Guía de Microbiología Enfermería 2020 P1-6

UNIVERSIDAD ESTATAL DE
MILAGRO
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE ENFERMERIA
GUÍA PRÁCTICA
DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
Elaborado por:
MSc. Betty Pazmiño Gómez
REVISIÓN MAYO - 2020

UNIVERSIDAD ESTATAL DE MILAGRO (UNEMI)
GUÍA PRÁCTICA DE MICROBIOLOGÍA
ÍNDICE
Pág
INTRODUCCIÓN.............................................................................................................................1
NORMATIVA DE INGRESO AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA...............................3
FACS 2016 (VIGENTE)..................................................................................................................3
PRÁCTICA N° 1................................................................................................................................6
NORMAS DE BIOSEGURIDAD E INSTRUMENTOS DEL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA...........................................................................................................................6
PRÁCTICA N° 2.............................................................................................................................11
CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNE............................................................................................11
PRÁCTICA N° 3.............................................................................................................................17
DETERMINAR ANTICUERPOS DEL VIRUS DEL DENGUE.................................................17
Determinar anticuerpos del virus del dengue mediante técnica Micro Elisa para valorar la
respuesta primaria y secundaria.................................................................................................17
PRÁCTICA N° 5.............................................................................................................................29
IDENTIFICACION MICROSCÓPICA DE PARÁSITOS INTESTINALES...............................29
PRÁCTICA N° 4..............................................................................................................................34
IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA DE BACTERIAS GRAM
POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS............................................................................................34
PRÁCTICA N° 5..............................................................................................................................43
IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA DE LEVADURAS.....................43
PRÁCTICA N° 6..............................................................................................................................49
IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA DE DERMATOFITOS..............49
CEPARIO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA (FACS)............................................54
BIBLIOGRAFIA..............................................................................................................................55
INTRODUCCIÓN.
La presente guía se realizó para complementar la enseñanza aprendizaje teórico-práctico

de la asignatura Microbiología y Parasitología con el propósito de mejorar la calidad
académica de los estudiantes de la Facultad Ciencias de la Salud Carrera de Enfermería
de la Universidad Estatal de Milagro (UNEMI).
Las técnicas utilizados para identificar microorganismos parasitarios, bacterianos,

micológicos y virales se basan el diagnóstico microbiológico de los agentes infecciosos
que causan patologías en el ser humano.
Las metodologías a seguir en cada una de las prácticas son fáciles y sencillas de realizar.
Antes de iniciar cada práctica se dará una explicación acerca de la importancia y
aplicación del método a utilizar, como manejar las muestras biológicas potencialmente
infecciosas para evitar la contaminación con agentes patógenos y la forma de eliminar el
material contaminado utilizado en el laboratorio, procesos que se deben seguir y cumplir
en base a las normas de bioseguridad establecidas por los organismos Internacionales
Nacionales y la Facultad Ciencias de la Salud (UNEMI).
Según las Normativas de la OMS, clasifican a los laboratorios por el manejo de

microorganismos infecciosos y por el grupo de riesgo (Nivel 1, 2, 3 y 4) que se utilizarán
exclusivamente para el desarrollo de trabajos en los Laboratorios.
El laboratorio de Microbiología de la Carrera de enfermería de la FACS, cumple con los

requisitos mínimos del Nivel de Seguridad Básico 2, que involucra: servicio de atención
primaria, diagnóstico e investigación, por el riesgo individual moderado y riesgo
poblacional bajo.
El laboratorio deberá estar bajo la dirección y responsabilidad de un facultativo con la

especialidad correspondiente y legalmente capacitado para realizar los procesos
microbiológicos, que se preocupe por la seguridad del personal y los estudiantes,
previniendo, accidentes e infecciones por microorganismos infecciosos.
NORMATIVA DE INGRESO AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

FACS 2016 (VIGENTE)
AL PERSONAL DOCENTE
Solicitar vía mail o documento físico la disponibilidad de los Laboratorios 48 horas antes
del desarrollo de las prácticas al Director de carrera, incluyendo:
 Actividad a realizar.
 Equipo, material y reactivos a utilizar.
 Número y grupo de estudiantes.
USO DEL LABORATORIO
1. El director de carrera autoriza el uso del laboratorio en los horarios establecidos.

2. El responsable de logística entregará:
 Inventario de los equipos, materiales y reactivos codificados.
 Formulario guías de prácticas de laboratorio y/o talleres.
 Formulario de asistencia de estudiantes a prácticas de laboratorio
3. Al finalizar las clases prácticas el docente entregará los formularios completos con los
parámetros establecidos para cada práctica.
RESPONSABILIDAD
1. Durante el uso del laboratorio el docente y estudiante se responsabilizaran del

cuidado de los bienes y equipo médico en caso de daño o pérdida.
2. El docente de la práctica deberá usar mandil blanco con manga larga y abotonada.
3. Revisar el estado de los equipos médicos y de climatización (aire acondicionado) y al
culminar la práctica deben apagarlos (excepto el aire de bioquímica).
Manipular los equipos, estos puede sufrir deterioro.
SE PROHÍBE AL ESTUDIANTE
1. El ingreso al laboratorio de los estudiantes que incumplan con el uso correcto del
uniforme y presentación personal establecidas en las normas de bioseguridad:
 Mandil blanco abotonado, con mangas largas y con el logo de la carrera.
 Zapatos cerrados.
 Cabello recogido (mujeres).
 Uñas cortas y limpias.
 Retirar accesorios personales (aretes largos, pulseras, anillos), ya que al
momento de manipular los equipos, estos pueden sufrir deterioro.
2. El ingreso de mochilas, bolsos y el uso del celular y dispositivos electrónicos, los
mismos se deben guardar en el casillero en la parte externa de las instalaciones del
laboratorio.
3. Ingerir bebidas y alimentos al interior del laboratorio.
4. Manipular equipos o materiales sin supervisión Docente.
5. ADOPTAR, equipo o material que pertenezca a los laboratorios.
6. Sentarse en las camas o sillas de rueda. (Traer solo libretas, bolígrafos y material a
petición del docente de la práctica).
7. Rayar equipos y bienes caso contrario se sancionará al estudiante
OBJETIVOS
Objetivo General
Aplicar los conocimientos teóricos en la práctica de Microbiología, mediante el

desarrollo de destrezas y habilidades, preparando al estudiante para su desempeño en
el entorno hospitalario.
Objetivo Específicos
 Identificar la Taxonomía, morfología y fisiología de los microorganismos

mediante la observación macroscópica y microscópica para diferenciar los
géneros y especies que afectan al ser humano.
 Asociar las características de los microorganismos con las diferentes patologías

que afectan al ser humano para la prevención, control y vigilancia
epidemiológica.
PRÁCTICA N° 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD E INSTRUMENTOS DEL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA
Asignatura: Nivel: 3er

Microbiología y Parasitología
Unidad: 1 Nº estudiantes: 10-12
(de acuerdo a la norma)
OBJETIVOS
Objetivo General:
Describir las normas de bioseguridad y los instrumentos, materiales y reactivos utilizados
en el laboratorio de microbiología, al igual que los símbolos de riesgo y peligrosidad de la
Facultad Ciencias de la Salud Carrera de Enfermería de la UNEMI.
Objetivos Específicos:
 Aplicar las normas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología durante el
desarrollo de las prácticas para evitar riesgo de contaminación con microorganismos
patógenos.
 Realizar procedimientos normados para la eliminación de los desechos del laboratorio.
 Distinguir el nombre de cada equipo, instrumento y reactivo estableciendo las
diferencias que existen entre ellos.
 Explicar la función de cada uno de los equipos, instrumentos y reactivos que se
utilizan en el laboratorio.
RESULTADOS DEL APRENDIZAJE
Interpretar las técnicas y normas de bioseguridad que les permite realizar los
procedimientos prácticos adecuadamente, clasificando los laboratorios de acuerdo a los
niveles de complejidad y riesgo de los microorganismos patógenos.
 Identificar los instrumentos, materiales y reactivos, diferenciando cada uno de ellos y

como utilizarlo durante el desarrollo de las práctica.
INTRODUCCIÓN
La bioseguridad son el conjunto de técnicas y normas establecidas por organismos

internacionales, nacionales y locales en el área de la Salud, que se deben aplicar para el
uso adecuado de equipos, reactivos y materiales biológicos con el propósito de prevenir y
evitar la exposición no intencional a estudiantes, personal de laboratorio y medio ambiente
a los agentes potencialmente infecciosos o bio-peligrosos, minimizando el riesgo de
contaminarse.
En el interior de las instalaciones del laboratorio es necesaria la utilización del símbolo de

bioseguridad como advertencia de la existencia de riesgo, lo que permitirá tomar medidas
de precaución.
El laboratorio de microbiología es un lugar que debe estar habilitado con equipos,

materiales y reactivos para el desarrollo de investigaciones y las prácticas de los
estudiantes en el que se pueden cultivar, manejar y examinar microorganismos, por tanto
se requiere un ambiente limpio y ordenado. El laboratorio de microbiología cuenta con el
equipamiento necesario para la manipulación de microorganismos que deben ser
manejados con precaución por su potencial Patogenicidad.
INSTRUCCIONES
 Los estudiantes antes de cada práctica deben leer y comprobar que la guía de
microbiología contiene información que facilitará la comprensión de los procedimientos
 Ingresar al laboratorio de Microbiología en grupos de diez a doce estudiantes de
acuerdo a la norma de FACS.
 Se prohíbe el ingreso de estudiantes que no cumplan con el uso correcto del uniforme
que consta en los reglamentos de FACS.
 La puerta del laboratorio permanecerá cerrada durante el desarrollo de la práctica.
 Al finalizar la práctica se dejará limpio el mesón utilizado y eliminar los materiales de

desecho en los recipientes de basura de acuerdo a la codificación de bioseguridad.
 Deberán lavarse las manos y sacarse el mandil antes de salir del laboratorio.
 Los estudiantes deberán entregar un informe detallado de la actividad concluida.
 Los estudiantes deben realizar Conclusiones y Recomendaciones de la práctica
realizada y subirla como tarea autónoma en el SGA.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
 Definición de bioseguridad
 Clasificación de los agentes biológicos
 Principios de bioseguridad
 Desinfección y esterilización
 Niveles de bioseguridad
 Normas de bioseguridad en el laboratorio de Microbiología
ESQUEMATICE LAS NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Los estudiantes deben realizar un informe sobre las normas de bioseguridad aprendidas.
INSTRUMENTOS, MATERIALES YREACTIVOS.
 Cámara de Bioseguridad
 Auto clave
 Esterilizador
 Estufa
 Microscopio
 Mechero de bunsen
 Centrífuga
 Balanza
 Refrigeradora
 Tubos de ensayo
 Gradillas
 Pipetas
 Láminas porta objetos
 Láminas cubre objetos
 Asa de siembra en aro
 Asa de siembra rectas
 Cajas petri con medios de cultivo
 Colorante de Gram
 Colorante azul de lactofenol
 Solución salina 0.9%
 Solución de lugol
 Cepas bacterianas
 Cepas micóticas
 Medios de cultivo (agar sangre, MacConkey, Mueller Hinton, sabouraud, Crhomo
Agar).
Los estudiantes observan, analizan y esquematizan los equipos, materiales y reactivos

que se utilizan en el laboratorio de microbiología estableciendo la función de cada uno.
ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS QUE SE

UTILIZAN EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA ESTABLECIENDO LA
FUNCIÓN DE CADA UNO (Como indica el modelo).
EQUIPO DIBUJO FUNCIÓN

cámara de Bioseguridades un
equipo cerrado y ventilado
diseñado para controlar los
aerosoles y macropartículas
Cámara de asociados al manejo del material
Bioseguridad biológico, potencialmente tóxicos
o infecciosos que permiten
trabajar de modo seguro con
materiales contaminados y
agentes patógenos (bacterias,
hongos, virus y parásitos).
PRÁCTICA N° 2
CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNE

OBJETIVOS
Objetivo General:
Conocer las estructuras morfológicas de las células del sistema inmune circulantes en el
sistema sanguíneo mediante microscopía óptica.
 Realizar un frotis periférico utilizando el colorante de Wright.
 Identificar las células del sistema inmune por microscopía óptica diferenciando su
morfología.
 Asociar el conocimiento teórico práctico de estudios microscópicos diferenciando la

morfología de las células del sistema inmune y su función en el cuerpo humano.
INTRODUCCIÓN
El sistema inmunitario, está formado por células, tejidos y órganos, que son los
encargados de defendernos de los antígenos que son moléculas extrañas que invaden el
sistema inmune cuando están las defensas bajas o inmunodeprimidos. Estas células
están presentes en muestras biológicas Líquido céfalo raquídeo, líquido pleural, orina,
sangre, secreción nasal, heces, etc. Se realiza un frotis en un placa porta objetos y una
vez seca la placa se fija con metanol, finalmente se tiñe con colorantes como Wright,
Giemsa y se observa al microscopio y se diferencia su morfología y el color de cada célula
del sistema inmunitario, lo que permite diagnosticar una patología ya sea infecciosa,
inmunodeficiencia, hipersensibilidad.
INSTRUCCIONES
 Los estudiantes deben realizar la práctica con Conclusiones y Recomendaciones y
subirla como tarea autónoma en el SGA.
INSTRUMENTOS, MATERIALES Y REACTIVOS.

 Microscopio.
 Lanceta
 Algodón
 Alcohol
 Placas porta objeto
 Metanol
 Colorante de Giemsa o Wright
 Aceite de inmersión
Los estudiantes observan, analizan y esquematizan el procedimiento para la observación

microscópica de muestras sanguíneas teñidas con Giemsa o Wright
PROCEDIMIENTO
 Desinfectar el dedo pulgar y con la ayuda de una lanceta pinchar.

 Colocar una gota de sangre en una placa porta objeto y realizar un frotis en ángulo de
45° y hacer un extendido, dejar secar al medio ambiente.
 El frotis se debe fijar con metanol luego teñir con colorante de Giemsa o Wright de 4 a
6 minutos dependiendo de la madurez del colorante,
 Colocar una gota de aceite de inmersión en la placa teñida y observar el microscopio
óptico en lente de 100X.
 Una vez enfocada la placa en el microscopio se mueve los campos para observar y
diferenciar las células presentes en el sistema inmune.
ESQUEMATICE CADA UNA DE LAS CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNE
OBSERVADAS EN LA PRACTICA (Como indica el presente modelo)
https://vdocuments.mx/cap-muestra-atlas-de-hematologia.html
ESQUEMATICE LAS CELULAS OBSERVADAS

Los estudiantes diferencian las características de las células del sistema inmune por
microscopía óptica. Ejemplos en siguiente link. https://www.studocu.com/es-
mx/document/universidad-autonoma-de-tamaulipas/inmunologia/practicas/practica-no1-identificacion-de-
celulas-del-sistema-inmune/3085371/view
1.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Neutrófilo

Segmentado).
2.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Linfocito).
3.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Eosinofilos).

4.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Monocito).
5.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Basófilo).

UTILIZAN EN LA PRACTICA (Como indica el presente modelo)
PRÁCTICA N° 3
DETERMINAR ANTICUERPOS DEL VIRUS DEL DENGUE

OBJETIVOS
Objetivo General:
Determinar anticuerpos del virus del dengue mediante técnica Micro Elisa para valorar la
respuesta primaria y secundaria.
 Determinar anticuerpos IgG e IgM contra dengue por el método de Micro Elisa
 Valorar la producción de anticuerpos IgG e IgM durante la infección primaria y
secundaria.
 Asociar el conocimiento teórico práctico del sistema inmune con la reacción antígena y
anticuerpo mediante el test de Microelisa para dengue.
INTRODUCCIÓN
Los anticuerpos séricos de la clase IgM, cuando están presentes, se combinan con
anticuerpos IgM anti-humano unido a la superficie de polietileno de los micropocillos.
INSTRUCCIONES
Pipeta de precisión para dispensar 5 y 100 μl.

Pipeta multicanal de precisión para dispensar 100 μl.
Lavador de placas de ELISA.
Incubadora /baño termostatizado.
Espectrofotómetro de placas de ELISA con filtro de 450 nm y filtro de referencia de 620
nm.
Agua destilada.
Alternativamente procesador automático de ELISA.
Un grupo concentrado de dengue 1-4 Antígenos se diluye con el volumen correcto de

diluyente de trabajo con antígeno. Los antígenos se producen mediante un sistema de
expresión de células de insectos inmunopurificado utilizando un anticuerpo monoclonal
específico.
Un volumen igual de la HRP conjugado de anticuerpos monoclonales (Mab) se añade el

antígeno diluido, lo que permite la formación de complejos antígeno-anticuerpo
monoclonal. ¡Residual suero s quita de la plancha de ensayo mediante el lavado, y un
complejo antígeno-anticuerpo monoclonal se agrega a la plancha del ensayo.
Después de la incubación, los pocillos se lavan y un sistema de color del sustrato,

tetrametilbenzidina / peróxido de hidrógeno (cromógeno TMB) se agrega. El sustrato es
hidrolizado por la enzima y el cromógeno cambia a un color azul. Después se parar la
reacción con el ácido, el TMB se vuelve amarillo. ¡Color de desarrollo es indicativo de la
presencia de anticuerpos IgM contra el dengue en la muestra.

PRÁCTICA N° 4
CONOCER LAS TÉCNICAS DE ADMINISTRACIÓN DE VACUNAS
OBJETIVOS
Objetivo General:
Conocer sobre la inmunización a través del sistema ampliado de vacunación para
disminuir las enfermedades que afectan al hombre.
 Conocer los programas de inmunización que cuenten con un acceso sostenible y
una financiación previsible, suministro de calidad y tecnologías innovadoras.
 Aplicar los conocimientos de la inmunización en forma equitativa a todas las

personas.
 Asociar el conocimiento teórico práctico sobre el sistema ampliado de vacunación en

Ecuador para disminuir las enfermedades que afectan al hombre.
INTRODUCCIÓN
Es necesario conocer las técnicas correctas de administración de vacunas para

evitar una absorción insuficiente o aumentar el riesgo de reacciones locales las
mismas que se describen a continuación.
• Conocer la vía de administración indicada según el tipo de vacuna (si hay dudas,
consultar el prospecto o la ficha técnica).
• Elegir el lugar anatómico adecuado en una zona de piel sana en función de la

edad y envergadura del paciente.
• Disponer del material necesario (sobre todo del tipo de aguja recomendada).
• Cuando se trata de un niño, es importante asegurarse de que se le ha inmovilizado

bien; la adecuada colaboración de los padres o acompañantes es fundamental.
Cuando se administra más de una vacuna en un mismo acto, es preferible

administrarlas en lugares anatómicos diferentes. Si esto no es posible, debe guardarse
una distancia entre ambas de al menos 2,5 cm.
No se recomienda el uso de paracetamol o ibuprofeno de forma rutinaria con el

propósito de prevenir posibles reacciones ya que puede disminuir la respuesta a la
vacuna. Sí está indicado para tratar la fiebre (≥38 ºC) o el dolor tras la vacunación en el
caso de que se presente.
Se han realizado numerosos estudios para evaluar la reactogenicidad de las

vacunas administradas por vía parenteral en relación a diferentes variables. Existe
evidencia de menor reactogenicidad con las siguientes variables:
• Lugar de administración el deltoides frente al vasto externo del muslo.
• Técnica de inyección intramuscular frente a subcutánea.
• Agujas más largas frente a más cortas.
• Ángulo de 90º frente a ángulo menor en inyección intramuscular.

https://es.slideshare.net/TNCSUUBC/tecnica-
de-vacunacion
Intradérmica (ID)
La administración intradérmica consiste en inocular el producto justo

debajo de la parte más superficial de la piel (epidermis). Es una vía poco
frecuente; en nuestro medio sólo está indicada para la administración de la
vacuna BCG, en la zona posterior del hombro izquierdo, próxima a la
inserción del deltoides con el acromion.
Subcutánea (SC)
Consiste en inocular el producto en el tejido adiposo que se encuentra

debajo de la piel y encima del músculo. Es la técnica utilizada para la
vacuna triple vírica y la varicela. También pueden administrase por vía
subcutánea la vacuna neumocócica polisacárida y la Fiebre amarilla.
Intramuscular (IM)
El producto se inocula en el tejido muscular profundo. Es la técnica

más frecuente.
Las zonas de elección son el tercio medio del vasto externo en

niños pequeños, y el deltoides en niños mayores y adultos. No se
recomienda la inoculación en glúteo por la posibilidad de inyección en
tejido graso subcutáneo que conlleva peor absorción y mayor posibilidad
de efectos adversos.
Oral (O)
Ninguna de las vacunas del calendario oficial se administra por esta vía.
Sin embargo, es la vía indicada para algunas otras vacunas que se utilizan
en nuestro medio: rotavirus, cólera, fiebre tifoidea... y también para la
vacuna de polio oral, que sigue administrándose en muchos países.
Guía Práctica de Microbiología 1 MSc. Betty Pazmiño Gómez

PRÁCTICA N° 5
CONOCER LAS MÉTODOS PARA IDENTIFICAR PARÁSITOS
OBJETIVOS
Objetivo General:
Conocer los diferentes métodos que se utilizan para el diagnóstico de parásitos
que afectan al ser humano.
Diferenciar los métodos de diagnóstico parasitario para su prevención y/o
detección precoz.
Promover el diagnóstico diferencial entre posibles patologías, dando oportunidad

de tratamiento específico.
 Asociar el conocimiento teórico práctico de los métodos para identificar

parásitos en el ámbito de la salud.

INTRODUCCIÓN
El examen parasitológico se utiliza para observar las formas de los parásitos como
protozoarios y metazoarios en sus diferentes formas como: trofozoítos, quiste,
huevos, larvas o adultos de helmintos en heces, por lo tanto, la recolección y la
manipulación adecuada de las muestras fecales son necesarias para la
identificación correcta de los parásitos en el laboratorio a través de tres fases:
PREANALITICA: es la que insume mayor tiempo, solicitud, obtención,

almacenamiento, transporte, recepción y la que está sujeta a mayor porcentaje de
errores.
ANALITICA: corresponde a la realización del procedimiento diagnóstico. Incluye
validación de las técnicas, calibración de equipos, ejecución de controles de
calidad, etc.
POSANALITICA: Interpretación de resultados, validación, emisión del informe.
Regla de oro en Parasitología - recobrar, identificar y demostrar el parásito, para

poder determinar la etiología del proceso de infección o enfermedad.
Para lo cual se utilizan:
MÉTODOS DIRECTOS
Identificar parásitos o sus productos de reproducción ejemplos:
 Baermann - extrae larvas.
 Flotación de Sheather - concentra ooquistes de algunos apicomplexa
 Raspado de úlcera perineal - demuestra trofozoítos de Entamoeba
histolytica en amebiasis cutís
 Raspado de úlcera cutánea - evidencia amastigotes de Leishmania
 Lavado bronquial - demuestra estadios de Pneumocystis carinii en
algunas situaciones de inmunocompromiso

MÉTODOS INDIRECTOS
Obtener con pruebas serológicas y de otro tipo resultados que, unido a la clínica y
a otras consideraciones, dan un diagnóstico probable ejemplos:
 Inmunológicos - hemaglutinación indirecta para tripanosomiasis
americana
 Inmunohistoquímicos - microsporidiosis
 Rayos X - de abdomen para visualizar cambios en diagnóstico de
angiostrongilosis abdominal
 Tomografía axial computarizada - neurocisticercosis
 Resonancia magnética - absceso hepático amebiano
 Péptidos sintéticos, otra tecnología biomolecular para diferenciar
Trypanosoma cruzi de T. rangeli
Cabe mencionar que la ingesta de medicamentos previa a su recolección y las

muestras mal conservadas o tratadas de manera inadecuada son factores que
interfieren en la identificación de parásitos, pudiendo obtener como resultado
falsos negativos por lo que se sugiere realizar un examen seriado para emitir un
diagnóstico definitivo.
INSTRUCCIONES
 Los estudiantes antes de cada práctica deben leer y comprobar que la guía
de microbiología contiene información que facilitará la comprensión de los
procedimientos
 Ingresar al laboratorio de Microbiología en grupos de diez a doce estudiantes
de acuerdo a la norma de FACS.

 Se prohíbe el ingreso de estudiantes que no cumplan con el uso correcto del

uniforme que consta en los reglamentos de FACS.
 La puerta del laboratorio permanecerá cerrada durante el desarrollo de la
práctica.
 Al finalizar la práctica se dejará limpio el mesón utilizado y eliminar los
materiales de desecho en los recipientes de basura de acuerdo a la
codificación de bioseguridad.
 Los estudiantes deberán entregar un informe detallado de la actividad
concluida.
 Los estudiantes deben realizar Conclusiones y Recomendaciones de la
práctica realizada y subirla como tarea autónoma en el SGA.
Los materiales y reactivos dependerán del tipo de método que se vaya a utilizar, el
siguiente es un ejemplo de un método directo.
 Microscopio.
 Solución salina al 0.9%
 Lugol
 Palillos de madera
 Placas porta objeto
 Placas cubre objeto
2.- Observación microscópica con solución salina al 09%. (Giardia Lamblia quiste)

3.- Observación microscópica con solución salina al 09%. (Ascaris lumbricoides

huevo)

PRÁCTICA N° 6
Identificar protozoarios (Entamoeba)

OBJETIVOS.
Objetivo General:
Explicar los procedimientos de obtención y manejo de material fecal para realizar estudios
microscópicos e identificación de parásitos intestinales.
 Realizar el examen parasitológico directo con solución salina al 0.9% y lugol

para identificar parásitos intestinales diferenciando su morfología.
 Describir las características morfológicas de los protozoarios del Género
Giardia lamblia quiste y trofozoito.
Diferenciar la morfología, taxonomía, fisiología y ciclo vital de los protozoarios del

genero Entamoeba Giardia lamblia quiste y trofozoito que afectan al ser humano.

INTRODUCCIÓN.
La microscopia óptica permite observar el tamaño, forma, disposición de los

protozoarios del genero Giardia lamblia y trofozoito que afectan al ser humano,
utilizando solución salina al 0.9 % y solución lugol.
INSTRUCCIONES
procedimientos
práctica.
concluida.
 Microscopio.
 Muestras de heces fecales.
 Láminas porta objeto
Los estudiantes observan, analizan y esquematizan el procedimiento para la

observación microscópica de muestras de heces.
PROCEDIMIENTO
 Colocar una gota de solución salina al0,9% en una placa porta objetos
 Agregar una pequeña cantidad de heces y mezclar con un palillo de madera.
 Colocar un cubre objetos y observar en lente de 10 y 40 x en busca de quistes
o trofozoitos parasitarios.
ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

QUE SE UTILIZAN EN LA PRACTICA (Como indica el presente modelo)

ESQUEMATICE LOS PARÁSITOS OBSERVADOS

Los estudiantes diferencian las características morfológicas de quistes de
Entamoeba histolytica y coli por microscopía óptica.
1.- Observación microscópica con solución salina al 09%. (Entamoeba

histolytica y coli quiste).


PRÁCTICA N° 7
Identificar protozoarios (Entamoeba)

OBJETIVOS.
Objetivo General:
Explicar los procedimientos de obtención y manejo de material fecal para realizar estudios
microscópicos e identificación de parásitos intestinales.
 Realizar el examen parasitológico directo con solución salina al 0.9% y lugol

para identificar parásitos intestinales diferenciando su morfología.
 Describir las características morfológicas de los protozoarios del genero
Giardia lamblia quiste y trofozoito.
Diferenciar la morfología, taxonomía, fisiología y ciclo vital de los protozoarios del

genero Giardia lamblia quiste y trofozoito que afectan al ser humano.

INTRODUCCIÓN.
La microscopia óptica permite observar el tamaño, forma, disposición de los

protozoarios del genero Giardia lamblia quiste y trofozoito que afectan al ser
humano, utilizando solución salina al 0.9 % y solución lugol.
INSTRUCCIONES
microbiología contiene información que facilitará la comprensión de los
procedimientos
práctica.
concluida.
 Microscopio.
 Muestras de heces fecales.
Los estudiantes observan, analizan y esquematizan el procedimiento para la

observación microscópica de muestras de heces.
PROCEDIMIENTO
 Colocar una gota de solución salina al0,9% en una placa porta objetos
 Agregar una pequeña cantidad de heces y mezclar con un palillo de madera.
 Colocar un cubre objetos y observar en lente de 10 y 40 x en busca de quistes
o trofozoitos parasitarios.
ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

QUE SE UTILIZAN EN LA PRACTICA (Como indica el presente modelo)

ESQUEMATICE LOS PARÁSITOS OBSERVADOS

Los estudiantes diferencian las características morfológicas de Giardia lamblia
quiste y trofozoito por microscopía óptica.
1.- Observación microscópica con solución salina al 09%. (Giardia lamblia

quiste y trofozoito).


DESARROLLO DE LA PRÁCTICA.
A cada grupo de estudiantes se le entregará medios de cultivo con cepas

bacterianas identificadas y láminas fijadas, 2 estudiantes de cada grupo procesan
la tinción de gramanalizarán las estructuras morfológicas macroscópica por el
tamaño:pequeño, mediano y grande, planoconvexa, mucoides, forma irregular,
redondeadas, bordes ondulados, pigmentación, brillantes, hemólisis en agar
sangre, fermentadoras de lactosa y no fermentadoras de lactosa.
La observación microscópica de los microorganismos les permitediferenciar su

morfología de acuerdo a la disposición y coloración de las bacterias,
diferenciando bacterias Gram positivas y Gram negativas a través de la tinción.
ESQUEMATICE LAS CARACTERISTICAS MACROSCÓPICAS DE LAS

BACTERIAS
El estudiante diferencia las estructuras morfológicas macroscópica por el tamaño:

pequeño, mediano y grande, planoconvexa, mucoides, forma irregular,
redondeadas, bordes ondulados, pigmentación, brillantes, hemólisis en agar
sangre, fermentadoras de lactosa y no fermentadoras de lactosa
1.- Medio de cultivo MacConkey (Escherichia coli)

2.- Medio de cultivo MacConkey (Enterobacter aerógenes)
3.- Medio de cultivo MacConkey (Pseudomona aeruginosa)
4.- Medio de cultivo Muller Hinton (Pseudomona aeruginosa)

5.- Medio de cultivo Agar sangre de cordero (Proteus mirabilis)
6.- Medio de cultivo Agar sangre de cordero (Staphylococcus aureus)
7.- Medio de cultivo Agar sangre de cordero (Enterococcus faecalis)

ESQUEMATICE LAS CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS DE LAS

BACTERIAS POR TINCIÓN DE GRAM
Los estudiantes diferencian las estructuras morfologicas de acuerdo a la

disposición y coloración de las bacterias, identificando bacterias Gram positivas y
Gram negativas a través de la tinción.
PROCEDIMIENTO: TINCIÓN DE GRAM:
 Muestras fijadas con cepas bacterianas distribuidas por el docente.

 Colocar 1 gota de violeta de genciana 1 minuto, lavar la placa con agua.
 Colocar una gota de lugol 1 minuto, lavar la placa con agua.
 Colocar 1 gota de alcohol cetona 5-10 segundos , lavar con agua
 Colocar 1 gota de safranina 1 minuto, lavar con agua.
 Observar la en lente 100x para diferenciar la morfología y coloración.
FUENTE:http://juancarlosvivancos.com/wp-content/uploads/2015/09/tincion-de-gram-pasos.jpeg
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
1.- Bacilos Gram negativos.(Escherichia coli)

2.- Diplococos gram Gram negativos. (Moraxella catharrallis)
3.- Diplococos Gram negativos (Neisseria gonorrhoeae)
3.- Diplococos gram Gram positivos. (Enterococcus faecalis)

4.- Cocos gram positivo en cadena(Streptococos viridans)
5.- Cocos Gram positivo en racimo de uva (Staphylococcus aureus)


PRÁCTICA N° 5
IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA DE LEVADURAS
Asignatura: Nivel: 2do

OBJETIVOS.
Objetivo General:
Generalizar el desarrollo de cándidas de las especies albicans y tropicalisen

medios de cultivo Chromoagar y las estructuras morfológicas directa con plasma y
con coloración de azul de lactofenol
 Identificarlas características macroscópicas del crecimiento de levaduras

diferenciando sus especiesen medio de cultivo chromoagar y chocolate.
 Identificarpor microscopia óptica levaduras de acuerdo a su morfología,
formación de tubo germinal y cápsula.
Identificar la morfología Microscópica de las levaduras y Macroscópica del Género

candida especie albicans, tropicalis y criptococos neoformans en medio de cultivo
chromoagar y chocolate observando su patogenicidad y virulencia.

INTRODUCCIÓN.
La morfología macroscópica en medio de cultivo selectivo chromoagar permiten

diferenciar las características por la tonalidad de color, textura y morfología de las
colonias,son útiles para la identificación de Candida albicans, tropicalis, Krusei,
glabrata se aíslan en muestras clínicas. sin embargo pueden desarrollarse en
agar sangre, agar chocolate y glucosado de Sabouraud
La microscopia óptica permite observar el tamaño, forma, disposición de las
esporas, diferenciando por la formación del tubo germinal en plasma sanguíneo.
INSTRUCCIONES
procedimientos
práctica.
concluida.

 Microscopio.
 Medios de cultivo chromoagar con cepas de levaduras.
 Aceite de inmersión.
 Láminas fijadas.
 Gasas
 Pizetas
 Agua destilada
A cada grupo de estudiantes se le entregará medios de cultivo con cepas de

levaduras identificadas y láminas fijadas, analizaran las estructuras morfológicas
macroscópica en medio de cultivo selectivo chromoagar es especifico para
cándidas permite reconocer las características de las colonias levaduriformes por
el color diferenciando sus especies, sin embargo pueden desarrollarse en agar
sangre, chocolate, glucosado de Sabouraud y Mueller Hinton.
La observación microscópica delevaduras del género cándida puede diferenciarse

por laformación del tubo germinal procesadas en plasma sanguíneo.
PROCEDIMIENTO: TUBO GERMINATIVO
 Tubo con un ml de plasma sanguíneo.

 Adicionar una o dos colonias del género cándida en el plasma sanguíneo

 Tapar el tubo y colocarlo en la estufa a 35° por una hora
 Colocar una gota en un porta objeto cubrir con la laminilla cubre objeto.
 Observar al microscopio en lente de 10X y 40X la formación de tubo germinal.

LEVADURA
Los estudiantes diferencian las características de las colonias levaduriformes por

el color en medio de cultivo selectivo chromoagar especifico para cándidas y el
desarrollo en agar dextrosa sabouraud y Mueller Hinton
1.- Medio de cultivo Chromoagar (candida albicans)
2.- Medio de cultivo Chromoagar (candida tropicalis)

3.- Medio de cultivo dextrosa de Sabouraud (Cadida albicans)
4.- Medio de cultivo Muller Hinton (Cadida albicans)
ESQUEMATICE LAS CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS DE LAS

LEVADURAS
La observación microscópica de levaduras del género cándida puede diferenciarse
por la formación del tubo germinal procesadas en plasma sanguíneo y mediante la
tinción de Gram se observará las levaduras de color lila con la presencia de hifas
tabicadas.

1.- Levaduras (Cándida albicans) tinción de Gram
2.- Levaduras (Cándida albicans) en plasma sanguíneo
3.- Levaduras (Candida tropicalis) en plasma sanguíneo

PRÁCTICA N° 6
IDENTIFICACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA DE DERMATOFITOS
Asignatura: Nivel: 2do

OBJETIVOS.
Objetivo General:
Generalizarel desarrollo de dermatofitos en medios de cultivo dextrosa Sabouraud

y selectivo para hongos patógenos, las estructuras microscópicas de la morfología
con coloración de azul de lactofenol.
 Identificar por microscopia óptica dermatofitos del género Microsporum, Canis

 Identificar por microscopia óptica dermatofitos del género Microsporum,
gypseum
Diferenciar la morfología Macroscópica de los dermatofitos del genero

Microspurum especie canis y gypseum en medio de cultivo agar dextrosa de
sabouraud y Microscopicamente disposición de las hifas tabicadas conidios y
macroconidios asociando con las enfermedades que afectan al ser humano.

INTRODUCCIÓN.
La morfología macroscópica de los dermatofitos en medio de cultivo dextrosa

sabouraudpermiten diferenciar las características del crecimiento micotico en el
Anverso: Colonias vellosas a algodonosas, planas y radiadas, color amarillo y
micelio blanco y el Reverso pigmento amarillo.
INSTRUCCIONES
procedimientos
práctica.
concluida.
 Cámara de flujo laminar

 Microscopio.

 Medios de cultivo dextrosa de sabouraud con cepas de dermatofitos:

Microsporum canis y gypseum.
 Láminas fijadas.
 Gasas
 Pizetas
 Agua destilada
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA.
A cada grupo de estudiantes se le entregará medios de cultivoDextrosa

Sabouraud con cepas identificadas de Microsporun canis y gypseum para
diferenciar su morfología macroscópica Anverso: Colonias vellosas a algodonosas,
planas y radiadas, color amarillo y micelio blanco y el Reverso pigmento amarillo.
Observar las láminas fijadas con azul de lacto fenol por microscopía óptica en las
que analizarán las estructuras morfológicas.
Microsporun canis: Hifas delgadas, septadas, ramificadas. Macroconidias, pared

externa gruesa, rugosa, con septos delgados, en forma de huso.
Microsporum gypseum: Escasas hifas delgadas y septadas. Macroconidias de

pared delgada, fusiformes, verrugosas, pueden tener espículas o equinulas.
Escasas microconidias.

DERMATOFITOS

Los estudiantes describirán la morfología macroscópica de los dermatofitos del

anverso y reverso de cepas micóticas en medio dextrosa sabouraud.
1.- Observación macroscópica en agar dextrosa de sabouraud

(Microspurum canis)
Anverso Reverso
2.- Observación macroscópica en agar dextrosa de sabouraud

(Microspurum gypseum)

Anverso Reverso
ESQUEMATICE LAS CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS DE LOS

DERMATOFITOS
Los estudiantes diferenciaran las estructuras microscópicas de Microsporum canis

y Microsporum gypseum:
1.- Observación microscópica (Microspurum canis en azul de lactofenol)
2.- Observación microscópica (Microspurum gypseum en azul de lactofenol)

CEPARIO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA (FACS)
El Laboratorio de Microbiología de La Facultad Ciencias de la Salud Carrera de

Enfermería presenta en la guía práctica un grupo de microorganismos purificados
que sirven para la formación académica de los estudiantes las mismas que fueron
obtenidas de aislamientos de pacientes infectados o de colección de cepas
American Type Culture Collection (ATCC).
La Facultad Ciencias de la Salud, tiene a disposición de la Docencia de

Microbiología un cepario de bacterias y hongos, que se pueden alternar cada
semestre dependiendo de su viabilidad, las cepas fueron donadas para uso
académico por el apoyo interinstitucional entre la Universidad de Buenos Aires
Facultad Ciencias Médicas Escuela de Medicina (UBA) yCentro Bacteriológico
Pazmiño Milagro
BACTERIAS
 Escherichia coli ATCC 25922
 Staphylococcus aureus ATCC 25923
 Pseudomona aeruginosa ATCC 27853
 Enterococcus faecalis ATCC 29212
 Enterobacter aerógenes
 Citrobacter
 Moraxella catarhallis
HONGOS
 Cándida albicans ATCC 90028
 Cándida tropicalis

 Cándida Krusei
 Aspergillus niger
 Criptococcus neoformans
 Epidermofiton fluocuosun
 Fonsecae pedrosoi
 Nocardia
 Rhodotorula
 Trichophyton rubrum
 Trichophyton mentagrophytes
BIBLIOGRAFIA
 OMS/OPS Manual de bioseguridad laboratorio (2005) 3ra Edición

disponible:
http://www.who.int/topics/medical_waste/manual_bioseguridad_laboratorio.
pdf
 Carr. Rodak. Atlas de Hematología 4ta ed 2014 ed. Panamericana
 Jacqueline H. Carr, & Bernadette F. Rodak. (2017). Atlas de Hematología
Clínica (5ta ed.). Panamericana.
 Jawetz, E. (2010). Microbiología Médica. (25a edición). España. McGraw-
Hill.México, D.F.
 Betty P. (2020) Gruía de Microbiología Práctica.
 Rina, G. (2003). Manual de Parasitología (2da ed.).
 Pruebas serológicas del virus del dengue | Dengue | CDC. (2019).
Recuperado 13 de julio de 2020, de
https://www.cdc.gov/dengue/es/healthcare-providers/testing/serologic-
tests.html
 (OMS). (2009). Dengue guias para el diagnóstico, tratamiento, prevención y
control. OMS, 1(2), 109-115. https://doi.org/10.3109/01674820209042792
 Prats, G. (2005). Microbiología Clínica. Primera Edición. Editorial
Panamericana. Bogotá, Colombia.
 Patrick R. Murray, Ken S. Rosenthal, Michael A. Pfaller (2013).
Microbiología Médica. (7ma. Edición). España Elsevier.

 AshOrihel. (2010). Atlas de parasitología Humana. (5a Edición). China.

Panamericana.
 Roberto Arena. (2015). Micología Médica ilustrada. (5ta Edición) México.
McGraw-Hill.
 Alexandro Bonifaz. 2012. Micología Médica Básica. (4ª Edición). China.
McGraw-Hill.
 Abul K. Andrew H. Shiv Pillai. (2016) Inmunología Celular y Molecular (8va
Edición). España. Elsevier
 Forbes, Sahm, Weissfeld, Bailey–Scott (2009). Diagnóstico Microbiológico
(12va Edición) Argentina. Panamericana.
 Frank Tener, David O. White. (2010). Virología Médica (4ta Edición) México.
Editorial Prensa Médica Mexicana.
ELABORADO POR:
MSc. Betty Pazmiño Gómez
REVISADO POR:
Lic. Elsa Vera Lorenti, MSc Lic. Alicia Cercado Mancero, MSc
DIRECTORA DE LA CARRERA DECANA DE LA FACS

Guía de Microbiología Enfermería 2020 P1-6

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UNIVERSIDAD ESTATAL DE

REVISIÓN MAYO - 2020

La presente guía se realizó para complementar la enseñanza aprendizaje teórico-práctico

Las técnicas utilizados para identificar microorganismos parasitarios, bacterianos,

Según las Normativas de la OMS, clasifican a los laboratorios por el manejo de

El laboratorio de Microbiología de la Carrera de enfermería de la FACS, cumple con los

El laboratorio deberá estar bajo la dirección y responsabilidad de un facultativo con la

NORMATIVA DE INGRESO AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

USO DEL LABORATORIO

1. El director de carrera autoriza el uso del laboratorio en los horarios establecidos.

1. Durante el uso del laboratorio el docente y estudiante se responsabilizaran del

Aplicar los conocimientos teóricos en la práctica de Microbiología, mediante el

 Identificar la Taxonomía, morfología y fisiología de los microorganismos

 Asociar las características de los microorganismos con las diferentes patologías

NORMAS DE BIOSEGURIDAD E INSTRUMENTOS DEL LABORATORIO DE

Asignatura: Nivel: 3er

RESULTADOS DEL APRENDIZAJE

 Identificar los instrumentos, materiales y reactivos, diferenciando cada uno de ellos y

La bioseguridad son el conjunto de técnicas y normas establecidas por organismos

En el interior de las instalaciones del laboratorio es necesaria la utilización del símbolo de

El laboratorio de microbiología es un lugar que debe estar habilitado con equipos,

 Al finalizar la práctica se dejará limpio el mesón utilizado y eliminar los materiales de

ESQUEMATICE LAS NORMAS DE BIOSEGURIDAD

INSTRUMENTOS, MATERIALES YREACTIVOS.

Los estudiantes observan, analizan y esquematizan los equipos, materiales y reactivos

ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS QUE SE

EQUIPO DIBUJO FUNCIÓN

Asignatura: Nivel: 3er

RESULTADOS DEL APRENDIZAJE

 Asociar el conocimiento teórico práctico de estudios microscópicos diferenciando la

INSTRUMENTOS, MATERIALES Y REACTIVOS.

Los estudiantes observan, analizan y esquematizan el procedimiento para la observación

 Desinfectar el dedo pulgar y con la ayuda de una lanceta pinchar.

ESQUEMATICE LAS CELULAS OBSERVADAS

1.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Neutrófilo

2.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Linfocito).

3.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Eosinofilos).

4.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Monocito).

5.- Observación microscópica con Tinción de Wright (Basófilo).

ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS QUE SE

Asignatura: Nivel: 3er

RESULTADOS DEL APRENDIZAJE

INSTRUMENTOS, MATERIALES YREACTIVOS.

Pipeta de precisión para dispensar 5 y 100 μl.

Un grupo concentrado de dengue 1-4 Antígenos se diluye con el volumen correcto de

Un volumen igual de la HRP conjugado de anticuerpos monoclonales (Mab) se añade el

Después de la incubación, los pocillos se lavan y un sistema de color del sustrato,

ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS QUE SE

 Aplicar los conocimientos de la inmunización en forma equitativa a todas las

RESULTADOS DEL APRENDIZAJE

 Asociar el conocimiento teórico práctico sobre el sistema ampliado de vacunación en

Es necesario conocer las técnicas correctas de administración de vacunas para

• Elegir el lugar anatómico adecuado en una zona de piel sana en función de la

• Cuando se trata de un niño, es importante asegurarse de que se le ha inmovilizado

Cuando se administra más de una vacuna en un mismo acto, es preferible

No se recomienda el uso de paracetamol o ibuprofeno de forma rutinaria con el

Se han realizado numerosos estudios para evaluar la reactogenicidad de las

• Lugar de administración el deltoides frente al vasto externo del muslo.

• Técnica de inyección intramuscular frente a subcutánea.

• Agujas más largas frente a más cortas.

• Ángulo de 90º frente a ángulo menor en inyección intramuscular.

ESQUEMATICE CADA UNO DE LOS EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS QUE SE

La administración intradérmica consiste en inocular el producto justo