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(Resumen 8.1)
1. Introducción a la cinética celular
La cinética celular se define como el estudio cuantitativo de la proliferación celular; estudia
el recambio, o tasa de cambio de las células. A diferencia de la cinética enzimática, la
cinética celular es el resultado de numerosas y complicadas redes de bioquímicas,
reacciones químicas y fenómenos de transporte, que implican múltiples fases y sistemas
multicomponentes.
a. Definiciones relacionadas al crecimiento celular
Si mencionamos la concentración celular sin ninguna especificación, puede tener muchos
significados diferentes, puede ser el número de células, el peso de la célula húmeda o el
peso de la célula seca por unidad de volumen.
o Cx = Concentración celular, peso celular seco por unidad de volumen.
o CN = Densidad del número de células, número de células por unidad de volumen
o =Densidad celular, peso celular húmedo por unidad de volumen de masa celular
Donde:
= Velocidad especifica de crecimiento
max = Velocidad específica máxima de crecimiento
CS = Concentración de sustrato limitante
Ks = Constante de saturación
Evaluación de los parámetros cinéticos de MONOD.
Un método para evaluar los parámetros (µ max y Ks) de la ecuación de Monod es linealizarla.
Los valores de los parámetros µ max y Ks son obtenidos a partir de las siguientes relaciones
1 1
lineales, donde tenemos que en función de . Se toman los inversos de ambos
μ S
miembros de la ecuación de Monod, y se tiene que:
Ks
∗1
1 μmax 1
= +
μ S μ max
Se observa que la ecuación anterior tiene la forma de la ecuación de una línea recta
(y = mx + b). Obteniendo la ecuación de Lineweaver-Burk con:
Ks 1
m= ; b=
μmax μmax
1 1
Lo cual requiere conocer y para poder hacer la estimación de la pendiente m y la
μ S
ordenada al origen b, haciendo uso de la metodología de regresión lineal y realizado esto
conocer los parámetros µmax y Ks.
2. Fermentadores discontinuos o por lotes (Batch)
Una fermentación discontinua (en batch) puede ser considerada como un "sistema
cerrado". Al inicio de la operación se añade la solución esterilizada de nutrientes y se
inocula con el microorganismo, permitiendo que se lleve a cabo la incubación en
condiciones óptimas de fermentación. A lo largo de toda la fermentación no se añade
nada, excepto oxígeno (en forma de aire), un agente antiespumante y ácidos o bases para
controlar el pH.
Principales características de los reactores intermitentes o reactores Batch
1. Los reactores intermitentes son cargados generalmente mediante orificios de
entrada ubicados en la parte superior del tanque.
2. Durante la operación del reactor batch (reactor intermitente), ningún compuesto
ingresa o sale del tanque.
3. De requerir intercambio térmico (calentamiento o enfriamiento), este tipo de
reactores utilizan camisas o chaquetas de enfriamiento o calentamiento, las cuales
se ubican en la parte exterior del tanque y son muy fáciles de utilizar.
4. La masa total dentro del reactor intermitente o batch siempre es constante, ya que
es un sistema cerrado.
5. El tiempo de residencia de todos los compuestos de la mezcla que se encuentran
dentro del reactor batch, siempre será el mismo para cada uno de los compuestos.
6. Las concentraciones de los componentes de la mezcla cambian con el tiempo.
7. Debido al mezclado, la temperatura dentro del reactor intermitente (reactor batch)
es homogénea al igual que la composición de la mezcla.
8. La energía dentro del reactor intermitente o batch cambia de acuerdo a cómo se va
desarrollando la reacción, o las reacciones químicas, dentro del reactor.
9. Si se requiere controlar la temperatura, este tipo de reactores permite la adición de
intercambiadores de calor.
Fase de desaceleración
Luego de la fase exponencial hay un rápido período de desaceleración causada por el
agotamiento de algún nutriente (el sustrato limitante) o por acumulación de inhibidores y
por lo tanto disminuye y tiende a 0.
Fase estacionaria
La velocidad de crecimiento es μ=0, debido a que el número de células que se forman son
igual a las que mueren. Aun en esta fase existe metabolismo celular y se sigue formando
producto. Algunos tipos de células en esta fase aún son viables y pueden producir
productos secundarios por ejemplo antibióticos. En esta fase se puede tener varios
escenarios:
o La concentración másica de células (X) es constante pero baja el número de células
viables.
o La concentración disminuye por el rompimiento de las células.
Fase de muerte
Esta es la etapa final, en la cual la concentración celular disminuye como resultado de la
disminución de nutrientes o por la autolisis. La muerte celular es generalmente constante
similar al crecimiento y se puede expresar a través de una recta
c. Factores que afectan a la velocidad especifica de crecimiento
Como se dijo anteriormente, µ max es la máxima velocidad a la que puede crecer un
microorganismo en determinadas condiciones de cultivo.
Concentración del sustrato
o Si la concentración de sustrato limitante (C S) es cero, la velocidad especifica de
crecimiento (µ (0)) también lo es.
o Cuando CS es muy grande, la velocidad especifica de crecimiento µ tiende a la
velocidad máxima µmax.
Concentración del producto.
El crecimiento de microorganismos suele ser inhibido por estos productos, cuyo efecto se
puede agregar a la ecuación de Monod de la siguiente manera:
CS Kp
μ=μ max ( K S + CS )( K p +C p )
El término Cp es la concentración de producto por encima del cual las células no pueden
crecer debido a la inhibición del producto.
Influencia del tipo de microorganismo en µmax.
La velocidad específica de crecimiento está influenciada por factores ambientales y
factores endógenos. Entre los factores endógenos está la organización morfológica, la
regulación y el control intracelular.
Influencia de la temperatura en µmax
El efecto de la temperatura sobre la velocidad específica de crecimiento es complejo ya
que depende exclusivamente del metabolismo microbiano y, por ende, varía de
microorganismo a microorganismo. La temperatura óptima de crecimiento de un
microorganismo depende mucho del entorno y del tipo de microorganismo. Normalmente
se emplean clasificaciones para agrupar a los microorganismos que crecen en un
determinado rango de temperatura.
Influencia del pH en µmax
En general, los microorganismos pueden crecer en una variada gama de pH que van
desde pH = 2 hasta pH = 11. Además, los microorganismos que toleran pH ácidos no
toleran pH alcalinos y viceversa.
d. Ecuación de diseño
Fermentador por lotes
La concentración celular en un fermentador discontinuo por lotes (Batch) es igual a la tasa
de crecimiento de las células en él:
dC X
=r X =μ C X (1)
dt
Para derivar la ecuación de rendimiento de una fermentación por lotes, necesitamos
integrarla para obtener:
CX CX
dC X dC X t
∫ r ∫ μ C =∫ dt =t−t 0 (2)
=
CX0
X C X0
X t 0
Cabe señalar que la ecuación (2) solo se aplica cuando r x es mayor que cero. Por lo tanto,
t no es el momento en que se inoculó el cultivo, sino el momento en que las células
comienzan a crecer, que es el comienzo de la fase de crecimiento acelerado.
Si la cinética de Monod representa adecuadamente la tasa de crecimiento durante el
período exponencial, podemos sustituir la ecuación de Monod en la ecuación. (2) para
obtener: