5/7/2021 Nanoflores híbridas basadas en enzimas con alto rendimiento para aplicaciones biocatalíticas, biomédicas y medioambientales

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Revisiones de química de coordinación

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Nanoflores híbridas a base de enzimas de alto rendimiento

para aplicaciones biocatalíticas, biomédicas y medioambientales
Yiduo Li a , Hanguang Wu b , * , Zhiqiang Su a , *
un Laboratorio clave estatal de ingeniería de recursos químicos, Laboratorio clave de Beijing de compuestos poliméricos funcionales avanzados, Universidad de Tecnología química de Beijing,

Pekín 100029, China

b Laboratorio clave de Beijing de I + D y evaluación de materiales de confección, Instituto de Tecnología de la Moda de Beijing, 100029 Beijing, China

información del artículo resumen

Historia del artículo: Las nanoflores híbridas basadas en enzimas (EHNF) proporcionan una forma de inmovilizar las enzimas sin contrastes agresivos.
Recibido el 26 de noviembre de 2019
diciones y limitaciones de transferencia de masa, así como promover el rendimiento de las enzimas. Este tipo de
Aceptado el 7 de abril de 2020
La inmovilización atrajo un interés considerable en seguir desarrollando la aplicación de reacciones enzimáticas.
ciones. Por lo tanto, la comprensión integral de la preparación, la microestructura y el catalizador
El comportamiento de los EHNF es fundamental para su mejor aplicación. En esta revisión, una amplia variedad de EHNF en términos
Palabras clave:
de síntesis, categorías, morfologías y sus aplicaciones en biocatalíticas, biomédicas, medioambientales y
Nanoflores híbridas
se introducen la bioenergía. Además, discutimos las tendencias y perspectivas futuras de los EHNF con el fin de
Inmovilización de enzimas
ofrecer sugerencias racionales para las futuras investigaciones y desarrollos de estos prometedores biocatalizadores.
Biosíntesis
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Catálisis enzimática

Contenido

1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2. Síntesis de EHNF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2.1. Métodos de síntesis de EHNF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2.2. Mecanismo de síntesis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
3. Variación de EHNF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
3.1. EHNF basados ​en una sola enzima. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
3.1.1. HNF a base de peroxidasa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
3.1.2. HNF a base de lipasa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
3.1.3. HNF a base de proteasas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3.1.4. HNF a base de carbohidrasas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3.1.5. HNF basados ​en lacasas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3.1.6. Otros . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3.2. EHNF basados ​en enzimas duales. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
4. Morfología. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
4.1. Microestructuras típicas de EHNF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
4.2. Factores que influyen en la morfología de las EHNF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
4.2.1. El efecto de las enzimas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
4.2.2. El efecto de los iones metálicos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
4.2.3. El efecto de la temperatura de síntesis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
4.2.4. El efecto del valor del pH. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

Abreviaturas: HNF, nanoflor híbrida; EHNF, nanoflor híbrida a base de enzimas; PBS, solución salina tamponada con fosfato; BSA, albúmina de suero bovino; CPO, cloroperoxidasa;

LPO, lactoperoxidasa; HRP, peroxidasa de rábano picante; ChT, una -quimotripsina; DPEasa, D- Psicosa 3-epimerasa; GOx, glucosa oxidasa; DQO, colesterol oxidasa; ALDC, a -
acetolactato descarboxilasa; AdhD, alcohol deshidrogenasa; l PAD, dispositivo microfluídico basado en papel; CA, anhidrasa carbónica; SBP, peroxidasa de soja; LOD, límite de detección;
TMB, 3,3 0 , 5,5 0 -tetra-metilbencidina; ELISA, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas; Con A, concanavalina A; SA, estreptavidina; ACC-HNF, acetilcolinesterasa y colina

oxidasa - nanoflores híbridas Cu3 (PO4) 2; un -GHNFs, una base -glycosidase nanoflores híbridos; CV, violeta cristal; NR, rojo neutro; PPL, lipasa de páncreas porcina; AKR, aldehído
cetona reductasa.
* Autores correspondientes.
Direcciones de correo electrónico: 20180064@bift.edu.cn (H. Wu), suzq@mail.buct.edu.cn (Z. Su).

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4.2.5. El efecto del tiempo de reacción. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

5. Propiedades. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
5.1. Gran estabilidad. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
5.2. Actividad alta. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
6. Solicitud . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
6.1. Aplicación catalítica industrial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
6.2. Aplicación biomédica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
6.2.1. Biosensor. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
6.2.2. Cribado farmacológico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
6.3. Aplicación medioambiental. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
6.3.1. Tratamiento de aguas residuales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
6.3.2. Fabricación de bioenergía. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
7. Conclusión y perspectivas de futuro. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
Declaración de competencia de intereses. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
Agradecimientos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
Apéndice A. Dato suplementario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
Referencias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

1. Introducción área. Debido a sus nanoestructuras con morfología ramificada,

la preparación de los EHNF debe basarse en la cinética en lugar de
Las nanoflores híbridas (HNF) es un compuesto que consta de compuestos orgánicos control termodinámico. Según el aporte de inorgánicos
y constituyentes inorgánicos con una estructura jerárquica de tres materiales, los métodos de síntesis de los EHNF se pueden clasificar
nanoestructura dimensional [1-5] . Se descubrió el primer HNF en precipitación [22,35] , coprecipitación [1,8]y bio
por Ge [6] al agregar accidentalmente CuSO 4 en el tampón fosfato mineralización [23,36,37]. Durante la síntesis, el ion acuoso
solución salina (PBS) con albúmina de suero bovino (BSA). Desde entonces, los HNF La solución se agrega en el sistema de enzima / PBS gota a gota bajo con-
han atraído gran atención debido a su funcionalidad combinada agitación mecánica continua, y un precipitado con flores porosas,
vínculos de los materiales orgánicos e inorgánicos, así como su breve aparece una estructura similar en la solución. Después de 1 a 3 días de incubación
y preparación respetuosa con el medio ambiente [7,8]. El jerárquico agitando suavemente, los EHNF se pueden obtener mediante la recolección
estructura proporciona una gran relación superficie-volumen, que en gran medida y lavar los sedimentos crecidos [19,38-41] . A pesar de la simulacin
mejora la actividad catalítica de los HNF. Mientras tanto, los inorgánicos condición completa y no severa de la preparación de la EHNF, la amplia-
constituyente forma una estructura protectora para la composicin orgnica El uso extendido de los EHNF en aplicaciones reales fueron severamente
, proporcionando así a los HNF una alta estabilidad. Gracias a su salida limitado porque su proceso de síntesis consume mucho tiempo. Acelerar
actuaciones de pie, los HNF se utilizan ampliamente en la biocatálisis, sobre la formación de EHNF, Batule et al. desarrolló un método para
análisis químico y biológico, síntesis de productos químicos, pol- someter a ultrasonidos la solución a temperatura ambiente durante 1 min, 5 min y
tratamiento lutante, etc. [1,9-11]. 7 min, por debajo de una frecuencia de funcionamiento de 40 kHz [39]. La sonicación
Se han empleado varios constituyentes orgánicos como enfoque uniformemente proporciona alta energía a la estructura de HNF,
constituyente orgánico en HNF, incluidos anticuerpos, proteínas, ADN, promover el autoensamblaje de iones metálicos y fosfato, además
etc. [12-18]. Enzima, un catalizador natural versátil y sostenible, formando los componentes básicos de los EHNF. Basado en su investigación,
También fue considerada como una de las proteínas más regulares en HNF. Chung [11] y Zhang [42] sintetizaron con éxito la similar
[2] . Los constituyentes inorgánicos crecen alrededor de la enzima durante Producto EHNF después de 5 min de sonicación. Hoy en día se utiliza la sonicación
el proceso de síntesis, formando el nanoflujo híbrido basado en enzimas como el método más común para acelerar el proceso de síntesis de
ers (EHNF), por lo que la enzima puede considerarse inmovilizada en los HNF [38] .
EHNF [2,19,20] . Comparado con la enzima libre, el inmovilizado Existe un gran requisito para la mejora de la
La enzima exhibe una capacidad de atrapamiento y estabilidad promovidas, así como Resistencia mecánica de los EHNF debido a su frágil estructura.
como buena reciclabilidad del sistema acuoso [2,9,19,21-27] . Yu [40,43,44]. Además, el tamaño de los EHNF suele estar en
et al. [28] encontró que el 95% de las enzimas se pueden reensamblar la nano o microescala, lo que resulta en la dificultad de separar
mediante la recristalización del fosfato de calcio con agregado fresco los productos EHNF del sustrato durante su formación
enzimas después de disolver los EHNF usados ​y eliminar la desnaturalización [29,45]. Por lo tanto, se desarrollaron diferentes estrategias para formar un
enzimas curadas. Además, la inmovilización de la enzima en el sustrato con buenas propiedades mecánicas para los HNF. Zhao
forma de EHNF supera el inconveniente de la convencional [45] y Zhang [46] utilizaron seminalmente gel en la mejora de EHNF
inmovilización enzimática: deterioro de las actividades enzimáticas. Allí- mentos. Con gran creatividad, Ren et al. [29] procesó el formado
Por lo tanto, la síntesis de EHNF proporciona simultáneamente enzimas EHNF en una red de hidrogel mediante congelación y
con actividad catalítica mejorada y estabilidad mejorada, que descongelación, y la red de hidrogel formada representa una excelente
debe deberse a la alta superficie de EHNF y su enzima propiedades mecánicas satisfaciendo la infiltración del sustrato.
efecto de confinamiento [3,8,20,29–31]. Los EHNF sintetizados poseen También moldearon los hidrogeles compuestos de EHNFs-PVA-quitosano
notable eficiencia enzimática y durabilidad, así como la baja en películas y perlas. Aparte de la mejora de la mecánica
costo, que ampliando en gran medida su aplicación en la bioquímica ical propiedades, el proceso de hidrogel también se da cuenta de la colección de
istría y ciencia farmacéutica [32–34]. los EHNF con tamaños pequeños después del uso. Además de
formación de hidrogel, la reticulación de las moléculas de enzima es

2. Síntesis de EHNF También se aplicó como una estrategia eficaz para fortalecer la construcción.
de EHNF [40]. Patel y col. [43] entrecruzó con éxito la lacasa
2.1. Métodos de síntesis de EHNF durante su síntesis de la lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 EHNF, y la
Los productos obtenidos exhibieron una reutilización mucho mayor (el residuo

Los altos rendimientos de los EHNF se atribuyen a su alto Se mejoró la eficiencia de decoloración individual de los tintes sintéticos.
energía superficial, que es proporcionada por su gran superficie específica al 84,6% en condiciones de lote repetidas de 10 ciclos).

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Fig. 1. Ilustración del proceso de formación de EHNF.

2.2. Mecanismo de síntesis Se han realizado muchos trabajos para ampliar sus aplicaciones en el
detección de fenoles, que generalmente se realiza con la ayuda
Hay algunas pequeñas distinciones durante la síntesis de diferentes de sustrato cromogénico.
ent EHNF, pero el mecanismo de crecimiento de estos EHNF muestra Entre todas las peroxidasas vegetales, la peroxidasa de rábano picante (HRP)
mucha similitud, que debería derivarse de la nucleación de es el más utilizado debido a su amplia fuente y bajo
cristales de fosfato metálico y la coordinación entre enzimas costo. La mayoría de los investigadores garantizado HRP con iones de cobre
e iones metálicos. Los iones metálicos poseen la capacidad de reaccionar con [8,9,20,30,34,50,56,57]. El trabajo de Ocsoy [58] demuestra que los ferrosos
tanto los grupos fosfato como la enzima, por lo que la forma- Los iones también se pueden utilizar como componente inorgánico en el HRP-
ción de los EHNF se narra generalmente en cuatro pasos: nucleación, HNF basados. En HRP-Fe 3 (PO 4 ) 2 HNF, Fe 2+ actúa como activador
coordinación, precipitación y autoensamblaje (ver Fig.1) de HRP, y el efecto cooperativo entre Fe 2+ y el hierro hemo
[6,24,33] . En la etapa inicial del crecimiento de EHNF, los iones metálicos en HRP proporciona a los EHNF una estabilidad excepcional.
adherirse a los grupos fosfato cargados negativamente a través de Además, también se aplican otros tipos de peroxidasas en
interacción trostática, y los cristales primarios se forman estudios viciosos. Chung [11], Zhang [42] y Lang [9] sintetizaron
[2,31,32,35,47–50]. Los nanocristales de fosfato metálico formados son catalasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. En 2015, Yu et al. [47] informó de su
inmovilizado en la enzima a través de los enlaces de coordinación entre preparación de la peroxidasa de soja-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. Después,
los iones metálicos y los átomos de nitrógeno distribuidos en la enzima, Altinkaynak et Alabama.
[41,55] exitosamente sintetizado la
conduciendo a la formación de nanoplacas primarias. Estas nanoplacas, lactoperoxidasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 y peroxidasa de rábano negro turco-
asemejándose a pétalos de flores, se agregan y comienzan la Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. A excepción de los iones de cobre, los iones de calcio también pueden ser
montaje de las EHNF [35,36]. Las nanoflores siguieron creciendo utilizado como componente inorgánico para la coordinación específica con
y formó una estructura en forma de flor con múltiples capas. Al final algo de peroxidasa. Liu y col. [44] cloroperoxidasa sintetizada
etapa de la síntesis, se completará el crecimiento de EHNF (CPO) -Ca 3 (PO 4 ) 2 HNF con refuerzo de la reutilización enzimática. En
cuando los nanocristales crecidos jerárquica y cinéticamente alcanzan El trabajo de Wang [33] , HNF basados ​en CPO con tres iones metálicos diferentes
una saturación. Como consecuencia, los EHNF se sintetizan de manera eficiente. (Cu 2+ , Cd 2+ y Co 2+ ) ya que los componentes inorgánicos se sintetizaron
tamaño, y la característica clave del proceso de crecimiento es que las enzimas tamaño, y el Cu 3 (PO 4 ) Los EHNF basados ​en 2 mostraron los mejores
funcionan como "pegamento" para unir los nanocristales de fosfato metálico actuaciones.
juntos [6,32,41,50–54] .

3.1.2. HNF a base de lipasa

3. Variación de EHNF La lipasa muestra una alta actividad enzimática debido a su característica de inter-
activación facial, especialmente en el medio orgánico. Por lo tanto,
La enzima es el componente que desempeña el papel catalítico en La lipasa también se ha preparado en HNF como un biocatalizador popular.
EHNF, por lo que la aplicación de los EHNF depende principalmente de la para la síntesis orgánica. La síntesis más habitual es combinar
tipo y función de las enzimas utilizadas. Por lo tanto, en nuestra revisión, lipasa con iones de cobre, y la lipasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF con vari-
categorizamos los EHNF según los sustratos del Se prepararon microestructuras y aplicaciones ajustando
enzimas empleadastabla 1). la fuente y dosis de lipasa, el solvente, el método de preparación
ración, etc. [40,60,62,63,66] . Sin embargo, se encuentra que la existencia
3.1. EHNF basados ​en una sola enzima de Cu 2+ deterioró la conformación y la actividad enzimática
de lipasa hasta cierto punto [6] . Para resolver este problema, Cu 2+ tiene
3.1.1. HNF a base de peroxidasa ha sido sustituido por otros iones metálicos, incluidos Ca 2+ [10,28] , Zn 2+
Las peroxidasas existen ampliamente en varias plantas. La planta peroxi [3,22] , Co 2+ [53] , Fe 3+ [64] y los EHNF con alta actividad catalítica
Las daas oxidan fenoles como guayacol, catecol, etc. [86,87] . Por lo tanto, Se fabricaron la estabilidad, la estabilidad y la reutilización de la enzima. Ke's

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4 Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342

tabla 1
EHNF categorizados por los sustratos de las enzimas empleadas.

Clase Enzima Iones de metal) Morfología Solicitud Referencia (s)

Peroxidasa Cloroperoxidasa Cu / Cd / Co esférico/ Descolorización [33]

rómbico / esférico
California [44]
catalasa Cu Rosetón Celda de biocombustible [11]
Rosetón Detección colorimétrica de H 2 O 2 [42]
[9]
Peroxidasa de soja Esférico [47]
Lactoperoxidasa Rosetón [41]
Peroxidasa de rábano negro turco Rosetón Descolorización [55]
Peroxidasa de rábano picante (HRP) Rosetón detección de E. coli [8]
Rosetón detección de H 2 O 2 y fenol [34]
Rosetón [20,30,50,56,57]
[9]
Fe esférico [58]

Lipasa Lipasa Zn Rómbico Acilación regioselectiva de arbutina [3]

Esférico [22]

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Cu Esférico Biodiesel [25]
Esférico Hidrólisis de butirato de p -nitrofenol [59]
Rosetón [6,60–62]
Esférico [63]
Co [53]
Burkholderia cepacia lipasa California Rosetón [10]
Cu / Fe / Ag / Rosetón [64]
Au
Lipasa de Candida rugosa Cu Rosetón [40]
Lipasa de Candida antarctica Cu Rosetón epoxidación de ácidos grasos [sesenta y cinco]
California Rosetón [28]
Lipasa de Pseudomonas cepacia Cu Rosetón [29]
Lipasa de Bacillus subtilis Rosetón [66]
Lipasa del páncreas porcino California Rosetón [28]
Lipasa de Thermomyces lanuginosus Rosetón [28]

Proteasa Proteinasa K Cu Rosetón [48]

Proteasa alcalina Rosetón [46]
Bromelina California Rosetón [28]
a -quimotripsina Rosetón [67]
Alcalase Rosetón [68]
Tripsina Cu Rosetón [69]
California Rosetón [28]
Papaína Cu Rosetón [20,49,62]
esférico [70]
California rosetón [28]
Zn rómbico [24]

Carbohidrasa Minnesota Rosetón [2]

L- arabinosa isomerasa
Cu Rosetón Preparación de L- ribulosa y D - [71]
tagatose
Co Rómbico Preparación de D- Psicosis [23]
D- Psicosa 3-Epimerasa
a -glicosidasa Cu Rosetón [21]
glucoamilasa Rosetón [72]
[73]
L-xilanasa
b-galactosidasa California Rosetón [7]
a -Amylasa Rosetón [37]
Glucosa oxidasa (GOx) Fe Rosetón [31]
Cu Rosetón Detección colorimétrica de glucosa [38]
Esférico Celda de biocombustible [11]
[9,74]

Lacasa Lacasa Cu [20]

[51]
Descolorización [35,43]
Esférico Detección de catecolaminas y / o [39]
Rómbico fenoles [6]
Rosetón [75]
preparación de viniferina [54,76]
Rosetón Celda de biocombustible [11]

Enzimas duales Aldehído-cetona reductasa (AKR) y alcohol California Rosetón Sintetizar el alcohol quiral clave [26]
deshidrogenasa (AdhD) intermedio de Crizotinib
Colesterol oxidasa y HRP Cu Rosetón Detección colorimétrica de colesterol [77]
GOx y lipasa Cu Esférico Epoxidación de alquenos [27]
Acetilcolinesterasa y colina oxidasa Rosetón Detección de organofosforados [78]
pesticida
HRP y GOx Rosetón Detección colorimétrica de E. coli [79]
Esférico Detección colorimétrica de glucosa [52,80]
[81]

Página 5

Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342 5

Mesa1 ( continuación )

Clase Enzima Iones de metal) Morfología Solicitud Referencia (s)

Otros a- Acetolactato descarboxilasa California Rosetón Evitar el mal sabor de la cerveza [45]
x- transaminasas Co Rómbico [36]
ureasa Cu Rosetón [32]
Rosetón preparación de L- xilulosa [19]
L- arabinitol 4-deshidrogenasa
NADH oxidasa Rosetón [19]
Enzima del citocromo P450 Esférico Oxidación de alcohol / aldehído [82]
TDAH Oxidar el alcohol secundario [9]
Diaforasa Reciclar cofactor NAD (H) [9]
2,4-diclorofenol hidroxilasa Rosetón [83]
Colesterol oxidasa de Brevibacterium Esférico [84]
anhídrido carbónico Cu Rómbico [6]
Cu / Mn / Ca Esférico / rómbico / [85]
rosetón

el grupo [10] sintetizó un nuevo EHNF de Burkholderia cepacia
lipasa y Ca 3 (PO 4 ) 2 . Además, Ca 3 (PO 4 ) 2 también se utilizó como
el componente inorgánico para la preparación de EHNF con Can-
lipasa dida antarctica, lipasa del páncreas porcino y Thermomyces
lipasa lanuginosus [28] . Zhang y col. [22] lipasa preparada
Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF a través de la coordinación entre Zn 2+ y la amida
grupos en la lipasa. Ag + y Au + también se agregaron como inorgánicos
componente para la preparación de HNF a base de lipasa, y el
Los productos obtenidos representaron excelentes propiedades como catéter activo.
alítico [64] .
sistema biocatalítico. La actividad de la inmoviliza una amilasa en
EHNF se atribuyó a la modulación positiva del alostérico
efecto inducido por Ca 2+ . Nadar y col. [72] seleccionó glucoamilasa como
el constituyente orgánico y sintetizó la glucoamilasa-
Cu 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O HNFs por método fácil y eficiente. Grupo de Qian
[21] fabricaron EHNF para compuestos que detectan la afinidad en diabéticos
investigación médica mediante el uso de una -glucosidasa con el antidiabético
efecto como el objetivo de cribado. Además, Zheng et al. [23] pro
planteó un método de bio-mineralización inteligente para crear EHNFs por
utilizando D- Psicosa 3-Epimerasa (DPEasa) como componente orgánico
y Co 3 (PO 4 ) 2 como componente inorgánico.

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3.1.3. HNF a base de proteasas
Como los miembros más importantes de la enzima industrial 3.1.5. HNF basados ​en lacasas
clases, se ha intentado inmovilizar proteasas en Las lacasas se encuentran ampliamente dispersas en bacterias, hongos de pudrición blanca y
EHNF para mejorar su rendimiento enzimático [86,87] . Acuerdo- plantas altas, que se pueden utilizar en el tratamiento de aguas residuales para
Según los informes anteriores, la papaína se utiliza con mayor frecuencia en el la decoloración del tinte debido a su efecto catalítico en la
HNF basadas en proteasas. Fei y col. [62,70] EHNF sintetizados a través de Oxidación de noles y compuestos aromáticos [54,88] . Debido al cobre
papaína autoensamblante y Cu 3 (PO 4 ) 2 Á3H 2 O. En el trabajo de Yu [49] , un átomos en sus sitios activos, la lacasa es una enzima fuerte dependiente de Cu 2+
catalizador similar de papaína-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF para la condensación de Knoevenagel- [23]. Por lo tanto, todos los EHNF con lacasa como enzima son los
La solución se desarrolló utilizando un método simple con afección leve. EHNF basados ​en Cu 2+ en el presente. Ge [6] informó en primer lugar de la fabri-
En otro trabajo, la papaína reaccionó con iones de calcio en PBS y catión de lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNFs. En la obra de Zhu [75] , la lacasa-
formó la papaína-Ca 3 (PO 4 ) 2 HNFs [28] . Además, Zhang et al. Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF se fabricaron en una membrana de acetato de celulosa,
[24] sintetizaron papaína-Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF con la categoría mejorada dándose cuenta de la detección rápida de fenol. Basado en la misma síntesis
propiedades alíticas. Excepto papaína, proteinasa K [48], alcalino sis método, Li [20] precipitó los EHNF formados en una nanofibra
tease [46] , y tripsina [69] también se utilizaron en la síntesis de membrana. En el trabajo de Rong [35] , los EHNF preparados se cargaron

proteasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. En algunos otros trabajos, una -quimotripsina en la superficie de la hoja de cobre, que funcionó como un portador monolítico
[67], alcalasa [68], y la bromelina [28] podría usarse como el orgánico y superó el problema del reciclaje. Para mejorar aún más la
constituyentes cuando Ca 3 (PO 4 ) 2 fue utilizado como el componente inorgánico bilidad de las enzimas, Patel et al. [43] entrecruzado la lacasa por
estimulantes durante la fabricación de los HNF basados ​en proteasas. utilizando glutaraldehído. Considerando la baja velocidad de la lacasa-
síntesis de HNFs, se han utilizado varios métodos para reducir

3.1.4. HNF a base de carbohidrasas el momento de la síntesis. El método más común es la sonicación.
La glucosa oxidasa (GOx) es la más utilizada en el tratamiento, lo que podría acortar el proceso a 5 min [11,39] . La

HNF a base de carbohidrasas. En el trabajo de Huang [74] , GOx fue en primer lugar Los HNF fabricados a base de lacasa representan un gran potencial de aplicación.
utilizado incorporándose con iones de cobre para formar GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. tial en la detección de fenol [75] , la producción de viniferina

Basándose en este proceso de síntesis básico, Kim et al. desarrolló el
método sonoquímico para la síntesis rápida y fácil de GOx-
Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF en menos de 5 min a temperatura ambiente [11,38] .
Los productos EHNF obtenidos se utilizaron para la detección de glucosa.
y la preparación de células de biocombustible, que se pueden ampliar fácilmente
a aplicaciones más diversas en química médica y ambiental
istry. GOx-Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O HNF también se fabricaron recientemente para
la detección de glucosa humana en el campo médico.
Con investigadores exhaustivo
cooperación de iones de carbohidrasa-metal en EHNF, varios EHNF
con diferentes tipos de carbohidrasas también se sintetizaron para
la inmovilización enzimática. Se utilizó L- arabinosa isomerasa para
formar EHNF con iones de cobre e iones de manganeso mediante Xu [71]
[54,76]y la decoloración del tinte [35,43] .
3.1.6. Otros
Debido a la diversidad de enzimas, la enzima utilizada en los EHNF
componente no está limitado dentro de las clases anteriores, pero la mayoría de los
los trabajos todavía se centran en los EHNF basados en Cu 3 (PO 4 ) 2 . Patel y col. [19]
informó de una nueva síntesis de L- arabinitol 4-deshidrogenasa-Cu 3 (PO 4 ) 2
HNF y NADH oxidasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF, que proporcionó una
comprensión en la camino para la producción de L- xilulosa. Lang y col. [9] empleado
AdhD y diaforasa como enzima dual en la síntesis de
EHNF a base de Cu 3 (PO 4 ) 2 , y los aplicó en la oxidación de
alcohol secundario y reciclaje del cofactor NAD (H). En el trabajo
[82], se prepararon las enzimas del citocromo P450-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF

y Rai [2] , respectivamente. En el trabajo de Wang [37], una amilasa era para oxidar alcohol, aldehído, etc. Además, ureasa [32] , 2,4-
inmovilizado en CaHPO 4 , y formó un nano- como una flor diclorofenol hidroxilasa [83] y DQO [84] también se utilizaron como

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6 Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342

Fig. 2. Imágenes SEM de los EHNF con diferentes microestructuras y sus flores analógicas. (a 1 ) Imagen de tagetes erecta: forma similar a las EHNF con roseta

morfología. (a 2 -a 4 ) EHNF con forma de roseta: (a 2 ) a -glicosidasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [21]. (a 3 ) catalasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [42] . (a 4 ) HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [57]. (b 1 ) Imagen de
craspedia: forma similar a los EHNF con morfología esférica. (b 2 -b 4 ) EHNF con forma esférica: (b 2 ) DQO-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [84]. (b 3 ) Lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNFs (el
la barra de escala es de 2 l m) [39]. (b 4 ) GOx y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [52] . (c 1 ) Imagen de nymphaea tetragona: forma similar a las EHNF con morfología rómbica. (c 2 -c 4 ) EHNF con
la forma rómbica: (c 2 ) DPEase-Co 3 (PO 4 ) 2 HNFs [23] . (c 3 ) Papaína-Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF (la barra de escala es 5 l m) [24] . (c 4 ) Lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [6].

los componentes orgánicos en la síntesis de Cu 3 (PO 4 ) 2 -basados 4. Morfología

EHNF. Zhao y col. [45] propuso ALDC-Ca 3 (PO 4 ) 2 HNF y aplicó
ellos en la industria cervecera. En el trabajo de Cao [36] , x -Transaminasa 4.1. Microestructuras típicas de EHNF

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fue empleado y Co 3 (PO 4 ) 2 era el componente inorgánico.
Otra enzima que vale la pena mencionar es la anhidrasa carbónica.
(CA), que es un tipo de enzima que contiene zinc. Curiosamente, en
los estudios actualmente disponibles, el CA reaccionó con Ca 3 (PO 4 ) 2 ,
Cu 3 (PO 4 ) 2 y Mn 3 (PO 4 ) 2 en PBS para formar EHNF, pero no Zn 3 (PO 4 ) 2
[6,85] .
3.2. EHNF basados ​en enzimas duales
En comparación con los EHNF convencionales, la principal novedad de
HNFs basados ​en enzimas duales es integrar dos sistemas enzimáticos
en una sola nanoflor [79] . Li [79], Sun [52] , Ariza-Avidad [81],
y Zhu [80] sintetizó con éxito HRP & GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2
HNFs y los aplicó en la detección colorimétrica de glucosa.
Mediante el uso de enzimas duales para la detección colorimétrica, el
La señal podría amplificarse obviamente y notablemente debido a
el efecto sinérgico de las enzimas aplicadas [79] . Basado en el
síntesis de GOx y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF, un papel microfluídico 3D-
dispositivo basado en 3D (3D μPAD) fue desarrollado para la detección más fácil
de glucosa [80,81]. Chung y col. [77] atrapó tanto el colesterol
oxidasa (DQO) y HRP en el Cu 3 (PO 4 ) 2 -EHNF y se aplica en
la detección de colesterol en sangre. Zhang y col. [27] preparado
GOx y lipasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF para catalizar la epoxidación de alquenos.
En el trabajo de Chen [26] , los AKR y AdhD-CaHPO 4 HNF sintetizados
se utilizaron para fabricar el intermedio de alcohol quiral clave de
Crizotinib.
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Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342
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Generalmente, los EHNF representan una estructura jerárquica con un
Numerosas nanoplacas compuestas por enzima / fosfato metálico,
asemejándose a los "pétalos" de la nanoflor. Diferentes sistemas de síntesis
tems y diferentes tcnicas de preparacin dan como resultado diferentes EHNF
productos con diversas microestructuras. Los diámetros de la
Los EHNF obtenidos varían básicamente de 1 a 30 l m, y sus formas
son en su mayoría similares a las flores redondas con variaciones sutiles. La
Las morfologías más comunes de EHNF son rosetas, esféricas y
rómbico. Algunos ejemplos típicos de EHNF con estos
las microestructuras se muestran en la Fig.2, y las flores con la sim-
También se demuestran apariencias similares para una mejor comprensión.
4.2. Factores que influyen en la morfología de las EHNF
La forma y el tamaño de los EHNF están influenciados por muchos factores.
incluyendo la condición de crecimiento y los parámetros del proceso, y
Los principales factores que influyen son la enzima aplicada y el metal.
ion, el valor de pH y el tiempo de reacción (como se ve en la Fig.3) [62].
4.2.1. El efecto de las enzimas.
La enzima es esencial para la formación de EHNF porque actúa como
el "pegamento" y une los nanocristales de fosfato metálico juntos
[6]. Las morfologías de los EHNF sintetizados con diferentes
las enzimas parecen variar considerablemente [28] . Li y col. [20] aplicó dif-
diferentes enzimas (por ejemplo, papaína, lacasa y HRP) para sintetizar la
7
6/14
5/7/2021 Nanoflores híbridas basadas en enzimas con alto rendimiento para aplicaciones biocatalíticas, biomédicas y medioambientales
Fig. 3. Principales factores que influyen en la morfología y el tamaño de los EHNF. (a 1 -a 3 ) Imágenes SEM de EHNF basados ​en Cu 3 (PO 4 ) 2 con diferentes enzimas [11]: (a 1 ) GOx; (a 2 ) lacasa;
(a 3 ) catalasa. (b 1 -b 3 ) Imágenes SEM de papaína-Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF con diferente cantidad de lipasa añadida [24]: (b 1 ) 0,025 g; (b 2 ) 0,05 g; (b 3 ) 0.25 g (la barra de escala en b 1 , b 2 , b 3 es 2 l m).
(c 1 -c 3 ) Imágenes SEM de HNF basados ​en CPO sintetizados con diferentes iones metálicos [33] : (c 1 ) Cu; (c 2 ) Cd; (c 3 ) Co. (d 1 -d 3 ) Imágenes SEM de peroxidasa de rábano negro turco-Cu 3 (PO 4 ) 2
HNF sintetizados bajo diferentes valores de pH [55] : (d 1 ) 6; (d 2 ) 7,4; (d 3 ) 9 (la barra de escala en d 1 , d 2 , d 3 es 2 l m). (e 1 -e 3 ) Imágenes SEM de papaína-Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF sintetizadas después
diferentes tiempos de incubación [24]: (e 1 ) 30 min; (e 2 ) 120 min; (e 3 ) 180 min (la barra de escala en e 1 , e 2 , e 3 es 20 l m).
EHNF basados ​en iones de cobre y diferentes morfologías de nanoflorecientes
fueron fabricados. Además, Chung et al. [11] desarrolló EHNF
incorporando Cu 3 (PO 4 ) 2 con diferentes enzimas, incluida GOx,
lacasa y catalasa, y los EHNF sintetizados representan completamente
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8 Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342
cristales y el crecimiento anisotrópico de la estructura en forma de flor.
Además, fue descubierto por Lin et al. [34] que el micro-
La estructura de los EHNF también fue determinada por la estructura molecular
pesos de enzimas.
Por otro lado, la concentración de enzimas también influye
la morfología del EHNF obviamente, incluido el tamaño de la
EHNF y la densidad del "pétalo" [3,34]. Por lo tanto, una cierta cantidad
de enzima se puede utilizar como agente de control de tamao y superficie cristalina
inhibidor de la cara durante la formación de EHNF [83]. Debido a la diferencia
enzima diferente habilidades de difusión y
interacciones entre enzimas a diversas concentraciones de enzimas,
la influencia de la concentración de la enzima comienza a partir de la enzima
inmovilización en la etapa temprana de la formación de EHNF [3,89].
Zheng y col. [3] observó el mayor tamaño de las nanoflores formadas
con estructura flojamente ensamblada a una concentración de lipasa relativamente baja
durante la síntesis de los EHNF basados ​en iones de cobre. La
Fang et al. también observaron resultados similares. [83] y Gulmez
et al. [48], y también encontraron que el micro-
Las estructuras se sintetizan con el aumento adicional de la enzima.
contenido, mientras que el tamaño del EHNF disminuye cuando la enzima
la concentración aumenta hasta un cierto valor. Esto es principalmente causado
por el aumento correspondiente en el número de sitios de nucleación
[36,61,62] . Durante la preparación de papaína-Zn 3 (PO 4 ) 2 [24]
y la lipasa-Zn 3 (PO 4 ) 2 hnfs [22] , Zhang et al. encontré que el
la morfología del producto cambió de "rombo" a "cuadrado"
con el aumento de la concentración de enzima [24] , como se muestra en
Figura 3 (b 1 , b 2 ). Si aumentamos aún más la concentración de enzima a
un valor de sobrecarga, una construcción compacta en forma de racimo con
grietas y formas de distribución de gran tamaño de partícula en lugar de la
elegante microestructura de flores (ver Fig.3b 3 ), y la masa trans-
fer eficiencia y actividad enzimática del producto también se deterioran
tasas en serio [21,32,60] . En los sistemas de síntesis de EHNF con
enzimas duales o multienzimas, la concentración de ambas
Las enzimas juegan un papel importante en la determinación de la morfología.
de los EHNF obtenidos [80] .
4.2.2. El efecto de los iones metálicos.
Los iones metálicos actúan generalmente como precursores del metal.
nucleación de cristales de fosfato y la coordinación orgánico-inorgánica
durante la formación de EHNF, por lo que es necesario investigar
controlar el efecto de los iones metálicos sobre la morfología de los EHNF. En
Trabajo de Duan [85] , ion manganeso (Mn 2+ ), ion calcio (Ca 2+ ) y
iones de cobre (Cu 2+ ) se utilizaron como iones metálicos para sintetizar el
HNF mediante el uso de CA como enzima y los EHNF con "tipo abanico"
forma, forma de "Dahlia-like" y forma de "Dahlia pinnata Cav"
fueron sintetizados correspondientemente. Durante la síntesis de CPO-
basados ​en HNF, Wang et al. [33] encontró que el CPO-Cd 3 (PO 4 ) 2 sistema de
formaron HNF con una morfología de mariposa, mientras que CPO-
Los sistemas Co 3 (PO 4 ) 2 y CPO-Cu 3 (PO 4 ) 2 formaron una esfera en forma de flor,
como se muestra en la Fig. 3 (c 1 -c 3 ). Por otro lado, la concentración de
Se propone que los iones metálicos alcancen un cierto valor para garantizar la
formación de nanocristales de fosfato metálico [83] . Durante el
síntesis de los HNF que consisten en ureasa y Cu 2+ , Somturk
et al. [32] formó los EHNF con diferentes densidades de "pétalos" cuando
diferentes concentraciones (0,8 mM, 8 mM y 80 mM) de Cu 2+ fueron
utilizado, mientras que el tamaño de las nanoflores enteras era casi el
mismo. Se observó un fenómeno similar durante la preparación
ción de la Brevibacterium colesterol oxidasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNFs
[84] y la papaína-Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF [24] , las nanoflores se convierten en
mucho más denso con el aumento de la concentración de iones metálicos.
Rai [2] desarrolló una serie de HNF basados ​en L- arabinosa isomerasa
utilizando 13 iones metálicos diferentes como componente inorgánico, y
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diferentes formas y tamaños, como se ve en la Fig.3(a 1 –a 3 ). Esta morfología
La diversidad ical proviene principalmente de los diferentes grupos amida en el
superficie de las enzimas empleadas, que ofrecen sitios de nucleación con
Diferentes geometrías y densidades para la unión de fosfato.
demostró que el aumento de la concentración de iones metálicos contribuye
al aumento de la actividad de las enzimas en los EHNF [90] . Allí-
Por tanto, se puede concluir que la funcionalidad de la enzima es
también seriamente influenciado por los tipos o concentraciones de
ion metálico en algunos sistemas EHNF específicos.
4.2.3. El efecto de la temperatura de síntesis.
La temperatura de incubación también es uno de los factores que afectan
la estructura de las nanoflores en algunos sistemas de síntesis de ENHF. Que
diferente mutuo Puede deberse a las diferentes actividades de difusión de la enzima.
a diferentes temperaturas, lo que lleva a los diferentes grados compactos
de los "pétalos" de la flor y diferentes diámetros de flores [55] . Durante
la preparación de EHNF a base de iones de cobre mediante el uso de lactoperoxi
dase (LPO), lipasa y papaína como componentes enzimáticos, la
Los "pétalos" eran más compactos a medida que disminuía la temperatura [41,62]. En
El trabajo de Lang [9], la integridad y regularidad de los "pétalos" de la flor
también se vieron seriamente afectados por la temperatura de síntesis del
enzima-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. Por tanto, la temperatura óptima
debe explorarse para obtener los productos EHNF con la mejor
nanoestructura.
4.2.4. El efecto del valor del pH
La carga de la enzima varía con el cambio del valor de pH,
lo que lleva a una capacidad de interacción diferente entre diferentes componentes
nentes en el sistema de síntesis de HNF, por lo que el valor de pH obviamente
afectan la morfología y las propiedades del producto final [49] .
En el sistema de síntesis EHNF con Cu 2+ como iones metálicos, Som-
turk y col. [50] y Nadar et al. [72] eligió ureasa y glucoamilasa
como la enzima, respectivamente. Encontraron que las enzimas son positivas
cargada debido a la protonación a valores de pH bajos, evitando
la interacción entre las moléculas de la enzima y los iones Cu 2+ . En
Por el contrario, a valores de pH más altos, las moléculas de enzima son negativamente
cargado, lo que lleva a la fuerte repulsión entre los protonados
moléculas enzimáticas cargadas negativamente también. Este tipo de repulsa
sión en los valores de pH inapropiados deteriora la formación de
las nanoplacas de enzima / fosfato metálico, lo que resulta en la incapacidad
de la formación EHNF. El resultado similar fue observado por Hao
et al. [84] en su preparación del colesterol Brevibacterium
oxidasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF. Mientras que durante la formación de LPO-
Cu 3 (PO 4 ) 2 EHNF [41] , como se muestra en la Fig. 3(d 1 -d 3 ), la morfología
de los EHNF solo se vio afectado a pH ácidos (inferiores a pH 8),
y las nanoflores más uniformes se sintetizaron a pH 9.
Por lo tanto, los EHNF solo se forman en los valores de pH adecuados, atribución
uted a la cantidad de carga apropiada de la enzima y el
buena atracción secuencial entre diferentes componentes [23,55] .
Cuando se utilizan lacasa y DQO ​como enzima en los EHNF para
sistemas de mación, un pH más bajo (pH = 3, 5) podría conducir a una disminución
Densidad de "pétalos" y estructura de "flor" más pequeña [84] . Grupo de fu
[51] encontró que los valores de pH también afectan los grupos funcionales en el
Superficie de EHNF.
4.2.5. El efecto del tiempo de reacción.
Según el mecanismo de formación de EHNF mencionado
arriba, las muestras obtenidas exhiben diferentes morfologías en
las diferentes etapas del proceso de crecimiento, (ver Fig.3 (e 1 -e 3 )), por lo que el
La influencia del tiempo de reacción en la morfología de los EHNF es obvia.
ous [2,24,47,50]. En la etapa inicial de síntesis, solo nanoplacas
puede observarse durante un largo período de proceso de síntesis, que
son el complejo de nanocristales de enzima y fosfato metálico. Con
el aumento en el tiempo de precipitación, los productos formados exhiben
la morfología de las nanoflores dispersas independientemente, y
el grosor y tamaño de partícula de los productos en forma de flor en serie
7/14
5/7/2021 Nanoflores híbridas basadas en enzimas con alto rendimiento para aplicaciones biocatalíticas, biomédicas y medioambientales
encontraron que Mn 2+ y Co 2+ pueden aumentar significativamente la cat- depende principalmente del tiempo de síntesis [69,70,83] . Vale la pena mencionar-
actividad alítica de la enzima, mientras que otros iones metálicos, incluidos es decir, que el tiempo de reacción no se establezca demasiado largo. Es decir
+ , no tuvo ningún efecto o incluso fue leve
Mg 2+ , Ca 2+ , K + , Na + , Ni 2+ , Li + y NH 4 porque la nucleación de los fosfatos metálicos y el in-situ
Efecto inhibidor sobre la actividad enzimática. Además, fue la precipitación de las nanopartículas formadas domina la síntesis

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Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342 9

Fig. 4. Actividad enzimática de EHNF y enzimas libres: (a) bajo diferentes valores de pH [22] ; (b) a diferentes temperaturas [24] ; (c) después de diferentes períodos de almacenamiento [57] .
(d) Tolerancia de EHNF y enzimas libres frente a disolventes [43] .

proceso, reduciendo la proporción de enzima en los EHNFs significativamente en una amplia gama de valores de pH. La tolerancia mejorada al pH de
cativamente, deteriorando así la actividad enzimática de EHNF EHNF se debe principalmente a la protección de los sistemas híbridos, que
[35,36,69,76] . reducir la movilidad molecular y prevenir la conformación drástica
cambio nacional de las enzimas [35] . Para el CPO- (Cu / Co / Cd) 3 (PO 4 ) 2
5. Propiedades HNF [33], por encima del 50% de actividad biocatalítica retenida después de 1 h de incubación
a 70 ° C, mientras que el CPO libre perdería toda su actividad catalítica
La amplia aplicación de las enzimas es limitada debido a su temperatura después de sólo 30 min a 70 ° C. Además, los EHNF poseen
estabilidad deteriorada a temperaturas elevadas e inactividad actividad significativamente mayor en las condiciones extremas de pH que
en el medio orgánico [74,91,92] . La inmovilización del el CPO gratuito. En el Brevibacterium colesterol oxidasa-Cu 3 (PO 4 ) 2
enzima en EHNFs le proporciona una eficiencia mucho mayor HNF [84] , la enzima inmovilizada mantuvo el 85% de su valor inicial
emparejando con el correspondiente libre, incluida una mayor estabilidad actividad después de 1 h de incubación a 80 ° C, mientras que la DQO libre perdía
así como una actividad catalítica mejorada, como se ve en la Fig. 4 [93]. Allí- 80% de actividad nativa después de 1 h de incubación a una temperatura más baja de
Por lo tanto, los EHNF superan el problema de 50 ° C. Li y col. [79] desarrolló un nuevo biosensor mediante la preparación
las enzimas tradicionales. EHNF con GOx y HRP como enzimas duales. Comparado con el libre
enzimas que pierden la mayoría de sus actividades intrínsecas a 70 ° C,
5.1. Alta estabilidad GOx y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNFs todavía exhibieron más del 90% de la
actividad a esta temperatura. Otras enzimas duales (AKR y AdhD)
Generalmente, las enzimas son sensibles a la temperatura y al pH. HNFs basados ​en CaHPO 4 como componente inorgánico también mostraron
valor, es decir, siempre se vuelven inactivos más allá del adecuado una estabilidad notable a la temperatura elevada - alrededor del 90% de
condiciones de temperatura o pH, que se debe principalmente a la la actividad inicial se mantuvo incluso después de 8 ha 30–50 ° C. La
cambio de conformación enzimática a diferentes temperaturas o valores de pH El aumento de la resistencia a la temperatura de los EHNF podría atribuirse a
ues [31,91]. En comparación con las enzimas libres, las HNF basadas en la la misma razón en cuanto a su resistencia al pH: en los EHNF, el fuerte
las enzimas correspondientes muestran sus ventajas en la aplicación formas de interacción entre los iones metálicos y el funcional
en un rango de pH más amplio y una temperatura no ideal ( Fig.4a, b) grupos de enzimas y refuerza significativamente la estructura
[25,36,54,57] . En el trabajo de Cui [60] , encontraron que la estabilidad del pH rigidez, disminuyendo así la extensión del cambio conformacional y
rango de la lipasa se amplió de 8 a 10 a 4-12 después de su prevenir la desnaturalización de la enzima en ambientes extremos
inmovilización en los EHNF. La alcalasa-CaHPO 4 HNFs sintetizan mentos [28,35].
dimensionado por Memon [68] y la lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF sintetizados Excepto para mantener la funcionalidad a temperatura elevada y
por Rong [35] representó una alta eficiencia de decoloración similar amplio rango de pH, la estabilidad de los EHNF también se refleja en su

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buena capacidad de almacenamiento y alta reutilización. La mala conservabilidad del
las enzimas libres causaron un gran desafío para su producción a gran escala
ción y aplicación. Comúnmente retienen solo alrededor del 30% de sus
actividades iniciales después de 30 días de almacenamiento a temperatura ambiente, y
pierden casi todas sus actividades después de 60 días (Figura 4 c) [57] . En con-
Por el contrario, después de la inmovilización en EHNF, las enzimas
permanecen por encima del 70% de su actividad inicial después de 30 días de almacenamiento,
y el 40% de su actividad inicial aún se conserva después de 60 días [19] . Piel-
además, en comparación con las enzimas libres y las enzimas
inmovilizados por otros métodos, los EHNF retienen mucho más
actividades después de varios ciclos sucesivos de reutilización, indicando su
reutilización mejorada. Las lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF preparadas por
Zhu y col. [54] retuvo el 85% de su actividad inicial después de 10 ciclos de
reutilización, mostrando una mejor reutilización que la lacasa inmovilizada en
otros sistemas. Los HNF basados ​en lacasas sintetizados por Wu et al.
[76] incluso retuvo el 93,2% de la actividad inicial después de 10 veces
regeneración. En algunos sistemas EHNF, la actividad enzimática puede
mejorarse aún más mediante el uso de algunos métodos específicos, por ejemplo, Patel
et al. [43] mejoró significativamente la eficiencia de decoloración de
los EHNF preparados después de 10 ciclos de reutilización mediante reticulación
( Figura 4D). La razón de la durabilidad mejorada de las enzimas en
Los EHNF se dedujeron como el efecto de encapsulación del fosfato metálico.
cristal de fáto, lo que resulta en la alteración minimizada de la enzima
sitios activos [36] .
Para algunas enzimas altamente hidrófilas, p. Ej., CPO [33], el catalítico
La capacidad se vería notablemente afectada por la escasez de agua.
disolventes orgánicos miscibles. La inmovilización de las enzimas en
Se demostró que los EHNF son un método eficaz para mejorar su tolerancia.
tolerancia a los disolventes orgánicos [33,43]. Esto se debe principalmente a la
protección de la estructura del andamio de EHNF, que evitan la
difusión del disolvente a las enzimas [33]. Wang y col. [33] encontrado
que CPO en el EHNF retuvo alrededor del 50% de la actividad en orgánicos
solventes (alcohol metílico, metilbenceno), mientras que el CPO libre
solo retuvo el contenido máximo del 20%. En el trabajo de Patel [43],
los HNF basados ​en lacasas reticulados mostraron 9.1, 10.7, 12.9, 14.0,
y una tolerancia 15,3 veces mayor hacia el hexano, tolueno, n-
butano, etanol y acetona, respectivamente, que la enzima libre
después de 4 h de incubación en condiciones óptimas.
5.2. Alta actividad
La inmovilización comúnmente reduce las actividades del
enzimas, atribuidas principalmente al efecto de limitación de la transferencia de masa
de los soportes sólidos [58,72,94–96]. Mientras que la preparacin del
Los EHNF se dieron cuenta de la mejora simultánea de la estabilidad y
actividad de las enzimas al mismo tiempo [3,8,20,29-31] . Lo mas
ejemplo típico de la actividad enzimática mejorada en EHNF es el
transformación de la lipasa de "inactiva" a "activa" [60,97,98].
La mayoría de las lipasas muestran una forma cerrada "inactiva" cuando se disuelven en agua.
medios de comunicación social porque sus sitios activos siempre están cubiertos por
cadenas de aminoácidos hidrófobos, llamadas "tapa", que pueden dislocarse
cated en presencia de tensioactivos. En los HNF basados ​en lipasas,
la flor puede actuar como un soporte anclando las lipasas en su apertura
forma activa después de su activación, aumentando así la actividad de
lipasa aproximadamente un 460% más alta que la libre. En el
lipasa-Zn 3 (PO 4 ) 2 HNF, la actividad de la lipasa es un 47% mayor que
el de la lipasa libre [22] . La mejora de la actividad enzimática de
el EHNF también es obvio para otras enzimas diferentes [46]. La
La actividad de lacasa-Cu 2+ HNF fue de 3,3 a 6,5 ​veces la de la lacasa libre.
[23,51] , mientras que la actividad de lacasa-Mg 2+ HNF fue de alrededor de 2,7
tiempos de lacasa libre [43]. La actividad catalítica de lacasa hacia
Los compuestos fenólicos podrían elevarse al 265% a través de la preparación.
ción de los EHNF basados ​en iones de cobre y una reticulación adicional
proceso [43]. En los HNF de ureasa-Cu 2+ , la ureasa mostró un
2000% más de actividad que la gratuita [32]. El ChT-Ca 3 (PO 4 ) 2
sintetizado por Yin et al. [67] presentó un 266% más enzimático
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actividad (3410 U mg À1 ) que la ChT libre en solución acuosa
(1123 U mg À1 ). Además, el HRP inmovilizado en el
Los EHNF basados ​en Cu 2+ lograron un aumento del 300-506% de los niveles enzimáticos
actividad [58] , y la actividad de HRP incluso se mejoró en un 710%
cuando se inmoviliza en los EHNF a base de hierro. Nadar y col. [72]
preparó HNF a base de glucoamilasa con catalizador mejorado al doble
actividad comparada con glucoamilasas libres mezclando solución de CuSO 4
con enzima que contiene PBS. Yu y col. [47] encontró que el similar
La mejora (~ 446%) de la actividad enzimática tuvo lugar en el
EHNF integrados en SBP también. Zheng y col. [23] desarrolló el
EHNF mediante el uso de enzima dependiente de Co 2+ (DPEasa) como el
componente y Co 3 (PO 4 ) 2 como constituyente inorgánico, y el
Los productos mostraron una actividad 7,2 veces mayor que la DPEasa libre.
Los HNF de GOx-Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O desarrollados por Guo et al. [31] para
la detección de glucosa en suero humano mostró una cat-
actividad alítica que la actividad total de la misma cantidad de
GOx + Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O. Algunos HNF con enzimas duales o múltiples
Las enzimas incluso exhiben una actividad más alta que la basada en enzimas.
HNF [80]. En el estudio de Li [79], biosensor basado en GOx y HRP-
Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF exhibieron una respuesta superior al 50% más alta que la
mezcla de GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2 y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF.
La clave para la actividad catalítica mejorada de la enzima en EHNF es
la selección de la enzima adecuada y su correspondiente metal
ion, que muestran una buena incorporación [93] . Por lo tanto, el mayor
Las actividades de las enzimas incrustadas en los EHNF surgen de las siguientes
factores reductores: (i) el efecto de anclaje sobre algunas enzimas específicas
(por ejemplo, lipasa) que presentan los HNF cuando son activados por algunos
tensioactivos, dejando los sitios activos completamente expuestos [60,90,97,98] ; (ii)
la alta superficie causada por la estructura jerárquica en el interior
HNF, que provocan una fuerte compresión y se acercan al metal.
iones y enzimas, facilitando la realización de la activación; (iii) el
efecto catalítico sinérgico y de acoplamiento de la nanoescala-
moléculas de enzima atrapadas [22,33] .
6. Aplicación
Las propiedades catalíticas superiores de los EHNF les otorgan una amplia
aplicaciones extendidas, con distintos campos operativos que incluyen
Biocatálisis industrial, biomédica y tratamiento ambiental.
[8,99-101] . Ejemplos de aplicación biotecnológica de las ENHF
se resumen en la Fig.5 .
6.1. Aplicación catalítica industrial
Debido a la excelente estabilidad, actividad catalítica y reutilización
de las enzimas inmovilizadas proporcionadas por la estructura única
de los EHNF, los EHNF se han utilizado ampliamente en biocatálisis industrial
recientemente, que gradualmente se convierte en un punto de acceso para la investigación [102] . Después
sintetizando las HNF de lipasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 , Hua et al. [65] aplicó el
productos en la epoxidación de ácidos grasos. El ácido graso
transformarse en perácido bajo la catálisis de lipasa en presencia
de H 2 O 2 , y luego realizar la auto-epoxidación. Este estudio
terminó con una actividad 25 veces mayor que la lipasa libre. En Zhang's
trabajo [27] , la epoxidación de alquenos fue catalizada por la síntesis
tamaño GOx y lipasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF con alta reutilización (permanecen
82% de la actividad inicial después de 10 ciclos). Primero, el H 2 O 2 es controlable
producido a partir de glucosa por GOx, luego utilizado inmediatamente por
lipasa. Bajo el efecto de la lipasa, el éster carboxílico se transforma en
perácido, que se utiliza en la epoxidación de alquenos. Además,
Yu y col. [49] sintetizó la papaína-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF que cata-
alyze Knoevenagel, y los EHNFs realizaron 15-
doblar la actividad en comparación con la papaína libre. He et al. [82] preparado
la enzima del citocromo P450-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF para catalizar una cantidad
de reacciones como la hidroxilación de hidrocarburos, la oxidación selectiva
de sulfuros, oxidación de alcohol / aldehído, etc. Además, Wu
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Fig. 5. Ilustración resumida de las aplicaciones de las ENHF. Las aplicaciones comunes de los EHNF se pueden dividir en tres categorías: biocatalíticas, biomédicas y
aplicaciones medioambientales. (a) Reacción de la epoxidación de alquenos catalizada por GOx y lipasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [27]. (b) Reacción de D -tagatosa a D- Psicosa catalizada por
DPEase-Co 3 (PO 4 ) 2 HNF [23]. (c) Determinación de E. coli O157: H7 basada en anticuerpos y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [8]. (d) Ilustración de la detección de glucosa por GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2
HNF [38]. e) Ilustración de una celda de biocombustible basada en GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF, catalasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF y lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [11]. (f) Ilustración de la decoloración de
Victoria blue bajo la catálisis de peroxidasa de rábano turco-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [55].

et al. [76] informó el efecto catalítico de la lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 ALDC y Ca 3 (PO 4 ) 2 . Después de integrarse en las microperlas de alginato,
HNF con capacidad de reutilización mejorada (siguen siendo el 93,2% de la actividad inicial las microperlas cargadas con ALDC-Ca 3 (PO 4 ) 2 HNF se pueden utilizar para resolver
después de 10 ciclos) en la preparación de viniferina. el problema del mal sabor de la cerveza al prevenir la formación de diace-
Excepto por la catálisis en la industria química, los EHNF también son tyl. Además, acortan el tiempo de maduración y recortan el coste
ampliamente aplicado en la fabricación de alimentos. L- ribulosa y D- etiquetada conspicuamente.
son monosacáridos con un alto valor de investigación, pero ambos son difícilmente
obtenido de la naturaleza, por lo que varias reacciones químicas han 6.2. Aplicación biomédica
aplicado para fabricar estos monosacáridos a partir de disacáridos
paseos y polisacáridos. Usando la misma enzima de 6.2.1. Biosensor
L- arabinosa
isomerasa, Xu et al. [71] y Rai et al. [2] sintetizado Recientemente, los EHNF preparados con varias enzimas y metales
los EHNF basados ​en iones de cobre y los EHNF basados ​en iones de manganeso en Los iones se han preparado como una serie de biosensores de alto rendimiento.
2016 y 2018, respectivamente. Las tasas de conversión de la síntesis gracias a su gran superficie y sensibilidad de detección [103].
EHNF basados ​en iones de cobre de tamaño y EHNF basados ​en iones de manganeso En comparación con los marcadores de reconocimiento de nanomateriales normales,
son 61,8% y 50%, respectivamente. Del mismo modo, Patel et al. [19] síntesis Los EHNF presentan rendimientos más notables como sondas de señal
EHNF de tamaño mediante el uso de L- Arabinitol 4-deshidrogenasa y NADH oxi- en la aplicación de biosensores [104,105] .
dase para preparar L- xilulosa a partir de L- arabinitol. El biosensor electroquímico juega un papel importante en la dis-
Además, los EHNF también funcionan como catalizadores efectivos en el facilitar el diagnóstico [106-112]. Los EHNF se pueden utilizar como un tipo de elec-
industria cervecera. Zhao y col. [45] sintetizó los EHNF utilizando biosensor troquímico para detectar el biomolécula objetivo

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Fig. 6. Ilustración de los esquemas de detección de glucosa de diferentes EHNF: (a) GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [38]; b) GOx y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [52]; (c) GOx-Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O HNFs [31].

Fig. 7. Ilustración del mecanismo de detección del colesterol diana mediante DQO y HRP-
Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [77] .

convenientemente debido al efecto de acoplamiento de la enzima

amplificación y sensibilidad de los transductores electroquímicos
[113] . El grupo de Li [79] fabricó un HRP y GOx-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF
biosensor electroquímico basado en la detección precisa de E. coli en la orina
y rápidamente. El rango de determinación del biosensor aplicado es
grande (de 15 a 1,5 × 10 8 UFC mL À1 ), y el límite de detección
(LOD) es tan bajo como 1 CFU mL À1 .
Aparte de la aplicación como biosensores electroquímicos,
Los EHNF también se han utilizado como biosensores colorimétricos porque
Fig. 8. (a) Ilustración de la detección colorimétrica. (b) Fotos que muestran la visual
de los sustratos cromogénicos producidos por enzimas, lo que lleva a
detección de fenol mediante el uso de lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 Á3H 2 O HNF en solución acuosa
cambios de color significativos para la detección del objetivo. Como se muestra en
con diferentes concentraciones (de izquierda a derecha: 50, 25, 10, 2, 0,4 y 0 l g mL À1 ) [75].
Figura 6, los EHNF basados ​en enzimas duales (GOx y HRP) se han
desarrollado para la preparación del sistema de detección colorimétrico
de glucosa [38,114] . Este proceso de detección es provocado por el desarrolló un dispositivo basado en papel microfluídico 3D (3D μPAD) para glu-
peróxido de hidrógeno (H 2 O 2 ) producido a través de la glucosa oxidante detección de cose. Zhu y col. [80] también desarrolló un nuevo biosensor
ción por GOx, que a su vez oxidó un sustrato incoloro con una cuantificación sensible de glucosa mediante el uso de impresión de cera
3,3 0 , 5,5 0 -tetra-metilbencidina (TMB) en un producto azul por HRP. μPADs con GOx y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF depositados, que presentaban
La proximidad de las dos enzimas en un nano- buenos rendimientos de detección durante el rango de concentración de
flor redujo en gran medida la difusión y descomposición de H 2 O 2 ,
0,1-10 mM, y su LOD fue de 25 l M.
mejorando así en gran medida la sensibilidad de detección [52] . sol Aprovechando el efecto de oxidación similar del
et al. [52] preparó en primer lugar GOx y HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 nanoflores para liberaron H 2 O 2 en TMB, diferentes biosensores basados ​en ENHFs fueron
la detección de glucosa. Basado en el trabajo de Sun, Ariza-Avidad [81] fabricado. Lin y col. [34] creó un colorimétrico basado en EHNF

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En el trabajo de Wei [8], HRP, anticuerpo y Cu 3 (PO 4 ) 2 fueron co-

inmovilizado en un HNF tres en uno, que se aplicó en un
ELISA para servir como un anticuerpo marcado con enzima para E. coli O157: H7
determinación (ver Fig. 9 ). La concanavalina A (Con A) -GOx-
CaHPO 4 HNF sintetizados por Zhu et al. [113] también con éxito
detectó E. coli en alimentos y agua. Zhang y col. [42] desarrollado
otro método para la detección de H 2 O 2 mediante la síntesis de catalasa-
Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF, y esta detección se basa en la co-oxidación de
fenol y 4-aminoantipirina. Con el aumento de la concentración
ción de H 2 O 2 , la solución cambia de rojo claro a rojo marrón.

6.2.2. Cribado farmacológico

La investigación de la medicina tradicional china ha atraído
mucha atención en las últimas décadas debido a su gran potencial en
la extracción de fármacos innovadores, y los ingredientes activos en diferentes
Se están investigando urgentemente diversas medicinas chinas [115]..
Entre todas las estrategias de detección, las enzimas inmovilizadas en
Fig. 9. Ilustración de la detección de E. coli O157: H7 por anticuerpos ultrasensibles. Los EHNF funcionan como una de las sondas más efectivas para la detección
HRP-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [8] .
ing de la medicina china. Aprovechando la afinidad específica
dad de un -glycosidase con sus inhibidores, Qian et al. [21] sintetizado
plataforma para la detección de H 2 O 2 y fenol. Grupo de Jin [78] fab- un hnfs basado en -glycosidase ( un -GHNFs) a la pantalla selectivamente la
enriquecido un biosensor de alto rendimiento para paraoxon a través de sin- compuestos que exhiben una actividad inhibidora de una -glicosidasa en el dia-
Thesizing acetilcolinesterasa y colina oxidasa - Cu 3 (PO 4 ) 2 drogas béticas. Del mismo modo, Zheng et al. [3] lipasa-Zn 3 preparada (PO 4 ) 2

HNF (ACC-HNF). En su estudio, H 2 O 2 se generó durante la HNF para mejorar la penetración de la arbutina en la membrana celular, que

conversión de acetilcolina en colina. El grupo de Guo [31] sintetiza es un ingrediente activo del tratamiento tradicional para el tracto urinario
tamaño GOx-Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O HNF con cascada autoactivada infecciones. Además, mejoraron la actividad a 3.3 veces

detección de glucosa, y el esquema de detección es el siguiente: (i) más alto que el de la lipasa libre.

GOx cataliza la glucosa para liberar H 2 O 2 y ácido glucónico; (ii) el Además, los EHNF con enzimas duales también se aplican en farmacias.

El pH del sistema de reacción disminuye a aproximadamente 4 debido a la macología. El crizotinib se conoce como una quinasa del linfoma anaplásico
ácido glucónico atado, lo que da como resultado la mayor actividad similar a la peroxidasa (ALK) y se utiliza como fármaco contra el cáncer. Chen y col. [26] sin-

de Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O; (iii) la situ en formado H 2 O 2 se cataliza rápidamente AKR y AdhD-CaHPO de tamaño 4 HNF para preparar el intermedio clave
por el Fe 3 (PO 4 ) 2 Á8H 2 O activado , entonces TMB se oxida y causa de crizotinib y mantuvo su actividad completa después de 16 ciclos.

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el cambio de color significativo. Chung [77] preparó DQO y HRP-
Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF para detectar colesterol, en el que HRP oxida TMB 6.3. Aplicación medioambiental
en producto azulFigura 7). Como se ve en la Fig. 8 , Zhu et al. [75] desarrollado
una membrana de acetato de celulosa que contiene lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 Á3H 2 O La contaminación ambiental y la insuficiencia de recursos se están volviendo
Suspensión de HNF para la detección in situ de fenol, que representa ing las preocupaciones más urgentes en todo el mundo. Una variedad de medios
una transformación de color lineal con el aumento de la con- Se han tomado medidas para resolver estos problemas y se han

centrado entre 0 y 50 l g mL À1 . El grupo de Liu [57] investigado El tratamiento es una de las estrategias atractivas para la limpieza de contaminantes.
un EHNF de doble función con estreptavidina (SA) y HRP como el doble y fabricación de recursos energéticos [116,117]. Sin embargo, enzimático
enzimas y Cu 3 (PO 4 ) 2 como componente inorgánico. Gracias a El tratamiento también se enfrenta a varios desafíos debido a la inferioridad
las funciones coexistentes de unidad de reconocimiento y amplificación de señal, propiedades de las enzimas, incluida la baja actividad, estabilidad y producción
Los productos EHNFs obtenidos se pueden utilizar en cooperación con el actividad. Recientemente, muchos esfuerzos se han centrado en el uso de
ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para construir un colori- lizado enzimas por la contaminante tratamiento, y la
biosensor métrico para la detección ultrasensible de alfa- La inmovilización de las enzimas en los EHNF es una de las más eficaces
fetoproteína (LD = 78 pg / mL). métodos tivos [43,55,90]. Las aplicaciones medioambientales del

Fig. 10. (a) Decoloración evidente (de rojo a incoloro) de la solución de rojo Congo después de 3 h de tratamiento con lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [35]. (b) Ilustración del tinte azul Victoria
decoloración por peroxidasa de rábano negro turco-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [55] .

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Fig. 11. (a) Ilustración de la producción de biodiésel utilizando PPL-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF [33]. b) Ilustración de la celda de biocombustible basada en EHNF [11].

Los EHNF incluyen principalmente la eliminación de contaminantes y la bioenergía. 6.3.2. Fabricación de bioenergía
fabricación. Teniendo en cuenta la escasez de recursos en la tierra hoy en día, el
desarrollo de diversas fuentes de energía renovable con buena eficiencia
Se exige con urgencia eficiencia y reciclabilidad. Varios EHNF con
6.3.1. Tratamiento de aguas residuales También se han desarrollado diferentes componentes y estructuras para
Las aplicaciones medioambientales de los EHNF se centran principalmente en la la fabricación de bioenergía, ver Fig.11 .
eliminación de los tintes en las aguas residuales. Adsorbiendo y concentrando En los últimos años, la lipasa se ha utilizado ampliamente en la producción de biodiésel.
Tratar contaminantes en el microambiente que rodea ducción porque la síntesis basada en lipasa es comparativamente sim-
enzimas, los EHNF exhiben un LOD más bajo y respuestas más rápidas plenas, baratas y limpias [25]. La inmovilización de la lipasa en
[90,118,119]. Debido a la selectividad hacia el sustrato, diferentes Los EHNF mejoraron en gran medida la reciclabilidad de la lipasa, por lo tanto, redujeron
Las enzimas se pueden utilizar para catalizar la descomposición de diferentes reducir el costo de manera significativa [60]. Como se ve en la Fig.11a, utilizando la sincronización

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grupos de contaminantes. Impresionante, lacasa, un azul multi-cobre
enzima oxidasa, tiene una especificidad de sustrato relativamente baja, por lo que
alisa más de un tipo de contaminantes [35,116,120] . Rong
et al. [35] fabricado Cu 8 (PO 3 OH) 2 (PO 4 ) 4 Á7H 2 O nanoflores cov-
ered por lacasa-Cu 3 (PO 4 ) 2 compuestos de microesferas híbridas para
decolorar las soluciones acuosas de rojo Congo ( Fig.10a). En otro
trabajo, la lacasa también se aplica en la síntesis de óxido de grafeno-
enzima HNF, que se utilizó en la decoloración de cristales de color violeta
let (CV) y rojo neutro (NR) en aguas residuales [121]. El turco
peroxidasa de rábano negro-Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF sintetizados por Altinkay-
nak [55] se utilizó eficazmente para eliminar el azul Victoria
tinte, que exhibió una eficiencia de decoloración 35% más alta que
la peroxidasa de rábano negro turco libre después del tratamiento para
1 horaFigura 10B). Además, los EHNF aún mantuvieron el 77% de sus
eficiencia de decoloración después de 10 ciclos cíclicos, lo que indica su excelente
prestó reutilización. En el trabajo de Wang [33], mediante la integración de CPO en el
HNFs, la actividad biocatalítica en la decoloración de CV fue
mejorado por encima del 98% dentro de los 3 minutos de tratamiento. Basado en el
trabajo previo sobre el decolorante HNFs basado en lacasa, Patel
[43] añadió glutaraldehído para reticular los EHNF sintetizados.
Los productos obtenidos presentaron la mejora significativa
reutilización: hasta un 84,6% de eficiencia de decoloración aún retenida
en 10 ciclos de las condiciones de lote repetidas.
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Y. Li y col. / Revisiones de química de coordinación 416 (2020) 213342
tratamiento ambiental y otros procesos de catálisis industrial.
Cuando las enzimas se incorporan con iones inorgánicos dentro de los EHNF,
su actividad, así como la estabilidad, se mejoran debido a la gran superficie
área de la cara de la estructura en forma de flor y el eficiente confinamiento
ment de las moléculas de enzima. A pesar del rápido desarrollo de
EHNF en los últimos años, también hay algunos desafíos para ser
enfrentado.
(1) Se espera que los mecanismos sintéticos de los EHNF sean más
claramente investigado, y muchos detalles durante la síntesis
se espera explorar el proceso. Por ejemplo, la molec-
fundamentos ulares sobre los fenómenos de reacción-difusión
y los entornos de confinamiento en los EHNF no están claros. La
La exploración del mecanismo de síntesis de los EHNF es importante.
tant para el control preciso de la morfología y propiedades
de los productos sintetizados, así como el desarrollo de
nuevos tipos de EHNF para aplicaciones específicas.
(2) Es necesario investigar la interacción entre enzimas y
iones metálicos en EHNF de forma más sistemática porque
proporcionar algunos principios para el diseño de EHNF con un alto
actividad biológica retenida. Además, el evento de nucleación
de la fase inorgánica en presencia de diferentes cantidades
de las enzimas todavía no se puede describir cuantitativamente.
(3) Los sistemas EHNF con enzimas duales o multienzimas como
los componentes orgánicos no se han explorado completamente, incluyendo
sus microestructuras y su mecanismo de funcionamiento.
(4) La mayoría de los EHNF solo representan solubilidad en medios acuosos, por lo que
Se requieren estrategias para el uso de EHNF en medios orgánicos.
especialmente en la aplicación de biocatálisis industrial.
(5) Se espera que el campo de aplicación de los EHNF sea más
expandido. Por ejemplo, puede ser posible poner EHNF en
más aplicaciones energéticas además de biodiesel y fábricas de pilas de combustible
ricación, como el desarrollo de los supercondensadores.
En resumen, nuevos tipos de EHNF, nuevos principios de síntesis y
Se espera que se investiguen urgentemente los mecanismos detallados.
y las modificaciones controlables de estructuras y propiedades de
Los EHNF también deberían recibir una atención cada vez mayor. Además, el
La aplicación de EHNF debe ampliarse más allá de la
biocatalizadores, el diseño de biosensores y el medio ambiente
mejoramiento.
Declaración de intereses en competencia
Los autores declaran que no tienen recursos financieros competitivos conocidos.
intereses personales o relaciones personales que pudieran haber aparecido
para influir en el trabajo informado en este documento.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales
dación de China (NSFC, Grant No. 51573013, 51873016, y
51873225). Fundación para el inicio de la investigación para profesores jóvenes en
También se reconoce BIFT (BIFTXJ201911).
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lipasa de páncreas porcina de tamaño (PPL) -Cu 3 (PO 4 ) 2 HNF, Yu et al.
[28] fabricó el biodiésel a partir de aceite de girasol con la eficiencia
de conversión del 96,5%, y la conversión del 72,5% permaneció después de 5 ciclos
carreras.
En otro trabajo, Chung et al. [11] utilizaron sus HNF desarrollados por
incorporando GOx, lacasa o catalasa con Cu 3 (PO 4 ) 2 para fabricar
células de biocombustible enzimático y alta densidad de potencia de hasta
Se obtuvieron 200 l W cm À2 (Figura 11B). Este biocombustible basado en EHNF
celda mantuvo más del 90% de su densidad de potencia inicial después de la
2 meses de almacenamiento a 4 ° C, lo que representa una excelente resistencia a la congelación.
tancia en comparación con el sistema de células de biocombustible basado en la
esponjando enzimas libres. La celda de biocombustible se puede producir con EHNF
en condiciones leves y no tóxicas en lugar de utilizar catálogos de metales tóxicos
alyst, que es el catalizador convencional para las células de biocombustible.
7. Conclusión y perspectivas futuras
EHNF, con una nanoestructura híbrida orgánica-inorgánica eficiente
tura, muestran excelentes oportunidades integrales para
mejorando significativamente las funciones catalíticas de los inmovilizados
enzimas. Por lo tanto, representan aplicaciones prácticas muy extendidas.
ción en diversas áreas biotecnológicas, incluida la biodetección,
15
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Apéndice A. Datos complementarios
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