Cultivos celulares

Nombre: Betty Acaro Reyes

Fecha:10/05/2020
Paralelo: C
Tema: Redacta un ensayo de 500 palabras donde menciones el objetivo, metodología,
resultados recalcando la importancia de los cultivos celulares en este artículo de investigación

ESTUDIO DE FÁRMACOS INHIBIDORES DE AUTOFAGIA Y EPIGENÉTICOS EN UNA LÍNEA

CELULAR DE CÁNCER DE PRÓSTATA

El principal objetivo del artículo fue evaluar el efecto citotóxico de Cloroquina y Panobinostat
en la línea celular prostática VCAP mediante el ensayo MTT y analizar el efecto de los
fármacos, tanto individual como sinérgico, sobre el ciclo celular.

Para este estudio utilizaron una línea celular derivada de un adenocarcinoma de próstata
VCAP, obtenida de ATCC, estas células se cultivaron en el medio DMEM, complementado con
10% FBS (suero fetal bovino), 100 U/ml de penicilina y 100 μg/ml de estreptomicina y luego
estas se incubaron a 37ºC al 5% de CO2. a través MTT se analizó el crecimiento y la
supervivencia celular dependiendo de las concentraciones del Cloroquina y Panobinostat

Se estudió la línea celular VCAP tratada con Cloroquina 25µM y Panobinostat 50nM por
separado, y posteriormente se estudió el efecto sinérgico. donde el tiempo 0 fue tomado
como control, y el tratamiento se realizó a 24, 48 y 72h. Luego, colocaron tripsina a las células
y se recogieron con PBS. Posteriormente a esto Centrifugaron 3’ 1200rpm. Eliminando el
sobrenadante y resuspendiendo el pellet en etanol frío al 70%. Para la medición por
inmunocitometría lavaron con PBS tres veces y añadieron RNAsa y PI, que, al intercalarse en el
ADN, permite analizar las fases del ciclo celular en las que se encuentran las células, de manera
que la cantidad de PI es proporcional a la cantidad de ADN. Tras 1h a temperatura ambiente en
oscuridad se analizaron las muestras en un citómetro que cuantifica las células en cada estadio
del ciclo.

Efecto de Cloroquina sobre la proliferación de la línea celular VCAP ,las células tratadas a partir
de una concentración mínima inhibitoria 25µM presentan disminución en la proliferación, y
que, a medida que aumenta la concentración, mayor es dicha disminución debido a esto, se
usó para analizar la distribución del ciclo celular mediante citometría en la cual observaron
que la mortalidad aumenta a medida que aumenta el tiempo de exposición al fármaco, siendo
el máximo a las 72h (12%) por lo que concluyeron que Cloroquina causa moderada
mortalidad en VCAP a pesar de inhibir el crecimiento a partir de 25µM.

En cambio, el efecto de Panobinostat sobre la línea celular VCAP, Tras incubar durante 72h, se
observó la inhibición del crecimiento a partir de la concentración 5 nM cantidades mayores a
esta, disminuyen la proliferación. El efecto máximo se alcanza a la concentración de 25nM. En
el estudio de la citometría de flujo de VCAP frente al tratamiento observaron una mortalidad
de casi un 80% a las 48h, por lo que ha demostrado tener elevada potencia terapéutica.

La sinergia de Cloroquina y Panobinostat sobre la línea celular VCAP los resultados

demostraron que la asociación tiene una potenciación muy efectiva, mostrando a las 72h la
muerte celular del 100%, en comparación con un 35% a las 24h.

Las líneas celulares constituyen una de las principales herramientas en la investigación médica
y biológica. Principalmente en el campo de la oncología la utilización de líneas celulares
derivadas de células tumorales ha permitido mejorar el conocimiento de numerosas
enfermedades, analizar la respuesta a fármacos o determinar el efecto de mutaciones
concretas en el genoma.

Bibliografía
Carmen Sanchez Arroyo-Rogelio Gonzales Sarmiento. (2017). ESTUDIO DE FÁRMACOS
INHIBIDORES DE AUTOFAGIA Y EPIGENÉTICOS EN UNA LÍNEA CELULAR DE CÁNCER.
FarmaJournal, 2, 95-105.