Facultad de Ciencias Naturales

Laboratorio de Biología Celular

Alumno: ____________________________________________ Código: ___________

Alumno: ____________________________________________ Código: ___________

Laboratorio 6: Mitosis.

OBJETIVOS:

1. Identificar las diferentes fases del ciclo celular

2. Identificar las diferentes fases de la mitosis
3. Comprender el efecto que tienen fármacos como la Colchicina en la mitosis
4. Familiarizarse con las aplicaciones que pueden tener tratamientos como el de
la Colchicina.

INTRODUCCIÓN
En la división celular se pueden reconocer dos procesos, la división del núcleo
(cariocinesis, o mitosis) y la del citoplasma (citocinesis). La división del núcleo es
exacta, en ella, se reparte simétricamente el material hereditario, mientras que la
citocinesis puede no serlo, es decir, la distribución de organelos citoplasmáticos y el
tamaño de las dos células puede no ser equitativo ni igual.

Significado Biológico de la Mitosis

Todos los organismos vivos utilizan la división celular,

ya sea como mecanismo de reproducción, o como
mecanismo de crecimiento del individuo. Lo seres
unicelulares utilizan la división celular para la
reproducción y perpetuación de la especie, una célula se
divide en dos células hijas genéticamente idénticas entre
sí e idénticas a la original, manteniendo el número
cromosómico y la identidad genética de la especie. En
organismos pluricelulares, la división celular se convierte
en un proceso cíclico destinado a la producción de
múltiples células, todas idénticas entre sí, pero que
posteriormente pueden derivar en una especialización y
diferenciación dentro del individuo.

El Ciclo Celular

La división celular es el proceso por el cual el material celular se divide entre dos
nuevas células hijas. En los Procariotas es un proceso relativamente sencillo, durante

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el cual dos cromosomas hijos se unen a puntos diferentes de la membrana celular.
Cuando la membrana se alarga, los cromosomas se separan. La membrana celular
luego se invagina y se forma una nueva pared celular, completándose la división de las
células hijas.

En los Eucariotas éste proceso es más complejo, esto, debido a la vasta cantidad de
material genético contenido en cromosomas diferentes.

El ciclo celular es la serie de eventos que se suceden en una célula en división. Se

reconocen dos etapas:

INTERFASE: Etapa durante la cual, la célula crece

y el ADN se duplica.

MITOSIS: Etapa en la que ocurre la división del

núcleo en dos núcleos hijos y la división del
citoplasma.

El período entre dos mitosis consecutivas, se denomina

interfase, comprende el estado normal de una célula, con los cromosomas
formados por una cromátida, es decir, en estado de una doble hélice de ADN.
Indudablemente para que una estructura pueda dividirse en dos exactamente iguales,
esta estructura ha de estar duplicada, es decir, todos sus componente repetidos y
separados en estructuras diferenciadas. El cromosoma antes de dividirse debe pasar a
un estado en el que posea dos cromátidas, genéticamente idénticas. La duplicación del
material genético debe ser previa a la división celular.

Las células en división pasan a través de una secuencia regular de crecimiento y

división, conocida como ciclo celular. Es posible resumir la secuencia de fases del
ciclo celular en el siguiente esquema:

INTERFASE: Etapa durante la cual, la célula crece y el ADN se duplica. A su

vez en la interfase se pueden distinguir tres períodos: G1, S y G2.

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 G1: Es un estadio que se caracteriza por ser genéticamente activo, el ADN se
transcribe y se traduce, dando lugar a proteínas necesarias para la vida celular y
sintetizando las enzimas y la maquinaria necesaria para la síntesis del ADN.

S: Es la fase en la cual se duplica el material hereditario, el cromosoma pasa de

tener un cromátida a tener dos, cada uno de ellos compuesto por una doble
hélice de ADN producto de la duplicación de la original. Como la replicación
del ADN es semiconservativa, las dos dobles hélices hijas serán exactamente
iguales, y por tanto las cromátidas hermanas, genéticamente idénticas.

G2: Durante este período se termina la preparación de todos los componentes

de la división celular, al final de esta fase, se produce una señal que dispara
todo el proceso de la división celular.

En células que se dividen activamente, la mitosis ocupa un 10% y la interfase el

90% del ciclo. Los períodos G1 y G2 ocupan cada uno un 25%, y el período S el
40%.

Al final de la mitosis, la célula entra en interfase, si esa célula ya no se va a dividir

más, entra en lo que se denomina período G0; si por el contrario esa célula va a
volver a dividirse entra de nuevo en el período G1 previo a la síntesis del ADN, e
iniciándose un nuevo ciclo de división celular.

La mitosis fue descubierta por Hoffmeister, en 1848, en células de embriones

vegetales, durante la mitosis, el ADN se encuentra totalmente empaquetado y
superenrollado, inaccesible a polimerasas y transcriptasas, es por esto que toda la
actividad funcional del ADN ha de realizarse en la interfase previa a la cariocinesis
o mitosis.

Características Morfológicas:

Las células en interfase presentan un núcleo redondo con un granulado muy fino y
continuo. La envoltura nuclear, aunque no se ve, forma un círculo que limita el
núcleo. En número de 1 o 2 se aprecian zonas más claras, transparentes, que son
los nucleolos. Cuando las células van a entrar en mitosis aparecen más
voluminosas y el núcleo mucho más grande.

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MITOSIS: Etapa en la que ocurre la división del núcleo en dos núcleos hijos y la
división del citoplasma. Es indispensable recordar, que la cariocinesis es un
proceso continuo, aunque para su estudio se divide en varias etapas que tienen que
ver con cambios conformacionales que ocurren en el núcleo celular, es decir que
pueden diferenciarse por la observación de células en división en el microscopio
óptico.

La citocinesis se desarrolla en su mayor parte de manera coincidente con el final

de la mitosis, de tal forma que la división termina sólo un poco después del final
de la cariocinesis.

Índice mitótico:

Una vez establecidos los límites, se pueden clasificar las células que se cuenten;
por ejemplo, si se contabilizan 100 células, habrá X en mitosis y 100-X será el
resto que se toman como interfases.

Las 100 células tomadas de forma aleatoria, son representativas de todo el tejido y,
por tanto, de todo el ciclo celular. De esta manera las X que están en mitosis son
una muestra proporcional de todas las que están en mitosis y 100-X de las que
están en interfase.

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 Se define el índice mitótico (Im) como la relación entre el número de células que
están en mitosis dividido por el número total de células contabilizadas. En el
ejemplo: Im = X/100, Im resulta ser una estimación del tiempo del ciclo
celular que está dedicado a la mitosis. Es una medida relativa y por tanto carece
de unidades.

MATERIALES Y REACTIVOS POR GRUPO DE DOS PERSONAS:

Equipos Cantidad
Microscopio 1 unidad

Insumos Cantidad
Kit de Láminas Mitosis 1 unidad por salón
de clase

ACTIVIDAD 1: OBSERVACIÓN DE LÁMINAS PREPARADAS

1. Realice un recorrido por la placa, observe y reconozca cada una de las etapas del
proceso de mitosis. Dibuje un esquema detallado y secuencial de cada
observación. Dele el nombre correspondiente a cada una.

Fase # 1: _________________ Fase # 2: _________________

Fase # 3: _________________ Fase # 4: _________________

2. Elija un grupo de 50 células y registre cuántas se encuentran en división celular y

cuántas en interfase:
Interfase ______ Mitosis______

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 Calcule el índice mitótico:

IM = # de células en división / # de células en división + # cel en interfase

IM= ________
Interprete el valor obtenido:

3. Para evitar los errores de muestreo que se pueden cometer al contabilizar un

número tan pequeño de células por persona, cada grupo debe sumar los datos
obtenidos de los otros grupos y obtener datos generales.

Grupo Células en Mitosis Células en Interfase

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12

TOTAL: _________ TOTAL: ________

Calcule el índice mitótico:

IM = ________ Compare diferencias o similitudes con los datos obtenidos

individualmente:

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Índice de las Fases Mitóticas:

Es el número de células que se encuentran en la fase

correspondiente, dividido por el número total de células
que se encuentran en mitosis. De esta forma, se puede
calcular el índice profásico (IP), índice metafásico (IM),
índice anafásico (IA) y el índice telofásico (IT).

TRATAMIENTO CON COLCHICINA

El número de cromosomas de una célula es característico de la especie, es decir, todos

los individuos (en estado normal) de una especie, tienen el mismo número de
cromosomas en cada una de sus células somáticas.

Para la determinación del número de cromosomas de una célula (denominado

cariotipo), se buscará aquella fase mitótica en la que los cromosomas estén más
condensados e independientes entre sí: esta fase se denomina; metafase. No obstante,
en muchas ocasiones resulta muy difícil el conteo de los cromosomas, aún en
metafase, por lo que se recurre a tratamientos especiales para aumentar la
condensación de los cromosomas.

La colchicina es una droga que se extrae del Colchicum hispanicum y cuyo efecto
tiene como consecuencia la despolimerización de la tubulina que forma las fibras del
huso mitótico. Al no formarse el huso, los cromosomas no se disponen en la zona
ecuatorial y siguen heterocromatinizándose (condensándose), acortando su longitud,
separándose más entre sí y facilitando su conteo. La colchicina actúa de forma casi
instantánea pues penetra en las células rápidamente, y de la misma manera se elimina
fácilmente lavando y poniendo de nuevo agua en la germinación de los bulbos. Si el
tiempo de tratamiento es muy largo las células tratadas se mueren, y si el tratamiento
con colchicina es muy corto, sólo se alterarán las etapas de la mitosis muy próximas al
momento de acción de la droga y mientras más se prolongue el tratamiento más se
extenderán los efectos, alcanzando así progresivamente distintas fases mitóticas.

Durante la acumulación, las células no avanzan en la mitosis pero los cromosomas

siguen heterocromatinizándose, lo que acorta su longitud y facilita el estudio de su
morfología y la determinación del número cromosómico de la especie.

Por último, si el tratamiento se prolonga, las cromátidas terminan por separarse y si se

elimina después de este momento la colchicina las células pueden pasar directamente a
interfase, produciéndose la duplicación del número de cromosomas (en este caso de 2n
pasaría a 4n, siendo las células tetraploides viables, de mayor tamaño y, si después de
completar la interfase entran de nuevo en mitosis pueden observarse los 4n
cromosomas).

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 Seguridad durante la práctica:

Normas de Seguridad: El estudiante debe referirse a la guía de laboratorio 1

 Recuerde que la Colchicina puede tener efecto sobre todas las células que se
encuentren en división celular

Elementos de protección personal:

 Es INDISPENSABLE utilizar Bata de laboratorio durante el desarrollo de la

práctica.
 Utilizar guantes de látex SIEMPRE que se manipulen muestras biológicas.

MATERIALES Y REACTIVOS POR GRUPO DE DOS PERSONAS:

Equipos Cantidad
Microscopio 1 unidad
Incubadora 37°C 1 unidad por salón de
clase

Reactivos Cantidad
Orceína Acética 0.5% 150 µl
Etanol 96 % 5 ml por salón de
clase
HCl 1N 500 µl
Colchicina 0.05% 100 ml por salón de
clase
Ácido Acético 2 ml por salón de
clase

Insumos Cantidad
Tubos Eppendorf de 1.5 ml 2 unidades
Hoja de bisturí # 10 1 unidad
Mango de bisturí para hoja # 10 1 unidad
Caja de petri 4 unidades por salón
de clase
Palillos de madera 20 unidades por salón
de clase
Recipientes para descartar 6 unidades por salón
material contaminado de clase
Timer 1 unidad por salón de
clase
Pinzas metálicas de punta 1 unidad

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delgada

Portaobjetos 2 unidades
Cubreobjetos 2 unidades

ACTIVIDAD 2: CRECIMIENTO DE RAICES DE CEBOLLA CABEZONA

(Allium cepa)

Previo al laboratorio (8 DÍAS)

1. Cada grupo de trabajo debe comprar 1 cebolla

cabezona y 1 vaso plástico.

2. Adicionar al vaso una cantidad de agua que permita

tocar la superficie inferior de la cebolla cabezona
(donde crecerán las raíces).

3. Disponga la cebolla sobre el vaso. En caso de que la

cebolla sea más angosta que el vaso, puede ayudarse
de palillos de madera para ayudar a sostenerla.

4. Recuerde cambiar el agua diariamente.

ACTIVIDAD 3: OBSERVACIÓN DE MITOSIS EN CÉLULAS

MERISTEMÁTICAS DE CEBOLLA – Tratamiento Control

1. Utilizando la cebolla de la actividad 1 y con ayuda de un bisturí, cortar raíces de 2

o 3 mm sobre un portaobjetos
2. Sumergir las raíces en un tubo Eppendorf que contiene solución fijadora de etanol
acético 3:1. Realice los cálculos para preparar 21.7 ml:

Cálculos:

Etanol _________ + Ácido acético _________

3. Incubar durante 5 min o indefinidamente a 4°C.

4. Transferir las raíces a otro tubo Eppendorf que contiene solución de HCl 1N.
5. Incubar durante 20 min a 37ºC

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6. Sacar las raíces de la solución y, en caso de que la raíz esté muy larga, realizar un
corte a los 2 mm del extremo apical o terminal de la raíz (es el más redondeado).
Descartar el resto.
7. Agregar una gota del colorante Orceína Acética sobre el meristemo; dejar actuar el
colorante por 20 min.
8. Ubicar un cubreobjetos sobre la raíz y realizar presión sobre el mismo con un
dedo de su mano. Tenga cuidado de no romper el cubreobjetos. Debe quedar
una especie de monocapa para ver mejor las células en división.
9. Con ayuda del microscopio, ubique una zona donde observe uno o varios grupos
de células en mitosis.
10. Realice un esquema realista de lo que observa en 40X. Identifique en él las células
que se encuentran en mitosis y escriba la fase en la que se encuentran.

11. Elija un campo en donde se observe abundante mitosis y registre cuántas células se
encuentran en división celular y cuántas en interfase:

Interfase ______ Mitosis______

12. Calcule el índice mitótico:

IM = # de células en división / # de células en división + # cel en interfase

IM = ________

Interprete el valor obtenido:

13. Elija otro campo y contabilice las células que se encuentran en interfase y en cada
fase de la mitosis

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 Interfase ______
Profase ______ Metafase ______
Anafase ______ Telofase ______

14. Con los datos anteriores deduzca el índice de fases:

# Células mitosis ______

IP: ______ IM: ______

IA: ______ IT: ______

Cálculos:

ACTIVIDAD 4: OBSERVACIÓN DE MITOSIS EN CÉLULAS

MERISTEMÁTICAS DE CEBOLLA – Tratamiento con Colchicina

1. Preparar 369 ml de colchicina al 0.05%

Cálculos:

Colchicina _______ + Agua ________

2. Poner en contacto las raíces de la cebolla con la solución (sin cortarlas).

3. Incubar las raíces durante 60 min. en la solución.
4. Continuar con los pasos 1-9 del tratamiento control.
5. Realice un esquema realista de lo que observa en las células tratadas con
colchicina (40X). Identifique en él las células que se encuentran en mitosis y
escriba la fase en la que se encuentran.

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6. Recorra las placas (tratamiento control y con colchicina), y elija 2 campos can
abundante mitosis. Complete en la tabla los índices mitóticos, profásicos,
metafásicos, anafásicos y telofásicos de los dos tratamientos. Recuerde tener en
cuenta el promedio para realizar los cálculos.

Cálculos Células en Tratamiento Control:

Campo # 1: Mitosis ______ P ___ M ___ A ___ T ____

Campo # 2: Mitosis ______ P ___ M ___ A ___ T ____

Promedio: Mitosis ______ P ___ M ___ A ___ T ____

Cálculos Células en Tratamiento con Colchicina:

Campo # 1: Mitosis ______ P ___ M ___ A ___ T ____

Campo # 2: Mitosis ______ P ___ M ___ A ___ T ____

Promedio: Mitosis ______ P ___ M ___ A ___ T ____

7. Con los datos de los promedios realice los índices de cada fase
Células Células en tratamiento
En Control con Colchicina
Índice Mitótico
Índice Profásico
Índice Metafásico
Índice Anafásico
Índice Telofásico

8. Analice los resultados obtenidos en las células con y sin colchicina mediante una
gráfica (x= fase mitótica, y= Índice de cada fase),

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9. ¿Observa alguna tendencia en la gráfica? Explique:

8. ¿Observa alguna diferencia con respecto a las células del tratamiento control con el
tratamiento de Colchicina? ¿Cuál? Explique.

10. De acuerdo con lo observado ¿Cuál es el efecto de la colchicina sobre la mitosis

en células del meristemo de la raíz en la cebolla? Tome como base de su
explicación, la comparación entre los índices calculados anteriormente.

11. Proponga una posible aplicación experimental en la vida real del tratamiento
realizado.

Disposición y Descarte de Materiales

 Cada estudiante es responsable de su área de trabajo.

 Depositar el material de vidrio roto en el tarro de basura blanco.
 En caso de haber utilizado objetos corto-punzantes (lancetas, bisturís,
agujas, etc.) descartarlos en el Guardián.
 Las láminas y laminillas contaminadas con muestras biológicas, deben
ser depositadas en el Recipiente que contiene hipoclorito al 2%.

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  Los medios de cultivo, una vez utilizados, deben ser depositados en la
bolsa roja especial para autoclavar.
 Los implementos que contengan fluidos o muestras biológicas (guantes,
toallas de papel, algodón, etc.) deben ser descartados en bolsa roja.

REFERENCIAS

Imágenes:

http://www.sciencephoto.com
http://despertandoconcienciaplanetaria.wikispaces.com
http://www.iesabastos.org

Elaborado por:

Fecha:

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