transmitancia entre el blanco inoculado y el
nivel de 5,0 ml de la Solución estándar sea no menor
que la correspondiente a una diferencia de 1,25 mg en
peso seco de las células. Esta concentración por lo ge-
neral está entre 0,01 y 0,04 ng/ml de la Solución están-
dar. Preparar esta solución en el momento de su uso
para cada valoración. , L-Triptófano
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1,0 µg
de cianocobalamina, a un vaso apropiado que con-
tenga, por cada g de contenido de las Cápsulas to-
mado, 25 ml de una solución de extracción acuosa pre-
parada justo antes de su uso que contiene 12,9 mg/ml
de fosfato dibásico de sodio, 11,0 mg/ml de ácido cí-
trico anhidro y 1 O mg/ml de metabisulfito de sodio.
Autoclavar la mezcla a 121 º durante 1 O minutos. Dejar
que sedimente cualquier partícula del extracto sin disol-
ver y filtrar o centrifugar, si fuera necesario. Diluir una
alícuota de la solución transparente con agua hasta ob-
tener una solución final que contenga una actividad de
vitamina B12 equivalente aproximadamente a la de la
Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 ml de
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1 O g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre~ar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tia mina, 100 µg de biotina y
Suplementos Dieteticos /Vitaminas Hidrosolubles 6227
20 mg de niacina en ácido acético glacial 0,02 N para
obtener 400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrige-
rador y proteger de la luz.
Solucion vitamínica B: Disolver 20 mg de ácido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m,g de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de ácido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la fórmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado según la
Tabla 2, disolviendo cuidadosamente cistina y triptó-
fano en ácido clorhídrico antes de agregar las siguien-
tes ocho soluciones a la solución resultante. Agregar
100 ml de agua y disolver dextrosa, acetato de sodio
y ácido ascórbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar la
Solución de polisorbato 80, ajustar con hidróxido de so-
dio 1 N a un pH entre 5,5 y 6,0, y diluir con Agua
Purificada hasta 250 ml.
Tabla 2
L-Cistina o1 q
o os q
Ácido clorhídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-auanina-uracilo S ml
Solución de xantina S ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A S ml
Solución salina B S ml
Solución de asoaraaina S ml
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro Sa
Ácido ascórbico 1a
Solución de oolisorbato 80 S ml
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para extraer la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: lNOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya según se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la fórmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar
1 O ml de Preparación de jugo de tomate y 1 ml de Solu-
ción de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 1 00 ml.
Colocar porciones de 1 O ml de la solución en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
 6228 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nutos (temperatura de la línea de salida de vapor) y
dejar que los tubos se enfríen en posición vertical. Ino-
cular tres o más de los tubos sembrando por runción
un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii.2 LNOTA-
Antes de usar un cultivo recientemente preparado por
primera vez en esta valoración, realizar no menos de 1 O
transferencias sucesivas del cultivo en un periodo de 2
semanas.] Incubar durante 16-24 horas a una tempera-
tura entre 30º y 40º mantenida termostáticamente con
un margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el lnóculo
si tienen más de 4 días de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al día del cultivo por
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacil/us feich-
mannii a dos tubos estériles que contengan 1 O mL de
Medio de cultivo. Incubar estos cultivos durante 16-24
horas a una temperatura entre 30º y 40º mantenida
termostáticamente con un margen de ±0,5º. Centrifu-
gar los cultivos bajo condiciones asépticas y decantar el
sobrenadante. Suspender las células del cultivo en 5 mL
de Medio de suspensión estéril y mezclar. Usando Medio
de suspensión estéril, ajustar el volumen de manera que
una dilución 1 en 20 en solución salina SR produzca
una transmitancia del 70% cuando se lee en un espec-
trofotómetro adecuado ajustado a una longitud de
onda de 530 nm, equipado con una celda de 1 O mm, y
leer contra el set de solución salina SR a una transmi-
tancia del 100%. Preparar una dilución 1 en 400 de la
suspensión ajustada usando Solución madre de medio
basal. [NOTA-Esta dilución se puede alterar, cuando sea
necesario, para obtener la respuesta de prueba de-
seada.] La suspensión de células así obtenida es el lnó-
culo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, y con ra longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina B1 2 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar.
' Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus leichmannii (listados como
Lactobacillus delbrueki1) como N" 7830 de ATCC, 10801 University Blvd., Ma-
nassas, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
USP 37
Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos similares
5,0 mL de Solución madre de medio basal y agua sufi-
ciente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para evitar la contaminación bacteriana
y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5 minutos,
ajustando para alcanzar esta temperatura en no más
de 1 O minutos precalentando el autoclave si fuera ne-
cesario. Enfriar tan rápido como sea posible para evitar
la formación de color que resulta del sobrecalenta-
miento del medio. Tomar precauciones para mantener
la uniformidad de las condiciones de esterilización y
enfriamiento durante toda la valoración, debido a que
colocar los tubos demasiado cerca o sobrecargar el au-
toclave puede ocasionar variaciones en la velocidad de
calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 mL de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar estos tubos a una temperatura entre 30º
y 40º mantenida termostáticamente con un margen
de ±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
colocar el recipiente en un espectrofotómetro ajustado
a una longitud de onda de 530 nm y leer la transmi-
tancia cuando se alcance un estado estacionario. Este
estado estacionario se observa unos pocos segundos
después de la agitación cuando la lectura se mantenga
constante durante 30 segundos o más. Permitir aproxi-
madamente el mismo intervalo de tiempo para la lec-
tura de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si se presenta evi-
dencia de contaminación con un microorganismo ex-
traño, no tomar en cuenta el resultado de la
valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cuaíquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (E) como la diferencia, y=
2,00 - :E. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los mL
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmética o loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la línea recta o la curva de re-
gresión que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solución muestra. Leer, a
partir de la curva estándar, el logaritmo del volumen
de la Solución estándar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
entre los puntos extremos graficados para el Estándar.
Restar de cada logaritmo así obtenido el logaritmo
del volumen, en mL, de la Solución muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o más niveles de dosificación para obtener X, que es
USP 37
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de ER Cianocobalamina
USP correspondiente a la cianocobalamina en cada
mg de la porción de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaba presente en cada mg de la
porción de Cápsulas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias Mes no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HsaCoN14Ü14P)
• ÁCIDO FÓLICO, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
matraz volumétrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
dróxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de ácido fosfórico 3 N y 240 ml de metano!.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso agregando agua o metano! a la Fase móvil pre-
parada para obtener una separación de la línea base
entre el ácido fólico y el estándar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA-El contenido de metano! y agua se
puede variar (entre 1o/o y 3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metano! para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
a9ua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. , Cápsula". Transferir una porción de contenido de las
Solución estándar: 0,016 mg/ml de ER Acido Fólico
USP en Solución de estándar interno , 0,3 mg de ácido fólico, a un matraz de 125 ml con
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir una cantidad de contenido de las
Cápsulas a un tubo de centrífusia adecuado y agregar
un volumen de Solución de estandar interno para obte-
ner una concentración nominal de 0,016 mg/ml de
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6229
ácido fólico. Agitar mecánicamente durante 1O minutos
y centrifugar. Filtrar una porción del sobrenadante
transparente y usar el filtrado.
Sistema cromatowáfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno Ll
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fólico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fólico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de ácido fólico (C19H19N106) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fóli~o y metilparabeno de la Solución
estandar ,
C5 = concentración de ER Acido Fólico USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declarsida de á~ido fólico (C19H19N106)
• ACIDO FOLICO, Metodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: Disolver 7,5 g de edetato disódico, mez-
clando, en 500 ml de agua que contenga 1O ml de
hidróxido de amonio.
Diluyente: 60 µg/ml de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15 ml de
ácido acético glacial y 350 ml de metano! a un matraz
volumétrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosulfonato
de sodio 0,008 M a volumen. ,
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Acido
Fólico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
del estándar con 10,0 ml de metano! y 35,0 ml de Re-
activo. Agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de
tapón. Agregar 10,0 ml de metano! y 35,0 ml de Reac-
tivo. Agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
6230 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50"
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fálico
(C19H 19N7Q 6) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de ácido fólico de la Solución
muestra
r5 = área del pico de ácido fólico de la Solución
estándar , prote9er de la luz.
Cs = concentración de ER Acido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fólico (C19H19N7Q6)
• DEXPANTENOL O PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 800 µg/ml de ER Dex-
pantenol USP en agua. Almacenar en un refrigerador,
prote9er de la luz y usar dentro de los 30 días.
Solucion estándar: En el día de la valoración, preparar
una dilución de 1,2 µg/ml de dexpantenol, a partir de
Solución madre del estándar diluida con agua.
Solución muestra: Pesar no menos de 30 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados, tanto como sea posible. Retirar
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías lavando con varias porciones de éter. Dese-
char los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas
con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcular el
peso neto promedio por Cápsula. Disolver una porción
del contenido de las Cápsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 100,0 ml de agua. Diluir cuantitativamente una por-
ción de esta solución con agua hasta obtener una con-
centración nominal de 1,2 µg/ml de dexpantenol o
2,4 µ~/ml de pantenol.
Solucion de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 ± O, 1 y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar
20 g de carbón activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbón activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
USP 37
tura de no menos de 1O''. Filtrar la solución si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina y 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g de D,L-triptófano)
en 700-800 ml de agua, calentar a 75 ± 5º y agregar
solución de ácido clorhídrico (1 en 2) gota a gota, mez-
clando, hasta que los sólidos se disuelvan. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina, 1O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado al 25%. Almace-
nar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 50 mg/ml de fosfato mono-
básico de potasio y 50 mg/ml de fosfato dibásico de
potasio en agua. Agregar 1O gotas de ácido clorhídrico
por L de solución. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 20 mg/ml de sulfato de
magnesio, 1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de
sulfato ferroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en
agua. Agregar 1O gotas de ácido clorhídrico por L de la
solución. Aímacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
200 µg/ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 µg/ml
de pantotenato de calcio en alcohol al 10%. Almacenar
en un refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: Disolver
50 mg/ml de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de ácido
oleico en alcohol al 20%. Almacenar en un refrigerador
y usar dentro de los 30 días.
Medio de pantotenato modificado: Disolver Dextrosa
anhidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones pre-
viamente mezcladas según la Tabla 3 y ajustar con hi-
dróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Finalmente, diluir
con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-trintófano 25 ml
Solución de nolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 n
Acetato de sodio anhidro 5n
Solución de adenina-nuanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-biotina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhidra- 5 ml
to de oiridoxina
Solución salina A 5 mL
Solución salina B 5 ml
Solución de niridoxal-nantotenato de calcio 5 ml
Solución de nolisorbato 40-ácido oleico 5 ml
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pantote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
ción final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
 USP 37
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 mL de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancreático de caseína, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidróxido de so-
dio O, 1 N o ácido clorhídrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1000 mL. Agregar porciones de
1 O mL de la solución a tubos de cuftivo, tapar los tubos,
y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar en pendiente y almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo madre de Pediococcus acidilactici3 en
un tubo conteniendo este medio. Incubar a 35º durante
20-24 horas y almacenar en un refrigerador. Mantener
el cultivo madre mediante transferencias mensuales a
tubos con medio inclinado preparado recientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 mL de Medio de
pantotenato modificado con el cultivo madre en medio
inclinado e incubar a 35º durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensión a partir de las porciones combina-
das y lavar las células con Medio de pantotenato modifi-
cado estéril. Resuspender las células en suficiente Medio
de pantotenato modificado de manera que una dilución
1 en 50, cuando se analiza en un tubo de ensayo de
1 3 mm de diámetro, proporcione 80% de transmisión
de luz a 530 nm. Transferir porciones de 1,2 mL de esta
suspensión madre a ampollas de vidrio estéril, sellar,
congelar en nitrógeno liquido y almacenar en un con-
gelador. En el día de la valoración, dejar que las ampo-
nas alcancen la temperatura ambiente, mezclar el con-
tenido y diluir 1 mL de cultivo descongelado con
solución salina estéril SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta di-
lución se puede alterar, cuando sea necesario, para ob-
tener la respuesta de prueba deseada.]
Análisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 mL de Medio de pantotenato modificado de
doble concentración a cada tubo. Tapar los tubos con
tapas de metal y esterilizar en un autoclave a 121 º
durante 5 minutos. Enfriar a temperatura ambiente en
un baño de agua fría e inocular cada tubo con 0,5 mL
del lnóculo. Dejar que se incube a 37º durante 16 ho-
ras. Detener el crecimiento calentando a una tempera-
tura de no menos de 80º, por ejemplo mediante la
aplicación de vapor a presión atmosférica en un esteri-
lizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y determinar la
transmitancia porcentual de las suspensiones, en celdas
de igual longitud de paso, en un espectrofotómetro
adecuado, a una longitud de onda de 530 nm.
Cálculos: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estándar en función de las concentraciones
del nivel del Estándar. La curva se traza conectando
cada par de puntos adyacentes con una línea recta. A
partir de esta curva estándar, determinar mediante
interpolación la potencia, en términos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solución
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solución muestra que se le agregó, para ob-
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
media promediando las respuestas individuales que va-
rían de su media en no más de 15%, usando no me-
nos de la mitad del número total de tubos. Calcular la
potencia de la porción del material tomado para la
1 ATCC N" 8042 es adecuado.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6231
valoración, en términos de dexpantenol, multiplicando
la respuesta media por el factor de dilución apropiado.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C 9H19 N04 )
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 1
Fase móvil: Acido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 mL de alcohol. Agregar 50 mL de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 mL. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir el equivalente a 0,6 mg/mL de pan-
totenato de calcio, a partir del contenido mezclado de
las Cápsulas en Solución de estándar interno y agitar vi-
gorosamente durante 1O minutos. Centrifugar, filtrar y
usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de pantotenato de
calcio y el estándar interno. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2010) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Ru/ Rs) x ( Cs/ Cu) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la humedad durante la pesada, en 500 mL
de agua en un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 1 O mL de ácido acético 0,2 N y 1 00 mL de solución
de acetato de sodio (1 en 60), y diluir con agua a volu-
men para obtener una concentración de 50 µg/mL de
ER Pantotenato de Calcio USP. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/mL de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en el
Análisis, usando 2,0-4,0 mL de Solucion estándar, están
dentro de la porción lineal de la curva de respuesta del
logaritmo de la concentración.
6232 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula.¡, Transferir una porción ~e conte~ido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal, d~ 50 mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumetrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agrega~,
1O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de soluc1on de
acetato de sodio (16,66 mg/ml), diluir con ag~a a volu-
men y filtrar. Diluir un volumen de esta soluc1on hasta
obtener una solución con aproximadamente la misma
concentración que la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 m~ de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver .~uevamer_ite ,la
pasta resultante en agua, ajustar la soluoon .c~n h1dro-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a ~na _temperatura de n? ~enos de 1Oº. Fil-
trar la solucion s1 se forma un prec1p1tado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-t~ipt,ófano: Suspender 4,0_g 9e L-
cistina y 1,0 g de L-triptofano (o 2,0 g de D,L-triptofano)
en 700-800 ml de agua, calentar a 70-80º y agregar
ácido clorhídrico diluido (1 en 2) gota a gota, mez-
clando, hasta que los sólidos se disuelvan. E_nfriar y di-
luir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
10º.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de Ufacilo, con ayu~fa de ~al_or, en 1O ml de
ácido clorh1drico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigera<;Jor.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina_, l_O µg/m,L _de clo!~idrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de b1otina en ac1<;10 acet1co
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote~er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina:. 1~ µg/ml de ácido p-amir_ioben-
zoico, 50 µg/ml de rnacina y 40 µg/ml de clor~1drato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador. , .
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobas1co
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
O 5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas según la Tabla 4, y ajustar con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 4
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina triotófano 25 ml
Solución de nolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 n
Acetato de sodio anhidro 5 n
Solución de adenina -auanina-uracilo 5 ml
USP 37
Tabla 4 (Continuación)
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti- 5 ml
na
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi- 5 ml
drato de oiridoxina
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2 O g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la m~z­
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o ~apar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º y de1ar que lo~
tubos se enfríen en posición vertical. Inocular tres o mas
de los tubos, sembrando por punción un cultivo puro
de Lactobaci/lus plantarum 1 incubando durante 16-24
horas a una temperatura entre 30º y 37º mantenida
termostáticamente con un margen de ±0,5º. Almacenar
en un refrigerador. Preparar un cultivo reciente por
punción del cultivo madre una vez por semana y no
usarlo para preparar el lnóculo si el cultivo tiene más de
1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º y ~r_ifriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspens1on conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo compara.ble, al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir celulas de~
Cultivo madre de Lactobac1/lus plantarum a un tubo este-
ril que contenga 1O ml de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a· una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida term?státicar_nente c?n un .
margen de ±0,5º. La suspension de celulas as1 obtenida
es er lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solu-
ción estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tu~os
vacíos similares 5,0 ml de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por durli-
cado volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a' tres o más niveles especificados de la Solución
estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 ml.
Agregar a cada tubo 5,0 ml de la Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y _muestra
juntos en una gradilla para ~~bos y el set duplicado en
una segunda gradilla o secc1on de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la contami-
nación y esterilizar en un autoclave a 1?1 º durante 5
minutos. Enfriar y agregar 1 gota de Inoculo a cada
tubo excepto dos de los cuatro tubos que no conten-
gan Solucion estándar (los blancos no inoculados). In-
cubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37°
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-2~ hc:i~as <;Je incuba- .
ción no se presente un aumento s1grnf1cat1vo de turbi-
dez ~n los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas. . .
Determinar la transmitancia de los tubos de la s1gu1ente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura óptica si fue,ra nece-
sario. Colocar el recipiente en un espec~~ofotometro
ajustado a una longitud de onda espec1f1ca entre 540
USP 37
y 660 nm y leer la transmitancia cuando se alcance un
estado estacionario. Este estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura del galvanómetro se mantenga constante
durante 30 segundos o más. Permitir aproximada-
mente el mismo intervalo de tiempo para la lectura de
cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (:L) como la diferencia, y= 2,00 - L. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los ml de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la línea
recta o la curva de regresión que mejor se ajuste a los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solución muestra. Leer, a
partir de la curva estándar, el logaritmo del volumen
de la Solución estándar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
entre los puntos extremos graficados para el Estándar.
Restar de cada logaritmo así obtenido el logaritmo
del volumen, en ml, de la Solución muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o más niveles de dosificación para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente al pantotenato de calcio
en cada mg de la porción de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaba presente en cada mg de la
porción de Cápsulas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logarit_!!:los de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Solución amortiguadora: Disolver 10,0 g de fosfato
monobásico de potasio en 2000 ml de agua y ajustar
con ácido fosfórico a un pH de 3,5.
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6233
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 O mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumétrico de
250 ml. A9regar 1 O ml de metanol y agitar el matraz
por rotacion suave hasta dispersar el contenido de las
Cápsulas. Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 50°
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisH32CaN2010)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94)
Fase móvil: Una mezcla de metanol, ácido acético gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan Niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacina-
mida USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP,
20 mg de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato
de Tiamina USP a un matraz volumétrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
baño de agua caliente mantenido a 65º-70º durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vórtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
sólidos. Enfriar rápidamente en un baño de agua fría
durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula." Transferir una porción de contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg
de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrífuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vórtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrífuga en un baño de agua caliente mantenido a
65º-70º, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al baño de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos más y mezclar en un mezclador de vórtice durante
30 segundos. Filtrar una porción de la solución, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
6234 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtración.]
Sistema cromatoc;iráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Resultado= (ru/r5) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
r5 = área del pico de niacina de la Solución
estándar
(5 = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
C1 = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (C 8 H11 N0 3
HCI), riboflavina (C11H20N406) y clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN405 · HCI) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (Mr1/Mr2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
USP 37
M,1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C 6 H6N 2 0), niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (C8H11 NOi · HCI),
riboflavina (C11H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (Ci2H11CIN405 · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
• NIACINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metanol (3:1)
Fase móvil: Solución de acetato de sodio O, 1 M
(13,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequeña cantidad de metano! (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
clorhidrato de piridoxina y riboflavina, cuando se en-
cuentran presentes en la formulación.] Pesar no menos
de 20 Cápsulas en un frasco de pesada tarado. Abrir las
Cápsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un vaso de precipitados. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas lavando con varias
porciones de éter. Desechar los lavados y secar las cu-
biertas de las Cápsulas con ayuda de una corriente de
aire seco. Pesar las cubiertas de las Cápsulas vacías en
un frasco de pesada tarado y calcular el peso neto del
contenido de las Cápsulas. Transferir una porción de
contenido de las Cápsulas, equivalente a 0,02 mg/ml
de riboflavina. Si la riboflavina no se encuentra presente
en la formulación, usar una porción, equivalente a
0,02 mg/ml de piridoxina. Si la piridoxina no se en-
cuentra presente en la formulación, usar una porción
•
equivalente a 0,2 mg/ml de niacina o niacinamida en
Disolvente de extracción y mezclar durante 20 minutos,
usando un agitador de movimiento tipo muñeca (wrist-
action). Sumergir el matraz en un baño de agua mante-
nida a 70º-75º y calentar durante 20 minutos. Mezclar
en un mezclador de vórtice durante 30 segundos, en-
friar a temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromatoc;iráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyección.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x 100
r 11 = área del pico de niacina de la Solución muestra
USP 37
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02)
• NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil, Solución madre
del estándar, Solución estándar, Solución muestra y
Sistema cromatográfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder según se indica
en Niacina, Método 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción y Fase móvil: Preparar según
se indica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Clorhidrato de Piri-
doxina USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con Disolvente de extracción
Solución muestra: Preparar según se indica en Niacina,
Método 2.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograft0 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11NÜ3 · HCI) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución muestra
rs = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6235
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CBH 11 NOi · HCI)
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción: Preparar según se indica en
Niacina, Método 2.
Solución A: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución A y meta-
no! (1 3:7). Agregar 2 ml de trietilamina por L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacial a un pH de
5,2.
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Solución muestra: Preparar según se indica en Niacina,
Método 2.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C11H20N406) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
rs = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C17H20N406)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en ácido fosfórico al O, 1 o/o
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en ácido clorhídrico 0,2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Mezclar una porción de contenido de las
Cápsulas con un volumen de ácido clorhídrico 0,2 N
para obtener una concentración nominal de 0,02 mg/
ml de tiamina. Agitar durante 15 minutos con un agi-
tador de movimiento tipo muñeca (wrist action) y ca-
lentar a ebullición durante 30 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
6236 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (Ci 2H17CIN40S · HCI) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,¡/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H17CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11NsÜ4S)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y ácido acético gla-
cial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado. , M, 1
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción de contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal de
7,5 mg de niacina o niacinamida, 1,2 mg de clorhidrato
de piridoxina, 0,4 mg de riboflavina y 1,2 mg de clorhi-
USP 37
drato de tiamina, a un matraz de 125 ml con tapón.
Agregar 10,0 ml de una mezcla de metano! y ácido
acético glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de meta-
no! y etilenglicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minu-
tos en un baño de agua mantenido a 60º y enfriar.
Filtrar, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de las respuestas de los picos. Calcular
el porcentaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) o niacinamida (C6H6N 20) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
r5 = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CaH11 N03 ·
HCI), riboflavina (C17H20N406) y tiamina
(C12H17CIN40S) (para productos que contengan
clorhidrato de tiamina) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
C5 = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal del analito
correspondiente en la Solución muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17NsÜ4S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
= peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI),
USP 37
riboflavina (C 11H20N406) y tia mina como clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H17Ns04S)
[NOTA-Se pueden usar soluciones estándar de absor-
ción atómica comercialmente disponibles para los mi-
nerales, cuando sea pertinente, cuando se describa la
preparación de una Solución madre del estándar en las
siguientes valoraciones. Usar agua desionizada cuando
se especifica agua. Cuando se especifica espectrofoto-
metna de absorción atómica en la valoración, se pue-
den diluir cuantitativamente las Soluciones estándar y la
Solución muestra con el disolvente especificado, si fuera
necesario, para producir soluciones con concentracio-
nes adecuadas adaptables al intervalo lineal o de tra-
bajo del instrumento.]
• CALCIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N de polietileno.
Solución estándar de calcio: 400 µg/mL de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cado a 300º durante 3 horas y enfriado en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 mL de ácido clorhídrico 1 N.
Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de car-
bono y diluir con agua hasta 1 000 ml.
Solucion madre del estándar: 100 µg/mL de calcio a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácidb
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 1 00 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/mL de calcio.
Solución de polisorbato 80: Diluir Polisorbato 80 con
alcohol (1 en 1 O).
Solución muestra: Transferir 5 Cápsulas a un matraz
volumétrico de 100 ml. [NOTA-Para Cápsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cápsulas. Abrir las
Cápsulas, sin perder material de la cubierta y transferir
el contenido a un recipiente adecuado. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cápsulas vacias, calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas y transferir una
porción de contenido de las Cápsulas, equivalente a 5
Cápsulas, a un matraz volumétrico de 100 ml.] Agregar
15 mL de agua, 1 O mL de ácido clorhídrico 6 N y 1 mL
de Solución de polisorbato 80 al matraz. Calentar sobre
una placa ,de calent_amien~o o baño de vapor, agitando
por rotac1on suave intermitentemente, hasta que las
Cápsulas se desintegren por completo o que el conte-
nido se disuelva. Calentar a ebullición suave durante 15
minutos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 mL del filtrado. Di-
luir esta solución con ácido clorhídrico O, 125 N hasta
obtener una concentración de 2 µg/mL de calcio agre-
gando 1 mL de Solución de cloruro de lantano po~
100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6237
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determina~ la concentración, C, en µg/mL, de
calcio en la Solucion muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (¡J9/mL)
Cu = concentrac1on nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• CROMO, Método 7
Solu~ión estándar de cromo: 1000 µg/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secado a
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
de 100 mL, y transferir 15,0 mL y 20,0 mL de Solución
madre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL
de cromo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de cromo y omitir
el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a }57,9 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL
de cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu =concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 7
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% (v/v) y diluir con una solución de
ácido nítrico al 1% (v/v) hasta 1000 mL. Esta solución
contiene 1000 µg/mL de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 200 mL. Diluir con agua a volumen
6238 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 µ9/ml de cobre.
Solucion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/ml de cobre y omitir
el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µ_g/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORURO, Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en recipientes de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: 408 mg/ml de
acetato de sodio en agua. Ajustar con unas pocas gotas
de ácido acético a un pH de 7,0. [NOTA-Disolver en
una porción de agua y dejar que la solución se equilibre
a temperatura ambiente, luego diluir con agua a volu-
men y ajustar el pH.]
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumétrico
de 1 000 ml. Agregar 28 ml de ácido perclórico y diluir
con a_gua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio previamente secado a 100º durante 4 horas y en-
friado en un desecador, en agua
Solución madre intermedia A: 100 µg/ml de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de fluoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1 O µg/ml de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 1 0,0 ml de
Solución madre intermedia By 5,0 y 10,0 ml de Solución
madre intermedia A a sendos matraces volumétricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 1 0,0 ml de ácido clor-
hídrico 1 N, 25 ml de Solución de acetato de sodio 3 M
y 25,0 ml de Solución de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 µg/ml
de fluoruro.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cápsulas mezclado, equivalente a una
cantidad nominal de 200 mg de fluoruro, a un matraz
volumétrico de 100 ml. Agregar 10,0 ml de ácido clor-
hídrico 1 N, 25,0 ml de Solución de acetato de sodio
3 M y 25,0 ml de Solución de citrato de sodio y diluir
con agua a volumen.
USP 37
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir a sendos vasos de precipitados de plástico
que contengan una barra mezcladora recubierta de
plástico, 50,0 ml de cada una de las Soluciones están-
dar y de la Solución muestra. Medir los potenciales
(ver pH (791 )), en mV, de las Soluciones estándar y la
Solución muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mínima de ±0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador específico para ión fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al tomar las mediciones, sumergir los electrodos en la
solución, mezclar en un agitador magnético con su
parte superior aislada hasta que se logre el equilibrio
(1-2 minutos) y registrar el potencial. Enjuagar y se-
car los electrodos entre mediciones, procurando evi-
tar el daño del cristal del electrodo específico para
ión fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/mL, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de la res-
puesta estándar y el potencial medido de la Solución
muestra, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flúor (F) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• FLUORURO, Método 2
[NOTA-Usar recipientes de plástico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1 000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulfúrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ;¡/ml de fluoruro.
Solucion estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción de fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra de la siguiente
manera. Usando vacío a una presión que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con 1 volumen de
columna de metanol seguido de 1 volumen de columna
de Solución amortiguadora de pH 70,0. No dejar que la
parte superior de la columna se seque. Si la parte supe-
rior de la columna se seca, reacondicionar la columna.]
Transferir 10,0 ml de Solución madre del estándar a un
matraz volumétrico de 100 ml. Agregar 75 ml de agua
y ajustar con hidróxido de sodio O, 1 N a un pH de 10,4
± O, 1. Diluir con agua a volumen. Filtrar, desechando
los primeros 15 ml del filtrado. Transferir 25,0 ml del
filtrado a un matraz volumétrico de 50 ml, agregar
15,0 ml de agua y ajustar con hidróxido de sodio O, 1
N a un pH de 10,0. Diluir con Solución amortiguadora
de pH 70,0 a volumen. Eluir una porción de esta solu-
ción a través de una columna de extracción de fase
sólida de 3 ml que contenga relleno L1 que se conecta
a través de un adaptador a una segunda columna de
extracción de fase sólida que contenga relleno de inter-
cambio catiónico fuerte de sulfonilpropilo. Desechar los
primeros 3 ml del eluato y recoger el resto del eluato
en un matraz adecuado para inyectar en el
cromatógrafo.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
USP 37
un recipiente de 100 ml. Si fuera necesario, retirar cual-
quier contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas
vacías lavando con varias porciones de éter. Desechar
los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas con
ayuda de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas
de las Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y
calcular el peso neto del contenido de las Cápsulas.
Transferir una porción de contenido de las Capsulas,
equivalente a una cantidad nominal de 1 mg de flúor, a
un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar 15 mL de
agua y agitar vigorosamente. Enjuagar las paredes del
matraz con 15 mL de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos. Diluir con agua hasta 85 mL, ajustar con
hidróxido de sodio 1 N a un pH de 10,4 ± O, 1 y diluir
con agua hasta 100 ml. Proceder según se indica en
Solución estándar, comenzando donde dice "Filtrar, des-
echando los primeros 15 mL del filtrado."
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L17
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
r5 = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO
Agua de bromo: Bromo y agua (1 :5). Agitar. Dejar en
reposo durante 30 minutos y usar el sobrenadante.
Análisis
Muestra: Cápsulas
Retirar el contenido de las Cápsulas cortando para abrir
las Cápsulas. Mezclar y determinar el peso de los con-
tenidos. Transferir una cantidad de contenido, equiva-
lente a 3 mg de yodo, a un crisol de níquel. Agregar
5 g de carbonato de sodio, 5 mL de solución de hidró-
xido de sodio al 50% (p/v) y 1O mL de alcohol, procu-
rando humedecer toda la muestra. Calentar el crisol en
un baño de vapor para evaporar el alcohol, luego se-
car el crisol a 100º durante 30 minutos para evitar
salpicaduras durante el calentamiento subsiguiente.
Transferir el crisol con su contenido a un horno calen-
tado a 500º y calentar el crisol durante 15 minutos.
[NOTA-Es necesario calentar a 500º para carbonizar
toda la materia orgánica presente; se puede usar una
temperatura más alta, si fuera necesario, para asegurar
la carbonización completa de la materia orgánica.j
Enfriar el crisol, agregar 25 mL de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de refoj y calentar a ebullición suave
durante 1O minutos. Filtrar la solución y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar ácido fosfó-
rico hasta que la solución sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 mL de ácido fosfórico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6239
calentar la solución a ebullición suave hasta que se
torne incolora, y luego durante 5 minutos más. Agre-
gar unos pocos cristales de ácido salicílico y enfriar la
solución a 20°. Agregar 1 mL de ácido fosfórico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dón SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = V x NA x F x lme x (Aw!W) x (100/ L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(mL)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
F = factor de corrección para convertir mg a µg,
1000 µg/mg
lme = miliequivalente de 1, 21, 16 mg/mEq
Aw = peso promedio del contenido de las Cápsulas
W = peso de la muestra del contenido de las
Cápsulas tomado
L = cantidad declarada de yodo (µg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 1
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 25 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 µg/mL de
hierro.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 1.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 5 µg/mL de hierro y omitir el uso de Solución de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Hierro; de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a ,?48,3 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µ~/mL)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO, Método 1
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 1.
6240 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Solución madre del estándar de magnesio: 1000 µg/
mL de magnesio, a partir de cinta de magnesio en
ácido clorhídrico 6 N y agua (1 :19)
Solución madre del estándar: 20 µg/mL de magnesio,
a partir de Solución madre del estándar de magnesio di-
luida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 mL. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/mL de
magnesio.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una cantidad nominal de
0,4 µg/mL de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 ml.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO, Método 7
Solución madre del estándar de manganeso: 1000
µ9/mL de manganeso en ácido clorhídrico 6 N y ácido
nitrico (49:1 ). [NOTA-Disolver el manganeso en ácido
nítrico y diluir con ácido clorhídrico 6 N hasta el volu-
men final.]
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 µg/mL de manganeso.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 1 µg/mL de manganeso y omitir el uso de Solución
de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
USP 37
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Manganeso; de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
mangan~so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 7
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1 000 µg/mL de molibdeno.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
la Solución madre del estándar a sendos matraces volu-
métricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido percló-
rico a cada matraz. Calentar a ebullición suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 µg/mL de molibdeno.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 1.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe tomar un número de
Cápsulas o una porción de contenido de las Cápsulas
nominalmente equivalente a 1000 µg de molibdeno y
realizar diluciones apropiadas hasta obtener una con-
centración final de 1O µg/mL de molibdeno, omitiendo
la adición de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Molibdeno; de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20: 1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
USP 37
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (pg/ml)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (pg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4,98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: 400 mg/ml de
cloruro estannoso en solución de ácido clorhídrico 6,5
N y agua (1 :4). [NOTA-Disolver primero en ácido clor-
hídrico 6,5 N y calentar la solución hasta que se di-
suelva el cloruro estannoso. Luego, diluir con agua a
volumen.]
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% y agua (1 :24). Preparar esta solu-
ción en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/ml de molibdeno, a partir de
molibdato de amonio en agua
Muestra: Retirar el contenido de un número contado
de Cápsulas cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y
determinar el peso de los contenidos. Transferir una
cantidad de contenido de las Cápsulas, equivalente a
una cantidad nominal de 40 mg de molibdeno, a un
vaso de precipitados de 200 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 465 nm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solución estándar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de ácido nítrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullición lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 mL de ácido perclórico, cu-
brir los vasos de precipitados con un vidrio de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestión sea
completa, lo cual se indica cuando el líquido se torna
incoloro o amarillo pálido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar más agua para completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar a ebulli-
ción suave la solución acuosa durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 9otas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
de amonio. Agregar 8,2 ml de ácido clorhídrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumétricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumétricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solución a embudos de separación.
Agregar a cada embudo de separación 1,0 ml de Solu-
ción de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solución de sulfato
ferroso, 4,0 ml de Solución de tiocianato de potasio,
1,5 ml de Solución de cloruro estannoso al 20% y
15,0 ml de alcohol amílico, y agitar los embudos de
separación durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solución de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separación y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las capas se separen y desechar las ca-
Suplementos DiE'téticos /Vitaminas H1drosolubles 6241
pas acuosas. Transferir la capa orgánica de cada em-
budo de separación a un tubo de centrífuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbn1icias de las fases organicas de la Solu-
ción estándar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (A,/A1) x [(V x C)/Mu] x 100
Au = absorbancia de la solución a partir de la
Muestra
As = absorbancia de la solución a partir de la
Solución estándar
V = volumen de la Soluoon estandar analizada,
2,0 ml
Cs = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (pg/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(pg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
,declarada de molibdeno (Mo)
• FOSFORO, Método 1
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar 1 gota de ácido sulfúrico por 100 ml
de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secado a 1 05u durante 2 horas y almacenado en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1 000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 ~tg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 pg/ml de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cápsulas, equivalente a una cantidad
nominal de 100 mg de fósforo a 25 ml de ácido nítrico
y digerir sobre una placa de calentamiento durante 30
minutos. Agregar 15 ml de ácido clorhídrico y conti-
nuar la digestión hasta que cese la producción de hu-
mos marrones. Enfriar v transferir el contenido del ma-
traz a un matraz volumétrico de 500 ml con ayuda de
pequeñas porciones de agua. Diluir con agua a volu-
men. Transferir 10,0 ml de esta solución a un matraz
volumétrico de 100 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 650 nm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir a tres matraces volumétricos diferentes de
25 ml, 5,0 ml de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de agua para proporcionar el blanco. Agre-
gar a cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solu-
ción de molibdato de amonio, de Solución de hidroqui-
nona y de Solución de bisulfito de sodio, y agitar por
rotación suave hasta mezclar. Diluir el contenido de
cada matraz con agua a volumen y dejar los matraces
en reposo durante 30 minutos. Determinar las absor-
bancias de las soluciones contra el blanco.
6242 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au/As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
C5 = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fósforo (P)
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 100 µg/ml de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105º durante 2 horas, en agua.
Solución madre del estándar: 1O µg/ml de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ~/ml de potasio.
Solucion de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una cantidad nominal de
1 µg/ml de potasio y omitir el uso de Solución de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
• SELENIO, Método 7
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 7. , Solucion de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
Solución estándar de selenio: [PRECAUCION-EI selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 ml y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1000
µg/ml de selenio.
USP 37
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones que contengan 5,0; 10,0 y 25,0 µg/ml de
selenio.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cápsulas, equivalente a una cantidad
nominal de 1000 µg de selenio, a un matraz adecuado
y agregar 12 ml de ácido nítrico. [NOTA-Se puede va-
riar el volumen de ácido nítrico para asegurar que el
polvo se disperse uniformemente.] Agitar el matraz por
rotación suave cuidadosamente hasta dispersar la mues-
tra de prueba. Someter a ultrasonido durante 1 O minu-
tos o hasta que la muestra de prueba se disuelva por
completo. Calentar a ebullición suave la solución du-
rante 15 minutos y enfriar a temperatura ambiente.
Agregar cuidadosamente 8 ml de ácido perclórico al
matraz, calentar el matraz hasta que aparezcan humos
de ácido perclórico y agitar el matraz por rotación
suave para disipar los humos. Repetir el calentamiento y
la agitación por rotación suave hasta que los humos
aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir el contenido del matraz a un matraz volumé-
trico de 50 ml con ayuda de Diluyente y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
selenio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2 ,
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico diluido
con a$1ua (1 en 1O)
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/ml de edetato disódico y 25 mg/ml
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.] . . .
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diammonaftaleno
a un embudo de separación de 250 ml y agregar
200 ml de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la solución
con tres porciones de 40 ml de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
USP 37
marrón y cubrir la solución con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solución permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador.
Solución madre del estándar: [PRECAUCIÓN-El selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 ml y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/ml de selenio. Diluir un volumen
de la solución con ácido clorhídrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentración de 2,0 µg/ml de selenio.
Solución estándar: Transferir 10,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agre-
gar 1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución de
ácido clorhídrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cápsulas, equivalente a una cantidad
nominal de 20 µg de selenio, a un matraz adecuado.
Agregar 1O ml de ácido nítrico y entibiar suavemente
sobre una placa de calentamiento. Continuar calen-
tando has~a que la reacción inicial de áSi~o nítrico, haya
desapareqdo y luego agregar 3 ml de ac1do perclorico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a
que l_a reacción del ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido perclórico
o hasta que la digestión comience a tornarse oscura.
Agregar 0,5 ml de ácido nítrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de ácido ní-
trico si se presenta un oscurecimiento adicional. Digerir
durante 1 O minutos después de la primera aparición de
humos de ácido perclórico o hasta que la digestión se
torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 ml de So-
lución de ácido clorhídrico y devolver ef matraz a la placa
de calentamiento para expulsar los residuos de ácido
nítrico. Calentar la mezcla durante 3 minutos después
de que comience a hervir. Enfriar el matraz a tempera-
tura ambiente y diluir con agua hasta 20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 380 nm
Blanco: 1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución
de ácido clorhídrico, diluido con agua hasta 20 ml
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco según se indica a continuación. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave para mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 ± O, 1 . Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotación suave para mezclar. Co-
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50º y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paración. Transferir 10,0 ml de ciclohexano a cada
embudo de separación y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrífuga y centri-
fugar a 1000 rpm durante 1 minuto para eliminar el
agua remanente. Determinar las absorbancias de las
soluciones a partir de las Muestras contra la solución
obtenida a partir del Blanco.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6243
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (A uf As) x [(V x Cs)! Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar,
10 ml
Cs = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra (µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 7
Solución estándar de cinc: 1000 µg/ml de cinc, a par-
tir de óxido de cinc disuelto en ácido clorhídrico 5 M
(3,89 mg/ml) y diluida con agua hasta el volumen fi-
nal. [NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M enti-
biando, si fuera necesario, enfriar, y luego diluir hasta el
volumen final.]
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc difuida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener _concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
ml de cinc.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Sol1;.1ción muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Metodo 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 2 µg/ml de cinc y omitir el uso de Solución de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 213,8 IJm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ$)/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• BORO, NÍQUEL, ESTAÑO y VANADIO, Método 7; CALCIO,
(ROMO, (OBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FÓSFORO
y CINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1) agregando el
6244 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando un volumen de Solu-
ción madre de agua regia a dos volúmenes de agua.
Diluir con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandia en solución de ácido
nítrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales
de interés en la solución.] Usando soluciones estándar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solución de ácido nítrico al 5% (v/
v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de solu-
ción estándar de elementos a un matraz volumétrico y
diluir con solución de ácido nítrico al 5% (v/v) hasta
obtener una solución con concentraciones finales de
aproximadamente 1 000 mg/L de calcio, 100 mg/L de
cobre, 250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio,
1 00 mg/L de manganeso, 800 mg/L de fósforo y
250 mg/L de cinc.
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lución estándar de elementos a un matraz volumétrico
y diluir con solución de ácido clorhídrico al 20% (v/v)
hasta obtener una solución con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 100 mg/L de
cromo, de molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño
y de vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 7 y Solución madre del estándar 2,
según se reguiera, en Diluyente para preparar una curva
de calibracion de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra: Pesar, luego transferir 5 Cápsulas a
un matraz volumétrico de 250 mL, y calentar suave-
mente sobre una placa de calentamiento hasta que el
contenido empiece a liberarse. Agregar cuidadosamente
25 mL de Solución madre de agua regia en incrementos
de 5 mL y agitar por rotación suave. Calentar, continuar
agitando por rotación suave hasta que las Cápsulas se
disuelvan en el ácido, retirar inmediatamente de la
fuente de calor y agregar 150 mL de agua. Enfriar y
diluir con agua a volumen. Filtrar aproximadamente
30 mL en un tubo de centrífuga usando un filtro de
nailon para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm.
Realizar los ajustes necesarios usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometría de emisión de plasma inducti-
vamente acoplado, usando un espectrómetro ajustado
para medir la emisión de cada mineral de interés apro-
ximadamente a la longitud de onda correspondiente.
[NOTA-Las condiciones operativas se pueden desarro-
llar y optimizar basándose en las recomendaciones del
fabricante. Se debe demostrar mediante experimentos
que las longitudes de onda seleccionadas proporcio-
nan la especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud
y precision suficientes.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en el Análisis.]
USP 37
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en las
Soluciones estándar y la Solución muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado usando Dilu-
yente como blanco. Graficar la emisión de las Solucio-
nes estándar en función de las concentraciones, en
mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta que
mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir de la
gráfica así obtenida, determinar la concentración, C,
en mg/L, de cada mineral de interés en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral:
Resultado = C x (V/W) x F x (Cw/L) x 100
C = concentración medida del elemento pertinente
en la Solución muestra (mg/L)
V =volumen de la Solución muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
Cw = peso promedio por Cápsula (mg)
L = cantidad declarada del elemento
pertinente/Cápsula (mg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P), potasio
(K) y cinc (Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades de-
claradas de boro (B), cromo (Cr), flúor (F), yodo (1),
molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se), estaño (Sn) y
vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS,
Disolución (2040): Cumplen con los requisitos de
Disolución.
• VARIACIÓN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3x102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Cáp-
sulas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales. La eti-
queta también indica la cantidad de cada vitamina y mi-
neral en términos de unidades métricas por unidad de
dosificación y, cuando sea necesario, la forma química de
vitamina presente, e indica además la forma salina del
mineral usado como la fuente de cada elemento. Cuando
se proporciona más de un método de valoración para
una vitamina o mineral en particular, el etiquetado indica
el método de valoración con el que cumple el producto
únicamente si no se usa el Método 7.
USP 37
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Cianocobalamina USP
ER Qexpantenol USP
ER Acido Fálico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Riboflavina USP
ER Fluoruro de Sodio USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Hidrosolubles con Minerales,
Solución Oral
DEFINICIÓN
La Solución Oral de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales
contiene una o más de las siguientes vitaminas hidrosolu-
bles: Cianocobal9mina, Niacina o Niacinamida, Dexpante-
nol o Pantenol Acido Pantoténico (como Pantotenato de
Calcio o Pantotenato de Calcio Racémico), Clorhidrato de
Piridoxina Riboflavina o Riboflavina-5'-Fosfato Sódico y
Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato de Tiamina; y uno
o más minerales derivados de sustancias generalmente re-
conocidas como seguras, prese~ta~do uno o má~ de los
siguientes elementos en f~rma 1onizabl~,: yodo, h1err.o,
magnesio, manganeso y cinc; La Soluc1on Oral cont1~ne
no menos de 90,0% y no mas de 250,0% de la ~ant1dad
declarada de tiamina (C12H11CIN40S) como clorhidrato de
tiamina o mononitrato de tiamina; no menos de 90,0% y
no más de 150,0% de las cantidades declaradas de pan-
totenato de calcio (C13H32CaN2010), dexpantenol o pante-
nol (C9H19N04 ), niacina (C6HsN02) o niacinamida . Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
(C6H6N20), clorhidrato de .Pirido-:<ina ~CsH11 N03; ~CI) y n-
boflavina (C11H20N406) o nboflavina-5 -fosfato sod1co
(C11H20N4Na09P); no menos de 90,0~ y no más d~
450 0% de la cantidad declarada de c1anocobalamina
(C63HssCoN14014P); no menos de 90,0% y no más de
160 0% de la cantidad declarada de yodo (I); y no menos
de 9o
0% y no más de 125,0% de las cantidades declara-
das d~ hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn) y
cinc (Zn).
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se. prop~r­
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo ,cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el metodo
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.]
• CIANOCOBALAMINA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar: 1,0 µg/mL, a partir de
ER Cianocobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar
en un refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que después 9e1 _perio~o de i~cubación se-
gún se describe en el Anal1S1s, la d1ferenc1.a en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 mL
de la Solución ~stándar sea no menor que la correspon-
diente a una d1ferenc1a de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 ng/mL y 0,04 ng/mL de la Solución estándar. Pre-
parar esta solución en el momento de su uso para cada
valoración.
Solución muestra: Transferir a un vaso apropiado un
volumen medido con exactitud de Solución Oral que se
supone contiene 1,0 µg de cianocobalamina por cada
Suplementos DietPticos /Vitaminas Hidrosolubles 6245
mL de la Solución Oral tomada y 25 mL de una solu-
ción de extracción acuosa preparada justo antes de su
uso que contiene, por cada 100 mL, 1,29 g de fosfato
dibásico de sodio, 1, 1 g de ácido cítrico anhidro y 1,0 g
de metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 ·
durante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier par-
tícula del extracto sin disolver y filtrar o centnf~gar, s1
fuera necesario. Diluir una alícuota de la soluc1on trans-
parente con agua hasta obtener una solució.n final que
contenga una actividad de vitamina B12 ~qu1valente
aproximadamente a la de la So/uc1on estandar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 mL de
ácido clorhídrico 6 N v someter la me7Cla a reflu¡o du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver .r;uevamente ,la
pasta resultante en agua, ajustar la soluc1on con h1dro-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 :t O, 1, y diluir con
agua hasta 1000 mL. Agregar 20 g de .carbón act!vado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1Oº. Fil-
trar la solución si se forma un prec1p1tado durante el
almacenamiento.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 mL. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O mL de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrigera_dor.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 mL de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 mL ?~
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los soli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
, .
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobas1co
de potasio y 1 O g de fosfato di básico de potasio e,n.
agua ,rara obtener 200 mL, y ag~~gar 2 gotas de aodo
clorh1drico. Almacenar esta soluoon ba¡o tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y O 20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 mL, y agregar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solución bajo tolueno. .
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de pol1sor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 mL. Almacenar en
un refrigerador. . .
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de nboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 100 µg de biotina y
20 mg de niacina en ácido acético 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
protec;¡er de la ,lu.z. . , . .
Solucion vitam1rnca B: Disolver 20 mg de ac1do p-am1-
nobenzoico, 1O mg de pantotenato de ca_lcio, 40 mg. de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de p1n-
doxal, 8 mg de diclorhidrato de p1ndoxam1na y 2 mg
de ácido fálico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 mL. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz. .
Solución madre del medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en el etiqueta90, produzc~ un me-
dio comparable al obtenido de la formula provista en
este procedimiento. .
Agregar los ingredientes en el orden. listado .en. la Tabla
7 disolviendo cuidadosamente Ctstma y Tnptofano en
á~ido clorhídrico antes de agregar las siguiente~ ocho
soluciones. Agregar 100 mL de agua a la soluc19n. re-
sultante y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Ao~o
ascórbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar Soluoon de
6246 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
polisorbato 80, ajustar con hidróxido_ de sodio 1 N a un
pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificada hasta
250 mL.
Tabla 1
L-Cistina
L-Triptófano
Ácido clohídrico 1 N
Solución de adenina--quanina-uracilo
Solución de xantina
Solución vitamínica A
Solución vilarní11ica B
Solución salina A
Solución salina B
Solución de asparaqina
Solución de hidrolizado ácido de caseína
Dextrosa anhidra
Acetato de sodio anhidro
Ácido ascórbico
Solución de nolisorbato 80
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coa~yuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y filtrar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesa.:io, hasta obtener.
un filtrado transparente de color pa11zo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconsti~uya s~gún se indica en
el etiquetado, produzca un medio equ1vale.nt~ al obte~
nido de la fórmula provista en este proced1m1ento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de Dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1 O mL de Preparación de jugo de torl?at~ J'. 1 mL de ~olu­
ción de polisorbato 80. Ajustar con h1drox1do de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua h?~ta 100 mL.
Colocar porciones de 1O mL de la soluc1on en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar.la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medi~o de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacíl/us leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de_ 1 O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nut~s y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. Inocular tres o más de los tubos, sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacil/us leichmannii. 1
[NOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
rado por primera vez en esta valoración, realizar no me-
nos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura entre
30º y 40º mantenida termostáticamente con un mar-
gen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador.
1 Se pueden obtener cultivos puros de Lactobaci/lus leíchmaníí (listados corno
Lactobacíllus delbruekí1) como Nº 7830 en ATCC, 10801 Un1vers1ty Blvd., Ma-
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.org).
USP 37
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y ~o usarlos para preparar el. lnóculo
si tienen más de 4 d1as de preparados. La act1v1dad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al día, del cultivo por
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
o1 q turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
o 05 q en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
10 ml adecuada y puede conducir a resultados er:~ticos.
5 ml lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspens1on conge-
5 ml lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
10 ml siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
10 ml
cultivo recientemente preparado.] Realizar una _transf_e-
rencia de células del Cultivo madre de LactobaC11fus le1ch-
5 ml
mannii a dos tubos estériles que contengan cada uno
5 ml 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar estos cultivos du-
5 mL rante 16-24 horas a una temperatura entre 30º y 40º
25 ml mantenida termostáticamente con un margen de ±0,5º.
10 q Centrifugar los cultivos bajo condiciones asépticas y de-
5 a
cantar el sobrenadante. Suspender las células del cultivo
en 5 mL de Medio de suspensión estéril y mezclar.
1 a Usando Medio de suspensión estéril, ajustar el volumen
5 ml de manera que una dilución 1 en 20 en solución salina
SR produzca una transmitancia del 70% cuando se lee
en un espectrofotómetro adecuado ajustado a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1 O mm, y leer contra el set de solución ~ali'!? SR a una
transmitancia del 100%. Preparar una d1luc1on 1 en 400
de la suspensión ajustada usando Solución madre de me-
dio basal estéril. [NOTA-Esta dilución se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.] La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. fntes de leer cualquier .Prueba,
calibrar el espectrofotometro con agua para fijar el 0%
y el 1 00% de transmitancia, y con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio .dur? y deri:ás
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1 5· 2 O· 3 O· 4 O y 5,0 mL de la Solución estándar.
Ag~eg~r' a ~;da' uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Sol~ción mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solucion madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y .muestra
juntos en una gradilla para ~~bos y el set duplicado en
una segunda gradilla o secoon de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no más de 1 O minutos precalentando el autoclave s1
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formació~ de color que res~lta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zación y enfriamiento durante toda _la valoración, _de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o s1 se
USP 37
sobrecarga el autoclave puede ocasionar variaciones en
la velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 ml de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. El estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o más. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminación con un microorganismo extraño, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cuaíquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (I:s) como la diferencia, y =
2,00 - 1:5 • Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los ml
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmética o loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la recta o la curva de regresión
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - I:u, sumando las dos
transmitancias (I:u) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer, a partir de la curva estándar, el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido el logaritmo del volumen, en ml, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, de cada
nivel de dosificación. Promediar los valores de X para
cada uno de los tres o más niveles de dosificación
para obtener X, que es i9ual al logaritmo de potencia
relativa, M', de la Solucion muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de cianocobalamina
(C63HssCoN14014P) en la porción de Solución Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + lag R)
R = µg de cianocobalamina que se supuso estaban
presentes en la porción de Solución Oral
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = [(antilog M)/NJ x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Solución Oral tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6247
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia, Actividad de Vitamina 812). Si las
dos determinaciones difieren en más de 0,08, realizar
una o más determinaciones adicionales. A partir de la
media de dos o más valores de M que no difieran en
más de O, 15, calcular la potencia media de la prepara-
ción que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-450,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HssCoN14014P)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 7
Fase móvil: Metanol y fosfato monobásico de sodio 0,2
M (3:97). Ajustar con ácido fosfórico 1,7 M a un pH de
3,2 ±O, l.
Solución estándar: 80 µg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Fase móvil
Solución de aptitud del sistema: 80 µg/ml de ER Pan-
tenol Racémico USP en Fase móvil. Mezclar la solución
resultante y Solución estándar (1 :1 ).
Solución muestra: Equivalente a 80 µg/ml de pantote-
nato de calcio, a partir de Solución Oral, en Fase móvil
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre pantenol y pan-
totenato de calcio, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para los picos de
pantotenato de calcio y de pantenol, Solución de apti-
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
r5 = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la Solución muestra
(mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (Cl8H32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la absorción de humedad durante la pe-
sada, en 500 ml de agua en un matraz volumétrico de
1000 ml. Agregar 1O ml de ácido acético 0,2 N y
100 ml de solución de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
ción de 50 µg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en el
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solución estándar, están
6248 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
dentro de la porción lineal de la curva de respuesta en
función del logaritmo de la concentración.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 50 mg de
pantotenato de calcio, a un matraz volumétrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con agua a volumen,
y filtrar. Diluir un volumen medido de esta solución
cuantitativamente, y en diluciones sucesivas si fuera ne-
cesario, con agua hasta obtener una solución con apro-
ximadamente la misma concentración que la de la Solu-
ción estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un re-
frigerador a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un refrigerador a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina, 1 O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml.. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas, según la Tabla 2 y ajustar con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 2
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triptófano 25 ml
Solución de polisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
USP 37
Tabla 2 (Continuación)
1 Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 1 00 ml. de agua; agre-
gar 500 mg de dextrosa anhidra, 500 mg de acetato de
sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mezcla en
un baño de vapor, mezclando, hasta que se disuelva el
agar. Agregar porciones de 1 O ml. de la solución ca-
liente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los tubos, este-
rilizar en un autoclave a 121 º durante 15 minutos y
dejar que los tubos se enfríen en posición vertical. Ino-
cular tres o más de los tubos, sembrando por punción
un cultivo puro de Lactobaci//us plantarum, 2 incubando
durante 16-24 horas a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de ±0,5º.
Almacenar en un refrigerador. Preparar un cultivo re-
ciente por punción del cultivo madre una vez por se-
mana y no usarlo para preparar el lnóculo si el cultivo
tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml. de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml. de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1 O ml de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml. de la Solu-
ción estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 ml de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspon-
dientes a tres o más niveles especificados de la Solu-
ción estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución ma-
dre de medio basal y agua suficiente para obtener
1 O ml. Colocar un set completo de tubos de Estándar
y muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilfa o sección de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la con-
taminación y esterilizar en un autoclave a 121 º du-
rante 5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnóculo a
cada tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
37º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel más alto
de Estándar durante un periodo de 2 horas.
-----
2 ATCC Nº 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobaci/lus arabinosus 17-5.
USP 37
Determinar la transmitancia de los tubos de la si-
guiente manera. Mezclar el contenido de cada tubo y
transferir a un recipiente apto para lectura óptica si
fuera necesario. Leer la transmitancia entre 540 y 660
nm cuando se alcance un estado estacionario. El es-
tado estacionario se observa unos pocos segundos
después de la agitación cuando la lectura del galva-
nómetro se mantenga constante durante 30 segun-
dos o más. Permitir aproximadamente el mismo inter-
valo de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nación con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (l:s) como la diferencia, y == 2,00 - l:s. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la recta
o la curva de regresión que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y == 2,00 - l:u, sumando las dos
transmitancias (l:u) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer, a partir de la curva estándar, el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido el logaritmo del volumen, en mL, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, de cada
nivel de dosificación. Promediar los valores de X para
cada uno de los tres o más niveles de dosificación
para obtener X, que es i9ual al logaritmo de potencia
relativa, M', de la Solucion muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente a pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2010) en la porción de Solución Oral
tomada:
antilog M == antilog (M' + log R)
R == número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Solución Oral tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado== [(antilog M)/N) x 100
N == cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Solución Oral tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, lVI, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
vaforando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6249
• DEXPANTENOL o PANTENOL, Método 7
Fase móvil y Sistema cromatográifco: Proceder según
se indica en la valoración de Pantotenato de Calcio, Mé-
todo 7.
Solución estándar: 80 µg/ml. de ER Dexpantenol USP o
ER Pantenol Racémico USP en Fase móvil. [NOTA-Usar
ER Dexpantenol USP para analizar la Solución Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racémico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solución de aptitud del sistema: 80 µg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en Fase móvil. Mezclar la solu-
ción resultante y la Solución estándar (1 :1 ).
Solución muestra: Equivalente a 80 ~tg/mL de dexpan-
tenol o pantenol, a partir de Solución Oral en Fase
móvil
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
dexpantenol o pantenol (C9H19N04) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solución muestra
rs = área del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solución estándar
Cs == concentración de ER Dexpantenol USP o ER
Pantenol Racémico USP en la Solución
estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de la Solución muestra
(mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
• DEXPANTENOL o PANTENOL, Método 2
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 800 µg/mL de ER Dex-
pantenol USP o 1600 µg/mL de ER Pantenol Racémico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 días. [NOTA-Usar ER
Dexpantenol USP para analizar la Solución Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racémico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
1,2 µg/mL de dexpantenol o 2,4 µg/mL de pantenol ra-
cémico, a partir de Solución madre del estándar con
agua.
Solución muestra: 1,2 µg/mL de dexpantenol o 2,4 µg/
mL de pantenol, a partir de Solución Oral en agua
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 mL de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 mL de agua,
ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 ± O, 1, y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar
20 g de carbón activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbón activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un refrigerador a una tempera-
tura de no menos de 1 Oº. Filtrar la solución si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 mL de agua, calentar a
6250 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
75 ± 5º y agregar ácido clorhídrico 6 M gota a gota,
mezclando, hasta que los sólidos se disuelvan. Enfriar,
diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar. Almacenar
bajo tolueno en un refrigerador a una temperatura de
no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar, diluir con agua hasta
200 ml y mezclar. Almacenar bajo tolueno en un
refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: Preparar una solución de riboflavina, clorhidrato
de tiamina y biotina en ácido acético 0,02 N que con-
tenga 20 µg/ml de riboflavina, 1O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina. Almacenar bajo to-
lueno en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: Preparar una solución en alcohol
neutro al 25% que contenga 1 O µg/ml de ácido p-ami-
nobenzoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhi-
drato de piridoxina. Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico y mezclar. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
40 mg de clorhidrato de piridoxal y 375 µg de pantote-
nato de calcio en alcohol al 10% para obtener 200 ml
y mezclar. Almacenar en un refrigerador y usar dentro
de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: Disolver
25 g de polisorbato 40 y 0,25 g de ácido oleico en al-
cohol al 20% para obtener 500 ml y mezclar. Almace-
nar en un refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Medio de pantotenato modificado:
Disolver Dextrosa anhidra y Acetato de sodio anhidro en
las soluciones previamente mezcladas, según la Tabla 3
y ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Finalmente, diluir con agua hasta 250 ml y mezclar.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de nolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 q tual de las suspensiones, en celdas de igual longitud
Acetato de sodio anhidro 5q
Solución de adenina-ouanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina 1 5 ml
Solución salina 2 5 ml
Solución de oiridoxal-oantotenato de calcio 5 ml
Solución de oolisorbato 40-ácido oleico 5 ml
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pantote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
ción final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
USP 37
4,0 g de digerido pancreático de caseína, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidróxido de so-
dio O, 1 N o ácido clorhídrico O, 1 N a un pH entre 6,5 y
6,6, diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar. Agregar
porciones de 1O ml de la solución a tubos de cultivo,
tapar los tubos y esterilizar en un autoclave a 121 º du-
rante 15 minutos. Enfriar en pendiente y almacenar en
un refrigerador. Preparar un cultivo madre de Pediococ-
cus acidilactici3 en un tubo que contenga este medio.
Incubar a 35º durante 20-24 horas y almacenar en un
refrigerador. Mantener el cultivo madre mediante trans-
ferencias mensuales a tubos con medio inclinado prepa-
rado recientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado con el cultivo madre en medio
inclinado e incubar a 35º durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensión a partir de las porciones combina-
das y lavar las células con Medio de pantotenato modifi-
cado. Resuspender las células en suficiente Medio de
pantotenato modificado estéril de manera que una dilu-
ción 1 en 50, cuando se analiza en un tubo de ensayo
de 1 3 mm de diámetro, proporcione 80% de transmi-
sión de luz a 530 nm. Transferir porciones de 1,2 ml de
esta suspensión madre a ampollas de vidrio estéril, se-
llar, congelar en nitrógeno liquido y almacenar en un
congelador. En el día de la valoración, dejar que las
ampollas alcancen la temperatura ambiente, mezclar el
contenido y diluir 1 ml de cultivo descongelado con
solución salina estéril SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta di-
lución se puede alterar, cuando sea necesario, para ob-
tener la respuesta de prueba deseada.]
Análisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,q ,ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Soluoon
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentración a cada tubo y mezclar. Tapar los
tubos con tapas de metal y esterilizar en un autoclave
a 121 º durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un baño de agua fría e inocular cada tubo
con 0,5 ml del lnóculo. Dejar que se incube a 37° du-
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
una temperatura de no menos de 80º, por ejemplo
mediante la aplicación de vapor a presión atmosférica
en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
terminar concomitantemente la transmitancia porcen-
de paso, en un espectrofotómetro adecuado, a una
longitud de onda de 530 nm.
Cálculos: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estándar en función de las concentraciones
del nivel del estándar. La curva se traza conectando
cada par de puntos adyacentes con una línea recta. A
partir de esta curva estándar, determinar mediante
interpolación la potencia, en términos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solución
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solución muestra que se le agregó, para ob-
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
media promediando las respuestas individuales que va-
rían de su media en no más de 15%, usando no me-
nos de la mitad del número total de tubos. Calcular la
potencia de la porción de la Solución Oral tomada
'ATCC Nº 8042 es adecuado.
USP 37
para la valoración multiplicando la respuesta media
por el factor de dilución apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia calculada de dexpantenol o pantenol
en la porción de Solución Oral tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porción de Solucion Oral tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
• NIACINA O NIACINAMIDA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Metanol, ácido acético glacial, trietilamina
y 1-hexanosulfonato de sodio 0,008 M (350: 15: 0,4:
1634,6)
Solución estándar: O, 1O mg/ml de ER Niacina USP o
ER Niacinamida USP en Diluyente. [NOTA-Usar ER Nia-
cina USP para Solución Oral que contenga niacina y
usar ER Niacinamida USP para Solución Oral que con-
tenga niacinamida.]
Solución muestra: Diluir un volumen de Solución Oral,
medido con exactitud, con Diluyente hasta obtener una
solución con una concentración de O, 1 mg/ml de nia-
cina o niacinamida.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de nia-
cina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la por-
ción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
rs = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 24 µg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Dilyuente
Solución muestra: Equivalente a 24 µg/ml de clorhi-
drato de piridoxina, a partir de Solucion Oral en
Diluyente
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6251
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de clor-
hidrato de piridoxina (C 8 H 11 NO i · HCI) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado= (r,;/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución muestra
r1 = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11NO, · HCI)
• RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SÓDICO, Método 1
[NOTA-Riboflavina-5'-fosfato sódico se cuantifica contra
el ER Riboflavina USP en este procedimiento. En el cro-
matograma de la Solución muestra, el pico de ribofla-
vina-5' -fosfato es el único pico medido para cálculos.]
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ribofla-
vina-5'-fosfato y riboflavina son aproximadamente O, 18
y 1,0, respectivamente.]
Solución estándar: Equivalente a 8 µg/ml de ER Ribo-
flavina USP en Diluyente, calentando si fuera necesario.
Solución muestra: Equivalente a 8 µg/ml de ribofla-
vina, a partir de Solución Oral en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ri-
boflavina (C11H20N406) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( C1/ Cu) x F x 100
ru = área del pico de riboflavina-5'-fosfato de la
Solución muestra
r5 = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
F = factor para convertir la respuesta obtenida
para riboflavina-5'-fosfato a riboflavina, 1,493
lNOTA-La Riboflavina Fosfato Sódico es una
mezcla de monofosfatos y difosfatos isoméri-
cos que contienen una cantidad promedio
de 67% de riboflavina-5'-monofosfato, que
se separa en este sistema cromatográfico. El
factor 1,493 asume 67% de riboflavina-5'-
monofosfato.]
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SÓDICO, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este proceqimiento.]
Blanco de disolventes: Acido clorhídrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (1 :2:97)
Solución madre de riboflavina: O, 1 6 mg/ml de ER Ri-
boflavina USP en ácido clorhídrico 1 N, acetato de so-
dio 2,5 M y agua (1 :2:97). Mezclar la solución resul-
tante y agua (1 :9).
Solucion estándar: Solución madre de riboflavina, ácido
clorhídrico 1 N, acetato de sodio 2,5 M y agua
(1 :1 :2:96)
Solución muestra: Transferir el equivalente a 0,8 mg de
riboflavina, a partir de Solución Oral a un matraz volu-
métrico de 100 ml, y diluir con agua a volumen. Mez-
6252 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
ciar la solución resultante, ácido clorhídrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (2:1 :2:95).
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometria y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Fluorescencia
Longitudes de onda analítica
Excitación: 440 nm
Emisión: 530 nm
Blanco: Blanco de disolventes
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Determinar las intensidades de fluorescencia máximas, Is
e fu, de la Solución estándar y la Solución muestra, res-
pectivamente. Calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de riboflavina (C, 1H20N406) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado= (/u/Is) x (Cs/Cu) x 100
fu = intensidad de la fluorescencia de la Solución
muestra
Is = intensidad de la fluorescencia de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• TIAMINA
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 24 µg/mL de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en Diluyente
Solución muestra: Equivalente a 24 µg/mL de clorhi-
drato de tiamina, a partir de Solución Oral en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Para productos que contengan clorhidrato de tiamina,
calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
clorhidrato de tiamina (C12H11CIN40S · HCI) en la por-
ción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de tiamina (C12H11CIN40S ·
HCI)
• YODURO
Fase móvil: Disolver 5, 15 g de bromuro de tetrabutila-
monio en 320 mL de acetonitrilo. Diluir con agua hasta
2000 ml.
Solución madre del estándar: 1, 3 mg/mL de yoduro
de potasio en Fase móvil. Esta solución tiene una con-
centración de 1 mg/mL de yoduro.
Solución estándar: 2,5 µg/mL de yoduro, a partir de
Solución madre del estándar en Fase móvil
Solución de aptitud del sistema: Transferir O, 1 3 g de
yoduro de potasio y 0,5 g de yodato de potasio a un
matraz volumétrico de 100 ml. Disolver en Fase móvil,
usando ultrasonido, si fuera necesario, diluir con Fase
móvil a volumen y mezclar. Transferir 1,0 mL de esta
solución a un matraz volumétrico de 100 mL, diluir con
Fase móvil a volumen y mezclar. Transferir 25,0 mL de
esta solución a un matraz volumétrico de 100 mL y di-
luir con Fase móvil a volumen.
Solución muestra: Diluir un volumen, medido con
exactitud, de Solución Oral para obtener una solución
USP 37
con una concentración de 2,5 µg/ml de yodo en Fase
móvil
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 30 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para yodato
y yoduro son aproximadamente 0,32 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,5 entre yodato y yoduro,
Solución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de yoduro, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
yodo (1) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de yoduro de la Solución muestra
rs = área del pico de yoduro de la Solución
estándar
Cs = concentración de yoduro en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de yodo en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 mL, disolver en ácido clorhídrico 6 N y diluir con
agua a volumen.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 µg/mL de hierro.
Solución muestra: 6 µg/mL de hierro, a partir de Solu-
ción Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analítica: 248,3 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración de hierro en la Solución muestra
a partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/ml)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,00 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 50 ml de ácido clorhídrico 6 N y
diluir con agua a volumen.
Solución madre del estándar: 20 µg/ml de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio en ácido clor-
hídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 y
15,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir con ácido clorhídrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/ml de magnesio.
Solución muestra: 2,5 µg/ml de magnesio, a partir de
Solución Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotómetro de absorción atómica
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analítica: 285,2 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de magnesio en la Solución
muestra a partir de la gráfica (µg/ml)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,0 g de manganeso a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 20 ml de ácido nítrico y diluir
con ácido clorhídrico 6 N a volumen.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso en ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 µg/ml de manganeso.
Solución muestra: Diluir un volumen, medido con
exactitud, de Solución Oral para obtener una solución
con una concentración de 1,5 µg/ml de manganeso en
ácido clorhídrico 0, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotómetro de absorción atómica
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud pe onda analítica: 279,5 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6253
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración de manganeso en la Solución
muestra a partir de la gráfica (µg/ml)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (~1g/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
•CINC
Solución estándar de cinc: Transferir 311 mg de óxido
de cinc a un matraz volumétrico de 250 ml y agregar
80 ml de ácido clorhídrico 6 N, entibiando si fuera ne-
cesario para disolver. Enfriar, diluir con agua a volumen
y mezclar para obtener una solución con una concen-
tración conocida de 1 000 µg/ml de cinc.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc en ácido clorhídrico
0,125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
ml de cinc.
Solución muestra: Diluir un volumen, medido con
exactitud, de la Solución Oral para obtener una solu-
ción con una concentración de 1 µg/ml de cinc en
ácido clorhídrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analítica: 21 3,8 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de cinc en la Solución muestra a
partir de la gráfica (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
OTROS COMPONENTES
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método 1 (611 > (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada
de alcohol (C2HsOH)
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/ml, y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de) x 10 2 ufc/ml.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
6254 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte o con
una cámara gaseosa superior mínima.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Solu-
ción Oral de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales. La
etiqueta indica la cantidad de cada vitamina y mineral
presente en términos de unidades métricas en un volu-
men dado de Solución Oral y, cuando sea necesario, la
forma química de vitamina presente, e indica además la
forma salina del mineral usado como la fuente de cada
elemento. Cuando los productos declaran contener pan-
tenol, la etiqueta indica el contenido equivalente de dex-
pantenol. Cuando se proporciona más de un método de
valoración para una vitamina o mineral en particular, el
etiquetado indica el método de valoración con el que
CU!)lple el producto únicamente si no se usa el Método 1.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Cianocobalamina USP
ER Dexpantenol USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Pantenol Racémico USP
ER Riboflavina USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Hidrosolubles con Minerales,
Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales con-
tienen, una o más de las siguientes vitaminas hídrosolu-
bles: Acido Ascórbico o su equivalente como Ascorbato de
<;:alcío o Ascorbato de Sodio, Bíotina, panocobalamína,
Acído Fálico, Níacína o Niacínamida, Acido Pantoténico
(como Pantotenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Ra-
cémíco), Clorhidrato de Piridoxina, Riboflavína y Clorhi-
drato de Tiamina o Mononítrato de Tíamína; y uno o más
minerales derivados de sustancias generalmente reconoci-
das como seguras, que proporcionan uno o más de los
siguientes elementos en forma íonízable: boro, calcio,
cromo, cobre, flúor, yodo, hierro, magnesio, manganeso,
molibdeno, níquel, fósforo, potasio, selenio, estaño, vana-
dio y cinc. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y
no más de 150,0% de las cantidades declaradas de ácido
ascórbíco (C6Hs06) o sus sales como ascorbato de calcio
(C12H14Ca012 · 2H20) o ascorbato de sodio (C6H7Na06),
biotína (C10H16N2Ü3S), cíanocobalamina (C63HssCo
Ni4Ü14P), ácido fálico (C19H19N706), pantotenato de calcio
(CisH32CaN2010), niacina (C6HsN02) o níacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI), ri-
boflavina (C17H20N406) y tíamina (C12H17CIN4QS) como
clorhidrato de tiamina o mononítrato de tiamina; no me-
nos de 90,0% y no más de 125,0% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P), potasio (K) y cinc
(Zn); y no menos de 90,0% y no más de 160,0% de las
cantidades declaradas de boro (B), cromo (Cr), flúor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se), estaño
(Sn) y vanadio (V).
USP 37
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A, D, E o K. Pueden contener otras sustancias declaradas
agregadas generalmente reconocidas como seguras, en
cantidades inobjetables .
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.], ,
• ACIDO ASCORBICO
[NOTA-Reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas.]
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente a una cantidad nominal
de 100 mg de ácido ascórbico, a un matraz volumétrico
de 200 mL y agregar 75 mL de ácido metafosfórico-
ácido acético SR. Tapar el matraz y agitar mecánica-
mente durante 30 minutos. Diluir con agua a volumen.
Transferir una porción de la solución a un tubo de cen-
trífuga y centrifugar hasta obtener un sobrenadante
transparente. Pipetear y transferir 4,0 mL de esta solu-
ción a un matraz Erlenmeyer de 50 mL, y agregar 5 mL
de ácido metafosfóríco-ácído ácétíco SR.
Análisis: Valorar con solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solución estándar de diclorofenol-indofenol SV consu-
mido por una mezcla de 5,5 mL de ácido metafosfóri-
co-ácido acético SR y 15 mL de a9ua. A partir del ácido
ascórbico equivalente de la solucion estándar de diclo-
rofenol-indofenol SV, calcular el contenido de ácido as-
córbíco en cada Tableta.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbíco (C6Hs06) ,
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se índica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (Ci2H14Ca012 · 21-]20)
• ASCORBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H7Na06)
• BIOTINA, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 85 mL de acetonitrílo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 mL de ácido fosfórico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 0,333 mg/mL de ER Bio-
tína USP en dimetíl sulfóxido
Solución estándar: 5 µg/mL de ER Biotína USP que se
prepara diluyendo la Solución madre del estándar en
agua.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 mg de biotína, a un
matraz volumétrico de 200 mL. Agregar 3 mL de díme-
til sulfóxido y agitar por rotación suave hasta humede-
cer el contenido. Colocar el matraz en un baño de agua
a 60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido
durante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de biotina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N203S) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
rs = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N2Ü3S)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir la
Solución madre del estándar con agua hasta una concen-
tración de O, 1 ng/ml de ER Biotina USP.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 100 µg de biotina, a
un matraz volumétrico de 200 ml. Agregar 3 ml de al-
cohol al 50% y agitar por rotación suave hasta hume-
decer el contenido. Calentar el matraz en un baño de
agua a 60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultraso-
nido durante 5 minutos, diluir con alcohol diluido a vo-
lumen y filtrar. Diluir un volumen del filtrado cuantitati-
vamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas,
con agua hasta obtener una solución con una concen-
tración de O, 1 ng/ml.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina y 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g de D,L-triptófano)
en 700-800 ml de agua. Calentar a 70-80º y agregar
ácido clorhídrico diluido (1 en 2) gota a gota, mez-
clando, hasta que los sólidos se disuelvan. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1 Oº.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6255
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas según la Tabla 7, y ajustar con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Solución de adenina-<:1uanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º y dejar que los
tubos se enfríen en posición vertical. Inocular tres o más
de los tubos, sembrando por punción un cultivo puro
de Lactobacillus plantarum, 1 incubando durante 16-24
horas a una temperatura entre 30º y 37º mantenida
termostáticamente con un margen de ±0,5º. Almacenar
en un refrigerador. Preparar un cultivo reciente por
punción del cultivo madre una vez por semana y no
usarlo para preparar el /nóculo si el cultivo tiene más de
1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que con-
tenga 0,5 ng de biotina a cada una de las series de
tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de Solución ma-
' ATCC N' 8014 es adecuado. A esta cepa se le conocía anteriormente como
Lactobacillus arabinosus 17-5.
6256 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
dre de medio basal. Tápar los tubos con algodón, esteri-
lizar en un autocldve a 121 y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus planlarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30' y 37" mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5 '. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solucion estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solu-
ción estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agre9ar a tubos de ensayo similares, por duplicado,
volumenes de la Solucion muestra correspondientes a
tres o más niveles especificados de la Solución están-
dar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 mL.
Agregar a cada tubo 5,0 mL de la Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o sección de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no con-
tengan Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel más alto
de Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos según se in-
dica a continuación. Mezclar el contenido de cada
tubo y transferir a una celda de espectrofotómetro.
Colocar la celda en un espectrofotómetro ajustado a
una longitud de onda específica de 540-660 nm y
leer la transmitancia cuando se alcance un estado es-
tacionario. El estado estacionario se observa unos po-
cos segundos después de la agitación cuando la lec-
tura del galvanómetro se mantenga constante
durante 30 segundos o más. Permitir aproximada-
mente el mismo intervalo de tiempo para la lectura
de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si hay evidencia de contaminación
con un microorganismo extraño, no tomar en cuenta
el resultado de la valoración.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (I) como la diferencia, y= 2,00 - I. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la línea
recta o la curva de regresión que mejor se ajuste los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solución muestra. Leer, a
partir de la curva estándar, el logaritmo del volumen
de la Solucion estándar correspondiente a cada uno
USP 37
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
de los puntos extremos graficados para el Estándar.
Restar de cada logaritmo así obtenido el logaritmo
del volumen, en mL, de la Solución muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o más niveles de dosificación para obtener X, que es
ig~al al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
eton muestra.
Determinar la cantidad, en ~tg, de ER Biotina USP co-
rrespondiente a la biotina en cada mg de la porción
de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de biotina que se supuso
estaba presente en cada mg en la porción de
Tabletas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• BIOTINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 800 mL de agua y 100 mL de
trietilamina a un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 80 mL de ácido fosfórico al 85% y diluir con agua a
volumen.
Fase móvil: Transferir 80 mL de acetonitrilo y 1 O mL de
Solución A a un matraz volumétrico de 1000 ml. Diluir
con a9ua a volumen.
Solucion estándar: 0,6 µg/mL de ER Biotina USP en
agua. [NOTA-Se usará una porción de la Solución están-
dar para determinar la recuperación porcentual de bio-
tina a fartir del procedimiento de Extracción en fase
sólida.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de Tabletas reduci-
das a polvo a un matraz volumétrico para obtener una
concentración nominal de 0,6 µg/mL de biotina. Agre-
gar agua hasta el 80% de la capacidad del matraz y
someter a ultrasonido durante 30-40 minutos, mez-
clando ocasionalmente, para disolver. Diluir con agua a
volumen y filtrar. Ajustar el pH de la solución con ácido
acético diluido o hidróxido de sodio O, 1 N a 6,0-7,0.
Extracción en fase sólida: [NOTA-Acondicionar la co-
lumna de extracción especificada en este procedimiento
según se indica a continuación. Lavar la columna con
una porción de 2 mL de metanol. Equilibrar con una
porción de 2 mL de agua.] Pipetear y transferir por se-
parado 5,0 mL de la Solución muestra y la Solución es-
tándar a columnas de extracción en fase sólida reciente-
mente acondicionadas que consistan en un relleno de
modo mixto con una masa de sorbente de 60 mg.
[NOTA-El relleno de modo mixto consiste en sorbentes
de intercambio aniónico y de fase reversa. El compo-
nente de fase reversa es un copolímero de N-vinilpirroli-
dona y divinilbenzeno. La unidad de intercambio anió-
nico es un grupo trialquilamino. 2 ]
Lavar la columna con 1 O mL de metanol al 30% (v/v)
en agua. Aplicar un volumen apropiado (4,9 mL) de
2Un cartucho adecuado es el cartucho Waters, Oasis MAX Vac RC, con ta-
maño de partícula de 30 pm, parte 186000371.
USP 37
metano! al 30% (v/v) en ácido clorhídrico O, 1 N a la
columna. Recoger el eluato en un matraz volumétrico
de 5 ml, que contenga 100 µL de acetato de sodio al
40% (p/v) en agua, y diluir con metanol al 30% (v/v)
en ácido clorhídrico O, 1 N a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y una porción de la Solu-
ción estándar que se haya sometido a una Extracción en
fase sólida.
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar y Solución estándar que se haya some-
tido a una Extracción en fase sólida.
Recuperación: 95%-100%, Solución estándar que se
haya sometido a una Extracción en fase sólida.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra que se
hayan sometido a una Extracción en fase sólida.
Medir las respuestas del pico de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N203S) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solución muestra
r5 = respuesta del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• CIANOCOBALAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 00 µg de cianocoba-
lamina, a un matraz de 250 ml. Agregar cuantitativa-
mente 100,0 ml de agua y extraer cuidadosamente
durante 2 minutos. Filtrar 1 O ml del extracto y usar el
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de cianocobalamina.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
Suplementos Dif'téticos /Vitaminas Hidrosolubles 6257
cianocobalamina (C6iHeeCoN 1.1Ü14P) en la porción de
Tabletas tornada:
Resultado= (ru/rs) x (Ci/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cianocobalamina de la
Solución muestra
rs = respuesta del pico de cianocobalamina de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HseCoN14Ü14P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar de cianocobalamina:
1,0 µg/ml de ER Cianocobalamina USP en alcohol al
25%. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar de cianocobalamina con agua
hasta un volumen medido tal que después del periodo
de incubación según se indica en el Análisis, la diferen-
cia en la transmitancia entre el blanco inoculado y el
nivel de 5,0 ml de la Solución estándar sea no menor
que la correspondiente a una diferencia de 1,25 mg en
peso seco de las células. Esta concentración por lo ge-
neral está entre 0,01 y 0,04 ng/ml de la Solución están-
dar. Preparar esta solución en el momento de su uso
para cada valoración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a una cantidad nominal de
1,0 µg de cianocobalamina, a un vaso apropiado que
contenga, por cada g de Tabletas reducidas a polvo to-
mado, 25 ml de una solución de extracción acuosa pre-
parada justo antes de su uso que contenga, cada
100 ml, 1,29 g de fosfato dibásico de sodio, 1, 1 g de
ácido cítrico anhidro y 1,0 g de metabisulfito de sodio.
Autoclavar la mezcla a 121 º durante 1 O minutos. Dejar
que sedimente cualquier partícula del extracto sin disol-
ver y filtrar o centrifugar si fuera necesario. Diluir una
alícuota de la solución transparente con agua hasta ob-
tener una solución final que contenga una actividad de
vitamina Bi2 equivalente a la actividad nominal de la
Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 ml de
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1 O g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 200 ml. Agregar 2 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre_gar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tia mina, 100 µg de biotina y
20 mg de niacina en ácido acético glacial 0,02 N para
6258 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
obtener 400 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrige-
rador y proteger de la luz.
Solucion vitamínica B: Disolver 20 mg de ácido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m.9. de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de ácido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3: 1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la fórmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado según la
Tabla 2, disolviendo cuidadosamente cistina y triptó-
fano en ácido clorhídrico antes de agregar las siguien-
tes ocho soluciones a la solución resultante. Agregar
100 mL de agua y disolver dextrosa, acetato de sodio
y ácido ascórbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar
Solución de polisorbato 80, ajustar con hidróxido de so-
dio 1 N a un pH entre 5,5 y 6,0, y diluir con Agua
Purificada hasta 250 mL.
Tabla 2
L-Cistina o1 q
L-Trintófano o 05 q
Ácido clorhídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-nuanina-uracilo 5 ml
Solución de xantina 5 ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de asoaraaina 5 ml
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Ácido ascórbico 1a
Solución de oolisorbato 80 5 ml
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para extraer la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya según se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la fórmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1 O mL de Preparación de jugo de tomate y 1 mL de Solu-
ción de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml.
Colocar porciones de 1 O mL de la solución en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
USP 37
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nutos (temperatura de la línea de salida de vapor), y
dejar que los tubos se enfríen en posición vertical. Ino-
cular tres o más de los tubos sembrando por punción
un cultivo puro de Lactobacil/us leichmannii.i [NOTA-
Antes de usar un cultivo recientemente preparado por
primera vez en esta valoración, realizar no menos de 1 O
transferencias sucesivas del cultivo en un periodo de 2
semanas.] Incubar durante 16-24 horas a una tempera-
tura entre 30º y 40º mantenida termostáticamente con
un margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si tiene más de 4 días de preparado. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al día del cultivo por
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacil/us leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus leich-
mannii a dos tubos estériles que contengan 1 O mL de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30º y 40º
mantenida termostáticamente con un margen de ±0,5º.
Centrifugar los cultivos bajo condiciones asépticas y de-
cantar el sobrenadante. Suspender las células del cultivo
en 5 mL de Medio de suspensión estéril y mezclar.
Usando Medio de suspensión estéril, ajustar el volumen
de manera que una dilución 1 en 20 en solución salina
SR produzca una transmitancia del 70% cuando se lee
en un espectrofotómetro adecuado ajustado a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1 O mm, y leer contra el set de solución salina SR a una
transmitancia del 100%. Preparar una dilución 1 en 400
de la suspensión ajustada usando Solución madre de me-
dio basal. [NOTA-Esta dilución se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba de-
seada.] La suspensión de células así obtenida es el lnó-
cu/o.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, y con fa longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina Biz y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar.
Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos similares
-----
3 Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus leichmannii (listado como
Lactobacillus delbrueki1) como N. 7830 en ATCC, 10801 University Blvd., Ma-
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.org).
USP 37
5,0 ml de Solución madre de medio basal y agua sufi-
ciente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solución mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o seccion de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para evitar la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minut?s, ajustan~fo para alcanzar esta temperatura en
no mas de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del so-
brecalentamiento del medio. Tomar precauciones
para mantener la uniformidad de las condiciones de
esterilización y enfriamiento durante toda la valora-
ción, debido a que colocar los tubos demasiado cerca
o sobrecargar el autoclave puede ocasionar variacio-
nes en la velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 ml de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Después de agitar su conte-
nido, colocar el recipiente en un espectrofotómetro
ajustado a una longitud de onda de 530 nm y leer la
transmitancia cuando se alcance un estado estaciona-
rio. El estado estacionario se observa unos pocos se-
gundos después de la agitación cuando la lectura se
mantiene constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% fara el blanco
no inoculado, leer la transmitancia de blanco inocu-
lado. Si la diferencia es mayor de 5% o si hay eviden-
cia de contaminación con un microorganismo ex-
traño, no tomar en cuenta el resultado de la
valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia de cada uno de
los tubos restantes. No tomar en cuenta los resulta-
dos de la valoración si la pendiente de la curva están-
dar indica un problema con la sensibilidad.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cuaíquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (E) como la diferencia, y =
2,00 - E. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los ml
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmética o loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la línea recta o la curva de re-
gresión que mejor se ajuste los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solución muestra. Leer, a
partir de la curva estándar, el logaritmo del volumen
de la Solución estándar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
entre los puntos extremos graficados para el Estándar.
Restar de cada logaritmo así obtenido el logaritmo
del volumen, en ml, de la Solución muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6259
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o más niveles de dosificación para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de ER Cianocobalamina
USP correspondiente a la cianocobalamina en cada
mg de la porción de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaba presente en cada mg en la
porción de Tabletas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
vaíorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P)
• ACIDO FOLICO, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
al 25% en metanol
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
m~tr!lz volumé~rico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
drox1do de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de ácido fosfórico 3 N y 240 ml de metanol.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso, agregando agua o metanol a la Fase móvil pre-
parada para obtener una separación de la línea base
entre el ácido fólico y el estándar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1 o/o y 3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
a9ua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. ,
Solución estándar: 0,016 mg/ml de ER Acido Fólico
USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción de polvo equivalente
a una cantidad nominal de 0,4 mg de ácido fólico a un
tubo de centrífuga color ámbar de 50 ml. Agrega;
25,0 ml de Solución de estándar interno, agitar mecáni-
camente durante 1O minutos y centrifugar. Filtrar una
porción del sobrenadante transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
6260 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fálico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fálico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de ácido fálico (C19H19N106) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fálico y metilparabeno de la Solución muestra
R5 = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fálico y metilparabeno de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fálico USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de ácido fálico en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de ácido fálico (C19H19N105)
• ACIDO Fouco, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: Disolver 7,5 g de edetato disódico, mez-
clando, en 500 mL de agua que contenga 1 O mL de
hidróxido de amonio.
Diluyente: 60 µg/mL de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 mL de trietilamina, 15 mL de
ácido acético glacial y 350 mL de metanol a un matraz
volumétrico de 2000 mL, y diluir con 1-hexanosulfonato
de sodio 0,008 M a volumen. , Muestra: Solución estándar
Solución madre del estándar: 60 µg/mL de ER Acido
Fálico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 mL de Solución madre
del estándar con 10,0 mL de metanol y 35,0 mL de Re-
activo, agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros mL del filtrado.
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad no-
minal de 0,3 mg de ácido fálico, a un matraz de
125 mL con tapón. Agregar 10,0 mL de metanol y
35,0 mL de Reactivo. Agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fálico
(C19H19N106) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de ácido fálico de la Solución
muestra
rs = área del pico de ácido fálico de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fálico USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de ácido fálico en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fálico (C19H19N105)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 1
Fase móvil: Acido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 mL de alcohol. Agregar 50 mL de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 mL. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 15 mg de pantotenato
de calcio, a un tubo de centrífuga. Agregar 25,0 mL de
Solución de estándar interno y agitar vigorosamente du-
rante 1 O minutos. Centrifugar, filtrar y usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las respuestas de los picos de pantotenato de
calcio y el estándar interno. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de pantotenato de calcio
(ClBH32CaN2010) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
= concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (ClBH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la humedad durante la pesada, en 500 mL
de agua en un matraz volumétrico de 1000 mL. Agre-
USP 37
gar 1O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución
de acetato de sodio (1 en 60), y diluir con agua a volu-
men para obtener una concentración de 50 µg/ml de
ER Pantotenato de Calcio USP. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua para
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se índica en el
Análisis, usando 2,0-4,0 ml de la Solución estándar, es-
tán dentro de la porción lineal de la curva de respuesta
del lo_garitmo de la concentración.
Solucion muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 50 mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumétrico de 1000 ml que
contenga 500 ml de agua. Agregar 1O ml de ácido
acético 0,2 N y 100 ml de solución de acetato de sodio
(16,66 mg/mL), diluir con agua a volumen y filtrar. Di-
luir un volumen de esta solución hasta obtener una so-
lución con aproximadamente la misma concentración
que la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina y 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g de D,L-triptófano)
en 700-800 ml de agua, calentar a 70-80º y agregar
ácido clorhídrico diluido (1 en 2) gota a gota, mez-
cl~mdo, hasta que los sólidos se disuelvan. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina, 1O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas según la Tabla 3, y ajustar con hidró-
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6261
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 mL
5 mL
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na
Solución de ácido p-aminobe11LOico-niacina- 5 ml
clorhidrato de oiridoxina
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacil/us plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua; agre-
gar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Acetato de
sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mezcla en
un baño de vapor, mezclando, hasta que se disuelva el
agar. Agregar porciones de 1O ml de la solución ca-
liente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los tubos, este-
rilizar en un autoclave a 121 º, y dejar que los tubos se
enfríen en posición vertical. Inocular tres o más de los
tubos, sembrando por punción un cultivo puro de Lac-
tobacillus plantarum 1 incubando durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. Almacenar en un
refrigerador. Preparar un cultivo reciente por punción
del cultivo madre una vez por semana y no usarlo para
preparar el lnóculo si el cultivo tiene mas de 1 semana
de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1O ml de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solu-
ción estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 ml de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspon-
dientes a tres o más niveles especificados de la Solu-
ción estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución ma-
dre de medio basal y agua suficiente para obtener
1O ml. Colocar un set completo de tubos de Estándar
y muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o sección de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no con-
tengan Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37°
6262 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel más alto
de Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos según se in-
dica a continuación. Mezclar el contenido de cada
tubo y transferir a un recipiente apto para lectura óp-
tica si fuera necesario. Colocar el recipiente en un
espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica entre 540 y 660 nm, y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más.
Permitir aproximadamente el mismo intervalo de
tiempo para la lectura de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nación con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de fa valoración.
Cálculos: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (E) como la diferencia, y = 2,00 - L. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los ml de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la línea
recta o la curva de regresión que mejor se ajuste los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solución muestra. Leer, a
partir de la curva estándar, el logaritmo del volumen
de la Solución estándar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
entre los puntos extremos graficados para el Estándar.
Restar de cada logaritmo así obtenido el logaritmo
del volumen, en ml, de la Solución muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o más niveles de dosificación para obtener J?, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente al pantotenato de calcio
en cada mg de la porción de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaba presente en cada mg en la
porción de Tabletas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (ClBH32CaN2010)
USP 37
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Solución amortiguadora: 5,0 mg/ml de fosfato mono-
básico de potasio en agua. Ajustar con ácido fosfórico a
un pH de 3,5.
Fase móvil: Metano! y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1O mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumétrico de 250 ml. Agregar
1O ml de metano! y agitar el matraz por rotación suave
hasta dispersar. Diluir con agua a volumen, mezclar y
filtrar.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94)
Fase móvil: Una mezcla de metano!, ácido acético gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumétrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
baño de agua caliente mantenido a 65º-70º durante 1O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vórtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
sólidos. Enfriar rápidamente en un baño de agua fría
durante 1O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1O mg de niacinamida
y 2,5 mg de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y
de clorhidrato de tiamina, a un tubo de centrífuga de
50 ml. Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando
USP 37
un mezclador de vórtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrífuga en un baño de agua caliente mantenido a
65º-70º, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al baño de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos más y mezclar en un mezclador de vórtice durante
30 segundos. Filtrar una porción de la solución, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtración.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado =(ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu =concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N0 3 ·
HCI), de riboflavina (C11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
rs = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6263
declarada de mononitrato de tiamina (CuH11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( C/ Cu) x (M,1/ M, 2 ) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20), niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CsH1 i N03 · HCI),
riboflavina (C17H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C i2H11Ns04S)
• NIACINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metanol (3:1)
Fase móvil: Solución de acetato de sodio O, 1 M
(13,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequeña cantidad de metanol (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulación.] Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 2 mg de riboflavina, a
un matraz volumétrico de 200 ml. Si la riboflavina no
se encuentra presente en la formulación, usar una por-
ción de polvo, equivalente a una cantidad nominal de
2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se encuentra
presente en la formulación, usar una porción de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 20 mg de nia-
cina o niacinamida. Agregar 1 00,0 ml de Disolvente de
extracción y mezclar durante 20 minutos, usando un
agitador de movimiento tipo muñeca (wrist-action). Su-
mergir el matraz en un baño de agua mantenido a
70º-75º y calentar durante 20 minutos. Mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos, enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyección.]
6264 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C 6 H5 N02) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
r1 = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la canti-
dad declarada de niacina (C6HsN02)
• NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil, Solución madre
del estándar, Solución estándar, Solución muestra y
Sistema cromatográfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder según se indica
en Niacina, Método 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C 6H6N 20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
r5 = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil y Solución mues-
tra: Preparar según se indica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de, clorhidrato de
piridoxina (C 8 H11N03 · HCI) en la porc1on de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de piridoxina de la Solución
muestra
USP 37
rs = área del pico de piridoxina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi · HCI)
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción: Preparar según se indica en
Niacina, Método 2.
Solución A: 6,8 g/L de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina ¡or L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacia a un pH de
5,2.
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Solución muestra: Preparar según se indica en Niacina,
Método 2.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina_. Calc~lar el
porcentaje de la cantidad declarada de nboflavina
(C11H 2oN406) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
r5 = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en ácido fosfórico al O, 1 %
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en ácido clorhídrico 0,2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Mezclar una porción de Tabletas
reducidas a polvo con un volumen de ácido clorhídrico
0,2 N para obtener una concentración nomin.al de
0,02 mg/ml de tiamina. Agitar durante 15 minutos con
USP 37
un agitador de movimiento tipo muñeca (wrist action)
y calentar a ebullición durante 30 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograft0 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) en la porción de Table-
tas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y ácido acético gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1: 1). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6265
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 7,5 mg de nia-
cina o niacinamida, 1,2 mg de clorhidrato de pirido-
xina, 0,4 mg de riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de
tiamina, a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y ácido acético gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1: 1). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograft0 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de niacina (C6HsN02) o niacina-
mida (C6H6N20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
r5 = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
C5 = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 ·
HCI), riboflavina (C11H20N406) y clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
C5 = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M, 7 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
6266 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la canti-
dad declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (C 8 H11 N0 3 •
HCI), riboflavina (C11H20N406) y tiamina como clorhi-
drato de tiamina (C,2H17CIN4QS · HCI) o mononitrato
de tiamina (C12H11Ns04S)
[N.~TA-~e pued~n us.ar solucione~ estándar para absor-
cJOn atom1ca disponibles comercialmente para los mi-
nerales, cuando sea pertinente, donde se describe la
preparación de una Solución madre del estándar en las
siguientes valoraciones. Usar agua desionizada cuando
se especifica agua. Cuando se especifica espectrofoto-
metna de absorción atómica en la valoracion, se pue-
den diluir cuantitativamente las Soluciones estándar y la
Solución muestra con el disolvente especificado, si fuera
necesario, para producir soluciones con concentracio-
nes adecuadas adaptables al intervalo lineal o de tra-
bajo del instrumento.]
• CALCIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N de 100 ml, y transferir 15,0 y 20,0 ml de Solución ma-
Solución estándar de calcio: 400 µg/ml de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cado a 300º durante 3 horas y enfriado en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 ml de ácido clorhídrico 1 N.
Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de car-
bono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solucion madre del estándar: 100 µg/ml de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: ~ipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solucion madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 ml de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/ml de calcio.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana. Calentar el
crisol en una mufla mantenida a 550º durante 6-12
horas y enfriar. Agregar 60 ml de ácido clorhídrico y
calentar a ebullición suave sobre una placa de calenta-
mi~nto o en un baño de vapor durante 30 minutos,
eniuagando intermitentemente la superficie interior del
crisol con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y transferir
cuantitativamente el contenido del crisol a un matraz
volumétrico de 100 ml. Enjuagar el crisol con pequeñas
porciones de ácido clorhídrico 6 N y agregar los enjua-
gues al matraz. Diluir con agua a volumen y filtrar, des-
echando los primeros 5 ml del filtrado. Diluir esta solu-
ción cuantitativamente con ácido clorhídrico O, 125 N
para obtener una concentración nominal de 2 µg/ml
de calcio, agregando 1 ml de Solución de cloruro de lan-
tano por 100 ml del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solución de cloruro de lantano por 100 ml.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar ~n función de sus concentraciones, en µg/ml,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml de
calcio en la Solución muestra.
USP 37
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• CROMO, Método 7
Solución estándar de cromo: 1000 µg/ml de cromo a
partir de dicromato de potasio, previamente secado a'
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solu~ión madre del estándar: 1 O µg/ml de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
So.1!-'ciones estánd~r: Transferir 10,0 y 20,0 ml de Solu-
oon madre del estandar a sendos matraces volumétricos
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/ml
de cromo.
Soll_!ción muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Metodo 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/ml de cromo y omitir
el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a ,357,9 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml
de cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 7
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% (v/v) y diluir con una solución de
ácido nítrico al 1 % (v/v) hasta 1000 ml. Esta solución
contiene 1000 µg/ml de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 200 ml. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 µ~/ml de cobre.
Soll_!cion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Metodo 7, excepto que se debe preparar la Solución
USP 37
muestra para que contenga 2 µg/ml de cobre y omitir
el uso de la Solución de doruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µSJ/mL)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORURO, Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua en un matraz vo-
lumétrico de 1000 ml. Dejar que la solución se equili-
bre a temperatura ambiente y diluir con agua a volu-
men. Ajustar con unas pocas gotas de ácido acético a
un pH de 7,0.
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumétrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de ácido perclórico y diluir
con asiua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio previamente secado a 100º durante 4 horas y en-
friado en un desecador, en agua
Solución madre intermedia A: 100 µg/ml de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de fluoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1O µg/ml de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 ml de
Solución madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 mL de Solución
madre intermedia A a sendos matraces volumétricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 10,0 ml de ácido clor-
hídrico 1 N, 25 ml de Solución de acetato de sodio 3 M
y 25,0 ml de Solución de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 µg/ml
de fluoruro.
Solución muestra: Transferir una cantidad de las Table-
tas reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad
nominal de 200 µg de fluoruro, a un matraz volumé-
trico de 100 ml. Agregar 10,0 ml de ácido clorhídrico
1 N, 25,0 ml de Solución de acetato de sodio 3 M y
25,0 ml de Solución de citrato de sodio, y diluir con
agua hasta 100 ml.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir a sendos vasos de precipitados de plástico
que contengan una barra mezcladora recubierta de
plástico 50,0 ml de cada una de las Soluciones están-
dar y de la Solución muestra. Medir los potenciales
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6267
(ver pH (791 )), en mV, de las Soluciones estándar y la
Solución muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mínima de ±0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador específico para ión fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al tomar las mediciones, sumergir los electrodos en la
solución, mezclar en un agitador magnético con su
parte superior aislada hasta que se logre el equilibrio
(1-2 minutos) y registrar el potencial. Enjuagar y se-
car los electrodos entre mediciones, teniendo cuidado
de evitar el daño del cristal del electrodo específico
para ión fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/ml, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de la res-
puesta estándar así obtenida y el potencial medido
de la Solución muestra, determinar la concentración,
C, en µg/ml, de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flúor (F) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• FLUORURO, Método 2
[NOTA-Usar recipientes de plástico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulfúrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ_g/ml de fluoruro.
Solucion estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción en fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra según se indica a
continuación. Usando vacío a una presión que no ex-
ceda de 5 mm de mercurio, lavar la columna con un
volumen de columna de metanol seguido de un volu-
men de columna de Solución amortiguadora de pH 70,0.
No dejar que la parte superior de la columna se seque.
Si la parte superior de la columna se seca, reacondicio-
nar la columna.] Transferir 10,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar 75 ml de agua y ajustar con hidróxido de sodio O, 1
N a un pH de 10,4 ±0, 1 . Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumétrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidró-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
ción amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porción de esta solucion a través de una columna de
extracción en fase sólida de 3 ml que contenga relleno
L1 que se conecta a través de un adaptador a una se-
gunda columna de extracción en fase sólida que con-
tenga relleno de intercambio catiónico fuerte de sulfo-
nilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato y
recoger el resto del eluato en un matraz adecuado para
inyectar en el cromatógrafo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a una cantidad nominal de
1 mg de flúor, a un matraz volumétrico de 100 ml.
Agregar 15 ml de agua y agitar vigorosamente. Enjua-
gar las paredes del matraz con 15 ml de agua y dejar
en reposo durante 1O minutos. Diluir con agua hasta
85 ml, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH de
10,4 ± O, 1 y diluir con agua hasta 100 ml. Proceder
6268 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
según se indica en Solución estándar, comenzando
donde dice "Filtrar, desechando los primeros 15 ml del
filtrado."
Sistema cromato!Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L17
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L17
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de flúor de la Solución muestra
r5 = área del pico de flúor de la Solución estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapón de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Análisis
Muestra: Tabletas
Transferir una porción de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a una cantidad nominal de 3 mg de
yoduro, a un crisol de níquel. Agregar 5 9 de carbo-
nato de sodio, 5 ml de solución de hidroxido de sodio
al 50% (p/v) y 1O ml de alcohol, teniendo cuidado de
humedecer toda la muestra. Calentar el crisol en un
baño de vapor para evaporar el alcohol, luego secar el
crisol a 100º durante 30 minutos para evitar salpicadu-
ras durante el calentamiento subsiguiente. Transferir el
crisol con su contenido a un horno calentado a 500º y
calentar el crisol durante 15 minutos. [NOTA-Es nece-
sario calentar a 500º para carbonizar toda la materia
orgánica presente; se puede usar una temperatura más
alta, si fuera necesario, para asegurar la carbonización
completa de la materia orgánica.] Enfriar el crisol,
agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol con un vidrio
de reloj y calentar a ebullición suave durante 1O minu-
tos. Filtrar la solución y lavar el crisol con agua hir-
viendo, recogiendo el filtrado y los lavados en un vaso
de precipitados. Agregar ácido fosfórico hasta que la
solución sea neutra frente al anaranjado de metilo y
luego agregar 1 ml de ácido fosfórico en exceso.
Agregar un exceso de Agua de bromo y calentar la so-
lución a ebullición suave hasta que se torne incolora y
luego durante 5 minutos más. Agregar unos pocos
cristales de ácido salicílico y enfriar la solución a 20º.
Agregar 1 ml de ácido fosfórico y 0,5 g de yoduro de
potasio, y valorar el yodo liberado con tiosulfato de
sodio 0,005 N SV, agregando almidón SR cuando el
color del yodo liberado haya desaparecido casi por
completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = V x NA x F x lme x (Aw! W) X (100/ L)
USP 37
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(ml)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
F = factor de corrección para convertir mg a µg,
1000 µg/mg
lme = miliequivalente de 1, 21 mg/mEq
Aw = peso promedio de las Tabletas
W = peso de la porción de Tabletas tomada
L = cantidad declarada de yodo (µg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 7
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 µg/ml de
hierro.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 5 µg/ml de hierro y omitir el uso de Solución de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a 448,3 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µ~/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 7.
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 ml, disolver en 50 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solución con una concentración de 1000 µg/ml de
magnesio.
Solución madre del estándar: 20 µg/ml de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/ml de
magnesio.
USP 37
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 0,4 µg/ml de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solución de cloruro de lantano por 100 ml.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO, Método 1
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir una cantidad pesada de 1,00 g de manganeso a un
matraz volumétrico de 1000 ml. Disolver en 20 ml de
ácido nítrico, diluir con ácido clorhídrico 6 N a volumen
y mezclar para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/ml de manganeso.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 µg/ml de manganeso.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 1 µg/ml de manganeso y omitir el uso de Solución
de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
mangan~so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de manganeso (Mn) en la Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6269
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 1
Diluyente: 20 mg/ml de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 ml y disolver en 50 ml de ácido nítrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/ml de molibdeno.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
en cada matraz durante 15 minutos, enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir cada una con Diluyente a volu-
men para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 µg/ml de molibdeno.
Solución muestra: Transferir una porción de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1000 µg de mo-
libdeno, a un matraz adecuado y agregar 12 ml de
ácido nítrico. [NOTA-Se puede variar el volumen de
ácido nítrico rara asegurar que el polvo se disperse uni-
formemente. Agitar el matraz por rotación suave cuida-
dosamente hasta dispersar la muestra de prueba. Some-
ter a ultrasonido durante 1O minutos o hasta que la
muestra de prueba se disuelva por completo. Calentar a
ebullición suave la solución durante 15 minutos y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente
8 ml de ácido perclórico, calentar nasta que aparezcan
humos de ácido perclórico y agitar el matraz por rota-
ción suave para disipar los humos. Repetir el calenta-
miento y la agitación por rotación suave hasta que los
humos desaparezcan. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir cuantitativamente el contenido del matraz a
un matraz volumétrico de 100 ml con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara:, Molibdeno; de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
6270 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4,98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: Transferir 40 g
de cloruro estannoso a un vaso de precipitados, agre_gar
20 ml de ácido clorhídrico 6,5 N y calentar la solucion
hasta que el cloruro estannoso se disuelva. Enfriar y di-
luir con agua hasta 100 ml.
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solución en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/ml de molibdeno en agua
Muestra: Una porción de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a 40 µg de molibdeno
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 465 nm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solución estándar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de ácido nítrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de
reloj y calentar a ebullición lentamente sobre una
placa de calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 6 ml de ácido percló-
rico, cubrir los vasos de precipitados con un vidrio de
reloj y continuar el calentamiento hasta que la diges-
tión sea completa, lo cual se indica cuando el líquido
se torna incoloro o amarillo pálido. Evaporar las solu-
ciones en los vasos de precipitados hasta sequedad.
Enjuagar las paredes de los vasos de precipitados y
los vidrios de reloj con agua, y agregar más agua
para completar 50 ml en cada vaso de precipitados.
Calentar a ebullición suave la solución acuosa durante
unos pocos minutos. Enfriar a temperatura ambiente.
Agregar 2 gotas de anaranjado de metilo SR y neutra-
lizar con hidróxido de amonio. Agregar 8,2 ml de
ácido clorhídrico. Transferir cuantitativamente el con-
tenido de los vasos de precipitados a sendos matraces
volumétricos de 100 ml, enjuagar los vasos de preci-
pitados con agua, transferir los enjuagues a los matra-
ces volumétricos correspondientes y diluir con agua a
volumen. Transferir 50,0 ml de cada solución a em-
budos de separación. Agregar a cada embudo de se-
paración 1,0 ml de Solución de fluoruro de sodio,
0,5 ml de Solución de sulfato ferroso, 4,0 ml de Solu-
ción de tiocianato de potasio, 1,5 ml de Solución de
cloruro estannoso al 20% y 15,0 ml de alcohol amí-
lico, y agitar los embudos de separación durante 1
minuto. Dejar que las capas se separen y desechar las
capas acuosas. Agregar 25 ml de Solución de cloruro
estannoso diluida a cada embudo de separación y agi-
tar suavemente durante 15 segundos. Dejar que las
capas se separen y desechar las capas acuosas. Trans-
ferir la capa orgánica de cada embudo de separación
a un tubo de centrífuga y centrifugar a 2000 rpm
durante 1 O minutos. Determinar las absorbancias de
las fases orgánicas de la Solución estándar y la Mues-
tra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Au/ As) x [(V x Cs)/ Mu] x 100
Au = absorbancia de la solución a partir de las
Tabletas
As = absorbancia de la solución a partir de la
Solución estándar
USP 37
V = volumen de la Solución estándar analizada,
2,0 ml
C = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• FÓSFORO, Método 7
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar 1 gota de ácido sulfúrico por 100 ml
de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secado a 105º durante 2 horas y almacenado en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 µg/ml de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
Solución muestra: [NOTA-Reducir a polvo fino y pesar
un número contado de Tabletas.] Transferir una porción
de polvo, equivalente a una cantidad nominal de
100 mg de fósforo, a 25 ml de ácido nítrico y digerir
sobre una placa de calentamiento durante 30 minutos.
Agregar 15 ml de ácido clorhídrico y continuar la di-
gestion hasta que cese la producción de humos marro-
nes. Enfriar y transferir el contenido del matraz a un
matraz volumétrico de 500 ml con ayuda de pequeñas
porciones de agua. Diluir con agua a volumen. Transfe-
rir 1 0,0 ml de esta solución a un matraz volumétrico de
100 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 650 nm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir a tres matraces volumétricos diferentes de
25 ml, 5,0 ml de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de agua para proporcionar el blanco. Agre-
gar a cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solu-
ción de molibdato de amonio, de Solución de hidroqui-
nona y de Solución de bisulfito de sodio, y agitar por
rotación suave hasta mezclar. Diluir el contenido de
cada matraz con agua a volumen y dejar los matraces
en reposo durante 30 minutos. Determinar las absor-
bancias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
Cs = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90%-125% de la cantidad de-
clarada de fósforo (P)
USP 37
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 100 µg/mL de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105º durante 2 horas, en agua
Solución madre del estándar: 1O µg/mL de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ~/mL de potasio.
Solucion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una cantidad nominal de
1 µg/mL de potasio y omitir el uso de Solución de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
• SELENIO, Método 7
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 7.
Solución estándar de selenio: [PRECAUCIÓN-El selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1000
µg/mL de selenio.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
la Solución madre del estándar a sendos matraces volu-
métricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido percló-
rico a cada matraz. Calentar a ebullición suave las solu-
ciones durante 15 minutos, enfriar a temperatura
ambiente y diluir cada una con Diluyente a volumen
para obtener soluciones con concentraciones de 5,0;
10,0 y 25,0 µg/mL de selenio.
Solución muestra: Transferir una porción de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1000 µg de se-
lenio, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de ácido
nítrico. [NOTA-Se puede variar el volumen de ácido ní-
trico para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar el matraz por rotación suave cuidadosa-
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6271
mente hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva por completo. Calentar a ebulli-
ción suave la solución durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 mL
de acido perclórico al matraz, calentar el matraz hasta
que aparezcan humos de ácido perclórico y agitar el
matraz por rotación suave para disipar los humos. Repe-
tir el calentamiento y la agitación por rotación suave
hasta que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Transferir el contenido del matraz a
un matraz volumétrico de 50 mL con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20: 1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
selenio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2 ,
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico diluido
con a~ua (1 en 1O)
Solucion de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disódico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separación de 250 mL y agregar
200 mL de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la solución
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
marrón y cubrir la solución con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solución permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador,
Solución madre del estándar: [PRECAUCION-EI selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solución con ácido clorhídrico 0, 125 N para obte-
ner una concentración de 2,0 µg/mL de selenio.
Solución estándar: Transferir 10,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agre-
gar 1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución de
ácido clorhídrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
6272 Vitaminas Hidrosoiubles /Suplementos Dietéticos
Solución muestra: Transterir una porción de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad no-
minal de 20 .UCJ de selenio, a un matraz adecuado.
Agregar 1 O ml de ácido nítrico y entibiar suavemente
sobre una placa de calentamiento. Continuar calen-
tando hasta que la reacción inicial de ácido nítrico haya
desaparecLdo y luego agregar 3 ml de ácido perclórico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a
que la reacción del ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido perclórico
o hasta que la digestión comience a tornarse oscura.
Agregar 0,5 ml de ácido nítrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de ácido ní-
trico si se presenta aún más oscurecimiento. Digerir du-
rante 1 O minutos después de la primera aparición de
humos de ácido perclórico o hasta que la digestión se
torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 ml de So-
lución de ácido clorhídrico y volver a colocar el matraz
sobre la placa de calentamiento para expulsar los resi-
duos de ácido nítrico. Calentar la mezcla durante 3 mi-
nutos después de que comience a hervir. Enfriar el ma-
traz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
Longitud de onda analítica: 380 nm
Blanco: 1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución
de ácido clorhídrico diluida con agua hasta 20 ml
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco según se indica a continuación. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave para mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 ± O, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotación suave para mezclar. Co-
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50º y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paración. Transferir 10,0 ml de ciclohexano a cada
embudo de separación y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrífuga y centri-
fugar a 1 000 rpm durante 1 minuto para eliminar el
agua remanente. Determinar las absorbancias de las
soluciones a partir de las Muestras contra la solución
a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(V x Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usada para preparar la Solución estándar,
10 ml
C5 = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra ütg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 7
Solución madre del estándar de cinc: 1 000 ~tg/ml de
cinc, a partir de óxido de cinc disuelto en ácido clorhí-
drico 5 M (3,89 mg/ml) y diluida con agua hasta el
USP 37
volumen final. [NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M
entibiando, si fuera necesario, enfriar y luego diluir a
volumen final.]
Solución madre del estándar: 50 pg/ml de cinc, a
partir de Solución madre del estandar de cinc diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
ml de cinc.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración nominal
de 2 ¡.tg/ml de cinc y omitir el uso de Solución de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 21 3,8 rJm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ$]/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• BORO, NÍQUEL, ESTAÑO y VANADIO, Método 7; CALc19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FOSFORO
y CINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1) agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando un volumen de Solu-
ción madre de agua regia a dos volúmenes de agua.
Diluir con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandio en solución de ácido
nítrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales
de interés en la solución.] Usando soluciones estándar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solución de ácido nítrico al 5% (vi
v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de solu-
ción estándar de elementos a un matraz volumétrico y
diluir con solución de ácido nítrico al 5% (v/v) hasta
obtener una solución con concentraciones finales de
aproximadamente 1000 mg/L de calcio, 100 mg/L de
cobre, 250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio,
1 00 mg/L de manganeso, 800 mg/L de fósforo y
250 mg/ml de cinc.
USP 37
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lución estándar de elementos a un matraz volumétrico
y diluir con solución de ácido clorhídrico al 20% (v/v)
hasta obtener una solución con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 100 mg/L de
cromo, de molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño
y de vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 1 y Solución madre del estándar 2,
según se reguiera, en Diluyente para preparar una curva
de calibracion de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra 1 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados en la Solución madre del estándar
1 y Solución madre del estándar 2): Pesar y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una por-
ción igual a 3,5 veces el peso promedio por Tableta a
un matraz volumétrico de 250 ml. Agregar lentamente
25 mL de Solución madre de agua regia en incrementos
de 5 mL seguidos de mezclado. [NOTA-Si la muestra
contiene carbonato, se producirá burbujeo. Esperar
hasta que cese el burbujeo para proceder.] Calentar la
solución a ebullición sobre una placa de calentamiento.
Continuar calentando suavemente hasta que cese la
producción de humos (aproximadamente 1 hora).
LNOTA-Si la muestra contiene selenio, digerir durante
no más de 15 minutos.] Retirar del calor, enfriar y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 mL
en un tubo de centrífuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando
Diluyente.
Solución muestra 2 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados únicamente en la Solución madre
del estándar 2): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porción igual a 3,5 veces
el peso promedio por Tableta a un matraz volumétrico
de 250 ml. Agregar lentamente 25 mL de Solución ma-
dre de agua regia en incrementos de 5 mL seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producirá burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solución a ebullición sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la producción de humos (apro-
ximadamente 1 hora). [NOTA-Si la muestra contiene
selenio, digerir durante no más de 15 minutos.] Retirar
del calor, enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar
aproximadamente 30 mL en un tubo de centrífuga
usando un filtro de nailon para jeringa con un tamaño
de poro de 5 µm. Si fuera necesario, realizar diluciones
adicionales usando Diluyente.
Solución muestra 3 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados únicamente en la Solución madre
del estándar 7): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porción igual al peso pro-
medio por Tableta a un matraz volumétrico de 250 ml.
Agregar lentamente 25 mL de Solución madre de agua
regia en incrementos de 5 mL seguidos de mezclado.
[NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se producirá
burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo para pro-
ceder.] Calentar la solución a ebullición sobre una placa
de calentamiento. Continuar calentando suavemente
(aproximadamente 1 hora) hasta que cese la produc-
ción de humos. Retirar del calor, enfriar y diluir con
agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 mL en un
tubo de centrífuga usando un filtro de nailon para je-
ringa con un tamaño de poro de 5 µm. Si fuera necesa-
rio, realizar diluciones adicionales usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Hidrosolubles 6273
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado para medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en el Análisis.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en
las Soluciones estándar y la Solución muestra con un
sistema de plasma inductivamente acoplado usando
Diluyente como blanco. Graficar la emisión de las So-
luciones estándar en función de sus concentraciones,
en mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir
de la gráfica así obtenida, determinar la concentra-
ción, C, en mg/L, de cada mineral de interés en la
Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cada mineral:
Resultado= Cx (V/W) x Fx (Cw/L) x 100
C = concentración medida del elemento pertinente
en la Solución muestra (mg/L)
V =volumen de la Solución muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
Cw = peso promedio por Tableta (mg)
L = cantidad declarada/Tableta (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), níquel (Ni), se-
lenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 10 2 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales. La etiqueta
también indica la cantidad de cada vitamina y mineral en
términos de unidades métricas por unidad de dosifica-
ción y, cuando sea necesario, la forma química de vita-
mina presente, e indica además la forma salina del mine-
ral usado como la fuente de cada elemento. Cuando se
proporciona más de un método de valoración para una
vitamina en particular, el etiquetado indica el método de
6274 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
valoración con el que cumple el producto únicamente si
no se usa el Método 7.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER c;ianocobalamina USP
ER Acido Fólico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Riboflavina USP
ER Fluoruro de Sodio USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Oleosolubles, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Vitaminas Oleosolubles contienen dos o más
de las siguientes vitaminas oleosolubles: Vitamina A, Vita-
mina D como Ergocalciferol (Vitamina D2) o Colecalciferol
(Vitamina D3), Vitamina E, Fitonadiona (Vitamina K1) y
Beta Caroteno. Las Cápsulas contienen no menos de
90,0% y no más de 165,0% de las cantidades declaradas
de vitamina A (C20H30Ü) como retinol o ésteres de retino!
en la ~o~ma de acetato ~e ri;tinilo (C22H32Ü2) o palmitato
de ret1nilo (C35H50Ü2); vitamina D como colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü); vitamina E como alfa
tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo (C31 H520 3),
o succinato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs405); fitonadiona
(C31 H4602); y beta caroteno (C40Hs5).
Las Cápsulas de Vitaminas Oleosolubles no contienen otras
vitaminas o minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
~io~i; más de un ~é.todo de valoración para un ingrediente
1n~1v1dual, los re_qu1s1tos se p_u_eden cumplir siguiendo cual-
quiera de los metodos espec1f1cados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.]
• VITAMINA A, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un éster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma química presente
en la formulación. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar: 15 µg/mL de acetato de retinilo a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano ' F
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/mL de
palmitato de retinilo en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
ig~ales c;Je Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
CJon estandar para ob_tener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cápsulas a un recipiente adecuado, mezclar, y
pesar. Transferir una porción de la mezcla, equivalente a
5 Cápsulas, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimi_ento interno. de teflón. [NOTA-Para Cápsulas de
g~lat1na dura, retirar, tanto ,como sea posible, el conte-
nido d~ no menos de, 20 Capsulas ~?rtando para abrir
las cubiertas de las Capsulas, transfiriendo las cubiertas
y su contenido a un recipiente adecuado, y triturando
h_a,sta obtener una m~sa homogéne_a. Transferir una por-
c1_on de la masa, equivalente a 5 Capsulas, a un reci-
piente con tapa de rosca con recubrimiento interno de
teflón.] Agregar 1O mL de dimetil sulfóxido y 15 mL de
USP 37
n-hexan_o, y agit~r dura~te 45 m_inuto~ en un agitador
de mov1m1ento tipo muneca (wrist-act1on) en un baño
de agua mantenido a 60º. [NOTA-Ajustar el agitador
de !11ovimient? _tipo muñeca para asegurar que el con-
tenido del rec~p1ente se mezcle vigorosa y completa-
mente.]_ Centrifugar a 3000 rpm durante 1O minutos y
transferir la capa de hexano con una pipeta a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 15 mL de n-he-
xan'? a la capa de dimetil sulfóxido, agitar bien durante
5 minutos, y transferir la capa de hexano con una pi-
peta a ~,n matraz volumétrico de 100 ml. Repetir esta
extracc1on con tres porciones adicionales de 15 mL de
n-hexano. Diluir los extractos en el matraz volumétrico
con n-hexano a volumen. Diluir un volumen de esta
solución con n-hexano para obtener una solución con
una concentración de 15 µg/mL de vitamina A como
retino! (C20H30Ü).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
t~to de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
ción muestra. Para productos que contengan acetato
de vitamina A o palmitato de vitamina A, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de vitamina A,
como retino! (C20H30Ü), en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retino! (C22H320 2)
de ER Vitamina A USP en la Solución estándar
(µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retino! (C20H30Ü) en la Solución muestra
(µg/mL)
= factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H300)
• VITAMINA A, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica un éster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento. ~iguient~, us~r la forma química presente en la
formulac1on. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con protección actínica durante
todo este procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 mL de ácido sulfúrico a 80 mL de
metanol en un matraz volumétrico de 100 ml. Enfriar y
diluir con metano! a volumen.
USP 37
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 100 ml, y agregar suficiente
agua para disolver. Agregar 1,7 ml de ácido sulfúrico y
diluir con agua a volumen.
Solución de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase móvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0,3)
Solución estándar: 15 µg/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
ml de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulación.] Pesar no menos de 20 Capsulas en un frasco
de pesada tarado. Usando una cuchilla afilada si fuera
necesario, abrir cuidadosamente las Cápsulas, sin perder
material de la cubierta, y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
a 30 µg de la cantidad declarada de colecalciferol o er-
gocalciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de teflón. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulación,
usar una porción, equivalente a 90 mg de la cantidad
declarada de vitamina E. Si la vitamina E no se encuen-
tra presente en la formulación, usar una porción, equi-
valente a 2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina
A, como retinol. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio,
1,5 ml de Solución de lecitina y 12,5 ml de 2,2,4-trime-
tilpentano, y dispersar en un mezclador de vórtice.
Agregar 6 ml de Solución de ascorbato de sodio-piroga-
lol, agitar lentamente, y dejar que la solución se desga-
sifigl!~· Continuar agitando ~asta que haya cesado la
em1s1on de gases y fuego agitar durante 12 minutos
adicionales. Agregar 6 ml de dimetil sulfóxido, mezclar
en un mezclador de vórtice hasta formar una suspen-
sión, y agitar durante 12 minutos. Agregar 6 ml de So-
lución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, mezclar en un
mezclador de vórtice para formar una suspensión, y agi-
tar durante 12 minutos. Agregar 12,5 ml de 2,2,4-tri-
metilpentano, mezclar en un mezclador de vórtice hasta
formar una suspensión, y agitar durante 1O minutos.
Centrifugar durante 1O minutos para romper la emul-
sión y para que el sobrenadante se torne transparente.
[NOTA-El sobrenadante se usa para la determinación
de vitamina A, así como para vitamina D y vitamina E,
si se encuentran presentes en la formulación.] Si fuera
necesario, diluir cuantitativamente un volumen del so-
brenadante con 2,2,4-trimetilpentano para obtener una
concentración cercana a la de la Solución estándar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 8,0 entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles 6275
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
ción muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C2oH30Ü), en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü) en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentración nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü)
• VITAMINA A, Método 3
[NOTA-Cuando se especifica un éster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma química presente en la
formulación. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con protección actínica durante
todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solución de hidróxido de potasio: 800 mg/ml de hi-
dróxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidróxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1O mg/ml de pirogalol en alcohol
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (92:8)
Solución madre del estándar: 30 µg/ml de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solución se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solución estándar: Diluir un volumen de Solución ma-
dre del estándar con Diluyente para obtener una concen-
tración de 1 µg/ml de acetato de retinilo a partir de ER
Vitamina A USP. Transferir 10,0 ml de esta solución a
un matraz de 125 ml con tapón y agregar 5 ml de
agua, 5 ml de Diluyente y 3 ml de Solución de hidróxido
de potasio. Tapar herméticamente, agitar durante 15
minutos sobre un baño de agua mantenido a 60 ± 5º, y
enfriar a temperatura ambiente. Agregar 7 ml de agua
y 25,0 ml de Disolvente de extracción. Tapar hermética-
mente y agitar vigorosamente durante 60 segundos.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 ml de agua y
dejar en reposo durante 1O minutos para que las capas
se separen. Retirar una porción de la capa orgánica para
inyectarla en el cromatografo. Esta Solución estándar
contiene 0,34 µg/ml de retinol.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
6276 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
a 1,5 mg de acetato de retinilo, a un matraz de 125 ml
con tapon. Agregar 5 ml de agua, 15 ml de Diluyente y
3 ml de Solución de hidróxido de potasio. Tapar herméti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un baño de
agua mantenido a 60 ± 5º, y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 ml de agua y 25,0 ml de Disolvente
de extracción. Tapar herméticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos o más, si fuera necesario,
para completar la extracción. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 ml de agua y dejar en reposo durante
1O minutos hasta que las capas se separen. [NOTA-No
agitar porque podría formarse una emulsión.] Retirar
una porción de la capa orgánica y diluir cuantitativa-
mente, y en diluciones sucesivas si fuera necesario, con
Disolvente de extracción para obtener una concentración
de 0,34 µg/ml de retinol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 4 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 1 3-cis-
retinol y todo trans retinol son aproximadamente 0,92
y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de todo trans retinol y
1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü), en
la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (rT1/rT2) x (Cs/Cu) x F x 100
rT1 = suma de las áreas de los picos de todo trans
retinol y 1 3-cis-retinol de la Solución muestra
rT2 = suma de las áreas de los picos de todo trans
retinol y 1 3-cis-retinol de la Solución estándar
C5 = concentración de acetato de retinilo
(CnH32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü) en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección act1nica durante todo este procedi-
miento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solución estándar a 60º durante 1 hora para iso-
USP 37
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 ml de la solución reservada según se especifica
en las instrucciones de la Solución muestra en Vitamina
A, Método 7 a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vacío a temperatura ambiente para
obtener una solución con una concentración de 2 µg/
ml de colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r5 = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solución
muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C23H44Q)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, Solución
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solución de lecitina
y Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 2 .
Fase móvil: n-Hexano y alcohol butílico terciario
(98,75:1,25)
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solución estándar a 60º durante 1 hora para iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) a su precursor correspondiente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C 27 H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r5 = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C27H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actmica durante todo este
,procedimiento.]
Acido acético diluido: Solución de ácido acético glacial
(1 en 1 O) en agua
Solución de fenolftaleína: 1O mg/ml de fenolftaleína
en alcohol
Solución de hidróxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidróxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar en el
día de su uso.
Disolvente de extracción: Cloruro de metileno y al-
cohol isopropílico (99,8:0,2)
Fase móvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solución madre del estándar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar cada 4 semanas. Almacenar
en un congelador.]
Solución estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción de fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isopropílico (4: 1), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extracción. No dejar que la co-
lumna se seque.]
Diluir un volumen de Solución madre del estándar con
alcohol deshidratado para obtener una concentración
de 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP o ER Ergocalcife-
rol USP. Preparar esta solución en el día de su uso.
Transferir 2,0 ml de esta solución a un matraz de
125 ml con tapón. Agregar 15,0 ml de agua y
15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio, tapar, y
agitar durante 30 minutos en un baño de agua mante-
nido a 60º. Dejar que se enfríe a temperatura am-
biente y transferir el contenido del matraz a un em-
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles 6277
budo de separación de 250 ml. Agregar 15,0 ml de
agua al matraz, tapar, agitar vigorosamente, y transfe-
rir esta solución al embudo de separación. Enjuagar el
matraz con 60 ml de n-hexano y transferir el enjuague
al embudo de separación. Tapar, agitar vigorosamente
durante 90 segundos, y dejar en reposo durante 15
minutos hasta que las capas se separen. Escurrir y de-
sechar la capa acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la
capa de hexano en el embudo de separación, tapar, y
agitar vigorosamente. Dejar en reposo durante 1O mi-
nutos hasta que las capas se separen y desechar la
capa acuosa. Agregar 1 gota de Solución de fenolfta-
lema y 15,,0 ml de agua al embudo de separación.
Agregar Acido acético diluido gota a gota, agitando,
hasta que el lavado sea neutro. Dejar en reposo du-
rante 1O minutos hasta que las capas se separen. Escu-
rrir y desechar la capa acuosa. Filtrar la capa de he-
xano a través de sulfato de sodio anhidro, colocado en
un pequeño trozo de algodón, en un matraz de fondo
redondo de 100 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato
de sodio con unos pocos ml de n-hexano y recoger
los enjuagues en el mismo matraz. Evaporar el hexano
en el matraz en un evaporador rotatorio a 50º hasta
sequedad. Agregar inmediatamente 2,0 ml de Disol-
vente de extracción para disolver el residuo. Transferir
esta solución a una columna de extracción de fase só-
lida recientemente acondicionada que contenga re-
lleno de sílice con una relación entre la masa de sor-
bente y el volumen de la columna de 500 mg a
2,8 ml o equivalente, enjuagar el matraz de fondo re-
dondo con 1,0 ml de Disolvente de extracción, y trans-
ferir a la columna. Eluir la columna con 2,0 ml de Di-
solvente de extracción y desechar esta fracción. Eluir la
columna con 7,0 ml de Disolvente de extracción y reco-
ger el eluato en un matraz adecuado. Colocar el ma-
traz en un baño de agua tibia mantenido a 42º y eva-
porar el disolvente con ayuda de una corriente de
nitrógeno. Agregar inmediatamente 2,0 ml de aceto-
nitrilo al residuo y usar la solución para inyectarla en el
cromatógrafo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 3, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas." Transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a
1O µg de ergocalciferol o colecalciferol, a un matraz de
125 ml con tapón y proceder según se indica en Solu-
ción estándar, comenzando donde dice "Agregar
15,0 ml de agua y 15,0 ml de Solución de hidróxido de
potasio".
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 27º
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 4,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C27H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r5 = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
6278 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
C = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(~tg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C28H440)
• VITAMINA E, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 100) en
agua
Fase móvil: Metanol y Solución A (19:1)
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalciferol USP en metanol.
Transferir 1,0 ml de esta solución a un matraz volumé-
trico de 1 00 ml que contenga 1 00 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 ml de metanol,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario, y diluir con
metanol a volumen. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solución reservada según se especifica
en las instrucciones de la Solución muestra en Vitamina
A, Método 7 a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vacío a temperatura ambiente hasta
sequedad. Transferir el contenido del matraz a un ma-
traz volumétrico adecuado con ayuda de metanol y di-
luir con metanol a volumen para obtener una concen-
tración de 2 mg/ml de alfa tocoferol, acetato de alfa
tocoferilo o succinato ácido de alfa tocoferilo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solución de aptitud del
sistema
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 1,2, Solución de apti-
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs201) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C3iHs4Üs) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
USP 37
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C 3 , H5 20i) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 240 ml de metano! con 1 O ml de
agua, seguidos de 0,5 ml de ácido fosfórico al 50%, y
diluir con acetonitrilo hasta 1000 ml.
Solución de aptitud del sistema: 2 mg/ml de ER Alfa
Tocoferol USP, de_ ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metanol
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Mezclar
cuidadosamente ácido sulfúrico y metano! (9 en 100)
en un matraz volumétrico de 100 ml. [NOTA-Disolver
en una porción de metanol, enfriar, y luego diluir a
volumen final.]
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 1 00 ml. Agregar suficiente agua
para disolver. Agregar 1,7 ml de acido sulfúrico y diluir
con a$lua a volumen.
Solucion de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 2, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas." Transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a
55 mg de vitamina E, a un recipiente con tapa de rosca
con recubrimiento interno de teflón. Agregar 0,5 g de
bicarbonato de sodio, 1,5 ml de Solución de lecitina y
12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un
mezclador de vórtice. Agregar 6 ml de Solución de as-
corbato de sodio-pirogalol, agitar lentamente, y dejar
que la solución se desgasifique. Continuar agitando
hasta que haya cesado la emisión de gases y luego agi-
tar durante 12 minutos adicionales. Agregar 6 ml de
dimetil sulfóxido, mezclar en un mezclador de vórtice
hasta formar una suspensión, y agitar durante 12 minu-
tos. Agregar 6 ml de Solución de ácido sulfúrico metanó-
lico 3 N, mezclar en un mezclador de vórtice para for-
mar una suspensión, y agitar durante 12 minutos.
Agregar 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en
un mezclador de vórtice hasta formar una suspensión, y
agitar durante 1 O minutos. Centrifugar durante 1 O mi-
nutos para romper la emulsión y para que la capa de
sobrenadante se torne transparente. Transferir un volu-
men de la capa sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano
a un matraz volumétrico adecuado, donde el volumen
de la muestra retirada de la capa de 2,2,4-trimetilpen-
tano y el tamaño del matraz volumétrico sean tales que
la concentración final de la Solución muestra equivalga a
la de la Solución estándar. Evaporar casi hasta sequedad,
agregar varios ml de metano!, y evaporar el 2,2,4-tri-
metilpentano remanente. Diluir con metano! a
volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para succi-
nato ácido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre succinato ácido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol y no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
ción de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mg/mL)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilución para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metanol para calcular la concentración
nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,3 mg/mL de ER Alfa Tocoferol
USP en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 3, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas." Transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a
8,0 mg de alfa tocoferol, a un matraz Erlenmeyer con
tapón de vidrio. Agregar 25,0 mL de agua, 25,0 mL de
alcohol deshidratado y 3,5 g de pellets de hidróxido de
potasio. Agitar durante 1 hora en un baño mantenido a
55º, enfriar, y transferir con ayuda de un volumen mí-
nimo de agua a un embudo de separación de 125 ml.
Enjuagar el matraz con 50 mL de n-hexano y agregar el
enjuague al embudo de separación. Tapar, agitar vigo-
rosamente durante 60 segundos, y dejar que las capas
se separen. Escurrir la capa acuosa en un segundo em-
budo de separación de 250 mL y repetir la extracción
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles 6279
con 50 mL de n-hexano. Desechar la capa acuosa y
combinar los extractos de hexano. Lavar los extractos
combinados con 25 mL de agua, dejar que las capas se
separen, y desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de
ácido acetico glacial y repetir el procedimiento de la-
vado dos veces más. Filtrar la capa de hexano lavada a
través de sulfato de sodio anhidro en un matraz de
fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el
sulfato de sodio con unos pocos mL de n-hexano y
agregar el enjuague a la solución de hexano en el ma-
traz. Colocar el matraz en un baño de agua mantenido
a 50º y evaporar la solución de hexano con ayuda de
un evaporador rotatorio hasta sequedad. Agregar inme-
diatamente 25,0 mL de Diluyente y agitar por rotación
suave hasta disolver el residuo.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina E como alfa tocoferol (C29Hso02) en la porción
de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
rs = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
Cs = concentración de alfa tocoferol en la Solución
estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de alfa tocoferol en la
Solución muestra (mg/mL)
[NOTA-Calcular el contenido de acetato de alfa tocofe-
rilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(C33Hs4Üs) dividiendo el contenido, en mg/Cápsula de
vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02), por el factor
0,91 ó 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato de alfa
tocoferilo (C33Hs4Üs)
• FITONADIONA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metano! y agua (19: 1)
Solución madre del estándar: 200 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución estándar: 20 µg/mL de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metanol
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/mL de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metano!, agregar la
Solución madre del estándar, y luego diluir con metano!
a volumen.]
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 mL de esta solución reservada según se especifica
en las instrucciones de la Solución muestra en Vitamina
A, Método 7 a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vacío a temperatura ambiente hasta
6280 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
sequedad. Transferir el contenido del matraz a un ma-
traz volumétrico adecuado con ayuda de metanol y di-
luir con metanol a volumen para obtener una concen-
tración de 20 µg/ml de fitonadiona.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatograf!O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 ~tl
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son aproximadamente
0,68 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C31 H4602), en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de fitonadiona de la Solución
muestra
rs = área del pico de fitonadiona de la Solución
estándar
Cs concentración de ER Fitonadiona USP en la
= Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (Ci1 H4602)
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución de hidróxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidróxido de potasio en 50 ml de agua.
Solución de yodo: Transferir 1 O mg de yodo a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Disolver en ciclohexano y
diluir con ciclohexano a volumen. Diluir 1 O ml de esta
solución con ciclohexano hasta 100 ml. [NOTA-Prepa-
rar esta solución en el día de su uso.]
Solución muestra A (para preparaciones que conten<;¡an
beta caroteno en soluciones oleosas): Proceder segun
se indica en Vitamina A, Método 1, excepto que se debe
usar ciclohexano en lugar de n-hexano como disolvente
de extracción, y diluir los extractos filtrados con ciclohe-
xano, para obtener una concentración de 2 µg/ml de
beta caroteno.
Solución muestra B (para preparaciones que contengan
beta caroteno en polvo seco): Retirar el contenido de
no menos de 20 Cápsulas cortando para abrir las Cáp-
sulas. Mezclar y determinar el peso del contenido.
Transferir una cantidad del contenido de las Cápsulas,
equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un matraz de
saponificación de 500 ml. Agregar 100 ml de alcohol,
6 ml de Solución de hidróxido de potasio y una barra
mezcladora magnética. Acoplar un condensador de aire
al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 minutos
mezclando constantemente. Enfriar a temperatura am-
USP 37
biente. Agregar 1 70 ml de éter de petróleo y mezclar
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el con-
tenido del matraz a un embudo de separación de
500 ml con porciones de éter de petróleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgánica superior a un matraz volumétrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificación. Agregar 1 70 ml de éter de petróleo y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cación al embudo de separación con ayuda de porcio-
nes de éter de petróleo. Dejar que las capas se separen
durante 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgánica al matraz volumé-
trico que contenga la capa orgánica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separación con porciones
pequeñas de éter de petróleo y transferir los lavados al
matraz volumétrico. Diluir los extractos etéreos con éter
de petróleo a volumen. Agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar, y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solución, equivalente a
1 00 µg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrógeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solución de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un baño de agua mantenido a 65º. Enfriar
rápidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución muestra A o Solución muestra B
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(C40Hs6), en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Au/F) x (100/Cu)
Au = absorbancia de la Solución muestra A o
Solución muestra B
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra A o Solución muestra B
(mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos ,
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/
g, y el recuento total combinado de hongos filamentosos
y levaduras no excede de 300 ufc/g:.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
 USP 37
• ETIQUETADO': Etiquetar las Cápsulas indicando que el pro-
ducto es Cápsulas de Vitaminas Oleosolubles. La etiqueta
también indica la cantidad de cada vitamina/unidad de
dosificación y, cuando sea necesario, la forma química
presente. Cuando el producto contiene vitamina E, la eti-
queta también indica si se trata de la forma do di.
Cuando se proporciona más de un método de valoración
para una vitamina en particular, el etiquetado indica el
método de valoración usado sólo si no se usa el Método
7.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Ácido de Alfa Tocoferilo USP
ER Colecalciferol USP
9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3f3,5Z,7E)-.
Colecalciferol.
C21H440 384,64
ER Ergocalciferol USP
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
(3f3,5Z, 7 E,22[)-.
Ergocalciferol.
C2sH440 396,65
ER Fitonadiona USP
1,4-Naftalendiona, 2-metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-he-
xadecenil)-, [R-[R*,R*-(E)]]-.
Filooquinona.
C31 H4602 450,70
ER Vitamina A USP
Vitaminas Oleosolubles, Solución Oral
DEFINICIÓN
La Solución Oral de Vitaminas Oleosolubles contiene dos o
más de las siguientes vitaminas oleosolubles: Vitamina A,
como retino! o ésteres de retino! en forma de acetato de
retinilo o palmitato de retinilo; Vitamina D, como ergocal-
ciferol (Vitamina D2) o colecalciferol (Vitamina D 3); Vita-
mina E, como alfa tocoferol, acetato de alfa tocoferilo o
succinato ácido de alfa tocoferilo; Fitonadiona (Vitamina
K,); y beta caroteno. Contiene no menos de 90,0% y no
más de 150,0% de las cantidades declaradas de vitamina
A, como equivalente de retinol (C20H300); vitamina D,
como colecalciferol (C21H440) o ergocalciferol (C2sH440);
vitamina E, como alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa
tocoferilo (C31 Hs203), o succinato ácido de alfa tocoferilo
(C33Hs40s); fitonadiona (C31 H4602); y beta ca rote no
(C40Hs6).
1 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas también se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en
términos de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A= 0,3 ~tg de todo trans retinol (vitamina A alcohol) o 0,344 µg
de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg de todo
trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de retinol (3,3
Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de beta
caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vitamina D
= 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1
antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de di-alfa
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco-
ferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de d-
aifa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles 6281
CONTENIDO
• VITAMINA A
[NOTA-~Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar 1: 1 3 pg/mL de retinol, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solución estándar 2: 1 3 pg/mL de retino!, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución estándar 7 y Solución estándar 2.
Solución muestra: Equivalente a 1 3 µg/mL de retino!, a
partir de un volumen medido con exactitud de Solución
Oral en n-hexano
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar 7 o Solución estándar 2 y
Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retino! (C20H300), en la porción de Solu-
ción Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forna todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
correspondiente
C = concentración de retino! en la Solución
estándar correspondiente (µg/mL)
Cu = concentración nominal de Vitamina A, como
retino!, en la Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retino!
(C20H300)
•VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actínica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/mL de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solución estándar a 60º durante 1 hora hasta iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) en su precursor correspondiente.
Solución madre de la muestra: Equivalente a 20 µg/
mL de colecalciferol o ergocalciferol, a partir de un vo-
lumen medido con exactitud de Solución Oral en n-
hexano
Solución muestra: Transferir 5,0 mL de Solución madre
de la muestra a un recipiente con tapa de rosca con
recubrimiento interno de teflón y calentar, agitando
constantemente, durante 1 hora en un baño de agua
mantenido a 60º para obtener una solución que con-
tenga vitamina D (colecalciferol o ergocalciferol) y su
precursor correspondiente. Enfriar y diluir con n-hexano
6282 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
hasta obtener una solución que contenga 2 µg/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviación estandar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C2sH440) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en ra Solución muestra,
1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H440)
o ergocalciferol (C2sH440)
•VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico en agua (1 en
100)
Fase móvil: Metanol y Solución A (19:1)
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución muestra: Equivalente a 2,0 mg/ml de alfa to-
coferol, acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de
alfa tocoferilo, a partir de un volumen medido con
exactitud de Solución Oral en metanol
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
USP 37
(C31 Hs203) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(C33Hs40s) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solución
muestra (m9/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• FITONADIONA (VITAMINA K 1)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (19:1)
Solución madre del estándar: 200 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metanol
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metanol, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solución muestra: Equivalente a 20 µg/ml de fitona-
diona, a partir de un volumen medido con exactitud de
Solución Oral en metanol
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0% Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C31 H4602), en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Fase móvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumétrico de 1 L y disolver con 20 ml de
2-propanol. Agregar 0,2 ml de N-etildiisopropilamina,
25 ml de solución de acetato de amonio al 0,2%,
455 ml de acetonitrilo y aproximadamente 450 ml de
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6283

metanol. Dejar que la solución alcance la temperatura [NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
ambiente y diluir con metanol a volumen. de los componentes en la Solución de aptitud del sis-
Diluyente: 50 µg/mL de butil hidroxitolueno en alcohol tema se presentan en la Tabla 7.]
Solución de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma- Tabla 1
traz volumétrico de 50 ml. Agregar 1 mL de agua, 4 mL
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5 Tiempo de Factor de
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a Retención Respuesta
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura Nombre Relativo Relativa
ambiente, pasar la suspensión a través de un filtro de Forma todo trans de alfa
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm y usar caroteno o 93 11
el filtrado transparente. Forma todo trans de be-
Solución madre del estándar: 60 µg/mL de ER Beta ta caroteno 1 00 1
Caroteno USP en tetrahidrofurano 9-cis-Beta caroteno 1 07 1
Solución estándar A: Transferir 5,0 mL de la Solución 13-cis-Beta caroteno 1 17 12
madre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL,
agregar 5,0 mL de tetrahidrofurano y diluir con Dilu- 15-cis-Beta caroteno 1 21 14
yente a volumen. Requisitos de aptitud
Determinar la concentración de Solución estándar A a Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
partir de la concentración de Solución estándar B según de la Solución de aptitud del sistema es similar al cro-
se describe a continuación. matograma de referencia provisto con el lote de ER
Solución estándar B: Transferir 5,0 mL de Solución ma- Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL y Resolución: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por alfa caroteno y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
triplicado. teno, Solución de aptitud del sistema
Condiciones instrumentales Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).) beta caroteno, Solución estándar A
Longitud de onda analítica: 457 nm Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
Longitud de paso de celda: 1 cm el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
Blanco: Ciclohexano lución estándar A
Análisis Análisis
Muestra: Solución estándar B Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
Calcular la concentración de beta caroteno total Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
(mg/mL) como la forma todo trans de beta caroteno caroteno en la porción de Solución Oral tomada:
(C40Hs6) en la Solución estándar B. [NOTA-La concen-
tración de Solución estándar B es igual a la concentra- Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ción de la Solución estándar A.]

Resultado = A/F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solución estándar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solución madre de la muestra: Transferir un volumen
medido con exactitud de Solución Oral, equivalente a
20 mg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
250 mL. Agregar 250 mg de butil hidroxitolueno,
120 mL de cloruro de metileno y 100 mL de alcohol.
Agitar el matraz hasta que la muestra se haya disuelto o
suspendido completamente. Dejar la mezcla en reposo
en la oscuridad hasta que alcance la temperatura am-
biente (aproximadamente 2 horas). Agregar cloruro de
metileno a volumen y agitar nuevamente de manera
vigorosa.
Solución muestra: Diluir un volumen de la Solución ma-
dre de la muestra con una mezcla de cloruro de meti-
leno y Diluyente (1 :1) hasta obtener una concentración
final de beta caroteno de 3 µg/ml. Pasar a través de un
filtro de membrana con un tamaño de poro de 0,45
µm.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
tándar A
ru = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución estándar A
Cs = concentración de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A según se
determina mediante el procedimiento
espectro métrico
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
OTROS COMPONENTES
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método I (611) (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada de
C2HsOH
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/mL, y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de ,3 x 102 ufc/mL.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte o con
una cámara gaseosa superior mínima.
6284 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
• ETIQUETADO:' La etiqueta indica que el producto es So-
lución Oral de Vitaminas Oleosolubles. La etiqueta indica
la cantidad de cada vitamina fresente en un volumen
determinado de Solución Ora y, cuando sea necesario, la
forma química de vitamina presente. Cuando el producto
contiene vitamina E, la etiqueta indica si se trata de la
formad o di.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de,Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP
ER Beta Caroteno USP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Acetato de Retinilo USP
ER Palmitato de Retinilo USP
Vitaminas Oleosolubles, Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles contienen dos o más
de las siguientes vitaminas oleosolubles: Vitamina A, Vita-
mina D como Ergocalciferol (Vitamina D2) o Colecalciferol
(Vitamina 03), Vitamina E, Fitonadiona (Vitamina Ki) y
Beta Caroteno. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no más de 165,0% de las cantidades declaradas
de vitamina A (C20H300) como retinol o ésteres de retinol
en la forma de acetato de retinilo (C22H3202) o palmitato
de retinilo (C36H4 602); vitamina D como colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C2sH440); vitamina E como alfa
tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo (C31Hs2Ü3),
o succinato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs40s); fitonadiona
(C31 H4602); y beta caroteno (C40Hs6).
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles no contienen otras
vitaminas o minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.]
• VITAMINA A, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un éster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma química presente
en la formulación. ER Vitamina A USP es acetato de
' Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las etiquetas
de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en términos
de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las Unidades
USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP de Vitamina
A= 0,3 µg de todo trans retino! (alcohol de vitamina A) o 0,344 µg de todo
trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg de todo trans
palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de retino! (3,3 Unida-
des USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retino! (RE); 1 UI de beta caroteno
= 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vitamina D =
0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1
antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de di-alfa
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP efe Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco-
ferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de succinato
ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E. En
términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa toco-
ferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg de di-
alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y 1 mg de
succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
USP 37
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar: 15 µg/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/mL de
palmitato de retinilo en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un recipiente con tapa de rosca
con recubrimiento interno de teflón. Agregar 1O mL de
dimetil sulfóxido y 15 mL de n-hexano, y agitar durante
45 minutos en un agitador de movimiento tipo muñeca
(wrist-action) en un baño de agua mantenido a 60º.
[NOTA-Ajustar el agitador de movimiento tipo muñeca
para asegurar que el contenido del recipiente se mezcle
vigorosa y completamente.] Centrifugar a 3000 rpm
durante 1 O minutos y transferir la capa de hexano con
una pipeta a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar 15 mL de n-hexano a la capa de dimetil sulfóx1do,
agitar bien durante 5 minutos, y transferir la capa de
hexano con una pipeta a un matraz volumétrico de
100 ml. Repetir esta extracción con tres porciones adi-
cionales de 15 mL de n-hexano. Diluir los extractos en
el matraz volumétrico con n-hexano a volumen. Diluir
un volumen de 1 O mL de esta solución con n-hexano
para obtener una solución con una concentración de
15 µg/mL de vitamina A como retinol (C20H30Ü).
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo en el cro-
matograma de la Solución muestra. Para productos
que contengan acetato de vitamina A o palmitato de
vitamina A, calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de vitamina A, como retinol (C20H300), en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H3 00) en la Solución muestra
(µg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
USP 37
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-1 65,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H100)
• VITAMINA A, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica un éster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma química presente en la
formulación. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con protección actínica durante
todo este procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 mL de ácido sulfúrico a 80 mL de
metanol en un matraz volumétrico de 100 ml. Enfriar y
diluir con metanol a volumen.
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 100 mL, y agregar suficiente
agua para disolver. Agregar 1,7 mL de ácido sulfúrico y
diluir con agua a volumen.
Solución de lecitina: 5 mg/mL de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase móvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0,3)
Solución estándar: 15 ~tg/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/mL de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulación.] Reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Si la vitamina D se encuentra presente en la formu-
lación, transferir una porción del polvo, equivalente a
30 µg de la cantidad declarada de colecalciferol o ergo-
calciferol, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de teflón. Si la vitamina D no se en-
cuentra presente en la formulación, usar una porción
del polvo, equivalente a 90 mg de la cantidad declarada
de vitamina E (como alfa tocoferol, acetato de alfa to-
coferilo o hemisuccinato de alfa tocoferilo). Si la vita-
mina E no se encuentra presente en la formulación,
usar una porción del polvo, equivalente a 2,5 mg de la
cantidad declarada de acetato de retinilo o palmitato de
retinilo. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio, 1,5 ml
de Solución de lecitina y 12,5 mL de 2,2,4-trimetilpen-
tano, y dispersar en un mezclador de vórtice. Agregar
6 ml de Solución de ascorbato de sodio-pirogalol, agitar
lentamente, y dejar que la solución se desgasifique.
Continuar agitando hasta que haya cesado la emisión
de gases y luego agitar durante 12 minutos adicionales.
Agregar 6 ml de dimetil sulfóxido, mezclar en un mez-
clador de vórtice hasta formar una suspensión, y agitar
durante 12 minutos. Agregar 6 mL de Solución de ácido
sulfúrico metanólico 3 N, mezclar en un mezclador de
vórtice para formar una suspensión, y agitar durante 12
minutos. Agregar 12,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano,
mezclar en un mezclador de vórtice hasta formar una
suspensión, y agitar durante 1 O minutos. Centrifugar
durante 1 O minutos para romper la emulsión y para
que el sobrenadante se torne transparente. [NOTA-El
sobrenadante se usa para la determinación de vitamina
A, así como para vitamina D y vitamina E, si se encuen-
tran presentes en la formulación.] Si fuera necesario, di-
luir cuantitativamente un volumen del sobrenadante
con 2,2,4-trimetilpentano para obtener una concentra-
ción cercana a la de la Solución estándar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6285
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 pm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 8,0 entre todo trans de
acetato de retinilo y todo trans de palmitato de
retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
ción muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C,oHioO), en la porción de Ta-
bletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 1 00
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de ia Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinolo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H12Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H100) en la Solución muestra
(pg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentración nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H100)
• VITAMINA A, Método 3
[NOTA-Cuando se especifica un éster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma química presente en la
formulación. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con protección actínica durante
todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solución de hidróxido de potasio: 800 mg/mL de hi-
dróxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidróxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/mL de pirogalol en alcohol
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (92:8)
Solución madre del estándar: 30 pg/ml de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solución se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solución estándar: Diluir un volumen de Solución ma-
dre del estándar con Diluyente para obtener una concen-
tración de 1 pg/mL de ER Vitamina A USP. Transferir
10,0 mL de esta solución a un matraz de 125 ml con
tapón y agregar 5 ml de agua, 5 ml de Diluyente y
3 ml de Solución de hidróxido de potasio. Tapar herméti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un baño de
agua mantenido a 60 ± 5 ,, y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 rnl de agua y 25,0 ml de Disolvente
de extracción. Tapar herméticamente y agitar vigorosa-
 6286 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
mente durante 60 segundos. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 ml de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos para que las capas se separen. Retirar una
porción de la capa orgánica para inyectarla en el cro-
matógrafo. Esta Solución estándar contiene 0,34 µg/ml
de retinol.
Solución muestra: Reducir a polvo fino un número
contado de Tabletas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a 1,5 mg de acetato de retinilo, a un ma-
traz de 125 ml con tapón. Agregar 5 ml de a9ua,
15 ml de Diluyente y 3 ml de Solución de hidroxido de
potasio. Tapar herméticamente, agitar durante 15 minu-
tos sobre un baño de agua mantenido a 60 ± 5º, y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar 7 ml de agua y
25,0 ml de Disolvente de extracción. Tapar hermética-
mente y agitar vigorosamente durante 60 segundos o
más, si fuera necesario, para completar la extracción.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 ml de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que las capas
se separen. [NOTA-No agitar porque podría formarse
una emulsión.] Retirar una porción de la capa orgánica
y diluir con Disolvente de extracción para obtener una
concentración de 0,34 µg/ml de retino!.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 4 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 1 3-cis-
retinol y todo trans retinol son 0,92 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de todo trans retinol y
1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü), en
la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (rr1/rn) x (Cs/Cu) x F x 100
rr1 = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 13-cis-retinol de la
Solución muestra
rr2 = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retinol y 1 3-cis-retinol de la
Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(CnH32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü) en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H30Ü)
• (OLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
USP 37
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solución estándar a 60" durante 1 hora para iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solución a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vacío a temperatura am-
biente para obtener una concentración de 2 µg/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 1 00
ru =área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solución
muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C23H44Ü)
• (OLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, Solución
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solución de lecitina
y Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 2.
Fase móvil: n-Hexano y alcohol butílico terciario
(98,75:1,25)
Solución estándar 1 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volu-
men de la Solución estándar a 60º durante 1 hora para
isomerizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) a su ,r,recursor correspondiente.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r5 = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µ;¡/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccion inicial
de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular la
concentración nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actmica durante todo este
,procedimiento.]
Acido acético diluido: Solución de ácido acético glacial
(1 en 1O) en agua
Solución de fenolftaleína: 1O mg/ml de fenolftaleína
en alcohol
Solución de hidróxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidróxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar en el
día de su uso.
Disolvente de extracción: Cloruro de metileno y al-
cohol isopropílico (99,8:0,2)
Fase móvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solución madre del estándar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar cada 4 semanas. Almacenar
en un congelador.]
Solución estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción de fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isopropílico ( 4: 1), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extracción. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solución madre
del estándar con alcohol deshidratado para obtener una
concentración de 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP. Preparar esta solución en el día
de su uso. Transferir 2,0 ml de esta solución a un ma-
traz de 125 ml con tapón. Agregar 15,0 ml de agua y
15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio, tapar, y
agitar durante 30 minutos en un baño de agua mante-
nido a 60º. Dejar que se enfríe a temperatura ambiente
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6287
y transferir el contenido del matraz a un embudo de
separación de 250 ml. Agregar 15,0 ml de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente, y transferir esta solu-
ción al embudo de separación. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separación. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos, y dejar en reposo durante 15 minutos hasta
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la capa de hexano
en el embudo de separación, tapar, y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1O minutos hasta que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solución de fenolftaleína,y 15,0 ml de agua al
embudo de separación. Agregar Acido acético diluido
gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1O minutos hasta que las ca-
pas se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Fil-
trar la capa de hexano a través de sulfato de sodio an-
hidro, colocado en un pequeño trozo de algodón, en
un matraz de fondo redondo de 100 ml. Enjuagar el
embudo y el sulfato de sodio con unos pocos ml de n-
hexano y recoger los enjuagues en el mismo matraz.
Evaporar el hexano en el matraz en un evaporador rota-
torio a 50º hasta sequedad. Agregar inmediatamente
2,0 ml de Disolvente de extracción para disolver el resi-
duo. Transferir esta solución a una columna de extrac-
ción de fase sólida recientemente acondicionada que
contenga relleno de sílice con una relación entre la
masa de sorbente y el volumen de la columna de
500 mg a 2,8 ml o equivalente, enjuagar el matraz de
fondo redondo con 1,0 ml de Disolvente de extracción,
y transferir a la columna. Eluir la columna con 2,0 ml
de Disolvente de extracción y desechar esta fracción.
Eluir la columna con 7,0 ml de Disolvente de extracción
y recoger el eluato en un matraz adecuado. Colocar el
matraz en un baño de agua tibia mantenido a 42º y
evaporar el disolvente con ayuda de una corriente de
nitrógeno. Agregar inmediatamente 2,0 ml de acetoni-
trilo al residuo y usar la solución para inyectarla en el
cromatógrafo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1 O µg de colecalciferol o ergocalciferol, a un
matraz de 125 ml con tapón y proceder según se in-
dica en Solución estándar, comenzando donde dice
"Agregar 15,0 ml de agua y 15,0 ml de Solución de
hidróxido de potasio".
Sistema cromato9ráfico
(Ver CromatografJO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 27º
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 4,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C 27 H44 0) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r5 = área del pico de colecalciferolo ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
6288 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2aH44Ü)
• VITAMINA E, Método 1
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 100) en
agua
Fase móvil: Metanol y Solución A (19: 1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de 0,65 mg/mL de ER Ergocalciferol USP en metanol.
Transferir 1,0 mL de esta solución a un matraz volumé-
trico de 100 mL que contenga 100 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 mL de metanol,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario, y diluir con
metanol a volumen. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: 2 mg/mL de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Méhodo 1. Transferir no menos
de 20 mL de esta solución a un recipiente adecuado y
evaporar al vacío a temperatura ambiente hasta seque-
dad. Transferir el residuo con ayuda de metanol a un
matraz volumétrico adecuado y diluir con metanol a vo-
lumen para obtener una concentración de 2 mg/mL de
alfa tocoferol, acetato de alfa tocoferilo o succinato
ácido de alfa tocoferilo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solución de aptitud del
sistema
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 1,2, Solución de apti-
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29HsoÜ2),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/mL)
USP 37
Cu = concentración nominal de la forma de
vitamina E correspondiente en la Solución
muestra (m9/mL)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C 31 H52 0 3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 240 mL de metanol con 1O mL de
agua, seguidos de 0,5 mL de ácido fosfórico al 50%, y
diluir con acetonitrilo hasta 1000 ml.
Solución de aptitud del sistema: 2 mg/mL de ER Alfa
Tocoferol USP, d~ ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metanol
Solución estándar: 2 mg/mL de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succianto Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 2. Transferir un volumen
del sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano a un matraz
volumétrico adecuado, donde el volumen de la muestra
retirada de 2,2,4-trimetilpentano y el tamaño del ma-
traz volumétrico sean tales que la concentración final de
la Solución muestra equivalga a la de la Solución están-
dar. Evaporar casi hasta sequedad, agregar varios mL de
metanol, y evaporar el 2,2,4-trimetilpentano remanente.
Diluir con metanol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para succi-
nato ácido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectiva mente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre succinato ácido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol; no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
ción de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mg/mL)
USP 37
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilución para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metano! para calcular la concentración
nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (CiiHs4Üs)
• VITAMINA E, Método 3
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase móvil: Metano!, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,3 mg/mL de ER Alfa Tocoferol
USP en metano!
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 8 mg de alfa tocoferol, a un matraz de 125 mL
equipado con una junta de vidrio esmerilado. Agregar
25,0 mL de agua, 25,0 mL de alcohol deshidratado y
3,5 g de pellets de hidróxido de potasio. Agitar durante
1 hora en un baño de agua mantenido a 55º. Enfriar y
transferir con ayuda de un volumen mínimo de agua a
un embudo de separación de 125 ml. Enjuagar el ma-
traz con 50 mL de n-hexano y agregar el enjuague al
embudo de separación. Tapar, agitar vigorosamente du-
rante 60 segundos, y dejar que las capas se separen.
Escurrir la capa acuosa en un segundo embudo de se-
paración de 250 mL y repetir la extracción con 50 mL
de n-hexano. Desechar la capa acuosa y combinar los
extractos de hexano. Lavar los extractos combinados
con 25 mL de agua, dejar que las capas se separen, y
desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de ácido acé-
tico glacial y repetir el procedimiento de lavado dos
veces más. Filtrar la capa de hexano lavada a través de
sulfato de sodio anhidro en un matraz de fondo re-
dondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato de
sodio con unos pocos mL de n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Colocar
el matraz en un baño de agua mantenido a 50º y eva-
porar la solución de hexano con ayuda de un evapora-
dor rotatorio hasta sequedad. Agregar inmediatamente
25,0 mL de Diluyente y agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (C29Hso02), en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
rs = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
Cs = concentración de alfa tocoferol en la Solución
estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina E como
alfa tocoferol en la Solución muestra (mg/mL)
[NOTA-Calcular el contenido de acetato de alfa tocofe-
rilo (C31 Hs20i) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(CiiHs4Üs) dividiendo el contenido, en mg/Tableta de
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6289
vitamina E como alfa tocoferol (C 2 "H10Ü2), por el factor
0,91 ó 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C 31 H1 2 01) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C11Hs4Üs)
• FITONADIONA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (19: 1)
Solución madre del estándar: 200 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución estándar: 20 µg/mL de ER Fitonadiona USP, a
partir de la Solución madre del estándar diluida con
metanol
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/mL de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP, a partir de la Solución madre del estándar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metano!, agregar la
Solución madre del estándar, y luego diluir con metano!
a volumen.]
Solución muestra: Transferir no menos de 20 mL de la
solución reservada según se especifica en las instruccio-
nes de la Solución muestra en Vitamina A, Método 7 a un
recipiente adecuado y evaporar al vacío a temperatura
ambiente hasta sequedad. Transferir el residuo con
ayuda de metano! a un matraz volumétrico adecuado y
diluir con metanol a volumen para obtener una concen-
tración de 20 µg/mL de fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son 0,68 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C31 H4602), en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de fitonadiona de la Solución
muestra
r5 = área del pico de fitonadiona de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (Ci1 H4602)
• FITONADIONA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente: Metanol y alcohol isopropílico (19:1)
Fase móvil: Mezclar 800 mL de metano!, 200 mL de
cloruro de metileno, O, 1 mL de ácido acético glacial,
1, 36 g de cloruro de cinc y 0,41 g de acetato de sodio.
6290 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
Solución de estándar interno: 5 pg/ml de menaqui-
nona 4 (vitamina K1) en Disolvente. [NOTA-Una solu-
ción madre concentrada de menaquinona 4 (100 pg/
ml) puede almacenarse durante 2 meses en un
refrigerador.]
Solución madre del estándar: 5 pg/ml de ER Fitona-
diona USP, preparada disolviendo en cloruro de meti-
leno con ayuda de ultrasonido y diluyendo con Disol-
vente a volumen final
Solución estándar: Transferir 1,0 ml de la Solución ma-
dre del estándar y 1,0 ml de la Solución de estándar
interno a un matraz adecuado y diluir con Disolvente
hasta 5 ml. Pasar a través de un filtro de membrana
con un tamaño de poro de 0,45 pm o menor.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de polvo, que no
exceda de 800 mg, y equivalente a una cantidad de
fitonadiona que no exceda de 50 pg, a un tubo de cen-
trífuga con tapón. Agregar 4 ml de agua. Tapar y mez-
clar usando un mezclador de vórtice hasta que la mues-
tra se disperse. Colocar el tubo en un baño de agua a
60º durante 5 minutos. Retirar del baño y agitar de
nuevo o mezclar usando un mezclador de vórtice du-
rante 1 minuto mientras la pre¡aración aún esté ca-
liente. Agregar 8 ml de alcoho y agitar el contenido
por rotación suave hasta mezclar. Colocar el tubo en un
baño de agua a 60º durante 5 minutos. Retirar del
baño y agitar de nuevo o mezclar usando un mezclador
de vórtice durante 2 minutos mientras la preparación
aún esté caliente. Enfriar a temperatura ambiente. Agre-
gar un volumen de Solución de estándar interno, equiva-
lente a 1,0 ml por cada 5 pg de la cantidad esperada
de fitonadiona en la alícuota tomada. Agregar 20,0 ml
de éter de petróleo y tapar el tubo herméticamente.
Agitar o mezclar usando un mezclador de vórtice du-
rante 15 minutos para mezclar bien el contenido. Cen-
trifugar para separar las dos capas. Transferir un volu-
me~ de la capa superior de éter de petróleo,
equivalente a 5-50 pg de la cantidad nominal de fitona-
diona, a un matraz apropiado. Colocar el matraz en un
baño de agua a 35º-45º y evaporar el disolvente bajo
una corriente de nitrógeno hasta que únicamente
quede un residuo oleoso. Disolver el residuo en un vo-
lumen de Disolvente para obtener una concentración de
1 pg/ml de fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver CromatografJO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Detector fluorometrico ajustado a 320 nm
para excitación y 420 nm para emisión
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno exhaustivo (end-
capped) L1 de 5 pm, y un reactor postcolumna consti-
tuido por una columna PEEK, de 4,6 mm x 3 cm, con
relleno bien apretado de polvo de cinc. [NOTA-Prepa-
rar el reactor postcolumna a diario, o según sea nece-
sario, para cumplir con los requisitos de aptitud del
sistema.]
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 25 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para el están-
dar interno y fitonadiona son 1,0 y 1,4,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 2500 platos
teóricos para el pico de fitonadiona
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
fitonadiona
USP 37
Desviación estándar relativa: No más de 3 0%
Análisis '
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C 31 H4602) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (C 5/Cu) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
fitonadiona y estándar interno de la Solución
muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
fitonadiona y estándar interno de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (pg/ml)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (pg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución de hidróxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidróxido de potasio en 50 ml de agua.
Solución de yodo: 0,01 mg/ml de yodo en ciclohe-
xano. [NOTA-Preparar esta solución en el día de su
uso.]
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas. Mo-
ler las Tabletas a polvo fino y transferir una cantidad del
polvo, equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un ma-
traz de saponificación de 500 ml. Agregar 100 ml de
alcohol, 6 ml de Solución de hidróxido de potasio y una
barra mezcladora magnética. Acoplar un condensador
de aire al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 mi-
nutos mezclando constantemente. Enfriar a temperatura
ambiente, agregar 1 70 ml de éter de petróleo, y mez-
clar durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el
contenido del matraz a un embudo de separación de
500 ml con porciones de éter de petróleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgánica superior a un matraz volumétrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificación, agregar 170 ml de éter de petróleo, y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cación al embudo de separación con ayuda de porcio-
nes de éter de petróleo. Dejar que las capas se separen
durante 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgánica al matraz volumé-
trico que contenga la capa orgánica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separación con porciones
pequeñas de éter de petróleo y transferir los lavados al
matraz volumétrico. Diluir los extractos etéreos con éter
de petróleo a volumen, agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar, y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solución, equivalente a
100 pg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrógeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solución de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un baño de agua mantenido a 65º. Enfriar
rápidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones espectrométricas
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución muestra
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(CoHs6), en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Au/F) x (1 00/Cu)
 USP 37
A" = absorbancia de la Solución muestra
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm 223
C" = concentración nominal de beta caroteno' en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs 6)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegración
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/
g, y el recuento total combinado de hongos filamentosos
y levaduras no excede de 300 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO': Etiquetar las Tabletas indicando que el pro-
duct~ ,es .Ta~letas de V.itaminas Oleos?lubles. La etiqueta
tamb1en indica la cantidad de cada vitamina/unidad de
dosificación y, cuando sea necesario, la forma química
presente. Cuando el producto contiene vitamina E la eti-
queta indica si se trata de la forma do di. Cuando' se
P.rop~rciona más. de un método de valoración para una
v1tam1na en particular, el etiquetado indica el método de
val9ración usado sólo si no se usa el Método 1.
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Ácido de Alfa Tocoferilo USP
ER Colecalciferol USP
9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3f3,5Z,7E)-.
Colecalciferol.
C21H44Ü 384,64
ER Ergocalciferol USP
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
(3f3,5Z,7 E,22E)-.
Ergocalciferol.
C28H440 396,65
ER Fitonadiona USP
1,4-Naftalendiona, 2-metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-he-
xadecenil)-, [R-[R*,R*-(E)]]-.
Filoquinona.
C31 H4602 450,70
ER Vitamina A USP
'.Las Unidades USP de a_ctividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades 1nternac1onales correspondientes,
s1emp_re que tales unidades hayan ex1st1do previamente. La Unidad USP para
Vitamina _E se ha d1scontinu_ado. Las unidades 1nternac1onales (UI) para vitami-
nas tamb1en se han d1scont1nuado; no obstante, continúa el uso de UI en las
et1qu_etas de los_ productos d~ vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en
terminas de Unidades ademas del etiquetado requerido, la relación de las
Unid_ades_ USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A= 0,3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o
0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o O 55 µg
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg d~ reti-
no! (3,3 Unidades USP de Vitamina A)= 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1,_1 antiguas_ Unidad_es USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocofenlo = 1 _antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de
di-alfa tocofenlo = 0~89 antig_uas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de
d-alfotocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de _Vitamina E, 1 mg de succi-
nato_ ac1do de d-alfa tocofenlo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En terminas de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocofenlo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol :' 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y
1 mg de succ1nato ac1do de di-alfa tocoferilo = 0,60.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6291
Vitaminas
,
Oleosolubles con Minerales '
Capsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales con-
tienen dos o más de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, como retinol o ésteres de retinol en forma de
acetato de reti~ilo o palmitato de retinilo; Vitamina D,
co_mo ergocalc1f~rol (Vitamina D 2) o colecalciferol (Vita-
mina D3); Vitamina E, como alfa tocoferol, acetato de alfa
tocoferilo o succinato ácido de alfa tocoferilo· Fitonadiona
(Vitamina K1); beta caroteno; y uno o más minerales deri-
vados de sustancias generalmente reconocidas como se-
guras, que proporcionan uno o más de los siguientes ele-
mentos en su forma ionizable: boro, calcio cromo cobre
flúor, Y,odo, hierro, magnesio, manganeso,' molibd~no, ní'.
q~el, fosforo, potasio, selenio, estaño, vanadio y cinc. Las
Capsulas contienen. no menos de 90,0% y no más de
165,0% de las cantidades declaradas de vitamina A como
equ!valente de retinol (C20H 30 0); vitamina D, como' cole-
calc1ferol (C21H44Ü) o ergocalciferol (C 28 H440); vitamina E,
como alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
(_C31 Hs293), o succinato ácido de alfa tocoferilo (C 33 H540 5);
f1tonad1ona (C31 H4602)¿ y beta ca rote no (C40 H56 ); no me-
nos de 90,0% y no mas de 125,0% de las cantidades
~eclaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P), potasio (K) y cinc
(Zn); y no menos de 90,0% y no más de 160,0% de las
cantidades d~claradas de boro (B), cromo (Cr), flúor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se) estaño
(Sn) y vanadio (V). '
Pueden contener otra~ sustancias agregadas declaradas ge-
neralmente reconocidas como seguras en cantidades
inobjetables. '
CONTENIDO
•VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar 1: 1 3 µg/mL de retinol, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solución estándar 2: 1 3 µg/mL de retinol, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución estándar 1 y Solución estándar 2.
Solución muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cápsula~ a un recipi,ente adecuado, mezclar y
pesar. Transferir una porc1on de la mezcla, equivalente a
5 Cápsulas, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimi_ento interno. de teflón. [NOTA-Para Cápsulas de
g~latina dura, retirar, tanto como sea posible, el conte-
nido d~ no menos de 20 Cápsulas, cortando para abrir
las cubiertas de las Cápsulas, transfiriendo las cubiertas
y sus contenidos a un recipiente adecuado y triturando
p_a,ra obtener una ma_sa homogéne~. Transferir una por-
c1_on de la masa, equivalente a 5 Capsulas, a un reci-
piente con tapa de rosca con recubrimiento interno de
teflón.] Agregar 1 O mL de dimetil sulfóxido y 15 mL de
n-hexano, y agitar durante 45 minutos en un baño de
agua mantenido a 60º. Centrifugar a 3000 rpm durante
1 O minutos y transferir la capa de hexano con una pi-
peta a un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar
15 m~ de. n-hexano a la capa de dimetil sulfóxido, agi-
tar m1nuc1osamente durante 5 minutos y transferir la
capa de hexano con una pipeta a un matraz volumé-
trico de _100 mL. Repetir esta extracción con tres porcio-
nes ad1c1onales de 15 mL de n-hexano. Diluir los extrac-
tos en el matraz volumétrico con n-hexano a volumen.
Diluir adicionalmente esta solución con n-hexano hasta
obtener una solución con una concentración de 1 3 ~1g/
mL de vitamina A como retinol (C2 0 H300).
6292 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar 7 o Solución estándar 2 y
Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20H30Ü), en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forna todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
correspondiente
Cs = concentración de retinol en la Solución
estándar correspondiente (µg/ml)
Cu = concentración nominal de Vitamina A, como
retinol, en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retinol
(C20H30Ü)
•VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Er!;jocalciferol USP en n-hexano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de
una solución preparada según se indica en Solución
muestra, en Vitamina A, a un recipiente adecuado y
concentrar, si fuera necesario, al vacío a temperatura
ambiente hasta obtener una solución con una concen-
tración esperada de 2 µg/ml de colecalciferol o
ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
USP 37
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cole-
calciferol (C21H44Ü) o ergocalciferol (C 28 H44Ü) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/ r5) x ( C/ Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en la Solución muestra,
1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 100) en
agua
Fase móvil: Metanol y Solución A (19:1)
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol ,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metanol a un matraz volu-
métrico adecuado y diluir con metanol a volumen para
obtener una concentración de 2 mg/ml de alfa tocofe-
rol, acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C29HsoÜ2), acetato de alfa tocoferilo
(C31 Hs2Ü3) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(C33Hs4Üs) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
C5 = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
USP 37
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solución
muestra (m9/mL)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• flTONADIONA (VITAMINA K 1)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (19:1)
Solución madre del estándar: 200 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución estándar: 20 µg/mL de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metano!
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/mL de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metano!, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solución muestra: Transferir no menos de 20 mL de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
métrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentración de 20 µg/mL de
fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C31 H4602) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Fase móvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumétrico de 1 L y disolver con 20 mL de
2-propanol. Agregar 0,2 mL de N-etildiisopropilamina,
25 mL de solución de acetato de amonio al 0,2%,
455 mL de acetonitrilo y aproximadamente 450 mL de
metanol. Dejar que la solución alcance la temperatura
ambiente y diluir con metanol a volumen.
Diluyente: 50 µg/mL de butil hidroxitolueno en alcohol
Solución de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumétrico de 50 ml. Agregar 1 mL de agua, 4 mL
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6293
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente, pasar la suspensión a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm y usar
el filtrado transparente.
Solución madre del estándar: 60 µg/mL de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solución estándar A: Transferir 5,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL,
agregar 5,0 mL de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Determinar la concentración de la Solución estándar A a
partir de la concentración de la Solución estándar 8,
según se describe a continuación.
Solución estándar B: Transferir 5,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución estándar B
Calcular la concentración de beta caroteno total
(mg/mL) como la forma todo trans de beta caroteno
(CoHs6) en la Solución estándar B. [NOTA-La concen-
tración de la Solución estándar B es igual a la concen-
tración de la Solución estándar A.]
Resultado= A/F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solución estándar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solución muestra: Transferir no menos de 20 mL de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
el residuo en una mezcla de cloruro de metileno y Dilu-
yente (1 :1 ), y diluir con la misma mezcla hasta obtener
una concentración de 3 µg/mL de beta caroteno. Pasar
a través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm, si fuera necesario.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
tándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
de los componentes en la Solución de aptitud del sis-
tema se presentan en la Tabla 7.]
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retención Respuesta
Nombre Relativo Relativa
Forma todo trans de alfa caroteno o 93 11
Forma todo trans de beta caroteno 1 00 1
9-cis-Beta caroteno 1 07 1
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución de aptitud del sistema es similar al ero-
6294 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolución: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno; y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C1/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución estándar A
Cs = concentración de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A, según se
determina mediante el procedimiento
espectrométrico
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
• CALCIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N 120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
Solución estándar de calcio: 400 µg/mL de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cados a 300º durante 3 horas y enfriados en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 mL de ácido clorhídrico 1 N.
Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de car-
bono y diluir con agua hasta 1000 mL.
Solucion madre del estándar: 1 00 µg/mL de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 100 mL. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir
con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener
concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/mL de
calcio.
Solución de polisorbato 80: Polisorbato 80 y alcohol
(1 :1 O)
Solución muestra: Transferir 5 Cápsulas a un matraz
volumétrico de 1 00 ml. [NOTA-Para Cápsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cápsulas. Abrir las
Cápsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un recipiente adecuado. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cápsulas vac1as, calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas y transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a 5
Cápsulas, a un matraz volumétrico de 100 mL.] Agregar
15 mL de agua, 1 O mL de ácido clorhídrico 6 N y 1 mL
de Solución de polisorbato 80 al matraz. Calentar sobre
una placa de calentamiento o baño de vapor, agitando
por rotación suave intermitentemente, hasta que las
Cápsulas se desintegren por completo o que el conte-
nido se disuelva. Calentar a ebullición suave durante 15
minutos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 mL del filtrado. Di-
luir esta solución con ácido clorhídrico O, 125 N hasta
obtener una concentración de 2 µg/mL de calcio, agre-
gando 1 mL de Solución de cloruro de lantano por
100 mL del volumen final.
USP 37
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,7 nm
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en mg/mL, de
calcio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de calcio
(Ca) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• CROMO, Método 7
Solución estándar de cromo: 1000 µg/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secados a
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
de 1 00 mL, y transferir 15,0 y 20,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 mL. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL
de cromo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2,5 µg/mL de cromo y omi-
tiendo e uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a 357,9 nm
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
c = concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (~tg/mL)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 7
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% y diluir con una solución de ácido
nítrico al 1 % hasta 1000 ml. Esta solución contiene
1000 µg/ml de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 1 25 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 200 ml. Diluir con ácido clorhídrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/ml de cobre.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/ml de cobre y omi-
tiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cobre
(Cu) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µ~/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORURO Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua contenida en un
matraz volumétrico de 1 000 ml. Dejar que la solución
se equilibre a temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de ácido acético
a un pH de 7,0.
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumétrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de ácido perclórico y diluir
con a~ua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio en agua, previamente secados a 100º durante 4
horas y enfriados en un desecador
Solución madre intermedia A: 100 µg/ml de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de f/uoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1 O µg/ml de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 1 0,0 ml de
Solución madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 ml de Solución
madre intermedia A a cinco matraces volumétricos de
1 00 ml distintos. Agregar a cada matraz 1 0,0 ml de
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6295
ácido clorhídrico 1 N, 25 ml de Solución de acetato de
sodio 3 M y 25,0 ml de Solución de citrato de sodio. Di-
luir el contenido de cada matraz con agua a volumen
para obtener concentraciones de O, 3; 0,5; 1,0; 5,0 y
1 0,0 µg/ml de fluoruro.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas,
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cápsulas mezclado, equivalente a 200 µg
de fluoruro, a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar 10,0 ml de ácido clorhídrico 1 N, 25,0 ml de Solu-
ción de acetato de sodio 3 M y 25,0 ml de Solución de
citrato de sodio. Diluir con agua a volumen.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir 50,0 ml de las Soluciones estándar y de la So-
lución muestra a sendos vasos de precipitados de plás-
tico, gue contengan una barra mezcladora recubierta
de plastico. Medir los potenciales (ver pH (791 )), en
mV, de las Soluciones estándar y la Solución muestra,
con un medidor de pH capaz de una reproducibilidad
mínima de ± 0,2 mV y equipado con un electrodo
indicador específico para ión fluoruro y un electrodo
de referencia de calomel. [NOTA-Al tomar las medicio-
nes, sumergir los electrodos en la solución, mezclar en
un agitador magnético con su parte superior aislada
hasta que se logre el equilibrio (1-2 minutos) y regis-
trar el potencial. Enjuagar y secar los electrodos entre
mediciones, procurando evitar que se dañe el cristal
del electrodo específico para ión fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/ml, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de respuesta
estándar así obtenida y el potencial medido de la Solu-
ción muestra, determinar la concentración, C, en
µg/ml, de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de flúor
(F) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µ9/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• FLUORURO Método 2
[NOTA-Usar recipientes de plástico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulfúrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ9/ml de fluoruro.
Solucion estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción de fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra de la siguiente
manera. Usando vacío a una presión que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con un volumen
de columna de metanol seguido de un volumen de co-
lumna de Solución amortiguadora de pH 7O, O. No dejar
que la parte superior de la columna se seque. Si la
parte superior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.] Transferir 1 0,0 ml de Solución madre del es-
tándar a un matraz volumétrico de 1 00 ml. Agregar
75 ml de agua y ajustar con hidróxido de sodio O, 1 N
a un pH de 10,4 ± O, 1. Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumétrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidró-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 1 0,0. Diluir con So/u-
6296 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
ción amortiguadora de pH 7O, O a volumen. El u ir una
porción de esta solucion a través de una columna de
extracción de fase sólida de 3 ml, que contenga relleno
L1, la cual se conecta a través de un adaptador a una
segunda columna de extracción de fase sólida que con-
tenga relleno de intercambio catiónico fuerte de sulfo-
nilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato y re-
coger el resto del eluato en un matraz adecuado para
inyectar en el cromatógrafo.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un recipiente de 100 ml. Si fuera necesario, retirar cual-
quier contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas
vacías lavando con varias porciones de éter. Desechar
los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas con
ayuda de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas
de las Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y
calcular el peso neto del contenido de las Cápsulas.
Transferir una porción del contenido de las Cápsulas,
equivalente a 1 mg de flúor, a un matraz volumétrico
de 100 ml. Agregar 15 ml de agua y agitar vigorosa-
mente. Enjuagar las paredes del matraz con 15 ml de
agua y dejar en reposo durante 1O minutos. Diluir con
agua hasta 85 ml, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a
un pH de 10,4 ± O, 1 y diluir con a~ua hasta 100 ml.
Proceder según se indica en Solucion estándar, comen-
zando donde dice "Filtrar, desechando los primeros
15 ml del filtrado".
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: De conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L17
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la por-
ción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO, Método 7
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapón de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Análisis
Muestra: Cápsulas
Retirar el contenido de las Cápsulas, cortando para abrir
las Cápsulas. Mezclar y determinar el peso del conte-
nido. Transferir una cantidad del contenido, equiva-
lente a 3 mg de yodo, a un crisol de níquel. Agregar
5 g de carbonato de sodio, 5 ml de solución de hidró-
xido de sodio al 50% (p/v) y 1O ml de alcohol, procu-
rando humedecer toda la muestra. Calentar el crisol en
un baño de vapor hasta evaporar el alcohol, luego se-
car el crisol a 100º durante 30 minutos para evitar
salpicaduras durante el calentamiento subsiguiente.
USP 37
Transferir el crisol con su contenido a un horno calen-
tado a 500" y calentar el crisol durante 15 minutos.
[NOTA-Es necesario calentar a 500º para carbonizar
toda la materia orgánica presente; se puede usar una
temperatura más alta, si fuera necesario, para asegurar
la carbonización completa de toda la materia
orgánica.]
Enfriar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullición suave
durante 1O minutos. Filtrar la solución y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar ácido fosfó-
rico hasta que la solución sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de ácido fosfórico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solución a ebullición suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos más. Agre-
gar unos pocos cristales de ácido salicílico y enfriar la
solución a 20º. Agregar 1 ml de ácido fosfórico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dón SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = V X NA X F X lme X (Aw!W) X (100/L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(ml)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada
F = factor de corrección para convertir mg en µg,
1000 µg/ml
lme = miliequivalente de I; 21, 16 mg/meq
Aw = peso promedio del contenido de las Cápsulas
W = peso de la muestra de contenido de las
Cápsulas tomado
L = cantidad declarada de yodo (µg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• YODURO, Método 2
Análisis: Proceder según se indica en Métodos Automati-
zados de Análisis (16), Valoración de Yoduro.
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 7
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 µg/ml de hierro.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra ¡ara que contenga 5 µg/ml de hierro y omi-
tiendo e uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a 248,3 nm
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
USP 37
tándar en función de sus concentraciones, en ,ug/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en ~tg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO Método 7 omitiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 7.
Solución estándar de magnesio: Transferir 1 ,O g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 mL, disolver en 50 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solución con una concentración conocida de 1000 µg/
mL de magnesio.
Solución madre del estándar: 20 µg/mL de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 mL. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/mL de
magnesio.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 0,4 µg/mL de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesio a 285,2 nm
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO Método 7
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso a un matraz volumétrico de
1000 mL. Disolver en 20 mL de ácido nítrico, diluir con
ácido clorhídrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles 6297
una solución con una concentración de 1000 ,ug/mL de
manganeso.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 ,ug/mL de manganeso.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de manganeso y
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
manganeso a 279,5 nm
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en ,ug/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 7
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1 000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando, si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1 000 µg/mL de molibdeno.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 1 0,0 y 25,0 mL de
la Solución madre del estándar a sendos matraces volu-
métricos de 1 00 mL y agregar 5,0 mL de ácido percló-
rico a cada matraz. Calentar a ebullición suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 µg/mL de molibdeno.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe tomar un número de
Cápsulas o una porción del contenido de las Cápsulas
equivalente a 1000 ,ug de molibdeno y realizar dilucio-
nes apropiadas para obtener una concentración final de
1 O ,ug/mL de molibdeno, omitiendo la adición de Solu-
ción de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
6298 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 mL de
agua a 1O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4,98 mg/mL de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/mL de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: Transferir
40 mg de cloruro estannoso a un vaso de precipitados,
agregar 20 mL de solución de ácido clorhídrico 6,5 N y
calentar la solución hasta que el cloruro estannoso se
disuelva. Enfriar y diluir con agua hasta 100 ml.
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solución en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/mL de molibdeno en agua
Muestra: Retirar el contenido de un número contado
de Cápsulas, cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y
determinar el peso del contenido. Usar una cantidad
del contenido de las Cápsulas, equivalente a 40 µg de
molibdeno.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 465 nm
Celda: 1 cm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 mL de Solución estándar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 mL de ácido nítrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullición lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 mL de ácido perclórico, cu-
brir los vasos de precipitados con vidrios de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestión sea
completa, lo cual se indica cuando el líquido se torna
incoloro o amarillo pálido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar más agua hasta completar
50 mL en cada vaso de precipitados. Calentar a ebulli-
ción suave la solución acuosa durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 9otas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
USP 37
de amonio. Agregar 8,2 mL de ácido clorhídrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumétricos de
100 mL, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumétricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 mL de cada solución a sendos embudos de sepa-
ración. Awegar a cada embudo de separación 1,0 mL
de Solucion de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solución de
sulfato ferroso, 4,0 mL de Solución de tiocianato de po-
tasio, 1,5 mL de Solución de cloruro estannoso al 20% y
15,0 mL de alcohol amílico, y agitar los embudos de
separación durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solución de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separación y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las fases se separen y desechar las ca-
pas acuosas. Transferir la capa orgánica de cada em-
budo de separación a un tubo de centrífuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgánicas de la Solu-
ción estándar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(Vx Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancia de la Muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
V = volumen de la Solución estándar analizada,
2,0 mL
C5 = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (µg/mL)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• FÓSFORO, Método 7
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5: 100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/mL de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/mL de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de ácido sulfúrico por
100 mL de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/mL de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secados a 105º durante 2 horas y almacenados en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 mL de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 µg/mL de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas,
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 100 mg de fós-
foro, a 25 mL de ácido nítrico y digerir sobre una placa
de calentamiento durante 30 minutos. Agregar 15 ml
de ácido clorhídrico y continuar la digestión hasta que
cese la producción de humos marrones. Enfriar y trans-
ferir el contenido del matraz a un matraz volumétrico
de 500 mL con ayuda de pequeñas porciones de agua.
Diluir con agua a volumen. Transferir 10,0 mL de esta
solución a un matraz volumétrico de 100 mL y diluir
con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
USP 37
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 650 nm
Celda: 1 cm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 5,0 mL de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de agua a sendos matraces volumétricos de
25 mL para proporcionar el blanco. Agregar a cada
uno de los tres matraces 1,0 mL de Solución de molib-
dato de amonio, de Solución de hidroquinona y de Solu-
ción de bisulfito de sodio, y agitar por rotación suave
hasta mezclar. Diluir el contenido de cada matraz con
agua a volumen y dejar los matraces en reposo du-
rante 30 minutos. Determinar las absorbancias de las
soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Au/ As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
Cs = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fósforo (P)
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 100 µg/mL de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105º durante 2 horas, en agua
Solución madre del estándar: 1O µg/mL de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ<J/ml de potasio.
Solucion de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1,5 µg/ml de potasio y
omitiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles 6299
• SELENIO, Método 7
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 7.
Solución estándar de selenio: [PRECAUCIÓN-El selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 ml y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1 000
µg/ml de selenio.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones con concentraciones de 5,0; 10,0 y 25,0 µg/
ml de selenio.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas,
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 1000 µg de sele-
nio, a un matraz adecuado y agregar 12 ml de ácido
nítrico. [NOTA-Se puede variar el volumen de ácido ní-
trico para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar el matraz por rotación suave cuidadosa-
mente hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva por completo. Calentar a ebulli-
ción suave la solución durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 ml
de acido perclórico al matraz, calentar el matraz hasta
que aparezcan humos de ácido perclórico y agitar el
matraz por rotación suave para disipar los humos. Repe-
tir el calentamiento y la agitación por rotación suave
hasta que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Transferir el contenido del matraz a
un matraz volumétrico de 50 ml con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
selenio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2
Solución de ácido clorhídrico: Ácido clorhídrico diluido
con agua (1 en 1 O)
6300 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
Solución de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/ml de cdctato cJisódico y 25 mg/ml
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
luego agregar clorhidrato de hidroxilamina y diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separación de 250 ml y agregar
200 ml de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la solución
con tres porciones de 40 ml de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
marrón y cubrir la solución con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solución permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador.
Solución madre del estándar: [PRECAUCIÓN-El selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1 000 ml y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/ml de selenio. Diluir un volumen
de la solución con ácido clorhídrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentración de 2,0 µg/ml de selenio.
Solución estándar: Transferir 1 O ml de Solución madre
del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agregar
1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución de ácido
clorhídrico y diluir con agua hasta 20 ml.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas,
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 20 µg de selenio,
a un matraz adecuado. Agregar 1 O ml de ácido nítrico
y entibiar suavemente sobre una placa de calenta-
miento. Continuar calentando hasta que la reacción ini-
cial de ácido nítrico haya desaparecido y luego agregar
3 ml d,e ácido perclórico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a que la
reacción del ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido percló-
rico o hasta que la digestión comience a tornarse os-
cura. Agregar 0,5 ml de ácido nítrico y continuar el
calentamiento, agregando cantidades adicionales de
ácido nítrico si se observa un oscurecimiento mayor.
Digerir durante 1 O minutos después de la primera apa-
rición de humos de ácido perclórico o hasta que la
digestión se torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar
2,5 ml de Solución de ácido clorhídrico y devolver el
matraz a la placa de calentamiento para expulsar los
residuos de ácido nítrico. Calentar la mezcla durante 3
minutos después de que comience a hervir. Enfriar el
matraz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV
Longitud de onda analítica: 380 nm
Celda: 1 cm
Blanco: 1 ml de ácido perclórico y 1 ml de Solución
de ácido clorhídrico, diluido con agua hasta 20 ml
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco, según se indica a continuación. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 ± O, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotación suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50 y equilibrar durante 30 minutos, procurando cu-
USP 37
brir los matl"aces para protegerlos de la luz. Enfriar a
temperatura ambiente y transferir el contenido de
cada matraz a sendos embudos de separación. Transfe-
ri.r, 10,0 ml de ciclohexano a cada embudo de separa-
c1on y extraer vigorosamente durante 1 minuto. Dese-
char la capa acuosa. Transferir la capa de ciclohexano
a un tubo de centrífuga y centrifugar a 1000 rpm du-
rante 1 minuto para eliminar el agua remanente. De-
terminar las absorbancias de las soluciones a partir de
las Muestras contra la solución a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(V x Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solución muestra
A1 = absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar,
10 ml
C1 = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra (µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 7
Solución estándar de cinc: 1 000 µg/ml de cinc, a par-
tir de óxido de cinc en ácido clorhídrico 5 M (3,89 mg/
ml) y diluida con agua a volumen final. [NOTA-Disol-
ver en ácido clorhídrico 5 M, entibiando, si fuera nece-
sario, enfriar y luego diluir a volumen final.]
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc, diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
ml de cinc.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/ml de cinc y omi-
tiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 213,8 nm
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la gráfica así obtenida,
determinar la concentración, C, en ¡1g/ml, de cinc en
la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
c = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• BORO, NÍQUEL, ESTAÑO y VANADIO, Método 1; CALc19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FOSFORO
y CINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1 ), agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9), agregando un volumen de So-
lución madre de agua regia a dos volúmenes de agua.
Diluir con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1 000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% y 1000 mg/L de escandia en solución de ácido ní-
trico al 5% y Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales
de interés en la solución.] Usando soluciones estándar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solución de ácido nítrico al 5%, pi-
petear y transferir la cantidad apropiada de solución es-
tándar de elementos a un matraz volumétrico, y diluir
con solución de ácido nítrico al 5% hasta obtener una
solución con concentraciones finales de aproximada-
mente 1000 mg/L de calcio, 100 mg/L de cobre,
250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 100 mg/L
de manganeso, 800 mg/L de fósforo y 250 mg/L de
cinc.
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%,
pipetear y transferir la cantidad apropiada de solución
estándar de elementos a un matraz volumétrico y diluir
con solución de ácido clorhídrico al 20% hasta obtener
una solución con concentraciones finales de aproxima-
damente 200 mg/L de boro y 100 mg/L de cromo, de
molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño y de
vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 1 y Solución madre del estándar 2,
según se requiera, en Diluyente, para preparar una curva
de calibración de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra: Pesar, luego transferir 5 Cápsulas a
un matraz volumétrico de 250 mL y calentar suave-
mente sobre una placa de calentamiento hasta que el
contenido empiece a liberarse. Agregar, cuidadosa-
mente, 25 mL de Solución madre de agua regia en incre-
mentos de 5 mL y agitar por rotación suave. Calentar,
continuar agitando por rotación suave hasta que las
Cápsulas se disuelvan en el ácido, retirar inmediata-
mente de la fuente de calor y agregar 150 mL de agua.
Enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar aproximada-
mente 30 mL en un tubo de centrífuga usando un filtro
de nailon para jeringa con un tamaño de poro de 5
µm. Realizar los ajustes necesarios usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado para medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6301
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta, según se indica en el Análisis.J
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en las
Soluciones estándar y la Solución muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado, usando Di-
luyente como blanco. Graficar la emisión de las Solucio-
nes estándar en función de las concentraciones, en
mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta que
mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir de la
gráfica así obtenida, determinar la concentración, C,
en mg/L, de cada mineral de interés en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral tomado:
Resultado = C x (V/W) x F x (Cw/L) x 100
C = concentración medida de la Solución muestra
(mg/mL)
V =volumen de la Solución muestra (L)
W =peso de la muestra (mg)
F factor de dilución de la Solución muestra
=
Cw =peso promedio de las Cápsulas (mg)
L cantidad declarada por Cápsula (mg)
=
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), níquel (Ni), se-
lenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040):Cumplen con los
requisitos de Disolución.
• VARIACIÓN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3x102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO:• La etiqueta indica que el producto es Cáp-
sulas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales. La eti-
' Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan
existido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspon-
dientes, siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad
USP para Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI)
para vitaminas se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en
las etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan
en términos de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A = O, 3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o
0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de reti-
no! (3,3 Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de
di-alfa tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de d-
aifa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de succi-
nato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
6302 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
queta también indica la cantidad de cada vitamina y mi-
neral por unidad de dosificación y, cuando sea necesario,
la forma química de vitamina presente, e indica además
la forma salina del mineral usado como fuente de cada
elemento. Cuando el producto contiene vitamina E, la
etiqueta indica si se trata de la forma do di. Cuando se
proporciona más de un método de valoración para una
vitamina o mineral en particular, el etiquetado indica el
método de valoración con el que cumple el producto
únicamente si no se usa el Método 1.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Ácido de Alfa Tocoferilo USP
ER Beta Caroteno USP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Palmitato de Retinilo USP
ER Fluoruro de Sodio USP
ER Acetato de Retinilo USP
Vitaminas Oleosolubles con Minerales,
Solución Oral
DEFINICIÓN
La Solución Oral de Vitaminas Oleosolubles con Minerales
contiene dos o más de las siguientes vitaminas oleosolu-
bles: Vitamina A, como retinol o ésteres de retino! en
forma de acetato de retinilo o palmitato de retinilo; Vita-
mina D, como ergocalciferol (Vitamina D2) o colecalciferol
(Vitamina D3); Vitamina E, como alfa tocoferol, acetato de
alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa tocoferilo; Fitona-
diona (Vitamina K1); beta caroteno; y uno o más minera-
les derivados de sustancias generalmente reconocidas
como seguras, que presentan uno o más de los siguientes
elementos en su forma ionizable: cromo, flúor, yodo,
hierro, magnesio, manganeso, molibdeno y cinc. Con-
tiene no menos de 90,0% y no más de 150,0% de las
cantidades declaradas de vitamina A, como equivalente
de retino! (C20H300); vitamina D, como colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C28H440); vitamina E, como
alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
(C31 Hs203), o succinato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs40s);
fitonadiona (C31 H4602); y beta caroteno (C40Hs6); no me-
nos de 90,0% y no más de 160,0% de las cantidades
declaradas de cromo (Cr), flúor (F), yodo (1) y molibdeno
(Mo); y no menos de 90,0% y no más de 125,0% de las
cantidades declaradas de hierro (Fe), magnesio (Mg),
manganeso (Mn) y cinc (Zn).
CONTENIDO
•VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar 1: 13 µg/mL de retino!, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solución estándar 2: 13 µg/mL de retinol, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución estándar 1 y Solución estándar 2.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 3,25 mg de
retinol, a un embudo de separación que contenga
·1 O mL de agua y 20 mL de alcohol deshidratado. Agre-
gar 1 00 mL de n-hexano, tapar y agitar durante 1 mi-
nuto. Dejar que las capas se separen, drenar la capa
acuosa en otro embudo de separación y repetir la ex-
tracción con 100 mL de n-hexano. Desechar la capa
USP 37
acuosa y combinar los extractos de hexano. Lavar los
extractos combinados con 25 mL de agua, dejar que las
capas se separen y desechar la capa acuosa. Filtrar la
capa de hexano lavada a través de sulfato de sodio an-
hidro en un matraz volumétrico de 250 ml. Enjuagar el
embudo y el sulfato de sodio con n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Diluir
los extractos en el matraz volumétrico con n-hexano a
volumen para obtener una solución con una concentra-
ción de 1 3 µg/mL de vitamina A como retinol
(C20H300).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar 1 o Solución estándar 2 y
Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20H300), en la porción de Solu-
ción Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (CslCu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
r5 = área del pico de la forna todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
correspondiente
Cs = concentración de retinol en la Solución
estándar correspondiente (µg/mL)
Cu = concentración nominal de Vitamina A, como
retinol, en la Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retino!
(C20H300)
•VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actmica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99: 1)
Solución estándar: 2 µg/mL de ER Colecalciferol USP o
ER Er~ocalciferol USP en n-hexano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) en su precursor correspondiente.
Solución madre de la muestra: Usando un volumen
medido con exactitud de Solución Oral, equivalente a
5,0 mg de colecalciferol o ergocalciferol, proceder se-
gún se indica en Solución muestra, en Vitamina A, para
obtener una solución con una concentración de 20 µg/
mL de colecalciferol o ergocalciferol en n-hexano.
Solución muestra: Transferir 5,0 mL de Solución madre
de la muestra a un recipiente con tapa de rosca con
recubrimiento interno de teflón. Calentar, agitando
constantemente, durante 1 hora en un baño de agua
mantenido a 60º para obtener una solución que con-
tenga vitamina D (colecalciferol o ergocalciferol) y su
precursor correspondiente. Enfriar y diuir con n-hexano
hasta obtener una solución que contenga 2 µg/mL de
colecalciferol o ergocalciferol.
USP 37
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviación estandar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cole-
calciferol (C21H440) o ergocalciferol (C2sH440) en la
porción de Solución Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en fa Solución muestra,
1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H440)
o ergocalciferol (C2sH440)
• VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 100) en
agua
Fase móvil: Metano! y Solución A (19:1)
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
métrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentración de 2 mg/ml de alfa tocofe-
rol, acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6303
(Ci1 Hs20i) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(CiiHs40s) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma pertinente de
vitamina E de la Solución muestra
ru = área del pico de la forma pertinente de
vitamina E de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solución
muestra (m~/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• FITONADIONA (VITAMINA K,)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metano! y agua (19:1)
Solución madre del estándar: 200 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido, si fuera necesario.
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metano!
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metano!, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metano! a
volumen.]
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
métrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentración de 20 µg/ml de
fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 n m
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (Ci1H4602) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración
nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (Ci1 H4602)
6304 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Fase móvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumétrico de 1 L y disolver con 20 mL de
2-propanol. Agregar 0,2 mL de N-etildiisopropilamina,
25 mL de solución de acetato de amonio al 0,2%,
455 mL de acetonitrilo y aproximadamente 450 mL de
metano!. Dejar que la solución alcance la temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen.
Diluyente: 50 µg/mL de butil hidroxitolueno en alcohol
Solución de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumétrico de 50 ml. Agregar 1 mL de agua, 4 mL
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente, pasar la suspensión a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm y usar
el filtrado transparente.
Solución madre del estándar: 60 µg/mL de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solución estándar A: Transferir 5,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL,
agregar 5,0 mL de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Determinar la concentración de la Solución estándar A a
partir de la concentración de la Solución estándar B,
según se describe a continuación.
Solución estándar B: Transferir 5,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 mL y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución estándar B
Calcular la concentración de beta caroteno total
(mg/mL) como la forma todo trans de beta caroteno
(C40Hs6) en la Solución estándar B. [NOTA-La concen-
tración de la Solución estándar B es igual a la concen-
tración de la Solución estándar A.]
Resultado = A/F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solución estándar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
el residuo en una mezcla de cloruro de metileno y Dilu-
yente (1 :1 ), y diluir con la misma mezcla hasta obtener
una concentración de 3 µg/ml de beta caroteno. Pasar
a través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm, si fuera necesario.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
tándar A
[NOTA-Los tiempos de retención relativos aproximados
de los componentes en la Solución de aptitud del sis-
tema se presentan en la Tabla 7.]
USP 37
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retención Respuesta
Nombre Relativo Relativa
Forma todo trans de alfa 0,93 1,1
ca rote no
Forma todo trans de be- 1,00 1
ta caroteno
9-cis-Beta caroteno 1 07 1
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolución: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno; y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución estándar A
Cs = concentración de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A, según se
determina mediante el procedimiento
espectrométrico
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
• CROMO
Solución estándar de cromo: 1000 µg/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secado a
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1O µg/ml de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 ml de Solu-
ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
de 100 ml, y transferir 15,0 y 20,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/ml
de cromo.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral para obtener una solución equi-
valente a 2,5 µg/ml de cromo en ácido clorhídrico
0,125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
USP 37
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analítica: 357,9 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml de
cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de cromo en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• FLUORURO
[NOTA-Usar recipientes de plástico durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido ascórbico: 70 mg/ml de ácido as-
córbico en agua
Fase móvil: Alcohol, agua y ácido sulfúrico 1 N
(50:449:1)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ9/ml de fluoruro.
Solucion estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar 2 ml de Solución de ácido ascórbico, 1 O ml de al-
cohol y aproximadamente 70 ml de agua, y mezclar.
Ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 4,25 ±
0,05. Diluir con agua a volumen y mezclar para obtener
una solución de fluoruro de 5 µg/ml.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 0,5 mg de
fluoruro, a un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar
1 gota de ácido clorhídrico, 1 O ml de alcohol y aproxi-
madamente 75 ml de agua, y mezclar. Ajustar con hi-
dróxido de sodio 1 N a un pH de 4,25 ± 0,05. Diluir
con agua a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: De conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L17
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L17
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la por-
ción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de fluoruro de la Solución
muestra
rs = área del pico de fluoruro de la Solución
estándar
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6305
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (~tg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO, Método 7
Fase móvil: Disolver 5, 15 g de bromuro de tetrabutila-
monio en 320 ml de acetonitrilo. Diluir con agua hasta
2000 ml.
Solución de aptitud del sistema: Transferir O, 1 3 g de
yoduro de potasio y 0,5 g de yodato de potasio a un
matraz volumétrico de 100 ml. Disolver en Fase móvil,
usando ultrasonido si fuera necesario, diluir con Fase
móvil a volumen y mezclar. Transferir 1,0 ml de esta
solución a un matraz volumétrico de 100 ml, diluir con
Fase móvil a volumen y mezclar. Transferir 25,0 ml de
esta solución a un matraz volumétrico de 100 ml y di-
luir con Fase móvil a volumen.
Solución madre del estándar: 1,3 mg/ml de yoduro
de potasio en Fase móvil. Esta solución tiene una con-
centración 1 mg/ml de yoduro.
Solución estándar: 2,5 µg/ml de yoduro, a partir de
Solución madre del estándar en Fase móvil
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral para obtener una solución con
una concentración de 2,5 µg/ml de yodo en Fase móvil.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 30 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para yodato
y yoduro son aproximadamente 0,32 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,5 entre yodato y yoduro,
Solución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de yoduro, Solución estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de yoduro de la Solución muestra
r5 = área del pico de yoduro de la Solución
estándar
C5 = concentración de yoduro en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de yodo en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• YODURO, Método 2
Análisis: Proceder según se indica en Métodos Automati-
zados de Análisis (16), Valoración de Yoduro.
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en ácido clorhídrico 6 N y diluir con
agua a volumen.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 1 00 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a
6306 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 µg/ml de hierro.
Solución muestra: 6 µg/ml de hierro, a partir de Solu-
ción Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analítica: 248,3 nm
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de hierro en la Solución muestra
a partir de la gráfica (µg/ml)
Cu = concentración nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,00 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 50 ml de ácido clorhídrico 6 N y
diluir con agua a volumen.
Solución madre del estándar: 20 µg/ml de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio en ácido clor-
hídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 y
15,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir con ácido clorhídrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/ml de magnesio.
Solución muestra: 2,5 µg/ml de magnesio, a partir de
Solución Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 285,2 nm
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de magnesio en la Solución
muestra a partir de la gráfica (µg/ml)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
USP 37
• MANGANESO
Solución estándar de manganeso: Transferir 1,0 g de
manganeso a un matraz volumétrico de 1000 ml. Di-
solver en 20 ml de ácido nítrico y diluir con ácido clor-
hídrico 6 N a volumen.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso en ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 µg/ml de manganeso.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de la Solución Oral para obtener 1,5 µg/ml de
manganeso en ácido clorhídrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 279,5 nm
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de manganeso en la Solución
muestra a partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno en
agua
Soluciones estándar: Transferir 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Agregar ácido clorhídrico
O, 125 N a volumen y mezclar para obtener soluciones
con concentraciones conocidas de aproximadamente
0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 3,0 µg/mL de molibdeno.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral hasta obtener 1,5 µg/mL de mo-
libdeno, a partir de Solución Oral, en ácido clorhídrico
0,125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 313,3 nm
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Qxido nitroso-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
USP 37
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de molibdeno en la Solución
muestra a partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• CINC
Solución estándar de cinc: Transferir 311 mg de óxido
de cinc a un matraz volumétrico de 250 mL y agregar
80 mL de ácido clorhídrico 6 N, entibiando, si fuera ne-
cesario hasta disolver. Enfriar, diluir con agua a volumen
y mezclar para obtener una solución con una concen-
tración conocida de 1000 µg/mL de cinc.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc en ácido clorhídrico
0,125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
mL de cinc.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral hasta obtener 1,5 µg/mL de cinc
en ácido clorhídrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 21 3,8 nm
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la gráfica así obtenida,
determinar la concentración, C, en µg/mL, de cinc en
la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de cinc en la Solución muestra a
partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
OTROS COMPONENTES
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método I (611) (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada de
C2HsOH
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/mL, y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de ~ x 102 ufc/ml.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022):
Cumple con los requisitos de las pruebas para determinar
la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6307
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, bajo gas inerte o con
una cámara gaseosa superior mínima.
• ETIQUETADO:' La etiqueta indica que el producto es Solu-
ción Oral de Vitaminas Oleosolubles con Minerales. La
etiqueta indica la cantidad de cada vitamina y mineral en
un volumen dado de Solución Oral y, cuando sea necesa-
rio, la forma química de vitamina presente e indica ade-
más la forma salina del mineral usado como la fuente de
cada elemento. Cuando el producto contiene vitamina E,
la etiqueta indica si se trata de la forma do di. Cuando
se proporciona más de un método de valoración para un
mineral en particular, el etiquetado indica el método de
valoración con el que cumple el producto, únicamente si
no se usa el Método 1.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de,Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP
ER Beta Caroteno USP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Acetato de Retinilo USP
ER Palmitato de Retinilo USP
ER Fluoruro de Sodio USP
Vitaminas Oleosolubles con Minerales,
Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales contie-
nen dos o más de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, como retinol o ésteres de retino! en forma de
acetato de retinilo o palmitato de retinilo; Vitamina D,
como ergocalciferol (Vitamina D2) o colecalciferol (Vita-
mina D3); Vitamina E, como alfa tocoferol, acetato de alfa
tocoferilo o succinato ácido de alfa tocoferilo; Fitonadiona
(Vitamina Ki); beta caroteno; y uno o más minerales deri-
vados de sustancias generalmente reconocidas como se-
guras, que proporcionan uno o más de los siguientes ele-
mentos en su forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre,
flúor, yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, ní-
quel, fósforo, potasio, selenio, estaño, vanadio y cinc. Las
Tabletas contienen no menos de 90,0% y no más de
165,0% de las cantidades declaradas de vitamina A, como
equivalente de retinol (C20H300); vitamina D, como cole-
calciferol (C21H440) o ergocalciferol (C2sH440); vitamina E,
como alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
(C31 Hs203), o succinato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs40s);
' Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las etiquetas
de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en términos
de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las Unidades
USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP de Vitamina
A= 0,3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o 0,344 µg de todo
trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg de todo trans
palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de retinol (3,3 Unida-
des USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de beta caroteno
= 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vitamina D =
0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1
antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de di-alfa
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco-
ferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de succinato
ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E. En
términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa toco-
ferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg de di-
alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y 1 mg de
succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
6308 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
fitonadiona (Ci1H4,,02); y beta caroteno (C40Hs6); no me-
nos de 90,0% y no más de 125,0% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P), potasio (K) y cinc
(Zn); y no menos de 90,0% y no más de 160,0% de las
cantidades declaradas de boro (B), cromo (Cr), flúor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se), estaño
(Sn) y vanadio (V).
Pueden contener otras sustancias agregadas declaradas ge-
neralmente reconocidas como seguras, en cantidades
in objeta bles.
CONTENIDO
•VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar 1: 1 3 µg/ml de retinol, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solución estándar 2: 13 µg/ml de retinol, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución estándar 7 y Solución estándar 2.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Agregar 15 ml de agua a una porción del
polvo, equivalente a 5 Tabletas, y someter a ultrasonido
durante 5 minutos. Agregar 15 ml de n-hexano y agitar
durante 15 minutos en un baño de agua mantenido a
60º. Agregar 1O ml de dimetil sulfóxido y agitar du-
rante 30 minutos adicionales en un baño de agua man-
tenido a 60º. Centrifugar a 3000 rpm durante 1O minu-
tos y transferir la capa de hexano con una pipeta a un
matraz volumétrico de 100 ml. Agregar 15 ml de n-
hexano a la capa de dimetil sulfóxido, agitar minuciosa-
mente durante 5 minutos y transferir la capa de hexano
con una pipeta a un matraz volumétrico de 100 ml.
Repetir esta extracción con tres porciones adicionales de
15 ml de n-hexano. Diluir los extractos en el matraz
volumétrico con n-hexano a volumen. Diluir adicional-
mente esta solución con n-hexano hasta obtener una
solución con una concentración equivalente a 13 µg/ml
de retino! (C20H30Ü).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar 7 o Solución estándar 2 y
Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retino! (C20H30Ü), en la porción de Ta-
bletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forna todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
correspondiente
Cs = concentración de retinol en la Solución
estándar correspondiente (µg/ml)
Cu = concentración nominal de Vitamina A, como
retinol, en la Solución muestra (µg/ml)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retinol
(C20H ioO)
•VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actínica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Er~ocalciferol USP en n-hexano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vacío a temperatura ambiente hasta
obtener una concentración de 2 µg/ml de colecalciferol
o ergocalciferol.
Sistema cromatowáfico
(Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 1 5 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviación estandar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cole-
calciferol (C21H44Ü) o ergocalciferol (C28H440) en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en la Solución muestra,
1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Q)
• VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico en agua (1 en
100)
Fase móvil: Metanol y Solución A (19:1)
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
USP 37
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
métrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentración de 2 mg/ml de alfa tocofe-
rol, acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromato!Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C29HsoÜ2), acetato de alfa tocoferilo
(C31 Hs2Ü3) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(C33Hs4Üs) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solución
muestra (m9/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• FITONADIONA (VITAMINA K1)
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (19: 1)
Solución madre del estándar: 200 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metanol
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metano!, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metano! a
volumen.]
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metanol a un matraz volu-
métrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentración de 20 µg/ml de
fitonadiona.
Sistema cromatowáfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6309
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (Ci1 H4602) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru!rs) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C11H4602)
• BETA (AROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica.]
Fase móvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumétrico de 1 L y disolver con 20 ml de
2-propanol. Agregar 0,2 ml de N-etildiisopropilamina,
25 ml de solución de acetato de amonio al 0,2%,
455 ml de acetonitrilo y aproximadamente 450 ml de
metanol. Dejar que la solución alcance la temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen.
Diluyente: 50 µg/ml de butil hidroxitolueno en alcohol
Solución de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumétrico de 50 ml. Agregar 1 ml de agua, 4 ml
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente, pasar la suspensión a través de un filtro de
membrana con un tamaño de poro de 0,45 µm y usar
el filtrado transparente.
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solución estándar A: Transferir 5,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 ml,
agregar 5,0 ml de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Determinar la concentración de la Solución estándar A a
partir de la concentración de la Solución estándar B,
según se indica a continuación.
Solución estándar B: Transferir 5,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a un matraz volumétrico de 100 ml y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Longitud de onda analítica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución estándar B
Calcular la concentración de beta caroteno total
(mg/ml) como la forma todo trans de beta caroteno
(C40Hs6) en la Solución estándar B. [NOTA-La concen-
tración de la Solución estándar B es igual a la concen-
tración de la Solución estándar A.]
Resultado= A/F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solución estándar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vacío a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
631 O Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
el residuo en una mezcla de cloruro de metileno y Dilu-
yente (1 :1 ), y diluir con la misma mezcla hasta obtener
una concentración de 3 µg/ml de beta caroteno. Pasar
a través de un filtro de membrana con un tamaño de
poro de 0,45 µm, si fuera necesario.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 µm
Temperatura de la columna: 30º
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución es-
tándar A
Los tiempos de retención relativos aproximados de los
componentes en la Solución de aptitud del sistema se
presentan en la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retención Respuesta
Nombre Relativo Relativa
Forma todo trans de alfa caroteno o 93 11
Forma todo trans de beta caroteno 1 00 1 agregando 1 ml de Solución de cloruro de lantano por
9-cis-Beta caroteno 1 07 1 100 ml del volumen final.
13-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solución de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el ER Aptitud
del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolución: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno; y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solución estándar A
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lución estándar A
Análisis
Muestras: Solución estándar A y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solución estándar A
Cs = concentración de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solución estándar A, según se
• CROMO, Método 1
determina mediante el procedimiento
espectrométrico
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
• CALCIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico 0, 125
N ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
Solución estándar de calcio: 400 µg/ml de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cados a 300º durante 3 horas y enfriados en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 ml de ácido clorhídrico 1 N.
Calentar a ebullición hasta expulsar el dióxido de car-
bono y diluir con agua hasta 1000 ml.
USP 37
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 ml de Solución de cloruro de lantano y diluir
con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener
concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/ml de
calcio.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana. Calentar el
crisol en una mufla mantenida a 550º durante 6-12
horas y enfriar. Agregar 60 ml de ácido clorhídrico y
calentar a ebullición suave sobre una placa de calenta-
miento o un baño de vapor durante 30 minutos, enjua-
gando intermitentemente la superficie interna del crisol
con ácido clorhídrico 6 N. Enfriar y transferir cuantitati-
vamente el contenido del crisol a un matraz volumé-
trico de 100 ml. Enjuagar el crisol con porciones pe-
queñas de ácido clorhídrico 6 N y agregar los enjuagues
al matraz. Diluir con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 ml del filtrado. Diluir esta solu-
ción cuantitativamente con ácido clorhídrico O, 125 N
para obtener una concentración de 2 µg/ml de calcio,
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,7 nm
Lámpara~ Calcio, de cátodo hueco
Llama: Qxido nitroso-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solución de cloruro de lantano por 100 ml
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
calcio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de calcio
(Ca) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ$)/ml)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
Solución estándar de cromo: 1000 µg/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secados a
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 ml de Solu-
de 100 ml, y transferir 15,0 y 20,0 ml de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/ml
de cromo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
USP 37
muestra ¡ara que contenga 2,5 µg/ml de cromo y omi-
tiendo e uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a 357,9 nm
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 1
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% y diluir con una solución de ácido
nítrico al 1% hasta 1000 ml. Esta solución contiene
1000 .flg/ml de cobre.
Solucion madre del estándar: 100 µg/ml de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 200 ml. Diluir con ácido clorhídrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/ml de cobre.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra ¡ara que contenga 2 µg/ml de cobre y omi-
tiendo e uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cobre
(Cu) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
c = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/ml)
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6311
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORURO Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua contenida en un
matraz volumétrico de 1000 ml. Dejar que la solución
se equilibre a temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de ácido acético
a un pH de 7,0.
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumétrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de ácido perclórico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio en agua, previamente secados a 100º durante 4
horas y enfriados en un desecador
Solucion madre intermedia A: 100 µg/ml de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de fluoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1 O µg/ml de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de f/uoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 ml de
Solución madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 ml de Solución
madre intermedia A a cinco matraces volumétricos de
100 ml distintos. Agregar a cada matraz 10,0 ml de
ácido clorhídrico 1 N, 25 ml de Solución de acetato de
sodio 3 M y 25,0 ml de Solución de citrato de sodio. Di-
luir el contenido de cada matraz con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y
10,0 µg/ml de fluoruro.
Solución muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 200 µg de fluo-
ruro, a un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar
10,0 ml de ácido clorhídrico 1 N, 25,0 ml de Solución
de acetato de sodio 3 M y 25,0 ml de Solución de citrato
de sodio, y diluir con agua a volumen.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir 50,0 ml de las Soluciones estándar y de la So-
lución muestra a sendos vasos de precipitados de plás-
tico, que contengan una barra mezcladora recubierta
de plástico. Medir los potenciales (ver pH (791 )), en
mV, de las Soluciones estándar y la Solución muestra,
con un medidor de pH capaz de una reproducibilidad
mínima de ± 0,2 mV y equipado con un electrodo
indicador específico para ión fluoruro y un electrodo
de referencia de calomel. [NOTA-Al tomar las medicio-
nes, sumergir los electrodos en la solución, mezclar en
un agitador magnético con su parte superior aislada
hasta que se logre el equilibrio (1-2 minutos) y regis-
trar el potenciaf. Enjuagar y secar los electrodos entre
mediciones, procurando evitar que se dañe el cristal
del electrodo específico para ión fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/ml, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de respuesta
estándar así obtenida y el potencial medido de la Solu-
ción muestra, determinar la concentración, C, en
µg/ml, de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de flúor
(F) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
6312 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
• FLUORURO Metodo 2
[NOTA-Usar recipientes de plástico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.J
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1 000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulft:irico O, 1 N y agua
(20:5:1 75)
Solución madre del estándar: 220 ~tg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 ~t_g/ml de fluoruro.
Solucion estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción de fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra de la siguiente
manera. Usando vacío a una presión que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con un volumen
de columna de metano! seguido de un volumen de co-
lumna de Soluoón amortiguadora de pH 7O, O. No dejar
que la parte superior de la columna se seque. Si la
parte superior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.] Transferir 10,0 ml de Solución madre del es-
tándar a un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar
75 ml de agua y ajustar con hidróxido de sodio O, 1 N
a un pH de 10,4 ± O, 1. Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumétrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidró-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
ción amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porción de esta solucion a través de una columna de
extracción de fase sólida de 3 mL, que contenga relleno
L1, la cual se conecta a través de un adaptador a una
segunda columna de extracción de fase sólida que con-
tenga relleno de intercambio catiónico fuerte de sulfo-
nilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato y re-
coger el resto del eluato en un matraz adecuado para
inyectar en el cromatógrafo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a 1 mg de flúor, a 15 ml de
agua y agitar vigorosamente. Enjuagar las paredes del
matraz con 15 ml de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos. Diluir con agua hasta 85 ml, ajustar con
hidróxido de sodio 1 N a un pH de 1 0,4 ± O, 1 y diluir
con agua hasta 100 ml. Proceder según se indica en
Solución estándar, comenzando donde dice "Filtrar, des-
echando los primeros 15 ml del filtrado".
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: De conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fiuoruro. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la por-
ción de Tabletas tomada:
Resultado= (r11/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
r1 = área del pico de la Soluoón estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (pg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (pg/ml)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0'Yo-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODURO, Metodo 7
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapón de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Análisis
Muestra: Tabletas
Transferir una cantidad de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a 3 mg de yoduro, a un crisol de
níquel. Agregar 5 g de carbonato de sodio, 5 ml de
solución de hidróxido de sodio al 50% (p/v) y 1 O ml
de alcohol, procurando humedecer toda la muestra.
Calentar el crisol en un baño de vapor hasta evaporar
el alcohol, luego secar el crisol a 100º durante 30 mi-
nutos para evitar salpicaduras durante el calentamiento
subsiguiente. Transferir el crisol con su contenido a un
horno calentado a 500º y calentar el crisol durante 15
minutos. [NOTA-Es necesario calentar a 500º para car-
bonizar toda la materia orgánica presente; se puede
usar una temperatura más alta, si fuera necesario, para
asegurar la carbonización completa de toda la materia
orgánica.]
Enfriar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullición suave
durante 1 O minutos. Filtrar. la solución y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar ácido fosfó-
rico hasta que la solución sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de ácido fosfórico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solución a ebullición suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos más. Agre-
gar unos pocos cristales de ácido salicílico y enfriar la
solución a 20º. Agregar 1 ml de ácido fosfórico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dón SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = V x NA x F x lme x (Aw! W) X (100/ L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(ml)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada
F = factor de corrección para convertir mg en pg,
1000 pg/ml
lrne = miliequivalente de 1; 21, 16 mg/meq
Aw = peso promedio de las Tabletas
W = peso de la porción de Tabletas tomado
L = cantidad declarada de yodo (pg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• YODURO, Método 2
Análisis: Proceder según se indica en Métodos Automati-
zados de Análisis (1 6), Valoración de Yoduro.
Criterios de aceptación: 90,0%- 160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 7
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 ~tg/ml de hierro.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
USP 37
muestra para que contenga 5 µg/mL de hierro y omi-
tiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a 248,3 nm
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO Método 7
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 7.
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1000 mL, disolver en 50 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen, y mezclar para obtener una
solución con una concentración conocida de 1000 µg/
mL de magnesio.
Solución madre del estándar: 20 µg/mL de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/mL de
magnesio.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 0,4 µg/mL de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesio a 285,2 nm
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 631 3
C = concentración medida de magnesio en la
Solucion muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO Método 1
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso a un matraz volumétrico de
1 000 ml. Disolver en 20 mL de ácido nítrico, diluir con
ácido clorhídrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solución con una concentración de 1000 µg/mL de
manganeso.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 µg/mL de manganeso.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de manganeso y
omitiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
manganeso a 279,5 nm
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 1
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando, si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/mL de molibdeno.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 10,0 y 25,0 ml de
la Solución madre del estándar a sendos matraces volu-
métricos de 100 mL y agregar 5,0 mL de ácido percló-
rico a cada matraz. Calentar a ebullición suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 1 0,0 y
25,0 µg/mL de molibdeno.
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente a 1 000 µg de molib-
6314 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
cieno, a un matraz adecuado y agregar 12 ml de ácido
nítrico. [NOTA-Se puede variar el volumen de ácido ní-
trico para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar cuidadosamente el matraz por rotación
suave para dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva completamente. Calentar la solu-
ción a ebullición suave durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar con cuidado 8 ml de
ácido perclórico, calentar hasta que aparezcan humos
de ácido perclórico y agitar el matraz por rotación
suave hasta disipar los humos. Repetir el calentamiento
y la agitación por rotación suave hasta que los humos
aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir cuantitativamente el contenido del matraz a
un matraz volumétrico de 100 ml con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/ml,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4,98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: Transferir
40 mg de cloruro estannoso a un vaso de precipitados,
agregar 20 ml de solución de ácido clorhídrico 6,5 N y
calentar la solución hasta que el cloruro estannoso se
disuelva. Enfriar y diluir con agua hasta 100 ml.
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solución en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/ml de molibdeno en agua
Muestra: Una porción de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a 40 µg de molibdeno
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 465 nm
Celda: 1 cm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solución estándar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
USP 37
20 ml de ácido nítrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullición lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 ml de ácido perclórico, cu-
brir los vasos de precipitados con un vidrio de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestión sea
completa, lo cual se indica cuando el líquido se torna
incoloro o amarillo pálido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar más agua hasta completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar a ebulli-
ción suave la solución acuosa durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 gotas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
de amonio. Agregar 8,2 ml de ácido clorhídrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumétricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumétricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solución a embudos de separación.
Agregar a cada embudo de separación 1,0 ml de Solu-
ción de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solución de sulfato
ferroso, 4,0 ml de Solución de tiocianato de potasio,
1,5 ml de Solución de cloruro estannoso al 20% y
15,0 ml de alcohol amílico, y agitar los embudos de
separación durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solución de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separación y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las fases se separen y desechar las ca-
pas acuosas. Transferir la capa orgánica de cada em-
budo de separación a un tubo de centrífuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgánicas de la Solu-
ción estándar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(Vx Cs)/Mu] x 100
Au = absorbancia de la Muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
V = volumen de la Solución estándar analizada,
2,0 ml
Cs = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• FÓSFORO, Método 7
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5: 100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de ácido sulfúrico por
100 ml de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secados a 1 05º durante 2 horas y almacenados en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 ,ug/ml de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
USP 37
Solución muestra: [NOTA-Reducir a polvo fino y pesar
un número contado de Tabletas.] Transferir una porción
del polvo, equivalente a 100 mg de fósforo, a 25 mL de
ácido nítrico y digerir sobre una placa de calentamiento
durante 30 minutos. Agregar 15 mL de ácido clorhí-
drico y continuar la digestión hasta que cese la produc-
ción de humos marrones. Enfriar y transferir el conte-
nido del matraz a un matraz volumétrico de 500 mL
con ayuda de pequeñas porciones de agua. Diluir con
agua a volumen. Transferir 1 0,0 mL de esta solución a
un matraz volumétrico de 100 mL y diluir con agua a
volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 650 nm
Celda: 1 cm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 5,0 mL de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de agua a sendos matraces volumétricos de
25 mL para proporcionar el blanco. Agregar a cada
uno de los tres matraces 1,0 mL de Solución de molib-
dato de amonio, de Solución de hidroquinona y de Solu-
ción de bisulfito de sodio, y agitar por rotación suave
hasta mezclar. Diluir el contenido de cada matraz con
agua a volumen y dejar los matraces en reposo du-
rante 30 minutos. Determinar las absorbancias de las
soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
Cs = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fósforo (P)
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 100 µg/mL de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
1 05º durante 2 horas, en agua
Solución madre del estándar: 1O µg/mL de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ9/mL de potasio.
Solucion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1,5 µg/mL de potasio y
omitiendo el uso de la Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 6315
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/C,,) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
• SELENIO, Método 1
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 7.
Solución estándar de selenio: [PRECAUCIÓN-El selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1 000
µg/mL de selenio.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de ácido perclórico
a cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones con concentraciones de 5,0; 10,0 y 25,0
µg/mL de selenio.
Solución muestra: Transferir una porción del polvo,
equivalente a 1000 µg de selenio, a un matraz ade-
cuado y agregar 12 mL de ácido nítrico. [NOTA-Se
puede variar el volumen de ácido nítrico para asegurar
que el polvo se disperse uniformemente.] Agitar el ma-
traz por rotación suave, cuidadosamente, hasta disper-
sar la muestra de prueba. Someter a ultrasonido du-
rante 1 O minutos o hasta que la muestra de prueba se
disuelva por completo. Calentar a ebullición suave la
solución durante 15 minutos y enfriar a temperatura
ambiente. Agregar cuidadosamente 8 mL de ácido per-
clórico al matraz, calentar el matraz hasta que aparez-
can humos de ácido perclórico y agitar el matraz por
rotación suave hasta disipar los humos. Repetir el calen-
tamiento y la agitación por rotación suave hasta que los
humos aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura am-
biente. Transferir el contenido del matraz a un matraz
volumétrico de 50 mL con ayuda de Diluyente y diluir
con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
selenio en la Solución muestra.
6316 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietéticos
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2 , traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico diluido
con a9ua (1 en 1 O)
Solucion de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disódico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
luego agregar clorhidrato de hidroxilamina y diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separación de 250 mL y agregar
200 mL de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la solución
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
marrón y cubrir la solución con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solución permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador~
Solución madre del estándar: [PRECAUCION-EI selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
r
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver e resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solución con ácido clorhídrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentración de 2,0 µg/mL de selenio.
Solución estándar: Transferir 1O mL de Solución madre
del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agregar
1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución de ácido
clorhídrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 20 µg de selenio,
a un matraz adecuado. Agregar 1O mL de ácido nítrico
y entibiar suavemente sobre una placa de calenta-
miento. Continuar calentando hasta que la reacción ini-
cial de ácido nítrico haya desaparecido y luego agregar
3 mL d,e ácido perclórico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a que la
reacción del ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido percló-
rico o hasta que la digestión comience a tornarse os-
cura. Agregar 0,5 mL de ácido nítrico y continuar el
calentamiento, agregando cantidades adicionales de
ácido nítrico si se observa un oscurecimiento mayor.
Digerir durante 1 O minutos después de la primera apa-
rición de humos de ácido perclórico o hasta que la
digestión se torne incolora. Enfriar el matraz, agregar
2,5 mL de Solución de ácido clorhídrico y devolver el
matraz a la placa de calentamiento para expulsar los
residuos de ácido nítrico. Calentar la mezcla durante 3
minutos después de que comience a hervir. Enfriar el
matraz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
USP 37
Modo: UV
Longitud de onda analítica: 380 nm
Celda: 1 cm
Blanco: 1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución
de ácido clorhídrico, diluido con agua hasta 20 mL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco según se indica a continuación. Agregar 5 mL
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
pH de 1, 1 ± O, 1. Agregar 5 mL de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotación suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50º y equilibrar durante 30 minutos, procurando cu-
brir los matraces para protegerlos de la luz. Enfriar a
temperatura ambiente y transferir el contenido de
cada matraz a sendos embudos de separación. Transfe-
rir 10,0 mL de ciclohexano a cada embudo de separa-
ción y extraer vigorosamente durante 1 minuto. Dese-
char la capa acuosa. Transferir la capa de ciclohexano
a un tubo de centrífuga y centrifugar a 1000 rpm du-
rante 1 minuto para eliminar el agua remanente. De-
terminar las absorbancias de las soluciones a partir de
las Muestras contra la solución a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(V x Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancias de la capa de ciclohexano de la
As
Solución muestra
= absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usado para preparar la Solución estándar,
10 mL
Cs = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/mL)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra (µ~)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 7
Solución madre del estándar de cinc: 1000 Jl:g/mL de
cinc, a partir de óxido de cinc en ácido clorh1drico 5 M
(3,89 mg/mL) y diluida con agua a volumen final.
[NOTA-Disolver en ácido clorhídrico 5 M, entibiando, si
fuera necesario, enfriar y luego diluir a volumen final.]
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución madre del estándar de cinc diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
mL de cinc.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra, en Calcio, Método 7, excepto que se debe pre-
parar la Solución muestra para que contenga 2 µg/mL
de cinc y omitiendo el uso de la Solución de cloruro de
lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 213,8 nm
USP 37
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la gráfica así obtenida,
determinar la concentración, C, en µg/ml, de cinc en
la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µg/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• BORO, NÍQUEL, ESTAÑO y VANADIO, Método 7; CALc19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FOSFORO
y CINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3:1 ), agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9), agregando un volumen de So-
lución madre de agua regia a dos volúmenes de agua.
Diluir con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% y 1000 mg/L de escandia en solución de ácido ní-
trico al 5% y Diluyente (1: 1 :198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales
de interés en la solución.] Usando soluciones estándar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solución de ácido nítrico al 5%, pi-
petear y transferir la cantidad apropiada de solución es-
tándar de elementos a un matraz volumétrico, y diluir
con solución de ácido nítrico al 5% hasta obtener una
solución con concentraciones finales de aproximada-
mente 1 000 mg/L de calcio, 100 mg/L de cobre,
250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 100 mg/L
de manganeso, 800 mg/L de fósforo y 250 mg/L de
cinc.
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%,
pipetear y transferir la cantidad apropiada de solución
estándar de elementos a un matraz volumétrico, y diluir
con solución de ácido clorhídrico al 20% hasta obtener
una solución con concentraciones finales de aproxima-
damente 200 mg/L de boro y 1 00 mg/L de cromo, de
molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño y de
vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 7 y Solución madre del estándar 2,
según se requiera, en Diluyente para preparar una curva
de calibración de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra 1 (para Tabletas que contienen mine-
rales encontrados en la Solución madre del estándar 7 y
Solución madre del estándar 2): Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una porción,
igual a 3,5 veces el peso promedio por Tableta, a un
matraz volumétrico de 250 ml. Agregar lentamente
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles 631 7
25 ml de Solucion madre de agua reyw en incrementos
de 5 ml, seguidos de mezclado. [No rA-Si la muestra
contiene un carbonato, se presentará burbujeo. Esperar
hasta que cese el burbujeo para proseguir.] Cal.entar la
solución a ebullición en una placa de calentamiento.
Continuar calentando suavemente hasta que cesen los
humos (aproximadamente 1 hora). [NOTA-Si la mues-
tra contiene selenio, digerir durante no más de 15 mi-
nutos.] Retirar del calor, enfriar y diluir con agua a volu-
men. Filtrar aproximadamente 30 mL en un tubo de
centrífuga usando un filtro de nailon para jeringa con
un tamaño de poro de 5 ftm. Si fuera necesario, realizar
las diluciones adicionales usando Diluyente.
Solución muestra 2 (para Tabletas que contienen mine-
rales encontrados sólo en la Solución madre del estándar
2): Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Transferir una porción, igual a 3,5 veces el peso
promedio por Tableta, a un matraz volumétrico de
250 ml. Agregar lentamente 25 ml de Solución madre
de agua regia en incrementos de 5 ml, seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene un carbonato,
se presentará burbujeo. Esperar hasta que cese el bur-
bujeo para proseguir.] Calentar la solución a ebullición
en una placa de calentamiento. Continuar calentando
suavemente hasta que cesen los humos (aproximada-
mente 1 hora). [NOTA Si la muestra contiene selenio,
digerir durante no más de 15 minutos.] Retirar del
calor, enfriar y diluir con agua a volume,n. Filtrar aproxi-
madamente 30 ml en un tubo de centrifuga usando un
filtro de nailon para jeringa con un tamaño de poro de
5 µm. Si fuera necesario, realizar las diluciones adiciona-
les usando Diluyente.
Solución muestra 3 (para Tabletas que contienen mine-
rales encontrados sólo en la Solución madre del estándar
7): Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Transferir una porción, igual al peso promedio por
Tableta, a un matraz volumetrico de 250 ml. Agregar
lentamente 25 ml de Solución madre de agua regia en
incrementos de 5 ml, seguidos de mezclado. [NOTA-Si
la muestra contiene un carbonato, se presentará burbu-
jeo. Esperar hasta que cese el burbujeo para proseguir.]
Calentar la solución a ebullición en una placa de calen-
tamiento. Continuar calentando suavemente hasta que
cesen los humos (aproximadamente 1 hora). Retirar del
calor enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar aproxi-
mad~mente 30 ml en un tubo de centrífuga usando un
filtro de nailon para jeringa con un tamaño de poro de
5 µm. Si fuera necesario, realizar las diluciones adiciona-
les usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730j.)
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado P?ra medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en el Análisis.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en las
Soluciones estándar y la Solución muestra con un sis-
tema de plasma inductivan1f'nte acoplado, usando Di-
luyente como blanco. Graficar la emisión de las Solucio-
nes estándar en función de las concentrac1ones, en
mg/L, de los minerales de interés y trazar la re.eta que
mejor se iljuste a los puntos g1·af1cados. A partir de la
 6318 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietéticos
gráfica así obtenida, determinar la concentración, C,
en mg/L, de cada mineral de interés en la Solución
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral tomado:
Resultado= eX (V/W) X F X (Cw/L) X 100
C = concentración medida del elemento pertinente
en la Solución muestra (mg/L)
V = volumen de la Solución muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
Cw = peso promedio (mg/Tableta)
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades ,declara~as de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), n1quel (N1), se-
lenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN y DISOLUCIÓN (2040): Cumplen con los
requisit9s de Disolución.
• VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3x10 2 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con Jos requisitos de las prueb_as para _determinar la
ausencia de Salmonel/a spp., Eschench1a co/1 y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO:' La etiqueta indica que el producto es Ta-
bletas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales. La eti-
queta también indica la cantidad de cada vitamina y mi-
neral por unidad de dosificación y, cuando sea necesario,
la forma química de vitamina presente, e indica además
la forma salina del mineral usado como la fuente de cada
elemento. Cuando el producto contiene vitamina E, la
etiqueta indica ,si se trata ~e la forma do ~/: Cuando se
proporciona mas de un metodo de valorac1on para un
mineral en particular, el etiquetado indica e! n:iétodo de.
valoración con el que cumple el producto, unicamente s1
no se usa el Método 1.
' Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan
existido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspon-
dientes, siempre que tales unidades hayan existido previamente: La Unidad
USP para Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades m!ernac1onales (UI)
para vitaminas se han discontinuad_o; no obstante, continu~ el uso de _UI en
las etiquetas de los productos d~ v1tam1nas. Cuando los_ art1culos se_ "t1quetan
en términos de Unidades ademas del etiquetado requerido, la relac1on de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. _Una_ Unidad USP
de Vitamina A= 0,3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o
0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato_ de vitamina A) o 0,55 flg
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A)_y 1 µg de ret1-
nol (3 3 Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta ¿aroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de d!-alfa
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ac1do de
di-alfa tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E Y. 1 mg de acetato de
d-alfa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de_ succ1-
nato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
USP 37
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Ácido de Alfa Tocoferilo USP
ER Beta Caro.tena USP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Acetato de Retinilo USP
ER Palmitato de Retinilo USP
ER Fluoruro de Sodio USP
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles,
Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con-
tienen una o más de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol (Vitamina D2)
o Colecalciferol (Vitamina D 3), Vitamina E, Fitonadiona (Vi-
tamina K1) y Beta Caroter;io; y una o más de las siguientes
vitaminas hidrosolubles: Acido Ascórbico o su equivalente
como Ascorbato de Calcio o Ascorbato de Sodio, Biotina,
Cianocobalamina, Ácido F<;)lico, Niacina o Niacinamida,
Dexpantenol o Pantenol, Acido Pantoténico (como Panto-
tenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Racémico), Clor-
hidrato de Piridoxina, Riboflavina y Clorhidrat_o de Tiamina
o Mononitrato de Tiamina. Las Capsulas contienen no
menos de 90,0% y no más de 165,0% de las cantidades
declaradas de vitamina A (C20H30Ü) como retino/ o ésteres
de retino/ en la forma de acetato de retinilo (C22H32Ü2) o
palmitato de retinilo (C36H6002); vitamina D ~om~ colecal-
ciferol (C21H44Ü) o ergocalc1ferol (C2sH44Ü); v1tam1na E
como alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
(C31 H5203), o succinato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs);
fitonadiona (C31 H4602) y beta ca roten o (C40Hs6); y no me-
nos de 90,0% y no más de 150,0% de las cantidades
declaradas de ácido ascórbico (C6Hs06) o sus sales como
ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2H20) o ascorbato de
sodio (C6H1Na06), biotina (C10H16N203S), cianocobala-
mina (C63HssCoN14Ü14P), ácido fólico (C19H19N106), nia-
cina (C6H5N02) o niacinamida (C6H6N20), dexpantenol
(C9H19N04) o pantenol (C9H19NÜ4), pantotenato de calcio
(C1 8 H32CaN2010), clorhidrato de piridoxina (CsH11NÜ3 ·
HCI), riboflavina (C11H20N406) y tiamina (C12H11CJN40S)
como clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
No contienen minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
• VITAMINA A, Método 1
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un éster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma química presente
en la formulación. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar: 15 µg/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/mL de
palmi!ato de re!inilo en n_-hexano ,
Solucion de aptitud del sistema: Mezclar volumenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cápsulas a un recipiente adecuado, mezclar y
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6319
pesar. Transferir una porción de la mezcla, equivalente a
5 Cápsulas, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de teflón. [NOTA-Para Cápsulas de
gelatina dura, retirar, tanto como sea posible, el conte-
nido de no menos de 20 Cápsulas cortándolas para
abrir las cubiertas de las Cápsulas, transfiriendo las cu-
biertas y su contenido a un recipiente adecuado, y tritu-
rando hasta obtener una masa homogénea. Transferir
una porción de la masa, equivalente a 5 Cápsulas, a un
recipiente con tapa de rosca con recubrimiento interno
de teflón.] Agregar 1 O ml de dimetil sulfóxido y 15 ml
de n-hexano y agitar durante 45 minutos en un agita-
dor de movimiento tipo muñeca (wrist-action) en un
baño de agua mantenido a 60º. [NOTA-Ajustar el agi-
tador de movimiento tipo muñeca para asegurar que el
contenido del recipiente se mezcle vigorosa y completa-
mente.] Centrifugar a 3000 rpm durante 1 O minutos y
transferir la capa de hexano con una pipeta a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 15 ml de n-he-
xano a la capa de dimetil sulfóxido, agitar minuciosa-
mente durante 5 minutos y transferir la capa de hexano
con una pipeta a un matraz volumétrico de 1 00 ml.
Repetir esta extracción con tres porciones adicionales de
15 ml de n-hexano. Diluir los extractos en el matraz
volumétrico con n-hexano a volumen. Diluir un volu-
men de esta solución con n-hexano hasta obtener una
solución con una concentración de 15 µg/ml de vita-
mina A como retino! (C20H30Ü).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo obtenido de la Solución estándar y el
área del pico de la forma todo trans de acetato de
retinilo o todo trans de palmitato de retinilo en el
cromatograma de la Solución muestra. Para productos
que contengan acetato de vitamina A o palmitato de
vitamina A, calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü), en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x Fx 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü), en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H,oO)
• VITAMINA A, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica un éster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma química presente en la
formulación. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con protección actínica durante
todo este procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 ml de ácido sulfúrico a 80 ml de
metano! en un matraz volumétrico de 1 00 ml. Enfriar y
diluir con metano! a volumen.
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 100 ml y agregar agua sufi-
ciente para disolver. Agregar 1,7 ml de ácido sulfúrico y
diluir con agua a volumen.
Solución de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase móvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0,3)
Solución estándar: 15 µg/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar hasta obtener concentraciones de 7,5 µg/
ml de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulación.] Pesar no menos de 20 Capsulas en un frasco
de pesada tarado. Usando una cuchilla afilada si fuera
necesario, abrir cuidadosamente las Cápsulas, sin perder
material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
a 30 µg de la cantidad declarada de colecalciferol o er-
gocalciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de teflón. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulación,
usar una porción, equivalente a 90 mg de la cantidad
declarada de vitamina E. Si la vitamina E no se encuen-
tra presente en la formulación, usar una porción, equi-
valente a 2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina
A, como retino!. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio,
1,5 ml de Solución de lecitina y 12,5 ml de 2,2,4-trime-
tilpentano y dispersar en un mezclador de vórtice. Agre-
gar 6 ml de Solución de ascorbato de sodio-pirogalol,
agitar lentamente y dejar que la solución se desgasifi-
que. Continuar agitando hasta que haya cesado la emi-
sión de gases y luego agitar durante 12 minutos adicio-
nales. Agregar 6 ml de dimetil sulfóxido, mezclar en un
mezclador de vórtice hasta formar una suspensión y
agitar durante 12 minutos. Agregar 6 ml de Solución de
ácido sulfúrico metanólico 3 N, mezclar en un mezclador
de vórtice para formar una suspensión y agitar durante
12 minutos. Agregar 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano,
mezclar en un mezclador de vórtice hasta formar una
suspensión y agitar durante 1 O minutos. Centrifugar du-
rante 1 O minutos para romper la emulsión y para que el
sobrenadante se torne transparente. [NOTA-El sobrena-
dante se usa para la determinación de vitamina A, así
como para vitamina D y vitamina E, si se encuentran
presentes en la formulación.] Si fuera necesario, diluir
cuantitativamente un volumen del sobrenadante con
2,2,4-trimetilpentano hasta obtener una concentración
cercana a la de la Solución estándar.
6320 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4 1 6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 8 0 entre la forma todo
1 der material de la cubierta y transferir el contenido a un
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
ción muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20HioO), en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x Fx 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
C1 = concentración de acetato de retinilo
(C22Hi202) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retino! (C20Hio0) 1 en la Solución muestra
(µg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentración nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20HioO)
• VITAMINA A, Método 3
[NOTA-Cuando se especifica un éster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma química presente en la
formulación. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con protección actínica durante
todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solución de hidróxido de potasio: 800 mg/mL de hi-
dróxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidróxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/mL de pirogalol en alcohol
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (92:8)
Solución madre del estándar: 30 µg/mL de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solución se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solución estándar: Diluir un volumen de Solución ma-
dre del estándar con Diluyente hasta obtener una con-
centración de 1 µg/mL de acetato de retinilo, a partir
de ER Vitamina A USP. Transferir 10,0 mL de esta solu-
ción a un matraz de 125 mL con tapón y agregar 5 mL
de agua, 5 mL de Diluyente y 3 mL de Solución de hidró-
xido de potasio. Tapar hermeticamente, agitar durante
15 minutos sobre un baño de agua mantenido a
USP 37
60 ± 5' y enfriar a temperatura ambiente. Agregar 7 mL
de agua y 25,0 mL de Disolvente de extraccion. Tapar
herméticamente y agitar vigorosamente durante 60 se-
gundos. Enjuagar las paredes del matraz con 60 mL de
agua y dejar en reposo durante 1 O minutos para que
las capas se separen. Retirar una porción de la capa
or~ánica para inyectarla en el cromatógrafo. Esta Solu-
cion estándar contiene 0, 34 µg/mL de retino!.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
vaso de precipitados de 1 00 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
a 1 5 mg de acetato de retinilo, a un matraz de 125 mL
1
con tapon. Agregar 5 mL de agua, 15 mL de Diluyente y
3 mL de Solución de hidróxido de potasio. Tapar herméti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un baño de
agua mantenido a 60 ± 5º y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 mL de agua y 25,0 mL de Disolvente
de extracción. Tapar herméticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos o más, si fuera necesario,
para completar la extracción. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 mL de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos hasta que las capas se separen. [NOTA-No
agitar porque podría formarse una emulsión.] Retirar
una porción de la capa orgánica y diluir cuantitativa-
mente y en diluciones sucesivas, si fuera necesario, con
Disolvente de extracción hasta obtener una concentra-
ción de 0,34 µg/mL de retino!.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 4 mL/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 13-cis-
retinol y la forma todo trans de retinol son aproxima-
damente 0,92 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de la forma todo trans de
retino! y 1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la
cantidad declarada de vitamina A, como retinol
(C20HioO), en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (r¡¡/rT2) x (Cs/Cu) x Fx 100
rn = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 1 3-cis-retinol de la
Solución muestra
rT2 = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 13-cis-retinol de la
Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(CnHi2Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20HioO) en la Solución muestra
(µg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6321
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20HioO)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actínica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solución a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vacío a temperatura am-
biente para obtener una concentración de 2 µg/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(CaH44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solución
muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C23H44Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA O), Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actínica durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, Solución
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solución de lecitina
y Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 2.
Fase móvil: n-Hexano y alcohol butílico terciario
(98,75:1,25)
Solución estándar 1 ~tg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volu-
men de Solución estándar a 60º durante 1 hora para
isomerizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) a su P,recursor correspondiente.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 ~tl
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C28H440) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA O), Método 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actínica durante todo este
,procedimiento.]
Acido acético diluido: Solución de ácido acético glacial
(1 en 1 O) en agua
Solución de fenolftaleína: 1 O mg/ml de fenolftaleína
en alcohol
Solución de hidróxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidróxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar en el
día de su uso.
Disolvente de extracción: Cloruro de metileno y al-
cohol isopropílico (99,8:0,2)
Fase móvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solución madre del estándar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar cada 4 semanas. Almacenar
en un congelador.]
Solución estándar: [NOTA--Acondicionar la columna de
extracción en fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isopropílico (4:1 ), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extracción. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solución madre
del estándar con alcohol deshidratado hasta obtener
6322 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
una concentración de 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP
o ER Ergocalciferol USP. Preparar esta solución en el día
de su uso. Transferir 2,0 ml de esta solución a un ma-
traz de 125 ml con tapón. Agregar 15,0 ml de agua y
15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio, tapar y agi-
tar durante 30 minutos en un baño de agua mantenido
a 60c. Dejar que se enfríe a temperatura ambiente y
transferir el contenido del matraz a un embudo de se-
paración de 250 ml. Agregar 15,0 ml de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente y transferir esta solu-
ción al embudo de separación. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separación. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos y dejar en reposo durante 15 minutos para
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la capa de hexano
en el embudo de separación, tapar y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1 O minutos para que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solución de fenolftaleína,y 15,0 ml de agua al
embudo de separación. Agregar Acido acético diluido
gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1 O minutos para que las capas
se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Filtrar la
capa de hexano a través de sulfato de sodio anhidro,
colocado en un pequeño trozo de algodón, en un ma-
traz de fondo redondo de 1 00 ml. Enjuagar el embudo
y el sulfato de sodio con unos pocos ml de n-hexano y
recoger los enjuagues en el mismo matraz. Evaporar el
hexano en el matraz en un evaporador rotatorio a 50º
hasta sequedad. Agregar inmediatamente 2,0 ml de Di-
solvente de extracción para disolver el residuo. Transferir
esta solución a una columna de extracción en fase só-
lida recientemente acondicionada que contenga relleno
de sílice con una relación entre la masa de sorbente y el
volumen de la columna de 500 mg a 2,8 ml o equiva-
lente, enjuagar el matraz de fondo redondo con 1,0 ml
de Disolvente de extracción y transferir a la columna.
Eluir la columna con 2,0 ml de Disolvente de extracción
y desechar esta fracción. Eluir la columna con 7,0 ml
de Disolvente de extracción y recoger el eluato en un
matraz adecuado. Colocar el matraz en un baño de
agua tibia mantenido a 42º y evaporar el disolvente con
ayuda de una corriente de nitrógeno. Agregar inmedia-
tamente 2,0 ml de acetonitrilo al residuo y usar la solu-
ción para inyectarla en el cromatógrafo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 3, hasta "calcular el peso neto del con-
tenido de las Cápsulas". Transferir una porción del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 1 O µg de
colecalciferol o ergocalciferol, a un matraz de 125 ml
con tapón y proceder según se indica en Solución están-
dar, comenzando donde dice "Agregar 15,0 ml de
agua y 15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio."
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 27°
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 4,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
USP 37
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C23H44Ü)
• VITAMINA E, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 100) en
agua
Fase móvil: Metanol y Solución A (19: 1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalciferol USP en metanol.
Transferir 1,0 ml de esta solución a un matraz volumé-
trico de 100 ml que contenga 1 00 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 ml de metanol,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario y diluir con
metano! a volumen. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solución a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vacío a temperatura am-
biente hasta sequedad. Transferir el contenido del ma-
traz a un matraz volumétrico adecuado con ayuda de
metano! y diluir con metanol a volumen para obtener
una concentración de 2 mg/ml de alfa tocoferol, ace-
tato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno Ll de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solución de aptitud del
sistema
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 1,2, Solución de apti-
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C31Hs40 5 ) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado= (ru!r1) x (Cs!Cu) x 100
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6323
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
r5 = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cu = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (m9/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 240 ml de metanol con 1O ml de
agua, seguidos de 0,5 ml de ácido fosfórico al 50% y
diluir con acetonitrilo hasta 1000 ml.
Solución de aptitud del sistema: 2 mg/ml de ER Alfa
Tocoferol USP, d¡; ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metanol
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Mezclar
cuidadosamente ácido sulfúrico y metanol (9 en 100)
en un matraz volumétrico de 100 ml. [NOTA-Disolver
en una porción de metanol, enfriar y luego diluir a vo-
lumen final.]
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 100 ml. A9regar agua suficiente
para disolver. Agregar 1,7 ml de acido sulfúrico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 2, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas." Transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a
55 mg de vitamina E, a un recipiente con tapa de rosca
con recubrimiento interno de teflón. Agregar 0,5 g de
bicarbonato de sodio, 1,5 mL de Solución de lecitina y
12,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un
mezclador de vórtice. Agregar 6 mL de Solución de as-
corbato de sodio-pirogalol, agitar lentamente y dejar que
la solución se desgasifique. Continuar agitando hasta
que haya cesado la emisión de gases y fuego agitar
durante 12 minutos adicionales. Agregar 6 mL de dime-
til sulfóxido, mezclar en un mezclador de vórtice hasta
formar una suspensión y agitar durante 12 minutos.
Agregar 6 mL de Solución de ácido sulfúrico metanólico
3 N, mezclar en un mezclador de vórtice para formar
una suspensión y agitar durante 12 minutos. Agregar
12,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en un mez-
clador de vórtice hasta formar una suspensión y agitar
durante 1O minutos. Centrifugar durante 1O minutos
para romper la emulsión y para que la capa de sobrena-
dante se torne transparente. Transferir un volumen de la
capa sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano a un ma-
traz volumétrico adecuado, donde el volumen de la
muestra retirada de la capa de 2,2,4-trimetilpentano y
el tamaño del matraz volumétrico sean tales que la con-
centración final de la Solución muestra equivalga a la de
la Solución estándar. Evaporar casi hasta sequedad, agre-
gar varios mL de metanol y evaporar el 2,2,4-trimetif-
pentano remanente. Diluir con metanol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para succi-
nato ácido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre succinato ácido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol; y no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
ción de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
r5 = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mg/mL)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilución para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metanol para calcular la concentración
nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 3
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano (46,5:
46,5: 7,0)
Solución estándar: 0,3 mg/mL de ER Alfa Tocoferol
USP en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 3, hasta "calcufar el peso neto del con-
tenido de las Cápsulas." Transferir una porción del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 8,0 mg de alfa
tocoferol, a un matraz Erlenmeyer con tapón de vidrio.
Agregar 25,0 mL de agua, 25,0 mL de alcohol deshidra-
tado y 3,5 g de pellets de hidróxido de potasio. Agitar
durante 1 hora en un baño de agua mantenido a 55º.
Enfriar y transferir con ayuda de un volumen mínimo de
agua a un embudo de separación de 1 25 ml. Enjuagar
eí matraz con 50 mL de n-hexano y agregar el enjuague
al embudo de separación. Tapar, agitar vigorosamente
durante 60 segundos y dejar que las capas se separen.
Escurrir la capa acuosa en un segundo embudo de se-
paración de 250 mL y repetir la extracción con 50 mL
de n-hexano. Desechar la capa acuosa y combinar los
extractos de hexano. Lavar los extractos combinados
con 25 ml de agua, dejar que las capas se separen y
desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de ácido acé-
6324 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
tico glacial y repetir el procedimiento de lavado dos
veces más. Filtrar la capa de hexano lavada a través de
sulfato de sodio anhidro en un matraz de fondo re-
dondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato de
sodio con unos pocos ml de n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Colocar
el matraz en un baño de agua mantenido a 50º y eva-
porar la solución de hexano con ayuda de un evapora-
dor rotatorio hasta sequedad. Agregar inmediatamente
25,0 ml de Diluyente y agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (C29HsoÜ2), en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
rs = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
Cs = concentración de alfa tocoferol en la Solución
estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina E como
alfa tocoferol en la Solución muestra (mg/ml)
[NOTA-Calcular la cantidad nominal de vitamina E
como alfa tocoferol (C29HsoÜ2), multiplicando el conte-
nido de acetato de alfa tocoferilo (C31Hs2Ü3) o succi-
nato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs), en mg/Cáp-
sula, por el factor 0,91 ó 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29H 5002),
acetato de alfa tocoferilo (C31Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• FITONADIONA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (19:1)
Solución madre del estándar: 200 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metanol, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metanol
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución reservada según se especifica en las instruccio-
nes de la Solución muestra en Vitamina A, Método 7 a un
recipiente adecuado y evaporar al vacío, si fuera necesa-
rio, a temperatura ambiente hasta sequedad. Transferir
el contenido del matraz a un matraz volumétrico ade-
cuado con ayuda de metanol y diluir con metanol a
volumen para obtener una concentración de 20 µg/ml
de fitonadiona.
USP 37
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son aproximadamente
0,68 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C31 H4602), en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de fitonadiona de la Solución
muestra
rs = área del pico de fitonadiona de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución de hidróxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidróxido de potasio en 50 ml de agua.
Solución de yodo: Transferir 1 O mg de yodo a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Disolver en ciclohexano y
diluir con ciclohexano a volumen. Diluir 1 O ml de esta
solución con ciclohexano hasta 100 ml. [NOTA-Prepa-
rar esta solución en el día de su uso.]
Solución muestra A (para preparaciones que conten9an
beta caroteno en soluciones oleosas): Proceder segun
se indica en Vitamina A, Método 7, excepto que se debe
usar ciclohexano en lugar de n-hexano como disolvente
de extracción y diluir los extractos filtrados con ciclohe-
xano, hasta obtener una concentración de 2 µg/ml de
beta caroteno.
Solución muestra B (para preparaciones que contengan
beta caroteno en polvo seco): Retirar el contenido de
no menos de 20 Cápsulas cortando para abrir las Cáp-
sulas. Mezclar y determinar el peso del contenido.
Transferir una cantidad del contenido de las Cápsulas,
equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un matraz de
saponificación de 500 ml. Agregar 100 ml de alcohol,
6 ml de Solución de hidróxido de potasio y una barra
mezcladora magnética. Acoplar un condensador de aire
al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 minutos
mezclando constantemente. Enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 1 70 ml de éter de petróleo y mezclar
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el con-
tenido del matraz a un embudo de separación de
500 ml con porciones de éter de petróleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgánica superior a un matraz volumétrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificación. Agregar 1 70 ml de éter de petróleo y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cación al embudo de separación con ayuda de porcio-
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6325
nes de éter de petróleo. Dejar que las capas se separen
durante 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgánica al matraz volumé-
trico que contenga la capa orgánica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separación con porciones
pequeñas de éter de petróleo y transferir los lavados al
matraz volumétrico. Diluir los extractos etéreos con éter
de petróleo a volumen. Agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solución, equivalente a
100 µg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrógeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solución de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un baño de agua mantenido a 65º. Enfriar
rápidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestras: Solución muestra A o Solución muestra B
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(C40Hs6), en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Au!F) x (100/Cu)
Au = absorbancia de la Solución muestra A o la
Solución muestra B
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra A o la Solución muestra B
(mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
, declarad~ de beta caroteno (C40Hs6)
• ACIDO ASCORBICO
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de éter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cápsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cápsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cápsulas, equivalente a
100 mg de ácido ascórbico, a un matraz volumétrico de
200 ml y agregar 75 ml de ácido metafosfórico-ácido
acético SR. Tapar el matraz y agitar mecánicamente du-
rante 30 minutos. Diluir con agua a volumen. Transferir
una porción de la solución a un tubo de centrífuga y
centrifugar hasta obtener un sobrenadante transpa-
rente. Pipetear y transferir 4,0 ml de esta solucion a un
matraz Erlenmeyer de 50 ml, y agregar 5 ml de ácido
metafosfórico-ácido acético SR.
Análisis: Valorar con solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solución estándar de diclorofenol-indofenol consumido
por una mezcla de 5,5 ml de ácido metafosfórico-ácido
acético SR y 15 ml de agua. A partir del equivalente de
ácido ascórbico de la solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol, calcular el contenido de ácido ascórbico
en cada Cápsula.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6Hs06) , Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2H20)
• ASCORBATO DE Soo10: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
• BIOTINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de ácido fosfórico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfóxido
Solución estándar: 5 µg/ml de ER Biotina USP, que se
prepara diluyendo Solución madre del estándar en, agua
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 mg de biotina, a un matraz
volumétrico de 200 ml. Agregar 3 ml de dimetil sulfó-
xido y agitar por rotación suave para humedecer el
contenido. Colocar el matraz en un baño de agua a
60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N203S) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
r5 = área del pico de biotina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: 0, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
agua, que se prepara diluyendo Solución madre del es-
tandar en agua en el día de la valoración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsulas, equivalente a 100 µg de biotina, a un matraz
volumétrico de 200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al
50% y agitar por rotación suave hasta humedecer el
contenido. Calentar el matraz en un baño de agua a
60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
 6326 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
rante 5 minutos, diluir con alcohol al 50% a volumen y
filtrar. Diluir un volumen del filtrado cuantitativamente
y, si fuera necesario en diluciones sucesivas, con agua
hasta obtener una solución con una concentración de
O, 1 ng/ml.
Solucion de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
1 00 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1 O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1 O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 mL
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 ml
._Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 mL
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina- 5 ml
clorhidrato de oiridoxina
USP 37
Tabla 1 (Continuación)
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 ml de Solución madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodón, esterilizar en
un autoclave a 121 º durante 15 minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1 O ml de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 ml de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados para la
Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro que no contienen
Solución estándar (los blancos no inoculados). Incubar
los tubos a una temperatura entre 30º y 37º mante-
nida termostáticamente con un margen de ±0,5º hasta
que, después de 16-24 horas de incubación, no se
presente un aumento significativo de turbidez en los
tubos que contengan el nivel más alto de Estándar du-
rante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotómetro. Colocar la celda en
un espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
1 ATCC Nº 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobacillus arabinosus 17-5.
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6327
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (Ls)
como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en función
del logaritmo de los ml de la Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva o de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solución mues-
tra. Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo del
volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el loga-
ritmo del volumen, en ml, de la Solución muestra para
obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosificación.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres o
más niveles de dosificación para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
ción muestra. Determinar la cantidad, en µg, de biotina
(C10H16N20iS) en la porción de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + lag R)
R = número de µg de biotina que se supuso
estaban presentes en la porción de Cápsulas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N20iS) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de biotina en la porción de
Cápsulas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valoraciones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Límites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en más
de 0,08, realizar una o más determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dos o más valores de M que
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20iS)
• CIANOCOBALAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metano\ y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua
Solución muestra: Pesar no menos de 30 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de éter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cápsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cápsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cápsulas, equivalente a
100 µg de cianocobalamina, a un matraz de 250 ml.
Agregar cuantitativamente 100,0 ml de agua y extraer
cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar 1O ml del
extracto y usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de cianocobalamina. Cal-
cular el porcentaje de la cantidad declarada de ciano-
cobalamina (C6iHssCoN14Ü14P) en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de cianocobalamina de la
Solución muestra
r5 = área del pico de cianocobalamina de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C6iHssCoN14Ü14P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar: 1,0 µg/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que, después del periodo de incubación se-
gún se describe en el Análisis, la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml
de Solución estándar sea no menos que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 y 0,04 ng/ml de la Solución estándar. Preparar
esta solución en el momento de su uso para cada
valoración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1,0 µg de cianocobalamina, a
un vaso apropiado que contenga, por cada g del conte-
nido de las Cápsulas tomado, 25 ml de una solución de
extracción acuosa preparada justo antes de su uso que
contiene 12,9 mg/ml de fosfato dibásico de sodio,
11,0 mg/ml de acido cítrico anhidro y 1 O mg/ml de
6328 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 º du-
rante 1O minutos. _Dejar que se~imente cualquier partí-
cula del extra_cto s_1n _disolver y filtrar o centrifu<;¡ar, si
fuera necesario. Diluir una al1cuota de la solucion trans-
parente con agua. ~asta obte_ner ~na solución final que
conte~ga una act1v1dad de v1tam1na B, 2 equivalente
aproximadamente a la de la Solución estándar.
Sol,ución_ df'. hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gun se 1nd1ca en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua p_ara obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Sol~ci~n de adenina-guanina-uracilo_: Preparar según
se indica en Pantotenato de Calcio, Metodo 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
3~-~0.ml de agua,_ calentar a 70º, agregar 6,0 ml de
h1drox1do de amomo 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1O g de fosfato monobásico
de potasio y 1O g de fosfato dibásico de potasio en
agua ,Pil:ra obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de ácido
clorh1drico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solución vitamínica A: Disolver 1O mg de riboflavina
1O mg de clorhidrato de tiamina, 100 µg de biotina y mac1on de color que resulta del sobrecalentamiento del
20 mg de niacina en ácido acético 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prot~!;ler 9e la )u.z. . ,
Soluc1on y1tamm1ca B: Disolver 20 mg de acido p-ami-
nobe~zo1co, 1O ~g d~ pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de p1ridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
dox3ll( 8 mg_ de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de ~cido fóhco en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
p~ede u~ar un~ mezcl? deshidratada que contenga los
mismos 1ngred1entes siempre que, cuando se reconsti-
tl!Yª según se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la fórmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
..?, _disolvie~d<? cuidadosamente Cistina y Triptófano en
Aodo c/orhtdnco antes de agregar las siguientes ocho
solucionf'.s a la solución resultante. Agregar 1,00 ml de
a<;¡ua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido as-
corbic<?. Filtrar, si fuera necesario. Agregar la Solución
de poltsorbato 80, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a
un pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificada hasta
250 ml.
Tabla 2
L-Cistina O1 a
L-Trintófano O 05 a
Ácido clohídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de xantina 5 ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de asnaraaina 5 ml
USP 37
Tabla 2 (Continuación)
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Ácido ascórbico 1 a
Solución de nolisorbato 80 5 ml
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar con ayuda de
pres_ión r~,ducida, ª.través de una capa d~I coadyuvante
de f~ltrac1on. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medie;> de cultivo: LNOTA-Se puede usar una mezcla
~esh1dratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya según se indica en
el_ etiquetad?, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la formula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y O 20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 ml de' agua. Agregar
1~ ml de Preparación de jugo de tomate y 1 ml de Solu-
c1on de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml.
Colocar porciones de 1O ml de la solución en tubos de
ensayo_y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfri_a,r tan rápido como sea posible para evitar la for-
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de '!1edio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1O ml del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la m~zcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se ~~suelv~ el agar. Colocar porciones de 1O ml de
la soluc1oi:i. caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. li:i~JCular tre~ o más de los tubos, sembrando por
punc1on un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii.2
LNOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
rado por primera vez en esta valoración, realizar no me-
nos de 1O transferencias sucesivas del cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.] Incubar durante 1 6-24 horas a
una temperatura entre 30º y 40º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. Almacenar en un
refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
v_ec._es por s~mana y ~o usarlos para preparar el lnóculo
s1 tienen mas de 4 d1as de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al día, del cultivo por
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre
siempre que produzca un lnóculo comparable al de ~n
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobacillus leich-
mannii a dos tubos estériles que contengan 1O ml de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
2Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus leichmannii (listados como
Lactobacillus delbrueckil) como Nº 7830 en ATCC, 10801 University Blvd., Ma-
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.org).
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6329
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30c y 40"
mantenida termostáticamente con un margen de ±0,5º.
Centrifugar los cultivos bajo condiciones asépticas y de-
cantar el sobrenadante. Suspender las células del cultivo
en 5 mL de Medio de suspensión estéril y mezclar.
Usando Medio de suspensión estéril, ajustar el volumen
de manera que una dilución 1 en 20 en solución salina
SR produzca una transmitancia del 70% cuando se lee
en un espectrofotómetro adecuado ajustado a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1 O mm y leído contra el set de solución salina SR a una
transmitancia del 100%. Preparar una dilución 1 en 400
de la suspensión ajustada usando Solución madre de me-
dio basal estéril. [NOTA-Esta dilución se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.) La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 1 00% de transmitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no más de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zación y enfriamiento durante toda la valoración, de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 mL de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. El estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o más. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminación con un microorganismo extrar1o, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoración.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta mediante el siguiente procedimiento. Deter-
minar y reemplazar cualquier transmitancia individual
aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular la res-
puesta a partir de la suma de los valores duplicados de
las transmitancias (L:s) como la diferencia, y= 2,00 - L:s.
Graficar esta respuesta en la ordenada del papel milime-
trado en función del logaritmo de los mL de la Solución
estándar por tubo sobre la abscisa, usando para la orde-
nada una escala aritmética o logarítmica, la que propor-
cione la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la
recta o la curva de regresión que mejor se ajuste a los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - L:u, sumando las dos
transmitancias (L:u) para cada nivel de la Solución mues-
tra. Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo del
volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solución muestra
para obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosifica-
ción. Promediar los valores de X para cada uno _9e los
tres o más niveles de dosificación para obtener X, que
es igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la
Solución muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de cianocobalamina
(C63HssCoN14Ü14P) en la porción de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porción de
Capsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= [(antilog M)!N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Cápsulas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Actividad de Vitamina 812 en Di-
seño y Análisis de Va/oraciones Biológicas (111 ), El Inter-
valo de Confianza y los Límites de Ja Potencia). Si las dos
determinaciones difieren en más de 0,08, realizar una o
más determinaciones adicionales. A partir de la media
de dos o más valores de M que no difieran en más de
O, 15, calcular la potencia media de la preparación que
se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P)
• Acmo Fouco, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
matraz volumétrico de 50 mL. Disolver y diluir con hi-
6330 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
dróxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de ácido fosfórico 3 N y 240 ml de metanol.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso agregando agua o metanol a la Fase móvil pre-
parada para obtener una separación de la línea base
entre el ácido fólico y el estándar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1% y 3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
a~ua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. , (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Solución estándar: 0,016 mg/ml de ER Acido Fólico
USP en Solución de estándar interno , Detector: UV 270 nm
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas a un tubo de centrífu~a adecuado y agregar
un volumen de Solución de estandar interno hasta obte-
ner una concentración nominal de 0,016 mg/ml de
ácido fólico. Agitar mecánicamente durante 1O minutos
y centrifugar. Filtrar una porción del sobrenadante
transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fólico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fólico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de ácido fólico (C19H19N106) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fóli~o y metilparabeno de la Solución
estandar , procedimiento.
Cs = concentración de ER Acido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declarS'lda de á~ido fólico (C19H19N106)
• Ac100 Fouco, Metodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
USP 37
Diluyente: 60 µg/ml de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosul-
fonato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Ácido
Fólico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
del estándar con 10,0 ml de una mezcla de metanol y
ácido acético glacial (9:1), y 30,0 ml de una mezcla de
metanol y etilenglicol (1 :1 ). Agitar durante 15 minutos
en un baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar,
desechando los primeros ml del filtrado. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 0,3 mg de ácido fólico, a un
matraz de 125 ml con tapón. Agregar 10,0 ml de una
mezcla de metanol y ácido acético glacial (9: 1), y
30,0 ml de una mezcla de metanol y etilenglicof (1 :1 ).
Agitar durante 15 minutos en un baño de agua mante-
nido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
Modo: HPLC
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fólico
(C19H19N106) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de ácido fólico de la Solución
muestra
r5 = área del pico de ácido fólico de la Solución
estándar ,
Cs = concentración de ER Acido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fólico (C19H19N106)
• DEXPANTENOL o PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
Solución madre del estándar: 800 µg/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 µg/ml de ER Pantenol Racémico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 días.
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
una dilución de 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml
de pantenol, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua.
Solución muestra: Pesar no menos de 30 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6331
der material de la cubierta y transferir tanto como sea
posible el contenido a un vaso de precipitados. Retirar
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías lavando con varias porciones de éter. Dese-
char los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas
con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcular el
peso neto promedio por Cápsula. Disolver una porción
del contenido de las Cápsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 100,0 ml de agua. Diluir cuantitativamente una por-
ción de esta solución con agua hasta obtener una con-
centración de 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml
de pantenol.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 ± O, 1 y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar
20 g de carbón activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbón activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
tura de no menos de 1 Oº. Filtrar la solución si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 ± 5º y agregar solución de ácido clorhídrico (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina, 1O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado al 25%. Almace-
nar en un refrigerador.
Solución salina A: 50 mg/ml de fosfato monobásico de
potasio y 50 mg/ml de fosfato dibásico de potasio en
agua. Agregar 1 O gotas de ácido clorhídrico por L de
solución. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: 20 mg/ml de sulfato de magnesio,
1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de sulfato fe-
rroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en agua.
Agregar 1O gotas de ácido clorhídrico por L de la solu-
ción. Almacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: 200 µg/
ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 1 0%. Almacenar en un
refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: 50 mg/ml
de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de ácido oleico en al-
cohol al 20%. Almacenar en un refrigerador y usar den-
tro de los 30 días.
Medio de pantotenato de calcio modificado: Disolver
Dextrosa anhidra y Acetato de sodio anhidro en las solu-
ciones previamente mezcladas de acuerdo con la Tabla
3, y ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Finalmente, diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 rnl
Solución de cistina-triptófano 25 rnl
Solución de polisorbato 80 O 25 rnl
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 rnl
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiarnina-bioti-
na 5 rnl
Solución de ácido p-arninobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 rnl
Solución salina A 5 rnl
Solución salina B 5 rnl
Solución de oiridoxal-oantotenato de calcio 5 rnl
Solución de oolisorbato 40-ácido oleico 5 rnl
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pantote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
ción final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancreático de caseína, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidróxido de so-
dio O, 1 N o ácido clorhídrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1 000 ml. Agregar porciones de
1 O ml de la solución a tubos de cultivo, tapar los tubos
y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar en pendiente y almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo madre de Pediococcus acidilactici3 en
un tubo conteniendo este medio. Incubar a 35º durante
20-24 horas y almacenar en un refrigerador. Mantener
el cultivo madre mediante transferencias mensuales a
tubos con medio inclinado preparado recientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado estéril con el cultivo madre en
medio inclinado e incubar a 35º durante 20-24 horas.
Centrifugar la suspensión a partir de las porciones com-
binadas y lavar las células con Medio de pantotenato mo-
dificado estéril. Resuspender las células en suficiente Me-
dio de pantotenato modificado de manera que una
dilución 1 en 50, cuando se analiza en un tubo de en-
sayo de 13 mm de diámetro, proporcione 80% de
transmisión de luz a 530 nm. Transferir porciones de
1,2 ml de esta suspensión madre a ampollas de vidrio
estéril, sellar, congelar en nitrógeno líquido y almacenar
en un congelador. En el día de la valoración, dejar que
las ampollas alcancen la temperatura ambiente, mezclar
el contenido y diluir 1 ml de cultivo descongelado con
solución salina estéril SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta di-
lución se puede alterar, cuando sea necesario, para ob-
tener la respuesta de prueba deseada.]
Análisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solución
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
calcio de doble concentración a cada tubo. Tapar los
1 ATCC Nº 8042 es adecuado.
6332 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
tubos con tapas de metal y esterilizar en un autoclave
a 121 durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un bano de agua fría e inocular cada tubo
con 0,5 ml del lnóculo. Dejar que se incube a 37 du-
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
una temperatura de no menos de 80º, por ejemplo
mediante la aplicación de vapor a presión atmosférica
en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
terminar la transmitancia porcentual de las suspensio-
nes, en celdas de igual longitud de paso, en un espec-
trofotómetro adecuado, a una longitud de onda de
530 nm.
Cálculo: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estándar en función de las concentraciones del
nivel del estándar. La curva se traza conectando cada
par de puntos adyacentes con una línea recta. A partir
de esta curva estandar, determinar mediante interpola-
ción la potencia de cada tubo que contenga porciones
de la Solución muestra. Dividir la potencia de cada tubo
por la cantidad de la Solución muestra que se le agregó,
para obtener las respuestas individuales. Calcular la res-
puesta media promediando las respuestas individuales
que varían de su media en no más de 15%, usando no
menos de la mitad del número total de tubos. Calcular
la potencia de la porción del material tomado para la
valoración multiplicando la respuesta media por el fac-
tor de dilución apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol (C9H19NÜ4) en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (PIN) x 1 00
P = potencia de dexpantenol o pantenol en la
porción tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porción tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19NQ4)
• PANTOTENATO D,E CALCIO, Método 7
Fase móvil: Acido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas mezclado a un tubo de centrífuga y un volu-
men de Solución de estándar interno hasta obtener una
concentración de 0,6 mg/ml en la Solución muestra.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio y
el estándar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
USP 37
dad declarada de pantotenato de calcio
(Cl8Hi2CaNJÜ1u) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Ru! R1) x ( C/ Cu) x 1 00
Ru = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
R1 = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH12CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secados y al-
macenados en la oscuridad sobre pentóxido de fosforo
y protegidos de la absorción de humedad durante la
pesada, en 500 ml de agua en un matraz volumétrico
de 1 000 ml. Agregar 1 O ml de ácido acético 0,2 N y
1 00 ml de solución de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
ción de 50 µg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en el
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solución estándar, están
dentro de la porción lineal de la curva de respuesta en
función del logaritmo de la concentración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 50 mg de pantotenato de cal-
cio, a un matraz volumétrico de 1000 ml que contenga
500 ml de agua. A~regar 1 O ml de ácido acético 0,2 N
y 100 ml de solucion de acetato de sodio (16,66 mg/
ml), diluir con agua a volumen y filtrar. Diluir un volu-
men de esta solución hasta obtener una solución con
aproximadamente la misma concentración que la de la
Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6333
Solución de polisorbato 80: 100 mg/mL de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/mL de riboflavina, 1O µg/mL de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/mL de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/mL de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/mL de niacina y 40 µg/mL de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua hasta obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua hasta obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 4 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 4
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triptófano 25 ml
Solución de nolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1O mL de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que con-
tenga 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de
las series de tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de células del Cultivo madre de Lactobaciflus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30" y 37 mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5c. La suspensión de
células así obtenida es el tnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados para la
Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura óptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (l:s)
como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en función
del logaritmo de los mL de Solución estándar por tubo
sobre la abscisa, usando para la ordenada una escala
aritmética o logarítmica, la que proporcione la mejor
aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(l:u). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solución muestra
para obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosifica-
ción. Promediar los valores de X para cada uno je los
tres o más niveles de dosificación para obtener X, que
es igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la
Solución muestra. Determinar la cantidad, en mg, de
6334 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
pantotenato de calcio (CrnH1;CaN2010) en la porción
de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
• NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Cápsulas tomada . durante todo este procedimiento.]
Calcular el porcentaje de pan,totenat~ de calcio
(C 18 H32 CaN 2 010) en la porc1on de Capsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 1 00
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Cápsulas tor:nada (mg) . gar de ER Niacinamida USP para formulaciones gue .
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluc10nes muestra
preparadas por separado: Si la diferenc~a entre los dos
logaritm_s:¡s de las pot~nc1as M es no mas de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la pote,n.oa valorada ~el
material de prueba (ver Diseño y Anal/Sis de Valoraciones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Límites ,de
la Potencia). Si las dos determ1nac1ones d1f1eren en mas
de O 08 realizar una o más determinaciones adiciona-
les. Á p~rtir de la media de dos o más valores _de M gue
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando. . Solución muestra: Proceder segun se 1nd1ca en Actdo
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Solución amortiguadora: Disolver 10,0 g de fos~ato
monobásico de potasio en 2000 ml de agua y a1ustar
con ácido fosfórico a un pH de 3,5.
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/ml de ER Pantoten,ato de.
Calcio USP, a partir de Solución madre del estandar di-
luida con agua , . . , .
Solución muestra: Proceder segun se indica en Actdo
Ascórbico, hasta "calcular el pi:;so neto pro~edio por
Cápsula". Transferir una porcion ~el contei:i1do de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad nominal, d~ 1 O mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumetnco de
250 ml. A9regar 1 O ml de. metanol y agitar_ el matraz
por rotacion suave hasta dispersar el contenido d_e las
Cápsulas. Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3 9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura' de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de,
pantotenato de calcio (CisH32CaN2010) en la porc1on
de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
= área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución estándar
= concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
USP 37
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml) .
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisH32CaN2010)
FLAVINA y TIAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94) , . , .
Fase móvil: Una mezcla de metanol, ac1do acet1co gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER N1acinam1da
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina. USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumétrico de 200 ml, y
agregar 180 ml ~e Diluyente. Sumergir el ~atraz en un
0
baño de agua caliente mantenido a 65 -70 durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mez~lador
de vórtice, hasta que se disuelvan tod9s los maten~les
sólidos. Enfriar rápidamente en un bano_ de agua_ fr!a
durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen. , . . , .
Ascórbico hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula"'. Transferir una porción del_ c~nten!do de las
Cápsulas, equivalen~~ a l_O mg d~ n1arn~am1da y 2,5 r:ig
de clorhidrato de p1ridox1na, de ribof!av1na y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrifuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vórtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tub~ de
centrífuga en un baño de agua caliente mantenido a
65º-70º, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al baño de agua caliente, calentar d,ur~nte 5 minu-
tos más y mezclar en un mezcJador de vort1~,e duran.te
30 segundos. Filtrar una porcion de la soluc1on, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtración.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención rel_ativos para ni_acina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiam1~a son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. C_akylar ~I porcen-
taje de la cantidad declarada de niac1nam1da
(C 6 H6 N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru! r1) x ( Csl Cu) x 1 00
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
= concentración de ER Niacinamida USP en la
Cs
Solución estándar (mg/ml)
= concentración nominal de niacinamida en la
Cu
Solución muestra (mg/ml)
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6335
Para formulaciones que contengan niacina:
Res u Ita do = (ru! rs) x ( C5/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
r5 = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 ·
HCI), de riboflavina (C17H20N406) y de ~~orhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) en la porc1on de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/r5) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
C5 concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml) . Aptitud del sistema
Para productos que contenga_n monorntra_to de
tiamina, calcular el porcentaje ~e I~ cantidad
declarada de mononitrato de t1amina (C12H17Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/r5) x (C5/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M, 1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de ririd_oxina (CsH11 N<?3 · HCI),
riboflavina (C17H20N406) y t1amina com_o clorh1dr~to ~e
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) o monorntrato de t1amina
(C12H17Ns04S)
• NIACINA, Método 2 durante todo este procedimiento.]
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metano! (3: 1)
Fase móvil: Solución de acetato de sodio O, 1 M
(1 3,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequeña cantidad de metano! (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulación.] Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados. Retirar cualquier cont~nido adhe-
rido a las cubiertas lavando con vanas porciones de
éter. Desechar los lavados y secar las cubi~rtas de las
Cápsulas con ayuda de una corriente de aire seco. Pesar
las cubiertas de las Cápsulas vacías en un frasco de pe-
sada tarado y calcular el peso neto del con~enido de las
Cápsulas. Transferir una porción del cont.erndo de las
Cápsulas, equivalente a 2 mg de riboflav1~a, a un ma-
traz volumétrico de 200 ml. Si la riboflav1na no se en-
cuentra presente en la f~r~ul~ción,. usar _u_na ~orción,
equivalente a 2 mg de pmdoxina. ~1 la pmdoxina no. ~e
encuentra presente en la formulacion, usar una porc1on
equivalente a 20 mg de niacina o niacinamida. Agregar
100 O ml de Disolvente de extracción y mezclar durante
20 ~inutos, usando un agitador de movimiento tip~
muñeca (wrist-action). Sumergir el matraz en un bano
de agua mantenido a 70°-75º y calenta~ d_urante 20
minutos. Mezclar en un mezclador de vort1ce durante
30 segundos, enfriar a temperatura ambiente y filtrar.
Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyección.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6H5 N02) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
r5 = área del pico de niacina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Niacina USP en la
. Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml) .
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02)
• NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
Disolvente de extracción, Fase móvil, Solución madre
del estándar, Solución estándar, Solución muestra y
Sistema cromatográfico: Usando ER Nia~inam_ida. USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder segun se 1nd1ca
en Niacina, Método 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/r5) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
r5 = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
6336 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil y Solución mues-
tra: Preparar según se indica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 20 µg/ml de ER Clorhi-
drato de Piridoxina USP, a partir de Solución madre del
estándar y diluir con Disolvente de extracción a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11N03 · HCI) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado = (ru/r5) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de piridoxina de la Solución
muestra
r5 = área del pico de piridoxina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH1, N0 3 · HCI)
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción y Solución muestra: Preparar
según se indica en Niacina, Método 2.
Solución A: 6,8 g/L de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina por L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacia a un pH de
5,2.
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C11H20N4Ü5) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/r5) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
r5 = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N4Ü5)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 g/L de 1-hexanosulfonato de sodio en
ácido fosfórico al O, 1%
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en ácido clorhídrico 0,2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Mezclar una porción del contenido de las
Cápsulas con un volumen de ácido clorhídrico 0,2 N
hasta obtener una concentración de 0,02 mg/ml de tia-
mina. Agitar durante 15 minutos con un agitador de
movimiento tipo muñeca (wrist action) y calentar a
ebullición durante 30 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN405 · HCI) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (ru/r5) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C5 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11N5Ü4S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C5/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6337
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H17CIN4QS · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H17Ns04S)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y ácido acético gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etiíen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado. , estándar
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 7,5 mg de niacina o niacina-
mida, 1,2 mg de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de
riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un
matraz de 125 ml con tapón. Agregar 10,0 ml de una
mezcla de metano! y ácido acético glacial (9: 1) y
30,0 ml de una mezcla de metanol y etilenglicol (1 :1 ).
Tapar, agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
rs = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi ·
HCI), de riboflavina (C17H2 0N40 6) y de clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN4QS · HCI) (para productos que
contengan clorhidrato de tiamina) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
rs = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI),
riboflavina (C17H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN4QS · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H17Ns04S)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/g y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp, Escherichia co/i y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
6338 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
• ETIQUETADO:• La etiqueta indica que el producto es Cáp-
sulas de Vitaminas Hidrosolubles y Oleosolubles. La eti-
queta también indica la cantidad de cada vitamina por
unidad de dosificación y, cuando sea necesario, la forma
química presente. Cuando el producto contiene vitamina
E, la etiqueta indica si se trata de la forma do di.
Cuando se proporciona más de un método de valoración
para una vitamina en particular, el etiquetado indica el
método de valoración con el que cumple el producto
únicamente si no se usa el Método 1.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de,Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP
ER Biotina USP
Ácido hexahidro-2-oxo-3a5-[(3aa,4,8,6aa)]-1 H-tieno[3,4-
,d]imidazol-4-pentanoico;
Acido (3a5,45,6aR)-hexahidro-2-oxo-1 H-tieno[3,4-d]imi-
dazol-4-valérico.
C10H16N203S 244,31
ER Pantotenato de Calcio USP
Sal cálcica (1 :2) de ,8-alanina, N-(2,4-dihidroxi-3,3-dime-
til-1-oxobutil)-, (R)-;
D-Pantotenato de calcio (2: 1).
C1sH32CaN2010 476,53
ER Colecalciferol USP
9, 1O-Secocolesta-5,7,1 0(19)-trien-3-ol, (3,8,5Z,7 E)-;
Colecalciferol.
C21H44Ü 384,64
ER Cianocobalamina USP
Vitamina Bi2.
C63HssCoN14Ü14P 1355,37
ER Dexpantenol USP
Butanamida, 2,4-dih idroxi-N-(3-hidroxipropil)-3, 3-dime-
til-, (R)-;
D-(+)-2,4-Dih idroxi-N-(3-hidroxipropil)-3, 3-dimetilbutira-
m ida.
C9H19NÜ4 205,25
ER Ergocalciferol USP
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
( 3,8, 5 Z,7 E, 22 E)-;
Ergocalciferol.
C2~H44Ü 396,65
E~ Acido Fálico USP
Acido L-glutámico, N-[4-[[(2-amino-1,4-dihidro-4-oxo-
, 6-pterid in il) me ti l]a mi no] benzoi I]-;
.l)cido fálico;
Acido N-[p-[[(2-amino-4-hidroxi-6-pteridinil)metil]a-
mino]-benzoil]-L-glutámico.
C19H19N106 441,40
E~ Niacina USP
.l)cido 3-piridincarboxílico;
Acido nicotínico.
C6HsN02 123, 11
4 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas también se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en
términos de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A = 0,3 µg de todo trans retino! (vitamina A alcohol) o 0,344 µg
de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg de todo
trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de retino! (3,3
Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retino! (RE); 1 UI de beta
caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vitamina D
= 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1
antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de di-alfa
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco-
ferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de d-
aifa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67 y
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
USP 37
ER Niacinamida USP
3-Piridincarboxamida;
Nicotinamida.
C6H6N20 122, 12
ER Fitonadiona USP
1,4-Naftalendiona, 2-metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-he-
xadecenil)-, [R-[R*,R*-(E)]]-;
Filoquinona.
C31 H4602 450,70
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de 3,4-piridindimetanol, 5-hidroxi-6-metil-;
Clorhidrato de piridoxol.
CsH11N03 · HCI 205,64
ER Pantenol Racémico USP
ER Riboflavina USP
Riboflavina.
C17H20N406 376,36
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Monoclorhidrato de tiazol, 3-[( 4-amino-2-metil-5-pirimi-
dinil)metil]-5-(2-hidroxietil)-4-metil-, cloruro;
Monoclorhidrato de tiamina.
C12H17CIN40S · HCI 337,27
ER Vitamina A USP
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles,
Solución Oral
DEFINICIÓN
La Solución Oral de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
contiene una o más de las siguientes vitaminas oleosolu-
bles: Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol (Vita-
mina D2) o Colecalciferol (Vitamina 03) y Vitamin,a E; una
o más de las siguientes vitaminas hidrosolubles: Acido As-
córbico o su equivalente como Ascorbato de Calcio o As-
corbato de Sodio, Cianocobalam)na, Niacina o Niacina-
mida, Dexpantenol o Pantenol, Acido Pantoténico (como
Pantotenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Racémico),
Clorhidrato de Piridoxina, Riboflavina o Rivoflavina-5'-Fos-
fato Sódico y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato de
Tiamina. Contiene no menos de 90,0% y no más de
250,0% de las cantidades declaradas de vitamina A
(C20H30Ü) como retinol o ésteres de retinol en forma de
acetato de retinilo (C22H32Ü2) o palmitato de retinilo
(C36H6o02); vitamina D como ergocalciferol (C2sH44Ü) o
colecalciferol (C21H44Ü), vitamina E como alfa tocoferol
(C29HsoÜ2), acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succi-
nato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs); ácido ascórbico
(C6Hs06) o sus sales como ascorbato de calcio
(C12H14Ca012 · 2H20) o ascorbato de sodio (C6H1Na06); y
tiamina (C12H17CIN40S) como clorhidrato de tiamina o
mononitrato de tiamina; no menos de 90,0% y no más
de 150,0% de las cantidades declaradas de pantotenato
de calcio (ClBH32CaN2010), dexpantenol (C9H19NÜ4) o
pantenol (C9H19NÜ4), niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI) y ri-
boflavina ((¡ 1H20N406) o riboflavina-5' -fosfato sódico
(C17H20N4Na09P); y no menos de 90,0% y no más de
450,0% de la cantidad declarada de cianocobalamina
(C63HssCoN14Ü14P).
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.]
• VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6339
Diluyente: Tetrahidrofurano y acetonitrilo (1 :1)
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,33 mg/ml de retinol (C20H300), a
partir de ER Vitamina A USP en Diluyente. [NOTA-ER
Vitamina A USP es acetato de retinilo. Usarlo para anali-
zar Solución Oral que contenga vitamina A como reti-
no!, acetato de retinilo o palmitato de retinilo.]
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 3,3 mg de
retinol, a un embudo de separación de 500 ml que
contenga 1 O ml de agua y 20 ml de alcohol deshidra-
tado. Agregar 150 ml de éter de petróleo, tapar y agi-
tar durante 1 minuto. Agregar otros 150 ml de éter de
petróleo, tapar, agitar y dejar que las capas se separen.
Desechar la capa acuosa y filtrar el extracto de éter de
petróleo a través de sulfato de sodio anhidro en un ma-
traz de fondo redondo de 500 ml. Evaporar la solución
hasta sequedad con ayuda de un evaporador rotatorio
sobre un baño de agua mantenida a aproximadamente
65º. Agregar inmediatamente 10,0 ml de Diluyente, agi-
tar por rotación suave hasta disolver el residuo y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 50 cm (preparada a partir de dos
columnas concatenadas de 4,6 mm x 25 cm); relleno
Ll
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A como retinol (C20H300) en la porción de Solu-
ción Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de retinol o éster de retinilo de
la Solución muestra
rs = área del pico de acetato de retinilo de la
Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H3202) en la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentraciónnominal de vitamina A, como
retinol (C20H300), en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como retinol (C20H300)
• (OLECALCIFEROL O ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Diluyente y Fase móvil: Preparar según se indica en
Vitamina A.
Solución estándar: 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Er~ocalciferol USP en Diluyente
Solucion muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 50 µg de co-
lecalciferol o ergocalciferol, a un embudo de separación
de 500 ml que contenga 1O ml de agua y 20 ml de
alcohol deshidratado. Agregar 150 ml de éter de petró-
leo, tapar y agitar durante 1 minuto. Agregar otros
150 ml de éter de petróleo, tapar, agitar y dejar que las
capas se separen. Desechar la capa acuosa. Escurrir el
extracto etéreo a través de sulfato de sodio anhidro en
un matraz de fondo redondo de 500 ml. Evaporar la
solución hasta sequedad con ayuda de un evaporador
rotatorio sobre un baño de agua mantenida a aproxi-
madamente 65º. Agregar inmediatamente 10,0 ml de
Diluyente, agitar por rotación suave hasta disolver el re-
siduo y filtrar.
Sistema cromatográfico: Preparar según se indica en
Vitamina A.
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C2sH440) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la formulación,
1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H440)
o ergocalciferol (C2BH440)
• VITAMINA E
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Solución de hidróxido de potasio: Transferir 90 g de
pellets de hidróxido de potasio a un matraz volumétrico
de 100 ml que contenga 60 ml de agua. Mezclar hasta
disolver, enfriar y diluir con agua a volumen.
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,3 mg/ml de ER Alfa Tocoferol
USP en Diluyente
Solución muestra: Transferir una cantidad de Solución
Oral, equivalente a 1,5 mg de alfa tocoferol, a un ma-
traz Erlenmeyer de 125 ml provisto de una junta de
vidrio esmerilado y agregar 25,0 ml de alcohol deshi-
dratado. Acoplar un condensador de reflujo y someter a
reflujo en un baño de agua en ebullición durante 1 mi-
nuto. Agregar cuidadosamente 3 ml de Solución de hi-
dróxido de potasio a través del condensador y continuar
sometiendo a reflujo durante 30 minutos. Retirar el ma-
traz del baño y enjuagar el condensador con aproxima-
damente 15 ml de agua. Enfriar y transferir con un vo-
lumen mínimo de agua a un embudo de separación de
250 ml. Enjuagar el matraz con 50 ml de n-hexano y
agregar los enjuagues al embudo de separación. Tapar,
agitar vigorosamente durante 1 minuto y dejar que las
capas se separen. Escurrir la capa acuosa en un se-
gundo embudo de separación de 250 ml y repetir la
extracción con 50 ml de n-hexano. Desechar la capa
acuosa y combinar los extractos de hexano. Lavar los
extractos combinados con 25 ml de agua, dejar que las
capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
3 gotas de ácido acético glacial y repetir el procedi-
miento de lavado dos veces más. Filtrar la capa de he-
 6340 Vitaminas Oleosolubies e Hidrosoiubles / Suplementos Dietéticos
xano lavada a través de sulfato de sodio anhidro en un
matraz de fondo redondo de 250 ml. En¡uagar el em-
budo y el sulfato de sodio con n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Evapo-
rar la solución de hexano hasta sequedad con ayuda de
un evaporador rotatorio sobre un bano de agua mante-
nido a aproximadamente 50 . Agregar inmediatamente
5,0 ml de Diluyente y agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E como alfa tocofe-
rol (C 29 H00 0 2) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
r5 = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
Cs = concentración de alta tocoferol en la Solución
estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina E, como
alfa tocoferol, en la Solución muestra
(mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%--250,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• ÁCIDO ASCÓRBICO
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 80 mg de
ácido ascórbico, a un matraz Erlenmeyer. Agregar
50 ml de agua, 100 ml de ácido sulfúrico O, 1 N SV y
15,0 ml de yodo O, 1 N SV. Mezclar el contenido du-
rante 30 segundos y agregar 5 ml de almidón SR.
Análisis: Valorar inmediatamente con tiosulfato de sodio
O, 1 N SV hasta la desaparición del color. Cada ml de
yodo O, 1 N equivale a 8,806 mg de ácido ascórbico
(C6Hs06).
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6Hs06)
• A~CORBATO DE CALCIO : Proceder según se indica en
Acido Ascórbico. Cada ml de yodo O, 1 N equivale a
10,66 mg de ascorbato de calcio (Cd~14Ca012 · 2H20).
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2Hz0)
• AscoRBATO DE SODIO : Proceder según se indica en Acido
Ascórbico. Cada ml de yodo O, l N equivale a 9,905 mg
de ascorbato de sodio (C6H1Na06).
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
• CIANOCOBALAMINA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar: 1,0 pg/ml de cianoco-
balamina, a partir de ER Cianocobalamina USP en al-
cohol al 25%. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que después del periodo de incubación, se-
gún se describe en el Análisis, la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml
de Solución estándar '>ea no menor que la correspon-
USP 37
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 y 0,04 ng/ml de la Solución estándar. Preparar
esta solución en el momento de su uso para cada
valoración.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral que se supone contiene
1,0 pg de cianocobalamina, a un vaso apropiado que
contenga, por cada ml de la Solución Oral tomada,
25 ml de una solución de extracción acuosa, preparada
justo antes de su uso, que contiene, en cada 1 00 ml,
1,29 g de fosfato dibásico de sodio, 1, 1 g de ácido cí-
trico anhidro y 1,0 g de metabisulfito de sodio. Autocla-
var la mezcla a 121 º durante 1 O minutos. Dejar que
sedimente cualquier partícula del extracto sin disolver y
filtrar o centrifugar, si fuera necesario. Diluir una alí-
cuota de la solución transparente con agua hasta obte-
ner una solución final que contenga una actividad de
vitamina B12 equivalente aproximadamente a la de la
Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 ml de
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1 O g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol. Almacenar en un refrigerador.
Solución vitamínica A: 1 O mg de riboflavina, 1 O mg de
clorhidrato de tiamina, 100 pg de biotina y 20 mg de
niacina en ácido acético 0,02 N para obtener 400 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y proteger
de la luz.
Solución vitamínica B: 20 mg de ácido p-aminoben-
zoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de clor-
hidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de pirido-
xal, 8 mg de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg de
ácido fálico en una mezcla de agua y alcohol neutrali-
zado (3: 1) para obtener 400 ml. Almacenar en un refri-
gerador y proteger de la luz.
Solución madre del medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en el etiquetado, produzca un me-
 USP 37
dio comparable al obtenido de la fórmula provista en
este procedimiento. . rado por primera vez en esta valoración, realizar no me-
Agregar los ingred.ientes en el orden. listado .en, la Tabla
7 disolviendo cuidadosamente C1stma y Tnptofano en
Á~ido clorhídrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solución resultante. A la solución resul-
tante, agregar 100 ,mL de agua y disolver Dextrosa,
Acetato de sodio y Acido ascórbico. Filtrar, si fuera nece-
sario. Agregar Solución de polisorbato 80, ajustar. c?n
hidróxido de sodio 1 N a un pH de 5,5-6,0 y diluir
con Agua Purificada hasta 250 mL.
Tabla 1
L-Cistina
L-Triotófano
Ácido clorhídrico 1 N
Solución de adenina-auanina-uracilo
Solución de xantina
Solución vitamínica A
Solución vitamínica B
Solución salina A
Solución salina B
Solución de asparaqina
Solución de hidrolizado ácido de caseína
Dextrosa anhidra
Acetato de sodio anhidro
Ácido ascórbico
Solución de polisorbato 80
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y filtrar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo:[NOTA-Se puede usar una mezcla des-
hidratada que contenga los mismos ingredientes siem-
pre que, cuando se reconstituya seg~n se indica en ~I
etiquetado, produzca un medio equivalente al obtenido
de la fórmula provista en este procedimiento.] Disolver
0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de peptona sec_a,
1,0 g de Dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato monoba-
sico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar 1 O mL
de Preparación de jugo de tomate y 1 mL de Solución de
polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un
pH de 6,8 y diluir con agua hasta 1 00 ml. Colocar por-
ciones de 1O mL de la solución en tubos de ensayo y
tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su contenido
en un autocfave a 121 º durante 15 minutos. Enfriar tan
rápido como sea posible para evitar la formación de
color que resulta del sobrecalentamiento del medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medic;Jo de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de. 1 O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubnr los tu-
bos esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nut~s y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. Inocular tres o más de los tubos, sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 1
' Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus leichmannii (li.stados como
Loctobacillus delbrueckil) como Nº 7830 en ATCC, 10801 Un1vers1ty Blvd., Ma-
nassas, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6341
[NOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
nos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura entre
30J y 40º mantenida termostáticamente con un mar-
gen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el lnóculo
si tienen más de 4 días de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al día, del cultivo por
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
O1 a
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
O 05 a adecuada y puede conducir a resultados err~ticos.
10 ml lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspens1on conge-
5 ml lada de Lactobacillw leichmannii como cultivo madre,
5 ml siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
10 ml cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii a dos tubos
10 ml
estériles que contengan 1 O mL de Medio de cultivo cada
5 ml uno. Incubar estos cultivos durante 16-24 horas a una
5 ml temperatura entre 30º y 40º mantenida termostática-
5 ml mente con un margen de ±0,5º. Centrifugar los cultivos
25 ml bajo condiciones asépticas y decantar el sobrenadante.
10 a Suspender las ,células del cultivo en 5 mL. de Medio de.,
suspensión esteril y mezclar. Usando Medio de su_spe:i,s1on
5 a
estéril, ajustar el volumen de manera que una d1luc!on
1a 1 en 20 en solución salina SR produzca una transm1tan-
5 ml cia del 70% cuando se lee en un espectrofotómetro
adecuado ajustado a una longitud de onda de 530 nm,
equipado con una celda de 1 O mm y leer contra el set
de solución salina SR a una transmitancia del 100%.
Preparar una diluci?n 1 en 400 de la suspensió,n. ajus-
tada usando Solucion madre de medio basal estenl.
[NOTA-Esta dilución se puede alterar, cuando sea nece-
sario, para obtener la respuesta de prueba deseada.] La
suspensión de células así ob~enida es el lryóculo . . , .
Calibración del espectrofotometro: Revisar penod1ca-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina Bi2 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 r:im de vidrio. du~o y der:nás
material de vidrio necesario se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Soluoón madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y
muestra juntos en una gradilla para tubos. y el set
duplicado en una segunda gradilla o secc1on de una
gradilla, preferentemente en orden alea~on<?·,
Cubrir los tubos para prevenir la contam1nac1on bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no más de 1 O minutos, precalentando el autocla.ve s1
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
6342 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
para evitar la formación de color que resulta del so-
brecalentamiento del medio. Tomar precauciones
para mantener la uniformidad de las condiciones de
esterilizacion v enfriamiento durante toda la valora-
a
ción, debido que colocar los tubos demasiado cerca
o sobrecargar el autoclave puede ocasionar variacio-
nes en la velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 ml de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Después de agitar el conte-
nido, leer la transmitancia a 530 nm cuando se al-
cance un estado estacionario. El estado estacionario
se observa unos pocos segundos después de la agita-
ción cuando la lectura se mantenga constante du-
rante 30 segundos o más. Permitir aproximadamente
el mismo intervalo de tiempo para la lectura en cada
tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia del blanco inocu-
lado. Si la diferencia es mayor de 5% o si hay eviden-
cia de contaminación con un microorganismo ex-
traño, no tomar en cuenta el resultado de la
valoración.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia de cada uno de
los tubos restantes. No tomar en cuenta los resulta-
dos de la valoración si la pendiente de la curva están-
dar indica un problema con la sensibilidad.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (Ls) como la diferencia, y=
2,00 - Ls. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los ml
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmética o loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la recta o la curva de regresión
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 -Lu, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer, a partir de la curva estándar, el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido el logaritmo del volumen, en ml, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificación. Promediar los valores de X
para cada uno de los tres o más niveles de dosifica-
ción para obtener X, que es igual al logaritmo de
potencia relativa, M', de la Solución muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de cianocobalamina
(C63HssCoN14014P), en la porción de Solución Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = µg de cianocobalamina que se supuso estaban
presentes en la porción de Solución Oral
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C6iHssCoN14014P) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado= [(antilog M)!N] x 100
USP 37
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Solución Oral tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia, Actividad de Vitamina 812). Si las
dos determinaciones difieren en más de 0,08, realizar
una o más determinaciones adicionales. A partir de la
media de dos o más valores de M que no difieran en
más de O, 15, calcular la potencia media de la prepara-
ción que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-450,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C6iHssCoN 14014P)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 7
Fase móvil: Fosfato monobásico de sodio 0,2 M y me-
tano! (97:3). Ajustar con ácido fosfórico 1,7 M a un pH
de 3,2±O,1.
Solución estándar: 80 µg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Fase móvil
Solución de aptitud del sistema: 80 µg/ml de ER Pan-
tenol Racémico USP en Fase móvil. Mezclar la solución
resultante y la Solución estándar (1 :1 ).
Solución muestra: Equivalente a 80 µg/ml de pantote-
nato de calcio, a partir de Solución Oral en Fase móvil
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 210 nm
Columna: 4,0 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre pantenol y pan-
totenato de calcio, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para los picos de
pantotenato de calcio y pantenol, Solución estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18Hi2CaN2010) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru!rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
rs = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sHi2CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la absorción de humedad durante la pe-
sada, en 500 ml de agua en un matraz volumétrico de
1 000 ml. Agregar 1 O ml de ácido acético 0,2 N y
100 ml de solución de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
ción de 50 µg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6343
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas seg.~n se i,ndica en ~I
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Soluoon estandar, estan
dentro de la porción lineal de la curva .~e respuesta en
función del logaritmo de la concentrac1on. . Acetato de sodio anhidro
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 50 mg de
pantotenato de calcio, a un matraz volumétrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agrega~,
1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de soluc1on de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con agua a volumen y
filtrar. Diluir un volumen medido de esta solución cuan-
titativamente y en diluciones sucesiva~,, si fuera nece.sa-
rio, con agua hasta obtener ur:i? soluc1on con aprox!l}'lª-
damente la misma concentrac1on que la de la Soluoon
estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ~L de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver .~uevamer:ite ,la
pasta resultante en agua, ajustar la soluc1on .c~n h1dro-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y d1lu1r con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a ~na .temperatura de nc;i ~enos de 1 Oº. Fil-
trar la solucion s1 se forma un prec1p1tado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-'80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigera~or.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de pohsor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina.' 1.0 µg/m,L .de clo!~idrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de b1ot1na en ac1do acet1co
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote~er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/ml de ácido p-ami~oben­
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clor~1drato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador. , .
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobas1co
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio, e~
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de aodo
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
O 5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar b~jo tolueno. . .
Solucion madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 2 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
-,A-T_C_C_N_º_8_01-4-es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobacilfus arabinosus 17-5.
Tabla 2
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triptófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 q
5 q
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
5 mL
Solución salina A
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2 O g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la m~z­
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 2
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37° mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en. ~n refriger~dor. Prepa-
rar un cultivo reciente por punc1on del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar. .,
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una susp~ns1on conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo compara.ble ,al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir celulas de~
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo este-
ril que contenga 1 O ml de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es eí lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solu-
ción estándar. Agregar a cada tu.~o y a cuatro tu~os
vacíos similares 5,0 ml de Soluoon madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado volúmenes de la Solución muestra correspon-
dientes a tres o más niveles especificados de Solución
estándar incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 ml.
Agregar 'a cada tubo 5,0 ml de Solución madre de me-
dio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Colo-
car un set completo de tubos de Estándar y m.uestra
juntos en una gradilla para tub?,s y el set duph~ado
en una segunda gradilla o secc1on de una gradilla,
preferentemente en orden al~atorio. .
Cubrir los tubos de ambas senes para prevenir la con-
taminación y esterilizar en un autoclave a 121 ~ du-
rante 5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de Inoculo a
cada tubo, excepto a dos de los cuatro tub~s que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
6344 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
37 mantenida termmtáticamente con un margen de
J:0,5 hasta que, después de 16 24 horas de incuba-
ción, no :,e presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que e ontengan el nivel más alto
de Estár1dar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la si-
guiente manera. Mezclar el contenido de cada tubo y
transferir a un recipiente apto para lectura óptica si
fuera necesario. Leer la transmitancia entre 540 y 660
nm cuando se alcance un estado estacionario. El es-
tado estacionario se observa unos pocos segundos
después de la agitación cuando la lectura del galva-
nómetro se mantenga constante durante 30 segun-
dos o más. Permitir aproximadamente el mismo inter-
valo de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nación con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (l:1) como la diferencia, y= 2,00 - l:s. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la recta
o la curva de regresión que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - l:u, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer a partir de la curva estándar el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido el logaritmo del volumen, en mL, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificación. Promediar los valores de X
para cada uno de los tres o más niveles de dosifica-
ción para obtener X, que es igual al logaritmo de
potencia relativa, M', de la Solución muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente a pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2010) en la porción de Solución Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Solución Oral tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18Hi2CaN2010) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Solución Oral tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
USP 37
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C 18 H32CaN2010)
• DEXPANTENOL o PANTENOL, Método 7
Fase móvil y Sistema cromatográfico: Proceder según
se indica en la valoración de Pantotenato de Calcio, Mé-
todo 7.
Solución estándar: 80 µg/ml de ER Dexpantenol USP o
ER Pantenol Racémico USP en Fase móvil. [NOTA-Usar
ER Dexpantenol USP para analizar la Solución Oral que
contiene dexpanteno y usar ER Pantenol Racémico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solución de aptitud del sistema: 80 µg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en Fase móvil. Mezclar la solu-
ción resultante y la Solución estándar (1 :1 ).
Solución muestra: Equivalente a 80 µg/ml de dexpan-
tenol o pantenol, a partir de Solución Oral en Fase
móvil
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantenol. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de dexpantenol o
pantenol (C9H19N04) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solución muestra
rs = área del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solución estándar
C1 concentración de ER Dexpantenol USP o ER
=
Pantenol Racémico USP en la Solución
estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de dexpantenol o
pantenol en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
• DEXPANTENOL o PANTENOL, Método 2
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 800 µg/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 µg/ml de ER Pantenol Racémico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 días. [NOTA-Usar ER
Dexpantenol USP para analizar la Solución Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racémico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml de pantenol ra-
cémico, a partir de la Solución madre del estándar en
agua.
Solución muestra: 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/
ml de pantenol, a partir de la Solucion Oral en agua
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
1 00 g de caseína exenta de vitamina con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 ± O, 1 y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar
20 g de carbón activado, mezclar durante l hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbón activado. Alma-
USP 37 Suplementos Dietéticos / Vitarnirids Oleosolubles e Hidrosolubles 6345
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
tura de no menos de 1 Oº. Filtrar la solución si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 ± 5º y agregar solución de ácido clorhídrico 6 M
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar, diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar.
Almacenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tem-
peratura de no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar, diluir con agua hasta
200 ml y mezclar. Almacenar bajo tolueno en un
refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: Preparar una solución de riboflavina, clorhidrato
de tiamina y biotina en ácido acético 0,02 N que con-
tenga 20 µg/ml de riboflavina, 1 O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina. Almacenar bajo to-
lueno en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: Preparar una solución en alcohol
neutralizado al 25% que contenga 1 O µg/ml de ácido
p-aminobenzoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de
clorhidrato de piridoxina. Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico y mezclar. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
40 mg de clorhidrato de piridoxal y 375 µg de pantote-
nato de calcio en alcohol al 10% para obtener 200 ml
y mezclar. Almacenar en un refrigerador y usar dentro
de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: Disolver
25 g de polisorbato 40 y 0,25 g de ácido oleico en al-
cohol al 20% para obtener 500 ml, y mezclar. Almace-
nar en un refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Medio de pantotenato modificado: Disolver Dextrosa
anhidra y Acetato de sodio en las soluciones previamente
mezcladas de acuerdo con la Tabla 3, ajustar con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8, diluir con agua hasta
250 ml y mezclar.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de polisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 q
Acetato de sodio anhidro 5 q
Solución de adenina-ouanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de oiridoxal-oantotenato de calcio 5 ml
Solución de oolisorbato 40-ácido oleico 5 ml
'ATCC N" 8042 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como /ac-
tobac1//111 orohi1Josu1 17-S.
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pantote-
nato modificado, pero disolver hasta 1 25 ml en lugar de
250 ml. Preparar en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver
6,0 g de peptona, 4,0 q de digerido pancreático de ca-
seína, 3,0 g de extracto de levadura, 1,5 g de extracto
de carne, 1,0 g de dextrosa y 15,0 g de agar en 800 ml
de agua, con ayuda de calor. Ajustar con hidróxido de
sodio O, 1 N o ácido clorhídrico O, I N a un pH entre
6,5 y 6,6, diluir con agua hasta 1 000 ml y mezclar.
Agregar porciones de 1 O ml de la solución a tubos de
cultivo, tapar los tubos y esterilizar en un autoclave a
121 º durante 15 minutos. Enfriar en pendiente y alma-
cenar en un refrigerador. Preparar un cultivo madre de
Pediococcus acidilactici 3 en un tubo que contenga este
medio. Incubar a 35° durante 20-24 horas v almacenar
en un refrigerador. Mantener el cultivo madre mediante
transferencias mensuales i:l tubos con medio inclinado
preparado recientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado con el cultivo madre en medio
inclinado e incubar a 35º durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensión a partir de las porciones combina-
das y lavar las células con Medio de pantotenato modifi-
cado estéril. Resuspender las células en suficiente Medio
de pantotenato modificado de manera que una dilución
1 en 50, cuando se analiza en un tubo de ensayo de
13 mm de diámetro, proporcione 80% de transmisión
de luz a 530 nm. Transferir porciones de 1,2 ml de esta
suspensión madre a ampollas de vidrio, sellar, congelar
en nitrógeno líquido y almacenar en un congelador. En
el día de la valoración, dejar que las ampollas alcancen
la temperatura ambiente, mezclar el contenido y diluir
1 ml de cultivo descongelado con solución salina estéril
SR hasta 150 mL. [NOTA-Esta dilución se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.]
Análisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 mL. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentración a cada tubo y mezclar. Tapar los
tubos con tapas de metal y esterilizar en un autoclave
a 121 º durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un baño de agua fría, e inocular cada tubo
con 0,5 mL del l11óculo. Dejar que se incube a 37° du-
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
una temperatura de no menos de 80º, por ejemplo
mediante la aplicación de vapor a presión atmosférica
en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
terminar concomitantemente la transmitancia porcen-
tual de las suspensiones, en celdas de igual longitud
de paso, en un espectrofotómetro adecuado, a una
longitud de onda de 530 nm.
Cálculo: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estándar en función de las concentraciones
del nivel del estándar. La curva se traza conectando
cada par adyacente de puntos con una línea recta. A
partir de esta curva estandar, determinar mediante
interpolación la potencia, en términos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solución
6346 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solución muestra que se le agregó, para ob-
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
media promediando las respuestas individuales que va-
rían de su media en no más de 15%, usando no me-
nos de la mitad del número total de tubos.
Calcular la potencia de la porción del material tomado
para la valoración multiplicando la respuesta media
por el factor de dilución apropiado. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de dexpantenol o
pantenol en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia calculada de dexpantenol o pantenol
en la porción de Solución Oral tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porción de Solucion Oral tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
• NIACINA o NIACINAMIDA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 25 mg/mL de edetato disódico en agua
Fase móvil: Mezclar 0,4 mL de trietilamina, 15,0 mL de
ácido acético glacial y 350 mL de metanol, y diluir con
1-hexanosulfonato de sodio 0,008 M hasta 2000 mL.
Solución estándar: O, 1O mg/mL de ER Niacina USP o
ER Niacinamida USP en Diluyente. [NOTA-Usar ER Nia-
cina USP para Solución Oral que contiene niacina y usar
ER Niacinamida USP para Solución Oral que contiene
niacinamida.]
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral con Diluyente hasta obtener una
solución con una concentración de O, 1 mg/mL de nia-
cina o niacinamida.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de nia-
cina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la por-
ción de Solución Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
rs = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 24 µg/mL de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Diluyente
Solución muestra: Equivalente a 24 µ5J/mL de Clorhi-
drato de Piridoxina, a partir de Solucion Oral en
Diluyente
USP 37
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de clor-
hidrato de piridoxina (CBH 11 N0 3 • HCI) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C 1/Cu) x 100
ru = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución muestra
rs = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 · HCI)
• RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SÓDICO, Método 7
[NOTA-La riboflavina-5'-fosfato sódico se cuantifica con-
tra el ER Riboflavina USP en este procedimiento. En el
cromatograma de la Solución muestra, el pico de ribofla-
vina-5' -fosfato es el único pico medido para el cálculo.]
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 8 µg/mL de ER Ribo-
flavina USP en Diluyente, calentando si fuera necesario.
Solución muestra: Equivalente a 8 µg/mL de ribofla-
vina, a partir de Solución Oral en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ribofla-
vina-5'-fosfato sódico y riboflavina son aproximada-
mente O, 18 y 1,0, respectivamente.]
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ri-
boflavina (C11H20N406) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de riboflavina-5'-fosfato de la
Solución muestra
rs = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/mL)
F = factor para convertir la respuesta obtenida de
riboflavina-5'-fosfato a riboflavina, 1,493.
[NOTA-La riboflavina fosfato sódico es una
mezcla de monofosfatos isoméricos y difosfa-
tos que contienen una cantidad promedio de
67% de riboflavina-5'-monofosfato, la cual se
separa en este sistema cromatográfico. El fac-
tor 1,493 asume 67% de riboflavina-5'-mo-
nofosfato.]
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SÓDICO, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este proceqimiento.]
Blanco de disolventes: Acido clorhídrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (1 :2:97)
Solución madre del estándar: Transferir 16 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 100 mL,
disolver en 1,0 mL de ácido clorhídrico 1 N y 2,0 mL de
acetato de sodio 2,5 M, y diluir con agua a volumen.
Transferir 10,0 mL de esta solución a un matraz volumé-
trico de 100 mL y diluir con agua a volumen.
Solución estándar: Transferir 5,0 mL de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 500 mL, agre-
gar 5,0 mL de ácido clorhídrico 1 N y 1 0,0 mL de ace-
tato de sodio 2,5 M, y diluir con agua a volumen.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6347
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, eguivalente a 0,8 mg de ri-
boflavina, a un matraz volumetrico de 100 mL y diluir
con agua a volumen. Transferir 10,0 mL de la solución
resultante a un matraz volumétrico de 500 mL, agregar
5,0 mL de ácido clorhídrico 1 N y 10,0 mL de acetato
de sodio 2,5 M, y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Fluorescencia
Longitudes de onda analíticas
Excitación: 440 nm
Emisión: 530 nm
Blanco: Disolvente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Determinar las intensidades de fluorescencia máximas, Is
e fu, de la Solución estándar y la Solución muestra, res-
pectivamente. Calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de riboflavina (C17H20N406) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado= (/u/Is) x (Cs/Cu) x 100
fu = intensidad de fluorescencia de la Solución
muestra
Is = intensidad de fluorescencia de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C17H20N406)
• TIAMINA
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 24 µg/mL de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en Diluyente
Solución muestra: Equivalente a 24 µg/mL de clorhi-
drato de tiamina, a partir de Solución Oral en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tia-
mina (C12H17Ns04S) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina o mononitrato de tiamina en la
Solución muestra (mg/mL)
F = 1 (para productos que contienen clorhidrato
de tiamina) y 0,97 (para productos que
contienen mononitrato de tiamina)
Criterios de aceptación: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de tiamina (C12H 17CIN4QS ·
HCI) o mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
OTROS COMPONENTES
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL, Método I (611) (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada de
C2HsOH
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/mL y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/ml.
• PROCEDIMIENTOS MICROBIOLÓGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS (2022): Cumple con los re-
quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de
Salmonel/a spp., Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte o con
una cámara gaseosa superior mínima.
• ETIQUETADO:• La etiqueta indica que el producto es Solu-
ción Oral de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles. La
etiqueta indica la cantidad de cada vitamina presente en
un volumen dado de Solución Oral y, cuando sea necesa-
rio, la forma química de vitamina presente. Cuando el
producto contiene vitamina E, la etiqueta indica si se
trata de la forma d o di. Cuando el producto declara
contener pantenol, la etiqueta indica el contenido equi-
valente de dexpantenol. Cuando se proporciona más de
un método de valoración para una vitamina en particu-
lar, el etiquetado indica el método de valoración con el
que cumple el producto únicamente si no se usa el Mé-
todo 1.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Pantotenato de Calcio USP
Sal cálcica (1 :2) de {3-alanina, N-(2,4-dihidroxi-3,3-dime-
til- 1-oxobutil)-, (R)-.
C18H32CaN2010 476,53
ER Colecalciferol USP
9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3f3,5Z,7 E)-.
C21H440 384,64
ER Cianocobalamina USP
Vitamina Bi2.
C63HssCoN14014P 1355,37
ER Dexpantenol USP
D-(+)-2,4-Dihidroxi-N-(3-hidroxi propil)-3, 3-dimetilbutira-
mida.
C9H19N04 205,25
ER Ergocalciferol USP
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
(3f3,5Z,7 E,22E)-.
C2sH440 396,65
E~ Niacina USP
Acido 3-piridincarboxílico.
C6HsN02 123, 11
ER Niacinamida USP
3-Piridincarboxamida.
C6H6N20 122, 12
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de 3,4-piridindimetanol, 5-hidroxi-6-metil-.
CsH11N03 · HCI 205,64
ER Pantenol Racémico USP
ER Riboflavina USP
Riboflavina.
C17H20N406 376,36
4 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas también se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en
términos de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A = 0,3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o
0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de reti-
no! (3,3 Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de
di-alfa tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de
d-alfa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67 y
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
6348 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Monoclorhidrato de tiazol, 3-[(4-amino-2-metil-5-pirimi-
dinil)metilj-5-(2-hidroxietil)-4-metil-, cloruro.
C12H11CIN40S · HCI 337,27
ER Vitamina A USP
Acetato de 3 7-dimetil-9-(2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-
1-il) 2 4 6 8~nonatetraen-1-ol (acetato de vitamina A).
' 1 1
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles,
Tabletas
DEFINICIÓN
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con-
tienen una o más de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol (Vitamina D2)
o Colecalciferol (Vitamina D3), Vitamina E, Fitonadiona (Vi-
tamina K1) y Beta Caroteri~; y una ,o r:nás de las siguientes
vitaminas hidrosolubles: Ac1do Ascorb1co o su equivalente
como Ascorbato de Calcio o Ascorbato de Sodio, Biotina,
Cianocobalamina, Ácido Fólico, Niacina o Niacinamida,
Ácido Pantoténico (como Pantotenato de Calcio o Panto-
tenato de Calcio Racémico), Clorhidrato de Piridoxina, Ri-
boflavina y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato de Tia-
mina. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y no
más de 165,0% de las cantidades declaradas de vitamina
A (C20H300) como retino! o ésteres de retino! en la forma
de acetato de retinilo (C22H32Ü2) o palmitato de retinilo
(C36H600 2), vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü) o er-
gocalciferol (C2 8 H44Q); vitamina E ~orno alfa tocoferol .
(C29Hso02), acetato de alfa tocofenlo (C31 Hs2Ü3) o SUCCl-
nato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs), fitonadiona
(C31H46Ü2) y beta caroteno (C40Hs6); y no menos de
90,0% y no más de 150,0% de las cantidades declaradas
de ácido ascórbico (C6Hs06) o sus sales, como ascorbato
de calcio (C12H14Ca012 · 2H20) o ascorbato de sodio
(C6H1Na06); biotina (C10H16N203S); cianocobalamina
(C63HssCoN14Ü14P); ácido fólico (C19H19N106); niacina
(C6H5 N02) o niacinamida (C6H6N20); pantotenato de cal-
cio (C1sH32CaN2010); clorhidrato de piridoxina (CsH11 NQ3 ·
HCI); riboflavina (C17H20N406) y tiamina (C12H17CIN4QS)
como clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
No contienen minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-Cuando se proporcione más de un método de valo-
ración para un ingrediente individual, los requisitos se pue-
den cumplir siguiendo cualquiera de los métodos especifica-
dos, declarando el método usado en el etiquetado
únicamente si no se usa el Método 1.]
• VITAMINA A, Método 1
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un éster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma química presente
en la formulación. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar: 15 µg/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/rnL de
palmitato de retinilo en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un recipiente con tapa de rosca
USP 37
con recubrimiento interno de teflón. Agregar 1O mL de
dimetil sulfóxido y 15 rnL de n-hexano, y agitar durante
45 minutos en un agitador de movimiento tipo muñeca
(wrist-action) en un baño de agua mantenido a 60º.
[NOTA-Ajustar el agitador de movimiento tipo muñeca
para asegurar que el contenido del recipiente se mezcle
vigorosa y meticulosamente.] Centrifugar a 3000 rprn
durante 1O minutos y transferir la capa de hexano con
una pipeta a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar 15 mL de n-hexano a la capa de dimetil sulfóxid?,
agitar meticulosamente durante 5 minutos y transferir la
capa de hexano con una pipeta a un. ,matraz volurné-.
trico de 100 ml. Repetir esta extracc1on con tres porcio-
nes adicionales de 15 mL de n-hexano. Diluir los extrac-
tos en el matraz volumétrico con n-hexano a volumen.
Diluir un volumen de 1O rnL de esta solución con n-
hexano hasta obtener una solución con una concentra-
ción de 15 µg/mL de vitamina A corno retino!
(C20H300).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
ción muestra. Para productos que contengan acetato
de vitamina A o palmitato de vitamina A, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de vitamina A,
como retino! (C20H300), en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
r5 = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
C5 = concentración de acetato de retinilo
(C22H32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A como
retinol (C 20 H3o0) en la Solución muestra
(µg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü)
• VITAMINA A, Método 2
[NOTA-Cuando se indica un éster de vitamina A. (a.cetato
de retinilo o palmitato de retinilo) en el proced1m1ento
siguiente, usar la forma química presente .e~ la formula-
ción. ER Vitamina A USP es acetato de ret1rnlo. Se debe
usar cuando se especifique ER Vitamina A USP. Usar ma-
terial de vidrio con protección actínica durante todo
este procedimiento.J
Solución de ácido sulfúrico rnetanólico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 mL de ácido sulfúrico a 80 mL de
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6349
metano! en un matraz volumétrico de 1 00 ml. Enfriar y
diluir con metano! a volumen.
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 100 ml, y agregar agua sufi-
ciente para disolver. Agregar 1,7 ml de ácido sulfúrico y
diluir con agua a volumen.
Solución de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase móvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7: 0,3)
Solución estándar: 15 µg/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
ml de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulación.] Reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Si la vitamina D se encuentra presente en la formu-
lación, transferir una porción del polvo, equivalente a
30 µg de la cantidad declarada de colecalciferol o ergo-
calciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de teflón. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulación,
usar una porción del polvo, equivalente a 90 mg de la
cantidad declarada de vitamina E (como alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o hemisuccinato de alfa toco-
ferilo). Si la vitamina E no se encuentra presente en la
formulación, usar una porción del polvo, equivalente a
2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina A, como
acetato de retinilo o palmitato de retinilo. Agregar 0,5 g
de bicarbonato de sodio, 1,5 ml de Solución de lecitina
y 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un
mezclador de vórtice. Agregar 6 ml de Solución de as-
corbato de sodio-pirogalol, agitar lentamente y dejar que
la solución se desgasifique. Continuar agitando hasta
que haya cesado ra emisión de gases y ruego agitar
durante 12 minutos adicionales. Agregar 6 ml de dime-
til sulfóxido, mezclar en un mezclador de vórtice hasta
formar una suspensión y agitar durante 12 minutos.
Agregar 6 ml de Solución de ácido sulfúrico metanólico
3 N, mezclar en un mezclador de vórtice para formar
una suspensión y agitar durante 12 minutos. Agregar
12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en un mez-
clador de vórtice hasta formar una suspensión y agitar
durante 1 O minutos. Centrifugar durante 1 O minutos
para romper la emulsión y para que el sobrenadante se
torne transparente. [NOTA-El sobrenadante se usa para
la determinación de vitamina A, así como para vitamina
D y vitamina E, si se encuentran presentes en la formu-
lación.] Si fuera necesario, diluir cuantitativamente un
volumen del sobrenadante con 2,2,4-trimetilpentano
hasta obtener una concentración cercana a la de la So-
lución estándar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 8,0 entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3 0%
Análisis '
Muestras: Solucion estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solucion estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
fo~ma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
c1on muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C2oHioO), en la porción de Ta-
bletas tomada:
Resultado= (ru/11) x (C/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solucion muestra
r1 = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
e, = concentración de acetato de retinilo
(C22H120:>), a partir de ER Vitamina A USP en
la Solución estándar (~tg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A como
retino! (C20HioO) en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentración nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C 20 H3 0 0)
• VITAMINA A, Método 3
[NOTA-Cuando se indica un éster de vitamina A (acetato
de retinilo o palmitato de retinilo) en el procedimiento
siguiente, usar la forma química presente en la formula-
ción. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo. Se debe
usar cuando se especifique ER Vitamina A USP. Usar ma-
terial de vidrio con protección actínica durante todo
este procedimiento.]
Disolvente de extracción: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solución de hidróxido de potasio: 800 mg/ml de hi-
dróxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidróxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/ml de pirogalol en alcohol
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (92:8)
Solución madre del estándar: 30 µg/ml de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solución se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solución estándar: Diluir un volumen de Solución ma-
dre del estándar con Diluyente hasta obtener una con-
centración de 1 µg/ml de ER Vitamina A USP. Transferir
10,0 ml de esta solución a un matraz de 125 ml con
tapón y agregar 5 ml de agua, 5 ml de Diluyente y
3 ml de Solución de hidróxido de potasio. Tapar herméti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un baño de
agua mantenido a 60 ± 5º y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 ml de agua y 25,0 ml de Disolvente
de extracción. Tapar herméticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 ml de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos para que las capas se separen. Retirar una
porción de la capa orgánica para inyectarla en el cro-
matógrafo. Esta Solución estándar contiene 0,34 µg/ml
de retino!.
Solución muestra: Reducir a polvo fino un número
contado de Tabletas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a 1,5 mg de acetato de retinilo, a un ma-
traz de 125 ml con tapón. Agregar 5 ml de agua,
15 ml de Diluyente y 3 ml de Solución de hidroxido de
6350 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
potasio. Tapar herméticamente, agitar durante 15 minu-
tos sobre un baño de agua mantenido a 60 ± 5° y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar 7 ml de agua y
25,0 ml de Disolvente de extracción. Tapar hermética-
mente y agitar vigorosamente durante 60 segundos o
más, si fuera necesario, para completar la extracción.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 ml de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que las capas
se separen. [NOTA-No agitar porque podría formarse
una emulsión.] Retirar una porción de la capa orgánica
y diluir con Disolvente de extracción hasta obtener una
concentración de O, 34 µg/ml de retino l.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 4 ml/min
Volumen de inyección: 50 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para 1 3-cis-
retinol y la forma todo trans de retinol son 0,92 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de la forma todo trans de
retinol y 1 3-cis-retinof. Calcular el porcentaje de la
cantidad declarada de vitamina A, como retinol
(C20H30Ü), en la porción de Tabletas tomada:
Resultado= (rn/rn) x (Cs/Cu) x F x 100
rn = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retinol y 1 3-cis-retinol de la
Solución muestra
rr2 = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retinol y 13-cis-retinol de la
Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(CnH32Ü2) de ER Vitamina A USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü) en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA O), Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actínica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solución a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vacío a temperatura am-
biente hasta obtener una concentración de 2 µg/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 ~tm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C23H44Ü) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r,) x (Cs!Cu) x Fx 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/mL)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solución
muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA O), Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, Solución
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solución de lecitina
y Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 2.
Fase móvil: n-Hexano y alcohol butílico terciario
(98,75: 1,25)
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6351
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(CnH44Ü) o ergocalciterol (C2sH44Ü) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r1 = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción inicial
de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular la
concentración nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• (OLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
,procedimiento.]
Acido acético diluido: Solución de ácido acético glacial
(1 en 1 O) en agua
Solución de fenolftaleína: 1O mg/ml de fenolftaleína
en alcohol
Solución de hidróxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidróxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar a
diario.
Disolvente de extracción: Cloruro de metileno y al-
cohol isopropílico (99,8: 0,2)
Fase móvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solución madre del estándar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o de ER Ergocalciferol USP en alcohol des-
hidratado. [NOTA-Preparar nuevamente cada 4 sema-
nas. Almacenar en un congelador.]
Solución estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción en fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isopropílico (4:1 ), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extracción. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solución madre
del estándar con alcohol deshidratado hasta obtener
una concentración de 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP
o de ER Ergocalciferol USP. Preparar esta solución en el
día de su uso. Transferir 2,0 ml de esta solución a un
matraz de 125 ml con tapón. Agregar 15,0 ml de agua
y 15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio, tapar y
agitar durante 30 minutos en un baño de agua mante-
nido a 60º. Dejar que se enfríe a temperatura ambiente
y transferir el contenido del matraz a un embudo de
separación de 250 ml. Agregar 15,0 ml de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente y transferir esta solu-
ción al embudo de separación. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separación. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos y dejar en reposo durante 15 minutos hasta
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la capa de hexano
en el embudo de separación, tapar y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solución de fenolftaleína,y 15,0 ml de agua al
embudo de separación. Agregar Acido acético diluido
gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1O minutos hasta que las ca-
pas se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Fil-
trar la capa de hexano a través de sulfato de sodio an-
hidro, colocado en un pequeño trozo de algodón, en
un matraz de fondo redondo de 100 ml. Enjuagar el
embudo y el sulfato de sodio con unos pocos ml de n-
hexano y recoger los enjuagues en el mismo matraz.
Evaporar el hexano en el matraz en un evaporador rota-
torio a 50º hasta sequedad. Agregar inmediatamente
2,0 ml de Disolvente de extracción para disolver el resi-
duo. Transferir esta solución a una columna de extrac-
ción en fase sólida recientemente acondicionada que
contenga relleno de sílice con una relación entre la
masa de sorbente y el volumen de la columna de
500 mg a 2,8 ml o equivalente, enjuagar el matraz de
fondo redondo con 1,0 ml de Disolvente de extracción y
transferir a la columna. Eluir la columna con 2,0 ml de
Disolvente de extracción y desechar esta fracción. Eluir la
columna con 7,0 ml de Disolvente de extracción y reco-
ger el eluato en un matraz adecuado. Colocar el matraz
en un baño de agua tibia mantenido a 42º y evaporar
el disolvente con ayuda de una corriente de nitrógeno.
Agregar inmediatamente 2,0 ml de acetonitrilo al resi-
duo y usar la solución para inyectarla en el
cromatógrafo.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1O µg de colecalciferol o ergocalciferol, a un
matraz de 125 ml con tapón y proceder según se in-
dica en Solución estándar, comenzando donde dice
"Agregar 15,0 ml de agua y 15,0 ml de Solución de
hidróxido de potasio".
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 27°
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 4,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Q) o ergocalciferol (C23H44Q) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Q)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• VITAMINA E, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 1 00) en
agua
6352 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Fase móvil: Metano! y Solución A (19:1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de 0,65 mg/mL de ER Ergocalciferol USP en metanol.
Transferir 1,0 mL de esta solución a un matraz volumé-
trico de 100 mL que contenga 100 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 mL de metano!,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario, y diluir con
metano! a volumen. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: 2 mg/mL de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 7. Transferir no menos
de 20 mL de esta solución a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vacío a temperatura am-
biente hasta sequedad. Transferir el residuo con ayuda
de metano! a un matraz volumétrico adecuado y diluir
con metano! a volumen para obtener una concentra-
ción de 2 mg/mL de alfa tocoferol, acetato de alfa toco-
ferilo o succinato ácido de alfa tocoferilo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solución de aptitud del
sistema
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 1,2, Solución de apti-
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29HsoÜ2),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mc;¡/mL)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29HsoÜ2),
acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C3Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
USP 37
Fase móvil: Mezclar 240 mL de metano! con 1 O mL de
agua seguidos de 0,5 mL de ácido fosfórico al 50% y
diluir con acetonitrilo hasta 1 000 ml.
Solución de aptitud del sistema: 2 mg/mL de ER Alfa
Tocoferol USP, de, ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metano!
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución muestra: Proceder según se indica en Solución
muestra en Vitamina A, Método 2. Transferir un volumen
del sobrenadante de la capa de 2,2,4-trimetilpentano a
un matraz volumétrico adecuado, donde el volumen de
la muestra retirada de la capa de 2,2,4-trimetilpentano
y el tamaño del matraz volumétrico sean tales que la
concentración final de la Solución muestra equivalga a la
de la Solución estándar. Evaporar casi hasta sequedad,
agregar varios ml de metanol y evaporar el 2,2,4-trime-
tilpentano remanente. Diluir con metano! a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para succi-
nato ácido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre succinato ácido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol; y no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
ción de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mg/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilución para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metano! para calcular la concentración
nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29HsoÜ2),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 3
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase móvil: Metano!, acetonitrilo y n-hexano (46,5:
46,5: 7,0)
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6353
Solución estándar: 0,3 mg/mL de ER Alfa Tocoferol
USP en metanol
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 8 mg de alfa tocoferol, a un matraz de 125 mL
equipado con una junta de vidrio esmerilado. Agregar
25,0 mL de agua, 25,0 mL de alcohol deshidratado y
3,5 g de pellets de hidróxido de potasio. Agitar durante
1 hora en un baño de agua mantenido a 55º. Enfriar y
transferir con ayuda de un volumen mínimo de agua a
un embudo de separación de 125 ml. Enjuagar el ma-
traz con 50 mL de n-hexano y agregar el enjuague al
embudo de separación. Tapar, agitar vigorosamente du-
rante 60 segundos y dejar que las capas se separen.
Escurrir la capa acuosa en un segundo embudo de se-
paración de 250 mL y repetir la extracción con 50 mL
de n-hexano. Desechar la capa acuosa y combinar los
extractos de hexano. Lavar los extractos combinados
con 25 mL de agua, dejar que las capas se separen y
desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de ácido acé-
tico glacial y repetir el procedimiento de lavado dos
veces más. Filtrar la capa de hexano lavada a través de
sulfato de sodio anhidro en un matraz de fondo re-
dondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato de
sodio con unos pocos mL de n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Colocar
el matraz en un baño de agua mantenido a 50º y eva-
porar la solución de hexano con ayuda de un evapora-
dor rotatorio hasta sequedad. Agregar inmediatamente
25,0 mL de Diluyente y agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (C29Hso02), en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
rs = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
Cs = concentración de alfa tocoferol en la Solución
estándar (mg/mL)
Cu =concentración nominal de vitamina E como
alfa tocoferol en la Solución muestra (mg/mL)
[NOTA-Calcular el contenido de acetato de alfa tocofe-
rilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido de alfa tocoferilo
(C33Hs4Üs) dividiendo el contenido, en mg/Tableta de
vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02), por el factor
0,91 ó 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• FITONADIONA, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metano! y agua (19: 1)
Solución madre del estándar: 200 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/mL de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/mL de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metanol, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solución estándar: 20 µg/mL de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metanol
Solución muestra: Transferir no menos de 20 mL de la
solución reservada según se especifica en las instruccio-
nes para Solución muestra en Vitamina A, Método 1 a un
recipiente adecuado y evaporar, si fuera necesario al va-
cío a temperatura ambiente hasta sequedad. Transferir
el residuo con ayuda de metanol a un matraz volumé-
trico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentración de 20 µg/mL de
fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son 0,68 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C31 H4602) en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de fitonadiona de la Solución
muestra
rs = área del pico de fitonadiona de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
• FITONADIONA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente: Metanol y alcohol isopropílico (19: 1)
Fase móvil: Mezclar 800 mL de metanol, 200 mL de
cloruro de metileno, O, 1 mL de ácido acético glacial,
1,36 ~ de cloruro de cinc y 0,41 g de acetato de sodio.
Solucion de estándar interno: 5 µg/mL de menaqui-
nona 4 (vitamina K2) en Disolvente. LNOTA-Una solu-
ción madre concentrada de menaquinona 4 (100 µg/
mL) puede almacenarse durante 2 meses en un
refrigerador.]
Solución madre del estándar: 5 µg/mL de ER Fitona-
diona USP, que se prepara disolviendo en cloruro de
metileno con ayuda de ultrasonido y diluyendo con Di-
solvente a volumen final.
Solución estándar: Transferir 1,0 mL de Solución madre
del estándar y 1,0 mL de Solución de estándar interno a
un matraz adecuado, y diluir con Disolvente hasta 5 mL.
6354 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Pasar a través de un filtro de membrana con un tamaño
de poro de 0,45 µm o menor.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de polvo, que no
exceda de 800 mg y equivalente a una cantidad de fito-
nadiona que no exceda de 50 µg, a un tubo de centrí-
fuga con tapón. Agregar 4 ml de agua. Tapar y mezclar
usando un mezclador de vórtice hasta que la muestra
se disperse. Colocar el tubo en un baño de agua a 60º
durante 5 minutos. Retirar del baño y agitar de nuevo o
mezclar usando un mezclador de vórtice durante 1 mi-
nuto mientras la preparación aún esté caliente. Agregar
8 ml de alcohol y agitar el contenido por rotación
suave hasta mezclar. Colocar el tubo en un baño de
agua a 60º durante 5 minutos. Retirar del baño y agitar
de nuevo o mezclar usando un mezclador de vórtice
durante 2 minutos mientras la preparación aún esté ca-
liente. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar un volu-
men de Solución de estándar interno, equivalente a
1,0 ml por cada 5 µg de la cantidad esperada de fito-
nadiona en la alícuota tomada. Agregar 20,0 ml de éter
de petróleo y tapar el tubo hermeticamente. Agitar o
mezclar usando un mezclador de vórtice durante 15 mi-
nutos para mezclar minuciosamente el contenido. Cen-
trifugar hasta separar las dos capas. Transferir un volu-
men de la capa superior de éter de petróleo,
equivalente a 5-50 µg de la cantidad nominal de fitona-
diona, a un matraz apropiado. Colocar el matraz en un
baño de agua a 35º--45º y evaporar el disolvente bajo
una corriente de nitrógeno hasta que únicamente
quede un residuo oleoso. Disolver el residuo en un vo-
lumen de Disolvente para obtener una concentración de
1 µg/ml de fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Detector fluorométrico ajustado a 320 nm
para excitación y 420 nm para emisión
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno exhaustivo (end-
capped) L1 de 5 µm y un reactor postcolumna consti-
tuido por una columna PEEK, de 4,6 mm x 3 cm, con
relleno bien apretado de polvo de cinc. [NOTA-Prepa-
rar el reactor postcolumna a diario, o según sea nece-
sario, para cumplir con los requisitos de aptitud del
sistema.]
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para el están-
dar interno y fitonadiona son 1,0 y 1,4,
respectivamente.]
Re9uisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 2500 platos
teóricos para el pico de fitonadiona
Factor de asimetría: No más de 1,5 para el pico de
fitonadiona
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C31 H4602) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado =(Ru/ Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru =cociente de respuesta entre los picos de
fitonadiona y estándar interno de la Solución
muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
fitonadiona y estándar interno de la Solución
estándar
Cs =concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/mL)
Cu =concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/mL)
USP 37
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (Ci1 H4002)
• BETA (AROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución de hidróxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidróxido de potasio en 50 ml de agua.
Solución de yodo: 0,01 mg/ml de yodo en ciclohe-
xano. [NOTA-Preparar esta solución en el día de su
uso.]
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas. Mo-
ler las Tabletas a polvo fino y transferir una cantidad del
polvo, equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un ma-
traz de saponificación de 500 ml. Agregar 100 ml de
alcohol, 6 ml de Solución de hidróxido de potasio y una
barra mezcladora magnética. Acoplar un condensador
de aire al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 mi-
nutos mezclando constantemente. Enfriar a temperatura
ambiente. Agregar 1 70 ml de éter de petróleo y mez-
clar durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el
contenido del matraz a un embudo de separación de
500 ml con porciones de éter de petróleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgánica superior a un matraz volumétrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificación. Agregar 170 ml de éter de petróleo y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cación al embudo de separación con ayuda de porcio-
nes de éter de petróleo. Dejar que las capas se separen
durante 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgánica al matraz volumé-
trico que contenga la capa orgánica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separación con porciones
pequeñas de éter de petróleo y transferir los lavados al
matraz volumétrico. Diluir los extractos etéreos con éter
de petróleo a volumen. Agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solución, equivalente a
100 µg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrógeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solución de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un baño de agua mantenido a 65º. Enfriar
rápidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución muestra
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(C40Hs6) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Au!F) x (100/Cu)
Au =absorbancia de la Solución muestra
F =absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
, declaradg de beta caroteno (C40Hs6)
• ACIDO ASCORBICO
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 100 mg de ácido ascórbico, a un matraz volu-
métrico de 200 ml y agregar 75 ml de ácido metafos-
fórico-ácido acético SR. Tapar el matraz y agitar
mecánicamente durante 30 minutos. Diluir con agua a
volumen. Transferir una porción de la solución a un
tubo de centrífuga y centrifugar hasta obtener un so-
brenadante transparente. Pipetear y transferir 4,0 ml de
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6355
esta solución a un matraz Erlenmeyer de 50 ml y agre-
gar 5 ml de ácido metafosfórico-acido acético SR.
Análisis: Valorar con solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solución estándar de diclorofenol-indofenol consumido
por una mezcla de 5,5 ml de ácido metafosfórico-ácido
acético SR y 15 ml de agua. A partir del equivalente de
ácido ascórbico de la solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV, calcular el contenido de ácido ascór-
bico en cada Tableta.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6Hs06) , rotación suave hasta humedecer el contenido. Calentar
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2f-fa0)
• ASCORBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
• BIOTINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de ácido fosfórico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfóxido
Solución estándar: 5 µg/ml de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solución madre del estándar en agua.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1 mg de biotina, a un matraz volumétrico de
200 ml. Agregar 3 ml de dimetil sulfóxido y agitar por
rotación suave hasta humedecer el contenido. Colocar
el matraz en un baño de agua a 60º-70º durante 5
minutos. Someter a ultrasonido durante 5 minutos, di-
luir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N2Ü3S) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
rs = área del pico de biotina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20iS)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: O, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
a9ua, que se prepara diluyendo Solución madre del es-
tandar con agua el día de la valoración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 100 µg de biotina, a un matraz volumétrico de
200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al 50% y agitar por
el matraz en un baño de agua a 60º-70º durante 5
minutos. Someter a ultrasonido durante 5 minutos, di-
luir con alcohol al 50% a volumen y filtrar. Diluir un
volumen del filtrado, cuantitativamente y si fuera nece-
sario en diluciones sucesivas, con agua hasta obtener
una solución con una concentración de O, 1 ng/ml.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
1 00 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y agregar agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1 O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1 O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-ami-
nobenzoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhi-
drato de piridoxina en una mezcla de alcohol neutrali-
zado y agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas, de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
 6356 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de polisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 q
Acetato de sodio anhidro So
Solución de adenina-ouanina-uracilo 5 ml
Solución de pantotenato de calcio 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de piridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la m~z­
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan O 5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de en~ayo que contengan 5,0 mL de S~lución fY1_C?dre de
medio basal. Tapar los tubos con algodon, estenhzar en
un autoclave a 121 º durante 15 minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un inóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Transferir células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1 O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37° mantenida te~r;iostá­
ticamente con un margen de ±0,5º. La suspens1on de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados para la
Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradifla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de Jnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos _que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
1 ATCC Nº 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobacil/us arabinosus 17-5.
USP 37
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba- .
ción, no se presente un aumento significati~o de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel mas alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotómetro. Colocar la celda en
un espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o m~s. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (Ls)
como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en función
del logaritmo de los mL de la Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de _la Solución mu_estra
(Lu). Leer, a partir de la surva ~standar, el logar.1tmo
del volumen de la Solucion estandar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el loga-
ritmo del volumen, en mL, de la Solución muestra para
obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifica-
ción. Promediar los valores de X para cada uno de los
tres o más niveles de dosificación para obtener X, que
es igual al logaritmo de la potencia relativa, M', de la
Solución muestra. Determinar la cantidad, en µg, de
biotina (C10H16N2Ü3S) en la porción de Tabletas
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de biotina que se supuso
estaban presentes en la porción de Tabletas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N203S) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de biotina en la porción de
Tabletas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las pot~ncias M es no m~s de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la pote,npa valorada ~el
material de prueba (ver Diseño y An~l/Sls de Valo;a~/Ones
Biológicas (111 ), El Intervalo d~ Cor:f1anza )". los L1m1tes ,de
la Potencia). Si las dos determinaciones d1f1eren en mas
de O 08 realizar una o más determinaciones adiciona-
les. Á p~rtir de la media de dos o más valores .de M gue
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando.
 USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6357
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• BIOTINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 800 mL de agua y 100 mL de
trietilamina a un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 80 mL de ácido fosfórico al 85% y diluir con agua a
volumen.
Fase móvil: Transferir 80 mL de acetonitrilo y 1 O mL de
Solución A a un matraz volumétrico de 1000 ml. Diluir
con a$1ua a volumen.
Solucion estándar: 0,6 µg/mL de ER Biotina USP en
agua. [NOTA-Se usará una porción de la Solución están-
dar para determinar el porcentaje de recuperación de
biotina a partir del procedimiento de Extracción en fase
sólida.]
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de Tabletas reduci-
das a polvo a un matraz volumétrico para obtener una
concentración nominal de 0,6 µg/mL de biotina. Agre-
gar agua hasta un volumen equivalente al 80% de la
capacidad del matraz, someter a ultrasonido durante
30-40 minutos, mezclando ocasionalmente, hasta disol-
ver. Diluir con a$1ua a volumen y filtrar. Ajustar el pH de
la solución con acido acético diluido o hidróxido de so-
dio O, 1 N a un valor de 6,0-7,0.
Extracción en fase sólida: [NOTA-Acondicionar la co-
lumna de extracción especificada en este procedimiento
de la siguiente manera. Lavar la columna con una por-
ción de 2 mL de metanol. Equilibrar con una porción de
2 mL de agua.] Pipetear y transferir por separado
5,0 mL de Solución muestra y de Solución estándar a co-
lumnas de extracción en fase sólida recientemente
acondicionadas que consistan en un relleno de modo
mixto con una masa de sorbente de 60 mg. [NOTA-El
relleno de modo mixto consiste en sorbentes de inter-
cambio aniónico y de fase reversa. El componente de
fase reversa es un copolímero de N-vinilpirrolidona y
divinilbenceno. La unidad de intercambio aniónico es
un grupo trialquilamino.2]
Lavar la columna con 1 O mL de metanol al 30% (v/v)
en agua. Aplicar a la columna un volumen apropiado
(4,9 ml) de metanol al 30% (v/v) en ácido clorhídrico
O, 1 N. Recoger el eluato en un matraz volumétrico de
5 mL, que contenga 100 µL de acetato de sodio al
40% (p/v) en agua y diluir con metanol al 30% (v/v)
en ácido clorhídrico O, 1 N a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y una porción de la Solu-
ción estándar que se haya sometido a una Extracción en
fase sólida
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar y la Solución estándar que se haya so-
metido a una Extracción en fase sólida
Recuperación: 95%-100%, Solución estándar que se
haya sometido a una Extracción en fase sólida
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra que se
hayan sometido las dos a una Extracción en fase sólida
2 Un cartucho adecuado es el cartucho Waters, Oasis MAX Vac RC con un
tamaño de partícula de 30 µm, parte 186000371. ' tancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 mL de
Me.dir el área d~I pico de biotina. Calcular el porcen-
taie de la cantidad declarada de biotina
(CioH16N20 iS) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
rs = área del pico de biotina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
• CIANOCOBALAMINA, Método 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metanol y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/mL de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 100 µg de cianocobalamina, a un matraz de
250 ml. Agregar cuantitativamente 100,0 mL de agua y
extraer cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar
1 O mL del extracto Y. usar el filtrado.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de cianocobalamina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de cianocobala-
mina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de cianocobalamina de la
Solución muestra
rs = área del pico de cianocobalamina de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HssCoN140 14 P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar: 1,0 µg/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal, que después del periodo de incubación se-
gún se describe en Análisis, la diferencia en la transmi-
Solución estándar sea no menos del correspondiente a
una diferencia de 1,25 mg en peso de las células secas.
6358 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Esta concentración por lo general está entre 0,01 y 0,04
ng/ml de Solución estándar. Preparar esta solución nue-
vamente para cada valoración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción de las Tabletas redu-
cidas a polvo, equivalente a 1,0 µg de cianocobalamina,
a un vaso apropiado que contenga, por cada g de Ta-
bletas reducidas a polvo tomado, 25 ml de una solu-
ción de extracción acuosa preparada justo antes de .su,
uso que contiene, cada 1 00 ml, 1,29 g de fosfato d1ba-
sico de sodio, 1, 1 g de ácido cítrico anhidro y 1,0 g de
metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 º du-
rante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier partí-
cula del extracto sin disolver y filtrar o centrifugar, si
fuera necesario. Diluir una alícuota de la solucion trans-
parente con agua hasta obtener una solución final que
contenga una actividad de vitamina B12 equivalente a la
actividad nominal de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún se indica en Biotina, Método 2.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparag1na
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
se indica en Biotina, Método 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 ml ?~
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los soli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásíco
de potasio y 1 O g de fosfato díbásíco de potasio en
agua para obtener 200 ml. Agregar 2 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polísor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de ríboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tía mina, 100 µg de biotína y
20 mg de níacina en ácido acético 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion vitamínica B: Disolver 20 mg de ácido p-amí-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de ca_lcío, 40 mg. ~e
clorhidrato de pirídoxina, 40 mg de clorhidrato de p1n-
doxal, 8 m.9. de diclorhidrato de pirídoxamina y 2 mg
de ácido folíco en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz. . que se disuelva el agar. Colocar porciones de. 1 O ml de
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga lc;>s
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en ~I etiqueta<;Jo, produzc? un me-
dio comparable al obtenido de la formula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
2, disolviendo cuidadosamente Cistina y Triptófano en
Ácido clorhídrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solución resultante. Agregar 1,00 ml de
agua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Aci~? as-
córbico. Filtrar, sí fuera necesario. Agregar Soluoon de
polisorbato 80, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un
pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificada hasta
250 ml.
USP 37
Tabla 2
----·~ --------
L-Cistina o1 (]
L-Triotófano O 05 a
Ácido clorhídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de xantina 5 ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de asparaaina 5 ml
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 q
Ácido ascórbico 1 q
Solución de QOlisorbato 80 5 ml
.
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesa.río, hasta obtener.
un filtrado transparente de color pa11zo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: lNüTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya según se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivale.nte al obte~
nido de la fórmula provista en este proced1m1ento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásíco de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar
1 O ml de Preparación de jugo de tomate y 1 ml de Solu-
ción de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua h?;;ta 100 ml.
Colocar porciones de 1 O ml de la soluc1on en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Este~ilízar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar.la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medi?o de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O ml del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se índica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 1 00 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mí-
nut~s y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. Inocular tres o más de los tubos, sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 3
lNOTA-Antes de usar por primera vez en esta. valora-
ción un cultivo recientemente preparado, realizar no
menos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un
período de 2 semanas.] Incubar durante 16--24 horas a
una temperatura entre 30º y 40º mantenida termostáti-
camente con un margen de ±0,5º. Almacenar en un
refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar ~l. lnócu/o
si tienen más de 4 días de preparados. La act1v1dad del
microorganismo se puede íncrem~ntar me~íante trans-
ferencias de una o dos veces al d1a del cultivo por
'Se pueden obtener cultivos puros de Lactobaci!lus !eichmannii (listados como
Lactobocillus delbruecki1) como Nº 7830 de ATCC, 10801 Un1vers1ty Blvd., Ma-
nassas, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6359
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobaci//us leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Transferir células del Cultivo madre de Lactobacillus Jeich-
mannii a dos tubos estériles que contengan 1 O mL de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30º y 40º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º. Centrifugar los cultivos bajo condiciones asépti-
cas y decantar el sobrenadante. Suspender las células
del cultivo en 5 mL de Medio de suspensión estéril y
combinar. Usando Medio de suspensión estéril, ajustar
el volumen de manera que una dilución 1 en 20 en
solución salina SR produzca una transmitancia del 70%
cuando se lee en un espectrofotómetro adecuado ajus-
tado a una longitud de onda de 530 nm, equipado
con una celda de 1 O mm y leída contra solucion salina
SR ajustada a una transmitancia del 100%. Preparar
una dilución 1 en 400 de la suspensión ajustada
usando Solución madre de medio basal estéril. [NOTA-
Esta dilución se puede alterar, cuando sea necesario,
para obtener la respuesta de prueba deseada.] La sus-
pensión de células así obtenida es el Jnóculo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, y con fa longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por. 9uplic?do, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Soluoon estandar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no más de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zación y enfriamiento durante toda la valoración, de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o si se
sobrecarga el autoclave puede ocasionar variaciones en
la velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 mL de Jnócu/o a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. Este estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o más. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminación con un microorganismo extraño, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (Ls) como la diferencia, y =
2,00 - Ls. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los mL
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmética o loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la recta o la curva de regresión
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente
a cada uno de los valores de y comprendidos dentro
del intervalo entre los puntos extremos graficados
para el Estándar. Restar de cada logaritmo así obte-
nido el logaritmo del volumen, en mL, de la Solución
muestra para obtener la diferencia, X, para cada nivel
de dosificación. Promediar los valores de X para cada
uno de los tres o más niveles de dosificación para
obtener X, que es igual al logaritmo de la potencia
relativa, M', de la Solución muestra. Determinar la
cantidad, en µg, de cianocobalamina (C63HssCo
N14Ü14P) en la porción de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porción de
Tabletas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = [(antilog M)!N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Tabletas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Actividad de Vitamina 812
en Diseño y Análisis de Va/oraciones Biológicas (111 ), El
Intervalo de Confianza y los Límites de la Potencia). Si
las dos determinaciones difieren en más de 0,08, reali-
zar una o más determinaciones adicionales. A partir de
la media de dos o más valores de M que no difieran
6360 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
en más de O, 15, calcular la potencia media de la pre-
paración que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de ci,anocobalamina (C53HssCoN14Ü14P)
• ACIDO FOLICO, Metodo 1
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
al 25% en metanol
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
matraz volumétrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
dróxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de ácido fosfórico 3 N y 240 ml de metanol.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso agregando agua o metanol a la Fase móvil pre-
parada para obtener una separación de la línea base
entre el ácido fálico y el estándar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (de 1%-3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
ª.9ua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. , Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Solución estándar: 0,016 mg/ml de ER Acido Fálico
USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 0,4 mg de ácido fálico, a un tubo de centrífuga
de color ámbar de 50 ml. Agregar 25,0 ml de Solución
de estándar interno, agitar mecánicamente durante 1 O
minutos y centrifugar. Filtrar una porción del sobrena-
dante transparente Y. usar el filtrado.
Sistema cromatografico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fálico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fálico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de ácido fálico (C19H19N106) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs!Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fóli~o y metilparabeno de la Solución
estandar
USP 37
Cs = concentración de ER Ácido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fálico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de á~ido fólico (C19H19N10 6)
• Ac100 Fouco, Metodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: Disolver 7,5 g de edetato disódico, mez-
clando, en 500 ml de agua que contenga 1O ml de
hidróxido de amonio.
Diluyente: 60 µg/ml de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15 ml de
ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un matraz
volumétrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosulfonato
de sodio 0,008 M a volumen. ,
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Acido
Fálico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
del estándar con 10,0 ml de metanol y 35,0 ml de Re-
activo. Agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Solución muestra: Transferir una porción de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 0,3 mg de ácido
fólico, a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de metanol y 35,0 ml de Reactivo. Agitar du-
rante 15 minutos en un baño de agua mantenido a 60º
y enfriar. Filtrar, desechando los primeros ml del
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fálico
(C19H19N1Ü5) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de ácido fólico de la Solución
muestra
r5 = área del pico de ácido fólico de la Solución
estándar ,
Cs = concentración de ER Acido Fálico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fólico (C19H19N106)
• PANTOTENATO DJ CALCIO, Método 1
Fase móvil: Acido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 15 mg de pantotenato de calcio, a un tubo de
centrífuga. Agregar 25,0 ml de Solución de estándar
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6361
interno y agitar vigorosamente durante 1 O minutos.
Centrifugar, filtrar y usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio y
el estándar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2Ü10) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs!Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la humedad mientras se pesa, en 500 ml
de agua en un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 1O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución
de acetato de sodio (1 en 60), y diluir con agua a volu-
men para obtener una concentración de 50 µg/ml de
ER Pantotenato de Calcio USP. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solución estándar, están
dentro de la porción lineal de la curva de respuesta del
logaritmo de la concentración.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 50 mg de pantotenato de calcio, a un matraz
volumétrico de 1000 ml que contenga 500 ml de
agua. Agregar 1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml
de solución de acetato de sodio (1 en 60), diluir con
agua a volumen y filtrar. Diluir un volumen de esta so-
lución hasta obtener una solución con aproximada-
mente la misma concentración que la de la Solución
estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-
biotina: 20 µg/ml de riboflavina, 1 O µg/ml de clorhi-
drato de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acé-
tico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador
y proteger de la luz.
Solución de ácido p--aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-ami-
nobenzoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhi-
drato de piridoxina en una mezcla de alcohol neutrali-
zado y agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 3 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 o
Acetato de sodio anhidro 5 o
Solución de adenina-ouanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de piridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
6362 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnócu/o comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Transferir células del Cultivo madre de Lactobacil/us plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1 O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostá-
ticamente con un margen de ±0,5º. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados para la
Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 mL. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnócu/o a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura óptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia ('Ls) como la diferencia, y= 2,00 - 'Ls. Graficar esta
USP 37
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la recta
o la curva de regresión que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - 'Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
('Lu). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente
a cada uno de los valores de y comprendidos dentro
del intervalo entre los puntos extremos graficados
para el Estándar. Restar de cada logaritmo así obte-
nido el logaritmo del volumen, en mL, de la Solución
muestra para obtener la diferencia, X, para cada nivel
de dosificación. Promediar los valores de X para cada
uno de los tres o más niveles de dosificación para
obtener X, que es igual al logaritmo de la potencia
relativa, M', de la Solución muestra. Determinar la
cantidad, en mg, de pantotenato de calcio
(CisH32CaN2010) en la porción de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Tabletas tomada
Calcular el porcentaje de pantotenato de calcio
(CisH32CaN2010) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Tabletas tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Va/ora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de 0, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisH32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Solución amortiguadora: Disolver 10,0 g de fosfato
monobásico de potasio en 2000 mL de agua y ajustar
con ácido fosfórico a un pH de 3,5.
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar nuevamente
cada 4 semanas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1 O mg de pantotenato de calcio, a un matraz
volumétrico de 250 mL. Agregar 1 O mL de metanol y
agitar el matraz por rotación suave hasta dispersar. Di-
luir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6363
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
rs = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
• NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94)
Fase móvil: Una mezcla de metano!, ácido acético gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a un matraz volumétrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
baño de agua caliente mantenido a 65º-70º durante 1O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vórtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
sólidos. Enfriar rápidamente en un baño de agua fría
durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solución muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg de clorhidrato
de piridoxina, de riboflavina y de clorhidrato de tia-
mina, a un tubo de centrífuga de 50 ml. Agregar
25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un mezclador
de vórtice durante 30 segundos para suspender por
completo el polvo. Sumergir el tubo de centrífuga en
un baño de agua caliente mantenido a 65º-70º, calen-
tar durante 5 minutos y mezclar en un mezclador de
vórtice durante 30 segundos. Devolver el tubo al baño
de agua caliente, calentar durante 5 minutos más y
mezclar en un mezclador de vórtice durante 30 segun-
dos. Filtrar una porción de la solución, enfriar a tempe-
ratura ambiente y usar el filtrado transparente. [NOTA-
Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la filtración.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C5H5N20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contienen niacina:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 ·
HCI), riboflavina (C11H20N4Ü5) y clorhidrato de
tiamina (Ci2H11CIN40S · HCI) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
= área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11NsÜ4S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
6364 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20) o niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CBH11 N03 · HCI),
riboflavina (C11H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(Ci2H17Ns04S)
• NIACINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metano! (3:1)
Fase móvil: Solución de acetato de sodio O, 1 M
(13,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
un volumen pequeño de metano! (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulación.] Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 2 mg de riboflavina, a
un matraz volumétrico de 200 ml. Si la riboflavina no
se encuentra presente en la formulación, transferir una
porción del polvo, equivalente a 2 mg de piridoxina. Si
la piridoxina no se encuentra presente en la formula-
cion, usar una porción del polvo, equivalente a 20 mg
de niacina o niacinamida. Agregar 100,0 ml de Disol-
vente de extracción y mezclar durante 20 minutos,
usando un agitador de movimiento tipo muñeca (wrist-
action). Sumergir el matraz en un baño de agua mante-
nido a 70º-75º y calentar durante 20 minutos. Mezclar
en un mezclador de vórtice durante 30 segundos, en-
friar a temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyección.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6Hs02)
• NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
USP 37
Solución A, Disolvente de extracción, Fase móvil, So-
lución madre del estándar, Solución estándar, Solu-
ción muestra, Sistema cromatográfico y Aptitud del
sistema: Usando ER Niacinamida USP en lugar de ER
Niacina USP, proceder según se indica en Niacina, Mé-
todo 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil y Solución mues-
tra: Preparar según se indica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11 N03 · HCI) en la porción de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de piridoxina de la Solución
muestra
rs = área del pico de piridoxina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH 11 N03 · HCI)
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción y Solución muestra: Preparar
según se indica en Niacina, Método 2.
Solución B: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución B y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina fºr L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacia a un pH de
5,2.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6365
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C11H20N406) en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
rs = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en ácido fosfórico al O, 1o/o
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en ácido clorhídrico O 2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Mezclar una porción del polvo con
un volumen de ácido clorhídrico 0,2 N para obtener
una concentración de 0,02 mg/ml de tiamina. Agitar
durante 15 minutos con un agitador de movimiento
tipo muñeca (wrist-action) y calentar a ebullición du-
rante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y fil-
trar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL.
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (Ci2H11CIN405 · HCI) en la porción de Table-
tas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN405 · HCI) o mononitrato de tiamina
(C 12H11Ns04S)
• NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metanol y ácido acético gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etifen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solución muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porción del polvo,
equivalente a 7,5 mg de niacina o niacinamida, 1,2 mg
de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de riboflavina y
1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un matraz de
125 ml con tapón. Agregar 10,0 ml de una mezcla de
metanol y ácido acético glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una
mezcla de metanol y etilenglicol (1 :1). Tapar, agitar du-
rante 15 minutos en un baño de agua mantenido a 60º
y enfriar. Filtrar, desechando los primeros ml del
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
6366 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50v
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
rs = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/mL)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 NQ3 ·
HCI), riboflavina (C, 1H20N406) y clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN4QS · HCI) en la porción de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
rs = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/mL)
M,1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 NQ3 · HCI),
riboflavina (C, 1H20N406) y tia mina como clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN4QS · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
USP 37
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 1
ufc/g y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO:• La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles. La eti-
queta también indica la cantidad de cada vitamina por
unidad de dosificación y, cuando sea necesario, la forma
química presente. Cuando el producto contiene vitamina
E, la etiqueta indica si se trata de la forma do di.
Cuando se proporciona más de un método de valoración
para una vitamina en particular, el etiquetado indica el
método de valoración con el que cumple el producto
únicamente si no se usa el Método 7.
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de,Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP
E~ Biotina USP
Acido hexahidro-2-oxo-3aS-[(3aa,4f3,6aa)]-1 H-tieno[3,4-
,d]imidazol-4-pentanoico;
Acido (3aS,4S,6aR)-hexahidro-2-oxo-1 H-tieno[3,4-d]imi-
dazol-4-valérico.
C10H16N2Ü3S 244,31
ER Pantotenato de Calcio USP
Sal cálcica (1 :2) de (R)-N-(2,4-dihidroxi-3,3-dimetil-
1-oxobutil)-/3-alanina;
D-Pantotenato de calcio (2: 1).
C1sH32CaN2010 476,53
ER Colecalciferol USP
(3f3,5Z,7E)-9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol;
Colecalciferol.
C21H44Ü 384,64
ER Cianocobalamina USP
Vitamina B12.
C63HssCoN14Ü14P 1355,37
ER Ergocalciferol USP
(3f3,5Z,7E,22E)-9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-
3-ol·
Ergo~alciferol.
C2§H44Ü 396,65
ER Acido Fólico USP
Ácido N-[4-[[(2-amino-1,4-dihidro-4-oxo-6-pteridi-
,nil)metil]amino]benzoil]-L-glutámico;
,-,cido fólico;
Acido N-[p-[[(2-amino-4-hidroxi-6-pteridinil)metil]
amino]-benzoil]-L-glutámico.
4 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas también se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en
términos de Unidades además del etiquetado requerido, la relación de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A= 0,3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o
0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de reti-
no! (3,3 Unidades USP de Vitamina A)= 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 µg de colecalciferol o ergocalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de
di-alfa tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de
d-alfa tocoferilo = 1, 36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67 y
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6367
C19H19N106 441,40
ER Niacina USP
Ácido 3-piridincarboxílico;
Acido nicotínico.
C6HsN02 123, 11
ER Niacinamida USP
3-Piridincarboxamida;
Nicotinamida.
C6H6N20 122, 12
ER Fitonadiona USP
[R-[R*,R*-(f)]]-2-Metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-hexa-
decenil)- l ,4-naftalendiona;
Filoquinona.
C31 H4602 450,70
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de 5-hidroxi-6-metil-3,4-piridindimetanol;
Clorhidrato de piridoxol.
CsH11N03 · HCI 205,64
ER Riboflavina USP
Riboflavina.
C17H20N406 376,36
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Monoclorhidrato de cloruro de 3-[(4-amino-2-metil-
5-pirimidinil)metil]-5-(2-hidroxietil)-4-metil-tiazol;
Monoclorhidrato de tiamina.
C12H17CIN4QS · HCI 337,27
ER Vitamina A USP
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
con Minerales, Cápsulas
DEFINICIÓN
Las Cápsulas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con
Minerales contienen una o más de las siguientes vitaminas
oleosolubles: Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol
(Vitamina D2) o Colecalciferol (Vitamina D3), Vitamina E,
Fitonadiona (Vitamina Ki) y Beta Carot~no; una o más de
las siguientes vitaminas hidrosolubles: Acido Ascórbico o
su equivalente como Ascorbato de, Calcio o Ascorbato de
Sodio, Biotina, Cianocobalamina, Acido fólico, Niacina o
Niacinamida, Dexpantenol o Pantenol, Acido Pantoténico
(como Pantotenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Ra-
cémico), Clorhidrato de Piridoxina, Riboflavina y Clorhi-
drato de Tiamina o Mononitrato de Tiamina; y uno o más
minerales, derivados de sustancias generalmente reconoci-
das como seguras, que proporcionan uno o más de los
siguientes elementos en forma ionizable: boro, calcio,
cromo, cobre, flúor, yodo, hierro, magnesio, manganeso,
molibdeno, níquel, fósforo, potasio, selenio, estaño, vana-
dio y cinc. Las Cápsulas contienen no menos de 90,0% y
no más de 165,0% de las cantidades declaradas de vita-
mina A como retinol (C20H30Ü) o ésteres de retinol en la
forma de acetato de retinilo (C22H32Ü2) o palmitato de
retinilo (C36H6002); vitamina D como colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2BH440); vitamina E como alfa
tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3)
o succinato ácido de alfa tocoferilo (C 33 H54 0 5); fitonadiona
(C31 H4602) y beta caroteno (C40Hs6); no menos de 90,0%
y no más de 150,0% de las cantidades declaradas de
ácido ascórbico (C6Hs06), o sus sales como ascorbato de
calcio (C12H14Ca012 · 2H20) o ascorbato de sodio
(C6H1Na06); biotina (C10H16N203S), cianocobalamina
(C63HssCoN14Ü14P), ácido fólico (C19H19N106), niacina
(C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20), dexpantenol
(C9H19NQ4) o pantenol (C9H19NÜ4), pantotenato de calcio
(C1BH32CaN2Ü10), clorhidrato de piridoxina (CsH11NÜ3 ·
HCI), riboflavina (C17H20N406) y tiamina (C12H17CIN40S)
como clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina; y
no menos de 90,0% y no más de 125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P), potasio (K) y cinc
(Zn); y no menos de 90,0% y no más de 160,0% de las
cantidades declaradas de boro (B), cromo (Cr), flúor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se), estaño
(Sn) y vanadio (V).
Pueden contener otras sustancias agregadas declaradas ge-
neralmente reconocidas como seguras, en cantidades
inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.]
• VITAMINA A, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un éster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma química presente
en la formulación. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano
Solución estándar: 15 µg/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/mL de
palmitato de retinilo en n-hexano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cápsulas a un recipiente adecuado, mezclar y
pesar. Transferir una porción de la mezcla, equivalente a
5 Cápsulas, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de teflón. [NOTA-Para Cápsulas de
gelatina dura, retirar, tanto como sea posible, el conte-
nido de no menos de 20 Cápsulas cortando para abrir
las cubiertas de las Cápsulas, transfiriendo las cubiertas
y su contenido a un recipiente adecuado, y triturando
hasta obtener una masa homogénea. Transferir una por-
ción de la masa, equivalente a 5 Cápsulas, a un reci-
piente con tapa de rosca con recubrimiento interno de
teflón.] Agregar 1O mL de dimetil sulfóxido y 15 mL de
n-hexano, y agitar durante 45 minutos en un agitador
de movimiento tipo muñeca (wrist-action) en un baño
de agua mantenido a 60º. [NOTA-Ajustar el agitador
de movimiento tipo muñeca para asegurar que el con-
tenido del recipiente se mezcle vigorosa y meticulosa-
mente.] Centrifugar a 3000 rpm durante 1O minutos y
transferir la capa de hexano con una pipeta a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Agregar 15 mL de n-he-
xano a la capa de dimetil sulfóxido, agitar meticulosa-
mente durante 5 minutos y transferir la capa de hexano
con una pipeta a un matraz volumétrico de 100 ml.
Repetir esta extracción con tres porciones adicionales de
15 mL de n-hexano. Diluir los extractos en el matraz
volumétrico con n-hexano a volumen. Diluir un volu-
men de esta solución con n-hexano hasta obtener una
solución con una concentración de 15 µg/mL de vita-
mina A como retinol (C20H30Ü).
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
6368 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo en el cro-
matograma de la Solución muestra. Para productos
que contengan acetato de vitamina A o palmitato de
vitamina A, calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü), en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H32Ü2) a partir de ER Vitamina A USP en
la Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü) en la Solución muestra
(µg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30Ü)
• VITAMINA A, Método 2
[NOTA-Cuando se indica un éster de vitamina A (acetato
de retinilo o palmitato de retinilo) en el procedimiento
siguiente, usar la forma química presente en la formula-
ción. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo. Se debe
usar cuando se especifique ER Vitamina A USP. Usar ma-
terial de vidrio con protección actínica durante todo
este procedimiento.j
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 mL de ácido sulfúrico a 80 mL de
metanol en un matraz volumétrico de 100 ml. Enfriar y
diluir con metano! a volumen.
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 100 mL y agregar suficiente
agua para disolver. Agregar 1,7 mL de ácido sulfúrico y
diluir con agua a volumen.
Solución de lecitina: 5 mg/mL de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase móvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0,3)
Solución estándar: 15 µg/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solución madre de aptitud del sistema: 15 µg/mL de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solución de aptitud del sistema: Mezclar volúmenes
iguales de Solución madre de aptitud del sistema y Solu-
ción estándar para obtener concentraciones de 7,5 µg/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulación.] Pesar no menos de 20 Capsulas en un frasco
de pesada tarado. Usando una cuchilla afilada si fuera
necesario, abrir cuidadosamente las Cápsulas, sin perder
material de la cubierta, y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
USP 37
a 30 µg de la cantidad declarada de colecalciferol o er-
gocalciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de teflón. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulación,
usar una porción, equivalente a 90 mg de la cantidad
declarada de vitamina E. Si la vitamina E no se encuen-
tra presente en la formulación, usar una porción, equi-
valente a 2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina
A, como retinol. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio,
1,5 mL de Solución de lecitina y 12,5 mL de 2,2,4-trime-
tilpentano, y dispersar en un mezclador de vórtice.
Agregar 6 mL de Solución de ascorbato de sodio-piroga-
lo/, agitar lentamente y dejar que la solución se desgasi-
fique. Continuar agitando hasta que haya cesado la
emisión de gases y luego agitar durante 12 minutos
adicionales. Agregar 6 mL de dimetil sulfóxido, mezclar
en un mezclador de vórtice hasta formar una suspen-
sión y agitar durante 12 minutos. Agregar 6 mL de So-
lución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, mezclar en un
mezclador de vórtice para formar una suspensión y agi-
tar durante 12 minutos. Agregar 12,5 mL de 2,2,4-tri-
metilpentano, mezclar en un mezclador de vórtice hasta
formar una suspensión y agitar durante 1O minutos.
Centrifugar durante 1O minutos para romper la emul-
sión y para que el sobrenadante se torne transparente.
[NOTA-El sobrenadante se usa para la determinación
de vitamina A, así como para vitamina D y vitamina E,
si se encuentran presentes en la formulación.] Si fuera
necesario, diluir cuantitativamente un volumen del so-
brenadante con 2,2,4-trimetilpentano hasta obtener
una concentración cercana a la de la Solución estándar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 8,0 entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
ción muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20H30Ü), en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma todo trans de éster
de retinilo de la Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H32Ü2) a partir de ER Vitamina A USP en
la Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C 20 H30Ü), en la Solución muestra
(µg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentración nominal. Las respuestas molares de
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6369
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H 30 0)
• VITAMINA A, Método 3
[NOTA-Cuando se indica un éster de vitamina A (acetato
de retinilo o palmitato de retinilo) en el procedimiento
siguiente, usar la forma química presente en la formula-
ción. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo. Se debe
usar cuando se especifique ER Vitamina A USP. Usar ma-
terial de vidrio con protección actínica durante todo
este procedimiento.j
Disolvente de extracción: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solución de hidróxido de potasio: 800 mg/ml de hi-
dróxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidróxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1O mg/ml de pirogalol en alcohol
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (92:8)
Solución madre del estándar: 30 µg/ml de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solución se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solución estándar: Diluir un volumen de Solución ma-
dre del estándar con Diluyente hasta obtener una con-
centración de 1 µg/ml de acetato de retinilo a partir de
ER Vitamina A USP. Transferir 10,0 ml de esta solución
a un matraz de 125 ml con tapón y agre!:lar 5 ml de
agua, 5 ml de Diluyente y 3 ml de Solucion de hidróxido
de potasio. Tapar herméticamente, agitar durante 15
minutos sobre un baño de agua mantenido a 60 ± 5º y
enfriar a temperatura ambiente. Agregar 7 ml de agua
y 25,0 ml de Disolvente de extracción. Tapar hermética-
mente y agitar vigorosamente durante 60 segundos.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 ml efe agua y
dejar en reposo durante 1O minutos para que las capas
se separen. Retirar una porción de la capa orgánica para
inyectarla en el cromatografo. Esta Solución estándar
contiene 0,34 µg/ml de retinol.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cápsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cápsulas. Transferir
una porción del contenido de las Cápsulas, equivalente
a 1,5 m<;¡ de acetato de retinilo, a un matraz de 125 ml
con tapon. Agregar 5 ml de agua, 15 ml de Diluyente y
3 ml de Solución de hidróxido de potasio. Tapar herméti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un baño de
agua mantenido a 60 ± 5º y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 ml de agua y 25,0 ml de Disolvente
de extracción. Tapar herméticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos o más, si fuera necesario,
para completar la extracción. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 ml de agua y dejar en reposo durante
1O minutos hasta que las capas se separen. [NOTA-No
agitar porque podría formarse una emulsión.] Retirar
una porción de la capa orgánica y diluir cuantitativa-
mente, y en diluciones sucesivas si fuera necesario, con
Disolvente de extracción hasta obtener una concentra-
ción de 0,34 µg/ml de retinol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40°
Velocidad de flujo: 4 ml/min
Volumen de inyección: 50 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NO}A-Los tiempos de retención relativos para 1 3-cis-
retinol y la forma todo trans de retinol son aproxima-
damente 0,92 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos para la forma todo trans
de retinol y 1 3-cis-retinol.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20H,oO), en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (rn/rT2) x (Cs/Cu) x F x 100
rn = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retinol y 1 3-cis-retinol de la
Solución muestra
rr2 = suma de las áreas de los picos de la forma
todo trans de retinol y 1 3-cis-retinol de la
Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C23H32Ü2) a partir de ER Vitamina A USP en
la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30Ü), en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30 0)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección act1nica durante todo este
procedimiento.]
Fase móvil: n-Hexano y alcohol isopropílico (99:1)
Solución estándar: 2 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Er<;¡ocalciferol USP en n-hexano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra
en Vitamina A, Método 7 a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vacío a temperatura am-
biente para obtener una solución con una concentra-
ción esperada de 2 pg/ml de colecalciferol o
ergocalciferol.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 pm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
6370 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C23H44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
• COLECALCIFEROL
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solución
muestra, 1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, Solución
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solución de lecitina
y Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 2.
Fase móvil: n-Hexano y alcohol butílico terciario
(98,75:1,25)
Solución estándar: 1 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Er~ocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solución estándar a 60º durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Sistema cromato!;Jráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lución de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C2sH44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
r5 = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
USP 37
C = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(~1g/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Método 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección actinica durante todo este
,procedimiento.] .
Acido acético diluido: Solución de ácido acético glacial
(1 en 1O) en agua
Solución de fenolftaleína: 1O mg/ml de fenolftaleína
en alcohol
Solución de hidróxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidróxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar a
diario.
Disolvente de extracción: Cloruro de metileno y al-
cohol isopropílico (99,8:0,2)
Fase móvil: Acetonitrilo y metano! (91 :9)
Solución madre del estándar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar nuevamente cada 4 semanas.
Almacenar en un congelador.]
Solución estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción en fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isopropílico (4:1 ), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extracción. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solución madre
del estándar con alcohol deshidratado hasta obtener
una concentración de 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP
o de ER Ergocalciferol USP. Preparar esta solución en el
día de su uso. Transferir 2,0 ml de esta solución a un
matraz de 125 ml con tapón. Agregar 15,0 ml de agua
y 15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio, tapar y
agitar durante 30 minutos en un baño de agua mante-
nido a 60º. Dejar que se enfríe a temperatura ambiente
y transferir el contenido del matraz a un embudo de
separación de 250 ml. Agregar 15,0 ml de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente y transferir esta solu-
ción al embudo de separación. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separación. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos y dejar en reposo durante 15 minutos hasta
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la capa de hexano
en el embudo de separación, tapar y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1O minutos hasta que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solución d~ fenolftaleína,y_ 15,0 r:n.L de. agua al
embudo de separacion. Agregar Aodo acet1co d1lwdo
gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1O minutos hasta que las ca-
pas se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Fil-
trar la capa de hexano a través de sulfato de sodio an-
hidro, colocado en un pequeño trozo de alg?dón, en
un matraz de fondo redondo de 100 ml. En1uagar el
embudo y el sulfato de sodio con unos pocos ml de n-
hexano y recoger los enjuagues en el mismo matraz.
Evaporar el hexano en el matraz en ~n evaporador rota-
torio a 50º hasta sequedad. Agregar inmediatamente
2,0 ml de Disolvente de extracción para disolver el resi-
duo. Transferir esta solución a una columna de extrac-
ción en fase sólida recientemente acondicionada que
contenga relleno de sílice con una relación entre la
masa de sorbente y el volumen de la columna de
500 mg a 2,8 ml o equivalente, enjuagar el matraz de
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6371
fondo redondo con 1,0 ml de Disolvente de extracción,
y transferir a la columna. Eluir la columna con 2,0 ml
de Disolvente de extracción y desechar esta fracción.
Eluir la columna con 7,0 ml de Disolvente de extracción
y recoger el eluato en un matraz adecuado. Colocar el
matraz en un baño de agua tibia mantenido a 42° y
evaporar el disolvente con ayuda de una corriente de
nitrógeno. Agregar inmediatamente 2,0 ml de acetoni-
trilo al residuo y usar la solución para inyectarla en el
cromatógrafo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 3, hasta "calcular el peso neto del con-
tenido de las Cápsulas". Transferir una porción del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 1 O µg de
colecalciferol o ergocalciferol, a un matraz de 125 ml
con tapón y proceder según se indica en Solución están-
dar, comenzando donde dice "Agregar 15,0 ml de
agua y 15,0 ml de Solución de hidróxido de potasio".
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Temperatura de la columna: 27°
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 4,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44Ü) o ergocalciferol (C23H44Ü) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución muestra
rs = área del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Ü)
o ergocalciferol (C2sH44Ü)
• VITAMINA E, Método 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Solución A: Solución de ácido fosfórico (1 en 100) en
agua
Fase móvil: Metano! y Solución A (19:1)
Solución de aptitud del sistema: Preparar una solución
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalciferol USP en metano!.
Transferir 1,0 ml de esta solución a un matraz volumé-
trico de 100 ml que contenga 1 00 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 ml de metano!,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario, y diluir con
metano! a volumen. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra
en Vitamina A, Método 7 a un recipiente adecuado y
evaporar al vacío a temperatura ambiente hasta seque-
dad. Transferir el contenido del matraz a un matraz vo-
lumétrico adecuado con ayuda de metano! y diluir con
metano! a volumen hasta obtener una solución con una
concentración esperada de 2 mg/ml de alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621>, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 1 00 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solución de aptitud del
sistema
Factor de asimetría: Entre 0,8 y 1,2, Solución de apti-
tud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mc;¡/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29HsoÜ2),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato ácido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma quí-
mica presente en la formulación y el Estándar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
protección actínica durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 240 ml de metano! con 1 O ml de
agua, seguidos de 0,5 ml de ácido fosfórico al 50%, y
diluir con acetonitrilo hasta 1000 ml.
Solución de aptitud del sistema: 2 mg/ml de ER Alfa
Tocoferol USP, de, ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metano!
Solución estándar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol _USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N: Mezclar
cuidadosamente ácido sulfúrico y metano! (9 en 100)
en un matraz volumétrico de 100 ml. [NOTA-Disolver
en una porción de metano!, enfriar y luego diluir a vo-
lumen final.]
6372 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Solución de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumétrico de 1 00 ml. Agregar suficiente agua
para disolver. Agregar 1,7 rnl de acido sulfúrico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 2, hasta "calcular el peso neto del con-
tenido de las Cápsulas". Transferir una porción del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 55 mg de
vitamina E, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de teflón. Agregar 0,5 g de bicarbo-
nato de sodio, 1,5 ml de Solución de lecitina y 12,5 ml
de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un mezclador
de vórtice. Agregar 6 ml de Solución de ascorbato de
sodio-pirogalol, agitar lentamente y dejar que la solu-
ción se desgasifique. Continuar agitando hasta que
haya cesado la emisión de gases y luego agitar durante
12 minutos adicionales. Agregar 6 ml de dimetil sulfó-
xido, mezclar en un mezclador de vórtice hasta formar
una suspensión y agitar durante 12 minutos. Agregar
6 ml de Solución de ácido sulfúrico metanólico 3 N, mez-
clar en un mezclador de vórtice para formar una sus-
pensión y agitar durante 12 minutos. Agregar 12,5 ml
de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en un mezclador de
vórtice hasta formar una suspensión y agitar durante 1 O
minutos. Centrifugar durante 1O minutos para romper
la emulsión y para que la capa de sobrenadante se
torne transparente. Transferir un volumen de la capa
sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano a un matraz vo-
lumétrico adecuado, donde el volumen de la muestra
retirada de la capa de 2,2,4-trimetilpentano y el tamaño
del matraz volumétrico sean tales que la concentración
final de la Solución muestra equivalga a la de la Solución
estándar. Evaporar casi hasta sequedad, agregar varios
ml de metanol y evaporar el 2,2,4-trimetilpentano re-
manente. Diluir con metanol a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 25 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para succi-
nato ácido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 4,0 entre succinato ácido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol y no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
ción de aptitud del sistema
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29HsoÜ2),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado = (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución muestra
rs = área del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solución estándar
USP 37
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
correspondiente en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solución
muestra (mg/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extracción ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilución para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metanol para calcular la concentración
nominal.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C 31 H5 ,0 3) o succinato ácido
de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs)
• VITAMINA E, Método 3
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,3 mg/ml de ER Alfa Tocoferol
USP en metanol
Solución muestra: Proceder según se indica en Vita-
mina A, Método 3, hasta "calcular el peso neto del con-
tenido de las Cápsulas". Transferir una porción del con-
tenido de las Cápsulas, equivalente a 8,0 mg de alfa
tocoferol, a un matraz Erlenmeyer con tapón de vidrio.
Agregar 25,0 ml de agua, 25,0 ml de alcohol deshidra-
tado y 3,5 g de pellets de hidróxido de potasio. Agitar
durante 1 hora en un baño de agua mantenido a 55º.
Enfriar y transferir con ayuda de un volumen mínimo de
agua a un embudo de separación de 125 ml. Enjuagar
el matraz con 50 ml de n-hexano y agregar el enjuague
al embudo de separación. Tapar, agitar vigorosamente
durante 60 segundos y dejar que las capas se separen.
Escurrir la capa acuosa en un segundo embudo de se-
paración de 250 ml y repetir la extracción con 50 ml
de n-hexano. Desechar la capa acuosa y combinar los
extractos de hexano. Lavar los extractos combinados
con 25 ml de agua, dejar que las capas se separen y
desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de ácido acé-
tico glacial y repetir el procedimiento de lavado dos
veces más. Filtrar la capa de hexano lavada a través de
sulfato de sodio anhidro en un matraz de fondo re-
dondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato de
sodio con unos pocos ml de n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Colocar
el matraz en un baño de agua mantenido a 50º y eva-
porar la solución de hexano con ayuda de un evapora-
dor rotatorio hasta sequedad. Agregar inmediatamente
25,0 ml de Diluyente y agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (C 29 H50 0 2 ), en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
= área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6373
C5 = concentración de alfa tocoferol en la Solución
estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina E, como
alfa tocoferol, en la Solución muestra
(mg/ml)
[NOTA-Calcular el alfa tocoferol equivalente
(C29HsoÜ2) de acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o
succinato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs) multipli-
cando sus contenidos por los factores 0,91 ó 0,81,
respectivamente.]
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• FITONADIONA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metano! y agua (19:1)
Solución madre del estándar: 200 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solución de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 µg/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porción de metano!, agregar la
Solución madre del estándar y luego diluir con metano! a
volumen.]
Solución estándar: 20 µg/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solución madre del estándar diluida con
metano!
Solución muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solución preparada según se indica en Solución muestra
en Vitamina A, Método 7 a un recipiente adecuado y
evaporar al vacío, si fuera necesario, a temperatura am-
biente hasta sequedad. Transferir el contenido del ma-
traz a un matraz volumétrico adecuado con ayuda de
metano! y diluir con metanol a volumen para obtener
una solución con una concentración esperada de 20 µg/
ml de fitonadiona.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cramatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución
estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son aproximadamente
0,68 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solución de aptitud del sistema
Desviacion estándar relativa: No más de 3,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C31H4602) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Fitonadiona USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de fitonadiona en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
• BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución de hidróxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidróxido de potasio en 50 ml de agua.
Solución de yodo: Transferir 1 O mg de yodo a un ma-
traz volumétrico de 100 ml. Disolver en ciclohexano y
diluir con ciclohexano a volumen. Diluir 1O ml de esta
solución con ciclohexano hasta 100 ml. [NOTA-Prepa-
rar esta solución en el día de su uso.]
Solución muestra A (para preparaciones que contengan
beta caroteno en soluciones oleosas): Proceder segun
se indica en Vitamina A, Método 1, excepto que se debe
usar ciclohexano en lugar de n-hexano como disolvente
de extracción, y diluir los extractos filtrados con ciclohe-
xano hasta obtener una concentración de 2 µg/ml de
beta caroteno.
Solución muestra B (para preparaciones que contengan
beta caroteno en polvo seco): Retirar el contenido de
no menos de 20 Cápsulas cortando para abrir las Cáp-
sulas. Mezclar y determinar el peso del contenido.
Transferir una cantidad del contenido de las Cápsulas,
equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un matraz de
saponificación de 500 ml. Agregar 100 ml de alcohol,
6 ml de Solución de hidróxido de potasio y una barra
mezcladora magnética. Acoplar un condensador de aire
al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 minutos
mezclando constantemente. Enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 1 70 ml de éter de petróleo y mezclar
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el con-
tenido del matraz a un embudo de separación de
500 ml con porciones de éter de petróleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgánica superior a un matraz volumétrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificación. Agregar 170 ml de éter de petróleo y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cación al embudo de separación con ayuda de porcio-
nes de éter de petróleo. Dejar que las capas se separen
durante 1O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgánica al matraz volumé-
trico que contenga la capa orgánica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separación con porciones
pequeñas de éter de petróleo y transferir los lavados al
matraz volumétrico. Diluir los extractos etéreos con éter
de petróleo a volumen. Agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solución, equivalente a
100 µg de beta caroteno, a un matraz volumétrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrógeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solución de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un baño de agua mantenido a 65º. Enfriar
rápidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Análisis
Muestra: Solución muestra
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(C40Hs6) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Au! F) x (1 00/ Cu)
Au = absorbancia de la Solución muestra
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223
Cu = concentración nominal de beta caroteno en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-165,0% de la cantidad
, declarad9 de beta caroteno (CoHs6)
• ACIDO ASCORBICO
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
6374 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
un vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de éter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cápsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de fas
Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cápsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cápsulas, equivalente a
100 mg de ácido ascórbico, a un matraz volumétrico de
200 ml y agregar 75 ml de ácido metafosfórico-ácido
acético SR. Tapar el matraz y agitar mecánicamente du-
rante 30 minutos. Diluir con agua a volumen. Transferir
una porción de la solución a un tubo de centrífuga y
centrifugar hasta obtener un sobrenadante transpa-
rente. Pipetear y transferir 4,0 ml de esta solucion a un
matraz Erlenmeyer de 50 ml y agregar 5 ml de ácido
metafosfórico-ácido acético SR.
Análisis: Valorar con solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solución estándar de diclorofenol-indofenol consumido
por una mezcla de 5,5 ml de ácido metafosfórico-ácido
acético SR y 15 ml de agua. A partir del equivalente de
ácido ascórbico de la solución estándar de diclorofe-
nol-indofenol SV, calcular el contenido de ácido ascór-
bico en cada Cápsula.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6Hs06) , Cápsulas, equivalente a 100 µg de biotina, a un matraz
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2t-fa0)
• ASCORBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
• BIOTINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de ácido fosfórico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solución madre del estándar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfóxido
Solución estándar: 5 µg/ml de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solución madre del estándar en, agua.
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 mg de biotina, a un matraz
volumétrico de 200 ml. Agregar 3 ml de dimetil sulfó-
xido y agitar por rotación suave para humedecer el
contenido. Colocar el matraz en un baño de agua a
60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de biotina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de biotina
(C,0H16N203S) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
USP 37
ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
r, = área del pico de biotina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (pg/ml)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (pg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C,0H16N203S)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: O, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
a9ua, que se prepara diluyendo Solución madre del es-
tandar con agua el día de la valoración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
volumétrico de 200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al
50% y agitar por rotación suave para humedecer el
contenido. Calentar el matraz en un baño de agua a
60º-70º durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos, diluir con alcohol al 50% a volumen y
filtrar. Diluir un volumen del filtrado cuantitativamente,
y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con agua
hasta obtener una solución con una concentración de
O, 1 n9/ml.
Solucion de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1O pg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
 USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6375
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/mL de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/mL de niacina y 40 µg/mL de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 mL. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 1 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina- 5 ml
clorhidrato de oiridoxina
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37° mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el Jnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 mL de Solución madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodón, esterilizar en
un autoclave a 121 º durante 15 minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo esté-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 1 6-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es el Jnócu/o.
1 ATCC N" 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobocillus orabinosus 17-5.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más niveles especificados de la Solución
estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 ml.
Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de me-
dio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Colo-
car un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la contami-
nación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de Jnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro que no contienen
Solución estándar (los blancos no inoculados). Incubar
los tubos a una temperatura entre 30º y 37º mante-
nida termostáticamente con un margen de ±0,5º hasta
que, después de 16-24 horas de incubación, no se
presente un aumento significativo de turbidez en los
tubos que contengan el nivel más alto de Estándar du-
rante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotómetro. Colocar la celda en
un espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica de 540 a 660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de las transmitancias
(Ls) como la diferencia, y = 2,00 - Ls. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel cuadriculado en fun-
ción del logaritmo de los mL de la Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00- Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el loga-
ritmo del volumen, en mL, de la Solución muestra para
obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifica-
ción. Promediar los valores de X para cada uno de los
tres o más niveles de dosificación para obtener X, que
es igual al logaritmo de la potencia relativa, M', de la
Solución muestra. Determinar la cantidad, en µg, de
biotina (C1oH1 6 N20iS) en la porción de Cápsulas
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
6376 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
R = número de ,ug de biotina que ~e supus?
estaban presentes en la porcion de Capsulas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H;,,N,O,S) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado= [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de biotina en la porción de
Cápsulas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las pot~ncias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseño y Análisis de Va/o!a~iones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los L1m1tes de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en más
de O 08 realizar una o más determinaciones adiciona-
les. Á p~rtir de la, media de dos o más valores _de M gue
no difieran en mas de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando. . 11,0 mg/mL de acido cítrico anhidro y 1 O mg/mL de
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (CiaH16N2Ü3S)
• CIANOCOBALAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Fase móvil: Metano! y agua (7:13)
Solución madre del estándar: 1O µg/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
ción madre en un lugar oscuro y desechar después de 1
semana.]
Solución estándar: 1 µg/mL de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solución madre del estándar diluida con
agua , Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 00 µg de ci~no~obalamina, a
un matraz de 250 mL. Agregar cuant1tat1vamente
100,0 mL de agua y extraer cuidadosamente _durante 2
minutos. Filtrar 1 O mL del extracto y usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
Volumen de inyección: 200 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de cianocobalamina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarad~, de cian<?cobala-
mina (C63HssCoN14Ü14P) en la porc1on de Capsulas
tomada:
Resultado = (ru/r,) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
r5 = área del pico de la Solución estándar
C5 = concentración de ER Cianocobalamina USP en
la Solución estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de cianocobalamina en
la Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C61HssCoN 14Ü14P)
• CIANOCOBALAMINA, Método 2
(NOTA--Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
USP 37
Solución madre del estándar: 1,0 µg/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que, después del periodo de incubación se-
gún se describe en el Análisis, la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 mL
de la Solución estándar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 y 0,04 ng/mL de Solución estándar. Preparar esta
solución en el momento de su uso para cada
valoración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido ~e las
Cápsulas, equivalente a 1,0 µg de cianocobalamina, a
un vaso apropiado que contenga, por cada g del ~5mte­
nido de las Capsulas tomado, 25 mL de una soluc1on de
extracción acuosa preparada justo antes de su uso que
contiene 12,9 m9/mL de fosfato dibásico de sodio,
metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 º du-
rante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier partí-
cula del extracto sin disolver y filtrar o centrifu9ar, si
fuera necesario. Diluir una alicuota de la solucion trans-
parente con agua hasta obtener una solución final que
contenga una actividad de vitamina B12 equivalente
aproximadamente a la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún s~ indica en Pa'!totena~o de Calcio, Método 2. .
Solucion de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 mL. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
se indica en Pantotenato de Calcio, Método 2.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 mL de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 mL <;J~
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los soli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 mL.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1O g de fosfato dibásico de potasio e,n.
agua para obtener 200 mL, y agregar 2 gotas de ac1do
clorhídrico. Almacenar esta solución baj·º tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de su fato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 mL. Agre9ar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 mL. Almacenar en
un refrigerador. . .
Solución vitamínica A: Disolver 1 O mg de nboflav1na,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 1 00 µg de biotina y
20 mg de niacina en ácido acético 0,02 N para obtener
400 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion vitamínica B: Disolver 20 mg de ácido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m9 de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de ácido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 mL. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz. .
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga l<?s
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en ~I etiqueta90, produzc? un me-
dio comparable al obtenido de la formula provista en
este procedimiento. .
Agregar los ingredientes en el ord~n. listado .en, la Tabla
2, disolviendo cuidadosamente Cist1na y Tnptofano en
 USP 37
Ácido clorhídrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solución resultante. Agregar 1.00 mL de
agua y disolver Dextrosa, Acetato de 10dio y Acid? as-
córbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar Soluoon de
polisorbato 80, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un
pH de 5,5-6,0, y diluir con Agua Purificada hasta
250 mL.
Tabla 2
L-Cistina
L-Triotóf ano
r- - - - -clorhídrico 1 N
Ácido
Solución de adenina-auanina-uracilo
Solución de xantina
Solución vitamínica A
Solución vitamínica B
Solución salina A
Solución salina B
Solución de asoaraaina
Solución de hidrolizado ácido de caseína
Dextrosa anhidra
Acetato de sodio anhidro
Ácido ascórbico
Solución de oolisorbato 80
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesa_rio, hasta obtener.
un filtrado transparente de color papzo. Almacenar ba¡o
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ir;gredient~s
siempre que, cuando se reconstituya s~gun se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte~
nido de la fórmula provista en este proced1m1ento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1 O mL de Preparación de jugo de tomat~ y 1 mL de ~olu­
ción de polisorbato 80. Ajustar con h1drox1do de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua ha;ta 100 mL.
Colocar porciones de 1 O mL de la solucion en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar _la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de_ 1 O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nut~s y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. Inocular tres o más de los tubos, sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 2
[NOTA-Antes de usar por primera vez en esta_ valora-
ción un cultivo recientemente preparado, realizar no
menos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un
periodo de 2 semanas.] Incubar durante 16-24 horas a
) Se pueden obtener cultivos puros de Lactobaollus /eichmannii (listados como
Laclobac1/lus delbruecki1) como N 7830 en ATCC, 10801 Un1versity Blvd., Ma-
nassas, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
Suplementos Dietético1 / \lili:imí11;1\ OlemoluhlP'> e Hidrosolubles 6377
una tempP1«1t 111,1 entre 30 y 40. mantenida termostáti-
camente con un rnarqen de '0,5 . Almacenar en un
retrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por >emana y '.10 u>a1 los pilra preparar el_ Inoculo
si tienen más de 4 d1as de preparados. La act1v1dad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al d1a del cultivo por
punción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnóculo líquido 2-4 horas des-
O1 a
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva d~ respuesta
O 05 a
adecuada y puede conducir a resultados err~t1cos.
10 ml lnóculo: [Norn--Se puede usar una suspens1on conge-
5 ml lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
5-
ml- siempre que produzca un /nóculo compara_ble ,al de un
10 ml cultivo recientemente preparado.] Transferir celulas del
Cultivo madre de 1.actobaol/us leichmannii a dos tubos
10 ml
estériles que contengan ·1 O rnl de Medio de cultivo cada
5 ml
uno. Incubar estos cultivos durante 16-24 horas a una
5 ml temperatura entre 30 y 40 mantenida termostática.-
5 ml mente con un margen de ±0,5 '. Centrifugar los cultivos
25 ml bajo condiciones asépticas y decantar el sobrenadante.
1o q Suspender las células del cultivo en 5 mL d_e Medio de
5 q
suspensión estéril y combinar. Usando Medio de suspen-
sión estéril, ajustar el volumen de manera que una dilu-
1 q
ción 1 en 20 en mlución salina SR produzca una trans-
5 ml mitancia del 70º1b cuando se lee en un
espectrofotórnetro adecuado ajustado a una longitud de
onda de 530 nm, equipado con una celda de 1 O mm, y
leída contra solución salina SR ajustada a una transm1-
tancia del 100%. Preparar una dilución 1 en 400 de la
suspensión ajustada usando Solución madre de medio
basal estéril. [NOTA-Esta dilución se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener ia respuesta de
prueba deseada.] La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Calibración del espectrofotómetro: Revis~r periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotometro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. ,Antes de leer cualquier _prueba,
calibr·ar el espectrofotometro con agua para f1¡ar el 0%
y el 1 00% de transmitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio_ duro y dei:nás
material de vidrio necesario se deben l1mp1ar meticulo-
samente, usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1 5· 2 O· 3 O· 4 O y 5 O mL de la Solución estándar.
Ag(eg~/ a ~;da' uno de estos tubos y a cuatro tu~os
vacíos sirni!ares 5,0 rnL de Soluuon madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensavo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 níL de la SolLfciÓn mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucion madre de
medio- bosal y agua suficiente para obtener 1 O mL. Co-
locar un set completo de tubos de Estándar y _muestra
juntos en una gradilla par-a tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 · durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no más de 1 O minutm precalentando el autoclave s1
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. lomar precauciones para
mantenE:'.r lit u111tmmidau ele las cor1c!iciones de esterili-
6378 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
zación y enfriamiento durante toda la valoración, de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 mL de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40' mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80º durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Después de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. Este estado estacionario se observa
unos pocos segundos después de la agitación cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o más. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminación con un microorganismo extraño, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoración.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoración si la pendiente de la curva estándar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta mediante el siguiente procedimiento. Deter-
minar y reemplazar cualquier transmitancia individual
aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular la res-
puesta a partir de la suma de los valores duplicados de
las transmitancias (Ls) como la diferencia, y= 2,00 - Ls.
Graficar esta respuesta en la ordenada del papel cuadri-
culado en funcion del logaritmo de los mL de la Solu-
ción estándar por tubo sobre la abscisa, usando para la
ordenada una escala aritmética o logarítmica, la que
proporcione la mejor aproximación a una línea recta.
Trazar la recta o la curva de regresión que mejor se
ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solución muestra
para obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifi-
cación. Promediar los valores de X para cada uno de
los tres o más niveles de dosificación para obtener X,
que es igual al logaritmo de la potencia relativa, M',
de la Solución muestra.
Determinar la cantidad, en µg, de cianocobalamina
(C63HssCoN14Ü14P) en la porción de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de µg de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en cada mg de la
porción de Cápsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)!N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Cápsulas tomada (µg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
USP 37
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Actividad de Vitamina 8 12 en Di-
seño y Ancílisis de Valoraciones Biológicas (111 ), El Inter-
valo de Confianza y los Limites de la Potencia). Si las dos
determinaciones difieren en más de 0,08, realizar una o
más determinaciones adicionales. A partir de la media
de dos o más valores de M que no difieran en más de
O, 1 5, calcular la potencia media de la preparación que
se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
, declar9da de cianocobalamina (C6,H88CoN14Ü14P)
• Acmo Fouco, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solución de hidróxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transferir 5,0 g de ácido pentético a un
matraz volumétrico de 50 mL. Disolver y diluir con hi-
dróxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase móvil: 2 g de fosfato monobásico de potasio en
650 mL de agua. Agregar 12,0 mL de Reactivo A,
7,0 mL de ácido fosfórico 3 N y 240 mL de metano!.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con ácido fosfó-
rico o amoníaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso agregando agua o metano! a la Fase móvil pre-
parada para obtener una separación de la línea base
entre el ácido fálico y el estándar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separación. [NOTA-El contenido de metano! y agua se
puede variar (1 %-3%).]
Solución de estándar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumétrico de 1000 mL y
agregar 220 ml de metano! para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobásico de potasio en 300 mL de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solución al matraz que contenga la solu-
ción de metilparabeno y agregar 300 mL adicionales de
ª$lua. Agregar 19 mL de Reactivo A, 7 mL de ácido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amoníaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrógeno a través de la
solución durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. ,
Solución estándar: 0,016 mg/mL de ER Acido Fálico
USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácida
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas a un tubo de centrífu$Ja adecuado y agregar
un volumen de Solución de estandar interno para obte-
ner una concentración de 0,016 mg/mL de ácido fálico.
Agitar mecánicamente durante 1O minutos y centrifu-
gar. Filtrar una porción del sobrenadante transparente y
usar el filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 15 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ácido
fálico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución Pstándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de ácido fálico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
USP 37
rada de ácido fólico (CiqH1"N101,) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (R1JR1) x (C/Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución muestra
R1 = cociente entre las áreas de los picos de ácido
fólico y metilparabeno de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fólico (C19H19N106)
• ÁCIDO FÓuco, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: Disolver 7,5 g de edetato disódico, mez-
clando, en 500 ml de agua que contenga 1 O ml de
hidróxido de amonio.
Diluyente: 60 µg/ml de hidróxido de amonio
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15 ml de
ácido acético glacial y 350 ml de metano! a un matraz
volumétrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosulfonato
de sodio 0,008 M a volumen. , con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
Solución madre del estándar: 60 µg/ml de ER Acido
Fólico USP en Diluyente. Preparar esta solución en el día
de su uso.
Solución estándar: Mezclar 5,0 ml de Solución madre
del estándar con 1 0,0 ml de metano! y 35,0 ml de Re-
activo. Agitar durante 15 minutos en un baño de agua
mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado. , centración de 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio del
contenido de las Cápsulas". Transferir una porción del
contenido de las Cápsulas, equivalente a 0,3 mg de
ácido fólico, a un matraz de 125 ml con tapón. Agre-
gar 10,0 ml de metano! y 35,0 ml de Reactivo. Agitar
durante 15 minutos en un baño de agua mantenido a
60º y enfriar. Filtrar, desechando los primeros ml del
filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de ácido fólico
(C19H19N106) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = área del pico de ácido fólico de la Solución
muestra
rs = área del pico de ácido fólico de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Ácido Fólico USP en la
Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de ácido fólico en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ácido fólico (C19H19N106)
Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6379
• DEXPANTENOL o PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en µreparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan .según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 800 ~tg/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 µg/ml de ER Pantenol Racémico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 días.
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
una dilución de 1,2 µg/ml de dexpantenol o 2,4 µg/ml
de pantenol, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua.
Solución muestra: Pesar no menos de 30 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir tanto como sea
posible el contenido a un vaso de precipitados. Retira;
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cap-
sulas vacías lavando con varias porciones de éter. Dese-
char los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas
no se perciba olor a éter. Pesar las cubiertas de las Cáp-
sulas vacías en un frasco de pesada tarado y calcular el
peso neto promedio por Cápsula. Disolver una porción
del contenido de las Cápsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 100,0 ml de agua. Diluir cuantitativamente una por-
ción de esta solución con agua hasta obtener una con-
de pantenol.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 ± O, 1 y agregar agua hasta obtener 1000 ml.
Agregar 20 g de ca~bón activa~o, mezclar du;ante .1
hora y filtrar. Repetir el tratamiento con carbon acti-
vado. Almacenar bajo tolueno en un lugar fresco a una
temperatura de no menos de 1 Oº. Filtrar la solución si
se forma un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 ± 5º y agregar solución de ácido clorhídrico (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar. Agregar agua hasta obte-
ner 200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina., 1.0 µg/m,L .de clo;hidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de b1ot111a en ac1do acet1co
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de!ª_ luz. . . . . .
Solucion de ac1do p-ammobenzo1co-macma-clorh1-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 ~tg/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado al 25%. Almace-
nar en un refrigerador.
 6380 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Solución salina A: 50 mg/ml de fosfato monobásico de
potasio y 50 mg/ml de fosfato dibásico de potasio en
agua. Agregar 1O gotas de ácido clorhídrico por L de
solución. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: 20 mg/ml de sulfato de magnesio,
1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de sulfato fe-
rroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en agua.
Agregar 1 O gotas de ácido clorhídrico por L de la solu-
ción. Almacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: 200 µg/
ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 10%. Almacenar en un
refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: 50 mg/ml
de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de ácido oleico en al-
cohol al 20%. Almacenar en un refrigerador y usar den-
tro de los 30 días.
Medio de pantotenato modificado: Disolver Dextrosa
anhidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones pre-
viamente mezcladas de acuerdo con la Tabla 3 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Final-
mente, diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a transmitancia porcentual de las suspensiones, en celdas
Acetato de sodio anhidro 5 n
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti- 5 ml
na
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de oiridoxal-oantotenato de calcio 5 ml
Solución de oolisorbato 40-ácido oleico 5 ml
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pantote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
ción final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancreático de caseína, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidróxido de so-
dio O, 1 N o ácido clorhídrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar porciones de
1 O ml de la solución a tubos de cuítivo, tapar los tubos,
y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar los tubos en un plano inclinado y almacenar en
un refrigerador. Preparar un cultivo madre de Pediococ-
cus acidilacticí3 en un tubo con este medio. Incubar a
35º durante 20-24 horas y almacenar en un refrigera-
dor. Mantener el cultivo madre mediante transferencias
mensuales a tubos con medio inclinado preparado re-
cientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado con el cultivo madre en medio
inclinado e incubar a 35º durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensión a partir de las porciones combina-
das y lavar las células con Medio de pantotenato modifi-
cado. Resuspender las células en suficiente Medio de
pantotenato modificado de manera que una dilución 1
en 50, cuando se analiza en un tubo de ensayo de
13 mm de diámetro, proporcione 80% de transmisión
de luz a 530 nm. Transferir porciones de 1,2 ml de esta
3 ATCC N 8042 e> adecuado.
USP 37
suspensión madre a ampollas de vidrio, sellar, congelar
en nitrógeno líquido y almacenar en un congelador. En
el día de la valoración, dejar que las ampollas alcancen
la temperatura ambiente, mezclar el contenido y diluir
1 ml de cultivo descongelado con solución salina estéril
SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta dilución se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.]
Análisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solución
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentración a cada tubo. Tapar los tubos con
tapas de metal y esterilizar en un autoclave a 121 º
durante 5 minutos. Enfriar a temperatura ambiente en
un baño de agua fría e inocular cada tubo con 0,5 ml
del lnóculo. Dejar que se incube a 37º durante 16 ho-
ras. Detener el crecimiento calentando a una tempera-
tura de no menos de 80º, por ejemplo mediante la
aplicación de vapor a presión atmosférica en un esteri-
lizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y determinar la
de igual longitud de paso, en un espectrofotómetro
adecuado, a una longitud de onda de 530 nm.
Cálculo: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estándar en función de las concentraciones del
nivel del estándar. La curva se traza conectando cada
par de puntos adyacentes con una línea recta. A partir
de esta curva estandar, determinar mediante interpola-
ción la potencia de cada tubo que contenga porciones
de la Solución muestra. Dividir la potencia de cada tubo
por la cantidad de la Solución muestra que se le agregó,
para obtener las respuestas individuales. Calcular ía res-
puesta media promediando las respuestas individuales
que varían de su media en no más de 15%, usando no
menos de la mitad del número total de tubos. Calcular
la potencia de la porción del material tomado para la
valoración multiplicando la respuesta media por el fac-
tor de dilución apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol (C9H19NÜ4) en la porción de Cáp-
sulas tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia de dexpantenol o pantenol en la
porción de Cápsulas tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porción de Cápsulas tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19NÜ4)
• PANTOTENATO D,E CALCIO, Método 1
Fase móvil: Acido fosfórico y agua (1:1000)
Solución de estándar interno: 80 mg de ácido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibásico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con ácido fosfórico a un
pH de 6,7.
Solución estándar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solución de estándar interno
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas mezclado a un tubo de centrífuga y un volu-
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas
men de Solución de estándar interno para obtener una
concentración de 0,6 mg/ml en la Solución muestra.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 1 O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para pantote-
nato de calcio y ácido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio y
el estándar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2010) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (Ru! Rs) x ( Cs/ Cu) x 100
Ru = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución muestra
Rs = cociente entre las áreas de los picos de
pantotenato de calcio y ácido p-
hidroxibenzoico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CJ8H32CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la humedad mientras se pesa, en 500 ml
de agua en un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución
de acetato de sodio (1 en 60), y diluir con agua a volu-
men para obtener una concentración de 50 µg/ml de
ER Pantotenato de Calcio USP. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solución estándar, están
dentro de la porción lineal de la curva de respuesta del
logaritmo de la concentración. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a una cantidad de 50 mg de pan-
totenato de calcio, a un matraz volumétrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con a_gua a volumen y
filtrar. Diluir un volumen de esta solucion hasta obtener
una solución con aproximadamente la misma concen-
tración que la de la Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
Oleosolubles e Hidrosolubles 6381
agua hasta l 000 rnL. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durdnte 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-80' y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina, 1 O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 4 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 4
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 mL
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Solución de adenina-quanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina--bioti- 5 ml
na
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de piridoxind - 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 mL
Cultivo madre de Lactobacil/us plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121" durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura de
6382 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
30"-37" mantenida termostáticamente con un margen
de ±0,5°. Almacenar en un refrigerador. Preparar un
cultivo reciente por punción del cultivo madre una vez
por semana y no usarlo para preparar el /nóculo si el
cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que con-
tenga 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de
las series de tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir células del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo esté-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 1 6-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. La suspensión de células así obtenida
es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más niveles especificados de la Solución
estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 mL.
Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de me-
dio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Colo-
car un set completo de tubos de Estándar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o sección de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 3
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura óptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentración-
respuesta según se indica a continuación. Para cada ni-
vel del Estándar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de las transmitancias
(Ls) como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta
USP 37
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en fun-
ción del logaritmo de los mL de Solución estándar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmética o logarítmica, la que proporcione la me-
jor aproximación a una línea recta. Trazar la recta o la
curva de regresión que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solución muestra
(Lu). Leer, a partir de la curva estándar, el logaritmo
del volumen de la Solución estándar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estándar. Restar de cada logaritmo así obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de Solución muestra para
obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifica-
ción. Promediar los valores de X para cada uno _9e los
tres o más niveles de dosificación para obtener X, que
es igual al logaritmo de la potencia relativa, M', de la
Solución muestra. Determinar la cantidad, en mg, de
pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010) en la porción
de Cápsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Cápsulas tomada
Calcular el porcentaje de pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2010) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/NJ x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Cápsulas tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
ción por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no más de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valoraciones
Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Límites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en más
de 0,08, realizar una o más determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dos o más valores de M que
no difieran en más de O, 15, calcular la potencia media
de la preparación que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN2010)
Solución amortiguadora: Disolver 10,0 g de fosfato
monobásico de potasio en 2000 mL de agua y ajustar
con ácido fosfórico a un pH de 3,5.
Fase móvil: Metano! y Solución amortiguadora (1 :9)
Solución madre del estándar: 0,25 mg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar nuevamente
cada 4 semanas. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: 40 µg/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solución madre del estándar di-
luida con agua ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio del
contenido de las Cápsulas". Transferir una porción del
contenido de las Cápsulas, equivalente a 1 O mg de pan-
totenato de calcio, a un matraz volumétrico de 250 ml.
Agregar 1 O mL de metano! y agitar el matraz por rota-
ción suave hasta dispersar el contenido de las Cápsulas.
Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 37 Suplementos Dietéticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6383
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 pm
Temperatura de la columna: 50"
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 25 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sHi2CaN2010) en la porción
de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/C11) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
r1 = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisH,2CaN2Ü10)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, ácido acético glacial y agua
(5:1 :94)
Fase móvil: Una mezcla de metano!, ácido acético gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solución estándar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a un matraz volumétrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
baño de agua caliente mantenido a 65º-70º durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vórtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
sólidos. Enfriar rápidamente en un baño de agua fría
durante 1O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen. , ru
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cápsula". Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg
de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrífuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vórtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrífuga en un baño de agua caliente mantenido a
65º-70º, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al baño de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos más y mezclar en un mezclador de vórtice durante
30 segundos. Filtrar una porción de la solución, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtración.]
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 1O µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0, 3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contienen niacina:
Resultado= (ru/rs) x (Ci/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
rs = área del pico de niacina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 ·
HCI), riboflavina (C17H20N406) y clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S · HCI) en la porción de
Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
= área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
rs = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
Cs = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
6384 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 90,0'Yci- 150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C,H,NO)) o niacinamida
(CH1oN;O), clorhidrato de piridoxina (C"H 11 NO, · HCI),
riboflavina (C1:HJ0N10") y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H1:CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11N10,S)
• NIACINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 1 ml de ácido acético glacial y
2,5 g de edetato disódico a un matraz volumétrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extracción: Solución A y metano! (3: 1)
Fase móvil: Solución rle acetato de sodio O, 1 M
(1 3,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ácido acético a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequeña cantidad de metano! (hasta 1 %) a la Fase
móvil para mejorar la resolución.]
Solucion madre del estándar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Di.rnlvente de extracción
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extracción a volumen.
Solución muestra: [NOTA-Esta preparación es ade-
cuada para la determinación de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulación.] Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados. Retirar cualquier contenido ad-
herido a las cubiertas lavando con varias porciones de
éter. Desechar los lavados y secar las cubiertas de las
Cápsulas con ayuda de una corriente de aire seco. Pesar
las cubiertas de las Cápsulas vacías en un frasco de pe-
sada tarado y calcular el peso neto del contenido de las
Cápsulas. Transferir una porción del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 2 mg de riboflavina, a un ma-
traz volumétrico de 200 ml. Si la riboflavina no se en-
cuentra presente en la formulación, usar una porción,
equivalente a una cantidad nominal de 2 mg de pirido-
xina. Si la piridoxina no se encuentra presente en la
formulación, usar una porción equivalente a 20 mg de
niacina o niacinamida. Agregar 100,0 ml de Disolvente
de extracción y mezclar durante 20 minutos, usando un
agitador de movimiento tipo muñeca (wrist-action). Su-
mergir el matraz en un baño de agua mantenido a
70º-75º y calentar durante 20 minutos. Mezclar en un
mezclador de vórtice durante 30 segundos, enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no/ entre cada inyección.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina de la Solución muestra
r1 = área del pico de niacina de la Solución
estándar
USP 37
Cs = concentración de ER Niacina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
(¡, = concentración nominal de niacina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C 6 H5 0 2 )
• NIACINAMIDA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A, Disolvente de extracción, Fase móvil, So-
lución madre del estándar, Solución estándar, Solu-
ción muestra, Sistema cromatográfico y Aptitud del
sistema: Usando ER Niacinamida USP en lugar de ER
Niacina USP, proceder según se indica en Niacina, Mé-
todo 2.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacinamida de la Solución
muestra
rs = área del pico de niacinamida de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Niacinamida USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de niacinamida en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción, Fase móvil y Solución mues-
tra: Preparar según se indica en Niacina, Método 2.
Solución madre del estándar: 0, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extracción
Solución estándar: Transferir 20 µg/ml de ER Clorhi-
drato de Piridoxina USP, a partir de Solución madre del
estándar y diluir con Disolvente de extracción a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11 NO, · HCI) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de piridoxina de la Solución
muestra
rs = área del pico de piridoxina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsHi 1 N01 · HCI)
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6385
• RIBOFLAVINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extracción y Solución muestra: Preparar
según se indica en Niacina, Método 2.
Solución A: 6,8 g/L de acetato de sodio en agua
Fase móvil: Preparar una mezcla de Solución A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina fºr L de la
mezcla y ajustar con ácido acético glacia a un pH de
5,2.
Solución madre del estándar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumétrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extracción. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un baño de agua mante-
nido a 65º-75º. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rápidamente en un baño de agua
fría a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extracción a volumen.
Solución estándar: Diluir 5,0 ml de Solución madre del
estándar con Disolvente de extracción hasta 25,0 ml.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C11H20N406) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de riboflavina de la Solución
muestra
rs = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• TIAMINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: 1,88 g/L de 1-hexanosulfonato de sodio en
ácido fosfórico al O, l %
Fase móvil: Solución A y acetonitrilo (46:9)
Solución madre del estándar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiarnina USP en ácido clorhídrico 0,2 N
Solución estándar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solución madre del estándar
diluida con ácido clorhídrico 0,2 N
Solución muestra: Proceder según se indica en Ácido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio del
contenido de las Cápsulas". Mezclar una porción del
contenido de las Cápsulas con un volumen de ácido
clorhídrico 0,2 N para obtener una concentración de
0,02 mg/ml de tiamina. Agitar durante 15 minutos con
un agitador de movimiento tipo muñeca (wrist-action)
y calentar a ebullición durante 30 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) en la porción de Cápsu-
las tomada:
Resultado= Cru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,¡/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
Mr1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
Mr2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
• NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Método 3
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disódico en agua
Fase móvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de ácido acético glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumétrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solución madre del estándar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solución estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metanol y ácido acético gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etilen-
glicol (1: 1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
baño de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado. ,
Solución muestra: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico, hasta "calcular el peso neto promedio del
contenido de las Cápsulas". Transferir una porción del
contenido de las Cápsulas, equivalente a 7,5 mg de nia-
cina o niacinamida, 1,2 mg de clorhidrato de pirido-
xina, 0,4 mg de riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de
6386 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
tiamina, a un matraz de 125 ml con tapón. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y ácido acético gla-
cial (9: 1) y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etilen-
glicol (1: 1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bano de agua mantenido a 60º y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf!O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50º
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de niacina o niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C 6H5 N02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/r5) x (CdC11) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
r5 = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
C5 = concentración de ER Niacina USP o de ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/ml)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 ·
HCI), riboflavina (Ci 1H20N406) y tiamina
(C12H11CIN40S) (para productos que contengan
clorhidrato de tiamina) en la porción de Cápsulas
tomada:
Resultado= (ru/r5) x (C5/Cu) x 100
ru = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución muestra
r5 = área del pico de la vitamina correspondiente
de la Solución estándar
C5 = concentración del Estándar de Referencia USP
pertinente en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de la vitamina
correspondiente en la Solución muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (ru/r5) x (C5/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
r5 = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
C1 = concentración de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de mononitrato de
tiamina en la Solución muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinami:::la (C6H6N20) o niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CsH 11 N03 · HCI),
USP 37
riboflavina (Ci 1H20N.,06) y tia mina como clorhidrato de
tia mina (C12H 11CIN40S · HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
[NOTA-Se pueden usar soluciones estándar de absorción
atómica disponibles comercialmente para los minerales,
cuando sea aplicable, cuando se describe la preparación
de una Solución madre del estándar en las siguientes va-
loraciones. Usar agua desionizada cuando se especifica
agua. Cuando se especifica espectrofotometría de ab-
sorción atómica en la valoración, se pueden diluir cuan-
titativamente las Soluciones estándar y la Solución mues-
tra con el disolvente especificado, si fuera necesario,
para producir soluciones con concentraciones adecua-
das adaptables al intervalo lineal o de trabajo del
instrumento.]
• CALCIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en ácido clorhídrico O, 125
N
Solución estándar de calcio: 400 µg/ml de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cados a 300º durante 3 horas y enfriados en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 ml de ácido clorhídrico 1 N.
Calentar a ebullición para expulsar el dióxido de car-
bono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solucion madre del estándar: 100 µg/ml de calcio, a
partir de Solución estándar de calcio diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solución madre del estándar a sendos
matraces volumétricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 ml de Solución de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/ml de calcio.
Solución de polisorbato 80: Polisorbato 80 y alcohol
(1 :1 O)
Solución muestra: Transferir 5 Cápsulas a un matraz
volumétrico de 1 00 ml. [NOTA-Para Cápsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cápsulas. Abrir las
Cápsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un recipiente adecuado. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas vacías
lavando con varias porciones de éter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cápsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cápsulas vac1as, calcular el
peso neto del contenido de las Cápsulas y transferir una
porción del contenido de las Cápsulas, equivalente a 5
Cápsulas, a un matraz volumétrico de 1 00 ml.] Agregar
15 ml de agua, 1 O ml de ácido clorhídrico 6 N y 1 ml
de Solución de polisorbato 80 al matraz. Calentar sobre
una placa de calentamiento o baño de vapor, agitando
por rotación suave intermitentemente, hasta que las
Cápsulas se desintegren por completo o que el conte-
nido se disuelva. Calentar a ebullición suave durante 15
minutos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Di-
luir esta solución con ácido clorhídrico O, 125 N para
obtener una concentración de 2 µg/ml de calcio, agre-
gando 1 ml de Solución de cloruro de lantano por
1 00 ml del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cal-
cio a 422,7 nm
Lámpara:, Calcio, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solución de cloruro de lantano por 100 ml.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en .ug/ml,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6387
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en mg/mL, de
calcio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de calcio en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
• CROMO, Método 7
Solución estándar de cromo: 1 000 µg/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secados a
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1 O µg/mL de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
ción madre del estándar a sendos matraces volumétricos
de 100 mL y transferir 15,0 y 20,0 mL de Solución ma-
dre del estándar a sendos matraces volumétricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 µg/mL
de cromo.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de cromo y omitir
el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ) .)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
cromo a 357,9 nm
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cromo en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• COBRE, Método 7
Solución estándar de cobre: Disolver 1,00 g de lámina
de cobre en un volumen mínimo de una solución de
ácido nítrico al 50% y diluir con una solución de ácido
nítrico al 1 % hasta 1 000 ml. Esta solución contiene
1000 µg/mL de cobre.
Solución madre del estándar: 100 µg/mL de cobre, a
partir de Solución estándar de cobre diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 200 mL. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 µ9/mL de cobre.
Solucion muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 1, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/mL de cobre y omitir
el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de co-
bre a 324,7 nm
Lámpara: Cobre, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
cobre en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de cobre en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
• FLUORUROS, Método 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plástico.]
Solución de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 mL de agua contenida en un
matraz volumétrico de 1000 mL. Dejar que la solución
se equilibre a temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de ácido acético
a un pH de 7,0.
Solución de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 mL de agua en un matraz volumétrico
de 1 000 mL. Agregar 28 mL de ácido perclórico y diluir
con agua a volumen.
Solucion madre del estándar de fluoruro: 500 µg/mL
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio, previamente secado a 1 00º durante 4 horas y
enfriado en un desecador, en agua
Solución madre intermedia A: 1 00 µg/mL de fluoruro,
a partir de Solución madre del estándar de fluoruro di-
luida con agua
Solución madre intermedia B: 1 O µg/mL de fluoruro, a
partir de Solución madre del estándar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 mL de
Solución madre intermedia By 5,0 y 10,0 mL de Solución
madre intermedia A a sendos matraces volumétricos de
100 mL. Agregar a cada matraz 1 0,0 mL de ácido clor-
hídrico 1 N, 25 mL de Solución de acetato de sodio 3 M
y 25,0 mL de Solución de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de O, 3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 µg/mL
de fluoruro.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrir las Cápsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cápsulas mezclado, equivalente a 200 µg
de fluoruro, a un matraz volumétrico de 1 00 ml. Agre-
gar 1 0,0 mL de ácido clorhídrico 1 N, 25,0 mL de Solu-
ción de acetato de sodio 3 M y 25,0 mL de Solución de
citrato de sodio. Diluir con agua a volumen.
6388 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Transferir a sendos vasos de precipitados de plástico,
que contengan una barra mezcladora recubierta de
plástico, 50,0 ml de cada una de las Soluciones están-
dar y de la Solución muestra. Medir los potenciales
(ver pH (791 )), en mV, de las Soluciones estándar y la
Solución muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mínima de ±0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador específico para ión fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al tomar las mediciones, sumergir los electrodos en la
solución, mezclar en un agitador magnético con su
parte superior aislada hasta que se logre el equilibrio
(1-2 minutos) y registrar el potencial. Enjuagar y se-
car los electrodos entre mediciones, teniendo cuidado
de evitar que se dañe el cristal del electrodo especí-
fico para ión fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en µg/ml, de las Soluciones estándar en función
del potencial, en mV. A partir de la curva de la res-
puesta estándar así obtenida y el potencial medido
de la Solución muestra, determinar la concentración,
C, en mg/ml, de fluoruro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flúor (F) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de fluoruro en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: ~0,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• FLUORUROS, Método 2
[NOTA-Usar envases de plástico y agua desionizada du-
rante todo este procedimiento.]
Solución amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidróxido de sodio O, 1 N a 1000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase móvil: Alcohol, ácido sulfúrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ.9/ml de fluoruro.
Solucion estándar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extracción en fase sólida especificada para su uso en la
Solución estándar y la Solución muestra de la siguiente
manera. Usando vacío a una presión que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con un volumen
de columna de metanol seguido de un volumen de co-
lumna de Solución amortiguadora de pH 7O, O. No dejar
que la parte superior de la columna se seque. Si la
parte superior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.] Transferir 10,0 ml de Solución madre del es-
tándar a un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar
75 ml de agua y ajustar con hidróxido de sodio O, l N
a un pH de 10,4 ± O, 1. Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumétrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidró-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
ción amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porción de esta solucion a través de una columna de
extracción en fase sólida de 3 ml que contenga relleno
L1 conectada a través de un adaptador a una segunda
columna de extracción en fase solida que contenga re-
lleno de intercambio catiónico fuerte de sulfonilpropilo.
Desechar los primeros 3 ml del eluato y recoger el resto
del eluato en un matraz adecuado para inyectar en el
cromatógrafo.
Solución muestra: Pesar no menos de 20 Cápsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cápsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
USP 37
un recipiente de 100 ml. Si fuera necesario, retirar cual-
quier contenido adherido a las cubiertas de las cápsulas
vacías lavando con varias porciones de éter. Desechar
los lavados y secar las cubiertas de las Cápsulas con
ayuda de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas
de las Cápsulas vacías en un frasco de pesada tarado y
calcular el peso neto del contenido de las Cápsulas.
Transferir una porción del contenido de las Cápsulas,
equivalente a 1 mg de flúor, a un matraz volumétrico
de 100 ml. Agregar 15 ml de agua y agitar vigorosa-
mente. Enjuagar las paredes del matraz con 15 ml de
agua y dejar en reposo durante 1O minutos. Diluir con
agua hasta 85 ml, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a
un pH de 10,4 ± O, 1 y diluir con a9ua hasta 100 ml.
Proceder según se indica en Solucion estándar, comen-
zando donde dice "Filtrar, desechando los primeros
15 ml del filtrado".
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Detector de conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L17
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la
porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de la Solución muestra
rs = área del pico de la Solución estándar
Cs = concentración de fluoruro en la Solución
estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
• YODUROS
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapón de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Análisis
Muestra: Cápsulas
Retirar el contenido de las Cápsulas cortando para abrir
las Cápsulas. Mezclar y determinar el peso del conte-
nido. Transferir una cantidad del contenido, equiva-
lente a 3 mg de yodo, a un crisol de níquel. Agregar
5 g de carbonato de sodio, 5 ml de solución de hidró-
xido de sodio al 50% (p/v) y 1 O ml de alcohol, te-
niendo cuidado de humedecer toda la muestra. Calen-
tar el crisol en un baño de vapor hasta evaporar el
alcohol, luego secar el crisol a 100º durante 30 minu-
tos para evitar salpicaduras durante el calentamiento
subsiguiente. Transferir el crisol con su contenido a
una mufla calentada a 500º y calentar el crisol durante
15 minutos. [NOTA-Es necesario calentar a 500º para
carbonizar cualquier materia or<;¡ánica presente; se
puede usar una temperatura mas alta, si fuera necesa-
rio, para ase.9urar la carbonización completa de toda la
materia organica.]
Enfriar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullición suave
durante 1O minutos. Filtrar la solución y lavar el crisol
con agua en ebullición, recogiendo el filtrado y los la-
vados en un vaso de precipitados. Agregar ácido fosfó-
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6389
rico hasta que la solución sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 mL de ácido fosfórico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solución a ebullición suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos más. Agre-
gar unos pocos cristales de ácido salicílico y enfriar la
solución a 20". Agregar 1 mL de ácido fosfórico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dón SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= V x NA x F x /me x (Aw/W) x (100/L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(mL)
NA = normalidad real de la solución de tiosulfato de
sodio usada
F = factor de corrección para convertir mg a µg,
1000 µg/mL
/me = miliequivalente de 1, 21, 16 mg/mEq
Aw = peso promedio del contenido de las Cápsulas
W = peso de la muestra de contenido de las
Cápsulas tomado
L = cantidad declarada de yodo (µg/Cápsula)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
• HIERRO, Método 7 Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Solución madre del estándar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
1 000 ml. Disolver en 25 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 mL de Solución madre del estándar de hierro a sen-
dos matraces volumétricos de 100 mL. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 µg/mL de
hierro.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga una concentración de 5 µg/
mL de hierro y omitir el uso de Solución de cloruro de
lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
hierro a 248,3 nm
Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 1 25 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
hierro en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de hierro en la Solución
muestra (µ9/mL)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solución
muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
• MAGNESIO, Método 7
Solución de cloruro de lantano: Preparar según se in-
dica en Calcio, Método 7.
Solución estándar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
1 000 mL, disolver en 50 mL de ácido clorhídrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solución con una concentración conocida de 1000 µg/
mL de magnesio.
Solución madre del estándar: 20 µg/mL de magnesio,
a partir de Solución estándar de magnesio diluida con
ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 1 00 mL. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solución de cloruro de lantano y diluir con
ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 µg/mL de
magnesio.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 0,4 µg/mL de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
magnesio a 285,2 nm
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solución de cloruro de lantano por 100 mL.
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO, Método 7
Solución madre del estándar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso a un matraz volumétrico de
1000 ml. Disolver en 20 mL de ácido nítrico, diluir con
ácido clorhídrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solución con una concentración de 1000 µg/mL de
manganeso.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso diluida con ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 µg/mL de manganeso.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/mL de manganeso y
omitir el uso de Solución de cloruro de lantano.
6390 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de
manganeso a 279,5 nm
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO, Método 7
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1 000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1 000 µg/mL de molibdeno.
Solución madre del estándar: 1 00 µg/mL de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
la Solución madre del estándar a sendos matraces volu-
métricos de 100 mL y agregar 5,0 mL de ácido percló-
rico a cada matraz. Calentar a ebullición suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 1 0,0 y
25,0 µg/mL de molibdeno.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe tomar un número de
Cápsulas o una porción del contenido de las Cápsulas
equivalente a 1 000 µg de molibdeno y realizar dilucio-
nes apropiadas para obtener una concentración final de
1 O µg/mL de molibdeno, omitiendo la adición de Solu-
ción de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de mo-
libdeno a 313,3 nm
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de molibdeno en la Solución muestra.
USP 37
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/ C11) x 1 00
C = concentración medida de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-1 60,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• MOLIBDENO, Método 2
Solución de fluoruro de sodio: Agregar 200 mL de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solución se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solución de sulfato ferroso: 4, 98 mg/mL de sulfato fe-
rroso en agua
Solución de tiocianato de potasio: 200 mg/mL de tio-
cianato de potasio en agua
Solución de cloruro estannoso al 20%: Transferir
40 mg de cloruro estannoso a un vaso de precipitados,
agregar 20 mL de solución de ácido clorhídrico 6,5 N y
calentar la solución hasta que el cloruro estannoso se
disuelva. Enfriar y diluir con agua hasta 100 mL.
Solución de cloruro estannoso diluida: Solución de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solución en el momento de su uso.
Solución estándar: 20 µg/mL de molibdeno en agua
Muestra: Retirar el contenido de un número contado
de Cápsulas cortando para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso del contenido. Usar una cantidad del conte-
nido de las Cápsulas, equivalente a 40 µg de
molibdeno.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analítica: 465 nm
Celda: 1 cm
Blanco: Alcohol amílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 mL de Solución estándar a
sendos vasos de precipitados de 200 mL. Agregar
20 mL de ácido nítrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de
reloj y calentar a ebullición lentamente sobre una
placa de calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 6 mL de ácido percló-
rico, cubrir los vasos de precipitados con un vidrio de
reloj y continuar el calentamiento hasta que la diges-
tión sea completa, lo cual se indica cuando el líquido
se torna incoloro o de color amarillo pálido. Evaporar
las soluciones en los vasos de precipitados hasta se-
quedad. Enjuagar las paredes de los vasos de precipi-
tados y los vidrios de reloj con agua, y diluir con
agua hasta completar 50 mL en cada vaso de precipi-
tados. Calentar a ebullición suave la solución acuosa
durante unos pocos minutos. Enfriar a temperatura
ambiente. Agregar 2 gotas de anaranjado de metilo
SR y neutralizar con hidróxido de amonio. Agregar
8,2 mL de ácido clorhídrico. Transferir cuantitativa-
mente el contenido de los vasos de precipitados a
sendos matraces volumétricos de 1 00 mL, enjuagar
los vasos de precipitados con agua, transferir los en-
juagues a los matraces volumétricos correspondientes
y diluir con agua a volumen. Transferir 50,0 mL de
cada solución a embudos de separación. Agre8ar a
cada embudo de separación 1,0 mL de So/ucion de
f/uoruro de sodio, 0,5 mL de Solución de sulfato ferroso,
4,0 mL de Solución de tiocianato de potasio, 1,5 mL de
Solución de cloruro estannoso al 20% y 15,0 mL de
alcohol amílico, y agitar los embudos de separación
durante 1 minuto. Dejar que las capas se separen y
desechar las capas acuosas. Agregar 25 mL de So/u-
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6391
ción de cloruro estannoso diluida a cada embudo de
separación y agitar suavemente durante 15 segundos.
Dejar que las capas se separen y desechar las capas
acuosas. Transferir la capa orgánica de cada embudo
de separación a un tubo de centrífuga y centrifugar a
2000 rpm durante 1O minutos. Determinar las absor-
bancias de las fases orgánicas obtenidas a partir de la
Solución estándar y la Muestra, y corregir con el
Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au/As) x [(Vx Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancia de la Muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
V = volumen de la Solución estándar analizada,
2,0ml
Cs = concentración de molibdeno en la Solución
estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• FÓSFORO, Método 7
Solución de ácido sulfúrico: Agregar cuidadosamente
ácido sulfúrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solución de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solución de ácido sulfúrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solución de ácido sulfúrico a volumen.]
Solución de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar 1 gota de ácido sulfúrico por 100 ml
de solución.
Solución de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solución madre del estándar de fósforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobásico de potasio, previamente
secados a 105º durante 2 horas y almacenados en un
desecador, y transferir a un matraz volumétrico de
1000 mL. Disolver en agua, agregar 6 ml de ácido sul-
fúrico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solución con una concentra-
ción de 1000 µg/ml de fósforo.
Solución estándar: 20 µg/ml de fósforo, a partir de So-
lución madre del estándar de fósforo diluida con agua
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrirlas. Mezclar y determinar el peso del
contenido. Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 00 mg de fósforo, a 25 ml de
ácido nítrico y digerir sobre una placa de calentamiento
durante 30 minutos. Agregar 15 ml de ácido clorhí-
drico y continuar la digestión hasta que cese la produc-
ción de humos marrones. Enfriar y transferir el conte-
nido del matraz a un matraz volumétrico de 500 ml
con ayuda de pequeñas porciones de agua. Diluir con
agua a volumen. Transferir 10,0 ml de esta solución a
un matraz volumétrico de 100 ml y diluir con agua a
volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analítica: 650 nm
Celda: 1 cm
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Transferir 5,0 ml de la Solución estándar, de la Solución
muestra y de agua, para proporcionar el blanco, a
sendos matraces volumétricos de 25 ml. Agregar a
cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solución de
molibdato de amonio, de Solución de hidroquinona y
de Solución de bisulfito de sodio, y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Diluir el contenido de cada ma-
traz con agua a volumen y dejar los matraces en re-
poso durante 30 minutos. Determinar las absorban-
cias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fós-
foro (P) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (Au/As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solución muestra
As = absorbancia de la Solución estándar
Cs = concentración de fósforo en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de fósforo en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fósforo (P)
• POTASIO
Solución estándar de potasio: 1 00 µg/ml de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secados a
105º durante 2 horas, en agua
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de potasio, a
partir de Solución estándar de potasio diluida con ácido
clorhídrico 0, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 µ~/ml de potasio.
Solucion de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 1 µg/ml de potasio y omitir
el uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de po-
tasio a 766,5 nm
Lámpara: Potasio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
potasio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de potasio en la
Solución muestra (µg/ml)
Cu = concentración nominal de potasio en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
• SELENIO, Método 7
Diluyente: Preparar según se indica en Molibdeno, Mé-
todo 7. ,
Solución estándar de selenio: [PRECAUCION-EI selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1 000 ml y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una concentración de 1000
µg/ml de selenio.
6392 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Solución madre del estándar: 1 00 µg/mL de selenio, a
partir de Solución estándar de selenio diluida con agua
Soluciones estándar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 mL y agregar 5,0 mL de ácido perclórico a
cada matraz. Calentar a ebullición suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones con concentraciones de 5,0; 10,0 y 25,0 µg/
mL de selenio.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrirlas. Mezclar y determinar el peso del
contenido. Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 1 000 µg de selenio, a un ma-
traz adecuado y agregar 12 mL de ácido nítrico.
[NOTA-Se puede variar el volumen de ácido nítrico
para asegurar que el polvo se disperse uniformemente.]
Agitar el matraz por rotación suave cuidadosamente
hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a ultraso-
nido durante 1O minutos o hasta que la muestra de
prueba se disuelva por completo. Calentar a ebullición
suave la solución durante 15 minutos y enfriar a tempe-
ratura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 mL de
ácido perclórico al matraz, calentar el matraz hasta que
aparezcan humos de ácido perclórico y agitar el matraz
por rotación suave para disipar los humos. Repetir el
calentamiento y la agitación por rotación suave hasta
que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Transferir el contenido del matraz a un
matraz volumétrico de 50 mL con ayuda de Diluyente y
diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de sele-
nio a 196,0 nm
Lámpara: Selenio, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Diluyente y ácido perclórico (20:1)
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
selenio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración medida de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Cu = concentración nominal de selenio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• SELENIO, Método 2 , matraz y agitar por rotación suave hasta mezclar. Co-
Solución de ácido clorhídrico: Acido clorhídrico diluido
con a~ua (1 en 1 O)
Solucion de hidróxido de amonio al 50%: Hidróxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disódico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disódico en una porción de agua,
luego agregar clorhidrato de hidroxilamina y diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separación de 250 mL y agregar
200 mL de ácido clorhídrico O, 1 N. Lavar la solución
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solución en un frasco
USP 37
marrón y cubrir la solución con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solución permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador.
Solución madre del estándar: [PRECAUCIÓN-El selenio
es tóxico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adición de agua y la
evaporación hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en ácido clorhídrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumétrico de 1 000 mL y diluir con ácido clorhídrico 3 N
a volumen para obtener una solución con una concen-
tración de 1000 µg/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solución con ácido clorhídrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentración de 2,0 µg/mL de selenio.
Solución estándar: Transferir 1 O mL de Solución madre
del estándar a un matraz con tapón de vidrio. Agregar
1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución de ácido
clorhídrico, y diluir con agua hasta 20 mL.
Solución muestra: Retirar el contenido de las Cápsulas
cortando para abrirlas. Mezclar y determinar el peso del
contenido. Transferir una cantidad del contenido de las
Cápsulas, equivalente a 20 µg de selenio, a un matraz
adecuado. Agregar 1O mL de ácido nítrico y entibiar
suavemente sobre una placa de calentamiento. Conti-
nuar calentando hasta que la reacción inicial de ácido
nítrico haya desaparecido y luego agregar 3 mL de
ácido P,erclórico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a que la
reacción del ácido perclórico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparición de humos blancos de ácido percló-
rico o hasta que la digestión comience a tornarse os-
cura. Agregar 0,5 mL de ácido nítrico y continuar el
calentamiento, agregando cantidades adicionales de
ácido nítrico si se produce más oscurecimiento. Di9erir
durante 1O minutos después de la primera aparicion
de humos de ácido perclórico o hasta que la digestión
se torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 mL de
Solución de ácido clorhídrico y devolver el matraz a la
placa de calentamiento para expulsar los residuos de
ácido nítrico. Calentar la mezcla durante 3 minutos
después de que comience a hervir. Enfriar el matraz a
temperatura ambiente y diluir con agua hasta 20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: UV
Longitud de onda analítica: 380 nm
Celda: 1 cm
Blanco: 1 mL de ácido perclórico y 1 mL de Solución
de ácido clorhídrico diluido con agua hasta 20 mL
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Tratar la Solución muestra, la Solución estándar y el
Blanco según se indica a continuación. Agregar 5 mL
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotación
suave hasta mezclar. Ajustar la solución en cada ma-
traz con Solución de hidróxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 ± O, 1. Agregar 5 mL de Reactivo B a cada
locar los matraces en un baño de agua mantenido a
50º y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paración. Transferir 10,0 mL de ciclohexano a cada
embudo de separación y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrífuga y centri-
fugar a 1000 rpm durante 1 minuto para eliminar el
agua remanente. Determinar las absorbancias de las
soluciones obtenidas a partir de las Muestras contra la
solución obtenida a partir del Blanco.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6393
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado= (AJA,) x [(Vx C)/Mu] x 100
Au = absorbancias de la capa de ciclohexano a
partir de la Solución muestra
As = absorbancias de la capa de ciclohexano a
partir de la Solución estándar
V = volumen de la Solución madre del estándar
usada para preparar la Solución estándar,
10 ml
C1 = concentración de selenio en la Solución madre
del estándar (µg/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solución
muestra (µg)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
• CINC, Método 7 250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 100 mg/L
Solución estándar de cinc: 1 000 µg/ml de cinc, a par-
tir de óxido de cinc en ácido clorhídrico 5 M (3,89 mg/
ml) y diluida con agua a volumen final. [NOTA-Disol-
ver en ácido clorhídrico 5 M entibiando, si fuera necesa-
rio, enfriar y luego diluir a volumen final.]
Soluciones madre del estándar: 50 µg/ml de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc diluida con ácido
clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
ml de cinc.
Solución de polisorbato 80: Preparar según se indica
en Calcio, Método 7.
Solución muestra: Proceder según se indica en Calcio,
Método 7, excepto que se debe preparar la Solución
muestra para que contenga 2 µg/ml de cinc y omitir el
uso de Solución de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: Línea de emisión de cinc
a 213,8 nm
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cinc en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porción de Cápsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración medida de cinc en la Solución
muestra (µ9/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solución
muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
• BORO, NÍQUEL, ESTAÑO y VANADIO, Método 7; CALc19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, fOSFORO
yCINC, Método 2; MOLIBDENO y SELENIO, Método 3
Solución madre de agua regia: Preparar una mezcla
de ácido clorhídrico y ácido nítrico (3: 1) agregando el
ácido nítrico al ácido clorhídrico. [NOTA-Ventilar perió-
dicamente la solución en una campana de extracción
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solución madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando un volumen de Solu-
ción madre de agua regia a dos volúmenes de agua.
Diluir con más agua a volumen y mezclar bien.
Solución de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1 000 mg/L de itrio en solución de ácido nítrico al
5% y 1 000 mg/L de escandia en solución de ácido ní-
trico al 5% y Diluyen le (1: 1: 198), y mezclar.
Solución madre del estándar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales
de interés en la solución.] Usando soluciones estándar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solución de ácido nítrico al 5%, pi-
petear y transferir la cantidad apropiada ,de_ solución .es-
tándar de elementos a un matraz volumetnco, y diluir
con solución de ácido nítrico al 5% hasta obtener una
solución con concentraciones finales de aproximada-
mente 1 000 mg/L de calcio, 1 00 mg/L de cobre,
de manganeso, 800 mg/L de fósforo y 250 mg/L de
cinc.
Solución madre del estándar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Sólo es necesario incluir los minerales de
interés en la solución.] Usando soluciones estándar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solución de ácido clorhídrico al 20%,
pipetear y transferir la cantidad apropiada ?e. solució.n .
estándar de elementos a un matraz volumetnco, y diluir
con solución de ácido clorhídrico al 20% hasta obtener
una solución con concentraciones finales de aproxima-
damente 200 mg/L de boro y 1 00 mg/L de cromo, de
molibdeno, de níquel, de selenio, de estaño y de
vanadio.
Soluciones estándar: Preparar una mezcla de Solución
madre del estándar 7 y Solución madre del estándar 2,
según se requiera, en Diluyente para preparar una curva
de calibración de seis puntos que abarque el intervalo
de concentración de cada mineral de interés.
Solución muestra: Pesar, luego transferir 5 Cápsulas a
un matraz volumétrico de 250 ml y calentar suave-
mente sobre una placa de calentamiento hasta que el
contenido empiece a liberarse. Agregar cuidadosamente
25 ml de Solución madre de agua regia en incrementos
de 5 ml y agitar por rotación suave. Calentar, continuar
agitando por rotación suave hasta que las Cápsulas se
disuelvan en el ácido, retirar inmediatamente de la
fuente de calor y agregar 150 ml de agua. Enfriar y
diluir con agua a volumen. Filtrar aproximadamente
30 ml en un tubo de centrífuga usando un filtro de
nailon para jeringa con un tamaño de poro de 5 µm. Si
fuera necesario, realizar los ajustes pertinentes usando
Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroquímica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometría de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrómetro ajustado para medir
la emisión de cada mineral de interés aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basándose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccion_adas prop~rcionan la .
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y prec1-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solución de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta según se indica en Análisis.]
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar la emisión de cada mineral de interés en
las Soluciones estándar y la Solución muestra con un
sistema de plasma inductivamente acopl?do usando
Diluyente como blanco. Graf1car la em1s1on de las So-
6394 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos USP 37

luciones estándar en función de las concentraciones, • ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP (11)

en mg/L, de los minerales de interés y trazar la recta
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir
de la gráfica así obtenida, determinar la concentra-
ción, C, en mg/L, de cada mineral de interés en la
Solución muestra. Calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de cada mineral tomado:
Resultado= C x (V/W) x F x (Cw/L) x 100
C = concentración medida de la Solución muestra
(mg/L)
V = volumen de la Solución muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilución de la Solución muestra
Cw = peso promedio de las Cápsulas (mg)
L = cantidad declarada por Cápsula (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fósforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), níquel (Ni), se-
lenio (Se), estaño (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEÑO
• DESINTEGRACIÓN Y DISOLUCIÓN DE SUPLEMENTOS DIETÉTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolución.
• VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3x10 2 ufc/g.
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
• ETIQUETADO:• La etiqueta indica que el producto es Cáp-
sulas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con Mi-
nerales. La etiqueta también indica la cantidad de cada
vitamina y mineral por unidad de dosificación y, cuando
sea necesario, la forma química de vitamina presente, e
indica además la forma salina del mineral usado como la
fuente de cada elemento. Cuando el producto contiene
vitamina E, la etiqueta indica si se trata de la forma do
di. Cuando se proporciona más de un método de valora-
ción para una vitamina o mineral en particular, el etique-
tado indica el método de valoración con el que cumple
el producto únicamente si no se usa el Método 7.
4 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan
existido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspon-
dientes (UI), siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Uni-
dad USP para Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales
(UI) para vitaminas también se han discontinuado; no obstante, continúa el
uso de UJ en las etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos
se etiguetan en términos de Unidades además del etiquetado requerido, la
relacion de las Unidades USP o UI con respecto a la masa es Ja siguiente. Una
Unidad USP de Vitamina A = 0,3 µg de todo trans retino! (alcohol de vitamina
A) o 0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o
0,55 µg de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg
de retino! (3, 3 Unidades USP de Vitamina A) ~ 1 equivalente de retino! (RE);
1 UI de beta caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP
de Vitamina D = 0,025 µg de colecalciferol o ergocalciferol; y 1 mg de di-alfa
tocoferol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-
alfa tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato
ácido de di-alfa tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg
de d-alfa tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de
acetato de d-alfa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E,
1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de
Vitamina E. En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato
de d-alfa tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo =
0,81, 1 mg de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo =
0,67, y 1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Colecalciferol USP
ER Cianocobalamina USP
ER Dexpantenol USP
ER ~rgocalciferol USP
ER Acido Fólico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Fitonadiona USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Pantenol Racémico USP
ER Riboflavina USP
ER Fluoruro de Sodio USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de,Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP
ER Vitamina A USP
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
con Minerales, Solución Oral
DEFINICIÓN
La Solución Oral de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
con Minerales contiene una o más de las siguientes vita-
minas oleosolubles: Vitamina A, Vitamina D como Ergocal-
ciferol (Vitamina D2) o Colecalciferol (Vitamina 03) y Vita-
mina E; una o ~ás de las siguientes vitaminas
hidrosolubles: Acido Ascórbico o su equivalente como As-
corbato de Calcio o Ascorbato de Sodio, Biotina, Cianoco-
balarpina, Niacina o Niacinamida, Dexpantenol o Pante-
nol, Acido Pantoténico (como Pantotenato de Calcio o
Pantotenato de Calcio Racémico), Clorhidrato de Pirido-
xina, Riboflavina o Riboflavina-5'-Fosfato Sódico y Clorhi-
drato de Tiamina o Mononitrato de Tiamina; y uno o más
minerales derivados de sustancias generalmente reconoci-
das como seguras, que proporcionan uno o más de los
siguientes elementos en forma ionizable: cromo, flúor,
yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno y cinc. La
Solución Oral contiene no menos de 90,0% y no más de
200,0% de las cantidades declaradas de vitamina A
(C20H30Ü) como retinol o ésteres de retino! en la forma de
acetato de retinilo (C22H32Ü2) o palmitato de retinilo
(C36H6o02); vitamina D como ergocalciferol (C2sH44Ü) o
colecalciferol (C 27 H44Q); vitamina E como alfa tocoferol
(C29Hso02) o acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs2Ü3) o succi-
nato ácido de alfa tocoferilo (C33Hs4Üs); ácido ascórbico
(C6Hs0 6) o sus sales como ascorbato de calcio
(C12H14Ca012 · 2H20) o ascorbato de sodio (C6H1Na06); y
tiamina (C12H11CIN4QS) como clorhidrato de tiamina o
mononitrato de tiamina; no menos de 90,0% y no más
de 150,0% de las cantidades declaradas de biotina
(C10H16N2Ü3S), pantotenato de calcio (ClBH32CaN2010),
dexpantenol (C9H19NÜ4) o pantenol (C9H19NQ4), niacina
(C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20), clorhidrato de piri-
doxina (CsH11 NQ3 · HCI), riboflavina (C11H20N406) o ribo-
flavina-5'-fosfato sódico (C11H20N4Na09P); no menos de
90,0% y no más de 450,0% de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C63HssCoN14Ü14P); no menos de 90,0%
y no más de 160,0% de las cantidades declaradas de cro-
mo(Cr), flúor (F), yodo (1) y molibdeno (Mo); y no menos
de 90,0% y no más de 125,0% de las cantidades declara-
das de hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn) y
cinc (Zn).
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione más de un método de valoración para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6395
quiera de los métodos especificados, declarando el método
usado en el etiquetado únicamente si no se usa el Método
7.]
• VITAMINA A de 500 ml que contenga 1 O ml de agua y 20 ml de
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Tetrahidrofurano y acetonitrilo (1 :1)
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,33 mg/ml de retinol (C20H300), a
partir de ER Vitamina A USP en Diluyente. [NOTA-ER
Vitamina A USP es acetato de retinilo. Usarlo para anali-
zar Solución Oral que contenga vitamina A como reti-
no!, acetato de retinilo o palmitato de retinilo.]
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 3,3 mg de
retinol, a un embudo de separación de 500 ml que
contenga 1 O ml de agua y 20 ml de alcohol deshidra-
tado. Agregar 150 ml de éter de petróleo, tapar y agi-
tar durante 1 minuto. Agregar otros 150 ml de éter de
petróleo, tapar, agitar y dejar que las capas se separen.
Desechar la capa acuosa y filtrar el extracto de éter de
petróleo a través de sulfato de sodio anhidro en un ma-
traz de fondo redondo de 500 ml. Evaporar la solución
hasta sequedad con ayuda de un evaporador rotatorio
sobre un baño de agua mantenido a aproximadamente
65º. Agregar inmediatamente 10,0 ml de Diluyente, agi-
tar por rotación suave hasta disolver el residuo y filtrar.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 50 cm (preparada a partir de dos
columnas concatenadas de 4,6 mm x 25 cm); relleno
Ll
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20H300), en la porción de So-
lución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x F x 100
ru = área del pico de retinol o éster de retinilo de
la Solución muestra
rs = área del pico de acetato de retinilo de la
Solución estándar
Cs = concentración de acetato de retinilo
(C22H3202) en la Solución estándar (µg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina A, como
retinol (C20H300), en la Solución muestra
(µg/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma éster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como retinol (C20H300)
• COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma química presente en la formulación y el Estándar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con protección act1nica durante todo este
procedimiento.]
Diluyente y Fase móvil: Preparar según se indica en
Vitamina A.
Solución estándar: 5 µg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en Diluyente
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 50 µg de co-
lecalciferol o ergocalciferol, a un embudo de separación
alcohol deshidratado. Agregar 150,0 ml de éter de pe-
tróleo, tapar y agitar durante 1 minuto. Agregar otros
150 ml de éter de petróleo, tapar, agitar y dejar que las
capas se separen. Desechar la capa acuosa. Escurrir el
extracto de éter de petróleo a través de sulfato de sodio
anhidro en un matraz de fondo redondo de 500 ml.
Evaporar la solución hasta sequedad con ayuda de un
evaporador rotatorio sobre un baño de agua mantenido
a aproximadamente 65º. Agregar inmediatamente
10,0 ml de Diluyente, agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo y filtrar.
Sistema cromatográfico: Preparar según se indica en
Vitamina A.
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C2aH440) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = áreas de los picos de colecalciferol o
ergocalciferol de la Solución muestra
rs = áreas de los picos de colecalciferol o
ergocalciferol de la Solución estándar
Cs = concentración de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solución estándar
(µg/ml)
Cu = concentración nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solución muestra (µg/ml)
F = factor de corrección que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la formulación,
1,09
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H440)
o ergocalciferol (C2aH440)
•VITAMINA E
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Solución de hidróxido de potasio: Transferir 90 g de
pellets de hidróxido de potasio a un matraz volumétrico
de 100 ml que contenga 60 ml de agua. Mezclar hasta
disolver, enfriar y diluir con agua a volumen.
Fase móvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solución estándar: 0,3 mg/ml de ER Alfa Tocoferol
USP en Diluyente
Solución muestra: Transferir una cantidad de Solución
Oral, equivalente a 1,5 mg de alfa tocoferol, a un ma-
traz Erlenmeyer de 125 ml provisto de una junta de
vidrio esmerilado y agregar 25,0 ml de alcohol deshi-
dratado. Acoplar un condensador de reflujo y someter a
reflujo en un baño de agua en ebullición durante 1 mi-
nuto. Agregar cuidadosamente 3 ml de Solución de hi-
dróxido de potasio a través del condensador y continuar
sometiendo a reflujo durante 30 minutos. Retirar el ma-
traz del baño y enjuagar el condensador con aproxima-
damente 15 ml de agua. Enfriar y transferir con un vo-
lumen mínimo de agua a un embudo de separación de
250 ml. Enjuagar el matraz con 50 ml de n-hexano y
agregar los enjuagues al embudo de separación. Tapar,
agitar vigorosamente durante 1 minuto y dejar que las
capas se separen. Escurrir la capa acuosa en un se-
gundo embudo de separación de 250 ml y repetir la
6396 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
extracción con 50 ml de n-hexano. Desechar la capa
acuosa y combinar los extractos de hexano. Lavar los
extractos combinados con 25 ml de agua, dejar que las
capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
3 gotas de ácido acético glacial y repetir el procedi-
miento de lavado dos veces más. Filtrar la capa de he-
xano lavada a través de sulfato de sodio anhidro en un
matraz de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el em-
budo y el sulfato de sodio con n-hexano y agregar el
enjuague a la solución de hexano en el matraz. Evapo-
rar la solución de hexano hasta sequedad con ayuda de
un evaporador rotatorio sobre un baño de agua mante-
nido a aproximadamente 50º. Agregar inmediatamente
5,0 ml de Diluyente y agitar por rotación suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato~ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40º
Velocidad de flujo: 3,0 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 5,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (C29Hso02), en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
muestra
rs = área del pico de alfa tocoferol de la Solución
estándar
Cs = concentración de alfa tocoferol en la Solución
estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de vitamina E como
alfa tocoferol en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
• ÁCIDO AscÓRB1co
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 80 mg de
ácido ascórbico, a un matraz Erlenmeyer. Agregar
50 ml de agua, 100 ml de ácido sulfúrico O, 1 N SV y
15,0 ml de yodo O, 1 N SV. Mezclar el contenido du-
rante 30 segundos y agregar 5 ml de almidón SR.
Análisis: Valorar inmediatamente con tiosulfato de sodio
O, 1 N SV hasta la desaparición del color. Cada ml de
yodo O, 1 N equivale a 8,806 mg de ácido ascórbico
(C6Ha06).
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de ácido ascórbico (C6Ha06) , Solución salina B: 20 g de sulfato de magnesio, 1
• ASCORBATO DE CALCIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico. Cada ml de yodo O, 1 N equivale a 10,66 mg
de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 2H20).
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 · 21-faO)
• AscoRBATO DE SODIO: Proceder según se indica en Acido
Ascórbico. Cada ml de yodo O, 1 N equivale a 9,905 mg
de ascorbato de sodio (C6H1Na06).
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
• BIOTINA, Método 7
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
USP 37
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 50 µg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solución en un
refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
O, 1 ng/ml de biotina, a partir de Solución madre del
estándar en agua.
Solución muestra: Diluir una porción medida con exac-
titud de la Solución Oral con agua hasta una concentra-
ción asumida de O, 1 ng/ml.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación bajo presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de pantotenato de calcio: 1O µg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
µg/ml de riboflavina y 1O µg/ml de clorhidrato de tia-
mina en ácido acético 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
prote';]ido de la luz, en un refrigerador.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O µg/ml de ácido p-aminoben-
zoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado y agua (1 :3). Al-
macenar en un refrigerador.
Solución salina A: 50 mg/ml de fosfato monobásico de
potasio y 50 mg/ml de fosfato dibásico de potasio en
agua. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almacenar
bajo tolueno.
mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de sulfato ferroso
y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en agua. Agregar
5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar. Almacenar bajo
tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
 USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6397
Tabla 1 (Continuación)
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de oantotenato de calcio 5 mL
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 mL
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1O mL de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobaciltus plantarum, 1
incubando durante 16--24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 mL de Solución madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodón, esterilizar en
un autoclave a 121 º durante 15 minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Transferir células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostá-
ticamente con un margen de ±0,5º. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución
estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacíos
similares 5,0 mL de Solución madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspondien-
tes a tres o más de los niveles especificados para la
Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o sección de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minación y esterilizar en un autoclave a 121 º durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnóculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solución estándar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y 37º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de turbi-
1 ATCC Nº 8014 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobacil/us arabinosus 1 7-5.
dez en los tubos que contengan el nivel más alto de
Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotómetro. Colocar la celda en
un espectrofotómetro ajustado a una longitud de onda
específica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos después
de la agitación cuando la lectura del galvanómetro se
mantenga constante durante 30 segundos o más. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
ción con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de la valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta, se$JÚn se indica a continuación. Para
cada nivel del Estandar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (Es) como la diferencia, y = 2,00 - "E5• Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la recta
o la curva de regresión que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - "Eu, sumando las dos
transmitancias ("Eu) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer, a partir de la curva estándar, el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo de los puntos extremos grafica-
dos para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido el logaritmo del volumen, en mL, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificación. Promediar los valores de X
para cada uno de tres o más niveles de dosificación
para obtener X, que es igual al logaritmo de la poten-
cia relativa, M', de la Solución muestra.
Calcular la cantidad, en ng, de biotina (C10H16N203S)
en la porción de Solución Oral tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de ng de biotina que se supuso
estaban presentes en la porción de Solución
Oral tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N203S) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = [(antilog M)!N] x 100
N cantidad nominal de biotina, en ng, en la
=
porción de Solución Oral tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
 6398 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20iS)
• BIOTINA, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución A: Transferir 800 mL de agua y 100 mL de
trietilamina a un matraz volumétrico de 1000 ml. Agre-
gar 80 mL de ácido fosfórico al 85% y diluir con agua a
volumen.
Fase móvil: Transferir 80 mL de acetonitrilo y 1 O mL de
Solución A a un matraz volumétrico de 1000 ml. Diluir
con a$lua a volumen.
Solucion estándar: 0,6 µg/mL de ER Biotina USP en
agua. [NOTA-Se usará una porción de la Solución están-
dar para determinar el porcentaje de recuperación de
biotina a partir del procedimiento de Extracción en fase
sólida.]
Solución muestra: 0,6 µg/mL de biotina, a partir de
Solución Oral en agua. Ajustar la solución con ácido
acético diluido o hidróxido de sodio O, 1 N a un pH de
6,0-7,0.
Extracción en fase sólida: [NOTA-Acondicionar la co-
lumna de extracción especificada en este procedimiento
de la siguiente manera. Lavar la columna con una por-
ción de 2 mL de metanol. Equilibrar con una porción de
2 mL de agua.] Pipetear y transferir por separado
5,0 mL de la Solución muestra y de la Solución estándar
a columnas de extracción en fase sólida recientemente
acondicionadas que consistan en un relleno de modo
mixto con una masa de sorbente de 60 mg. [NOTA-El
relleno de modo mixto consiste en sorbentes de inter-
cambio aniónico y de fase reversa. El componente de
fase reversa es un copolímero de N-vinilpirrolidona y
divinilbenceno. La unidad de intercambio aniónico es
un grupo trialquilamino. 2]
Lavar la columna con 1 O mL de metano! al 30% (v/v)
en agua. Aplicar a la columna un volumen apropiado
(4,9 mL) de metano! al 30% (v/v) en ácido clorhídrico
O, 1 N. Recoger el eluato en un matraz volumétrico de
5 mL, que contenga 100 µL de acetato de sodio al
40% (p/v) en agua, y diluir con metano! al 30% (v/v)
en ácido clorhídrico O, 1 N a volumen.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 100 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y una porción de la Solu-
ción estándar que se haya sometido a una Extracción en
fase sólida.
Requisitos de aptitud
Factor de asimetría: No más de 1,5, Solución
estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar y la Solución estándar que se haya so-
metido a una Extracción en fase sólida.
Recuperación: 95%-100%, Solución estándar que se
haya sometido a una Extracción en fase sólida.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra que se
hayan sometido a una Extracción en fase sólida.
Medir las áreas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N203S) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = área del pico de biotina de la Solución muestra
rs = área del pico de biotina de la Solución
estándar
2 Un cartucho adecuado es el cartucho Waters, Oasis MAX Vac RC, con un
tamaño de partícula de 30 ~tm, parte 186000371.
USP 37
C1 = concentración de ER Biotina USP en la Solución
estándar (µg/mL)
Cu = concentración nominal de biotina en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20iS)
• CIANOCOBALAMINA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Solución madre del estándar: 1,0 µg/mL de cianoco-
balamina, a partir de ER Cianocobalamina USP en al-
cohol al 25%. Almacenar en un refrigerador.
Solución estándar: Diluir un volumen adecuado de So-
lución madre del estándar con agua hasta un volumen
medido tal que, después del periodo de incubación se-
gún se describe en Análisis, la diferencia en la transmi-
tancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 mL de
la Solución estándar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
células. Esta concentración por lo general está entre
0,01 y 0,04 ng/mL de la Solución estándar. Preparar
esta solución en el momento de su uso para cada
valoración.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral que se supone contiene
1,0 µg de cianocobalamina, a un vaso apropiado que
contenga, por cada mL de la Solución Oral tomada,
25 mL de una solución de extracción acuosa preparada
justo antes de su uso, que contiene, en cada 100 mL,
1,29 g de fosfato dibásico de sodio, 1, 1 g de ácido cí-
trico anhidro y 1,0 g de metabisulfito de sodio. Autocla-
var la mezcla a 121 º durante 1 O minutos. Dejar que
sedimente cualquier partícula del extracto sin disolver y
filtrar o centrifugar, si fuera necesario. Diluir una alí-
cuota de la solución transparente con agua hasta obte-
ner una solución final que contenga una actividad de
vitamina B12 equivalente aproximadamente a la de la
Solución estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Preparar se-
gún se indica en Biotina, Método 1.
Solución de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Preparar según
se indica en Biotina, Método 1.
Solución de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 mL de agua, calentar a 70º, agregar 6,0 mL de
hidróxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sóli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobásico
de potasio y 1 O g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 200 mL, y agregar 2 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 mL, y agregar 2 gotas de ácido clorhídrico.
Almacenar esta solución bajo tolueno.
Solución de polisorbato 80: 20 g de polisorbato 80 en
alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en un
refrigerador.
Solución vitamínica A: 1O mg de riboflavina, 1O mg de
clorhidrato de tiamina, 100 µg de biotina y 20 mg de
niacina en ácido acético 0,02 N para obtener 400 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y proteger
de la luz.
Solución vitamínica B: 20 mg de ácido p-aminoben-
zoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de clor-
hidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de pirido-
xal, 8 mg de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg de
ácido fólico en una mezcla de agua y alcohol neutrali-
zado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un refri-
gerador y proteger de la luz.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6399
Solución madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente fórmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga l<?s
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya según se indica en ~I etiquetac;Jo, produzc~ un me-
dio comparable al obtenido de la formula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
2, <fisolviendo cuidadosamente Cistina y Triptófano en
el Acido clorhídrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones. A la solución resuítante, agregar J 00 mL de
a~ua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido as-
corbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar Solución de
polisorbato 80, ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un
pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificada hasta
250 ml.
Tabla 2
L-Cistina O1 a
L-Trintófano O 05 a
Ácido clorhídrico 1 N 10 ml
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de xantina 5 ml
Solución vitamínica A 10 ml
Solución vitamínica B 10 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de asoaraaina 5 ml
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Ácido ascórbico 1a
Solución de oolisorbato 80 5 ml
Preparación de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
ción analítico en el sobrenadante y filtrar, con ayuda de
presión reducida, a través de una capa del coadyuvante
de filtración. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: LNOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya según se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la fórmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de Dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobásico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1O mL de Preparación de jugo de tomate y 1 mL de Solu-
ción de polisorbato 80. Ajustar con hidróxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml.
Colocar porciones de 1O mL de la solución en tubos de
ensayo y tapar con algodón. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 º durante 15 minutos.
Enfriar tan rápido como sea posible para evitar la for-
mación de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensión: Diluir un volumen medido de
Solución madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar según se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un baño de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1O mL de
la solución caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfríen en posición verti-
cal. Inocular tres o más de los tubos, sembrando por
punción un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 3
LNOTA-Antes de usar por primera vez en esta. valora-
ción un cultivo recientemente preparado, realizar no
menos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un
periodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura de
30º-40º mantenida termostáticamente con un margen
de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punción al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el Jnóculo
si tienen más de 4 días de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias una o dos veces al día del cultivo por pun-
ción, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el Jnóculo líquido 2-4 horas des-
pués de la inoculación. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados erráticos.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus Jeichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Transferir células del Cultivo madre de Lactobacil/us Jeich-
mannii a dos tubos estériles que contengan 1 O mL de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30º y 40º
mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º. Centrifugar los cultivos bajo condiciones asépti-
cas y decantar el sobrenadante. Suspender las células
del cultivo en 5 mL de Medio de suspensión estéril y
combinar. Usando Medio de suspensión estéril, ajustar
el volumen de manera que una dilución 1 en 20 en
solución salina SR produzca una transmitancia del 70%
cuando se lee en un espectrofotómetro adecuado ajus-
tado a una longitud de onda de 530 nm, equipado
con una celda de 1 O mm, y leída contra solución sa-
lina SR ajustada a una transmitancia del 100%. Prepa-
rar una dilución 1 en 400 de la suspensión ajustada
usando Solución madre de medio basal estéril. [NOTA-
Esta dilución se puede alterar, cuando sea necesario,
para obtener la respuesta de prueba deseada.] La sus-
pensión de células así obtenida es el Jnóculo.
Calibración del espectrofotómetro: Revisar periódica-
mente la longitud de onda del espectrofotómetro,
usando una celda de longitud de onda estándar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotómetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, y con fa longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a cantidades mínimas de actividad de vitamina B12 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y demás
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando métodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250º durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solución estándar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 mL de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado 1 O; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solución mues-
tra. Ágr~gar a cada tubo 5,0 mL de Solución madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estándar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
-,S_e_p_u-ed_e_n_o_b-tener cultivos puros de Lactobacillus /eichman:iii (listados como
Lactobacil/us delbruecki1) como Nº 7030 en ATCC, 1 0801 Un1vers1ty Blvd., Ma-
nassas, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
6400 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
duplicado en una segunda gradilla o sección de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminación bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 º durante 5
minut?s, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no mas de 1 O minutos, precalentando el autoclave, si
fuera necesario. Enfriar tan rápido como sea posible
para evitar la formación de color que resulta del so-
brecalentamiento del medio. Tomar precauciones
para mantener la uniformidad de las condiciones de
esterilización y enfriamiento durante toda la valora-
ción, puesto que colocar los tubos demasiado cerca o
sobrecargar el autoclave puede ocasionar variaciones
en la velocidad de calentamiento.
Agregar asépticamente 0,5 ml de lnóculo a cada tubo
así preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
40º mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a no menos de 80º
durante 5 minutos. Enfriar a temperatura ambiente.
Después de agitar su contenido, leer la transmitancia
a 530 nm cuando se alcance un estado estacionario.
Este estado estacionario se observa unos pocos se-
gundos después de la agitación cuando la lectura se
mantenga constante durante 30 segundos o más.
Permitir aproximadamente el mismo intervalo de
tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia del blanco inocu-
lado. Si la diferencia es mayor de 5% o si hay eviden-
cia de contaminación con un microorganismo ex-
traño, no tomar en cuenta los resultados de la
valoración.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia de cada uno de
los tubos restantes. No tomar en cuenta los resulta-
dos de la valoración si la pendiente de la curva están-
dar indica un problema con la sensibilidad.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estándar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (L1) como la diferencia, y =
2,00 - Ls. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en función del logaritmo de los ml
de la Solución estándar por tubo sobre la abscisa
usando para la ordenada una escala aritmética e{ loga-
rítmica, la que proporcione la mejor aproximación a
una línea recta. Trazar la recta o la curva de regresión
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias (I:u) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer, a partir de la curva estándar, el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a ca~a uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido el logaritmo del volumen, en ml, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificación. Promediar los valores de X
para cada uno de los tres o más niveles de dosifica-
ción para obtener X, que es igual al logaritmo de la
potencia relativa, M', de la Solución muestra.
Calcular la cantidad, en µg, de cianocobalamina
(C61HssCoN14014P) en la porción de Solución Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = µg de cianocobalamina que se supuso estaban
presentes en la porción de Solución Oral
tomada
USP 37
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (CiHssCoN 14 0 14 P) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado= [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porción de Solución Oral tomada (µg)
Deter,minaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nac1on por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos log~ritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia, Actividad de Vitamina 8 12). Si las
dos determinaciones difieren en más de 0,08, realizar
una o más determinaciones adicionales. A partir de la
media de dos o más valores de M que no difieran en
más de O, 15, calcular la potencia media de la prepara-
ción que se está valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-450,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C61HssCoN 140 14P)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 1
Fase móvil: Fosfato monobásico de sodio 0,2 M y me-
tano! (97:3). Ajustar con ácido fosfórico 1,7 M a un pH
de 3,2±O,1.
Solución estándar: 80 µg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Fase móvil
Solución de aptitud del sistema: 80 µg/ml de ER Pan-
tenol Racémico USP en Fase móvil. Mezclar la solución
resultante con Solución estándar (1 :1 ).
Solución muestra: Equivalente a 80 µg/ml de pantote-
nato de calcio, a partir de Solución Oral en Fase móvil
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,0 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Aptitud del sistema
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1,5 entre pantenol y pan-
totenato de calcio, Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para los picos de
pantotenato de calcio y pantenol, Solución estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%, Solu-
ción estándar
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pan-
totenato de calcio (C13Hi2CaN2010) en la porción de
Solución Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C1/Cu) x 100
ru = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución muestra
rs = área del pico de pantotenato de calcio de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de pantotenato de
calcio en la Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH12CaN2010)
• PANTOTENATO DE CALCIO, Método 2
Solución madre del estándar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentóxido de fósforo y
protegido de la absorción de humedad mientras se
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6401
pesa, en 500 ml de agua en un matraz volumétrico de
1000 ml. Agregar 1O ml de ácido acético 0,2 N y
100 ml de solución de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
ción de 50 µg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución estándar: En el día de la valoración, diluir un
volumen de Solución madre del estándar con agua hasta
obtener una concentración de 0,01-0,04 µg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentración exacta
es tal que las respuestas obtenidas según se indica en el
Análisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solución estándar, están
dentro de la porción lineal de la curva de respuesta del
logaritmo de la concentración.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 50 mg de
pantotenato de calcio, a un matraz volumétrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de ácido acético 0,2 N y 100 ml de solución de
~cetato 9e. sodio (1 en 60), di.luir con agua a v~lumen y
filtrar. Diluir un volumen medido de esta solucion cuan-
titativamente, y en diluciones sucesivas si fuera necesa-
rio, con agua hasta obtener una solución con aproxima-
damente la misma concentración que la de la Solución
estándar.
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 ml de
ácido clorhídrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el ácido clorhídrico de la
mezcla mediante destilación a presión reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solución con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbón activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbón activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 Oº. Fil-
trar la solución si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina e~ u,na solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptofano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70º-80º y agregar ácido clorhídrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 µg/ml de riboflavina, 1 O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina en ácido acético
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
dr~to de piridoxina:. 1 ~ µg/ml de ácido p-aminoben-
zo1co, 50 µg/ml de n1ac1na y 40 µg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solución madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
ment~ m,ezcladas de acuerdo con la Tabla 3 y ajustar
con h1drox1do de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti- 5 ml
na
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina- 5 ml
clorhidrato de oiridoxina
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un baño de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solución caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfríen en posición
vertical. Inocular tres o más de los tubos, sembrando
por punción un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30º y 37º mantenida termostáticamente con un
margen de ±0,5º. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por punción del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnóculo
si el cultivo tiene más de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 µg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solución madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godón, esterilizar en un autoclave a 121 º durante 15
minutos y enfriar.
lnóculo: [NOTA-Se puede usar una suspensión conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnóculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Transferir células del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estéril que contenga 1 O ml de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30º y 37º mantenida termostá-
ticamente con un margen de ±0,5º. La suspensión de
células así obtenida es el lnóculo.
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solu-
ción estándar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacíos similares 5,0 ml de Solución madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volúmenes de la Solución muestra correspon-
dientes a tres o más de los niveles especificados para
la Solución estándar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0
y 4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solución
madre de medio basal y agua suficiente para obtener
1O ml. Colocar un set completo de tubos de Estándar
y muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o sección de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la con-
taminación y esterilizar en un autoclave a 121 º du-
rante 5 minutos. Enfriar, agregar 1 gota de lnóculo a
cada tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no
6402 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos
contienen Solución estándar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30º y
37° mantenida termostáticamente con un margen de
±0,5º hasta que, después de 16-24 horas de incuba-
ción, no se presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel más alto
de Estándar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la si-
guiente manera. Mezclar el contenido de cada tubo y
transferir a un recipiente apto para lectura óptica, si
fuera necesario. Leer la transmitancia entre 540 y 660
nm cuando se alcance un estado estacionario. Este
estado estacionario se observa unos pocos segundos
después de la agitación cuando la lectura del galva-
nómetro se mantenga constante durante 30 segun-
dos o más. Permitir aproximadamente el mismo inter-
valo de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nación con un microorganismo extraño, no tomar en
cuenta el resultado de ía valoración.
Cálculo: Preparar una curva estándar de concentra-
ción-respuesta según se indica a continuación. Para
cada nivel del Estándar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (Ls), como la diferencia, y = 2,00 - Ls. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
función del logaritmo de los mL de la Solución están-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmética o logarítmica, la que proporcione
la mejor aproximación a una línea recta. Trazar la recta
o la curva de regresión que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solución
muestra. Leer, a partir de la curva estándar, el loga-
ritmo del volumen de la Solución estándar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estándar. Restar de cada logaritmo así
obtenido, el logaritmo del volumen, en mL, de la So-
lución muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificación. Promediar los valores de X
para cada uno de los tres o más niveles de dosifica-
ción para obtener X, que es igual al logaritmo de la
potencia relativa, M', de la Solución muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente a pantotenato de calcio
(C1sH32CaN2010) en la porción de Solución Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = número de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porción de
Solución Oral tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1BH32CaN2010) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado = [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porción de Solución Oral tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nación por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no más de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseño y Análisis de Valora-
ciones Biológicas (111 >, El Intervalo de Confianza y los
Límites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
USP 37
ren en más de 0,08, realizar una o más determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o más
valores de M que no difieran en más de O, 15, calcular
la potencia media de la preparación que se está
valorando.
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C 18 H32 CaN2010)
• DEXPANTENOL o PANTENOL, Método 1
Fase móvil y Sistema cromatográfico: Proceder según
se indica en la valoración de Pantotenato de Calcio, Mé-
todo 7.
Solución estándar: 80 µg/mL de ER Dexpantenol USP o
ER Pantenol Racémico USP en Fase móvil. [NOTA-Usar
ER Dexpantenol USP para analizar la Solución Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racémico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solución de aptitud del sistema: 80 µg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en Fase móvil. Mezclar la solu-
ción resultante y Solución estándar (1 :1 ).
Solución muestra: Equivalente a 80 µg/mL de dexpan-
tenol o pantenol, a partir de Solución Oral en Fase
móvil
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos de pantenol.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol (C9H19N04) en la porción de Solu-
ción Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solución muestra
rs = área del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Dexpantenol USP o ER
Pantenol Racémico USP en la Solución
estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de pantenol o
dexpantenol en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
• DEXPANTENOL o PANTENOL, Método 2
[NOTA-El siguiente procedimiento también se aplica a la
determinación del componente dextrógiro de pantenol
racémico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan según
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados según se describe en este
procedimiento.
Solución madre del estándar: 800 µg/mL de ER Dex-
pantenol USP o 1600 µg/mL de ER Pantenol Racémico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 días. [NOTA-Usar ER
Dexpantenol USP para analizar la Solución Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racémico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solución estándar: En el día de la valoración, preparar
1,2 µg/mL de dexpantenol o 2,4 µg/mL de pantenol ra-
cémico, a partir de Solución madre del estándar con
agua.
Solución muestra: 1,2 µg/mL de dexpantenol o 2,4 µg/
mL de pantenol, a partir de Solución Oral en agua
Solución de hidrolizado ácido de caseína: Mezclar
100 g de caseína exenta de vitaminas con 500 mL de
ácido clorhídrico diluido (1 en 2) y someter la mezcla a
reflujo durante 8-1 2 horas. Eliminar el ácido clorhídrico
de la mezcla mediante destilación a presión reducida
hasta que se forme una pasta espesa. Disolver nueva-
mente la pasta resultante en aproximadamente 500 mL
de agua, ajustar la solución con hidróxido de sodio 1 N
a un pH de 3,5 ± O, 1 y diluir con agua hasta 1000 ml.
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
Agregar 20 g de carbón activado, mezclar durante 1
hora y filtrar. Repetir el tratamiento con carbón acti-
vado. Almacenar bajo tolueno en un lugar fresco a una
temperatura de no menos de 1Oº. Filtrar la solución si
se forma un precipitado durante el almacenamiento.
Solución de cistina-triptófano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solución de 1,0 g de L-triptófano (o 2,0 g
de D,L-triptófano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 ± 5º y agregar solución de ácido clorhídrico 6 M,
gota a gota, mezclando, hasta que los sólidos se disuel-
van. Enfriar, diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar.
Almacenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tem-
peratura de no menos de 1Oº.
Solución de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
ácido clorhídrico 4 N. Enfriar, diluir con agua hasta
200 ml y mezclar. Almacenar bajo tolueno en un
refrigerador.
Solución de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: Preparar una solución de riboflavina, clorhidrato
de tiamina y biotina en ácido acético 0,02 N que con-
tenga 20 µg/ml de riboflavina, 1O µg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 µg/ml de biotina. Almacenar bajo to-
lueno en un refrigerador y proteger de la luz.
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: Preparar una solución en alcohol
neutro al 25% que contenga 1O µg/ml de ácido p-ami-
nobenzoico, 50 µg/ml de niacina y 40 µg/ml de clorhi-
drato de piridoxina. Almacenar en un refrigerador.
Solución salina A: Disolver 25 g de fosfato monobásico
de potasio y 25 g de fosfato dibásico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ácido
clorhídrico y mezclar. Almacenar bajo tolueno.
Solución salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de ácido clorhídrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solución de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
40 mg de clorhidrato de piridoxal y 375 µg de pantote-
nato de calcio en alcohol al 10% para obtener 200 ml,
y mezclar. Almacenar en un refrigerador y usar dentro
de los 30 días.
Solución de polisorbato 40-ácido oleico: Disolver
25 g de polisorbato 40 y 0,25 g de ácido oleico en al-
cohol al 20% para obtener 500 ml y mezclar. Almace-
nar en un refrigerador y usar dentro de los 30 días.
Medio de pantotenato modificado: Disolver Dextrosa
anhidra y Acetato de sodio en las soluciones previamente
mezcladas de acuerdo con la Tabla 4, ajustar con hidró-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8, diluir con agua hasta
250 ml y mezclar.
Tabla 4
Solución de hidrolizado ácido de caseína 25 ml
Solución de cistina-triotófano 25 ml
Solución de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5a
Solución de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solución de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solución de ácido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solución salina A 5 ml
Solución salina B 5 ml
Solución de oiridoxal-oantotenato de calcio 5 ml
Solución de oolisorbato 40-ácido oleico 5 ml
6403
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tración: Preparar según se indica en Medio de pantote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
ción final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver
6,0 g de peptona, 4,0 g de digerido pancreático de ca-
seína, 3,0 g de extracto de levadura, 1,5 g de extracto
de carne, 1,0 g de dextrosa y 15,0 g de agar en 800 ml
de agua, con ayuda de calor. Ajustar con hidróxido de
sodio O, 1 N o ácido clorhídrico O, 1 N a un pH entre
6,5 y 6,6, diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar.
Agregar porciones de 1O ml de la solución a tubos de
cultivo, tapar los tubos y esterilizar en un autoclave a
121 º durante 15 minutos. Enfriar los tubos en un plano
inclinado y almacenar en un refrigerador. Preparar un
cultivo madre de Pediococcus acidilactici4 en un tubo
con este medio inclinado. Incubar a 35º durante 20-24
horas y almacenar en un refrigerador. Mantener el cul-
tivo madre mediante transferencias mensuales a tubos
con medio inclinado preparado recientemente.
lnóculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado estéril a partir de un cultivo ma-
dre en medio inclinado e incubar a 35º durante 20-24
horas. Centrifugar la suspensión a partir de las porcio-
nes combinadas y lavar las células con Medio de panto-
tenato modificado estéril. Resuspender las células en sufi-
ciente Medio de pantotenato modificado estéril de
manera que una dilución 1 en 50, cuando se analiza en
un tubo de ensayo de 1 3 mm de diámetro, proporcione
80% de transmisión de luz a 530 nm. Transferir porcio-
nes de 1,2 ml de esta suspensión madre a ampollas de
vidrio estériles, sellar, congelar en nitrógeno líquido y
almacenar en un congelador. En el día de la valoración,
dejar que las ampollas alcancen la temperatura am-
biente, mezclar el contenido y diluir 1 ml de cultivo
descongelado con solución salina SR estéril hasta
150 ml. [NOTA-Esta dilución se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba
deseada.]
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Preparar por triplicado una serie de ocho tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a
los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5; 3,0;
2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0;
4,0 y 5,0 ml de la Solución estándar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solución
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentración a cada tubo y mezclar. Tapar los
tubos con tapas de metal y esterilizar en un autoclave
a 121 º durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un baño de agua fría e inocular cada tubo
con 0,5 ml del lnóculo. Dejar que se incube a 37º du-
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
una temperatura de no menos de 80º, por ejemplo
mediante la aplicación de vapor a presión atmosférica
en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
terminar concomitantemente la transmitancia porcen-
tual de las suspensiones, en celdas de igual longitud
de paso, en un espectrofotómetro adecuado, a una
longitud de onda de 530 nm.
Cálculo: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estándar en función de las concentraciones
del nivel del estándar. La curva se traza conectando
4 ATCC Nº 8042 es adecuado. Esta cepa se conocía anteriormente como Lac-
tobacilfus arabinosus 17-5.
6404 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos
cada par adyacente de puntos con una línea recta. A
partir de esta curva estandar, determinar mediante
interpolación la potencia, en términos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solución
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solución muestra que se le agregó, para ob-
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
media promediando las respuestas individuales que va-
rían de su media en no más de 15%, usando no me-
nos de la mitad del número total de tubos. Calcular la
potencia de la porción de la Solución Oral tomada
para la valoración, multiplicando la respuesta media
por el factor de dilución apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia calculada de dexpantenol o pantenol
en la porción de Solución Oral tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porción de Solucion Oral tomada (mg)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
• NIACINA o NIACINAMIDA
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 25 mg/mL de edetato disódico en agua
Fase móvil: Mezclar 350 mL de metanol, 15,0 mL de
ácido acético glacial, 0,4 mL de trietilamina y diluir con
1-hexanosulfonato de sodio 0,008 M hasta 2000 ml.
Solución estándar: O, 1O mg/mL de ER Niacina USP o
ER Niacinamida USP en Diluyente. [NOTA-Usar ER Nia-
cina USP para la Solución Oral que contiene niacina y
usar ER Niacinamida USP para la Solución Oral que con-
tiene niacinamida.]
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral con Diluyente hasta obtener una
solución con una concentración de O, 1 mg/mL de nia-
cina o niacinamida.
Sistema cromato9ráfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyección: 5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Requisitos de aptitud
Desviación estándar relativa: No más de 2,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de nia-
cina (C5HsN02) o niacinamida (C5H5N20) en la por-
ción de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución muestra
rs = área del pico de niacina o niacinamida de la
Solución estándar
Cs = concentración de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solución estándar
(mg/mL)
Cu = concentración nominal de niacina o
niacinamida en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN0 2) o niacinamida
(C6H6N20)
• CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
USP 37
Solución estándar: Equivalente a 24 µg/mL de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Diluyente
Solución muestra: Equivalente a 24 µ9/mL de Clorhi-
drato de Piridoxina, a partir de Solucion Oral en
Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de clor-
hidrato de piridoxina (C 8 H11 N0 3 . HCI) en la porción
de Solución Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C 5/Cu) x 100
ru = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución muestra
rs = área del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solución estándar
Cs = concentración de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrat9 de piridoxina (CsH11 N03 · HCI)
• RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SODICO, Método 1
[NOTA-La Riboflavina-5'-fosfato sódico se cuantifica con-
tra el ER Riboflavina USP en este procedimiento. En el
cromatograma de la Solución muestra, el pico de ribofla-
vina-5' -fosfato es el único pico medido para cálculos.]
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 8 µg/mL de ER Ribo-
flavina USP en Diluyente, calentando si fuera necesario.
Solución muestra: Equivalente a 8 µg/mL de ribofla-
vina, a partir de Solución Oral en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para ribofla-
vina-5'-fosfato y riboflavina son aproximadamente O, 18
y 1,0, respectivamente.]
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ri-
boflavina (C17H20N405) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = área del pico de riboflavina-5'-fosfato de la
Solución muestra
rs = área del pico de riboflavina de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/mL)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/mL)
F = factor para convertir la respuesta obtenida
para riboflavina-5'-fosfato a riboflavina,
1,493. [NOTA-La riboflavina fosfato sódico
es una mezcla de monofosfatos y difosfatos
isoméricos que contienen una cantidad pro-
medio de 67% de riboflavina-5'-monofosfa-
to, la cual se separa en este sistema
cromatográfico. El factor 1,493 asume 67%
de riboflavina-5'-monofosfato.]
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C17H20N405),
• RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SODICO, Método 2
[NOTA-Usar material de vidrio con protección actínica
durante todo este procegimiento.]
Blanco de disolventes: Acido clorhídrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (1 :2:97)
Solución madre del estándar: Transferir O, 16 mg/mL
de ER Riboflavina USP en ácido clorhídrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (1 :2:97). Mezclar la solución
resultante y agua (1 :9).
Solución estándar: Transferir 5,0 mL de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 500 mL, agre-
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6405
gar 5,0 ml de ácido clorhídrico 1 N, 10,0 ml de ace-
tato de sodio 2,5 M y diluir con agua a volumen.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 0,8 mg de ri-
boflavina a un matraz volumétrico de 100 ml y diluir
con agua a volumen. Transferir 10,0 ml de la solución
resultante a un matraz volumétrico de 500 ml, agregar
5,0 ml de ácido clorhídrico 1 N, 10,0 ml de acetato de
sodio 2,5 M y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Fluorescencia
Longitudes de onda analíticas
Excitación: 440 nm
Emisión: 530 nm
Blanco: Blanco de disolventes
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Determinar las intensidades de fluorescencia máximas, Is
e lu, de la Solución estándar y la Solución muestra,
respectivamente.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ribo-
flavina (C11H20N406) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (/u/Is) x (Cs/Cu) x 100
lu = intensidad de fluorescencia de la Solución
muestra
Is = intensidad de fluorescencia de la Solución
estándar
Cs = concentración de ER Riboflavina USP en la
Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de riboflavina en la
Solución muestra (mg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
• TIAMINA
Diluyente, Fase móvil y Sistema cromatográfico: Pro-
ceder según se indica en Niacina o Niacinamida.
Solución estándar: Equivalente a 24 µg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en Diluyente
Solución muestra: Equivalente a 24 µg/ml de clorhi-
drato de tiamina o mononitrato de tiamina, a partir de
Solución Oral en Diluyente
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir las áreas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S · HCI) o mononitrato de tia-
mina (C12H11Ns04S) en la porción de Solución Oral
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x F x 100
ru = área del pico de tiamina de la Solución muestra
rs = área del pico de tiamina de la Solución
estándar
Cs = concentraciónde ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solución estándar (mg/ml)
Cu = concentración nominal de clorhidrato de
tiamina o mononitrato de tiamina en la
Solución muestra (mg/ml)
F = 1 (para productos que contengan clorhidrato
de tiamina) y 0,97 (para productos que
contengan mononitrato de tiamina)
Criterios de aceptación: 90,0%-200,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de tiamina (C12H11CIN40S ·
HCI) o mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
[NOTA-Se pueden usar soluciones estándar de absorción
atómica disponibles comercialmente para los minerales,
si es aplicable, cuando se describe la preparación de
una solución madre del estándar en las siguientes valo-
raciones. Usar agua desionizada cuando se especifica
agua. Cuando se especifica espectrofotometría de ab-
sorción atómica en la valoración, se pueden diluir cuan-
titativamente las Soluciones estándar y la Solución mues-
tra con el disolvente especificado, si fuera necesario,
para producir soluciones con concentraciones adecua-
das adaptables al intervalo lineal o de trabajo del
instrumento.]
• CROMO
Solución estándar de cromo: 1000 µg/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secados a
120º durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solución madre del estándar: 1 O µg/ml de cromo, a
partir de Solución estándar de cromo diluida con ácido
clorhídrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estándar: Transferir 10,0 ml y 20,0 ml de
Solución madre del estándar a sendos matraces volumé-
tricos de 100 ml, y transferir 15,0 ml y 20,0 ml de So-
lución madre del estándar a sendos matraces volumétri-
cos de 50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los
cuatro matraces con ácido clorhídrico O, 125 N a volu-
men para obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 µc_;¡/ml de cromo.
Solucion muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
hasta obtener una solución equivalente a 1 µg/ml de
cromo.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 357,9 nm
Lámpara: Cromo, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
cromo en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentración de cromo en la Solución
muestra (µ~/ml)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solución muestra, (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
• FLUORUROS
[NOTA-Usar envases de plástico durante todo este
procedimiento.]
Solución de ácido ascórbico: 70 mg/ml de ácido as-
córbico en agua
Fase móvil: Alcohol, agua y ácido sulfúrico 1 N
(50:449:1)
Solución madre del estándar: 220 µg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solución contiene
100 µ_g/ml de fluoruro.
Solucion estándar: Transferir 5,0 ml de Solución madre
del estándar a un matraz volumétrico de 100 ml. Agre-
gar 2 ml de Solución de ácido ascórbico, 1 O ml de al-
cohol y aproximadamente 70 ml de agua, y mezclar.
Ajustar con hidróxido de sodio 1 N a un pH de 4,25 ±
0,05. Diluir con agua a volumen y mezclar para obtener
una solución de fluoruro de 5 µg/ml.
Solución muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral, equivalente a 0,5 mg de
fluoruro, a un matraz volumétrico de 100 ml. Agregar
1 gota de ácido clorhídrico, 1 O ml de alcohol y aproxi-
madamente 75 ml de agua, y mezclar. Ajustar con hi-
6406 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietéticos USP 37

dróxido de sodio 1 N d un pH de 4,25 ± 0,05. Diluir Análisis

con agua a volumen. Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Sistema cromato9ráfico Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) yodo (1) en la porción de Solución Oral tomada:
Modo: HPLC
Detector: Conductividad Resultado = (ru/rs) x (C5/Cu) x 100
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7 ru = área del pico de yoduro de la Solución muestra
Columna analítica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L17 rs = área del pico de yoduro de la Solución
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min estándar
Volumen de inyección: 100 µL Cs = concentración de yoduro en la Solución
Aptitud del sistema estándar (µg/ml)
Muestra: Solución estándar Cu = concentración nominal de yodo en la Solución
Requisitos de aptitud muestra (µg/ml)
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% Criterios de aceptación: 90,0%-1 60,0% de la cantidad
Análisis declarada de yodo (1)
Muestras: Solución estándar y Solución muestra • HIERRO
Medir las áreas de los picos de fluoruro. Calcular el Solución madre del estándar de hierro: Transferir
porcentaje de la cantidad declarada de flúor (F) en la 100 mg de polvo de hierro a un matraz volumétrico de
porción de Solución Oral tomada: 1000 ml, disolver en ácido clorhídrico 6 N y diluir con
agua a volumen.
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 Soluciones estándar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solución madre del estándar de hierro a sen-
ru = área del pico de fluoruro de la Solución dos matraces volumétricos de 100 ml. Diluir el conte-
muestra nido de cada matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a
rs = área del pico de fluoruro de la Solución volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
estándar 6,0 y 8,0 µg/ml de hierro.
Cs = concentración de fluoruro en la Solución Solución muestra: 6 µg/ml de hierro, a partir de Solu-
estándar (µg/ml) ción Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
Cu = concentración nominal de flúor en la Solución Condiciones instrumentales
muestra (µg/ml) (Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
declarada de fluor (F) Longitud de onda analítica: 248,3 nm
• YODUROS Lámpara: Hierro, de cátodo hueco
Fase móvil: Disolver 5, 15 g de bromuro de tetrabutila- Llama: Ajre-acetileno
monio en 320 ml de acetonitrilo. Diluir con agua hasta Blanco: Acido clorhídrico 0, 125 N
2000 ml. Análisis
Solución madre del estándar: l, 3 mg/ml de yoduro Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
de potasio en Fase móvil. Esta solución tiene una con- Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
centración de 1 mg/ml de yoduro. Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
Solución estándar: 2,5 µg/ml de yoduro, a partir de tándar en función de sus concentraciones, en µg/ml,
Solución madre del estándar en Fase móvil de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
Solución de aptitud del sistema: Transferir O, 1 3 g de cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así ob-
yoduro de potasio y 0,5 g de yodato de potasio a un tenida, determinar la concentración, C, en µg/ml, de
matraz volumétrico de 100 ml. Disolver en Fase móvil, hierro en la Solución muestra.
usando ultrasonido, si fuera necesario, diluir con Fase Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
móvil a volumen y mezclar. Transferir 1,0 ml de esta hierro (Fe) en la porción de Solución Oral tomada:
solución a un matraz volumétrico de 100 ml, diluir con
Fase móvil a volumen y mezclar. Transferir 25,0 ml de Resultado = (C/Cu) x 100
esta solución a un matraz volumétrico de 100 ml y di-
luir con Fase móvil a volumen. C = concentración de hierro en la Solución muestra
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac- a partir de la gráfica (µg/ml)
titud de Solución Oral hasta obtener una solución con Cu = concentración nominal de hierro en la Solución
una concentración de 2,5 µg/ml de yodo en Fase móvil. muestra (µg/ml)
Sistema cromato9ráfico Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) declarada de hierro (~e)
Modo: HPLC • MAGNESIO
Detector: UV 225 nm Solución estándar de magnesio: Transferir 1,00 g de
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 cinta de magnesio a un matraz volumétrico de
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min 1000 ml. Disolver en 50 ml de ácido clorhídrico 6 N y
Volumen de inyección: 30 µL diluir con agua a volumen.
Aptitud del sistema Solución madre del estándar: 20 µg/ml de magnesio,
Muestras: Solución estándar y Solución de aptitud del a partir de Solución estándar de magnesio en ácido clor-
sistema hídrico O, 125 N
[NOTA-Los tiempos de retención relativos para yodato Soluciones estándar: Transferir 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 y
y yoduro son aproximadamente 0,32 y 1,0, 15,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
respectivamente.] ces volumétricos de 100 ml. Diluir con ácido clorhídrico
Requisitos de aptitud O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
Resolución: No menos de 2,5 entre yodato y yoduro, 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 µg/ml de magnesio.
Solución de aptitud del sistema Solución muestra: 2,5 µg/ml de magnesio, a partir de
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para Solución Oral en ácido clorhídrico 0, 125 N
el pico de yoduro, Solución estándar Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ) .)
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6407
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 285,2 nm
Lámpara: Magnesio, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así obte-
nida, determinar la concentración, C, en µg/mL, de
magnesio en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de magnesio en la Solución
muestra, a partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de magnesio en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
• MANGANESO
Solución estándar de manganeso: Transferir 1,0 g de
manganeso a un matraz volumétrico de 1 000 ml. Di-
solver en 20 mL de ácido nítrico y diluir con ácido clor-
hídrico 6 N a volumen.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de manga-
neso, a partir de Solución madre del estándar de manga-
neso en ácido clorhídrico O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 µg/mL de manganeso.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral hasta obtener 1,5 µg/mL de
manganeso en ácido clorhídrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 279,5 nm
Lámpara: Manganeso, de cátodo hueco
Llama: Ajre-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de manganeso en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de manganeso en la Solución
muestra, a partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de manganeso en la
Solución muestra (µg/ml)
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
• MOLIBDENO
Solución estándar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumétrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de ácido nítrico, enti-
biando, si fuera necesario. Diluir con agua a volumen.
Solución madre del estándar: 100 µg/ml de molib-
deno, a partir de Solución estándar de molibdeno en
agua
Soluciones estándar: Transferir 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
3,0 mL de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Agregar ácido clorhídrico
O, 125 N a volumen y mezclar para obtener las solucio-
nes con concentraciones conocidas de aproximada-
mente 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 3,0 µg/mL de molibdeno.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solución Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
hasta obtener 1 µg/mL de molibdeno, a partir de Solu-
ción Oral.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 313,3 nm
Lámpara:, Molibdeno, de cátodo hueco
Llama: Qxido nitroso-acetileno
Blanco: Acido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en µg/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la gráfica así
obtenida, determinar la concentración, C, en µg/mL,
de molibdeno en la Solución muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porción de Solución Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentración de molibdeno en la Solución
muestra, a partir de la gráfica (µg/mL)
Cu = concentración nominal de molibdeno en la
Solución muestra (µg/mL)
Criterios de aceptación: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
• CINC
Solución estándar de cinc: Transferir 311 mg de óxido
de cinc a un matraz volumétrico de 250 mL y agregar
80 ml de ácido clorhídrico 6 N, entibiando, si fuera ne-
cesario para disolver. Enfriar, diluir con agua a volumen
y mezclar para obtener una solución con una concen-
tración conocida de 1000 µg/mL de cinc.
Solución madre del estándar: 50 µg/mL de cinc, a
partir de Solución estándar de cinc en ácido clorhídrico
O, 125 N
Soluciones estándar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solución madre del estándar a sendos matra-
ces volumétricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con ácido clorhídrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 µg/
mL de cinc.
Solución muestra: Diluir un volumen medido con
exactitud de Solución Oral en ácido clorhídrico O, 125 N
hasta obtener 1 µg/mL de cinc.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometría y Dispersión de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometría de absorción atómica
Longitud de onda analítica: 213,8 nm
Lámpara: Cinc, de cátodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Ácido clorhídrico O, 125 N
Análisis
Muestras: Soluciones estándar y Solución muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tándar en función de sus concentraciones, en ~1g/mL,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la gráfica así obtenida,
determinar la concentración, C, en µg/mL, de cinc en
la Solución muestra.
 6408 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietéticos USP 37

Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc ER Pantotenato de Calcio USP

(Zn) en la porción de Solución Oral tomada: Sal cálcica (1 :2) de (R)-N-(2,4-dihidroxi-3, 3-dimetil-
1-oxobutil)-/3-alanina.
Resultado = (C/Cu) x 100 C1sHi2CaN2010 476,53
ER Colecalciferol USP
C = concentración de cinc en la Solución muestra, (3f3,5Z, 7E)-9,1O-Secocolesta-5,7,1 0(1 9)-trien-3-ol.
a partir de la gráfica (µg/mL) C21H440 384,64
Cu = concentración nominal de cinc en la Solución ER Cianocobalamina USP
muestra (µg/mL) Vitamina B12.
Criterios de aceptación: 90,0%-125,0% de la cantidad C63HssCoN14014P 1355,37
declarada de cinc (Zn) ER Dexpantenol USP
( R)-2, 4-Di h id roxi-N-( 3-h id ro xi pro pi 1)- 3, 3-d imetil-
OTROS COMPONENTES butana mida .
• DETERMINACIÓN DE ALCOHOL,Método I (611) (si estuviera C9H19N04 205,25
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada
ER Ergocalciferol USP
de alcohol (C2HsOH)
(3f3,5Z,7E,22E)-9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-
CONTAMINANTES 3-ol.
• PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- C2sH440 396,65
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3 Ef3 Niacina USP
ufc/mL, y el recuento total combinado de hongos fila- Acido 3-piridincarboxílico.
mentosos y levaduras no excede de ,3 x 102 ufc/mL. C6HsN02 123, 11
• AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- ER Niacinamida USP
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la 3-Piridincarboxamida.
ausencia de Salmonella spp., Escherichia co/i y Staphylococ- C6H6N20 122, 12
cus aureus. ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de 5-hidroxi-6-metil-3,4-piridindimetanol.
REQUISITOS ADICIONALES CsH11N03 · HCI 205,64
• ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- ER Pantenol Racémico USP
permeables y resistentes a la luz, bajo gas inerte o con (±)-2, 4-Di h id roxi-N-(3-h id ro xi pro pi 1)-3, 3-d i meti 1-
una cámara gaseosa superior mínima. butana mida.
• ETIQUETADO:• La etiqueta indica que el producto es Solu- C9H19N04 205,25
ción Oral de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con ER Riboflavina USP
Minerales. La etiqueta también indica la cantidad de cada Riboflavina.
vitamina y mineral en un volumen dado de Solución Oral C11H20N406 376,36
y, cuando sea necesario, la forma química de vitamina ER Fluoruro de Sodio USP
presente e indica además la forma salina del mineral Fluoruro de sodio.
usado como la fuente de cada elemento. Cuando el pro- NaF 41,99
ducto contiene vitamina E, la etiqueta indica si se trata ER Clorhidrato de Tiamina USP
de la forma d o di. Cuando el producto declara contener Monoclorhidrato de cloruro de 3-[(4-amino-2-metil-
pantenol, la etiqueta indica el contenido equivalente de 5-pirimidinil)metil]-5-(2-hidroxietil)-4-metil-tiazol.
dexpantenol. Cuando se proporciona más de un método C12H11CIN40S · HCI 337,27
de valoración para una vitamina o mineral en particular, ER Vitamina A USP
el etiquetado indica el método de valoración con el que Acetato de 3,7-dimetil-9-(2,6,6-trimetil-1-ciclohexen-
CUl)lple el producto únicamente si no se usa el Método 7. 1-il) 2,4,6,8-nonatetraen-1-ol (acetato de vitamina A).
• ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
2H-1-Benzopiran-6-ol, 3,4-dihidro-2,5,7,8,-tetrametil-2-
(4,8, 12-trimetiltridecil)-.
C29Hso02 430,70 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
ER Biotina USP
Ácido hexahidro-2-oxo-3aS-[(3aa,4f3,6aa)]-1 H-tieno[3,4-
con Minerales, Tabletas
d]imidazol-4-pentanoico.
C10H16N203S 244,31 DEFINICIÓN
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con
5 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis- Minerales contienen una o más de las siguientes vitaminas
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes, oleosolubles: Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami- (Vitamina D2) o Colecalciferol (Vitamina 03), Vitamina E,
nas también se han discontinuado; no obstante, continúa el uso de UI en las Fitonadiona (Vitamina K1) y Beta Carot~no; una o más de
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artículos se etiquetan en las siguientes vitaminas hidrosolubles: Acido Ascórbico o
términos de Unidades, además del etiquetado requerido, la relación de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente: Una Unidad USP su equivalente como Ascorbato de, Calcio o Ascorbato de
de Vitamina A= 0,3 µg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o Sodio, Biotina,, Cianocobalamina, Acido Fálico, Niacina o
0,344 µg de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 µg Niacinamida, Acido Pantoténico (como Pantotenato de
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 µg de reti- Calcio o Pantotenato de Calcio Racémico), Clorhidrato de
no! (3,3 Unidades USP de Vitamina A)= 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 µg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita- Piridoxina, Riboflavina y Clorhidrato de Tiamina o Mono-
mina D = 0,025 µg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe- nitrato de Tiamina; y uno o más minerales derivados de
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alta sustancias generalmente reconocidas como seguras, que
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato ácido de
di-alta tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa proporcionan uno o más de los siguientes elementos en
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre, flúor, yodo,
d-alta tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi- hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, níquel, fósforo,
nato ácido de d-alta tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E. potasio, selenio, estaño, vanadio y cinc. Las Tabletas con-
En términos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alta
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato ácido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg tienen no menos de 90,0% y no más de 165,0% de las
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alta tocoferilo = 0,67, y cantidades declaradas de vitamina A (C20H300) como reti-
1 mg de succinato ácido de di-alfa tocoferilo = 0,60. no! o ésteres de retino! en la forma de acetato de retinilo
(C22Hi202) o palmitato de retinilo (C36H6o02), vitamina D
como colecalciferol (C21H440) o ergocalciferol (C2sH440),
USP 37 Suplementos Dietéticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6409
vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02) o acetato de
alfa tocoferilo (Ci1 Hs201) o succinato ácido de alfa tocofe-
rilo (C11Hs4Üs), fitonadiona (C11 H4602) y beta caroteno
(CoHs6); no menos de 90,0% y no más de 150,0% de las
cantidades declaradas de ácido ascórbico (C6Hs06) o sus
sales como ascorbato de calcio (Ci2H14Ca012 · 2H20) o as-
corbato de sodio (C6H1Na06), biotina (C10H16N201S), cia-
nocobalamina (C61HsaCoN14Ü14P), ácido fólico
(C19H19N106), niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), pantotenato de calcio (C1sH12CaN2010), clorhi-
drato de piridoxina (CaH11 NOi · HCI), riboflavina
(C11H20N406) y tiamina (C12H11CIN40S) como clorhidrato
de tiamina o mononitrato de tiamina; no menos de
90,0% y no más de 125,0% de las cantidades declaradas
de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), manganeso (Mn),
magnesio (Mg), fósforo (P), potasio (K) y cinc (Zn); y no
menos de 90,0% y no más de 160,0% de las cantidades
declaradas de boro (B), cromo (Cr), flúor (F), yodo (1),
molibdeno (Mo), níquel (Ni), selenio (Se), estaño (Sn) y
vanadio (V).
Pueden contener otra
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 µm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 40 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 1O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviación estándar relativa: No más de 3,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Medir el área del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solución estándar y el área del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo en el cro-
matograma de la Solución muestra. Para productos
que contengan acetato de vitamina A o palmitato de